Mitocndria

OBJETIVOS
Ao nal desta aula, voc dever ser capaz de: Conhecer as principais caractersticas das membranas e compartimentos mitocondriais. Discutir a origem simbitica de mitocndrias e cloroplastos.

26
Pr-requisitos
Conhecer as caractersticas de uidez e permeabilidade das membranas biolgicas. Saber as caractersticas de eucariotos e procariotos.

aula_26.indd 89

a u l a

15/7/2004, 16:51:08

Biologia Celular I | Mitocndria INTRODUO

Muito antes do surgimento dos seres eucariontes, todas as reaes metablicas que resultam na gerao de energia j eram executadas em sistemas procariontes ou mesmo pr-biticos. Nos seres vivos atuais, a energia produzida nesses sistemas armazenada em molculas como o ATP e o NADH.H+ e utilizada para gerao de calor (nos seres homeotrmicos), movimentos (como o batimento ciliar), na sntese de novas molculas e outros processos essenciais para a manuteno da vida celular. Duas organelas se destacam na produo de ATP para as clulas: mitocndrias e cloroplastos. Estes ltimos, voc sabe, s existem nos vegetais e sero estudados mais adiante neste mesmo mdulo. Nesta aula e na prxima, vamos tratar das mitocndrias. Na disciplina de Bioqumica, voc viu que as mitocndrias produzem ATP, a principal molcula armazenadora de energia, em dois conjuntos de reaes: o ciclo de Krebs e a cadeia respiratria. As mitocndrias esto entre as organelas mais conhecidas, sendo estudadas h muito tempo. A razo do interesse to antigo por essa organela pode estar baseada em dois fatores: a facilidade com que as mitocndrias podem ser visualizadas, j que esto acima do limite de resoluo do microscpio ptico; so muito antigos os registros do consumo de O2 e liberao de CO2 por clulas vivas, assim como a associao dessa atividade com a produo de ATP.

Mitocndria, ontem e hoje Mais de 100 anos aps sua descoberta, sabemos muito sobre a produo de ATP nas mitocndrias e conhecemos sua enorme importncia para a sobrevivncia das clulas. No entanto, essa interessante organela ainda pode nos surpreender: h menos de 10 anos foi descoberto e vem sendo estudado seu papel central na morte celular programada; ainda h muito por descobrir, como voc vai saber em Biologia Celular II.

AS MITOCNDRIAS EXISTEM EM TODAS AS CLULAS EUCARITICAS?

As mitocndrias esto presentes no citoplasma de quase todas as clulas eucariticas, incluindo animais, vegetais, fungos, protozorios e algas. As excees so protozorios que vivem em ambientes anaerbicos: amebas, Giardia e Trichomonas.

90 CEDERJ

aula_26.indd 90

15/7/2004, 16:51:15

MITOCNDRIAS EM FORMAS E NMEROS

Como j mencionamos anteriormente, possvel observar mitocndrias ao microscpio ptico sem qualquer tipo de processamento ou colorao porque seu tamanho, entre 0,5 e 1m, est acima do limite de resoluo do microscpio. Alm disso, a observao de mitocndrias tambm foi facilitada pela descoberta de que um corante histolgico, o verde Janus, associa-se especicamente a essa organela. Mas, para usar o corante, as clulas precisam ser xadas; portanto, estaro mortas quando forem observadas. Assim, foi possvel observar que o nmero de mitocndrias variava entre diferentes tipos celulares; da mesma forma, tambm era evidente que algumas mitocndrias eram mais arredondadas, outras mais alongadas. A maioria dos tipos celulares possui muitas mitocndrias, de novo com exceo de alguns PROTOZORIOS(vide box).
Pelo menos dois grupos de PROTOZORIOS, os tripanosomatdeos que incluem o Trypanosoma cruzi, agente da doena de Chagas, e as Leishmanias, que causam as leishmanioses tegumentar e visceral e os Apicomplexa que incluem Toxoplasma e Plasmodium, agentes causadores, respectivamente, da toxoplasmose e da malria possuem apenas uma mitocndria. Nesses protozorios, a mitocndria bastante grande e pode ser ramicada.

