Dissertação Ismael PDF

UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR
FACULDADE DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM FARMACOLOGIA

DETERMINAO DO ACETATO DE MEGESTROL EM PLASMA HUMANO
POR CROMATROGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA ACOPLADA AO
ESPECTRMETRO DE MASSA: APLICAO EM ESTUDO DE
BIOEQUIVALNCIA

Ismael Leite Martins

Fortaleza

2004

ii
UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR
FACULDADE DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM FARMACOLOGIA

BIOEQUIVALNCIA

ISMAEL LEITE MARTINS

Dissertao submetida Coordenao do Programa de Ps
Graduao em Farmacologia, do Departamento de Fisiologia e
Farmacologia, da Faculdade de Medicina, da Universidade
Federal do Cear, como requisito parcial para obteno do
ttulo de Mestre em Farmacologia.

Orientadora: Profa. Dra. Maria Elisabete Amaral de Moraes

FORTALEZA

2004

M343d Martins, Ismael Leite
Determinao do Acetato de Megestrol em Plasma Humano por Cromatrografia
Lquida de Alta Eficincia acoplada ao Espectrmetro de Massa : Aplicao em Estudo de
Bioequivalncia / Ismael Leite Martins. - Fortaleza, 2004.
196 f. : il
Orientadora: Profa. Dra. Maria Elisabete Amaral de Moraes
Dissertao (Mestrado). Universidade Federal do Cear. Departamento
de Fisiologia e Farmacologia.

1. Farmacocintica 2. Acetato de Megestrol 3. Betametasona 4. LC-MS-MS. I. Moraes,
Maria Elisabete Amaral de (Orient.). II. Ttulo

CDD 615.7

iii

ISMAEL LEITE MARTINS

BIOEQUIVALNCIA

Dissertao aprovada em _________ de _______________ de 2004

BANCA EXAMINADORA

Prof. Dra. Maria Elisabete Amaral de Moraes (Orientadora)
Universidade Federal do Cear - UFC

Prof. Dr. Manoel Odorico de Moraes Filho

Prof. Dra. Gisela Costa Camaro

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Dedico esta dissertao a todas as preciosidades
que Deus me deu, meu pai, minha me,
minha irm, por todo amor e incentivo em
todas as etapas importantes da minha vida.

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A Deus, por estar sempre ao meu lado, dando-me foras para enfrentar todos os
momentos dessa caminhada.

Minha Famlia, pelo carinho, apoio em cada situao difcil da minha vida, e pelo
entusiasmo em cada conquista.

Janaina Pinho Tavares, minha namorada, que participou de momentos
inesquecveis desse trabalho me apoiando em tudo que fosse necessrio.

Dra. Maria Elisabete Amaral de Moraes, minha orientadora, a qual apoiou-me na
construo do saber cientfico, estimulando em mim a paixo pela Pesquisa Clnica, atravs
de seus ensinamentos, bem como, oferecendo a oportunidade de realizao de cursos em
outros estados brasileiros. Tambm pude observar o afinco, a dedicao e o respeito a
pesquisa clnica, ao voluntrio, o que a faz conquistar espaos ainda obscuros.

Dr. Manoel Odorico de Moraes, por colaborar sempre, seja com sua biblioteca, ou
com seus ensinamentos enriquecedores, sempre dizendo que o futuro pertence queles que
acreditam na beleza dos seus sonhos, contribuindo dessa forma para minha evoluo diante
da pesquisa cientfica.

Dr. Fernando Antnio Frota Bezerra, por estar sempre disposto a nos ensinar a
cincia com sua grande arte de professor e por ser um exemplo de ser humano.

Dra. Gisela Costa Camaro, por sempre mostrar disponvel para atender meus
pedidos de ajuda, colaborando com meu crescimento cientfico atravs do seu vasto
conhecimento e de sua carinhosa presena na banca examinadora do exame de qualificao e
na defesa de dissertao.

Dr. Jos Pedrazzoli Jr., por ter me acolhido em seu laboratrio na Unidade
Integrada de Farmacologia e Gastroenterologia, Escola de Medicina da Universidade de So
Francisco, Bragana Paulista-SP, com muito apreo.

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Professores do Curso de Ps-Graduao, por terem transmitido com muita
sapincia seus conhecimentos.

