MANUAL INFORMATIVO TECNOPEC PARA PROFISSIONAIS EM REPRODUO ANIMAL

NOVIDADES IATF EM NOVILHAS: SOLUES TCNICAS TECNOPEC

objetivo inicial do desenvolvimento dos protocolos de Inseminao Artificial em Tempo Fixo (IATF) foi melhorar a eficincia reprodutiva de vacas paridas, diminuindo o intervalo entre partos e aumentando a produtividade do rebanho. Por suas vantagens e benefcios, a tcnica passou a ser utilizada posteriormente em outras categorias de fmeas bovinas, como novilhas, com o intuito de facilitar o manejo reprodutivo das fazendas, eliminando a necessidade de observao de cio, permitindo realizar a inseminao de muitas fmeas de forma prtica em pouco tempo e agregar valor gentico de forma

mais rpida e prtica em todo o rebanho. Porm, quando os protocolos de IATF desenvolvidos para vacas paridas so aplicados em novilhas, especialmente em zebunas, os resultados de prenhez apresentam uma grande variabilidade. Para aprimorar os ndices destes programas, algumas particularidades da fisiologia reprodutiva das novilhas necessitam ser abordadas. PUBERDADE ma novilha adquire a capacidade de emprenhar logo aps a puberdade (maturidade sexual). Sua hipfise, mesmo antes da puberdade, capaz de produzir e liberar Hormnio Folculo Estimulante (FSH) que gera crescimento folicular nos ovrios. Os folculos crescem e se desenvolvem, porm, no atingem a capacidade de ovulao, entram em

atresia e, logo aps inicia-se uma nova emergncia folicular. Mais frente, durante a fase de transio, o desenvolvimento ovariano e uterino se intensificam e preparam o sistema reprodutivo para a funcionalidade. A puberdade se inicia com vrios eventos neuroendcrinos, os quais fazem com que essas fmeas comecem a produzir, armazenar e liberar Hormnio Luteinizante (LH) na hipfise. Os folculos passam a produzir mais estrgenos, os quais estimulam por feedback positivo, a produo e liberao de mais pulsos de LH. O comportamento de cio pode aparecer discretamente nesta fase, promovido pelos maiores nveis de estrgenos circulantes.

Dinmica de Ondas Foliculares em Novilhas

Figura 1 Esquema de ondas foliculares em novilhas, entrando em puberdade.

1 Ovulao

O folculo dominante passa ento a ter um suporte gonadotrfico adicional (FSH + LH), chegando a estgios provulatrios. Nessa fase, logo aps o pico de estrgenos, ocorre o pico de LH responsvel pela 1 ovulao e luteinizao folicular (CL). A partir desses even-

tos, a progesterona produzida pelo CL atua na finalizao da maturao endometrial e a novilha passa a ser considerada pbere. A primeira ovulao de uma novilha de baixa fertilidade, pois o corpo lteo formado, frequentemente, apresenta curta durao (menor que os 16 a 17 dias, considerados normais). Este CL pouco luteinizado, pelo estmulo insuficiente de LH e, conse-

quentemente, produz pouca progesterona. Nos ciclos subsequentes, a luteinizao do corpo lteo melhor e os nveis de progesterona liberados so maiores. Logo, h reduo do nmero de receptores de ocitocina e estrgeno no endomtrio, evitando a produo de picos precoces de PGF e a fertilidade desta novilha passa a ser normal.

PARMETROS DE AVALIAO GINECOLGICA ntes de realizar a IATF em novilhas, muito importante que se realize um exame ginecolgico para avaliao da condio ovariana e uterina. Essa avaliao deve ser feita por veterinrio experiente em palpao ou, de preferncia, com ultrasom. Os animais impberes, com tero infantil e ovrios pouco desenvolvidos, devem ser descartados dos progra-