MITOCNDRIAS EM MOVIMENTO
Depois que foi possvel observar as mitocndrias em clulas vivas, os pesquisadores se surpreenderam com a dinmica dessas organelas: elas se dividem por sso e tambm se fundem com muita freqncia, de modo que o nmero de mitocndrias numa clula o resultado do equilbrio entre a sso e a fuso das vrias mitocndrias existentes. O aperfeioamento das tcnicas de videomicroscopia e a descoberta de um
CORANTE VITAL

CORANTE VITAL
aquele que s cora clulas vivas. Existe ainda outra classe de corante que evidencia clulas vivas: os corantes de excluso. As clulas vivas so capazes de impedir a entrada dos corantes de excluso, que assim s entram em clulas

uorescente, a rodamina 123, que se concentra

em mitocndrias apenas se elas estiverem funcionando, permitiu a observao da distribuio das mitocndrias nas clulas, seu formato alongado, o equilbrio dinmico entre sso e fuso das organelas e seu deslocamento, rpido e direcionado.

CEDERJ 91

aula_26.indd 91

15/7/2004, 16:51:16

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria Usando a rodamina 123, foi possvel observar que as mitocndrias so capazes de se deslocar usando microtbulos como trilhos (Figura 26.1) e, diferentemente de outras organelas que tambm se deslocam usando o citoesqueleto (por exemplo, vesculas secretrias), as mitocndrias se deslocam nas duas direes, para a extremidade minus ou para a extremidade plus, associando-se ora dinena ora kinesina.

Figura 26.1: Distribuio das mitocndrias (a) num broblasto vivo corado com rodamina 123. Note o formato alongado das organelas. Depois de xada, a mesma clula foi incubada com anticorpos antitubulina num procedimento de imunouorescncia (b), que revelou a grande coincidncia entre a distribuio de mitocndrias e microtbulos. Fotos: Lan Bo Chen.

Evidentemente, a ultra-estrutura das mitocndrias s pode ser observada ao microscpio eletrnico. Em cortes ultranos, observamos que as mitocndrias possuem duas membranas, a mais interna, com invaginaes chamadas cristas, e uma matriz eletrondensa (Figura 26.2).
Figura 26.2: Micrograa eletrnica de transmisso de um corte ultrano de mitocndria. Note as invaginaes da membrana mitocondrial interna, formando as cristas, e a matriz eletrondensa. Foto: Daniel Friend.

No entanto, s a observao em microscpio de alta voltagem (veja a Aula 2) permitiu a visualizao do formato alongado e no das mitocndrias, com ramicaes que podem ser processos de sso ou de fuso (Figura 26.3).
92 CEDERJ

aula_26.indd 92

15/7/2004, 16:51:16

Figura 26.3: Mitocndrias alongadas em clulas de epitlio de caramujo observadas ao microscpio de alta voltagem. As mitocndrias so muito mais eletrondensas do que o citoplasma e se concentram na regio apical da clula. possvel observar cristas e ramicaes. Foto de Pierre Favard.

O nmero de MITOCNDRIAS presentes no citoplasma de uma clula eucaritica pode variar de algumas dezenas a milhares, dependendo da necessidade de energia daquele tipo celular naquele momento. Se a demanda por ATP se mantiver alta por algum tempo, a quantidade de mitocndrias aumentar.

A MULTIPLICAO DAS MITOCNDRIAS

Como assim, a quantidade de mitocndrias aumenta? Quer dizer que elas proliferam? Sim! Elas se dividem independentemente do ciclo celular, ou seja, de modo no coordenado com a diviso da prpria clula. Claro que voc lembrou que as mitocndrias tm DNA! Voc tambm j conhece a hiptese de que as mitocndrias se originaram de procariotos fagocitados pelo eucarioto ancestral (ou clula pr-eucaritica, reveja a Figura 15.3, na Aula 15) que se tornaram simbiontes. Ao longo desta aula, vamos colecionar semelhanas e diferenas entre mitocndrias e procariotos. Segure s um pouquinho mais a curiosidade que a gente j vai conversar sobre isso, mais adiante.

PARA ONDE SE MOVEM AS MITOCNDRIAS?

Voc pode notar, comparando as Figuras 26.1 e 26.3, que o posicionamento das mitocndrias no citoplasma das clulas varia muito. Na Figura 26.4, esquematizamos a distribuio de mitocndrias nos dois tipos celulares das fotos citadas.

Figura 26.4: Em clulas como os broblastos (a) as mitocndrias se distribuem acompanhando os microtbulos. J no epitlio de absoro (b), as mitocndrias se concentram na regio apical, onde ocorre a absoro de nutrientes.

