Aula 6 e 7 Juntas - Controle de Crescimento Microbiano e Antibioticos

Controle do Crescimento Microbiano
Microbiologia
Aula T6 – Controle do Crescimento Microbiano
Profa. Dra. Aline Teixeira Amorim
2021
Antissepsia
Uso de ATM em tecidos vivos com o objetivo de
reduzir a população microbiana no sítio anatômico
Assepsia
Medidas adotadas em processos clínico-laboratoriais
com o objetivo de reduzir o risco de contaminação ou
infecção
Ignaz Semmelweis
Desinfetantes de uso
Desinfetante doméstico
ATM utilizado em objetos inanimados capaz de

eliminar microrganismos patogênicos. Mas não todos!
Antisséptico Enxaguante bucal
ATM, suficientemente atóxicos, para serem aplicados em

tecidos vivos
Sanitizante Sanitização de utensílios

de cozinha industrial
Tipo particular de desinfetante que reduz o número de

contaminantes bacterianos em níveis relativamente
seguros.
Esterilização
Remoção/Destruição de TODAS as formas de vida
microbiana
Aquecimento Agentes químicos Filtração
Método mais Líquidos ou

Poucos agentes
comum gases
Ácido peracético?
Glutaraldeído?
Desinfecção
Remoção/Destruição microrganismos patogênicos
MOs na forma vegetativa
Água fervente
Substâncias químicas Radiação UV
(Vapor)
Controle Microbiano
Métodos Físicos
Métodos Químicos
Mecanismos de ação
Alteração da permeabilidade da membrana
Danos aos lipídeos ou proteínas
Extravasamento do conteúdo celular no meio

circundante e interferência no crescimento da célula
Danos a proteínas e enzimas Produtos
Calor
Desnaturação de Químicos
proteínas
Rompimento de Pontes Formação de
de Hidrogênio Pontes dissulfeto
Danos a ácidos nucléicos
Calor Produtos Radiação

Químicos
Impede bactéria de crescer
Impede bactéria de realizar funções metabólicas

Controle Antimicrobiano
Métodos Físicos
FÍSICOS
PRESSÃO
OSMÓTICA DESSECAÇÃO
RADIAÇÃO
RADIAÇÃO CALOR
CALOR
BAIXAS
TEMPERATURAS
ALTA PRESSÃO FILTRAÇÃO
Métodos Físicos: Calor

• Mata MO pela desnaturação de suas enzimas
• Resistência ao calor varia entre diferentes MO
• Dois tipos:
• Esterilização por Calor Úmido
• Esterilização por Calor Seco
Proteína ativa (Funcional) Proteína Desnaturada

MO = Microrganismo
Métodos Físicos: Calor úmido
• Mata os MO pela coagulação proteica (desnaturação)

• Fervura
• Esterilização com Autoclave
Ruptura de ligações de hidrogênio que mantém as proteínas em sua estrutura tridimensional


Fervura
• Mata Bactérias (vegetativa), vírus, fungos ~ 10 min
• Vírus da Hepatite: > 30 min Nem sempre é um

procedimento confiável de
• Endosporos: > 20 h esterilização

Autoclave
• > Pressão → > Temperatura
• 121 ºC, > 1 ATM, ≥ 15 minutos
• Mais eficaz:
• Vapor em contato direto com MO
• MO contidos em solução aquosa
• Meios de cultura, Instrumentais metálicos, Vestimentas, Equipamentos de Transfusão...
• Mata TODOS os MO – Inclusive endosporos

Esterilização de sólidos requer que o vapor realmente entre em contato

Deve-se ter o cuidado de assegurar que o vapor entre em contato com TODAS as superfícies
Métodos Físicos: Calor seco
• Mata por efeitos de oxidação

