Determinao de produtos de

transformao de pesticidas:
reviso de mtodos de extrao e deteco

Andr Campos Colares Botelho

PPGEA Londrina

Profa. Dra. Juliana Feij de Souza Daniel

Tpicos Especiais em Saneamento Ambiental: Degradao de
VIDAL, J.l. Martnez et al. Determination of pesticide transformation products: A
review of extraction and detection methods. Journal Of Chromatography A, [s.l.],
v. 1216, n. 40, p.6767-6788, out. 2009. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2009.08.013.
SUMRIO

1.EXTRAO LQUIDO-LQUIDO (L.L.E.)

2.EXTRAO SLIDO-LQUIDO (S.L.E.)

3. MEMBRANA LQUIDA (S.M.L.)

4.P.L.E./S.P.E.

5.MICROEXTRAO EM FASE LQUIDA (HS-

LPME)
1. EXTRAO LQUIDO-LQUIDO

A extrao Lquido-lquido (E.L.L. ou L.L.E.)

se baseia na transferncia de um soluto de
uma fase lquida para outra de acordo com a
sua solubilidade.

Este mtodo muito til na separao de

compostos orgnicos desde que sejam
escolhidos os solventes de extrao
adequados.
(QUEIROZ; COLLINS; JARDIM, 2001)
1. EXTRAO LQUIDO-LQUIDO
Pode ser usada para
separar seletivamente
uma substncia de uma
mistura ou para remover
impurezas de uma
soluo.

Normalmente uma das

fases a gua ou uma
soluo aquosa e a outra
um solvente orgnico
que imiscvel com a
gua.
Fig. 01 Mecanismo para E.L.L.
Fonte: http://slideplayer.com.br/
1. EXTRAO LQUIDO-LQUIDO
VANTAGENS

Mtodo simples (na configurao mais comum usa-

se um funil de separao ou tubos de centrfuga).

Pode-se utilizar um nmero grande de solventes,

puros e disponveis comercialmente, os quais
fornecem uma ampla faixa de solubilidade e
seletividade.

Alm disso, as protenas presentes nas amostras

so desnaturadas, eliminando a contaminao da
coluna cromatogrfica.
(QUEIROZ; COLLINS; JARDIM, 2001)
1. EXTRAO LQUIDO-LQUIDO
DESVANTAGENS
Amostras com alta afinidade pela gua so parcialmente
extradas pelo solvente orgnico, resultando em perda do
analito;
Pode ocorrer a formao de emulses, o que resulta em
grande consumo de tempo;
Volumes relativamente grandes de amostras e de solventes
so requeridos, gerando problemas de descartes;
Alguns solventes orgnicos so txicos;
Decomposio de compostos instveis termicamente, na
etapa de pr-concentrao;
O processo suscetvel a erros e, relativamente, de difcil
automao.
(QUEIROZ; COLLINS; JARDIM, 2001)
1. EXTRAO LQUIDO-LQUIDO

Apesar destas desvantagens, a E.L.L.

considerada uma tcnica clssica de
preparao de amostra e tem sido ainda muito
utilizada em anlises de diversos tipos de
substncias presentes em fluidos biolgicos,
pois extratos bastante limpos podem ser
obtidos com alta seletividade para alguns
analitos.
(QUEIROZ; COLLINS; JARDIM, 2001)
1. EXTRAO LQUIDO-LQUIDO
GALEANODIAZ, T et al. Determination of fenthion and fenthion-sulfoxide, in olive oil
and in river water, by square-wave adsorptive-stripping voltammetry. Talanta, [s.l.], v.
76, n. 4, p.809-814, 15 ago. 2008. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.talanta.2008.04.037.

Exemplo:
1 g de azeite misturada com 5 mL de hexano.

A soluo passada atravs de um cartucho de slica e o pesticida Fention

(organofosforado) eludo com 20 mL de hexano.

A soluo de hexano transferida para um copo de 100 mL com 15 mL de

acetonitrilo.

A mistura agitada durante 15 minutos. A fase de acetonitrilo ento executada

em um funil de separao de 100 mL e o material lipdico, co-extrado na fase de
acetonitrilo, removido realizando uma extrao lquido-lquido com 10 mL de
hexano.

