ENZIMAS

Prof Dr ngela de Mattos

1 Dutra

ENZIMAS
So protenas que facilitam a
reao entre os reagentes e
aumentam intensamente a
velocidade da reao.
As enzimas atuam diminuindo a
energia de ativao das reaes
qumicas.
2

Enzimas
Com exceo de um pequeno
grupo de molculas de RNA que
possuem atividade enzimtica e
so chamadas de RIBOZIMAS,
todas as enzimas so PROTENAS

Enzimas
Protenas especializadas

Aceleram reaes qumicas

4

Enzimas
1 Catalisadores de reaes nos
sistemas biolgicos
2 Grande eficincia cataltica
3 Alto grau de especificidade por
seus substratos
4 Funcionam
em solues aquosas
em pH e temperaturas fisiolgicas
5

Enzimas
Estrutura
Enzimtica
Ribozimas

RNAs

Protenas
Conjugadas

Cofator + apoenzima

Holoenzima

Simples

Apoenzima

Enzimas
Catalisadores
Aumentam a velocidade das reaes

Atuam diminuindo a energia de ativao

7

Caractersticas da enzima
Tem especificidade (atuam sempre com a
mesma substncia).
Exemplos:
gorduras (lipo - grego) - LIPASE
amido (amylon - grego) - AMILASE
protenas - PROTEASE.
8

Enzimas
Importncia Biomdica
Biocatalisadores
regulam as velocidades de todos os
processos fisiolgicos

Papel fundamental na sade e na

doena

Sade
Enzimas
Processos
Ocorram de modo ordenado
Fisiolgicos

Homeostasia

10

Estados patolgicos
Leso tecidual grave
Cirrose Heptica
Prejudica a sntese de enzimas pelo tecido

Enzimas do ciclo da uria

Amnia

Uria

(txica para o organismo)

(no txica)

COMA HEPTICO

11

Estados patolgicos
Doenas Genticas - EIM

Incapacidade ou capacidade parcial

de sintetizar enzimas

Sintomatologia variada

12

Estados patolgicos
Infarto do miocrdio

Leso cardaca grave

Extravasamento de enzimas intracelulares

Determinao da atividade de enzimas especficas

no plasma proporciona ao clnico informaes importantes
para o diagntico

13

Enzimas - Histrico
Histria da Bioqumica comea
com pesquisas sobre enzimas
Catlise biolgica incio sc.XIX
estmago - digesto da carne
saliva - digesto do amido

Dcada de 30
1830 - amilase ou ptialina
1836 - pepsina e tripsina
14

 O nome enzima provm de "in yeasts",

no qual suspeitava-se que as catlises
biolgicas estavam envolvidas com a
fermentao do acar em lcool.
Payen e Persoz em 1833, quando
encontraram uma substncia termolbil
no precipitado do lcool, extrato de
malte, que convertia amido em acar,
mais
tarde denominada amilase.
Pasteur em 1860 postulou que as
enzimas esto associadas estrutura e
a vida da clula
15

 Dcada de 50 (1850)
Louis Pasteur - concluiu que:

aucar lcool pela levedura

era catalisada por fermentos
inseparveis
da estrutura das clulas vivas do levedo

FERMENTAO
Fermentos foram posteriormente
denominados de ENZIMAS
16

Pasteur ( 1850)

fermentos eram inseparveis das clulas

Eduard Buchner (1897)

Extratos de levedo (livre de clulas)
AUCAR

fermentao

LCOOL

17

 Em 1877 Buchener extraiu enzimas

de clulas de leveduras que
catalisavam a fermentao alcolica
catalisam a maioria das vias
metablicas energticas e podem
funcionar independentemente da sua
estrutura.
Summer em 1926 isolou urease de
feijo e evidenciou que estes cristais
consistem em protenas.
18

Enzimas - Histrico
Incio do Sculo XX
75 enzimas isoladas e cristalizadas
ficou evidenciado carter protico

Atualmente
+ de 2000 enzimas so conhecidas
19

Enzimas - Nomenclatura
No sculo XIX - poucas enzimas identificadas
Adicionava-se sufixo ASE ao nome do
substrato
enzima que hidrolisam
gorduras (lipo - grego) - LIPASE
amido (amylon - grego) - AMILASE
protenas - PROTEASE
Nomes arbitrrios
Tripsina e pepsina - proteases
Catalase - H2O2
20