CEDERJ 93

aula_26.indd 93

15/7/2004, 16:51:20

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria No apenas isso, na maioria das clulas, elas se deslocam muito, como se corressem ao longo dos microtbulos para atender necessidade de ATP em diferentes pontos da clula (Figura 26.4a). Em alguns tecidos, essa necessidade alta (Figura 26.4b) e muito localizada, fazendo com que as mitocndrias quem paradas nesses locais. O parada est entre aspas porque mitocndrias na verdade nunca esto paradas; mesmo sem se deslocar, elas tm uma vibrao que resulta do grande movimento de cargas associado s suas membranas, como veremos na prxima aula. Bons exemplos de clulas em que as mitocndrias esto imobilizadas so o espermatozide e o tecido muscular cardaco. No espermatozide (Figura 26.5), todas as mitocndrias se encontram na cauda, isto , no agelo, enroladas ao redor do axonema. Como voc provavelmente sabe, um espermatozide precisa nadar sem parar no trato urogenital feminino, buscando o vulo. Para garantir que no falte ATP para as dinenas agelares (veja a Aula 23), as mitocndrias esto bem ali ao lado. Essa localizao das mitocndrias do espermatozide somente no agelo tem uma conseqncia interessante: como na maioria dos processos de fertilizao dos mamferos o agelo do espermatozide no entra no ovcito, todas as mitocndrias do zigoto sero herdadas da me (herana uniparental).

(a)

(b)

Figura 26.5: Esquema (a) e micrograa (b) mostrando mitocndrias ao redor do axonema do agelo do espermatozide. Foto da coleo do Laboratrio de Microscopia Eletrnica da Uerj.

94 CEDERJ

aula_26.indd 94

15/7/2004, 16:51:23

No corao, as mitocndrias cam comprimidas entre as miobrilas do msculo cardaco, garantindo que no falte ATP para a contrao. O substrato para a produo de ATP tambm pode estar associado, na forma de gotculas de gordura (Figura 26.6). Voc j pensou se para contrair o msculo cardaco dependesse da chegada de ATP por difuso, a partir de mitocndrias que estivessem distantes?

(b)

Figura 26.6: Esquema (a) e micrograa (b) mostrando mitocndrias comprimidas entre as miobrilas cardacas, prximas a gotculas de lipdeo.

(a)

PRINCIPAIS CARACTERSTICAS DAS MEMBRANAS E COMPARTIMENTOS MITOCONDRIAIS

As mitocndrias so delimitadas por duas membranas no coladas, uma externa e uma interna, que assim denem dois compartimentos, o espao intermembranar e a matriz mitocondrial. As principais caractersticas de cada um desses componentes foram estudadas separadamente, em experimentos de fracionamento celular (Figura 26.7). Em seguida, examinaremos essas caractersticas.

CEDERJ 95

aula_26.indd 95

15/7/2004, 16:51:24

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria

Figura 26.7: Separao dos componentes mitocondriais por fracionamento celular.

Membrana mitocondrial externa uma membrana cuja DALTON

uma unidade de massa ou raio molecular, que expressa a velocidade com que uma molcula sedimenta por ultracentrifugao. A velocidade de sedimentao varia tambm com as caractersticas do lquido em que ela est dissolvida (densidade, viscosidade), e a velocidade de ultracentrifugao.

bicamada lipdica no possui caractersticas especiais, assemelhandose bicamada lipdica do retculo endoplasmtico. J as protenas inseridas nessa membrana so especiais. Podemos citar como tpica dessa membrana e essencial para o funcionamento da organela a presena da porina. A porina uma protena transmembrana (reveja a Figura 8.8) que tem uma conformao tridimensional to diferente que forma um poro hidroflico, permitindo a passagem de molculas com at 5000
DALTONS pela membrana mitocondrial externa. Ou seja, devido presena

da porina, a membrana mitocondrial externa no forma uma barreira para ons e pequenas molculas. Curiosamente, a porina da membrana mitocondrial externa muito similar a protenas formadoras de poros encontradas na membrana de bactrias Gram negativas.