mas reprodutivos, selecionando somente fmeas pberes (que j ovularam e apresentam tero de bom tamanho). Os programas de IATF, quando aplicados em animais impberes, geram resultados de prenhez inferiores, pois estes animais apresentam baixa taxa de ovulao ao final do protocolo, alm de tero despreparado para a manuteno da gestao. Em novilhas pr-pberes, com maior desenvolvimento uterino e ovariano (porm ainda sem CL), os resultados so variveis, na dependncia de fatores nutricionais e genticos. Atualmente, a avaliao de puberdade feita a partir dos parmetros de tamanho, consistncia do ovrio e presena de estruturas palpveis (A= fmeas pberes, com corpo lteo; B= fmeas pr-pberes, ausncia de corpo lteo e com folculos; C= fmeas impberes, com ovrios pequenos, lisos e sem estruturas). Com relao avaliao uterina, as fmeas cclicas normalmente apresentam dimetro do corno uterino maior que 15 mm, mas esta uma classificao difcil de ser adotada a campo, pois ocorre variao de resultados conforme o tcnico que a realiza, a sensibilidade do aparelho de US e o local do corno uterino onde feita a medio. Logo, essa avaliao no tem uma boa repetibilidade. A Tabela 1 mostra a relao entre o dimetro do corno uterino e o resultado de um programa de induo de puberdade. Animais com dimetro inferior a 15 mm (medidos logo aps a bifurcao) apresentaram menor resposta induo de ciclicidade imediatamente aps o tratamento.

Tabela 1 As novilhas devem tambm ser selecionadas pelo peso, respeitando uma estrutura corprea mnima para o incio dos protocolos. O peso mnimo depende da raa, linhagem e condies de manejo. Em novilhas zebunas, melhores resultados so obtidos em animais acima de 300 Kg. Dimetro do corno uterino tero < 15 mm tero > 15 mm Ciclicidade 56,6% (17/30) 72,7% (24/30) Valentim et al. 2008; SP.
Protocolo: D0 - Inserir Primer; D8 - Retirar Primer; D9 - Aplicar 1mg RIC BE

Taxa de Ciclicidade em Novilhas Nelore 12 dias aps Protocolo de Induo de Puberdade em funo do Dimetro Uterino no incio do Protocolo

Entretanto o peso corporal jamais pode ser tomado como nico fator de avaliao. bastante comum novilhas com peso acima deste valor apresentarem imaturidade sexual. A utilizao de novilhas mais pesadas nos programas reprodutivos evita problemas de parto e facilita o retorno condio cclica aps o parto.

MTODO PARA OTIMIZAR RESULTADOS EM PROGRAMAS REPRODUTIVOS DE NOVILHAS 1 Etapa - Induo de Puberdade Sempre preocupada em aprimorar resultados e suplantar as dificuldades encontradas no campo, a Tecnopec investiu em vrios experimentos (2009) voltados ao desenvolvimento de novos programas de inseminao artificial em tempo fixo para novilhas zebunas. De maneira geral, todo protocolo de IATF para novilhas s deve ser utilizado em animais pberes, pois os resultados de prenhez IATF em animais impberes ou pr-pberes so inferiores. fundamental, portanto que os animais sejam avaliados previamente quanto a ciclicidade e desenvolvimento genital e classificados em: 1.) Novilhas impberes: Animais com pouco desenvolvimento de ovrios e tero (genitais infantis). Em experimento realizado em 2009 com novilhas Nelore pr pberes (avaliadas por Ultra-som), com peso mdio de 280Kg, no Mato Grosso do Sul, o tratamento com dispositivos Primer, previamente utilizados por 24 dias e aplicao de 2 ml de RIC-BE na colocao (Dia 0) e 1 ml na Tabela 3 Taxa de Ciclicidade em Novilhas Nelore pr-pberes 12 dias aps Protocolo de Induo Tratamento

2.) Novilhas pr-pberes: Animais com desenvolvimento de genitais normais, porm que ainda no atingiram a puberdade (no apresentam Corpo-lteo nos ovrios). 3.) Novilhas pberes: Animais que j esto ciclando. A indicao da Tecnopec que se trabalhe em IATF somente com animais pberes. Para isso desenvolvemos um protocolo de preparao dos animais, chamado de Programa de Induo de Puberdade. Esse programa consiste na utilizao de um dispositivo Primer (1gr progesterona) por 8 dias. No dia da colocao e no dia da retirada do dispositivo aplica-se, respectivamente, 2ml e 1 ml de RIC BE (Benzoato de estradiol). O aporte exgeno de progesterona + estrgeno (Primer + RIC BE ) capaz de acelerar a entrada em puberdade de novilhas pr-puberes, pois simula uma condio fisiolgica, primeiro na produo de estrgeno pelo folculo e depois na produo de progesterona pelo corpo lteo. A progesterona estimula o desenvolvimento do endomtrio e suas glndulas e prepara o tero para a gestao. O estrgeno possui ampla funo sobre o trato reprodutivo, atuando na sinalizao do comportamento de cio e na maturao das glndulas uterinas e mamrias. Tabela 2 CL D20 65,1% (41/63) 23,0% (15/63)

Induo puberdade Controle (fmeas s/ induo)

Taxa de Ciclicidade em Novilhas Nelore pr-pberes 12 dias aps Protocolo de Induo

Valentim et al. 2008; SP.

