NBR 14029

ANLISE CRTICA DA NORMA NBR 14029 Validao de Metodologia Analtica para anlise de teor de ingrediente ativo em produtos tcnicos e formulaes de agrotxicos. 08/08/2003 ABNT ABIQUIM - Comisso de Defensivos Agrcolas
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Eurachem Guide 2002 Mtodo de medio: Uma seqncia lgica de operaes, descrita, usada na realizao de medidas. [A14.2 VIM 1993]

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MATERIAL DE REFERNCIA Material ou substncia que tem um ou mais valores de propriedades que so suficientemente homogneos e bem estabelecidos para ser usado na calibrao de um aparelho, na avaliao de um mtodo de medio ou atribuio de valores a materiais.
NBR ISO GUIA 30: 2000 2.1

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MATERIAL DE REFERNCIA CERTIFICADO

Material de referncia, acompanhado por um certificado, com um ou mais valores de propriedade, certificado por um procedimento que estabelece sua rastreabilidade obteno exata da unidade na qual os valores da propriedade so expressos, com cada valor certificado acompanhado por uma incerteza para um nvel de confiana estabelecido.
ABNT ISO GUIA 30:2000 2.2

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GUIDE TO QUALITY IN ANALYTICAL CHEMISTRY CITAC/Eurachem Guide 2002

Garantia da Qualidade: GQ descreve o procedimento geral e as medidas que um laboratrio usa para assegurar a qualidade de suas operaes. E podem incluir tipicamente:
Um sistema de qualidade As condies ambientais favorveis Pessoal habilitado e treinado Procedimentos de treinamento e registros Equipamentos adequadamente mantidos e calibrados
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GUIDE TO QUALITY IN ANALYTICAL CHEMISTRY CITAC/Eurachem Guide 2002 Procedimentos de controle de qualidade Mtodos documentados e validados Incerteza e rastreabilidade das medies Procedimentos de verificao e de relatrios Aes corretivas e preventivas Testes de proficincia Auditorias internas e reviso de procedimentos Procedimento de reclamaes Requisitos para reagentes, calibraes, padres & materiais de referncia
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Eurachem Guide 2002

CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE: Estabelecer e seguir procedimentos para a monitorao contnua das operaes e dos resultados das medidas decidindo se estes resultados so confiveis o bastante para ser divulgados. [IUPAC Orange Book A17.3 ]

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GUIDE TO QUALITY IN ANALYTICAL CHEMISTRY CITAC/Eurachem Guide 2002

Procedimentos de controle de qualidade para assegurar a qualidade dos resultados incluem:

Anlise de material de referncia/medidas com padres Anlise de amostras cegas Uso de amostras de controle de qualidade & cartas de controle Anlise de branco Anlise de amostras com spike Anlise em duplicata Teste de proficincia
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NBR 14029 - OBJETIVO

Esta norma prescreve as condies para validao de metodologia analtica para anlise de teor de ingrediente ativo em produtos tcnicos e formulaes de agrotxicos. Implicaes:
Uso somente para grau de pureza envolvendo tcnicas cromatogrficas. Esta norma no pode ser utilizada para validao de outros mtodos.
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NBR 14029 - REFERNCIAS NORMATIVAS

NBR 13.073 Limpeza de vidraria para uso em agrotxico NBR 13.075 Segurana na manipulao de produtos agrotxicos Faltam as referncias normativas de validao.

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NBR 14029 Def. Branco

Branco - Parte da formulao que no contm o ingrediente ativo objeto do estudo NBR 14029 - 3.1 Branco da amostra: So essencialmente matrizes sem o analito. Eurachem - 6.48.2 Branco de reagentes:
 Todos os reagentes usados durante o processo analtico (incluindo solventes usados para extrao ou dissoluo) que so analisados isoladamente para verificar se eles contribuem no sinal medido.

