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Enzima

Enzimas so um grupo de substncias orgnicas de natureza normalmente protica (existem tambm enzimas constitudas de RNA [1], as ribozimas), com actividade intra ou extracelular que tm funes catalisadoras, catalisando reaes qumicas que, sem a sua presena, dificilmente aconteceriam. Isso conseguido atravs do abaixamento da energia de activao necessria para que se d uma reaco qumica, resultando no aumento da velocidade da reao e possibilitando o metabolismo dos seres vivos. A capacidade cataltica das enzimas torna-as adequadas para aplicaes industriais, como na indstria farmacutica ou na alimentar. Em sistemas vivos, a maioria das reaces bioqumicas d-se em vias metablicas, que so sequncias de reaces em que o produto de uma reaco utilizado como reagente na reaco seguinte. Diferentes enzimas catalisam diferentes passos de vias metablicas, agindo de forma concertada de modo a no interromper o fluxo nessas vias. Cada enzima pode sofrer regulao da sua actividade, aumentandoa, diminuindo-a ou mesmo interrompendo-a, de modo a modular o fluxo da via metablica em que se insere. O ramo da Bioqumica que trata do estudo das reaces enzimticas a Enzimologia.

[editar] Atividade enzimtica As enzimas convertem uma substncia, chamada de substrato, noutra denominada produto, e so extremamente especficas para a reaco que catalisam. Isso significa que, em geral, uma enzima catalisa um e s um tipo de reaco qumica. Consequentemente, o tipo de enzimas encontradas numa clula determina o tipo de metabolismo que a clula efetua. A velocidade da reaco catalisada por uma enzima aumentada devido ao abaixamento da energia de ativao necessria para converter o substrato no produto. O aceleramento da reaco pode ser da ordem dos milhes de vezes: por exemplo, a enzima orotidina5'-fosfato descarboxilase diminui o tempo da reao por ela catalisada de 78 milhes de anos para 25 milissegundos. [2] Como so catalisadores, as enzimas no so consumidas na reaco e no alteram o equilbrio qumico dela. A atividade enzimtica pode depender da presena de determinadas molculas, genericamente chamadas cofactores. A natureza qumica dos cofactores muito varivel, podendo ser, por exemplo, um ou mais ies metlicos (como o ferro), ou uma molcula orgnica (como a vitamina B12). Estes cofactores podem participar ou no directamente na reaco enzimtica. Determinadas substncias, podem inibir a actividade de algumas enzimas, diminuindo-a ou eliminando-a totalmente; so os chamados inibidores enzimticos. Pelo fato de serem protenas com estrutura terciria ou quaternria, os enzimas so dotadas de dobramentos tridimensionais em suas ceias polipeptdicas, o que lhes confere uma forma caracterstica e exclusiva. Assim, diferentes enzimas tm diferentes formas e, portanto, diferentes papis biolgicos. Para que um enzima atue, necessrio que os substratos "se encaixem" na enzima. Esse "encaixe", porm, depende da forma, isto , do "contorno" da enzima. Por isso, substratos que se "encaixam" em uma determinada enzima no se "encaixam" em outras diferentes, e a reao no ocorre; da a especificidade das enzimas quanto aos substratos em que atuam. Uma vez ocorrido o "encaixe", forma-se o complexo enzima-substrato, que se assemelha ao sistema "chave-fechadura". O local da enzima onde o substrato se "encaixa" denominado stio ativo (ou centro ativo). No caso de substncias que reagem entre si, sob a ao catalisadora das enzimas, a reao facilitada, tornando-se mais rpida, pois a proximidade entre as molculas "encaixadas" acelera o processo reativo; aps a reao, a enzima desliga-se do substrato e permanece intacta. [editar] Localizao Podemos encontrar enzimas em quase todas as estruturas celulares e fluidos corporais. Algumas tm uma localizao especfica, de tal modo que podem servir para indicar que estamos em presena de um tal tecido, secreo ou fragmento celular se verificar a actividade de uma dada enzima. [editar] Histria

Eduard Buchner Era j sabido, entre o final do sculo XVII e incio do sculo XVIII, que secrees estomacais eram capazes de digerir a carne; [3] era tambm conhecida a converso de amido a acares pela saliva e extractos vegetais. O mecanismo subjacente a estas transformaes no era, no entanto, conhecido. [4]