96 CEDERJ

aula_26.indd 96

15/7/2004, 16:51:26

Alm da porina, a membrana externa da mitocndria possui complexos transportadores que reconhecem seqncias sinalizadoras para importao de protenas e as transportam do citoplasma para dentro da mitocndria. Vamos conhecer mais sobre esses complexos adiante. Espao intermembranar como a membrana externa no forma uma barreira, a composio inica desse compartimento semelhante do citoplasma. Esse espao nada teria de especial, no fosse a presena dos complexos enzimticos de interconverso de nucleotdeos. Parece complicado? Na verdade s as palavras so complicadas. Voc j viu, em Bioqumica, e vamos relembrar na prxima aula, que o metabolismo mitocondrial produz muito ATP, mas s uma molcula de GTP por volta do ciclo de Krebs. Voc j sabe tambm que a clula usa GTP e outros nucleotdeos trifosfatados em vrios processos de sinalizao interna para polimerizar microtbulos, para transportar vesculas etc. Claro que a produo mitocondrial de GTP no ia dar nem para a sada! Mas a esperta da mitocndria consegue transferir o fosfato do ATP diretamente para um GDP, formando GTP (e ADP, claro, mas este volta para a matriz mitocondrial para ser refosforilado). Isso tambm funciona para formar CTP e UTP, nucleotdeos usados na adio de acares. Essa converso irreversvel, isto , os outros nucleotdeos no conseguem devolver o fosfato para o ADP. Os complexos enzimticos que fazem isso so solveis, mas so grandes demais para sair pela porina, e assim cam presos logo ali no espao entre as membranas (Figura 26.8), esperando os ATPs recm-formados para roubar o fosfato de alguns e transferir para GDP, CTP e UTP (no parece a histria do Robin Hood, que tirava dos ricos para dar aos pobres?).
O AT P, a d e n o s i n a trifosfato, o nucleotdeo fosfatado mais conhecido na gerao de energia. Alm dele, existem tambm o G T P, g u a n i d i n a trifosfato, importante na polimerizao de microtbulos e na sinalizao celular; o CTP, citosina trifosfato, e o U T P, u r i d i n a trifosfato, que atuam na adio de acares.

Figura 26.8: Os complexos enzimticos existentes no espao intermembranas transferem o fosfato de parte do ATP produzido para outros nucleotdeos, como o UDP e o GDP.

CEDERJ 97

aula_26.indd 97

15/7/2004, 16:51:27

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria Membrana mitocondrial interna essa membrana, sim, muito especial. a bicamada lipdica mais uida e menos permevel de uma clula. Voc lembra que as membranas so tanto mais uidas quanto mais fosfolipdeos com cadeias de cido graxo curtas e insaturadas e menos colesterol tiverem? A bicamada da membrana mitocondrial interna tem fosfolipdeos com essas caractersticas e no possui nenhum colesterol. importantssimo que ela seja bastante uida porque o funcionamento da cadeia transportadora de eltrons depende do choque entre as molculas. J a quase impermeabilidade (quase, porque a membrana mitocondrial interna permevel gua e a gases, como O2, CO2 e NO) atribuda a um fosfolipdeo especial: a cardiolipina. A cardiolipina tem esse nome porque foi descrita primeiro em mitocndrias do msculo cardaco, mas depois foi encontrada em todas as mitocndrias. Esse fosfolipdeo resultado da juno de duas fosfatidilcolinas, formando um fosfolipdeo com quatro cadeias de cido graxo ( quadrpede!). Dessa forma, a rea ocupada pela cabea polar corresponde ao dobro do nmero de cadeias hidrofbicas na regio hidrofbica da membrana (Figura 26.9).

Figura 26.9: Esquema comparativo dos fosfolipdeos fosfatidilcolina, cardiolipina (verde) e uma bicamada lipdica semelhante membrana mitocondrial interna.

Quando se faz uma extrao bioqumica que separa os lipdeos e as protenas da membrana mitocondrial interna e depois se seca e pesa o contedo, constata-se que essa membrana tem muito mais protenas do que lipdeos. a maior relao protena/lipdeo da clula (70/30). No difcil imaginar por que a membrana mitocondrial interna tem tantas protenas: nela que ocorre a cadeia transportadora de eltrons, e seus componentes so protenas da membrana interna; na membrana interna que est a enzima que sintetiza ATP, a ATP sintase, em grande nmero de cpias;

