INSTITUTO SUPERIOR DE CINCIAS DA SADE DO NORTE

Quantificao da propafenona no soro humano por HPLC-UV

Mtodos Laboratoriais Bioqumicos de Biologia Molecular Aplicados s Cincias Forenses II

Ana Sofia Oliveira Coelho N17725 Cincias Forenses e Criminais 2 Ano

Instituto Superior de Cincias Da Sade do Norte

Introduo: A propafenona uma droga usada no tratamento de arritmias cardacas.

Ela bloqueia os canais rpidos de sdio em todos os tecidos cardacos e tambm outros excitveis como o sistema nervoso central. O metabolismo da propafenona, as suas interaces e o seu uso generalizado tm estimulado o desenvolvimento de testes de rotina para esta droga e os seus metabolitos. Existem tambm trabalhos com o objectivo de avaliar a farmacocintica da propafenona.

Objectivo: quantificar a propafenona no soro humano pela tcnica de HPLC-UV.

Protocolo Experimental

Materiais e reagentes

Reagentes Tampo fosfato Acetonitrila (grau HPLC) Sulfato de Zinco (35%) Metanol (grau HPLC) Soro Materiais Vrtex Centrifuga Eppendorfs Falcons Pipetas de 10L, 100L, 200L e 1000L Pontas para pipetas

Quantidade

50 L 150 L 5000 L Quantidade 1 1 1 caixa 2 1 de cada 1 caixa de cada

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Aparelho e condies cromatogrficas

O aparelho cromatogrfico consistiu em: Bomba de baixa presso; Detector UV, Desgaseificador online; Injector Reodyne modelo 7725i com um loop de 200 L; Coluna de fase reversa (C18, 25 x 0.46 cm, 5 m de tamanho das partculas); protegida com uma coluna de guarda C18.

Preparao das fases mveis Fase mvel A 1. Adicionar tampo fosfato (pH=3,0.01 M) e acetonitrila (72:28) para um falcon e identificar. Fase mvel B 1. Adicionar tampo fosfato (pH=3,0.01 m) e acetonitrila (67:33) para um falcon e identificar.

Procedimento 1. Dos 0 aos 7 minutos fazer passar a fase mvel A (isocrtica a 100 %). 2. Mudar para o solvente B (durao de 2 minutos). 3. Dos 9 aos 17 minutos fazer passar a fase mvel B (isocrtica a 100%). 4. Mudar para a fase mvel A (durao de 1 minuto), mantendo constante por 5 minutos para reequilibrar.

O tempo total de anlise de 23 minutos com uma taxa de fluxo de 1.7 mL/min a uma temperatura ambiente (25C), monitorizado com um detector UV a 210 nm. 3

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Preparao da amostra
1. Adicionar 50 L de sulfato de zinco (35%) e 150 L de metanol a 250 L de soro;

2. Vortexar durante 1 minuto;

3. Centrifugar durante 10 minutos a 15 800 g.

4. Transferir o sobrenadante para outro tubo;

5. Injectar 200 L de amostra no HPLC.

Preparao dos padres

1. Preparar as solues padro a partir de uma soluo me de 100 000 ng/mL, utilizando uma concentrao intermdia de 1000 ng/mL.

Concentrao do padro (ng/mL) 10 ng/mL 50 ng/mL 200 ng/mL 250 ng/mL 400 ng/mL 500 ng/mL

Padro interno (L) 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L

Padro intermdio (L) 10 L 50 L 200 L 250 L 400 L 500 L

Soro (L) 980 L 940 L 790 L 740 L 590 L 490 L

Bibliografia

Afshar M, Rouini M.. (2004). The Japan Society for Analytical Chemistry: A Rapid HPLC Assay for the Simultaneous Determination of Propafenone and Its Major Metabolites in Human Serum.