As enzimas foram descobertas no sculo XIX, aparentemente por Pasteur, que concluiu que a fermentao do acar em lcool pela levedura catalisada por fermentos. Ele postulou que esses fermentos (as enzimas) eram inseparveis da estrutura das clulas vivas do levedo. Pasteur declarou que "a fermentao alcolica um acto correlacionado com a vida e organizao das clulas do fermento, e no com a sua morte ou putrefaco".[5] Em 1878, Wilhelm Khne empregou pela primeira vez o termo "enzima" para descrever este fermento, usando a palavra grega , que significa "levedar". O termo passou a ser mais tarde usado apenas para as protenas com capacidade cataltica, enquanto que o termo "fermento" se refere actividade exercida por organismos vivos. Em 1897, Eduard Buchner descobriu que os extratos de levedo podiam fermentar o acar at lcool e provou que as enzimas envolvidas na fermentao continuavam funcionando mesmo quando removidas das clulas vivas [6]. Esta descoberta valeu-lhe o prmio Nobel de Qumica em 1907. Restava determinar qual a natureza das enzimas. Alguns afirmavam que as protenas, associadas actividade enzimtica, apenas eram o suporte da verdadeira enzima, e, por si prprias, incapazes de catlise. Em 1926, James B. Sumner purificou e cristalizou a urease, mostrando tratar-se de uma protena pura, e fez o mesmo, em 1937, para a catalase. A prova final foi feita por Northrop e Stanley em 1930, com o estudo de trs enzimas digestivas, a pepsina, a tripsina e a quimotripsina, pelo que receberam o Prmio Nobel da Qumica em 1946.[7] J.B.S. Haldane escreveu um tratado intitulado "Enzimas", onde continha a notvel sugesto de que as interaes por ligaes fracas, entre a enzima e seu substrato, poderiam ser usadas para distorcer a molcula do substrato e catalisar a reao. A cristalizao de enzimas purificadas permitiu que as suas estruturas moleculares pudessem ser examinadas por cristalografia de raios X, o que aconteceu primeiro com a lisozima, uma enzima que ocorre na saliva, lgrimas e na clara de ovo e destri a parede celular de bactrias, em 1965 [8]. Comearam assim a bioqumica e biologia estruturais, que se esforam por compreender o funcionamento dos enzimas a nvel atmico. A tentativa de compreender o mecanismo da catlise enzimtica a nvel quntico tem sido facilitada recentemente pelo aumento de capacidade aritmtica dos computadores. [editar] Estruturas e mecanismos Ver artigo principal: Catlise enzimtica

Diagrama PDB 1MOO mostrando a Anidrase carbnica II. A esfera a cinzento um io de zinco que funciona como cofactor no stio activo. As enzimas so protenas, e podem ter um tamanho desde 62 resduos de aminocidos, como o caso do monmero da enzima 4oxalocrotonato tautomerase,[9] at um tamanho de 2.500 resduos, como o caso da sintase de cidos gordos.[10] A actividade das enzimas so determinadas pela sua estrutura quaternria.[11] A maioria das enzimas so maiores do que o substrato sobre o qual actuam, e s uma pequena poro da enzima (cerca de 3-4 aminocidos) est envolvida na catlise.[12] A regio que contm estes resduos catalticos, que se liga-se ao substrato e que desempenha a reaco, denominada de stio activo. As enzimas tambm podem ter stios onde se ligam cofactores, que so necessrios s reaces catalticas. Algumas enzimas tambm podem ter stios de ligaes para pequenas molculas, que so produtos ou substratos, directos ou indirectos, da reaco catalisada. Estas ligaes servem para aumentar ou diminuir a actividade da enzima, providenciando um meio de regulao por feedback. Tal como todas as protenas, as enzimas so formadas por longas cadeias lineares de aminocidos que sofrem um enovelamento que tem como resultado um produto com estrutura tridimensional. Cada sequncia nica de aminocidos produz tambm uma estrutura tridimensional nica que tem propriedade especficas. Cadeias individuais de protenas podem por vezes agrupar-se para formar um complexo proteico. A maioria das enzimas pode sofrer desnaturao, isto , a sua estrutura pode sofrer desagregao e inactivao pelo aumento de temperatura, o que provoca alteraes na conformao tridimensional da protena. Dependendo da enzima, a desnaturao pode ter efeitos reversveis ou irreversveis. [editar] Especificidade As enzimas possuem normalmente uma alta especificidade em relao s reaces que catalizam e aos substratos que esto envolvidos nessas reaces. A forma complementar, carga e caractersticas hidroflicas/hidrofbicas, so responsveis por esta especificidade. As enzimas exibem tambm elevados nveis de estereoespecificidade, regioselectividade e quimioselectividade.[13] Algumas das enzimas que apresentam maior especificidade e preciso, esto envolvidas na cpia e expresso do genoma. Estas enzimas possuem mecanismos de proof-reading (reviso). Um destes casos a DNA polimerase, que cataliza uma reaco num primeiro passo, para de seguida confirmar, num segundo passo, se o produto o correcto. [14] Este processo em duas etapas resulta em mdias de taxa de erro muito diminutas, na ordem de uma para cem milhes de reaces, no caso de polimerases de mamferos.[15] Mecanismos de reviso similares tambm podem ser encontrados na RNA polimerase,[16] na aminoacil-tRNA sintetases[17] e em ribossomas.[18]