Amigos da Unidade de Farmacologia Clnica, meu agradecimento a todos vocs
por terem colaborado na minha pesquisa cientfica, fazendo do trabalho dirio um ambiente
mais ameno e alegre.

Colegas de Ps-Graduao, por termos, juntos, vencido tantas disciplinas,
apresentaes de artigos e provas com um saldo maravilhoso, que nossa amizade.

Malu, Maria Teresa, Fbia e Flvia, da UNIFAC, pela colaborao e presteza
bem como pelos momentos agradveis que tivemos.

As secretrias do Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Slvia e urea, que
sempre estiveram dispostas a nos ajudar no que fosse preciso.

Comit de tica em Pesquisa Clnica, pelas crticas e sugestes, engrandecendo
ainda mais o trabalho a ser desenvolvido e no permitindo abusos com seres humanos.

A todos os voluntrios que participaram desse estudo.

FUNCAP, CNPq e Instituto Claude Bernard, por terem colaborado
financeiramente durante todo o desenvolvimento da pesquisa.

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No temos em nossas mos a soluo
para todos os problemas do mundo;
mas, diante dos problemas do mundo,
temos nossas mos.

Ismael Leite Martins

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RESUMO

Determinao do Acetato de Megestrol em Plasma Humano por Cromatografia
Lquida de Alta Eficincia Acoplada ao Espectrmetro de Massa: Aplicao em Estudo
de Bioequivalncia. Ismael Leite Martins. Orientadora: Maria Elisabete Amaral de Moraes.
Dissertao de Mestrado. Programa de Ps-Graduao em Farmacologia. Departamento de
Fisiologia e Farmacologia, Universidade Federal do Cear, 2004.

Atravs da cromatografia lquida de alta eficincia com deteco por
espectrometria de massa no modo MS/MS, desenvolveu-se um mtodo sensvel e altamente
seletivo para determinar os nveis de acetato de megestrol no plasma humano, usando a
betametasona como padro interno. O analito e o padro interno foram extrados das
amostras do plasma atravs da soluo de extrao hexano-acetato de etila (1:1 v/v), e
cromatografados em uma coluna C
18
. A fase mvel consistiu de acetonitrila-gua (80:20
v/v), contendo 0,1% de cido frmico. A deteco foi realizada em um triplo-quadrupolo,
atravs de um espectrmetro de massa no modo de monitoramento de reao mltipla via
eletrospray. O mtodo tem um tempo de corrida de 3 minutos e limite de quantificao de 2
ng/mL. As curvas de calibrao foram obtidas utilizando uma faixa de concentrao de 2 a
150 ng/mL. As precises intralote foram 3,16%, 4,65% e 2,68%, e a acurcia intralote foi de
6,77%, 6,23% e 5,73% para 6, 60 e 120 ng/mL, respectivamente. As precises interlote
foram 7,76%, 6,23% e 6,37%, e a acurcia interlote foi de 0,08%, 1,55% e 2,11% para as
mesmas concentraes. Este mtodo validado foi aplicado com sucesso para a determinao
dos parmetros farmacocinticos dos comprimidos de acetato de megestrol administrados a
30 voluntrios sadios.

Palavras-chave: Acetato de Megestrol Betametasona LC-MS-MS.

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ABSTRACT

Determination of Megestrol Acetate in Human Plasma by High-Performance Liquid
Chromatography Coupled to Mass Spectrometry: Application to a Bioequivalence
Study. Ismael Leite Martins. Advisor: Maria Elisabete Amaral de Moraes. Masters
Dissertation. Post-Graduate Program in Pharmacology. Department of Physiology and
Pharmacology, Federal University of Ceara, 2004

A sensitive and highly selective liquid chromatography-tandem mass
spectrometry (LC-MS-MS) method was developed to determine megestrol acetate in human
plasma using betamethazone as the internal standard. The analyte and internal standard were
extracted from plasma samples by hexane/ethyl acetate (1:1 v/v), and chromatographed on a
C
18
column. The mobile phase consisted of acetonitrila-water (80:20 v/v) including formic
acid 0.1%. Detection was performed on a triple quadropole tandem mass spectrometer by
multiple reaction mode via electrospray source. The method has a chromatographic run time
of 3 min and a limit of quantification of 2 ng/mL. The linear calibration curves were
obtained in the concentration range 2 150 ng/mL. The intra-batch precisions were 3.16%,
4.65%, and 2.68%; and the intra-batch accuracy was 6.77%, 6.23%, and 5.73% for 6, 60 and
120 ng/mL, respectively. The inter-batch precision was 7.76%, 6.23%, and 6.37% and the
inter-batch accuracy was 0.08%, 1.55%, and 2.11% for the same concentrations. This
validated method was successfully applied for the determination of pharmacokinetic profiles
of megestrol acetate tablets administered to 30 healthy volunteers.