Protocolo: D0 - Inserir Primer; D8 - Retirar Primer; D9 - Aplicar 1mg RIC BE

retirada (Dia 8), resultou em expressiva induo de ciclicidade nos animais. Em avaliao realizada 12 dias aps o protocolo, o lote tratado com dispositivos de quarto uso apresentou 65% de ciclicidade (presena de CL) enquanto o lote controle (sem induo) tinha apenas 35% de animais com corpo lteo. Tratamento Induo Primer 4 uso Controle n 109 110 Ciclicidade 65,1% 35,4%
a

Valentim et al. 2009; MS.

Protocolo: D0 - Inserir Primer + Aplicar 2mg RIC BE; D8 - Retirar Primer + Aplicar 1mg RIC BE

O objetivo do Protocolo Induo de Puberdade fazer com que as novilhas atinjam rapidamente estgios mais avanados de desenvolvimento sexual, tornando-as cclicas. Os dados dos experimentos mostram que esses programas so muito eficientes nesse tipo de estmulo. Como os resultados de prenhez dos protocolos de IATF em novilhas so profundamente influenciados pelo grau de ciclicidade, a induo de puberdade previamente ao incio dos protocolos IATF quase obrigatria na maioria dos lotes de novilhas, devido alta frequencia de fmeas pr-pberes.

O protocolo de induo tambm pode ser utilizado em animais impberes, para acelerar o desenvolvimento do aparelho genital. No entanto, esses animais requerem uma reavaliao algum tempo depois do protocolo, antes de entrar em programas reprodutivos. No protocolo de induo perfeitamente possvel a utilizao de dispositivos Primer que j no servem para IATF (4 uso) e que eram descartados. Com isso, a relao custo benefcio do protocolo de induo altamente compensadora.
Dia 8 Dia 20 Dia 30

Figura 2 Protocolo de Induo de Puberdade em Novilhas

Inserir PRIMER Aplicar 2 ml de RIC BE

8 dias
Incio dos programas reprodutivos Retirar PRIMER Aplicar 1 ml de RIC BE

2 Etapa - Protocolo IATF-LH Os resultados dos programas IATF padres em novilhas normalmente se mostram inferiores aos de vacas paridas. Em levantamento realizado pela Tecnopec em 10.058 animais tratados com protocolos IATF Tecnopec (indutor de ovulao BE), a taxa de prenhez de vacas paridas foi de 55,6%, enquanto a de novilhas foi de 42,7%. Dois so os fatores principais para essa menor eficincia da novilha na IATF: 1.) Presena de animais impberes e prpberes; 2.) Menores taxas de ovulao no final do protocolo (novilhas X vacas).

Na primeira etapa apresentamos a soluo para o fator 1: uniformizar a ciclicidade do lote utilizando o protocolo de induo de puberdade. Para o fator 2 mostraremos o que devemos incluir no protocolo de IATF para aumentar a taxa de ovulao. Os indutores de ovulao RIC BE (Benzoato de estradiol) e Gestran Plus (GnRH) possuem ao indireta sobre a ovulao, ou seja, dependem que a novilha j possua um estoque endgeno de LH para ovular. Assim, buscando aumentar o aproveitamento das novilhas em programas IATF, a Tecnopec testou o uso do Lutropin (LH), indutor direto da ovulao e da luteinizao do corpo

lteo, como uma alternativa para elevar as taxas de ovulao e de prenhez aps os programas de IATF em novilhas. Em experimento prvio, o grupo do Prof. Ciro M. Barros mostrou que doses de 2,5 ml de Lutropin (3,12 mg) foram to eficientes quanto doses maiores de LH, na induo da ovulao em vacas. Uma srie de experimentos realizados pela Tecnopec em novilhas zebunas objetivou avaliar se o protocolo com indutor de ovulao base de LH seria capaz de melhorar a taxa de Taxa de ovulao 0% (0/5) 80% (4/5) 80% (4/5) 80% (4/5)