Eurachem - 6.48.1

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Especificidade/Seletividade
Especificidade: a habilidade de um mtodo mensurar apenas o que pretendido medir (AOAC PVMC). Especificidade a habilidade em acessar inequivocamente o analito na presena de componentes que devem ser esperados estar presentes. (ICH/95) Seletividade: a habilidade de um mtodo para determinar acuradamente e especificamente o analito de interesse na presena de outros componentes em uma matriz de amostra sob as condies estabelecidas do teste. (NATA TN 13)
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Seletividade Eurachem
Confirmao de identidade e seletividade/ especificidade Referncia Rpida

O que fazer Analisar as amostras e os materiais de referncia por candidatos e outros mtodos independentes

Quantas vezes 1

Calcular / determinar Usar os resultados das tcnicas de confirmao para acessar a habilidade do mtodo em confirmar a identidade do analito isolado de outros interferentes Examinar o efeito das interferncias a presena do interferente aumenta ou inibe a deteco ou quantificao do mensurando

Comentrios Decidir quanta evidncia auxiliar razovel requerer para obter suficiente confiabilidade

Analisar as amostras contendo vrias interferncias suspeitas na presena dos analitos de interesse

Se a deteco e quantificao inibida pelos interferentes, um desenvolvimento de mtodo posterior ser necessrio.

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Seletividade (interfern cias) Efeitos de matriz

Anlises de amostras spiked, materiais standard e materiais de referncia (MRC)

Pelo menos 7 amostras em cada 3 concentraes em cada tipo de matriz

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NBR 14029 Seletividade

3.7 Definio Condio na qual o mtodo indiferente presena dos demais componentes da formulao constituinte(s) do branco. 5.1 Executar o mtodo para o branco (branco da amostra) e verificar a resposta obtida e a presena eventual de interferentes. Avaliar as interferncias quanto sua significncia e consider-las nos clculos.

Questes: De qual norma nacional ou internacional procede esta definio? Sendo seletividade a capacidade do mtodo mensurar o analito, no estranho medir a seletividade com o branco sem a presena do analito?
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NBR 14029 Seletividade

Resultado da Validao: Seletividade Declarar que no existem interferentes ou fator de correo para o ensaio. (?)

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Amostra e Poro de Teste - IUPAC

Amostra de Teste A amostra preparada em um laboratrio de amostras, do qual pores de teste so removidas para testes ou para anlises. Poro de Teste A quantidade ou volume da amostra teste separada para anlise, usualmente conhecida como massa ou volume.

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Replicata e duplicata - IUPAC

Replicata Amostras mltiplas separadas em condies de comparao. Esta seleo pode ser conseguida separando unidades prximas no tempo e no espao. Contudo as amostras replicadas que deveriam ser idnticas, as vezes atuam como se a nica coisa replicada fosse o ato da diviso fsica.

Duplicata Uma amostra duplicata uma amostra replicada que consiste em duas pores. Uma terceira amostra usada para resolver uma possvel disputa; a amostra replicada usada para estimar a variabilidade da amostra.
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Repetitividade ISO 3534-1

a preciso sob condies de repetitividade, isto , condies onde resultados de testes independentes so obtidos com o mesmo mtodo sobre os mesmos itens testados no mesmo laboratrio pelo mesmo operador usando o mesmo equipamento dentro de curtos intervalos de tempo.

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Preciso de Repetitividade e Reprodutibilidade EURACHEM - 2002

Analisar Repetir (independ entes) XXXXX O que calcular dos dados Comentrios

Padres, materiais de referncia ou amostras fortificadas de branco da amostra em vrias concentraes dentro da faixa de trabalho

XXXXXXXXXXXXXXX

XXXXXXXXXXX

a) Mesmo analista, equipamento, laboratrio, curta escala de tempo b) Diferentes analistas, equipamento, mesmo laboratrio, longa escala de tempo c) Diferentes analistas, equipamento, laboratrios, longa escala de tempo

10

Determinar o desvio padro s em cada concentrao

Determine o desvio padro de repetitividade em cada concentrao Determine o desvio padro intra laboratorial em cada concentrao Determine o desvio padro inter laboratorial em cada concentrao

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Determinar o desvio padro s em cada concentrao

10

Determinar o desvio padro s em cada concentrao

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Preciso (repetitivi dade)

Anlise em replicatas de amostras

Pelo menos 7 em cada tipo de matriz de amostra

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NBR 14029 Def 3.5 Repetitividade

Grau de concordncia entre o resultado de medies sucessivas de uma mesma grandeza, efetuadas com a totalidade das seguintes condies:
 Mesmo mtodo  Mesmo analista  Mesmo instrumento de medio  Mesma amostra/ pesagem(?)  Mesmo local  Mesmas condies de utilizao  Repetio em instantes sucessivos

