UNIVERSIDADE AGOSTINHO NETO

FACULDADE DE CIÊNCIAS
DEI-BIOLOGIA
SECTOR DE MICROBIOLOGIA

TRABALHO DE FIM DO CURSO DE LICENCIATURA EM BIOLOGIA

DETECÇÃO DOS PRINCIPAIS AGENTES BACTERIANOS ISOLADOS NAS

INFECÇÕES DO SISTEMA URINÁRIO NO PERÍODO COMPREENDIDO
ENTRE 2011 A 2015 E DETERMINAÇÃO DOS PERFIS DE
SUSCEPTIBILIDADE AOS ANTIMICROBIANOS.

ELABORADA POR: JOSÉ HILÁRIO FRANCISCO DA ROSA

LUANDA, 2019
SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO

2. OBJECTIVOS
3. MATERIAL E MÉTODOS

4. RESULTADOS E DISCUSSÕES

5. CONCLUSÕES

6. RECOMENDAÇÕES
1. INTRODUÇÃO
Pela via ascendente,
quando o microrganismo
Normalmente, a urina não deve apresentar nenhum microrganismo; a presença de
atinge a uretra, bexiga,
qualquer microrganismo pode levar ao desenvolvimento
ureter e o rim. da infecção urinária.

Os
microrganismos
alcançam o
tracto urinário
Pela via linfática, rara, Via hematogênica, pela
havendo a por três vias
intensa vascularização do
possibilidade de
alcançar o rim pelas rim, podendo o mesmo
conexões linfáticas . ser comprometido em
qualquer infecção
sistêmica

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 O tracto urinário pode ser invadido por uma grande diversidade de microrganismos, como
bactérias, vírus e fungos.

A natureza do microrganismo invasor depende, na maior parte dos casos, de:

História da infecção

Factores subjacentes dos hospedeiros

Uso de agentes antimicrobianos

Instrumentação do tracto urinário

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 No geral, os isolados bacterianos que mais causam as infecções do tracto urinário pertencem à
família Enterobacteriaceae, e os membros desta família incluem os géneros Escherichia,
Klebsiella, Proteus, Enterobacter, Serratia, e bactérias Gram-negativas não fermentadoras como
P. aeruginosa.

Entre os agentes causadores da ITU temos também as bactérias Gram-positivas como

Enterococcus sp., Staphylococcus sp., e Streptococcus do grupo -hemolytica.

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 EPIDEMIOLOGIA

Segundo NAJAR e colaboradores (2013), a infecção do tracto urinário é a terceira infecção mais
comum nos humanos ficando atrás somente das infecções respiratórias e gastrointestinais.

Trabalhos publicados por STAMM & NORRBY em 2013 e FOSTER em 2015, indicam que no
mundo, são descritos aproximadamente 150 milhões de casos por ano, com uma maior
incidência em mulheres jovens sexualmente activas.

As ITU constituem em todo mundo um grave problema de saúde pública , uma vez que as
suas complicações clínicas são severas, principalmente em crianças, podendo causar
meningite em aproximadamente 10% dos casos. Pode ainda produzir “cicatrizes” nos rins e
levar ao longo do tempo a uma insuficiência renal crônica com hipertensão .

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DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DAS INFECÇÕES URINÁRIAS

Segundo HORNER e colaboradores (2016), a metodologia considerada como padrão ouro no

diagnóstico laboratorial das ITU é a cultura microbiológica.

Na práctica laboratorial, existem dois critérios de avaliação de bacteriúria:

Stamm
Kass Critérios
et al.

A utilização deste ou daquele critério, é da competência do clínico a cada situação isolada, já

que o de Kass é mais específico e o de Stamm mais sensível.

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 ANTIBIOTERAPIA

Para uma escolha terapêutica adequada é necessário avaliar a susceptibilidade dos agentes
etiológicos aos antimicrobianos realizando o antibiograma

Um grande factor de preocupação na área médica nos últimos anos tem sido a diminuição da
susceptibilidade dos microrganismos aos antimicrobianos, devido ao aumento do uso
indiscriminado e exagerado e por vezes desnecessário de antibióticos de amplo espectro

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 MECANISMO DE ACTUAÇÃO DOS ANTIBIÓTICOS

Figura 1.11: Principais mecanismos de acção de antibióticos sobre as bactérias .

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 2. OBJECTIVOS

2.1. GERAL:

Detectar os principais agentes bacterianos isolados nas infecções do sistema urinário em

indivíduos ambulatórios que acorreram ao Laboratório de Microbiologia da Faculdade de
Medicina da UAN.