A mistura agitada e deixada at as fases serem separadas.

2. EXTRAO SLIDO-LQUIDO

Na extrao slido-lquido os
componentes solveis de um slido so
separados por contato com um solvente
adequado (lquido).

Geralmente o material solvel (soluto) o

produto de interesse e o slido residual
(inerte) um subproduto ou resduo.
(RODRIGUES, 2016)
2. EXTRAO SLIDO-LQUIDO
Processo de extrao slido-lquido, envolve:

1. Contato ntimo entre carga slida e o

solvente;
2. Separao da soluo (extrato) do slido
esgotado;
3. Separao do solvente (e do slido
arrastado, se houver) do extrato seguida
por purificao do produto e
4. Recuperao do solvente do slido mido
(por prensagem ou secagem).
(RODRIGUES, 2016)
2. EXTRAO SLIDO-LQUIDO
PIC, Yolanda et al. Rapid and sensitive ultra-high-pressure liquid
chromatographyquadrupole time-of-flight mass spectrometry for the quantification
of amitraz and identification of its degradation products in fruits. Journal Of
Chromatography A, [s.l.], v. 1203, n. 1, p.36-46, ago. 2008. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2008.07.018.

Analito de interesse: pesticida Amitraz

Matriz da analise: fruta Pra.
As amostras foram cortadas em pequenos pedaos
totalizando 5 gramas da amostra, colocadas um copo de vidro
de 100 ml e misturados completamente com 30 ml de acetato
de etilo e 15 g de sulfato de sdio anidro, durante 2 min.
Aps a sedimentao o sobrenadante foi passado atravs de
um papel de filtro que contm sulfato de sdio anidro num
balo de evaporao.
Um evaporador rotativo ajustado a 40C e 250 mbar foi
utilizado para evaporar o extracto a menos de 1 ml.
2. EXTRAO SLIDO-LQUIDO

O extrato foi passado para um tubo cnico cilndrico

de 15 ml.

Os extratos foram evaporados at secura

utilizando um evaporador, com uma corrente de
nitrognio e um banho de gua a 50C.

Aps a evaporao do solvente, foi reconstitudo em

0,5 ml de acetonitrilo.
3. MEMBRANA LQUIDA

Formada por uma fina camada de fase

orgnica (geralmente com reagentes
dissolvidos) entre duas fases aquosas de
diferentes composies.

Esta camada fina de fase orgnica pode ser

imobilizada sobre um suporte microporoso
inerte adequado, que quando interposto entre
duas solues aquosas denominado
membrana lquida suportada (S.L.M.).
(PARHI, 2013)
3. MEMBRANA LQUIDA

Nesta tcnica de extrao em trs fases os analitos

so extrados de uma amostra aquosa que flui
continuamente atravs de uma fase lquida orgnica
em outra fase aquosa temporariamente estagnada.

Trata-se de um sistema de separao relativamente

novo e prospectivo que consiste em uma pelcula
lquida atravs da qual as transferncias de gases,
ons ou molculas seletivas ocorrem atravs de
processos de permeao e transporte.
(PARHI, 2013)
3. MEMBRANA LQUIDA

S.L.M. uma membrana lquida de tipo no

dispersivo, cuja fase de membrana
imobilizada nos poros de um polmero poroso.

O suporte polimrico, que geralmente consiste

de polmeros hidrofbicos microporosos, no
desempenha um papel ativo na separao,
mas fornece um suporte estrutural para a fase
da membrana (extratores orgnicos) que o
componente ativo na separao.
(PARHI, 2013)
3. MEMBRANA LQUIDA

Essas membranas podem ser configuradas

como uma folha plana ou um tipo cilndrico (de
modo a aproveitar a superfcie mxima) na
qual ela no apenas deixa o lquido da
membrana descansar na sua superfcie, mas
tambm permite que o lquido da membrana
penetre nos seus poros.
(PARHI, 2013)
3. MEMBRANA LQUIDA

Com base no tamanho, forma, rea de

superfcie e aplicaes suportadas, as
membranas lquidas podem ser categorizadas
em classes principais, nomeadas membrana
lquida com suporte de folha plana (F.S.S.L.M.)
e membrana lquida com suporte de fibra oca
(H.F.S.L.M.).
(PARHI, 2013)
3. MEMBRANA LQUIDA
Membrana lquida compatvel com folhas planas
(F.S.S.L.M.)
Utiliza um suporte slido microporoso
para a membrana lquida e a forma
mais simples desta membrana.

