EFEITOS DO DIABETES MELLITUS SOBRE A FORMAO SSEA NO CNDILO MANDIBULAR DE RATOS

GALDINO, M.V.B .; CAPELETTI, L.C .; ARAJO, R.V .; ALMEIDA, M.E.S ; LAMERS, M.L .; SANTOS, M.F .; SANTOS, F.C.A ; MARQUES, M.R .
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Universidade Federal de Gois (UFG) Universidade de So Paulo (USP) Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)

Contato: mrubia.01@hotmail.com PALAVRAS-CHAVE: diabetes, osso, cndilo mandibular.

INTRODUO O Diabetes Mellitus (DM) uma doena crnica no transmissvel caracterizada por um conjunto heterogneo de distrbios metablicos de carboidratos, lipdeos e protenas como resultado da deficincia relativa ou absoluta do hormnio insulina. Segundo o IBGE, no Brasil 9,1% da populao acima dos 35 anos acometida pelo diabetes (IBGE, 2008). O DM tem sido associado a um grande nmero de complicaes envolvendo vrios rgos e tecidos do corpo como olhos, rins, corao, sistema circulatrio, nervoso e sseo (BURNER et al., 2009, FRUSTACI et al., 2000, KOGAWA et al., 2000, MISHRA et al.,2005, RIZK et al., 2005, ROSEMBLOOM et al., 1996, DIB ET AL, 1992). Devido ao efeito significativo da doena sobre os tecidos conjuntivos, o acometimento dos tecidos cartilaginoso e sseo afeta diretamente o desenvolvimento e a atividade normal das articulaes (BURNER e ROSENTHAL, 2009). Os movimentos articulares podem ficar limitados em pacientes diabticos e um
exemplo comum o desenvolvimento da sndrome da mo rgida nestes pacientes (ROSENBLOOM e SILVERSTEIN, 1996).

Neste sentido, alguns autores sugerem uma relao

direta entre DM e doenas articulares como a osteoartrite, que a maior causa de comprometimento das articulaes sinoviais (DeGROOT, VERZJIL e JACOBS, 2001; WAINE, NEVINNY E ROSENTHAL et al., 1961). A articulao temporo-mandibular (ATM) uma articulao sinovial, bilateral localizada entre o cndilo mandibular e a fossa glenide do osso temporal. O cndilo desempenha a dupla funo de articulao e crescimento, sendo considerado o mais importante centro de crescimento da mandbula. revestido por uma camada de tecido conjuntivo fibroso seguido por uma cartilagem que, em jovens, do tipo hialina e sofre

ossificao durante o crescimento do indivduo, originando o centro sseo do cndilo mandibular. O objetivo desse trabalho foi avaliar a formao ssea no cndilo mandibular de ratos durante o crescimento normal e avaliar os efeitos do Diabetes Mellitus sobre a formao ssea a curto e a longo prazo.

MATERIAL E MTODOS Foram utilizados 28 ratos Wistar machos, com 60 dias de idade pesando aproximadamente 150g, divididos em quatro grupos: controle curto prazo (Controle CP), diabtico curto prazo (Diabetes CP), controle longo prazo (Controle LP) e diabtico longo prazo (Diabetes LP). Os animais do grupo diabtico foram submetidos a jejum de 12 hs durante a noite e na manh seguinte induzidos ao diabetes por injeo de Estreptozotocina (60 mg/kg em tampo citrato 0,05M e pH 4.8). O grupo controle recebeu apenas injeo de tampo citrato. Aps 48hs de induo, foram considerados diabticos aqueles com glicemia superior a 300mg/dl. Os animais foram avaliados quanto variao do peso e ingesta de rao para confirmar a continuao da doena bem como a averiguao da glicemia no dia da eutansia. Os animais foram mantidos diabticos por um perodo de 30 dias (Diabetes CP) ou seis meses (Diabetes LP) e eutanasiados com doses letais de quetamina e xilazina. Os procedimentos esto de acordo com as instrues do NIH e foram aprovados pela comisso de tica na experimentao animal da UFG (protocolo 174/2009). Processamento incluso e obteno dos cortes para Microscopia de Luz Os cndilos foram removidos, fixados em soluo de paraformaldeido a 4% por 24 horas e desmineralizados em soluo de EDTA 4,13% em tampo fosfato 0,1 M pH 7,4, a 4C sob agitao constante, durante 30 dias; a soluo foi trocada em dias alternados. Depois da descalcificao, as peas foram lavadas em gua corrente, desidratadas em banhos sucessivos de etanol em concentraes crescentes (50-100%) e diafanizados em xilol. Trs banhos de 1 hora em Paraplast (Sigma Chem. Co., St Louis, USA) precederam a incluso

no mesmo material. Em micrtomo rotatrio foram obtidos cortes seriados de 5m de espessura e posicionados em laminas pr-cobertas com poli-L-lisina (Sigma Chem. Co, St Louis). Para as anlises foram selecionados cortes da poro central dos cndilos. Histoqumica Para a anlise foi utilizada a colorao Picrossrius-Hematoxilina. as lminas foram desparafinizadas em banhos de xilol e reidratados em sequncia decrescente de etanol (100