2.2. ESPECÍFICOS:

Avaliar a frequência dos principais agentes bacterianos isolados das uroculturas;

Determinar a frequência dos principais agentes etiológicos quanto ao sexo e faixa etária;

Analisar os perfís de resistência aos antimicrobianos produzidos pelos isolados bacterianos

das uroculturas estudadas.

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 3. MATERIAIS E MÉTODOS

População de estudo e
tamanho da amostra

76 placas de cultura pura identificadas como P. aeruginosa isoladas em pacientes internados em duas
unidades hospitalares de Luanda (1 e 2) durante o período de Agosto a Dezembro de 2015, respeitando
todos os critérios de colheita de amostras biológicas, independentemente do espécime clínico de
origem, local de colheita ou sexo, bem como a idade dos pacientes.

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3.1. CONFIRMAÇÃO DA IDENTIFICAÇÃO BIOQUÍMICA E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR

Repicagem em:
1º Agar sangue (37°);
Provas bioquímicas: Teste de Suscetibilidade aos
1º TSI Antibióticos (Kirby e Bauer)
2º Gram (bacterioscopia)
3º Agar Cetrimide (37°); 2º Oxidase
4º TSB (42°)

Extração de DNA (Método de Electroforese em gel de

PCR-Fingerprinting (csM13)
Tiocianato de Guanidina) agarose

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4. RESULTADOS E DISCUSSÕES
Com base nos resultados dos testes que consistiram na análise das características
bioquímicas4.1.e TAXAS
fisiológicas das bactérias,
DE RESISTÊNCIA todos 76 isolados foram identificados como
AOS ANTIBIÓTICOS
pertencentes a espécie P. aeruginosa, confirmando-se deste modo a pré identificação
feita aos isolados nos locais de proveniência.

Figura 5.3: Taxas de resistência aos antibióticos dos isolados provenientes do hospital 1.

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 Figura 5.4: Taxas de resistência aos antibióticos dos isolados provenientes do hospital 2.

Numa comparação directa entre os valores da taxa de resistência obtidos nos isolados dos
dois hospitais verificou-se que não houve muita variação no comportamento destes isolados
frente aos antibióticos testados, estando os valores obtidos muito próximos, com excepção
da Gentamicina (GEN) que apresentou uma variação considerável nos valores obtidos, sendo
mais elevada (70%) no hospital 1 e relactivamente baixa (33%) no hospital 2.

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 Num estudo realizado por Ferreira (2005) em amostras provenientes de hospitais de seis estados
Brasileiros, foram obtidas taxas de resistência muito próximas em alguns casos e noutros mais
elevadas em relação aos resultados obtidos no presente trabalho, nomeadamente 50% à 70%
para Ceftazidima (CAZ), 25% à 100% para o Imipenem (IPM) e Meropenem (MER), 50% à 100%
para Gentamicina (GEN), e 39% à 100% para Ciprofloxacina (CIP).

Num outro estudo realizado por Pessoa (2013), num hospital universitário do sudeste do Brasil, as
taxas de resistência obtidas foram também semelhantes aos resultados deste trabalho: 35,1%
para Gentamicina (GEN), 35,85% para Ciprofloxacina (CIP), 28,2% para Imipenem (IMP) e 29,2%
para Meropenem (MER).

Segundo Friedrich & Bosso (1999), a emergência de resistência aos agentes antimicrobianos, está
relacionada provavelmente à pressão selectiva exercida pelo uso intenso, indiscriminado, e muitas
das vezes indevido desses medicamentos, ou ainda, à factores intrínsecos relacionados com estas
bactérias.

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 4.2. ANÁLISE DE DIVERSIDADE INTRA-ESPECÍFICA: Tipificação Fenotípica

Nº de Resistotipos Nº total de
Origem
Isolados (OTUs) Resistotipos
Hospital 1 24 10
28
Hospital 2 52 19

Esta diversidade intraespecífica encontrada em função da análise de características fenotípicas

(Resistotipagem), é provável que não represente a real relação entre os isolados que constituem
tais OTUs (resistotipos), uma vez que estes perfis resultaram da análise de um número muito
limitado de antibióticos testados.

Por outro lado segundo Bingen e colaboradores (1996), actualmente a determinação do perfil de
suscetibilidade/resistência aos antimicrobianos, não é eficiente para a tipagem de P. aeruginosa,
visto que estirpes expressando diferentes genótipos podem apresentar perfis de resistência
similares e, inversamente, estirpes expressando o mesmo genótipo podem apresentar perfis
diferentes.