• Chama direta
Incineração
• Incineração
• Esterilização em Ar Quente
Flambagem
Estufa de esterilização
Métodos Físicos: Calor seco
Estufa de esterilização
Pasteurização
• Louis Pasteur (1864)
• Método de prevenção da perda de qualidade dos Louis Pasteur
vinhos, destruindo, pelo CALOR, bactérias capazes
de deteriorar esta bebida.
• Aquecimento  Resfriamento
• Leite (~75°C, 15 s, Resfriado)
• HTST – High-temperature short-time
• Reduz o número de MO
• NÃO assegura esterilização!!
Louis Pasteur e produtores de vinhos

Tratamento de temperatura elevada

• Leite esterilizado
• Armazenado sem refrigeração por vários meses
• Aquecido por vapor 140°C (4s)
• Resfriado – 5º C
• Embalado hermeticamente em embalagem pré-

esterilizada
Filtração
Passagem de líquido ou gás através de material
semelhante a um tela, com poros pequenos o suficiente
para reter microrganismos
HEPA – High-efficiency particulate air
Remove MO > 0,3 µm
Salas de cirurgia
Filtração
0,45 µm , 0,22 µm, 0,01 µm
Filtração com auxílio de bomba de vácuo

Baixas temperaturas
• Depende do MO e intensidade da aplicação
• T °C de Refrigerador (0° a 7° C)
• Taxa metabólica maioria das bactérias reduz
• Refrigeração → Efeito Bacteriostático.
• Exceção: Psicrotróficas
• T °C abaixo do congelamento
• MO dormentes, mas não os mata!
• Congelamento rápido→ cristais de gelo que se formam
rompem a estrutura celular e molecular bacteriana
Dessecação
• Ausência de água
• MO não reproduzem
• Podem permanecer viáveis por anos
• Com presença de água podem retomar seu crescimento
• LIOFILIZAÇÃO
• Processo utilizado em laboratórios para preservação de MO
Pressão osmótica
Uso de altas concentrações de sais e açúcares para
conservar o alimento (Ambiente hipertônico)
Fungos e bolores são muito mais capazes que as

bactérias de crescer em materiais com baixa
umidade ou altas pressões osmóticas.
Radiação
• Efeitos depende: comprimento de onda, intensidade e duração
• Dois tipos que matam MO:
• Ionizante (Penetrante)
• Não-ionizante
Usada na esterilização de
produtos farmacêuticos e
Radiação ionizante materiais
dentários e médicos
descartáveis
(seringas, luvas, cateteres)

• Raios γ (gama), Raios X ou Feixes de Elétrons de alta
energia Usada contra o bioterrorismo
pelos correios americanos!
• Comprimento de onda mais curto: < 1 nm
Ionização da água
Formação de Radicais hidroxila altamente reativos
Reagem com os componentes orgânicos celulares

Radiação não-ionizante
• Luz UV
• Comprimento de onda maior: > 1 nm
• Causa DANOS ao DNA das células
• Dímeros de pirimidina: normalmente timinas
• Inibem a replicação correta do DNA durante a
reprodução
Desvantagem:
Radiação não é muito penetrante, pode lesionar olhos e
exposição prolongada causa queimadura e câncer de pele!
Controle Microbiano
Métodos Químicos
QUÍMICOS
AGENTES
QUÍMICOS
DESINFETANTES ESTERILIZANTES
Níveis de desinfecção
Alto nível Médio nível Baixo nível
Capaz de destruir Elimina bactérias Elimina maioria das
todos MO com vegetativas, a bactérias, alguns
exceção a alto maioria dos vírus, vírus e fungos,
número de esporos fungos e mas não elimina
micobactérias micobactérias
Ex.: Glutaraldeído Ex.: Hipoclorito de Ex.: Hipoclorito de

2% (20 – 30 min.) sódio 1% (30 min.) sódio 0,025%
Características Ideais:
Desinfetantes e Antissépticos
• Possuir alta eficácia germicida DESINFETANTES
• Efeito rápido
• Capacidade de penetração nas
• Amplo Espectro Antimicrobiano
camadas de matéria orgânica sem
perder sua ação germicida
• Apresentar estabilidade química
• Ser solúvel em água e nos líquidos orgânicos • Ausência de ação corrosiva
• Ser inodoro ou ter odor agradável ANTISSÉPTICOS