Key words: Megestrol Acetate Betamethazone LC-MS-MS.

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Figura 1. Frmula estrutural do acetato de megestrol. 6
Figura 2. Esquema de funcionamento do sistema de espectrometria de
massa. 13
Figura 3. Diagrama esquemtico do processo de eletrospray. Um potencial
eltrico aplicado entre a extremidade do spray e o orifcio do
espectrmetro em combinao com um fluxo criando um cone
Taylor de gotas carregadas. A dessolvatao leva a carga do
lquido para o analito, sendo, ento, analisado no espectrmetro
de massa (Direitos Autorais de PharmaGenomics, 2003). 16
Figura 4. Esquema da origem inica por eletrospray (Direitos Autorais de
American Chemical Society 1985). 17
Figura 5. Ilustrao do filtro de massa quadruplo. 19
Figura 6. Esquema demonstrativo da fragmentao de compostos utilizando
espectrmetro de massa triplo-quadrupolo no modo
monitoramento de reao mltipla (MRM). 20
Figura 7. Anlise da mdia dos ndices de massa corporal pr e ps-estudo,
em 29 voluntrios sadios do sexo masculino. 53
Figura 8. Anlise hematolgica das mdias dos valores dos exames
laboratoriais pr e ps-estudo, de 29 voluntrios do sexo
masculino, *p<0,05. Valores de referncia: Hemoglobina = 13,5 a
18 g/dL (A) e Leuccitos = 3,6 a 10 x10
3
/mm
3
(B). 56
Figura 9. Anlise da funo renal das mdias dos valores dos exames
laboratoriais pr e ps-estudo, de 29 voluntrios do sexo
masculino, *p<0,05. Valores de referncia: Creatinina = 0,7 a 1,3
mg/dL (A) e Ureia = 10 a 50 mg/dL (B). 57
Figura 10. Linearidade da curva de calibrao realizada com seis diferentes
concentraes de acetato de megestrol (r = 0,998759). 59
Figura 11. a) Plasma branco normal, lote 7997/3, b) Plasma branco normal,
lote 42205/1, c) Plasma branco normal, lote 17679/5, d) Plasma
branco normal, lote 42207/1, e) Plasma branco lipmico, lote
32513/1, f) Plasma branco hemolisado, lote 34614/4. 60

xv
Figura 12. Cromotograma MRM de plasma coletado trs horas aps a
administrao oral de uma dose de 160 mg de acetato de
megestrol: (1) acetato de megestrol e (2) betametasona. 61
Figura 13. Espectro de massa do on fragmento do acetato de megestrol (A) e
betametasona (B). 62
Figura 14. Curva mdia da concentrao plasmtica (ng/mL) versus tempo
(h) aps a administrao de duas formulaes de 160 mg de
acetato de megestrol em 28 voluntrios saudveis. 76

