O Toxoplasma gondii, parasita intracelular obrigatrio, possui trs formas de evoluo: 1 - Taquizoitos (ou trofozoitos) so as formas de reproduo rpida,

encontradas nos tecidos durante a infeco aguda, e que possuem a capacidade de invadir clulas. Eles virtualmente desaparecem com o evoluir da resposta imune, mas persistem no interior de certas clulas na forma de cistos. 2 - Bradizoitos (ou merozoitos) - formas de reproduo lenta ou de repouso so os microrganismos contidos dentro dos cistos. Como estes podem ter sua cpsula desenvolvida a partir da clula hospedeira, tambm so referidos como pseudocistos. 3 - Oocistos so formas produzidas exclusivamente nas clulas intestinais dos felinos e eliminadas nas fezes. 1 - IgM negativo (-) e IgG negativo (-): ausncia de contato com o T.gondii ou infeco muito recente, dentro do prazo de poucos dias em que a resposta imunolgica ainda no est detectvel. 2 - IgM negativo (-) e IgG positivo (+): infeco pregressa com o T.gondii h mais de 1 ano. 3 - IgM positivo (+) e IgG negativo (-): este resultado deve ser interpretado com cuidado pode ser uma infeco aguda na fase inicial em que ainda no positivou a IgG (o que raro) ou um IgM falso positivo (o que mais comum). Ser necessrio colher nova amostra depois de duas semanas: se tratava-se realmente uma infeco na fase inicial, esta segunda amostra dever continuar com IgM positivo e agora com o IgG tambm positivo; se o IgG se mantiver negativo, indica falso positividade do IgM. 4 - IgM positivo (+) e IgG positivo (+): este resultado sugestivo de infeco recente. A confirmao deve ser feita com o teste da avidez. Teste da avidez do IgG

Este teste baseia-se na crescente avidez que os anticorpos apresentam pelo antgeno ao longo do tempo. um auxiliar valioso para o diagnstico de infeco antiga: quando so encontrados anticorpos especficos da classe IgG com alta avidez (maior do que 60%), a infeco ocorrida j data de, pelo menos, 3 meses. O resultado do teste com avidez baixa (menor do que 30%) sugere que a infeco seja recente, com menos de 3 meses, mas, em alguns casos, a avidez pode permanecer baixa por vrios meses, o que impede uma interpretao segura. o mtodo de escolha para o diagnstico de toxoplasmose congnita a pesquisa do Toxoplasma pelo PCR, feito no sangue perifrico do recm-nato ou no sangue do cordo umbilical. pesquisa de anticorpos (HAI), IgG de e IgM pelo teste indireta de 2-

hemaglutinaoindireta

hemaglutinao

mercaptoetanol (HAI/2 ME) e a pesquisa de IgG pelo mtodo de imunofluorescncia indireta (IFI), em anlises seqenciais de amostras de soros, tm sido utilizadas para o diagnstico de toxoplasmose congnita. A produo da imunoglobulina M aparece inicialmente, caracterizando a fase aguda da enfermidade, seguida de imunoglobulina G, que aparece mais tardiamente. Os ttulos de IgG se mantm constantes ou ascendentes se houver a infeco,

decrescendo ou at desaparecendo em prazo de poucos meses, no caso da transmisso passiva de anticorpos pelo colostro (DUBEY et al., 1987a). Muitos laboratrios utilizam o teste de ELISA para o diagnstico da toxoplasmose humana, por ser um mtodo que apresenta alta sensibilidade e especificidade, de fcil execuo, quantitativo, baixo custo, alm de poder ser automatizado. A maioria desses tes-

tes usa fraes antignicas simples do parasita inteiro29 ou antgenos solveis17,26. No presente trabalho, a reao foi feita com extrato total de taquizotos na concentrao

PCR A tcnica de PCR tem sido utilizada para o diagnstico da toxoplasmose congnita, ocular e em pacientes imunocomprometidos. Nesta linha, o PCR realizado em lquido amnitico, tecido placentrio, sangue, liquor, urina, entre outros, possui valor comprovado.

O mais comum o uso do PCR para diagnstico de infeco congnita utilizando-se o lquido amnitico. O diagnstico pr-natal de toxoplasmose congnita primariamente baseado em achados na ultra-sonografia e no PCR do lquido amnitico.

O PCR realizado com 18 semanas de gestao mais sensvel, mais rpido e seguro do que os procedimentos diagnsticos realizados com o sangue fetal. Este diagnstico deve ser feito em todas as mulheres grvidas com testes sorolgicos positivos para toxoplasmose e alta suspeita de infeco aguda adquirida durante a gestao e tambm se houver achados sugestivos de dano fetal ao ultrassom. Esta tcnica possui VPP = 100% e VPN = 99,7%, quando realizado entre 8 e 18 semanas de gestao.

O PCR em tempo real tambm tem sido realizado para o diagnstico de toxoplasmose. Este mtodo combina a amplificao e a deteco de DNA em uma nica fase, encurtando o tempo de realizao do teste de 48 para 4 horas e utilizando-se de mtodos automatizados o que diminui a variabilidade interlaboratorial. O PCR em tempo real pode estimar a concentrao de parasitas no lquido amnitico e predizer o prognstico do feto.

Os sinais na ultra-sonografia, que podem aparecer em at 28% dos casos de fetos considerados infectados, so: hidrocefalia, microcefalia, calcificaes intracranianas, hepatoesplenomegalia, ascite fetal e placentomegalia.