• Não ser irritante
• Ser incolor • Não interferir no processo de
cicatrização
• Não produzir manchas • Não ser absorvido pela pele
Agentes químicos: Principais grupos

• Álcoois • Agentes de Superfície
• Aldeídos e Derivados • Biguanidas
• Fenóis e Derivados • Metais Pesados e Derivados
• Halogênios e Derivados • Agentes Oxidantes
• Ácidos Inorgânicos
• Ácidos Orgânicos
Na ausência de água, as proteínas não

Álcoois são desnaturadas tão rapidamente
quanto na sua presença.
Isso explica porque álcool etílico absoluto
• Baratos é menos ativo do que as misturas de
álcool e água.
• Bactericidas diante de formas vegetativas
• Mecanismo de Ação
• DESNATURAÇÃO DE PROTEÍNAS
• SOLUBILIZAÇÃO DE LIPÍDEOS
• Álcool Etílico: antisséptico mais empregado
• Álcool 70% - 5 min – inativa todas as formas vegetativas

Halogênios e derivados
• Iodo
• Sobre a forma de tintura: Solução em álcool aquoso
• Um dos antissépticos mais utilizados na prática cirúrgica
• Bactericida, fungicida e esporicida
• Solução alcóolica a 2% - ação imediata
• Mecanismo de ação:
• Inibe função de proteínas
• Forte agente oxidante

Biguanidas
• Clorexidina
• Excelentes resultados na antissepsia de pele
• Lavagem de mãos de cirurgiões, preparação de pacientes antes da cirurgia
• Urologia obstetrícia e ginecologia, queimados e na prevenção e tratamento de doenças orais
• 0,5% - bacteriostático/ > a 4% - bactericida
• Mecanismo de ação
• Adsorve-se a parte externa dos MO ligando-se aos grupos fosfatos da parede. Provoca
danos à membrana - ocorre liberação de conteúdo citoplasmático
Ordem decrescente de resistência a germicidas

químicos
Alto nível (aldeídos)
Nível intermediário
(álcool, hipoclorito de sódio a 1%,cloro orgânico, fenol
sintético, monopersulfato
de potássio e associações)
Baixo nível
(quaternário de amônio e hipoclorito
de sódio 0,2%)
Microbiologia
Aula T7 – Antibióticos e Resistência
Profa. Dra. Aline Teixeira Amorim
2021
Antibiótico: descoberta por acaso
Penicilina - 1928 Purificação - 1940
Penicillium notatum Uso larga escala na

Tortora, Funke, Case. Microbiologia. 10ª Ed. Cap. 1 guerra
Classificação
Quanto aos seus efeitos
Bactericida Bacteriostático
Mata os MO diretamente Impede o crescimento

de MO
Tortora, Funke, Case. Microbiologia. 10ª Ed. Cap. 20

Classificação
Fonte: https://goo.gl/IpTqkh
Classificação
Bactericida Bacteriostáticos
Cloranfenicol Aminoglicosídeos
Eritromicina Beta-lactâmicos
Clindamicina Vancomicina
Sulfonamidas Quinolonas
Trimetoprim Rifampicina
Tetraciclinas Metronidazol
Classificação
Quanto espectro de ação
Estreito Estendido Amplo

Agem sobre número Agem sobre ampla faixa de
limitado de MO em doses Ação intermediária
MO em doses terapêuticas
terapêuticas
Eficazes contra MO G+ ou Eficazes contra MO G+ e Eficazes contra MO G+ ou

G-, mas NÃO contra significativo número de G-, além de outros
ambos espécies G-
Ex.: Isoniazida Ex.: Ampicilina Ex.: Tetraciclina