Enzimas - Nomenclatura
No sculo XX - quantidade de enzimas
descritas
Nomenclatura existente se tornou ineficaz
Dcada de 60 - IUB - Unio Internacional
de Bioqumica adotou um novo sistema
de nomenclatura e classificao
mais

complexo
sem ambigidades
baseado no mecanismo de reao
21

Enzimas - Nomenclatura
Sistema Oficial IUB
Cada enzima - no de cdigo (E.C.Enzime Comission) com 4 dgitos
que caracterizam o tipo de reao
1o

dgito - classe
2o dgito - subclasse
3o dgito - sub-subclasse
4odgito - indica o substrato
22

Enzimas - Classificao
ATP + D-Glicose

ADP + D-Glicose-6-fosfato

IUB - ATP:glicose fosfotransferase

E.C. 2.7.1.1
2 - classe - transferase
7 - sub-classe - fosfotransferase
1 - sub-subclasse - fosfotransferase que utiliza grupo
hidroxila como receptor
1 - indica ser a D-glicose o aceptor do grupo fosfato

Hexoquinase

23

Enzimas - Nomenclatura
N0
Classe
Tipo de reao catalisada
1 Oxirredutases Transferncia de eltrons
(ons hidreto ou tomos H)
2 Transferases Reaes de transferncia de grupos
3 Hidrolases
Reaes de hidrlise
4 Liases
Adio de grupos em ligas duplas ou
remoo de grupos com a formao de
ligas duplas
5 Isomerases
Transferncia de grupos dentro da mesma
molcula para formar ismeros
6 Ligases
Formao de ligaes C-C, C-S, C-O, C-N
pelo acoplamento da clivagem do ATP

24

 Oxido-redutases (reaes de oxidaoreduo ou transferncia de eltrons.

Ex: Desidrogenases e Oxidases)

25

Oxirredutases:transferncia de eAH2 + B

A + BH 2

Lactato
desidrogenase
Exemplo cido
Ltico
Desidrogenase

COOH

CO

CH3

NADH

cido Pirvico

NADox

COOH

H-C- OH

CH3
cido Ltico

26

1. Oxirredutases transferncia de eltrons

Etanol

Acetaldedo

27

Transferases

(transferem
grupos funcionais como amina,
fosfato, acil, carboxil. Ex:
Quinases e Transaminases)

28

Transferases
transferncia de grupos

29

Hexoquinase

30

TRANSFERASES -

transferncia de grupos

Exemplo: Aminotransferase - TGP

31

GLICOGNIO SINTASE
32

GLICOGNIO SINTASE

33

HIDROLASES
Exemplo: Lactase

Lactose

H2O

Glicose + Galactose

(-D-glicopironosil--Dgalactopiranose )

34

HIDROLASES
Reaes de hidrlise de ligao
covalente. Ex: Peptidases)

35

HIDROLASES:Quimiotripsina

36

LIASES: Fumarases
adio ou remoo de grupos
(H2O, NH4+, CO2).

37

Liases: Catalisam a quebra de

ligaes covalentes e a remoo de
molculas de gua, amnia e gs
carbnico.

Dehidratases e
Descarboxilases

38

ISOMERASES
Transferncia de grupos dentro da mesma
molcula, formao de ismeros

Triose Phosphate
Isomerase

39

ISOMERASES
Reaes de interconverso entre ismeros
ticos ou geomtricos - Epimerases

40

LIGASES
Reaes de sntese com consumo de ATP

Piruvato carboxilase

41

Ligases (catalisam reaes de

formao de novas molculas a
partir da ligao entre duas prexistentes, sempre s custas de
energia. Ex: Sintetases)

42

Formao de um complexo
enzima-substrato
Reao enzimtica = enzima +
substrato complexo
Ligao atravs do stio ativo
Fenda na estrutura protica
especfica

43

Stio de ligao

44

Ao enzimtica: stio ativo

(substrato)

45

46

47

Enzimas
Energia de ativao: Diferena entre os nveis

de energia do estado basal e do estado de

transio

48

Cintica enzimtica
A cintica enzimtica a parte
da Enzimologia que estuda a
velocidade
das
reaes
enzimticas bem como os
fatores que a influenciam.

