UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE CENTRO DE CINCIAS EXATAS E DA TERRA QUMICA DO PETRLEO INSTITUTO DE QUMICA MTODOS ESPECTROANALTICOS

PROF. Dr. JAILSON VIEIRA DE MELO

ALUNOS: Carlos Eduardo Bastos

Carlos Humberto Dayvid de Andrade Barbosa Geilson Csar Braga Albano Railson Carlos S. da Luz
NATAL/RN Junho de 2011

Principais Pontos
y LUMINESCNCIA

Fotoluminescncia (fluorescncia): 2. Bioluminescncia 3. Quimiluminescncia

1.

Histrico da Luminescncia
y 1667- Identificao de Bioluminescncia y 1877- Descrio dos compostos luminescentes y 1947- Luciferase do vagalume y 1952- Utilizao da luciferase em um ensaio - resultados

inadequados y 1976- Primeiro ensaio quimiluminescente - Luminol y 1978-1994- Caracterizar steres de acridina que so marcadores em imunoensaios

Luminescncia
Luminescncia: a emisso de luz associada com a dissipao de energia de uma substncia que se encontra em um estado eletricamente excitado

Luminescncia
A luminescncia, um dos espetculos mais fascinantes de dissipao de energia definida como emisso de radiao eletromagntica, por molculas, de comprimentos de onda que vo do ultravioleta ao infravermelho no espectro eletromagntico. Essas radiaes resultam na transio de um estado eletronicamente excitado para um estado de energia mais baixa.

Vantagens da Luminescncia
y Elevada sensibilidade (atomol at zeptomol); y Linearidade da curva dose resposta; y Rapidez no sinal gerado e estvel; y Custo (uso de pequenas quantidades de reagentes); y Procedimento simples.

Bioluminescncia
 Emisses luminosas decorrentes de reaes catalisadas por

enzimas com alto

QL

 Existem vrias razes que explicam por que os organismos

vivos produzem luz dentre elas a comunicao, localizao de alimento,atrao da presa, camuflagem,auto-defesa,etc.
 A reao global de bioluminescncia envolve a oxidao de

luciferinas em presena de luciferases.

Bioluminescncia

Bioluminescncia
Peixes Abissais
Zona aftica (4000m,2C) Iluminao,predao,reproduo, camuflagem

Bactria Marinha
Simbiose com peixes abissais Atrao sexual e predao

Vaga-lumes
Atrao Sexual

Bioluminescncia

Atividade dos plnctons no oceano na costa leste da frica em 2005 um mar luminoso de 15.000km visto do espao.

Bioluminescncia

Bioluminescncia (Aplicaes)
 Diagnostico de doenas.  Produo de bactrias bioluminescentes.  Indicadores ambientais.  Indicadores usados pela NASA.  Controle higinico sanitrio.

Quimiluminescncia
y Fenmeno que se obtm energia luminosa a partir de uma reao

qumica;

Quimiluminescncia
Esta produzida quando uma reao qumica produz uma espcie eletronicamente excitada que emite luz quando retorna ao seu estado fundamental.

Este processo pode ser formulada como:

A + B C* + D C* C + h

Quimiluminescncia
y Nas reaes QL, a energia excedente de uma molcula num estado

eletronicamente excitado singleto ou tripleto, dissipada na forma de radiao eletromagntica, diferentemente do que ocorre na maioria das reaes exotrmicas, onde a dissipao na forma de calor ou excitao rotacional ou vibracional. y O fenmeno da QL ocorre devido a quebra de ligaes ricas em energia, tais como, perxidos, hidroperxidos ou 1,2-dioxetanos, j existente nas molculas ou formadas a partir de rearranjos moleculares (intermedirios). y Esse processo pode ser ativado enzimaticamente ou quimicamente. y O produto excitado ao retornar ao estado fundamental, emite ftons, caracterizando a QL direta ou poder transferir sua energia para uma outra molcula, sendo ento, QL indireta.

Quimiluminescncia
A intensidade radiante, ICL (ftons emitidos por segundo), depende da velocidade (d[C]/dt) e do rendimento quntico da quimiluminescncia, CL (ftons por molcula que reagiu). Sendo o ultimo termo igual ao produto do rendimento quntico da excitao EX (estados excitados por molcula que reagiu) e o rendimento quntico da emisso EM (ftons por estado excitado).

Quimiluminescncia
A instrumentao relativamente simples, consistindo, em alguns casos, apenas de um frasco de reao apropriado e de uma fotomultiplicadora.

Quimiluminescncia

y Na analise quantitativa, o sinal geralmente integrado por um tempo fixo

e comparado com padres tratados de forma idntica. Alternativamente, as alturas de pico so usadas para a quantificao. y Freqentemente, uma relao linear entre sinal e concentrao observada em uma faixa de concentrao de diversas ordens de grandeza.