Algumas enzimas que produzem metabolitos secundrios so descritos como promscuos, visto que podem actuar num largo espectro de diferentes substratos. Tem sido sugerido que este tipo de especificidade alargada importante nos processos de evoluo de novas vias de biossntese.[19] [editar] Modelo chave-fechadura As enzimas exibem uma elevada especificidade, e foi sugerido por Emil Fischer, em 1894, que esse facto era devido a que tanto as enzimas como os substratos apresentam formas geomtricas complementares, fazendo com que encaixem de maneira precisa umas nos outros.[20] Este processo muitas vezes referido como modelo chave-fechadura. No entanto, apesar de estes modelo explicar a especificidade das enzimas, falha em explicar a estabilizao dos estados de transio que as enzimas exibem. [editar] Modelo do encaixe induzido

Diagramas que mostram a actividade enzimtica atravs do modelo do encaixe induzido. Em 1958, Daniel Koshland sugeriu uma modificao ao modelo de chave-fechadura: uma vez que as enzimas exibem estruturas flexveis, o stios activo altera a sua forma de maneira continuada atravs de interaces com o substrato, enquanto esse mesmo substrato vai interagindo com a enzima.[21] Como resultado, o substrato no se liga simplesmente a um stio activo que rgido. As cadeias laterais dos aminocidos que formam o stios activo sofrem um reorientao de maneira a que as suas posies potenciem a aco cataltica da enzima. Em alguns casos, como nas glicosidases, a molcula de substrato tambm sofre alteraes de conformao medida que vai se aproximando do stio activo.[22] O stio activo continua a sofrer modificaes at que o substrato esteja completamente ligado e neste momento em que a conformao final e a carga so determinadas. [23] [editar] Mecanismos As enzimas actuam de diversas formas, todas elas baixando o valor de G :[24] Baixando a energia de activao, atravs da criao de um ambiente no qual o estado de transio estabilizado (por exemplo, distorcendo a forma da molcula do substrato - a enzima distorce o substrato, gastando energia neste passo, de modo a baixar a energia do estado de transio da reaco catalisada, resultando numa diminuio global da energia requerida para completar a reaco). Providenciando uma via alternativa (por exemplo, reagindo com o substrato formando um complexo enzima-substrato, de existncia impossvel sem a presena da enzima). Reduzindo a variao da entropia da reaco ao orientar os substratos de forma correcta para facilitar a reaco. Na ausncia de enzima, as molculas colidem em todas as direces possveis de forma aleatria, um processo menos eficiente que na presena da enzima. Ao considerar-se H isoladamente, este aspecto negligenciado. [editar] Dinmica e funes Investigaes recentes providenciaram novos conhecimentos sobre a ligao entre a dinmica interna de uma enzima e o seu mecanismo de catlise[25][26][27]. A dinmica interna de uma enzima descrita como o movimento de partes internas (como aminocidos individuais, grupos de aminocidos, um lao da cadeia, uma hlice alfa, folhas beta vizinhas ou at domnios proteicos inteiros) destas biomolculas, que podem ocorrer a diversas escalas de tempo, desde femtossegundos a segundos. Redes de resduos de aminocidos de uma estrutura podem contribuir para a catlise atravs de movimentos dinmicos[28][29][30][31]. Os movimentos em protenas so importantes para diversas enzimas mas o tipo de reaco que elas catalisam determina que tipos de movimento so mais importantes: pequenas e rpidas vibraes ou lentas e significativas alteraes conformacionais. Estes estudos tm consequncias na compreenso dos efeitos alostricos, na produo industrial de enzimas e no desenvolvimento de novos frmacos. [editar] Regulao alostrica As enzimas alostricas mudam a sua estrutura aquando da ligao de determinadas molculas. A modulao da actividade da enzima pode ser directa, quando a molcula se liga directamente a um local de ligao na enzima, ou indirecta, quando a molcula se liga a outras protenas ou subunidades que interagem com a enzima alostrica, influenciando ento a sua actividade. [editar] Cofactores e coenzimas

