BIOTECNOLOGIA E ENGENHARIA GENTICA

PROFESSOR VASCO

BIOTECNOLOGIA
Envolve tcnicas que permitem ao homem utilizar organismos para a obteno de substncias de utilidade para o ser humano. Por exemplo, cruzamentos experimentais para obteno de raas mais apuradas de gado e cavalos e tambm de vegetais mais ricos em determinados nutrientes.

ENGENHARIA GENTICA
Envolve tcnicas que permitem o transplante de genes do DNA de uma espcie para o DNA de espcie diferente. Dessa maneira, formado o chamado DNA recombinante, que a associao de duas ou mais molculas de DNA de espcies diferentes que no so encontradas juntas na natureza.

APLICAES DA ENGENHARIA GENTICA

Testes altamente preciosos de paternidade e de

identificao de criminosos. Localizao de genes associados a doenas genticas. Deteco de genes relacionados com o desenvolvimento de cncer. Terapia gnica. Produo de vacinas sintticas. Obteno de organismos transgnicos.

ENZIMAS DE RESTRIO
So enzimas especiais tambm chamadas de ENDONUCLEASES, que cortam a molcula de DNA em pontos especficos.

Com a ao das enzimas de restrio possvel a retirada de um gene do DNA permitindo a introduo de outro gene pertencente ao DNA de outra espcie, obtendo o DNA recombinante.

A enzima de restrio EcoRI, por exemplo, corta o DNA entre as bases G e A. A EcoRI uma endonuclease descoberta a partir da Escherichia coli (Eco). O R, vem da palavra Restrio e I porque foi a primeira enzima de restrio descoberta.

DNA FINGERPRINT
considerado a impresso digital do DNA. semelhante a um cdigo de barras. obtido a partir da tcnica denominada

Eletroforese

FORMAO DO DNA FINGERPRINT

O DNA submetido a enzima de restrio. A enzima de restrio fragmenta o DNA em segmentos com tamanhos diferentes, sendo uns menores e outros maiores. Os fragmentos do DNA so colocados em uma placa de gel ( agarose ) que submetida a uma campo eltrico, gerando dois plos (+ e - ). Os fragmentos do DNA,por serem negativos, se movimentam em direo ao plo +. Os fragmentos menores se movimentam mais rpido ficando na posio anterior ; em seguida, se situam os fragmentos maiores. Dessa forma, obtido o DNA fingerprint que permite a anlise nos exames de DNA em determinadas circunstncias, como em disputas de paternidade e em investigao criminal.

 feita uma comparao entre os DNAs fingerprint dos indivduos em anlise. Aqueles que tiverem o maior nmero de bandas em comum, apresentam alguma relao entre eles.

MELHORAMENTO GENTICO
O conhecimento da hereditariedade tem gerado tecnologias de grande utilidade para o ser humano.

As espcies de animais e plantas que constituem nossa alimentao bsica, foram domesticadas e melhoradas em vrias regies do mundo.

O melhoramento gentico consiste em selecionar e aprimorar as caractersticas das espcies visando a utilizao pelo ser humano.

O melhoramento gentico um processo antigo, que no incio era realizado por maneira intuitiva. Por exemplo, se um agricultor desejava obter espigas de milho com maior nmero de gros, ele apenas selecionava as sementes de milho com tal caracterstica.

Atualmente, o processo de melhoramento gentico feito baseado no conhecimento da gentica.

EXEMPLO DE MELHORAMENTO GENTICO ANIMAL

Gado Santa Gertrudes, produzido no King Ranch, em Kigsville no Texas, EUA. um timo produtor de carne e resistente a doenas parasitrias e ao calor Resultante do cruzamento de dois tipos

Gado Shorthorn
timo produtor de carne, mas sensvel a doenas e ao calor

Gado Braham ( Zebu )

Menor produo de carne e resistente a doenas e ao calor

Problemas em relao ao melhoramento gentico

Um dos principais problemas relacionados ao processo a obteno de linhagens com baixa variabilidade gentica, ou seja, poucas diferenas entre os indivduos da populao.

Tal fato poderia levar a uma diminuio da adaptao dos indivduos a variaes ambientais.

TRANSGNICOS OU ORGANISMOS GENTICAMENTE MODIFICADOS ( OGMs )

So organismos que recebem genes de outras espcies. So obtidos visando a produo de substncias de utilidade para o ser humano. As plantas so muito utilizadas na obteno de transgnicos que produzam toxinas contra pragas.

Bactrias transgnicas vem sendo utilizadas para a produo de insulina, hormnio de crescimento, anticorpos especficos, fator VIII (necessrios aos hemoflicos). Pode-se, por exemplo, introduzir um gene humano em um camundongo ou um gene de inseto em uma planta. Por esses mecanismos foram obtidos camundongos gigantes e planta de fumo que brilhava.