Tabela 4 Avaliao da taxa de ovulao induzida pelo uso de diferentes doses de Lutropin

Tratamento G1 - 1,56 mg LH G2 - 3,12 mg LH G3 - 6,24 mg LH G4 - 12,5 mg LH

Simes et al., SBTE 2008

ovulao e prenhez dos animais, comparativamente ao protocolo convencional com BE. Os resultados podem ser vistos na Tabela 5, mostrando que a induo de ovulao com LH elevou significativamente a taxa de ovulao em 11,2%. Tabela 5 Taxa de ovulao em protocolos IATF com indutores de ovulao Benzoato de estradiol (RIC-BE ) e LH (Lutropin ), 2010 Taxa de ovulao (CD D21) Fazenda BE* 1 2 3 Total 66,3% (61/92) 55,7% (34/61) 71,4% (55/77) 65,2% (150/230)
a

LH** 73,4% (69/94) 79,0% (49/62) 78,8% (57/73) 76,4% (175/229) Valentim et al. 2010.
b

Letras diferentes: P=0,008

Protocolo base: D0 - Inserir Primer + Aplicar 2mg RIC BE; D9 - Retirar Primer + Aplicar 1,5ml Prolise + Aplicar 10mg Folltropin * BE: D10 - 1mg RIC BE; D11 - IA ** LH: D9 - 0,5mg RIC BE; D11 - 3,12mg Lutropin + IA 12 horas depois

As taxas de prenhez tambm foram melhoradas com o uso do LH, como pode ser visto na Tabela 6. A dose de 3,12 mg de Lutropin , em comparao a 1 mg de Benzoato de Estradiol, aumentou a taxa de ovulao e prenhez ao protocolo. Como no houve diferena estatstica de resultaTabela 6

dos entre a inseminao junto ou 12 horas aps da aplicao de LH, por questes de facilidade de manejo, a inseminao ao mesmo momento da aplicao do Lutropin ,s 48 horas da retirada do Primer , mais vantajosa.

Resultados de dinmica folicular e taxa de prenhez de novilhas zebunas em protocolos de IATF com diferentes indutores de ovulao (BE vs LH) e momentos de Inseminao no protocolo com LH BE + IA 54* Dimetro fol. D9 - retirada de P4 (mm) Dimetro fol. D11 - IATF (mm) Crescimento folicular (mm) Taxa de ovulao (presena de CL D19) Taxa de prenhez 7,6 8,9 1,5 2,0 2,6 2,3
a a

LH + IA 48** 7,9 9,1 1,7 2,0 2,0 1,7

b b

LH 48 + IA 54*** 7,4 9,1 1,7 1,6 2,0 1,9

b ab

55,7% (34/61) 37,7% (23/61)

79,0% (49/62) 54,8% (34/62)

72,6% (45/62) 48,4% (30/62)

Vianna et al. 2009; SP

Protocolo base: D0 - Inserir Primer + Aplicar 2mg RIC BE; D9 - Retirar Primer + Aplicar 1,5ml Prolise + Aplicar 10mg Folltropin * BE: D10 - 1mg RIC BE; D11 - IA ** LH + IA 48: D9 - 0,5mg RIC BE; D11 - 3,12mg Lutropin + IA *** LH 48 + IA 54: D9 - 0,5mg RIC BE; D11 - 3,12mg Lutropin + IA 6 horas depois

Em resumo, o protocolo IATF com Lutropin se mostrou significativamente mais vantajoso que o protocolo padro, aumentando significativamente a taxa de ovulao e prenhez em novilhas nelore.

RESULTADO DA ASSOCIAO ENTRE PROTOCOLO DE INDUO DE PUBERDADE E DE IATF COM LUTROPIN Exp. 1 Para avaliar a interao da associao do protocolo de induo de puberdade prvio ao protocolo de IATF em novilhas, a Tecnopec realizou em 2009, no Mato Grosso do Sul, um experimento abrangendo um lote de novilhas Nelore com Tabela 7 Taxa de prenhez de novilhas zebunas submetidas ou no induo de puberdade antes da IATF Induo de puberdade Com induo

peso mdio de 280Kg, no qual foram utilizados apenas animais impberes e pr-pberes, avaliados previamente por ultra-som. 210 animais receberam o programa de induo de puberdade abaixo. Os 108 restantes no receberam nenhum tratamento prvio, permanecendo como grupo controle. Aps 14 dias da retirada dos dispositivos todas as novilhas receberam protocolos IATF com Lutropin ou Benzoato de Estradiol. Os resultados podem ser vistos na Tabela 7. Protocolo IATF LH (G1) BE (G2) LH (G3) n 104 106 54 54 Taxa de prenhez 37,6% 16,4% 23,5%
a

Sem induo BE (G4) 22,2%b Valentim et al. 2009; MS.