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Tabela 1: Material utilizado na etapa clnica dos testes de bioequivalncia. 24
Tabela 2: Equipamentos utilizados na etapa clnica dos testes de
bioequivalncia. 25
Tabela 3: Definio das seqncias de tratamento. 25
Tabela 4: Produtos estudados. 29
Tabela 5: Descrio dos equipamentos e material. 35
Tabela 6: Componentes do CLAE. 35
Tabela 7: Padres de referncia. 35
Tabela 8: Reagentes. 36
Tabela 9: Preparo da Curva de Calibrao para o Acetato de Megestrol. 38
Tabela 10: Preparo dos controles de qualidade. 40
Tabela 11: Padres de Referncia Certificados. 43
Tabela 12: Amostras do fluido biolgico (plasma). 43
Tabela 13: Parmetros farmacocinticos. 49
Tabela 14: Eventos adversos, intensidade, relacionamento com a medicao e
ao adotada, relatados pelos trinta voluntrios do sexo
masculino. 55
Tabela 15: Anlise das funes heptica e metablica da mdias dos valores
dos exames laboratoriais pr e ps-estudo, de 29 voluntrios do
sexo masculino. 56
Tabela 16: Definio dos Controles de Qualidade (CQ). 63
Tabela 17: Anlise Intra-Lote dos Controles de Qualidade CQB, CQM e
CQA. 64
Tabela 18: Anlise Intra-Lote dos Controles de Qualidade do Acetato de
Megestrol em plasmas Lipmico e Hemolisado. 65
Tabela 19: Anlise Inter-Lotes do Controle de Qualidade LQ. 66
Tabela 20: Anlise Inter-Lotes dos Controles de Qualidade CQB, CQM e
CQA. 66
Tabela 21: Anlise da percentagem de recuperao do frmaco e do padro
interno. 67
Tabela 22: Estudo de estabilidade do Acetato de Megestrol em plasma
submetido ao tempo e condies de anlise dentro do auto-injetor. 69

xviii
Tabela 23: Mdia e Desvios obtidos no estudo de estabilidade do Acetato de
Megestrol em plasma submetido anlise no auto-injetor. 69
submetido a trs ciclos de congelamento e descongelamento para
o controle de qualidade baixo 70
o controle de qualidade mdio 71
o controle de qualidade alto 71
Tabela 27: Variao das mdias dos controles de qualidade nos ciclos de
congelamento e degelo em relao s mdias das amostras recm-
preparadas. 72
Tabela 28: Estabilidade de longa durao para o Acetato de Megestrol no
fluido biolgico. 73
Tabela 29: Estabilidade das amostras de plasma no processadas. 74
Tabela 30: Estabilidade das solues padro para o Acetato de Megestrol e
Betametasona. 75
Tabela 31: ANOVA para In(C
max
). 77
Tabela 32: ANOVA para In(ASC(
0-144h)
). 77
Tabela 33: Mdia e IC (90%) dos parmetros farmacocinticos obtidos aps
a administrao de 160 mg de Megestat
e Acetato de Megestrol. 79

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LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

% porcentagem
mais ou menos
menor ou igual
g/mL micrograma por mililitro
L microlitro
L/min microlitros por minuto
L/mL microlitros por mililitros
m micrmetro
> maior
art. artigo
cm centmetro
eV eltron volt
g grama
g/dL grama por decilitro
g/mol grama/mol
h hora
kDa kilodalton
kg kilograma
kg/m
2
kilograma por metro quadrado
kV kilovolt
l litro
l/h litro por hora
ln logaritmo neperiano
m/z massa/carga
mbar milibar (unidade de presso)
mg miligrama
mg/dia miligrama por mililitro
mg/dL miligrama por decilitro
mg/Kg miligrama por kilograma
mg/mL miligrama por mililitro

xxi
mL mililitro
mM milimolar
mm milmetro
mm
3
milmetro cbico
ng/mL nanograma por mililitro
n nmero
rpm rotaes por minuto
U/L unidade por litro
v volt
v/v volume por volume
ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
ASC rea Sob a Curva
CAD Collisionally Activated Dissociation
CID Collision-Induced Dissociation
CLAE Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
C
max
Concentrao Mxima
CNS-MS Conselho Nacional de Sade - Ministrio da Sade
CONEP Comit Nacional de tica em Pesquisa
CQ Controle de Qualidade
CQA Controle de Qualidade Alto
CQB Controle de Qualidade Baixo
CQM Controle de Qualidade Mdio
CRF Case Report Formulary
CV Coeficiente de Variao
DCB Denominao Comum Brasileira
DP Desvio padro
ECG Eletrocardiograma
EUA Estados Unidos da Amrica
FDA Food and Drug Administration
HPLC High-Performance Liquid Chromatographic
HUSF Hospital Universitrio So Francisco
HUWC Hospital Universitrio Walter Cantdio
IES Ionizao por Eletrospray

xxii
IMC ndice de Massa Corporal
K Constante de eliminao
LQ Limite de Quantificao
MRM Monitoramento de reao mltipla
MS/MS Triplo-quadrupolo
OMS Organizao Mundial de Sade
SGOT Glutamato-oxalacetato-transaminase
SGTP Glutamato piruvato-transaminase
SIDA Sndrome da Imunodeficincia Adquirida
t
1/2
Meia-vida plasmtica
UFC Universidade Federal do Cear
UNIFAC Unidade de Farmacologia Clnica
USP United States Pharmacopeia
VHS Velocidade de Hemossedimentao
Vol. Voluntrio
WHO World Health Organization