Quimiluminescncia
Os mtodos quimiluminescentes so geralmente altamente sensveis porque baixos nveis de luz so facilmente monitorados na ausncia de rudos. Alm disso, a atenuao da radiao por um filtro ou um monocromador geralmente no necessria. De fato, em geral os limites de deteco no so determinados pela sensibilidade do transdutor, mas pela pureza do reagente. Limites de deteco tpicos situam-se na faixa de partes por milho (ppm) ou ate mesmo na faixa de partes por bilho (ppb).

Aplicaes da Quimiluminescncia
Anlise de gases:
y Determinao de NO na atmosfera:

NO + O3 NO2* + O2 NO2* NO2 + h ( = 600 a 2.800 nm) Uma resposta linear registrada para concentraes de NO na faixa de 1 ppb a 10.000 ppb. y Monitoramento de O3 atmosfrico: Essa determinao baseada na luminescncia produzida quando o analito reage com o corante Rodamina B adsorvido na superfcie da slica gel ativada. y Determinao de compostos de enxofre atmosfrico (sulfeto de hidrognio, dixido de enxofre e mercaptanas): nesse caso, a amostra queimada em uma chama de hidrognio para forma o dmero de enxofre, o qual se decompem com emisso de luz. 4H2 + 2SO2 S2* + 4 H2O S2* S2 + h (azul, mximos em 384 e 394 nm)

Aplicaes da Quimiluminescncia
Anlise das Espcies Orgnicas:
y Pode-se determinar glicose, colesterol, colina, cido rico, aminocidos,

aldedos e lactato. Por exemplo:

Anlise para Espcies Inorgnicas na Fase Lquida:

y Muitas analises feitas em fase lquida usam substncias quimiluminescentes

contendo o grupo funcional:

y Esses reagentes reagem com o oxignio, perxido de hidrognio e muitos

outros agentes oxidantes fortes para formar um produto de oxidao quimiluminescente.

Aplicaes da Quimiluminescncia
y O Luminol o exemplo mais comum desses compostos. Sua reao com

oxidantes fortes, como oxignio, perxido de hidrognio, on hipoclorito e on permanganato, em presena de base forte, ocorre como mostrado abaixo:
+ 2 OH- + O2

N2 + 2 H2O +

+h

Com frequncia, essa reao necessita de um catalisador para que seja obtida uma velocidade adequada. Dentro de certos limites, a intensidade de quimiluminescncia do luminol diretamente proporcional concentrao do oxidante, do catalisador ou do luminol.

Aplicaes da Quimiluminescncia

y Usando perxido de hidrognio como oxidante, o catalisador Co2+

pode ser estimado em concentraes menores do que 0,01 nmol/L; y O Cr3+, abaixo de 0,5 nmol/L; y O Cu2+, abaixo de 1 nmol/L.

Luminol
O luminol o substrato de uma das mais clssicas reaes QL. Essa molcula pode ser oxidada por H2O2 na presena de um catalisador, em geral peroxidase, formando um perxido altamente reativo, decompondo-se via um dinion, on ftalato, eletronicamente excitado.

Vamos Pratica...

Imunofluorescncia
y Baseada

na reao antgeno-anticorpo, permite a imonolocalizao de um determinado tipo (especfico) de protenas.

y S possvel graas a alta especificidade das imunoglobulinas.

Tipos de imunofluorescncia

Imunofluorescncia Direta

Imunofluorescncia Indireta

http://www2.ucg.br/cbb/professores/49/Biomedicina/7_period o/Quimioluminescencia.pdf

ster de Acridina
Marcadores em imunoensaios

ster de Acridina
y Anis em equilbrio com base neutra; y Aumento do pH seguido de equilbrio emite fton de luz; y y y y y

Vantagens: No requer um catalisador; Muito estvel, grande vida mdia; Tempo de reao rpido - fcil de medir o relmpago - flash; A conjugao no limita o rendimento; Alta sensibilidade

Mecanismo Imunoensaio quimioluminescente com ster de acridina

+ meio alcalino

N metilacriladona

Emisso de luz

Decomposio

Bibliografia
CRUVINEL,Wilson de Melo. Quimioluminescncia. In: Gois. p. 1 - 20. GASCN, Thais Moura; SCHINDLER, Fernanda; OLIVEIRA, Claudia Giorgia Bronzatti de. Avaliao do mtodo de quimioluminescncia na anlise de homocistena plasmtica e sua comparao com o mtodo de HPLC em amostras de crianas. Einstein, Santo Andr - Sp, n. , p.187-191, 2010. QUIMIOLUMINESCENCIA E BIOLUMINESCENCIA. Salvador - Ba: Quimica Nova, 1993. UOL (Org.). Como funcionam os bastes luminosos: O ativador. Disponvel em: <http://ciencia.hsw.uol.com.br/bastoes-luminosos3.htm>.Acesso em: 24 jun. 2011. http://www2.ucg.br/cbb/professores/49/Biomedicina/7_periodo/Quimioluminescencia.p df http://www.fcf.usp.br/Ensino/Graduacao/Disciplinas/LinkAula/Aula%20%20Outros%20i munoensaios%202005%20%5BSomente%20leitura%5D.pdf