Ver artigo principal: Cofactor Ver artigo principal: Coenzima [editar] Cofactores Algumas enzimas no necessitam de componentes adicionais para mostrarem uma actividade completa. No entanto, outras requerem ligao a molculas no protecas para que possam exercer a sua actividade. Os cofactores podem ser inorgnicos (ies metlicos e complexos ferro-enxofre) ou compostos orgnicos (flavina ou heme). Os cofactores orgnicos (coenzimas) so normalmente grupos prostticos, que esto intimamente ligados s enzimas a que eles prestam assistncia. Os cofactores que possuem ligao forte s enzimas so distintos de outras coenzimas, tal como a NADH, visto que no so libertados do stio activo durante a reaco catalisada. Um exemplo de uma enzima que contm um cofactor a anidrase carbnica, que mostrada em figura acima com um io de zinco como cofactor.[32] Estas molculas que possuem uma ligao estreita com as enzimas so normalmente encontradas no stio activo e esto envolvidas na reaco cataltica. Por exemplo, a flavina e grupos heme esto muitas vezes envolvidos em reaes de oxidaoreduo. Enzimas que requerem um cofactor mas que no se ligam a estes, so denominadas apoenzimas. Uma apoenzima juntamente com o(s) seu(s) cofactor(es) so denominadas holoenzimas. A maioria dos cofactores no se ligam por covalncia a uma enzima, mas estabelecem ligaes fortes. No entanto, os grupos prostticos orgnicos podem ligar-se de maneira covalente. Um exemplo disso a ligao da tiamina pirofosfato enzima piruvato desidrogenase. [editar] Coenzimas

Modelo tridimensional da coenzima NADH. As coenzimas so pequenas molculas que transportam grupos qumicos de uma enzima para outra.[33] Alguns destes compostos qumicos, como a riboflavina, a tiamina e o cido flico, so vitaminas, compostos que no so sintetizados no organismo e que tm de ser assimilados atravs da dieta. Os grupos qumicos transportados incluem o io hidreto (H-) transportado pelo NAD ou NADP+, o grupo acetilo transportado pela coenzima A, os grupos formilo, metenilo e metilo transportados pelo cido flico e o grupo metilo transportado pela S-adenosilmetionina. Dado que as coenzimas so modificadas quimicamente como consequncia da aco enzimtica, til consider-las como sendo uma classe especial de substratos, ou substratos secundrios, que so comuns em muitos tipos de enzimas diferentes. Por exemplo, sabe-se que existem cerca de 700 enzimas que utilizam a coenzima NADH.[34] As coenzimas sofrem regenerao e as suas concetraes so mantidas a um nvel estvel dentro da clula. Por exemplo, o NADPH regenerado atravs da via das pentoses-fosfato e a S-adenosilmetionina regenerada pela metionina adenosiltransferase. [editar] Termodinmica

Diagrama de uma reaco cataltica, mostrando o nvel de energia em cada etapa da reaco. Normalmente, o substrato necessita de uma quantidade elevada de energia para conseguir chegar ao estado de transio, decaindo depois at a um produto final. A enzima estabiliza o estado de transio, reduzindo o valor de energia necessrio para que se formem os produtos. A linha a vermelho (cheio) representa a reaco na ausncia de catalisador; a azul (tracejado), na presena de enzima. S: nvel de energia do(s) substrato(s); P: nvel de energia do(s) produto(s); G: energia de Gibbs; R: coordenada de reaco (sentidos de progresso de reaco); G': energia livre padro bioqumica; G: energia de activao (S-P: do(s) substrato(s); P-S: do(s) produto(s)). Ver artigos principais: energia de activao, equilbrio termodinmico, equilbrio qumico. Tal com acontece com todos os compostos catalisadores, as enzimas no alteram a posio do equilbrio qumico da reaco. Normalmente, na presena de uma enzima, a reaco desenvolve-se na mesma direco que se seria tomada se ela no estivesse presente, mas de maneira mais rpida. no entanto, Na ausncia da enzima, as reaces podero dar origem a diferentes produtos, porque nessas condies esses produtos so formados de maneira mais rpida. Para alm disso, as enzimas podem executar duas ou mais reaces, de tal maneira que a actuao numa reaco termodinamicamente favorvel possa facilitar a actuao numa reaco menos favorvel. Por exemplo, a energia disponibilizada pela hidrlise do ATP normalmente utilizada para executar outras reaces.