98 CEDERJ

aula_26.indd 98

15/7/2004, 16:51:27

 se a bicamada lipdica da membrana interna bastante impermevel e, no entanto, preciso que muitas molculas cheguem matriz e de l saiam atravessando essa membrana, ela tem de ter muitos transportadores, carreadores etc. Matriz mitocondrial o contedo da matriz mitocondrial to concentrado que no se espalha logo que a membrana mitocondrial interna rompida, como representado na Figura 26.7. A matriz como um colide que vai se dispersando devagar. Como est isolada por uma membrana bastante impermevel, a matriz mitocondrial tem composio inica muito particular. Seu pH, por exemplo, bem maior que o do citoplasma, cerca de 8, porque a cadeia respiratria bombeia prtons para fora da mitocndria, alcalinizando a organela (mas sem acidicar o citoplasma, j que o volume deste muito maior). O estado fsico coloidal da matriz resultado de uma grande concentrao de macromolculas, em que se destacam: a) protenas solveis: as enzimas do ciclo de Krebs; as enzimas que fazem a -oxidao dos cidos graxos; a piruvato desidrogenase, complexo enzimtico muito grande e abundante que essencial para o funcionamento do ciclo de Krebs a partir de glicose (e que vamos ver na prxima aula); b) cidos nuclicos: DNA; RNAs: ribossomais (rRNA), transportador (tRNA), e o equivalente ao mensageiro (mRNA). Na prxima aula, vamos abordar o metabolismo mitocondrial, com as protenas e enzimas que dele participam, do ponto de vista celular. Por ora, vamos nos deter nos cidos nuclicos encontrados na matriz mitocondrial.

O GENOMA DAS MITOCNDRIAS E CLOROPLASTOS

A descoberta de que mitocndrias e cloroplastos (Aulas 28 e 29) possuem cidos nuclicos (DNA e RNA) despertou enorme curiosidade entre os pesquisadores. Procuramos incluir nesta aula algumas das concluses dessas pesquisas, que tiveram enorme inuncia na elaborao das teorias sobre a evoluo da vida em nosso planeta.

CEDERJ 99

aula_26.indd 99

15/7/2004, 16:51:28

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria

De novo, os protozorios! Por alguma razo, nos tripanosomatdeos, os crculos de DNA esto presos uns aos outros como os elos de uma corrente. Por isso, formam um aglomerado eletrondenso na regio da mitocndria que ca prxima base do agelo (Figura 26.10b). Devido a essa proximidade, pensava-se que era uma estrutura ligada ao batimento agelar e deu-se a ela o nome de cinetoplasto (que signica corpsculo do movimento). Nesses protozorios, os genes contidos no cinetoplasto parecem ter relao com a infectividade do parasito e so muito estudados.

Diferentemente do DNA nuclear, nas mitocndrias e nos cloroplastos essas molculas so circulares (Figura 26.10a) e no possuem histonas, como o DNA de procariotos. Em cada organela, esto presentes vrias molculas de DNA iguais que geralmente esto associadas em pequenos grupos espalhados pela matriz mitocondrial (e pelo estroma dos cloroplastos).

Figura 26.10: Micrograas de um crculo de DNA mitocondrial isolado (a) e do cinetoplasto (seta em b) do Trypanosoma cruzi, formado por vrios crculos associados; M, mitocndria; N, ncleo. Foto a, de David Clayton; foto b, de Isabel Porto Carreiro.

As muitas molculas de DNA de uma mitocndria so produzidas por replicao. No entanto, a replicao do DNA de mitocndrias e cloroplastos no est regulada pelos mesmos mecanismos que a replicao do DNA nuclear. Alm de replicadas, as molculas de DNA de mitocndrias e cloroplastos tambm so transcritas por enzimas prprias das organelas, produzindo RNAs que, por sua vez, so traduzidos por ribossomos tambm nas prprias organelas. Os ribossomos de mitocndrias e cloroplastos so diferentes dos ribossomos citoplasmticos. Especialmente os dos cloroplastos so semelhantes aos ribossomos de bactrias e conseguem at mesmo funcionar em conjunto com enzimas ou tRNA de bactrias. Quando a sntese de protenas em mitocndrias e cloroplastos comea, o primeiro aminocido da cadeia sempre formil-metionina, como nos procariotos, enquanto nos eucariotos o primeiro aminocido sempre metionina. Apesar dessas diferenas e do descompasso na replicao, a traduo nas mitocndrias tem de ser bastante coordenada com a que ocorre no citoplasma, j que a grande maioria das protenas das mitocndrias est codicada no ncleo. Os poucos genes presentes na organela codicam
100 CEDERJ

aula_26.indd 100

15/7/2004, 16:51:28

para subunidades de enzimas mitocondriais que dependem da chegada, vindas do citoplasma, de outras subunidades da mesma protena para poder montar a enzima funcional.

Nem tudo igual!