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 4.3. ANÁLISE DE DIVERSIDADE INTRA-ESPECÍFICA: Tipificação Molecular

Nível de OTUs
Técnica Aplicada Nº de Isolados
Semelhança Formadas

M13-PCR 85% 64 43

Os perfis de amplificação evidenciaram o polimorfismo existentes, permitindo estabelecer o

relacionamento ou o afastamento das estirpes dentro da espécie em estudo.
Não foi possível estabelecer uma correlação entre as estirpes e a sua origem, pois constatou-se
que estirpes de origem diferentes apresentaram níveis de semelhança tão elevados como outras
da mesma origem.

Num trabalho realizado por Soqui (2007), utilizando métodos de PCR Fingerprinting com o “primer”
csM13, para a tipificação molecular de isolados de C. jejuni e C. coli, esta técnica permitiu agrupar
39 e 38 tipos num universo de 101 e 86 destes isolados, respectivamente.

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 4.4. Índice de Diversidade de Simpson e Avaliação do Poder Discriminante

Tabela 5.3: Valores de índice de diversidade de Simpson obtidos para P. aeruginosa

Técnica Aplicada N s Max nj Ds Taxa de tipificação

Resistotipagem 76 28 8 0,867 36,84%

M13-PCR 64 43 7 0,552 67,19%

Deste modo, a aplicação da técnica de PCR fingerpriting, permitiu a discriminação entre isolados de P.
aeruginosa pertencentes aos mesmos resistotipos, ao mesmo tempo que demonstrou que entre estirpes de
diferentes resistotipos podem existir elevado grau de similaridade.

Num trabalho realizado por Soqui (2007), verificou-se que o valor de índice de similaridade de Simpson
obtido foi de 0,979, confirmando assim o elevado poder discriminante dos métodos de PCR-fingerprinting
aplicados naquela pesquisa.
Em suma os valores acima descritos demonstraram que neste trabalho a técnica de M13-PCR
fingerprinting apresentou maior poder discriminante em relação à técnica de resistotipagem.

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5. CONCLUSÕES

Com base nos resultados obtidos neste trabalho, foi possível cumprir com os objectivos traçados para a
elaboração desta dissertação, destacando-se os seguintes pontos conclusivos:

Os métodos tradicionais de biotipagem em combinação com os métodos moleculares aplicados

neste estudo foram eficazes na identificação e caracterização dos isolados de P. aeruginosa .
Os isolados clínicos de P. aeruginosa apresentaram altas taxas de resistência para alguns
antimicrobianos destacando-se, CTX , CRO, CAZ e GEN com valores entre 67 a 72%.

Os valores obtidos neste trabalho demonstram grande diversidade intraespecífica nos isolados
hospitalares de P. aeruginosa estudados, tanto na análise de perfis de resistência
(resistotipagem) quanto para a análise de características moleculares, baseadas na análise de
perfis de bandas obtidos por PCR fingerprinting .

A diferença verificada na tipificação dos isolados de P. aeruginosa comprovou o maior poder

discriminante atribuído aos métodos moleculares de PCR fingerprinting em relação aos
métodos fenotípicos baseados na resistotipagem.

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 7. Recomendações
Dada a importância clínica e epidemiológica aliada aos sérios problemas de saúde pública
que representam o surgimento de estirpes de P. aeruginosa multirresistentes em ambientes
hospitalares, recomenda-se o seguinte:

Criar Comissões de Controle de Infecções Hospitalares em todas as unidades sanitárias

incluindo entre os seus membros pelo menos um profissional do laboratório clínico
responsável pelos exames microbiológicos, incluindo o diagnóstico etiológico, detecção de
mecanismos de resistência a antimicrobianos, orientação terapêutica e diversas ações de
vigilância epidemiológica.

Elaborar a nível das unidades sanitárias, protocolos de terapêutica padronizados para

indicação de antibióticos, e se possível, sempre baseados em resultados de antibiogramas
com vista a controlar o uso abusivo e indevido dos antimicrobianos.

Implementar projectos de pesquisa a nível das instituições de ensino e investigação em

colaboração com as instituições de saúde, e outras afins que incluam os estudantes com
vista a estimular a investigação e subsidiar com os conhecimentos produzidos estratégias
para o desenvolvimento técnico-científico de Angola.

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MUITO OBRIGADO A TODOS PELA ATENÇÃO