Western Blot - O teste de Western Blot utilizado para detectar a presena do parasita nos marcadores sorolgicos do recm-nascido. O diagnstico da toxoplasmose congnita no recm-nascido feito pela demonstrao da presena de anticorpos IgM ou IgA contra o T. gondii. O diagnstico no pode ser feito apenas pela demonstrao de anticorpos IgG, j que estes so transferidos passivamente da me para o feto. Entretanto, deve-se ter cautela na interpretao dos resultados de IgM e IgA no recm-nascido, pois a transmisso de IgM e/ou IgA materna pode ocorrer durante o nascimento. Devido a curta meia vida destes anticorpos (IgM e IgA), os testes positivos devem ser confirmados e repetidos do segundo ao quarto dia de vida (IgM) e no dcimo dia de vida (IgA).

Outro mtodo para o diagnstico da toxoplasmose no recm-nascido a realizao do teste de Western Blot em me e recm-nascido. Em 1985, pesquisas revelaram que bandas eram claramente demonstrveis em blots de IgG e/ou IgM do soro de recm-nascidos infectados que no estavam presentes em blots no soro das mes. Mesmo aps 20 anos, este mtodo ainda tem sido utilizado e demonstrado mais sensibilidade que a deteco de IgM. O ciclo biolgico do Toxoplasma gondii ocorre em duas fases distintas do parasito. A fase assexuada do protozorio que ocorre nos linfonodos e tecidos dos hospedeiros intermedirios, e a fase sexuada que ocorre no epitlio intestinal dos hospedeiros definitivos. Por este fato o T. gondii considerado um parasito com ciclo heteroxeno, no qual os feldeos so considerados os hospedeiros definitivos ou completos e o homem e outros vertebrados homeotrmicos, os hospedeiros intermedirios ou incompletos. Pode ocorrer aborto, nascimento de crianas com a ttrade de Sabin (Sabin, 1942) (macro ou microcefalia, coriorretinite, calcificaes cerebrais e retardo mental), dficit intelectual,

Inflamao da coride na qual a retina sensorial se torna edematosa e opaca. As clulas inflamatrias e o exsudato podem tourar atravs da retina sensorial para embaar o corpo vtreo. inflamao da retina
(corioretinite). Ela acontece na maioria das vezes como decorrncia da contaminao na vida fetal, manifestando-se adulto jovem na adolescncia ou quando

retinocoroidite bilateral, estrabismo ou nascimento de crianas aparentemente normais, que apresentam cistos em estado de latente A infeco aguda em adultos pode acarretar alterao ganglionar, febre, um leve resfriado ou adenopatia, e hepatoesplenomegalia (Costa et al., 2007). A toxoplasmose adquirida pelo paciente imunodeprimido frequentemente aparece como doena do Sistema Nervoso Central (encefalite) e retinite. De acordo com Hill e Dubey (2002), a encefalite a manifestao mais importante e a maior causa de severos prejuzos em pacientes imunossuprimidos. Os pacientes podem ter dores de cabea, desorientao, sonolncia, mudanas no reflexo e convulses. A PCR (Polymerase Chain Reaction), pode ser realizada no sangue, urina e no LCR do RN, sendo um teste de sensibilidade elevada. A PCR tem sido tambm realizada no lquido amnitico para diagnstico da infeco intra-uterina Cistos de T. gondii podem ser encontrados at mesmo em retinas estruturalmente (e, portanto, oftalmoscopicamente) normais O T.gondii assume diferentes formas em diferentes estgios do seu ciclo. O ciclo inicia-se pela ingesto de cistos presentes em carne (por exemplo, de porco, rato ou coelho), pelos feldeos. A parede do cisto dissolvida por enzimas proteolticas do estmago e intestino delgado, o parasita liberado do cisto, penetra nos entercitos (clulas da mucosa intestinal) do animal e replica-se assexuadamente dando origem a vrias geraes de Toxoplasma atravs da reproduo assexuada. Aps cinco dias dessa infeco, inicia-se o processo de reproduo sexuada, em que os merozotos formados na reproduo assexuada do origem aos gametas. Os gmetas masculino

(microgameta) e feminino (macrogameta), descendentes do mesmo parasita ou de dois diferentes, fundem-se dando origem ao ovo ou zigoto, que aps segregar a parede cstica d origem ao oocisto. Este expulso com as fezes dos animais aps nove dias (cada gato expulsa mais de 500 milhes de oocistos em cada defecao). J no exterior, sofre diviso meitica (esporulao) novamente aps alguns dias, formando-se dois esporocistos cada um com quatro esporozotos. Uma forma altamente resistente a desinfectante pode durar cinco anos em condies midas. Estes so activados em taquizotos se forem ingeridos por outro animal, chamado hospedeiro intermedirio: por exemplo, um rato ou coelho que coma erva em que algum gato ou outro feldeo tenha defecado ou uma criana ou adulto que mexa com os dedos em material contaminado com fezes e depois leve-os boca. Os taquizotos podem se infectar e replicar em todas as clulas dos mamferos, exceto nas hemcias. Uma vez ligados a uma clula do hospedeiro, o parasito penetra na clula e forma um vacolo parasitforo, dentro do qual se divide. A replicao do parasito continua at que seu nmero no interior da clula atinja uma massa crtica que provoca a ruptura da clula, liberando parasitos que iro infectar outras clulas adjacentes. A maior parte dos taquizotos eliminada pelas respostas imunes humoral e celular do hospedeiro. Algumas dessas formas produzem oocistos, contendo muitos bradizotos, ocorrendo em vrios rgos do hospedeiro, mas persistem no SNC e nos msculos. Se o animal for caado e devorado por um feldeo, os cistos libertam os parasitas dentro do seu intestino, infectando o novo hspede definitivo. IgG o marcador da imunidade ao parasita. IgM o marcador de infeco aguda pelo parasita