49

Cintica enzimtica
Os princpios gerais da cintica das
reaes qumicas aplicam-se s
reaes catalisadas enzimaticamente,
embora estas tambm mostrem um
padro distinto que no usualmente
encontrado nas reaes no
enzimticas: saturao com o
substrato.
50

Modelo chave - fechadura

Enzima + Substrato [Enzimasubstrato]
Enzima + Produto

ETAPA REVERSVEL

ETAPA IRREVERSVEL

51

52

Fatores que influenciam na

reao enzimtica
Temperatura: Quanto maior a
temperatura, maior a velocidade
da reao, at se atingir a
temperatura tima; a partir dela,
a atividade volta a diminuir, por
desnaturao da molcula.
53

Fatores que influenciam na

reao enzimtica
pH: Idem temperatura;
existe um pH timo, onde a
distribuio de cargas
eltricas da molcula da
enzima e, em especial do
stio cataltico, ideal para a
catlise.
54

Inibio competitiva
Uma molcula apresenta estrutura
semelhante ao substrato da enzima que
se liga para realizar a catlise, ela
poder aceitar esta molcula no seu
local de ligao, mas no pode levar ao
processo cataltico, pois ocupando o
stio ativo do substrato correto. Portanto
o inibidor compete pelo mesmo local do
substrato.
55

Inibio enzimtica: reversvel

competitiva

56

Inibio no competitiva
Ocorre quando um molcula ou
on pode se ligar em um
segundo local na superfcie
enzimtica (no no stio ativo).
Isto pode distorcer a enzima
tornando o processo cataltico
ineficiente.
57

Inibio no competitiva
O inibidor no competitivo pode
ser uma molcula que no se
assemelha com o substrato,
mas apresenta uma grande
afinidade com a enzima.
o mecanismo inverso do
inibidor competitivo, porque
inibe a ligao do complexo ES
e no da enzima livre.
58

Inibio enzimtica: reversvel

no-competitiva

59

Inibio enzimtica irreversvel

Algumas substncias se ligam
covalentemente
s
enzimas
deixando-as inativas. Na maioria
dos casos a substncia reage
com o grupo funcional no stio
ativo bloqueando o local do
substrato, deixando a enzima
cataliticamente inativa.
60

Inibio enzimtica irreversvel

Inibidores irreversveis podem ser
extremamente seletivos pois so
semelhantes ao substrato.
So muito utilizados como resduos,
os quais apresentam grupos de
tomos que se configuram
semelhantemente ao estado de
transio que se ligam ao substrato.
61

Inibio alostrica

62

Papel da enzima no aumento da velocidade

de reao atravs da reduo da ENTROPIA

63

Enzimas
Componentes da Reao Enzimtica

E+S

ES

E+P

E - Enzima
S - Substrato(s)
ES - Complexo Enzima -Substrato
P Produto(s)
64

Enzimas
Componentes da Reao Enzimtica

E+S

ES

P+E

Substrato se liga ao
STIO ATIVO
da enzima

65

Enzimas - Via Metablica

Substrato inicial

66

Enzimas
Substratos
Complexo ES (Enzima-Substrato)
Ligao Stio Ativo
Chave-fechadura
Incaixe induzido
Liberao do Produto
+
Enzima inalterada

67

Enzimas
Ligao da Enzima ao Substrato
2 modelos propostos:
Chave-Fechadura
Encaixe Induzido

68

Ligao da
enzima ao
substrato

Modelo
Chave-Fechadura
69

Enzimas
Modelos de ligao da enzima ao
substrato

Modelo Encaixe Induzido

Modelo Encaixe Induzido combinado com a tenso do substrato

70

Centro Cataltico / Stio Ativo

Regio da molcula enzimtica que
participa da reao com o substrato
Pode possuir componentes no proticos
cofatores
Possui aminocidos auxiliares e de contato

73

Enzimas = Catalisadores
Propriedades
Aceleram as reaes
No so consumidos na reao
Atuam em pequenas concentraes
No alteram o equilbrio das
reaes
74

Enzimas - Propriedades
- Aceleram reaes qumicas
Decomposio do H2O2
Condies da Reao

Energia livre de Ativao

kj/mol
kcal/mol

Velocidade
Relativa

Sem catalisador

75,2

18,0

Platina

48,9

11,7

2,77 x 104

Enzima Catalase

23,0

5,5

6,51 x 108

75

Enzimas - Propriedades
- No so consumidos na reao

H2O2

E+S

Catalase

ES

H2O +

O2

E+P
76

Enzimas - Propriedades
- Atuam em pequenas concentraes

1 molcula de Catalase

decompe
5 000 000 de
molculas de H2O2
pH = 6,8 em 1 min

Nmero de renovao
TURNOVER NUMBER
77

Enzimas - Propriedades
- No alteram o estado de equilbrio

Energia

no nvel basal (forma estvel), S e/ou P contm uma

quantidade caracterstica de energia livre
o equilbrio entre S e P reflete a diferena em energia
livre dos seus estados basais