Alm das muitas semelhanas com os cidos nuclicos e as enzimas de procariotos, existem diferenas marcantes tambm. Talvez a maior delas esteja no cdigo gentico. No cdigo nuclear de todas as espcies, o signicado de alguns CDONS bastante conservado. No genoma mitocondrial de animais e fungos, o cdigo universal para m de leitura (stop codon), por exemplo, no tem esse signicado, codicando para o aminocido triptofano. J no genoma das mitocndrias de plantas, o signicado tambm parada de leitura. O RNA das mitocndrias e cloroplastos mais permissivo no pareamento com os cdons. Enquanto nos eucariotos e procariotos cada cdon tem um signicado, nas organelas a terceira base pode variar, sem mudar o signicado. Isso permite usar menos tRNA diferentes (so 22 nas mitocndrias e 30 no citoplasma). Por isso, os bilogos moleculares dizem que o cdigo gentico das mitocndrias mais relaxado, no sentido de menos exigente. O genoma de mitocndrias e cloroplastos pode ter tamanhos muito diferentes, sendo o dos cloroplastos geralmente maior. Numa mesma planta, o genoma da mitocndria pode ter cerca de 200 mil pares de bases, enquanto o do cloroplasto tem 250 milhes de pares de bases. Os menores genomas de organelas so os das mitocndrias de animais, que tm entre 16 e 19 mil pares de bases. O genoma da mitocndria humana, por exemplo, bem pequeno e j foi completamente seqenciado. CDON
Conjunto de trs bases nitrogenadas, codicando um aminocido, o incio ou o m da leitura.

CEDERJ 101

aula_26.indd 101

15/7/2004, 16:51:29

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria

O genoma mitocondrial humano O seqenciamento completo do genoma mitocondrial humano mostrou que ele formado por dois genes que codicam para RNA ribossomal, 22 genes que codicam para RNA transportador e 13 genes que codicam para protenas. Sua caracterstica mais marcante (comum a vrios genomas mitocondriais) que todos os 16.569 nucleotdeos presentes fazem parte de algum gene, ou seja, no h regies no codicantes nem espao para regies reguladoras. Ao mesmo tempo, apresenta alta taxa de substituio de nucleotdeos, cerca de 10 vezes maior que a taxa nuclear. Por isso, a comparao de seqncias mitocondriais humanas tem sido muito til no estudo da migrao de populaes. O seqenciamento do genoma mitocondrial teve grande impulso depois da guerra do Vietn porque, pressionado pelas famlias dos soldados mortos que no aceitavam os tmulos do soldado desconhecido, o exrcito americano nanciou e executou um grande trabalho de anlise do DNA mitocondrial dos soldados mortos. A razo do interesse que o DNA mitocondrial o mais adequado para a identicao de cadveres muito destrudos. Por ser menor, est menos sujeito a quebras; por ser circular, mais fcil saber se a molcula est completa; por estar presente em mais de mil cpias por clula, mais fcil de ser encontrado; por ser herdado apenas da me, as comparaes para identicao so mais fceis. Depois da metodologia estabelecida, o DNA mitocondrial j foi usado para identicao de cadveres muito antigos ou destrudos (como os restos mortais da famlia do ltimo czar russo) e vem sendo freqentemente usado em gentica forense (como, por exemplo, na busca dos netos por avs argentinos, cujos lhos desapareceram durante a ditadura).

No apenas os cidos nuclicos de mitocndrias e cloroplastos se parecem com os de procariotos, mas tambm as prprias enzimas que trabalham na transcrio e na traduo dentro da organela tm caractersticas em comum com as enzimas dos procariotos, sendo inibidas pelas mesmas drogas (Figura 26.11). Surpreendentemente, essas enzimas so elas prprias completamente codicadas por genes do ncleo e traduzidas no citoplasma.

Figura 26.11: As drogas que inibem a transcrio no ncleo (-amanitina) e a traduo e citoplasma (ciclo-heximida) de uma clula so diferentes das que inibem transcrio (acridinas) e traduo (cloranfenicol, tetraciclina e eritromicina) em mitocndrias ou cloroplastos na mesma clula.

102 CEDERJ

aula_26.indd 102

15/7/2004, 16:51:29

Talvez voc tenha reconhecido algumas drogas na Figura 26.11, j que as drogas que inibem traduo nas mitocndrias e cloroplastos so as mesmas que inibem a traduo em bactrias e por isso so usadas como antibiticos. Mas voc no precisa achar que vai exterminar suas mitocndrias tomando esses antibiticos, porque eles se concentraro nas bactrias que tm uma taxa de traduo muito mais acelerada que as mitocndrias.