Protocolo base: D0 - Inserir Primer + Aplicar 2mg RIC BE; D9 - Retirar Primer + Aplicar 1,5ml Prolise + Aplicar 10mg Folltropin * BE: D10 - 1mg RIC BE; D11 - IA ** LH: D9 - 0,5mg RIC BE; D11 - 3,12mg Lutropin + IA 12 horas depois

Antes de tudo, os dados mostram a grande dificuldade em se trabalhar com animais impberes. O tratamento de induo de puberdade (G2) ou o protocolo de IATF com Lutropin (G3) isoladamente, no induziram a um aumento na taxa de prenhez dos animais. No entanto, associando-se

os dois protocolos (Induo + IATF-LH: G1) ocorreu uma interao positiva que aumentou significativamente a taxa de prenhez. Esse resultado mostra que a associao entre estes tratamentos a melhor opo para realizao de programas de IATF em novilhas.

Exp. 2 Neste estudo, utilizou-se 187 novilhas Nelore pr-pberes, com idades entre 18 a 25 meses e peso mdio de 280 Kg, em Cocalinho/MT. Todas as fmeas receberam protocolo de Induo de Puberdade Tecnopec e foram subdivididas, uma semana depois, a protocolos de IATF com Lutropin, com diferentes dosagens de Folltropin no dia da retirada do Primer. Protocolo LH + Folltropin 5mg* LH + Folltropin 10mg* LH (sem FSH)** p=0,06 n 63 62 62 Taxa de prenhez 58,7% 54,8% 41,9%
b

Tabela 8 Taxa de prenhez de novilhas zebunas submetidas ao protocolo de induo de puberdade antes da IATF com Lutropin (2,5 ml = 3,12mg)

ab

Cunha Junior et al, 2010

* LH + 5 ou 10mg FSH: D8 - + 5 ou 10 mg de Folltropin (FSH) ** LH: No houve aplicao de indutor de crescimento folicular

Os resultados deste experimento mostram o excelente custo-benefcio na associao dos protocolos de Induo de Puberdade e IATF com Lutropin em fmeas zebunas pr-puberes. O uso de Folltropin (FSH) como indutor do crescimento folicular final, no momento da retirada do dispositivo de progesterona, foi imprescindvel no aumento das taxas de prenhez e mostrou-se mais eficaz com a reduo da dose para 5mg. CONCLUSES GERAIS E RECOMENDAO FINAL Para garantir o melhor ndice de prenhez em programas reprodutivos de novilhas, utilize previamente o protocolo de induo de puberdade (fig. 2) para uniformizar o lote quanto maturidade sexual, aumentando a taxa de ciclicidade do mesmo. 14 dias aps protocolo de induo, as novilhas que inicialmente estavam prpberes, j podem ingressar em programas reprodutivos em protocolos de IATF com Lutropin (fig. 3). Novilhas inicialmente impberes (genital infantil) no incio do protocolo de induo, devem ser reavaliadas quanto ao desenvolvimento de genital aps um perodo mais longo (30 60 dias).

Programa IATF Tecnopec - Novilhas Zebunas Figura 3 Protocolo IATF Tecnopec com Lutropin (IATF-LH48)
Inserir PRIMER Aplicar RIC BE
Dia 9 Dia 11

9 dias

08h

48 horas

08h

Retirar PRIMER

Aplicar PROLISE + FOLLTROPIN + RIC BE

Aplicar LUTROPIN +

IA
08 s 10h

*RIC BE necessrio para provocar a dilatao da crvix e facilitar a inseminao.

EM CASO DE DVIDAS OU PARA MAIS DETALHES, ENTRE EM CONTATO: reproducao@tecnopec.com.br

Tecnopec uma empresa que h 15 anos est no mercado brasileiro, sempre voltada Reproduo Animal. reconhecida pelos principais profissionais de reproduo bovina, ovina, caprina e eqina como a empresa lder na rea de biotecnologia da reproduo no Brasil.