Aplicao: 5.3.1.1 Analisar a mesma pesagem(?) de uma amostra no mnimo cinco vezes(?), usando o mesmo instrumento, pelo mesmo analista, no menor espao de tempo possvel. 5.3.1.2 Com os resultados etc...
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Reprodutibilidade - ISO 3534-1

a preciso sob condies de reprodutibilidade, isto , condies onde os resultados dos testes so obtidos atravs do mesmo mtodo em itens de teste idnticos em diferentes laboratrios com diferentes operadores usando diferentes equipamentos. Uma afirmao vlida a propsito dos requisitos de reprodutibilidade devem especificar as condies alteradas. Reprodutibilidade deve ser expressa quantitativamente em termos da disperso dos resultados.
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Reprodutibili dade

Anlises por diferentes operadores (usualmente por estudos interlaboratoriais)

Anlises replicatas por diferentes operadores em laboratrios diferentes, usando equipamentos diferentes

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NBR 14029 - Reprodutibilidade

Grau de concordncia entre o resultado de medies sucessivas, com o mesmo mtodo e de uma ordem de concentrao, efetuadas por:
 Analistas diferentes  Anlise em instrumentos diferentes ou  Amostras preparadas/ pesadas independentemente ou  Momentos diferentes intervalos mnimos de 12 horas(?).

5.3.2.1 Analisar no mnimo 5 pesagens(?) da mesma amostra de acordo com 3.6 5.3.2.2 Com os resultados obtidos calcular etc... Analistas diferentes ou iguais? Como? Faltam detalhar...
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Preciso Intermediria - Eurachem

A15.2 Preciso Intermediria: Preciso intermediria expressa a variao do prprio laboratrio: em diferentes dias, diferentes analistas, diferentes equipamentos, etc. [ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95]
Incluir esta definio e sua aplicao.
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Recuperao - (AOAC PVMC)

a frao de analito adicionada amostra de teste (fortificada ou spike ) necessria a anlise. A porcentagem de recuperao (%R) calculada como segue: %R = [ (CF CU) / CA] x 100 Onde: CF a concentrao do analito medida na amostra fortificada, CU a concentrao do analito medida na amostra no fortificada, CA a concentrao do analito adicionada na amostra fortificada.

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Recupe rao

Anlise de amostras spiked em concentraes apropriadas Anlise de materiais de referncia certificados (MRC)

Pelo menos 7 em cada uma das 3 concentraes em cada matriz de amostra Pelo menos 7 para cada material de referncia

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NBR 14029 Def - Fator de recuperao

3.2. Fator de recuperao Fator calculado experimentalmente que corrige o erro ou a perda da molcula em anlise, aproximando o resultado analtico do resultado real.
5.4.1 Caso a anlise da amostra seja de forma direta, diluio e atendendo aos parmetros de miscibilidade (totalmente solvel), considera-se o fator de recuperao como 100%. 5.4.2 Em processos intermedirios como por exemplo, moagem seguida de extrao, extrao seguida de concentrao, nos quais pode haver perda do princpio ativo, deve ser calculado: etc..
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CORRIGE OS PROBLEMAS DE PROCESSO OU PROCESSAMENTO DA AMOSTRA Falta definir a recuperao!

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Faixa de linearidade

Anlises de amostras spiked e padres

Pelo menos 7 em cada 5 concentraes na faixa de trabalho Pelo menos 7 replicatas para cada MRC

Acurcia desvio ou erros sistemticos

Materiais de referncia (MRC se disponvel)

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NBR 14029 Def - LINEARIDADE

5.2.1 Preparar alquotas do padro analtico ou produto tcnico (considerando sua pureza), de concentraes conhecidas com massa ou volume variando em uma faixa em torno de 50% acima e abaixo do valor indicado no mtodo com no mnimo 5 pontos.

5.2.2 Analisar cada uma destas alquotas e registrar o valor de cada resposta, utilizando o mtodo a ser validado.

No define quantas alquotas! Falta definir acurcia.

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NBR 14029 Def - LINEARIDADE

5.2.3 Tabular os dados e plotar o grfico de resultado de resposta (rea, absorbncia, volume e massa) x massa. 5.2.4 Realizar a regresso linear dos resultados obtidos e calcular o coeficiente de correlao, devendo ser este igual ou maior que 0,99.

