Via das pentoses-fosfato; Rui Fontes

Via das pentoses-fosfato

1Pelo menos algumas das enzimas da via das pentoses-fosfato existem em todas as clulas do organismo e, em certos tecidos e clulas como o fgado, o tecido adiposo, a glndula mamria activa, o cortex supra renal e os eritrcitos uma parte significativa da glicose oxidada nesta via metablica. Na via das pentoses-fosfato (via do fosfogliconato ou desvio (shunt) das hexose-monofosfato) o agente oxidante no o NAD+ (como na gliclise) mas o NADP+ pelo que, neste caso, se forma NADPH. A aco sequenciada de 3 enzimas que catalisam reaces fisiologicamente irreversveis [desidrognase da glicose-6-fosfato (ver equao 1), hidrlase da 6-fosfogliconolactona (ver equao 2) e desidrognase do 6-fosfogliconato (ver equao 3)] permite a formao da ribulose-5-fosfato (uma cetopentose-fosfato) que, numa reaco fisiologicamente reversvel catalisada pela isomrase das pentoses-fosfato, pode ser convertida em ribose-5-fosfato (uma aldopentose-fosfato; ver equao 4). A equao 5 o somatrio das reaces referidas acima e descreve a aco sequenciada da chamada fase irreversvel da via das pentoses-fosfato (reaces 1-3) e da reaco catalisada pela isomrase das pentoses-fosfato (reaco 4): glicose-6-P + NADP+ 6-fosfogliconolactona + NADPH 6-fosfogliconolactona + H2O 6-fosfogliconato 6-fosfogliconato + NADP+ ribulose-5-P + NADPH + CO2 ribulose-5-P ribose-5-P glicose-6-P + 2 NADP+ + H2O ribose-5-P + 2 NADPH + CO2 3(1) (2) (3) (4) (5)

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Os produtos do processo descrito pela equao 5 so a ribose-5-fosfato e o CO2 (que resultaram da oxidao da glicose-6-fosfato) e o NADPH (que resultou da reduo do NADP+). A ribose-5-fosfato um substrato de vias metablicas que levam formao de nucleotdeos e de cidos nucleicos. O NADPH o agente redutor (i) em reaces de vias anablicas como as de sntese de cidos gordos, colesterol e hormonas esterides, (ii) na manuteno do glutatio no estado reduzido (GSH), (iii) em reaces de hidroxilao quer de compostos endgenos quer de xenobiticos (medicamentos e drogas) e (iv), nas clulas macrofgicas, em processos reactivos que levam morte de bactrias infectantes. Ao contrrio do que acontece no caso do NAD+/NADH em que a concentrao estacionria da forma oxidada cerca de 1000 vezes superior do NADH, no caso do NADPH/NADP+ a concentrao estacionria da forma reduzida cerca de 100 vezes superior do NADP+. Uma razo [NADPH]/[NADP+] elevada ajuda a compreender que as reaces em que o NADPH actua como redutor sejam termodinamicamente favorecidas. Nas situaes em que a glicemia elevada (como acontece normalmente durante o perodo absortivo) a sntese e a libertao de insulina nas clulas dos ilhus de Langerhans pancreticos esto activadas ao mesmo tempo que a sntese e a libertao de glicagina nas clulas dos mesmos ilhus est inibida. Estas duas hormonas tm no fgado efeitos antagnicos: a insulina estimula todos os processos em que se consome glicose e alguns dos processos anablicos em que se consome (oxida) NADPH enquanto a glicagina estimula todos os processos metablicos que levam formao de glicose. A insulina estimula a oxidao da glicose aumentando a formao de acetil-CoA e, ao mesmo tempo, a actividade das enzimas marca-passo da via da sntese de cidos gordos em que o substrato a acetil-CoA e o NADPH o agente redutor. A oxidao da acetil-CoA a CO2 no ciclo de Krebs um processo cuja velocidade est dependente do consumo de ATP: quando a insulina est elevada e a formao de acetilCoA mais rpida que a sua oxidao uma parte da acetil-CoA formada pode ser desviada para a formao de cidos gordos e, em ltima anlise, para a formao de gordura. Neste processo de sntese, o ATP sofre hidrlise mas tambm se oxida o NADPH formado na via das pentoses-fosfato. A concentrao de NADPH demasiado pequena para poder sustentar os processos de sntese se, a uma velocidade semelhante, no ocorresse a reduo do NADP+ formado. A insulina estimula a via das pentoses-fosfato induzindo a sntese (transcrio dos genes) das desidrognases da glicose-6-fosfato e do 6-fosfogliconato. Um outro factor que controla o fluxo na via das pentoses-fosfato a velocidade de consumo (oxidao) do NADPH. A desidrognase da glicose-6-fosfato inibida pelo NADPH e, se a concentrao de NADPH baixar na clula, esta desidrognase fica activada estimulando-se a via das pentoses-fosfato.