50%) e gua destilada. Os cortes foram imersos em soluo de Picrossrius durante uma hora, seguido de colorao em hematoxilina por 8 minutos. Em seguida os cortes foram desidratados em sequncia crescente de etanol (95 a 100%), diafanizados em xilol e as lminas foram montadas com Permount . Estereologia As imagens para quantificao da massa ssea dos cndilos foram capturadas em microscpio ptico acoplado cmera Leica DFC 300 Fx, sistema Leica Aplication Suit version 2.8.1. A porcentagem de massa ssea foi mensurada pelo programa Image pro-plus estabelecendo-se a proporo relativa entre a estrutura ssea e os espaos trabeculares de acordo com o sistema de teste de multipontos M130 proposto por Weibel (1963). Para isso, doze campos aleatrios da regio central do cndilo foram obtidos para cada animal, totalizando 84 campos por grupo. Os valores relativos foram determinados pela contagem dos pontos coincidentes com a grade teste dividido pelo nmero total de pontos e expressos em
porcentagem.

Anlise Estatstica Os dados obtidos foram analisados atravs do programa BioEstat 3.0. Para comparao entre os grupos foi utilizada a anlise de varincia (ANOVA, um critrio) e psteste de Tukey. Foram considerados significativos os valores com p < 0,05. Os valores foram expressos como mdiadesvio padro.

RESULTADOS E DISCUSSO Durante o crescimento normal ocorreu aumento significativo na porcentagem da massa ssea condilar (controle CP = 69,310,8 e controle LP = 83,410,4; p<0,01). A curto prazo, a massa ssea no se alterou de forma significativa no grupo diabtico (66,912,1) se comparado ao seu respectivo controle. A longo prazo, o grupo diabtico mostrou uma grande reduo da massa ssea (70,012,6; p<0,01) quando comparado ao grupo controle (Figura 1). Alteraes no metabolismo sseo de indivduos diabticos tm sido demonstradas na literatura. Medindo a densidade ssea de pacientes, KRAKAUER ET AL (1995) demonstraram que a formao e o acmulo sseo so reduzidos durante o desenvolvimento dos diabticos e, ao longo do tempo, a hiperglicemia aumenta a reabsoro ssea, levando, consequentemente, ostepenia. No presente estudo foram obtidos resultados semelhantes quando se observou diminuio da massa ssea longo prazo. Nos grupos diabticos, a massa ssea praticamente no se alterou com o passar do tempo, permanecendo com valores muito semelhantes ao grupo controle de curto prazo.

Prejuzos na ossificao endocondral tambm foram demonstrados por KAYAL ET AL (2007) pela menor formao de calo sseo, aumento na quantidade de osteoclastos e maior apoptose de condrcitos, o que acelera a perda de cartilagem e reduz a formao ssea. b a a a

Curto prazo Longo prazo Figura 1. Porcentagem de massa ssea nos cndilos mandibulares. Os valores so expressos em
porcentagem segundo o teste de multipontos M130 de Weibel (1963). Superdices diferentes (a,b) representam diferenas estatsitcamente significantes entre os grupos. Os valores so expressos como mdiadesvio padro (ANOVA/Tukey, p<0,05). Curto prazo = 30 dias; longo prazo = 6 meses.

A relao entre DM e m formao mandibular tem sido estabelecida tanto no crescimento da mandbula (GIGLIO ET AL, 2001) como na microestrutura do osso formado (ABBASSY ET AL, 2010) onde as dimenses mandibulares e as taxas de formao ssea e de deposio mineral esto diminudas. De forma interessante, essas alteraes foram observadas aps 30 ou 35 dias da induo da DM. Neste estudo, a porcentagem ssea no se alterou aps 30 dias da induo da doena, sugerindo que o cndilo da mandbula responda de forma diferente das outras regies do osso. A menor densidade ssea no cndilo mandibular decorrente da hiperglicemia sugere maior incidncia de disfunes da ATM em indivduos diabticos, como proposto por COLLIN et al. (2000). No entanto maiores estudos so necessrios para comprovar a relao entre DM e disfunes da articulao temporo-mandibular.

CONCLUSO A longo prazo, o Diabetes Mellitus diminui a massa ssea do cndilo mandibular de ratos. Auxlio Financeiro: Fapeg/CNPq chamada 06/2009.

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