Síntese da parede celular
Inibição da síntese de proteínas
Inibição da síntese de ácidos

Nucléicos
Dano à membrana plasmática
Síntese de metabólitos
essenciais
•Inibição da síntese da parede celular

Inibidores da síntese da parede celular
Anel
Anel Betalactâmico
Betalactâmico
C C
Alvo: transpeptidases (Protein Binding Penicilin -
PBPs)
Inibem a síntese da parede
C N Ligam às PBPs  inibem montagem das cadeias de
peptideoglicano
O
Glicopeptídeos
Streptomyces orientalis
Interrupção da síntese da cadeia de peptídeoglicano
Vancomicina
Interação com terminações D-Alanina D-Alanina
X
Glicopeptídeos
Sensível
Inibidores que agem na membrana plasmática

Inibidores – Membrana Plasmática

• Grupos lipossolúveis e hidrossolúveis dos antibióticos
• Na membrana, induzem mudanças na permeabilidade
• Podem causar ou morte ou inibição do crescimento

Inibidores Síntese da Membrana Plasmatica

Lipopeptídeos Polipeptídeos
 Daptomicina  Polimixina
 Bacitracina
 Etionamida
 Etambutol
 Cicloserina
LIPOPEPTÍDEOS
(Daptomicina)
• Polipetídeo cíclico
• Produzido por Streptomyces roseosporus
• Liga-se irreversivelmente à membrana

citoplasmática
• Despolariza e membrana
POLIPEPTÍDEOS
(Polimixina)
• Insere-se nas membranas como detergentes
• Interage com polissacarídeos e fosfolipídios na

memb. ext.
• Aumentam a permeabilidade celular

Fonte: http://miud.in/1Hde
• Eventualmente, provoca morte.
Inibidores da síntese protéica

Inibidores da síntese protéica

Inibidores da Síntese Proteica

Tetraciclinas
Glicilciclinas
• Ligação reversível à unidade 30S do

ribossomo
• Impede ligação aminoacil-RNA entre
RNAt e 30S-RNAm
Aminoglicosídeos
• Exige coadministração de inibidor de parede para penetrar
• Ligam-se à subunidade 30S do ribossomo
• Produção de proteínas defeituosas
Cloranfenicol
Transferase
• Lig. reversível a peptidiltransferase da
subunidade 50S
• Impede alongamento da cadeia X
polipeptídica

Macrolídeos
(Eritromicina)
• Ligação reversível à região 23S (50S) do RNAr
• Bloqueia extensão do polipeptídeo

OXAZOLIDINONAS
(Linezolida)
• Liga-se à subunidade 50S
• Distorce sítio de ligação do RNAt  inibe a formação do complexo
70S
Fonte: http://miud.in/1Hdh (Animação)

Inibidores da síntese de ácidos nucléicos

Inibição síntese Ácido Nucleico
Quinolonas
• Inibem topoisomerase II (Girase) ou Topoisomerase IV

• G - : subunidade A da DNA girase
• G +: Topoisomerase IV
Inibição da síntese de metabólitos essenciais

Inibição Síntese Metabólitos
Trimetoprim Sulfonamidas
• Interfere no metabolismo do ácido • Interfere no metabolismo do ácido

fólico, precursor para formação do fólico, precursor para formação do
DNA/RNA DNA/RNA
• Análogo do ácido di-hidrofólico, • Análogo do ácido-p-
competição aminobenzoico (PABA),
• Se liga à diidrofolato-redutase competição
• Se liga à diidropteroato-sintetase
• Eficientes contra MO G+, G-
• Indicada para infeção aguda do
Principais classes de antibióticos