O suporte slido impregnado com o

extrator e apertado entre duas
meias clulas usando juntas
formando assim dois
compartimentos.

Um compartimento para soluo de

alimentao e o outro compartimento
para a sada da soluo. Ambas as
fases so agitadas por agitadores
mecnicos.
Fig. 02 - Diagrama esquemtico da membrana
lquida com suporte de folha plana (F.S.S.L.M.)
no processo de separao de membrana.
(PARHI, 2013)
3. MEMBRANA LQUIDA
Membrana lquida compatvel com fibra oca (H.F.S.L.M.)
O mdulo de fibra oca usado para extrao de ons metlicos. Dentro
da casca, muitas fibras finas so embaladas em linhas. A fase de origem
passa atravs das fibras e a fase de recepo pelo lado da casca com a
ajuda de bombas.

Fig. 03 - Membranas lquidas de fibra oca suportadas

(H.F.S.L.M.), contator de membrana de fluxo extra (PARHI, 2013)
3. MEMBRANA LQUIDA
SANDAHL, Margareta; MATHIASSON, Lennart; JNSSON, Jan ke.
Determination of thiophanate-methyl and its metabolites at trace level in spiked
natural water using the supported liquid membrane extraction and the microporous
membrane liquidliquid extraction techniques combined on-line with high-
performance liquid chromatography. Journal Of Chromatography A, [s.l.], v. 893,
n. 1, p.123-131, set. 2000. Elsevier BV. http://dx.doi.org/10.1016/s0021-
9673(00)00697-x.
Foram utilizadas unidades de membrana com volumes de canais totais em
cada lado da membrana de 150 l com canais espirais e 12 l com canais
diretos para extrao via membrana lquida e extrao lquido-lquido,
respectivamente.

Para a extrao via membrana lquida , uma membrana de P.T.F.E.

(politetrafluoretileno ou Teflon) porosa, Fluoropore FG, miliporada, foi
impregnada durante pelo menos 20 minutos no lquido da membrana e
presa entre dois blocos de P.T.F.E..

Para a extrao lquido-lquido da membrana, uma membrana de P.T.F.E.

seca, foi montada entre dois blocos de titnio.
4. P.L.E./S.P.E.
A extrao de fase slida (S.P.E.), extrao lquida
pressurizada (P.L.E.) e a cromatografia de fase
gasosa (mtodo GC-MS) so mtodos utilizados
para a determinao de dois pesticidas
organofosforados (O.P.P.s) - clorpirifos, diazinon e
os seus dois metabolitos mais estveis - em lodo
de esgoto e amostras de solo agrcola.

O procedimento de extrao lquida pressurizada

foi otimizado como uma abordagem de extrao
menos demorada e econmica para amostras de
lamas de depurao/solo.
(DAZ-CRUZ; BARCEL, 2006)
4. P.L.E./S.P.E.
DAZ-CRUZ, M. Silvia; BARCEL, Dami. Highly selective sample preparation and
gas chromatographicmass spectrometric analysis of chlorpyrifos, diazinon and their
major metabolites in sludge and sludge-fertilized agricultural soils. Journal Of
Chromatography A, [s.l.], v. 1132, n. 1-2, p.21-27, nov. 2006. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2006.07.062.