Diferena entre
a energia livre
de S e P

Energia de ativao sem enzima

Energia de ativao com enzima

P
Caminho da Reao

78

Enzimas- Especificidade
Comparao entre a hidrlise de vrios
substratos por:
Catalisador Inorgnico
Hidrlise catalisada pelo
HCl a quente

Enzima

Hidrlise catalisada por uma

enzima especfica para
o glicognio

Inalteradas
Protenas
Aminocidos Protenas
Triacilgliceris Inalterados
Triacilgliceris Glicerol +
Glicognio
Glicose +
c. Graxos
Maltose +
Glicognio
Glicose
Oligossacardeos

79
ramificados

Enzimas
Especificidade Estereoqumica

80

Enzimas
Especificidade de Grupo
Tipo de ligao e um dos fragmentos
devem ser especficos
Ex: maltase
Glicose
Glicose

digesto de glicdios
Ex: ose
Glicose

Frutose
Galactose
Arabinose
Xilulose

Maltosedeve ser a glicose

Metade da molcula

81

Enzimas

Cofatores

82

Cofatores enzimticos
Para alguns tipos de processos
biolgicos, apenas a cadeia
protica no suficiente, por isso
a protena requer uma molcula
denominada cofator a qual pode
ser uma pequena molcula
orgnica, denominada coenzima
ou um on metlico.
83

Cofatores enzimticos
Os cofatores so geralmente
estveis em temperatura alta. A
catlise ativa enzima-cofator
denominada holoenzima, quando o
cofator removido, se mantm a
protena, a qual catabolicamente
inativa e denominada apoenzima

84

Cofatores

85

Enzimas - Cofatores
Molculas orgnicas ou inorgnicas que
condicionam a atividade das enzimas
on

Poro protica
APOENZIMA

Cofator
Coenzima

HOLOENZIMA
Grupamento
prosttico

86

Enzimas - Cofatores ons

Cofatores inorgnicos
Exemplos:
Magnsio - Reaes de fosforilao
Mangans- Superxido dismutase
mitocondrial
Zinco - Anidrase carbnica,
Carboxipeptidase
87

Cofatores
Ativadores -

ons

Magnsio - co-substrato para o ATP

88

Enzimas - Cofatores
Mg +2 como Ativador
Hexoquinase - transferncia do fosfato
do ATP para a glicose

89

Enzimas - Cofatores
Coenzimas
Cofatores orgnicos
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis
Classificam-se em:
transportadoras de hidrognio
transportadoras de grupos qumicos

90

Coenzimas
A molcula orgnica que se liga s
enzimas para ativar uma reao,
denominada coenzima, cada tipo
apresenta uma funo qumica
particular, algumas so agentes oxiredutoras, outras transferidoras etc.
91

Coenzimas

NAD/NADP+

92

Coenzimas: oxidao e reduo

93

Coenzimas: ATP - ADP

94

Coenzimas: processos
endergnicos e exergnicos

95

Coenzimas transportadoras de
hidrognio
Coenzima

Abreviatura Reao
Origem
catalisada
Nicotinamida adenina NAD+
Oxi-reduo Niacina ou
dinucleotdio
Nicotinamida adenina NADP+
dinucleotdio fosfato
Flavina adenina
FAD
dinucleotdio

Vitamina B3
Oxi-reduo Niacina ou
Vitamina B3
Oxi-reduo Riboflavina ou
Vitamina B2

96

NAD

Nicotinamida
adenina
dinucleotdio (B3)

97

FAD Flavina Adenina Dinucleotdio (B2)

98

Exemplo da ao do FAD como

coenzima Reao da sucinato
desidrogenase

99

Coenzimas transportadoras
de grupos qumicos
Coenzima
Coenzima A

Abrev.
Reao catalisada Origem
Pantotenato ou
CoA-SH Transferncia de

Biotina
Piridoxal fosfato

PyF

Metilcobalamina
Tetrahidrofolato

THF

Tiamina
pirofosfato

TPP

grupo acil
Transferncia de
CO2
Transferncia de
grupo amino
Transferncia de
unidades de carbono
Transferncia de
unidades de carbono
Transferncia de
grupo aldedo

Vitamina B5
Biotina ou
Vitamina H
Piridoxina ou
Vitamina B6
Cobalamina ou
Vitamina B12
cido flico
Tiamina ou
Vitamina B1

100

Sntese da CoA
(B5)

4-fosfopantotenato

4-fosfopantotenoilcistena

4-fosfopantetona

Defosfocoenzima A

forma ligaes com grupamentos acil ( -C R )

101

Piridoxal fosfato (B6)

Coenzima: Transaminao

102