As enzimas catalisam as reaces em ambos os sentidos. Elas no alteram o equilbrio em si, mas a velocidade em que este alcanado. Por exemplo, a anidrase carbnica catalisa a sua reaco nas duas direces, dependendo da concentrao dos seus reagentes. (em tecidos; alta concentrao de CO2) (nos pulmes; baixa concentrao de CO2) Se o equilbrio estiver substancialmente deslocado para uma das direces, isto , se for uma reaco muito exergnica, a reaco efectivamente irreversvel. Nestas condies, a enzima s catalizar a reaco na direco termodinamicamente permitida.

[editar] Cintica

Mecanismo de reaco de uma enzima com substrato nico. A enzima (E) liga o substrato (S) e liberta o produto (P). A cintica enzimtica o estudo do mecanismo pelo qual as enzimas ligam substratos e os transformam em produtos. So utilizados dados sobre a velocidade de reaco de enzimas atravs de ensaios enzimticos. Em 1902, Victor Henri[35] props uma teoria quantitativa de cintica enzimtica, mas os seus dados experimentais tinham pouca utilidade porque no era ento considerada a importncia da concentrao do io H+. Depois de Peter Lauritz Srensen definir a escala logartmica de pH e introduzir o conceito de soluo tampo em 1909[36], o qumico alemo Leonor Michaelis e a sua ps-doc canadiana Maud Leonora Menten repetiram as experincias de Henri e confirmaram a sua equao, sendo esta cintica conhecida como cintica de Henri-Michaelis-Menten (muitas vezes simplificado para cintica de Michaelis-Menten)[37]. Este trabalho foi desenvolvido por G. E. Briggs e J. B. S. Haldane, que derivaram equaes cinticas usadas ainda hoje em dia[38]. Henri contribuiu significativamente para este campo ao teorizar as reaces enzimticas ocorrendo em dois passos. No primeiro, o substrato liga-se de forma reversvel enzima, formando o complexo enzima-substrato. Este complexo por vezes designado complexo de Michaelis. A enzima catalisa ento o passo qumico da reaco e liberta o produto.

Curva de saturao numa reaco enzimtica, mostrando a relao entre a concentrao de substrato ([S]) e a velocidade (V). As enzimas podem catalisar at vrios milhes de reaces por segundo. Por exemplo, a reaco catalisada pela orotidina 5'-fosfato descarboxilase tem uma semivida de 78 milhes de anos na ausncia de enzima, diminuindo para apenas 25 milissegundos na presena desta[39]. As velocidades de reaco dependem das condies em que as enzimas se encontram e da concentrao de substrato. Condies de alta temperatura, pH extremos ou altas concentraes salinas desestabilizam a estrutura da protena, desnaturando-a. Por outro lado, em geral, um aumento na concentrao de substrato tende a aumentar a actividade enzimtica. Experimentalmete, encontra-se a velocidade mxima de reaco aumentando progressivamente a concentrao de substrato, at se verificar uma velocidade constante de formao de produto. Tal visvel na curva de saturao do grfico direita. A saturao acontece porque, medida que aumentada a concentrao de substrato, aumenta tambm a quantidade de enzima presente sob a forma de complexo enzima-substrato (ES). velocidade mxima, Vmax, todos os centros activos esto ocupados (saturados) com substrato, ou seja, no existe enzima livre para ligar mais substrato e a concentrao de complexo ES igual concentrao de enzima. A actividade de uma enzima geralmente descrita atravs de Vmax e tambm da constante de Michaelis-Menten, KM, que representa a concentrao de substrato qual se detecta uma velocidade de reaco igual a metade de Vmax. Cada enzima possui um KM caracterstico para um dado substrato; este parmetro muitas vezes usado para demonstrar a fora de ligao de um substrato enzima. tambm usada outra constante cintica, kcat, para descrever o comportamento de uma enzima, representando o nmero de molculas de substrato que podem ser catalisadas por centro activo por segundo. A eficincia cataltica de uma enzima pode ser expressa atravs da constante de especificidade, igual razo kcat/Km. A constante de especificidade relaciona-se tanto com a afinidade da ligao do substrato enzima como com a capacidade cataltica desta, pelo que se torna til para a comparao entre diferentes enzimas, ou a mesma enzima com diferentes substratos. Existe um valor mximo terico para esta constante, cerca de 108 to 109 M1 s1, denominado limite de difuso. Considerando-se que cada coliso entre enzima e substrato resulta em catlise, a velocidade global de formao do produto no ser limitada pela velocidade de reaco da enzima mas