No mtodo foi utilizado 1g de amostras de lodo

liofilizado e peneirado mais mistura com 100 l da
soluo padro, 1,5g de p de Florisil ativado
(adsorvente altamente seletivo que possui ampla
utilidade em cromatografia preparativa e analtica ) e
Hydromatrix (hidrogel peptdico) na clula de
extrao nativa contendo 0,5g de Florisil ativado na
extremidade inferior.
4. P.L.E./S.P.E.
As clulas de extrao
foram seladas em ambas as
extremidades com filtros de
fibra de vidro. A extrao foi
realizada por P.L.E.
utilizando um extrator de
solvente acelerado ASE 200
(Dionex) utilizando uma
mistura de DCM-acetona Fig. 04 - Extrator de solvente acelerado ASE
200 (Dionex) Fonte: https://alt-model-
como extrator de solvente images.s3-us-west-2.amazonaws.com

nas seguintes condies

experimentais: presso
2.000 psi a120 C.
4. P.L.E./S.P.E.

Antes da limpeza off-

line do S.P.E., os
extratos de P.L.E.
foram reduzidos para
10 mL sob um fluxo
suave a 35 C em
um evaporador
Turbo Vap. Fig. 05 - Evaporador Turbo Vap.
Fonte: http://www.biotage.com
4. P.L.E./S.P.E.
Em seguida, os extratos
concentrados assim obtidos foram
carregados nos cartuchos de
Florisil.

Para a frao eluda, foram

adicionados 20 mL de etil acetato
para eluir os analitos
potencialmente retidos de interesse
do cartucho.

O eludo resultante foi levado

secagem no evaporador e Fig. 06 - Cartuchos de Florisil.
reconstitudo com 1 mL de etil Fonte: http://www.biotage.com

acetato para posterior

derivatizao.
5. MICROEXTRAO EM FASE
LQUIDA
A microextrao em fase lquida do headspace
(H.S.-L.P.M.E.) uma tcnica de tratamento de
amostras altamente integrada desenvolvida nos
ltimos anos.

Esta tcnica integra amostragem, extrao, limpeza,

concentrao e outras etapas.

Nela os analitos so evaporados da matriz de

amostra para a fase gasosa, e depois enriquecidos a
partir da fase gasosa em uma gota de solvente de
microlitros pendurado na ponta de uma microfenda
e, finalmente, so analisados por um instrumento.
(YANG et al., 2009)
5. MICROEXTRAO EM FASE
LQUIDA
A H.S.-L.P.M.E. parece ser uma tcnica muito boa, devido
ao fato de que a matriz de amostras eliminada, pois o
extrator usado na L.P.M.E. suspenso no espao acima
de uma amostra aquosa e no tem contato com a soluo
de amostra.

Menos interferncia torna a identidade e a quantificao

dos analitos mais confiveis.

O H.S.-L.P.M.E. tem muitas aplicaes bem sucedidas,

como determinaes de anilinas cloradas, aminas
alifticas, fenis, trialometanos e hidrocarbonetos
aromticos policclicos em gua, clorobenzenos no solo,
alcois de cerveja.
(YE; ZHOU; WANG, 2006)
5. MICROEXTRAO EM FASE
LQUIDA
YE, Cun-ling; ZHOU, Qing-xiang; WANG, Xin-ming. Headspace liquid-phase
microextraction using ionic liquid as extractant for the preconcentration of
dichlorodiphenyltrichloroethane and its metabolites at trace levels in water
samples. Analytica Chimica Acta, [s.l.], v. 572, n. 2, p.165-171, jul. 2006. Elsevier
BV. http://dx.doi.org/10.1016/j.aca.2006.05.052.

Uma microfenda comercial de

25 L equipada com um tubo de
politetrafluoreteno (P.T.F.E.) de 3
mm de comprimento foi usada
para microextrao.
Para a extrao, uma alquota
de 25 mL da soluo de amostra
contendo NaCl a 35% foi colocada
em um frasco de 45 mL imerso na
clula de recirculao a uma
temperatura de 70C. Fig. 07 - Diagrama esquemtico do HS-LPME
(YE; ZHOU; WANG, 2006)
5. MICROEXTRAO EM FASE
LQUIDA
Aps a absoro dos 10 L de 1-
butil-3-metilimidazolio hexafluorofosfato,
[C4MIM] [PF6], a agulha da microsseringa
foi inserida atravs do septo e depois
ajustada com um tubo de P.T.F.E. de 3
mm e sendo presa de modo que a ponta
da agulha estivesse localizada a uma
posio constante no espao de cabea
do frasco para injetar.
Para comear com o processo de
extrao, o mbolo da seringa foi
totalmente pressionado para expor um 10
L de gota [C4MIM] [PF6] e o agitador
magntico foi ligado a 800 rpm.
Aps a extrao durante 30 min., o
agitador magntico foi desligado e, em Fig. 07 - Diagrama esquemtico do HS-LPME
seguida, a microponta foi retrada de volta (YE; ZHOU; WANG, 2006)

