Biologia – 1

Aula: Tecnologia do DNA

Professor: Celso Brandão
TÓPICOS
• Enzimas de restrição e DNA ligase
(endonucleases);
• Plasmídeos e Fagos;
• Transformação e trandução (reprodução
bacteriana)
Antes de começar...
• O foco desta matéria é o entendimento da manipulação
genética. Entenda que esta base é para que no futuro
tenhamos conteúdo para discutir: transgênicos, clonagem,
testes de DNA, investigações criminais (PCR) e produção de
medicamentos;

• Assuntos muito cobrados no ENEM e vestibulares.

Enzimas de restrição e DNA
ligase (endonucleases);
• “O código genético é universal”

• O que significa mesmo esta afirmação?

• Se a vida na Terra existe através de uma mesma receita

(A-T-C-G) o que poderia ser feito se pudéssemos cortar e
colar pedaços de interesse do material genético?
Enzimas de restrição e DNA
ligase (endonucleases);
• As enzimas de restrição ou endonucleases são capazes de
cortar pontos específicos do material genético sem danificá-lo;

• As enzimas são específicas cortando o local certo ou próximo

(por ex: existe uma enzima que corta somente Guanina). Cada
enzima reconhece um ou mais sequências alvo e corta o DNA
nestas sequências ou perto delas;

• DNA ligase é uma enzima de adesão de DNA. Se dois pedaços

de DNA tiverem terminações complementares, a ligase pode
ligá-las para formar uma molécula de DNA única e contínua.

• Uma pausa na aula para o debate. O que pode ser feito com
essa tecnologia?
Plasmídeos e Fagos
• Mesmo podendo construir um material genético “novo”
ou proporcionando “melhorias” em algum material
genético, não somos capazes de fazer muita coisa. Não é
possível alterar o material genético de um organismo já
existente, logo, não há replicação deste material
genético...mas a aula não acabou.
Plasmídeos e Fagos
• A apostila cita que a descoberta de enzimas de restrição foi
possível devido ao reconhecimento de bactérias que se
protegem de vírus...vamos entender isso;

• Existem vírus que atacam especificamente bactérias

(bacteriófagos ou fagos). O ataque viral é igual a qualquer ciclo
infeccioso que causa lise (lítico). Porém estas bactérias
produzem enzimas que “cortam” o material genético do vírus
impedindo a conclusão do ciclo.

• Observe no quadro
Plasmídeos e Fagos
• Aqui temos a primeira aplicação deste conhecimento;

• Imagine uma pessoa com diabetes tipo II, isso significa que
seu material genético não faz corretamente a tradução da
sequência responsável pela produção de insulina;

• Utilizando enzimas de restrição é possível cortar o trecho de

um material genético saudável que produz a insulina. Este
trecho é colocado num meio nutritivo com plasmídeos e/ou
fagos. Ambos vão incorporar o material genético da maneira
explicada e irão sintetizar a substância relacionada ao trecho
de DNA, ou seja, a bactéria produz insulina humana pura.
Resumo: Plasmídeos
• Algumas bactérias apresentam plasmídeo (um DNA
extracromossomal, circular e independente);

• As bactérias evolutivamente desenvolveram este material

genético extra como meio de resistência à antibióticos;

• Através de enzimas de restrição e DNA ligase é possível inserir

uma informação neste plasmídeo, sendo assim, a bactéria irá
replicar a informação contida no trecho de DNA.
Resumo das etapas de uma
Fago
• 1 cortando e colando: A enzima reconhece e corta uma
sequência alvo específica e corta o DNA em dois pedaços
neste sítio ou próximo a ele. Contudo, elas não irão se
combinar para formar uma molécula de DNA intacta até que
sejam unidas pelo DNA ligase;

• 2 transformação e seleção bacteriana: existe um tipo de

reprodução sexuada (isso mesmo, sexuada) em bactérias que
se chama transformação. Algumas bactérias “recolhem”
fragmentos de material genético e o incorporam para si (E. coli
faz isso). Um choque de temperatura força essas bactérias a
incorporarem os plasmídeos feitos na etapa 1.
Resumo das etapas de um
Fago
• Várias outras etapas são feitas a fim de deixar o processo mais
“puro” possível, como não é o foco da matérias, vamos para o
resultado desejado;

• 3 produção do polipeptídio: As bactérias servem como mini

"fábricas," produzindo grandes quantidades de proteína. Por
exemplo, se nosso plasmídeo continha o gene da insulina
humana, as bactérias começariam a transcrição do gene e a
tradução do RNAm para produzir muitas moléculas da
proteína insulina humana.
Outras utilidades
• Aprendemos na última aula a utilidade na manipulação do
material genético...ainda iremos detalhar algumas utilidades,
mas para a aula de hoje iremos ver outras utilidades que não
focam em sua manipulação:

• PCR;
• Eletroforese em gel;
• Teste de paternidade.
PCR (proteína C reativa, reação em
cadeia da polimerase)
• É uma técnica para fazer muitas cópias de uma região
específica do DNA, in vitro (em um tubo de ensaio, ao invés de
um organismo);

• Na PCR, a reação é repetida ciclicamente através de uma série

de alterações de temperatura, o que possibilita a produção de
muitas cópias da região de interesse (desnaturação da dupla
fita a 95°C). A reação é rápida porque substâncias chamadas
primers são inseridas (elas inciam o processo de replicação).
Também é utilizado a enzima DNA polimerase, enzima que
sintetiza DNA;

• No final de 36 ciclos bilhões de DNAs são produzidos...mas o

que é um ciclo?
Nomes das etapas não são
importantes para o E.M.
Mas e agora?
• Pense numa utilidade para este teste?

• Imagine uma cena de crime onde pouquíssimo material

genético foi deixado, com essa técnica é possível multiplica-lo
para uma análise mais concreta;

• Se a replicação acontece bilhões de vezes é possível anteceder

uma mutação (previsão de doenças genéticas e câncer).
Continuando...
• Mesmo sendo possível replicar bilhões de vezes o material
genético, ele ainda é extremamente pequeno e imperceptível
para microscópios;

• Neste momento é aplicada a eletroforese em gel:

• É método de separação de material genético através de carga

elétrica. O material genético apresenta carga negativa e é
colocado em uma solução em gel com carga positiva. Este
material é fragmentado em vários genes. Cada gene tem um
tamanho e peso diferente, os mais leves são atraídos primeiro,
os mais pesados depois...vamos entender na imagem
Note as bandas com
espessuras diferentes
• Cada banda abaixo recebeu um corante e cada gene é uma
banda, ou seja, uma característica específica, a comparação de
faixas de banda é a análise deste material. É assim que se faz
também um teste de paternidade.
Quem são é a mãe e o pai?