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Nalgumas clulas no sensveis insulina (como os eritrcitos) pode ser este o nico mecanismo controlador do fluxo na via das pentoses-fosfato. 5Quando, numa determinada situao metablica, a sntese de ribose-5-fosfato excede o seu consumo na sntese de nucleotdeos uma srie de reaces fisiologicamente reversveis catalisadas por duas isomrases e duas transfrases permite a transformao da ribose-5-fosfato em frutose-6-fosfato e gliceraldedo-3-fosfato. Para melhor compreender o processo de converso da ribose-5-fosfato em frutose-6-fosfato e gliceraldedo-3-fosfato til admitir-se que partimos de 3 molculas de ribose-5fosfato (35C=15C) e que se formam duas molculas de frutose-6-fosfato e uma de gliceraldedo-3fosfato (26C + 3C = 15C). As isomrases envolvidas no processo so a isomrase das pentosesfosfato (ver equao 4) e a epimrase das pentoses-fosfato (ver equao 6). A isomrase das pentosesfosfato a enzima que catalisou a formao da ribose-5-fosfato (a partir de ribulose-5-fosfato) mas tambm pode converter 2 das 3 molculas de ribose-5-fosfato de que partimos em ribulose-5-fosfato. Por sua vez a epimrase pode converter as duas molculas de ribulose-5-fosfato em xilulose-5-fosfato (uma cetopentose-fosfato). Nesta fase teramos uma molcula de ribose-5-fosfato e duas de xilulose-5fosfato. Por aco da transcetlase (ver equao 7) uma molcula de ribose-5-fosfato reage com uma molcula de xilulose-5-fosfato; a transferncia de uma unidade de 2 carbonos em que a xilulose-5fosfato funciona como substrato dador leva formao de uma molcula de sedoheptulose-7-fosfato (uma cetoheptose-fosfato) e outra de gliceraldedo-3-fosfato (aldotriose-fosfato). A transaldlase (ver equao 8) vai fazer reagir entre si os produtos da reaco anterior; neste caso a sedoheptulose-7fosfato que funciona como dador de uma unidade de 3 carbonos formando-se eritrose-4-fosfato (uma aldotetrose-fosfato) e frutose-6-fosfato. Nesta fase, tendo partido de 3 molculas de ribose-5-fosfato, temos uma molcula de frutose-6-fosfato, uma de eritrose-4-fosfato e uma outra de xilulose-5-fosfato que ainda no reagiu. A reaco entre a xilulose-5-fosfato e a eritrose-4-fosfato tambm catalisada pela transcetlase (ver equao 9) permitindo a formao de mais uma molcula de frutose-6-fosfato e outra de gliceraldedo-3-fosfato. Todas estas reaces so fisiologicamente reversveis e as concentraes estacionrias de todas estas oses-fosfato mantm-se prximas das concentraes de equilbrio. A equao 10 descreve o somatrio das transformaes referidas acima (equaes 4 e 6-9 partindo de 3 molculas de ribose-5-fosfato): ribulose-5-P xilulose-5-P xilulose-5-P + ribose-5-P sedoheptulose-7-P + gliceraldedo-3-P sedoheptulose-7-P + gliceraldedo-3-P eritrose-4-P + frutose-6-P xilulose-5-P + eritrose-4-P frutose-6-P + gliceraldedo-3-P 3 ribose-5-P 2 frutose-6-P + gliceraldedo-3-P (6) (7) (8) (9) (10)

