Contagem de Staphylococcus

aureus
- Técnica por contagem direta em
placas
- Metodologia = ISO 6889
 Amostra
• Alimentos, rações de animais e outros:

• Carnes, verduras, pratos prontos, pratos

simples ou elaborados, crustáceos, moluscos
bivalves, sucos e produtos a base de lactose.
 Amostra
• Cuidados
• Manter sob refrigeração de 3 a 6°C ou congelada a
-15°C se a análise não proceder em até 36h
• Descongelar em temperatura de ≤ 4,4°C por não mais
de 18h.
• Ou... Em temperaturas mais altas ( mas não superior a
40°C) por não mais de 15min, agitando
frequentemente a amostra para facilitar o
descongelamento.
• Ou de 18 a 27°C por não mais de 3 h
 Preparo da amostra
• Depois de descongelada, homogeneizar toda
a amostra e retirar a unidade analítica do
macerado.
• Se a quantidade de amostra encaminhada
para a análise for menor que o requerido para
a análise, recomenda-se submeter metade à
análise, reservando a outra metade como
contra amostra.
 Preparo da amostra
• Retire a quantidade analítica de 25g,
• Pesar em balança calibrada
• A pesagem e a análise devem proceder em
ambiente estéril cabine de segurança
biológica ou próximo a chama.
• Sadas
 Identificação/ homogeneização
• Coloque o N° • Retire a porção analítica de
da amostra 25g com pinças pipetas ou
no Bag, a espátulas estéreis
lápis 6B

• Adicione
parte do
diluente
Anate o n° da amostra no
frasco do diluente
 homogeneização
• Homogenize em stomacher

• Retire a
amostra e
acrescente
o restante
do diluente
Homogeneizar
novamente
(com as mãos)
 Diluição
• O diluente usado nesta metodologia é a água
peptonada a 0,1% ou tampão fosfato pH 7,2

1ml 1ml

10-1 10-2 10-3

 Plaqueamento
• Selecionar 3 diluições adequadas da amostra
• Inocular 0,1mL em placas contendo Agar Baird
Parquer previamente plaqueado, espalhar o
inoculo com alças de Drigalski, das placas de
maior para as placas de menor diluição.
• Até que todo o excesso de liquido seja absorvido.

• -> este procedimento é chamado de

plaqueamento em superficie
0,1
Meramente
ilustrativo
 Incubação
• Incubar as placas invertidas a 35-37°C por 45 a
48h
 Contagem
• Selecionar placas entre 20-200 colônias e contar
apenas as típicas

• -> negras ou cinza escuro de 2 a 3mm rodeadas por

um halo opaco ou transparente
• Selecionar 5 colonias tipicas para o teste da coagulase
• Contar as colônias típicas
• Repicar para TSA ou nutriente (para manutenção)
• E uma alçada para BHI para teste da coagulase
 Coagulase
• 0,2ul da cultura e 0,3 ul se soro
• Verificar a formação do coagulo
• Se