para a microsseringa e injetado

diretamente na H.P.L.C. para anlise.
7. REFERNCIAS
1. DAZ-CRUZ, M. Silvia; BARCEL, Dami. Highly selective sample preparation
and gas chromatographicmass spectrometric analysis of chlorpyrifos, diazinon
and their major metabolites in sludge and sludge-fertilized agricultural
soils. Journal Of Chromatography A, [s.l.], v. 1132, n. 1-2, p.21-27, nov. 2006.
Elsevier BV. http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2006.07.062.
2. GALEANODIAZ, T et al. Determination of fenthion and fenthion-sulfoxide, in olive
oil and in river water, by square-wave adsorptive-stripping
voltammetry. Talanta, [s.l.], v. 76, n. 4, p.809-814, 15 ago. 2008. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.talanta.2008.04.037.
3. OLIVEIRA, Anderson Rodrigo Moraes de et al. Microextrao em fase lquida
(LPME): fundamentos da tcnica e aplicaes na anlise de frmacos em fluidos
biolgicos. Qumica Nova, [s.l.], v. 31, n. 3, p.637-644, 2008. FapUNIFESP
(SciELO). http://dx.doi.org/10.1590/s0100-40422008000300031.
4. PARHI, P. K.. Supported Liquid Membrane Principle and Its Practices: A Short
Review. Journal Of Chemistry, [s.l.], v. 2013, p.1-11, 2013. Hindawi Limited.
http://dx.doi.org/10.1155/2013/618236.
5. QUEIROZ, Sonia C. N.; COLLINS, Carol H.; JARDIM, Isabel C. S. F.. Mtodos de
extrao e/ou concentrao de compostos encontrados em fluidos biolgicos
para posterior determinao cromatogrfica. Qumica Nova, [s.l.], v. 24, n. 1,
p.68-76, fev. 2001. FapUNIFESP (SciELO). http://dx.doi.org/10.1590/s0100-
40422001000100013.
7. REFERNCIAS
6. RODRIGUES, Rodolfo. Extrao Slido-Lquido. Bag: Universidade Federal
do Pampa, 2016. 34 slides, color.
7. SANDAHL, Margareta; MATHIASSON, Lennart; JNSSON, Jan ke.
Determination of thiophanate-methyl and its metabolites at trace level in spiked
natural water using the supported liquid membrane extraction and the
microporous membrane liquidliquid extraction techniques combined on-line with
high-performance liquid chromatography. Journal Of Chromatography A, [s.l.],
v. 893, n. 1, p.123-131, set. 2000. Elsevier BV. http://dx.doi.org/10.1016/s0021-
9673(00)00697-x.
8. VIDAL, J.l. Martnez et al. Determination of pesticide transformation products: A
review of extraction and detection methods. Journal Of Chromatography
A, [s.l.], v. 1216, n. 40, p.6767-6788, out. 2009. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2009.08.013.
9. YE, Cun-ling; ZHOU, Qing-xiang; WANG, Xin-ming. Headspace liquid-phase
microextraction using ionic liquid as extractant for the preconcentration of
dichlorodiphenyltrichloroethane and its metabolites at trace levels in water
samples. Analytica Chimica Acta, [s.l.], v. 572, n. 2, p.165-171, jul. 2006.
Elsevier BV. http://dx.doi.org/10.1016/j.aca.2006.05.052.
10. YANG, Cui et al. Gas flow headspace liquid phase microextraction. Journal Of
Chromatography A, [s.l.], v. 1216, n. 45, p.7694-7699, nov. 2009. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2009.09.039.