A frutose-6-fosfato e o gliceraldedo-3-fosfato formadas na fase reversvel da via das pentoses-fosfato so intermedirios da gliclise que, nas condies metablicas em que a via das pentoses-fosfato est mais activa no fgado (glicemia elevada, insulina elevada e glicagina baixa), tambm est activada levando formao de acetil-CoA, o substrato na sntese de cidos gordos. 6A aco sequenciada das enzimas das fases irreversvel (equao 11) e reversvel (equao 10 ou 12) da via das pentoses-fosfato e de enzimas da gliconeognese [isomrase das trioses-fosfato (equao 13), aldlase (equao 14), frutose-1,6-bisfosftase (equao 15) e isomrase das fosfohexoses (equao 16)] pode permitir a oxidao completa da glicose-6-fosfato pelo NADP+ (equao 17): 6 glicose-6-P +12 NADP+ + 6 H2O 6 ribulose-5-P +12 NADPH + 6 CO2 6 ribulose-5-P 4 frutose-6-P + 2 gliceraldedo-3-P 1 gliceraldedo-3-P 1 di-hidroxiacetona-P 1 gliceraldedo-3-P + 1 di-hidroxiacetona-P frutose-1,6-bisfosfato frutose-1,6-bisfosfato + H2O frutose-6-P + Pi 5 frutose-6-P 5 glicose-6-P somatrio: glicose-6-P +12 NADP+ +7 H2O 6 CO2 +12 NADPH + Pi (11) (12) (13) (14) (15) (16) (17)

de notar, contudo, que as condies metablicas em que a via das pentoses-fosfato est mais activa (glicemia elevada, insulina elevada e glicagina baixa) levam, no fgado, inibio da enzima responsvel pela reaco 15 (a fosftase da frutose-1,6-bisfosfato heptica). O conjunto de reaces cujo

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somatrio a equao 17 um exerccio terico que serve apenas para mostrar que as enzimas da via das pentoses-fosfato (em conjunto com outras enzimas) podem levar oxidao completa da glicose sem o contributo do ciclo de Krebs e da fosforilao oxidativa. Quando, 3 molculas de glicose so oxidadas na via das pentoses-fosfato podem formar 3 CO2 + 2 frutose-6-fosfato e 1 gliceraldedo-3-fosfato. Se as 2 frutose-6-fosfato (6C*2) e o gliceraldedo-3-fosfato (3C) formados forem oxidados na sequncia gliclise-desidrognase do piruvato-ciclo de Krebs significa que 3 dos 18 CO2 libertados a partir das 3 molculas de glicose (6C*3) foram da responsabilidade da desidrognase do 6-fosfogliconato (1/6 dos carbonos). 7Em rgos (como o msculo) em que as desidrognases da glicose-6-fosfato e do 6-fosfogliconato so pouco activas a sntese de ribose-5-fosfato, um precursor na sntese dos nucleotdeos, pode ocorrer por aco exclusiva das enzimas da fase reversvel da via das pentoses-fosfato actuando na frutose-6fosfato e no gliceraldedo-3-fosfato (ver equao 10). Um dos papis metablicos do NADPH o de manter o glutatio (tripeptdeo contendo resduos de glutamato, cistena e glicina) na sua forma reduzida (GSH; contm um grupo tiol). O glutatio intervm como redutor em processos reactivos que sero descritos abaixo, e nessas reaces, converte-se em dissulfureto de glutatio (GSSG). O NADPH o agente redutor (do dissulfureto do glutatio) numa reaco catalisada pela redtase do glutatio onde o GSH regenerado: NADPH + GSSG 2 GSH + NADP+ 9(18)

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O GSH existe em altas concentraes nas clulas sendo o agente redutor em reaces em que o H2O2, perxidos lipdicos (LOOH) e o desidroascorbato (forma oxidada da vitamina C) so reduzidos a H2O, lipdeos hidroxilados (LOH) e ascorbato, respectivamente. A enzima que catalisa a reduo dos perxidos a peroxdase do glutatio (equao 19); a que catalisa a reduo do desidroascorbato a redtase do desidroascorbato (equao 20). LOOH (ou H2O2) + 2 GSH LOH (ou H2O) + GSSG + H2O Desidroascorbato + 2 GSH ascorbato + GSSG (19) (20)

Nas situaes de stress oxidativo, os grupos tiol (R-SH) dos resduos de cistena de protenas sofrem oxidao no enzmica formando-se ligaes dissulfureto intra e inter-protenas (protena-S-S-protena). Na reduo destas ligaes, o GSH o agente redutor: a reaco descrita pela equao 21 catalisada por uma oxiredtase (por tradio, frequentemente designada por tioltransfrase) que repe a situao original. protena-S-S-protena + 2 GSH 2 protena-SH + GSSG (21)