IMPORTAO DE PROTENAS MITOCONDRIAIS

Como voc viu, a maioria das protenas presentes em mitocndrias e cloroplastos est codicada no genoma nuclear e sintetizada no citoplasma. Como vo parar dentro das organelas? Para entrar em mitocndrias e em cloroplastos, as protenas precisam ter seqncias sinal que sero reconhecidas por receptores na membrana externa das organelas. Isso lembra a entrada de protenas no retculo endoplasmtico, no lembra? Uma diferena muito marcante entre a entrada de uma protena no retculo e na mitocndria que uma protena s entra na mitocndria depois que foi completamente sintetizada, ou seja, a importao de protenas pela mitocndria ps-traducional. No entanto, assim como no retculo, a protena precisa estar desenovelada para passar pelos translocadores mitocondriais. Por isso, uma protena mitocondrial, mesmo depois de completamente sintetizada, continua ligada a vrias chaperonas, que impedem o enovelamento precoce ou a agregao de vrias protenas (reveja esse conceito na Aula 18). As chaperonas s vo se soltar da protena depois que ela for reconhecida pelos translocadores mitocondriais. Existem dois grupos de translocadores, os complexos TOM (Trans Outer Membrane, translocase de membrana externa) e TIM (Trans Inner Membrane, translocase de membrana interna) (Figura 26.12). Eles podem funcionar separadamente, s o TOM para protenas de membrana externa e do espao intermembranar e, TOM e TIM para protenas de membrana interna e protenas da matriz.

CEDERJ 103

aula_26.indd 103

15/7/2004, 16:51:30

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria

Figura 26.12: Os complexos de importao mitocondriais translocase da membrana externa (TOM) e translocases de membrana interna (TIM).

Vamos imaginar uma protena de matriz mitocondrial. Ela sintetizada no citoplasma, mantida desenovelada por chaperonas at que sua seqncia de sinal seja reconhecida por uma TOM (Figura 26.13).

Figura 26.13: Importao de uma protena da matriz mitocondrial.

Uma vez reconhecidas, as chaperonas se soltam e a hidrlise de ATP por essas chaperonas contribui para que a TOM transporte a protena para dentro. Logo que sua seqncia-sinal aparecer no espao intermembranar, uma TIM vai reconhec-la e transloc-la para a matriz com a ajuda da energia do gradiente de prtons da cadeia respiratria (Figura 26.13). Ao chegar matriz, sua seqncia-sinal cortada, e a conformao funcional adquirida com a ajuda das chaperonas mitocondriais. Com certeza, esse mecanismo seria mais eciente se a passagem pelas duas membranas fosse consecutiva. Essa idia conrmada pela existncia de stios de contato entre a duas membranas da mitocndria, observada em algumas preparaes especiais de microscopia eletrnica (Figura 26.14), e pela descoberta de que uma das TIM (a TIM 23) uma protena das duas membranas.
104 CEDERJ

aula_26.indd 104

15/7/2004, 16:51:30

Figura 26.14: Observando ao microscpio eletrnico de alta voltagem um corte espesso de mitocndrias do fungo Neurospora crassa preservadas por congelamento, possvel observar que as membranas externa e interna mantm distncia aproximadamente constante, exceto nos pontos de contato (no detalhe), que se acredita sejam os locais de importao de protenas para a matriz mitocondrial. Foto de Daniela Nicastro (J. Struct. Biol. 129:48, 2000).

ORIGEM SIMBITICA DE MITOCNDRIAS E CLOROPLASTOS

Agora que voc j conhece melhor as caractersticas de mitocndrias e cloroplastos, podemos voltar discusso sobre a origem dessas organelas. As mitocndrias teriam se originado a partir da fagocitose de procariotos aerbicos por eucariotos que no os destruram e passaram a usufruir de grandes vantagens numa poca em que o teor de oxignio da atmosfera terrestre estava aumentando. Os novos eucariotos desenvolveram, ento, uma relao de simbiose com os procariotos que fagocitaram e passaram a predominar porque podiam obter muito mais energia a partir dos substratos disponveis. A aquisio das mitocndrias tambm liberou a membrana plasmtica das tarefas de produo de energia, possibilitando outras especializaes que contriburam muito para o aumento da complexidade dos eucariotos. Mas ser que essa hiptese verdadeira? Ainda no foi possvel test-la diretamente, j que ainda no se conseguiu cultivar mitocndrias e depois oferec-las a um eucarioto sem mitocndrias, como uma ameba, na tentativa de refazer o evento simbitico. O estudo de outras
CEDERJ 105