Resistência Bacteriana
Resistência: preocupação mundial
Entre 2000 e 2010 – Consumo de ATBs – 76% em BRICS
Era Pós Antibiótico – Superbactérias + doenças infecciosas
2050 – 4,7 milhões na Ásia, 4,1 milhões na África e 392 mil na América Latina
16 a 12 de novembro: Semana Mundial de Conscientização da Resistência Microbiana
Fonte: https://www.bio.fiocruz.br
Tipos de resistência
Intrínseca Adquirida Cruzada Múltipla
Resistência Genética, Bactéria

natural Subpopulações Grupo de drogas resistente a
Transferência quimicamente múltiplos
Sem alvo de relacionadas
ação do ATB vertical compostos
Resistência de Mutacional Bombas de efluxo: Uso intenso de ATM

Micoplasmas às contra todas as
penicilinas Transmissível de amplo espectro
tetraciclinas
*ATM = Antimicrobianos
Resistência Bacteriana
Mecanismos
Inativação Enzimática
Inativação enzimática 𝜷− 𝒍𝒂𝒄𝒕𝒂𝒎𝒂𝒔𝒆

• Afetam antibióticos que são produtos naturais

Anelβ−lact âmico
• Penicilinas, Cefalosporinas, Carbapenêmicos
• ~200 variações de β-lactamases
• Ex.: MRSA*, Streptococcus pneumoniae

•
*MRSA = Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus

Inativação enzimática
O
S CH
CH33
R
R11 C
C NH
NH CH
CH CH
CH C CH
CH33
O
O C
C N
N CHCOOH
Betalactamases ou Penicilinase
Inativação da maioria das penicilinas
Especialmente por estafilococos
MRSA – Resistência e Importância
• Causa mais frequente de infecção: pele e tecidos moles
• Amoxicilina + Ácido Clavulônico - inibidor de β-lactamase
• HA-MRSA e CA-MRSA
*MRSA = Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus

Bloqueio da entrada
(Impermeabilidade)
Bloqueio entrada: Impermeabilidade

• Gram-negativas são mais resistentes
• Porinas
• Modificação da abertura das porinas
Menor
captação do
antibiótico
Alteração do Sítio-alvo
• Modificação no sítio dos ribossomos
• Redução da afinidade do receptor bacteriano ao antibiótico
• Modificação do aa no sítio alvo da bactéria

 MRSA→PBP2a (penicillin-binding protein 2a)
Alteração do Sítio-Alvo
Produção de PBPs modificadas

Alteração do Sítio-Alvo
Fonte: FEMS Microbiolol Ver 32 (2008) 234-258
Mutação
PBP2a: S. aureus
Produção de PBPs modificadas
Resistência
(Vancomicina)
Resistência
(Vancomicina)
Sensível
Resistente
Bombas de Efluxo
Bombas de Efluxo
• Proteínas bacterianas (G neg.) agem como

bombas que expelem os antibióticos
• Resistência a praticamente todas as principais

classes de antibióticos
• Bactérias normalmente apresentam muitas

dessas bombas
Mutações
Únicas Múltiplas
Modificações genéticas
Conjugação
Transdução
Transformação
• Transformação
• Conjugação
• Transdução
• Mutação
Mecanismos de Resistência - Resumo

Impermeabilidade Bombas de Efluxo
Mutação
e Aquisição de
Inativação Enzimática
genes “R”
Fonte: Nature Reviews Microbiology 8, 251-259, 2010

Resistência: estratégias para prevenção
Microrganismo
Microrganismosusceptível
resistente
Patógeno
Prevenir a Prevenir
transmissão Infecção
Resistência Infecção
microbiana
Diagnóstico
Saber Tratamento
utilizar efetivos
ATB
Uso de
antimicrobianos
Testes para orientar a

quimioterapia
Resistência: Métodos e Tipos

• Perfil de sensibilidade: Guidelines CLSI, EUCAST, BrCAST
• “S”: Sensível
• “I”: Intermediário
• “R”: Resistente
• Métodos de testes:
• Disco-difusão
• Macro e Microdiluição em caldo
• E-Test
• Diluição em ágar
• Métodos automatizados de turbidimetria, colorimetria e fotometria
Método Kirby-Bauer/Teste de Disco-difusão: Difusão em

ágar
 Sensível
 Intermediário
 Resistente
Teste de Diluição em Meio Líquido
Bactericida ou Bacteriostática? CIM e CBM (Concentração Bactericida Mínima)

Resistência: Métodos de determinação
Macrodiluição em caldo Microdiluição em caldo Diluição em ágar
Antibiograma automatizado Disco-Difusão (Kirby-Bauer) Fita E-Test

Bibliografia
Bibliografia
Obrigada!!