sim pela velocidade de difuso das molculas em soluo. Enzimas que possuam uma constante de especificidade perto deste valor so designadas enzimas cataliticamente (ou cineticamente) perfeitas; alguns exemplos incluem as enzimas triose fosfato isomerase, anidrase carbnica, acetilcolinesterase, catalase, fumarase, -lactamase e superxido dismutase. A cintica de Michaelis-Menten baseia-se na lei da aco das massas, que derivada das assunes sobre difuso livre e sobre colises aleatrias com base termodinmica. No entanto, muitos dos processos bioqumicos ou celulares no se comportam da forma prevista por estes modelos devido alta concentrao de substncias no meio celular, separao de fases entre enzima, substrato e produto e restrio do movimento molecular a uma ou duas dimenses [40]. Nestas situaes, aplicvel um modelo fractal da cintica de Michaelis-Menten[41][42][43][44]. Algumas enzimas apresentam cintica mais veloz que as velocidades de difuso, no que aparenta ser uma impossibilidade. Diversos mecanismos foram usados como razo para explicar este fenmeno. Uma explicao a de algumas enzimas acelerarem a sua catlise ao captar e orientar o seu substrato usando dipolos elctricos. Outros modelos usam um mecanismo quntico-mecnico de tunneling, em que um proto ou electro podem atravessar barreiras de activao, embora o modelo de tunneling de protes seja controverso[45][46], tendo sido no entanto observado na triptamina [47]. Estes modelos sugerem que a catlise enzimtica seja possivelmente melhor descrita em termos de "atravessar um barreira" em detrimento do modelo tradicional de "passar por cima" de uma barreira energtica diminuda. [editar] Inibio

Os inibidores competitivos ligam-se de maneira reversvel enzima, prevenindo a ligao do substrato. Por outro lado, a ligao do substrato previne a ligao do inibidor. O substrato e o inibidor competem pela enzima. a) Reaco normal, (b) Inibio. S: substrato; E: enzima; I: inibidor; A: centro activo. (1) O substrato liga-se enzima; (2) A enzima liberta produtos; (3) O inibidor liga-se enzima; (4) O inibidor compete com o substrato.

Ver artigo principal: Inibidor enzimtico As taxas de reaco enzimticas podem ser diminudas por aco de vrios tipos de inibidores enzimticos. Inibio competitiva Na inibio competitiva, o inibidor e o substrato competem pela enzima, isto , no se podem ligar ao mesmo tempo enzima. Os inibidores so muitas vezes semelhantes ao substrato da enzima. Por exemplo, o metotrexato um inibidor competitivo da enzima dihidrofolato redutase, que cataliza a reduo do dihidrofolato em tetrahidrofolato. A similitude entre as estruturas do cido flico e desta droga so mostradas na figura adjacente. Notar que o local de ligao do inibidor no necessariamente o mesmo que o local de ligao do inibidor, se a ligao de este ltimo mudar a conformao da enzima com vista a impedir a ligao do substrato, e vice versa. Na inibio competitiva, a velocidade mxima da reaco no alterada, mas nveis mais altos de concentrao do substrato so requeridos para que se atinja uma determinada velocidade, aumentando o K M aparente. Inibio acompetitiva ou incompetitiva Na inibio acompetitiva, o inibidor no se pode ligar enzima no estado livre, mas somente ao complexo E-S. O complexo E-I-S assim formado, enzimaticamente inactivo. Este tipo de inibio raro, mas pode ocorrer em enzima multimricas. Inibio no-competitiva Os inibidores no-competitivos podem ligar-se enzima e ao substrato ao mesmo tempo, ou seja, nunca se ligam ao stio activo. Quer o complexo E-I, quer o complexo E-I-S, so enzimaticamente inactivos. Tanto o KM aparente como o Vmax mudam neste caso, pois o inibidor no pode ser desligado da enzima por aumento da concentrao de substrato (em contraste com o que acontece na inibio competitiva). Inibio mista Este tipo de inibio assemelha-se inibio no-competitiva. Neste caso, o complexo E-I-S possui actividade enzimtica residual. Em muitos organismos, os inibidores podem agir como parte do mecanismo de retroalimentao. Se uma enzima produz um determinada substncia em demasia, essa substncia poder agir como inibidor da enzima, no incio da via que a produz, causando a reduo ou paragem da produo da substncia quando esta se acumula. Esta um forma de retroalimentao negativa. Enzimas que esto sujeitas a esta forma de regulao so muitas vezes multimricas e possuem stios de ligao alostricos para substncias reguladoras. Os seus grficos substrato/velocidade no tm a forma hiperblica mas sim forma sigmide (curva em forma de S)