aula_26.indd 105

15/7/2004, 16:51:31

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria relaes simbiticas, entre protozorios e bactrias, tem contribudo bastante para o entendimento do processo. Algumas caractersticas argumentam fortemente a favor da origem procaritica das mitocndrias: 1) A presena de porinas na membrana mitocondrial externa pela hiptese da origem simbitica, a membrana externa da mitocndria corresponderia membrana do vacolo fagoctico, portanto, a presena de uma protena tpica de procariotos nessa membrana parece contraditria. No entanto, o estudo detalhado da membrana do vacolo que envolve parasitos, como Trypanosoma, Toxoplasma etc. mostrou que comum a insero de protenas do parasito na membrana do vacolo. 2) A presena de cardiolipina, fosfolipdeo tpico de procariotos, formado na prpria mitocndria a partir de duas fosfatidilcolinas. 3) A presena de DNA circular em mltiplas cpias, sem histonas. 4) A presena de RNA transportador semelhante ao de procariotos. 5) A presena de ribossomos semelhantes aos de procariotos. 6) A sntese de protenas comeando sempre por formil-metionina. A tentao de considerar a hiptese verdadeira grande, no? Mas ainda preciso explicar algumas divergncias, como as diferenas no cdigo gentico, que no semelhante ao de eucariotos, mas tambm no semelhante ao de procariotos. Mitocndrias sempre se originam de outras mitocndrias, que aumentaram de tamanho e depois sofreram sso. Apesar de possurem o prprio DNA e ainda manterem os processos de replicao, transcrio e traduo, poucas protenas e RNAs esto codicadas pelo genoma da prpria organela, tornando-as dependentes do genoma nuclear e dos mecanismos de sntese e transporte citoplasmticos. Durante a evoluo, a relao simbitica aprofundou-se, envolvendo a transferncia de genes do simbionte para o ncleo do eucarioto hospedeiro. Essa transferncia foi lenta, durante milhes de anos, porque, alm de serem transferidos para o ncleo, os genes precisam se adaptar aos mecanismos de replicao e controle de expresso gnica dos eucariotos, incorporando-se ao genoma de maneira estvel e produzindo mRNA capaz de ser lido e de conter em si mesmo o sinal de direcionamento para mitocndria. Assim, as mitocndrias se tornaram totalmente dependentes do hospedeiro, deixando de ser um simbionte para se tornar uma organela. Como o processo de transferncia gnica unidirecional, so considerados mais evoludos os genomas mitocondriais menores, que j transferiram mais genes, como o genoma mitocondrial humano.
106 CEDERJ

aula_26.indd 106

15/7/2004, 16:51:34

De que procarioto as mitocndrias e os cloroplastos descedem?

Certamente, a relao simbitica entre eucariotos e mitocndrias mais antiga e data de um perodo anterior separao entre animais e plantas. Acredita-se que o evento endoctico que incorporou as mitocndrias aos eucariotos data de cerca de 1,5 x 109 anos, quando os nveis de oxignio na atmosfera aumentaram. Comparando as seqncias gnicas, as mitocndrias parecem ter se originado de bactrias prpura; e os cloroplastos, muitos anos depois, com animais e vegetais j separados evolutivamente, de bactrias fotossintticas (Figura 26.15).

Figura 26.15: A rvore filogentica da provvel evoluo de mitocndrias e cloroplastos e seus ancestrais procariotos.

CEDERJ 107

aula_26.indd 107

15/7/2004, 16:51:34

AULA

26 MDULO 5

Biologia Celular I | Mitocndria

EXERCCIOS
1. As mitocndrias de todos os tipos celulares so morfologicamente iguais? 2. Como se organiza estruturalmente a mitocndria? 3. Quais as principais caractersticas da membrana mitocondrial externa? 4. Quais as principais caractersticas da membrana mitocondrial interna? 5. Quais as principais caractersticas do espao intermembranas? 6. Quais as principais caractersticas da matriz mitocondrial? 7. Por que as mitocndrias representaram um grande salto evolutivo para os seres eucariontes? 8. Como se distribuem as mitocndrias em uma clula? 9. Como feita a importao de protenas mitocondriais cujos genes se encontram no ncleo? 10. Por que se acredita que as mitocndrias resultam de uma relao simbitica entre uma bactria e uma clula eucarionte primitiva que a fagocitou?

108 CEDERJ

aula_26.indd 108

15/7/2004, 16:51:35