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REFERNCIAS
ISO 5725-1
Accuracy of measurement methods and results Part 1: General principles and definitions Accuracy of measurement methods and results Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method Accuracy of measurement methods and results Part 3: Intermediate measures of the precision of a standard measurement method Accuracy of measurement methods and results Part 4: Basic methods for the determination of the trueness of a standard measurement method Accuracy of measurement methods and results Part 6: Use in practice of accuracy values
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1994

ISO

ISO 5725-2

1994

ISO

ISO 5725-3

1994

ISO

ISO 5725-4

1994

ISO

ISO 5725-6

1994

ISO
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REFERNCIAS
EURACHEM Guide VIM ABNT ISO Guia 30 DOQ CGCRE 008 FDA NATA 17 The Fitness for Purpose of Analytical Methods A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics Vocabulrio Internacional de Metrologia Termos e definies relacionados com materiais de referncia Orientaes sobre validao de mtodos de ensaios qumicos Validation of Chromatographic Methods Method and Validation o of Test Methods 1998 1993 2000 2003 1994 1997 Internet Internet ABNT INMETRO Internet Internet

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CONCLUSO
Alinhar a definio de branco com as normas de referncia. Adicionar a(s) referncia(s) normativa(s) pertinente(s). Falta definir o campo de aplicao da norma: quais mtodos - cromatogrficos ou via mida - esto no escopo da norma. Seletividade e especificidade Alinhar os conceitos e aplicao com as normas internacionais. Repetitividade e reprodutibilidade - Alinhar os conceitos e aplicao com as normas internacionais.
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CONCLUSO
Acrescentar o conceito de robustez. Robustez: A robustez de um procedimento analtico uma medida de sua capacidade em permanecer inalterada por variaes pequenas, mas deliberadas dos parmetros do mtodo que indicam a confiabilidade durante sua utilizao normal. (ICH /95) Teste de Robustez (Ruggedness Test): Estudo intralaboratorial para se estudar o comportamento de um processo analtico quando pequenas mudanas no ambiente e/ou condies de operao so feitas, de modo a se assemelhar com aquelas que podem aparecer em diferentes ambientes de teste. O teste de robustez permite obter os efeitos de mnimas mudanas de uma maneira rpida e sistemtica. (AOAC PVMC)
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CONCLUSO
Introduzir o conceito e a aplicao de recuperao de acordo com as normas de referncia. Definido na transparncia 27.

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CONCLUSO
Introduzir o conceito e aplicao de Acurcia ou Rigor: a proximidade de concordncia entre um resultado de teste e um valor de referncia aceito (ISO 3534-1) O termo acurcia , quando aplicado para um conjunto de resultados de testes, envolvem uma combinao de erros aleatrios e sistemticos (bias).

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CONCLUSO
Introduzir o conceito e a aplicao do conceito: Exatido: a proximidade de concordncia entre um valor mdio obtido de um largo conjunto de resultados de testes a um valor de referncia aceitvel (ISO 3534-1) A medida de exatido normalmente expressa em termos de erros sistemticos (bias). A referncia a exatido como acurcia da mdia no geralmente recomendada. (ISO 3534-1)
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CONCLUSO
Introduzir o conceito de: Tendncia (bias): a diferena entre os valores esperados dos resultados dos testes e um valor de referncia aceitvel. (ISO 3534-1) O bias (tendncia, desvio, vis, vcio, erro sistemtico total) o valor total dos erros sistemticos em contraste com os valores aleatrios. Deve haver um ou mais componentes que contribuem para o valor do bias. Uma maior diferena sistemtica de um valor de referncia aceito est refletido em um valor de bias maior. (ISO 3534-1)
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CONCLUSO
Alinhando com os conceitos de Faixa ou Linearidade: Faixa (Range, Measuring-Working): Conjunto de valores dos mensurandos para os quais pretendese que os erros de medio de um instrumento estejam dentro de limites especificados (IUPAC Orange Book) Linearidade: Define a habilidade do mtodo em obter os resultados de teste proporcionais a concentrao do analito. (AOAC PVMC)
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CONCLUSO
Definir e justificar caso no seja necessrio utilizar a aplicao dos conceitos. Limite de deteco: O menor contedo que pode ser medido com razovel certeza estatstica (AOAC PVMC) A menor concentrao de analito em uma amostra que pode ser detectada, mas no necessariamente quantificada sob as condies estabelecidas do teste. (NATA Tech Note #13) Limite de Quantificao: o contedo igual ou superior ao menor ponto de concentrao na curva de calibrao (AOAC PVMC)
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