O cido flico ( esquerda) e a droga anticancergena metotrexato so semelhantes na sua estrutura. Como resultado, o metotrexato um inibidor competitivo de muitas das enzimas que utilizam os folatos. Os inibidores irreversveis reagem com a enzima e formam ligaes covalentes com a cadeia polipeptdica. Este tipo de inactivao irreversvel. Um exemplo de inibidor irreversvel a eflornitina, uma substncia utilizada no tratamento da doena do sono [48]. A penicilina e a aspirina tambm actuam deste modo. Nestes casos, o composto liga-se ao centro activo e a enzima converte-o a uma forma activada que reage irreversivelmente com um ou mais resduos de aminocidos. [editar] Usos de inactivadores Os inactivadores so muitas vezes usados como medicamentos, mas tambm podero actuar como venenos. No entanto, a diferena entre um medicamento e um veneno normalmente uma questo de dosagem, visto que a maior parte dos medicamentos e drogas so txicas a partir de certo nvel. Como Paracelso disse: "Todas as coisas so um veneno e nada existe sem veneno, apenas a dosagem razo para que uma coisa no seja um veneno"[49] Igualmente, os antibiticos e outras drogas anti-infecciosas so apenas venenos que matam o agente patognicos e no o hospedeiro deste. Um exemplo de um inactivador que usado como medicamento a aspirina, que inibe a ciclooxigenase 1 e a ciclooxigenase 2, que so enzimas que produzem um mensageiro que age em casos de inflamao, neste caso uma prostaglandina, suprimindo assim a dor e a inflamao. O cianureto um inactivador enzimtico irreversvel, que se combina com cobre e zinco no stio activo da anzima citocromo c oxidase, bloqueando a respirao celular.[50] [editar] Funes biolgicas

A aco da luciferase induz bioluminiscncia nos pirilampos As enzimas exercem uma grande variedade de funes nos organismos vivos. So indispensveis para a transduo de sinais, na regulao celular, muitas vezes por aco de cinases e fosfatases.[51] Atravs da sua aco podem gerar movimento, como no caso da miosina que hidroliza ATP, gerando contraces musculares. Tambm movimentam carga atravs da clula, atravs da aco do citoesqueleto.[52] Algumas enzimas so ATPases (funcionam como bombas inicas), que se localizam na membrana celular, estando envolvidas do processo de transporte activo. Algumas funes mais exticas so operadas por enzimas, como o caso da luciferase que gera luz nos pirilampos.[53] Os vrus podem conter enzimas que auxiliam na infeco de clulas (HIV-integrase e transcriptase reversa) ou na libertao celular de vrus (neuraminidase no vrus influenza). Uma importante funo das enzimas tem lugar no sistema digestivo dos animais. Enzimas como as amilases e proteases, quebram grandes molculas como o amido e protenas, respectivamente, em molculas de menores dimenses, de maneira a que estas possam ser absorvidas no intestino. O amido no absorvvel no intestino, mas as enzimas hidrolizam as cadeias de amido em molculas menores tais como a maltose e a glucose, podendo desta maneira ser absorvidas. Diferentes enzimas actuam sobre diferentes tipos de alimento. Nos ruminantes, que possuem uma dieta herbvora, bactrias no sistema digestivo produzem uma enzima denominada celulase que quebra as paredes celulares das clulas vegetais. As enzimas podem trabalhar em conjunto, seguindo uma ordem de actuao especfica. Desta maneira podem formar vias metablicas. Nestas vias, uma enzima processa o produto da aco de outra enzima como o seu substrato. Aps a reaco cataltica, o produto depois entregue a outra enzima. Por vezes, mais do que uma enzima pode catalisar a mesma reaco, em paralelo. Isto permite uma regulao mais complexa: As enzimas determinam que passos que ocorrem nessa vias metablicas. Sem a presena de enzimas, o metabolismo no progride atravs dos mesmo passos, nem suficientemente rpido para que sirva as necessidades da clula. De facto, uma via metablica to importante como a gliclise no poderia existir sem a presena de enzimas. A glucose, por exemplo, pode reagir directamente com o ATP para dar origem a um produto fosforilado em um ou mais carbonos. Na ausncia de enzimas, este processo to lento que se torna insignificante. No entanto, se a enzima hexocinase for adicionada, estas reaco lentas continuam a ser efectuadas, mas a fosforilao do carbono nmero 6 ocorre de maneira to rpida que, se a mistura for testada pouco tempo depois, a glicose-6-fosfato o nico produto significativo. Consequentemente, pode-se dizer que a rede de vias metablicas existentes dentro de cada clula depende do conjunto de enzimas funcionais que esto presentes. [editar] Controle da atividade A atividade enzimtica na clula controlada de cinco principais modos: 1. A produo da enzima (transcrio e traduo dos genes que codificam a enzima) pode ser aumentada ou diminuda pela clula em resposta a mudanas no ambiente celular. Esta forma de regulao gentica designada como induo ou inibio da expresso enzimtica. Por exemplo, as bactrias podem desenvolver resistncia a antibiticos como a penicilina porque so induzidas enzimas (lactamases) que hidrolisam o anel beta-lactmico presente na estrutura do antibitico e essencial para a sua actividade biolgica. Outro exemplo a importncia das enzimas hepticas citocromo P450 oxidases, envolvidas no metabolismo de desintoxicao de xenobiticos.