Para alm de intervir como redutor nas reaces catalisadas pela peroxdase do glutatio, pela redtase do desidroascorbato e pela tioltransfrase, o glutatio tambm redutor em reaces no enzmicas podendo reduzir o io superxido (a H2O2) e radicais orgnicos. 10- Como se mostra nas equaes 19, 20 e 21, sempre que o glutatio intervm como redutor forma-se GSSG que , de imediato, reduzido por aco cataltica da redtase do glutatio (ver equao 18). O somatrio das equaes 18 e 19 permite compreender que o NADPH o redutor ltimo nos processos de reduo dos perxidos lipdicos e do H2O2 (equao 22). Uma situao semelhante ocorre tambm nos casos do desidroascorbato e dos grupos dissulfureto das protenas (ver equaes 23 e 24). NADPH + LOOH (ou H2O2) NADP+ + LOH (ou H2O) NADPH + desidroascorbato NADP+ + ascorbato NADPH + protena-S-S-protena NADP+ + 2 protena-SH (22) (23) (24)

O ascorbato (forma reduzida da vitamina C) reduz o radical tocoferil (forma oxidada da vitamina E) a tocoferol que, por sua vez, reagindo com intermedirios dos processos de formao de perxidos lipdicos das membranas das clulas, limita a extenso destes processos. Os processos de oxidao de componentes lipdicos das membranas e de outras estruturas celulares como protenas ou cidos nucleicos pode lesar as clulas.

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Os eritrcitos no tm ncleo e, ao contrrio do que acontece nas outras clulas, as protenas e os lipdeos que se alteram no podem ser re-sintetizados. Nos eritrcitos o papel principal do NADPH o de manter o glutatio no estado reduzido (GSH) limitando os danos causados s estruturas moleculares celulares pelas chamadas espcies reactivas de oxignio (ROS). So exemplos de espcies reactivas de oxignio o superxido (O2-), o H2O2 e o radical hidroxilo (HO). De todas estas substncias a que se supe ter um efeito directo mais agressivo o radical hidroxilo mas na sua origem est quer o H2O2 quer o superxido. Em situaes de stress oxidativo aumento da velocidade de sntese de ROS as ROS levam peroxidao de lipdeos das membranas e oxidao de protenas. Mutaes no gene (presente no cromossoma X) codificador da desidrognase da glicose-6-fosfato (ver equao 1) so responsveis por uma doena gentica muito frequente (400 milhes de afectados no mundo) denominada favismo. O deficit de NADPH que est associado a esta doena torna o eritrcito vulnervel a situaes de stress oxidativo ocorrendo hemlise aquando da ingesto de favas ou de determinados medicamentos. Esta doena gentica mais frequente nos descendentes de indivduos que viveram em zonas com alta incidncia de malria. A razo desta associao a proteco que o deficit da enzima desidrognase da glicose-6-fosfato (mesmo relativo no caso das mulheres heterozigticas) confere relativamente ao agente da malria. Este agente (Plasmodium falciparum) vive dentro dos eritrcitos dos indivduos afectados de malria mas a sua capacidade de sobrevivncia fica reduzida quando o stress oxidativo dos eritrcitos (que ocorre no favismo) faz com que os ciclos de formao medular /fagocitose nos macrfagos sejam mais curtos. 11- Em clulas macrofgicas como os polimorfonucleares neutrfilos, o NADPH tem um papel determinante na destruio das estruturas moleculares das bactrias infectantes. No decorrer do processo fagoctico, por aco da oxdase do NADPH o NADPH reduz o oxignio molecular a superxido (equao 25) que, por sua vez, est na origem de outras ROS que se supe participarem no processo de destruio das bactrias. NADPH + 2 O2 NADP+ + 2 O2- + H+ (25)

O superxido pode sofrer dismutao enzmica (dismtase do superxido) ou no enzmica e levar formao de H2O2 (equao 26) e tambm pode reduzir e cindir o H2O2 com formao do radical hidroxilo (reaco de Haber-Weiss catalisada por ies de ferro ou de cobre; equao 27). O radical hidroxilo dificilmente detectvel porque muito reactivo iniciando cadeias de reaces de oxidao (e peroxidao). O2- + O2- + 2 H+ H2O2 + O2 O2- + H2O2 O2 + HO- + HO (26) (27)

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