O

citocromo

P450

(abreviado uma

como e

CYP, diversa

P450,

menos de

frequentemente

CYP450)

grande

super-famlia

hemoprotenas. Hemoprotena a protena ligada a um composto metalporfirina, como exemplo o citocromo, mioglobina e catalase, so encontradas em todos os domnios da vida. O Citocromo P450 usa uma abundncia de compostos como substratos (compostos nos quais atuam) exgenos e endgenos em reaes enzimticas. Usualmente eles formam parte de componentes de mltiplas cadeias de transferncia de eltron, chamados sistemas continentes de P450. nome citocromo P450 derivado do fato que estas so protenas celulares ('cyto') coloridas ('cromo'), com um "pigmento de 450 nm", assim chamada pela caracterstica "pico Soret" formada pela absoro da luz de comprimento de ondas prximo a 450 nm quando o ferro hemo reduzido (freqentemente com ditionito de sdio) e complexado em monxido de carbono. A reao mais comum catalisada pelo citocromo P450 a reao de mono-oxigenase, ou seja, a insero de um tomo de oxignio dentro de um substrato orgnico (RH) enquanto o outro tomo de oxignio reduzido a gua:

RH + O2 + 2H+ +2e ROH + H2O As enzimas CYP tm sido identificadas em todas as linhagens vivas, incluindo mamferos, aves, peixes, insetos, vermes, echinoideas, urochordatas, plantas, fungos, mycetozoas, bactrias e archaeas. Mais de 7.700 seqncias distintas de CYP so conhecidas. O stio ativo do citocromo P-450 contm um centro de ferroheme (ferro quelado com qualquer porfirina independentemente do estado de valncia do Fe). O ferro prendido protena P-450 pela via do ligante thiolato (o grupo tiol o anlogo de enxofre ao grupo hidroxila (-OH) encontrado nos lcoois. Desde que o enxofre e o oxignio pertenam ao mesmo grupo da tabela peridica, eles compartilham algumas propriedades de ligaes qumicas similares. Como no lcool, em geral, a forma desprotonada RS- (R deve ser o radical ao qual o

enxofre est ligado), chamada tiolato, quimicamente mais reativa do que a forma do tiol protonado RSH) derivado de um resduo de cistena. Esta cistena e vrios resduos flanqueadores so altamente conservados nos CYP conhecidos e tem o padro consenso da assinatura formal pr-stio [FW] [SGNH] - x - [GD] - {F} - [RKHPT] - {P} - C - [LIVMFAP] - [GAD].

Devido vasta variedade de reaes catalisadas pelos CYP, as atividades e propriedades de muitos CYPs diferem em muitos aspectos. Em geral, o ciclo cataltico do P-450 ocorre como se segue: 1) O substrato liga-se ao stio ativo da enzima, em ntima proximidade ao grupo heme, no stio oposto cadeia peptdica. O substrato ligado induz uma alterao na conformao do stio ativo, frequentemente deslocando uma molcula de gua da posio axial distante da cordenao do ferroheme, e algumas vezes alterando o estado do ferroheme de baixo spin para alto spin. Isso ocasiona a mudana nas propriedades espectrais da enzima, com um aumento na absorvncia a 390 nm (nano-metro ou milimcron; igual a 10-9 metros) e um decrscimo a 420 nm. Isso pode ser medido pela diferena na espectometria e referido como diferena de espectro de tipo I (veja a insero na figura). Se nenhum equivalente redutor estiver disponvel, esse complexo pode permanecer estvel, permitindo a determinao do grau de ligao a partir de mensuraes de absorvncia in vitro. 2) A mudana no estado eletrnico do stio ativo favorece a transferncia de um eltron do NAD(P)H pela via da redutase do citocromoP450 ou outra redutase associada. Isso toma lugar pela via da cadeia de transferncia de eltron, como descrito acima, reduzindo o ferroheme frrico (Fe+3) para o estado ferroso (Fe+2). 3) O oxignio molecular liga-se covalentemente a uma posio de coordenao axial do ferroheme. O cistena ligante (a cistena do CYP) um melhor doador de eltron do que a histidina, com o oxignio consequentemente sendo ativado para numa extenso maior em outras protenas heme. Entretanto, isso algumas vezes permite a dissociao da ligao, a chamada

reao e descasamento, liberando um radical super-xido, interrompendo o ciclo cataltico. 4: Um Segundo eltron transferido pela via do sistema de transporte de eltrons, tanto da redutase do citocromo P450, das ferredoxinas [protenas que contm complexos ferro-enxofre e que apresentam atividade careadora de eltrons, porm nenhuma funo clssica de enzima; as ferrodoxinas so encontradas em vegetais verdes, algas, bactrias anaerbicas e nas mitocndrias do crtex (poro externa de um rgo) da glndula supra-renal e do msculo cardaco], ou do citocromo b5 (CYP21B?), reduzindo a aduo de dixignioa um grupo perxido negativamente carregado. 5) O grupo peroxo (deve ser o grupo que tem um oxignio a mais porque foi adicionado) formado na quarta etapa rapidamente protonado duas vezes pela transferncia local da gua ou lados de cadeias de aminocidos ao redor, liberando uma molcula de gua e formando espcies de ferro(V)-oxo altamente reativas. 6) Dependendo do substrato e enzima envolvida as enzimas P450 podem catalisar qualquer de uma ampla variedade de reaes. Uma hidoxilao hipottica mostrada nesta ilustrao. Aps o produto ter sido liberado do sitio ativo, a enzima retorna ao seu estado original, com uma molcula de gua retornando a ocupar a posio de coordenao distante do ncleo de ferro.