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As enzimas podem encontrar-se compartimentadas, com difentes vias metablicas (ou partes de vias metablicas) ocorrendo em diferentes compartimentos celulares. Por exemplo, os cidos gordos so sintetizados por um conjunto de enzimas no citoplasma, no retculo endoplasmtico e no complexo de Golgi e usados por um conjunto diferente de enzimas como fonte de energia na mitocndria, atravs da -oxidao[54]. As enzimas podem ser reguladas por inibidores e activadores. Por exemplo, os produtos finais de uma dada via metablica so frequentemente inibidores das enzimas que catalisam os primeiros passos da via (normalmente o primeiro passo factualmente irreversvel), regulando assim a quantidade de produto final produzido pela via. Este tipo de regulao denominado mecanismo de feedback (ou autoalimentao) negativo porque a quantidade de produto final regulada pela sua prpria concentrao. Na prtica, o feedback negativo ajusta a velocidade de sntese de metabolitos intermedirios da via de acordo com a necessidade da clula. Este mecanismo ajuda na distribuio econmica e eficiente de compostos, evitando a produo excessiva de produtos finais. Tal como outros mecanismos homeostticos, o controlo da actividade enzimtica ajuda na manuteno de um ambiente interno estvel em organismos vivos. As enzimas podem ser reguladas atravs da sua modificao ps-traducional. Este tipo de modificao inclui a fosforilao, a miristoilao e a glicosilao. Por exemplo, a fosforilao de diversas enzimas, como a glicognio sintase, em resposta a um sinal da insulina, ajuda no controlo da sntese ou degradao do glicognio e permite a resposta celular a variaes da glicemia[55]. Outro exemplo a quebra da cadeia polipeptdica da quimotripsina, uma protease digestiva que produzida numa forma inactiva (quimotripsinognio) no pncreas e transportada ento para o estmago, onde activada. Este mecanismo evita a digesto de tecidos pancreticos (ou outros) pela quimotripsina antes de entrar no tracto digestivo. Este tipo de precursor inactivo de uma enzima denominado zimgeno. Algumas enzimas tornam-se activas quando so colocadas num ambiente diferente (por exemplo, de um ambiente citoplasmtico redutor para um ambiente periplasmtico oxidativo). Um exemplo encontra-se na hemaglutinina dos vrus Influenza (vrus da gripe), que sofre uma mudana conformacional quando encontra o ambiente acdico de vesculas da clula hospedeira, provocando a sua activao[56]. [editar] Envolvimento em doenas

Fenilalanina hidroxilase. PDB 1KW0 Uma vez que controlo da actividade enzimtica essencial para a homeostase, qualquer alterao em genes que codifiquem enzimas (mutaes ou deleces) poder ter como efeito o aparecimento de doenas genticas. A importncia das enzimas demonstrada pelo facto de que uma doena letal pode ser causada pelo mau funcionamento de um nico tipo de enzima entre as milhares que esto presentes no corpo humano. Um exemplo disso que o acontece com o tipo mais comum de fenilcetonria. Uma mutao num nico aminocido da enzima fenilalanina hidroxilase, que cataliza o primeiro passo na degradao da fenilalanina, resulta na acumulao da fenilalanina e dos produtos associados. Isto pode causar atraso mental se a doena no for tratada.[57] Outro exemplo acontece quando mutaes em genes que codificam enzimas envolvidas no reparo de DNA causam sndromas de cancro hereditrio, tal com a xerodermia pigmentosa. Defeitos nestas enzimas podem causar cancro, visto que o corpo fica com uma habilidade menor para reparar mutaes no genoma. Isto causa uma lenta acumulao de mutaes e resulta no desenvolvimento de muitos tipos de cancro no paciente