Aula 6 e 7 Juntas - Controle de Crescimento Microbiano e Antibioticos

Enviado por

Dados do documento

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Aula 6 e 7 Juntas - Controle de Crescimento Microbiano e Antibioticos

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

Controle do Crescimento Microbiano

Profa. Dra. Aline Teixeira Amorim

ATM utilizado em objetos inanimados capaz de

Antisséptico Enxaguante bucal

ATM, suficientemente atóxicos, para serem aplicados em

Sanitizante Sanitização de utensílios

Tipo particular de desinfetante que reduz o número de

Aquecimento Agentes químicos Filtração

Método mais Líquidos ou

Danos aos lipídeos ou proteínas

Extravasamento do conteúdo celular no meio

Calor Produtos Radiação

Impede bactéria de crescer

Impede bactéria de realizar funções metabólicas

Métodos Físicos: Calor

• Resistência ao calor varia entre diferentes MO

Proteína ativa (Funcional) Proteína Desnaturada

Métodos Físicos: Calor úmido

• Mata os MO pela coagulação proteica (desnaturação)

• Esterilização com Autoclave

Ruptura de ligações de hidrogênio que mantém as proteínas em sua estrutura tridimensional

Métodos Físicos: Calor úmido

• Vírus da Hepatite: > 30 min Nem sempre é um

Métodos Físicos: Calor úmido

• 121 ºC, > 1 ATM, ≥ 15 minutos

• Vapor em contato direto com MO

• MO contidos em solução aquosa

• Meios de cultura, Instrumentais metálicos, Vestimentas, Equipamentos de Transfusão...

• Mata TODOS os MO – Inclusive endosporos

Métodos Físicos: Calor úmido

Esterilização de sólidos requer que o vapor realmente entre em contato

Métodos Físicos: Calor seco

• Mata por efeitos de oxidação

Métodos Físicos: Calor seco

Louis Pasteur e produtores de vinhos

Tratamento de temperatura elevada

• Armazenado sem refrigeração por vários meses

• Aquecido por vapor 140°C (4s)

• Embalado hermeticamente em embalagem pré-

HEPA – High-efficiency particulate air

Remove MO > 0,3 µm

0,45 µm , 0,22 µm, 0,01 µm

Filtração com auxílio de bomba de vácuo

• Podem permanecer viáveis por anos

• Com presença de água podem retomar seu crescimento

Fungos e bolores são muito mais capazes que as

• Efeitos depende: comprimento de onda, intensidade e duração

• Dois tipos que matam MO:

(seringas, luvas, cateteres)

Formação de Radicais hidroxila altamente reativos

Reagem com os componentes orgânicos celulares

Ex.: Glutaraldeído Ex.: Hipoclorito de Ex.: Hipoclorito de

• Ser inodoro ou ter odor agradável ANTISSÉPTICOS

Agentes químicos: Principais grupos

• Aldeídos e Derivados • Biguanidas

• Fenóis e Derivados • Metais Pesados e Derivados

• Halogênios e Derivados • Agentes Oxidantes

Na ausência de água, as proteínas não

• Bactericidas diante de formas vegetativas

• Álcool Etílico: antisséptico mais empregado

• Álcool 70% - 5 min – inativa todas as formas vegetativas

• Um dos antissépticos mais utilizados na prática cirúrgica

• Bactericida, fungicida e esporicida

• Solução alcóolica a 2% - ação imediata