PRODUO DE INSULINA HUMANA A PARTIR DE BACTRIAS

- O gene da insulina humana isolado

utilizando-se enzimas de restrio para cortar o DNA humano;

- O gene humano inserido em um plasmdeo bacteriano que tambm foi submetido a enzima de restrio;
- Ativa-se o plasmdeo, para a transcrio do gene e produo da protena (insulina); - Retira-se a insulina da bactria.

EXEMPLOS DE ORGANISMOS TRANSGNCOS

Planta de algodo resistentes s lagartas.

Reduz a necessidade de utilizao de pesticidas. Os gastos de produo diminuem e a poluio ambiental tambm reduzida.

Golden Rice.
Arroz geneticamente modificado que contm um gene que codifica a produo de -caroteno. Foi produzido para evitar que as populaes pobres da sia adoecessem por avitaminoses.

MTODOS DE OBTENO DE TRANSGNICOS

Utilizao da bactria Agrobacterium tumefaciens

Biobalstica Eletroporao de Protoplastos

Utilizao da Agrobacterium tumefaciens

Tal bactria ocorre no solo e possui a capacidade de introduzir seu plasmdeo no interior de clulas vegetais.

O plasmdeo se incorpora ao material gentico da clula do organismo a ser modificado.

Atua, portanto, como um vetor natural para introduo do DNA no organismo a ser modificado.

BIOBALSTICA
Envolve a utilizao de microprojteis de ouro ou tungstnio associadas molculas de DNA, que so introduzidas nas clulas do organismo que se deseja modificar. Tal procedimento no traz prejuzo para as clulas, sendo, por isso, um mtodo muito utilizado hoje em dia. Vantagem: no utiliza vetores como vrus e bactrias para a introduo do DNA no organismo a ser modificado.

ELETROPORAO DE PROTOPLASTOS Um plasmdeo e o protoplasto ( clula vegetal sem parede celular) so colocados em mesma soluo. A soluo submetida a descargas eltricas de alta voltagem, promovendo a abertura de poros na membrana plasmtica do protoplasto.

Tal processo permite a introduo do plasmdeo no protoplasto e sua associao com o genoma de tal clula.

CLONAGEM

Processo famoso pela tcnica que resultou, em 1996, na ovelha Dolly. Nessa tcnica, a um vulo de ovelha teve seu ncleo removido. Uma clula da glndula mamria de outra ovelha teve seu ncleo igualmente retirado. De posse de um vulo anucleado e do ncleo da clula mamria, foi provocada uma eletrofuso. Assim, o ncleo somtico fundiu com o citoplasma do gameta sem ncleo resultando em uma clula que se comportou como zigoto. A partir do zigoto, formou-se uma blstula que foi implantada no tero de uma ovelha adulta. Nasceu Dolly, a ovelha clonada.

CLONAGEM

CLONAGEM REPRODUTIVA
A clonagem reprodutiva visa a obteno de um organismo. Foi o caso da ovelha Dolly ou da vaca Vitria (EMBRAPA/DF).

CLONAGEM TERAPEUTICA
A clonagem teraputica visa a obteno de clulas-tronco embrionrias. Um clone formado, gera uma blstula que nunca implantada, apenas serve como uma massa de clulas que podem ser consideradas clulas-tronco de alta versatilidade.

TERAPIA GNICA

Consiste na substituio do gene anormal que leva manifestao de determinada doena, pelo gene normal. Atualmente, os estudos de terapia gnica limita-se s clulas somticas. Porm, no futuro pretende-se atuar sobre os gametas, evitando a transferncia do gene anormal para os descendentes.

EXEMPLOS DE DOENAS-ALVO DA TERAPIA GNICA

FENILCETONRIA
HIPERCOLESTEROLEMIA ANEMIA FALCIFORME IMUNODEFICINCIA HUMANA (ADA)

PRINCIPAIS MANEIRAS DE INTRODUO DE GENES EM HUMANOS

TCNICA EX VIVO TCNICA IN VIVO

TCNICA EX VIVO:
Uso de um vetor (Ex.: vrus) modificado que contenha o alelo normal.

Em seguida, so coletados leuccitos do sangue da pessoa afetada e permite-se que os vrus alterados infectem essas clulas.
Os vrus introduzem o gene normal nos leuccitos. Os leuccitos, agora modificados, se multiplicam e so reintroduzidos no paciente.

TCNICA IN VIVO :

Consiste na clonagem do gene normal e de seu preparo para introduo no paciente por meio de injeo intravenosa ou intramuscular. Dessa maneira, o gene incorpora-se s clulas do paciente e dentro delas passa a comandar a sntese da protena normal.

VACINAS GNICAS

Genes de agentes causadores de doenas e que codificam protenas responsveis por estimular o sistema imunolgico humano tm sido isolados. Tais genes so introduzidos em bactrias e clonados.

O produto da ao desses genes, ou seja, a protena, purificado para depois ser introduzido no organismo, estimulando a produo de anticorpos, isto , atua como vacina.
Exemplo de doenas que j esto produzidas vacinas gnicas: Hepatite B e Meningite.