xxiii
SUMRIO

DEDICATRIA iv
AGRADECIMENTOS v
EPGRAFE viii
RESUMO ix
ABSTRACT xi
LISTA DE FIGURAS xiii
LISTA DE TABELAS xvi
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS xix
SUMRIO xxiii
INTRODUO 1
1. CONSIDERAES GERAIS SOBRE ENSAIOS CLNICOS 2
2. ACETATO DE MEGESTROL 6
2.1. Farmacologia 6
2.2. Toxicologia 7
2.3. Farmacologia Clnica 7
2.4. Farmacocintica 8
2.5. Usos Teraputicos 9
2.5.1. Cncer de Mama 9
2.5.2. Cncer de Prstata 10
2.5.3. Cncer de Endomtrio 11
2.5.4. Caquexia causada pelo Cncer 11
2.6. Reaes Adversas 11
2.6.1. Efeitos Potencialmente Perigosos 11
2.6.2. Efeitos Adversos Severos ou Irreversveis 12
2.6.3. Efeitos Adversos Sintomticos 12
3. ESPECTROMETRIA DE MASSA 13
OBJETIVOS 21
OBJETIVO GERAL 22
OBJETIVOS ESPECFICOS 22

xxiv
MATERIAL E MTODOS 23
1. PROTOCOLO CLNICO 24
1.1. Material e Equipamentos 24
1.2. Delineamento do Estudo 25
1.3. Seleo do Voluntrio 26
1.3.1. Exames Laboratoriais 26
1.3.2. Critrios de Incluso 26
1.3.3. Critrios de Excluso 27
1.3.4. Critrios para Retirada do Estudo 28
1.4. Entrada do Voluntrio no Estudo 28
1.4.1. Internamento 28
1.4.2. Restries 28
1.4.3. Esquema Experimental 29
1.4.4. Coleta de Sangue 29
1.4.5. Efeitos Adversos 30
1.5. Comit de tica 31
1.6. Termo de Consentimento Livre e Esclarecido 31
1.7. Confidencialidade 32
1.8. Anlise Estatstica 33
2. PROTOCOLO ANALTICO 34
2.1. Princpios do Mtodo 34
2.2. Segurana 34
2.3. Material 34
2.3.1. Equipamentos e Materiais 34
2.3.2. Padres 35
2.3.3. Reagentes 36
2.3.4. Material Biolgico 36
2.4. Preparo das Solues 36
2.4.1. Solues Padro 36
2.4.2. Soluo Padro de Acetato de Megestrol 36
2.4.3. Soluo Padro de Betametasona 37
2.4.4. Solues de trabalho 37
2.4.5. Fase Mvel usada no trabalho 37

xxv
2.5. Preparo dos Padres da Curva de Calibrao e das Amostras
Controle de Qualidade 38
2.5.1. Preparo dos padres da curva de calibrao 38
2.5.2. Preparo das amostras dos controles de qualidade 39
2.6. Preparo das Anlises 40
2.6.1. Montagem da seqncia de determinaes das amostras 40
2.6.2. Extrao das amostras 41
2.6.3. Condies cromatogrficas 42
2.6.4. Condies de deteco no espectrmetro de massas no modo
MS/MS 42
2.7. Validao do Mtodo Bioanaltico 42
2.7.1. Validao Pr-estudo 42
2.7.2. Especificidade 43
2.7.3. Curva de calibrao 43
2.7.4. Determinao do limite de quantificao 44
2.7.5. Linearidade 44
2.7.6. Preciso e exatido 45
2.7.6.1. Validao intralotes 45
2.7.6.2. Validao interlotes 46
2.7.6.3. Recuperao 46
2.8. Estudo de Estabilidade do Frmaco no Fluido Biolgico 46
2.8.1. Estabilidade de curta durao 47
2.8.1.1. Estabilidade no tempo e condies de anlise 47
2.8.1.2. Estabilidade do frmaco em ciclos de congelamento e degelo 47
2.8.2. Estabilidade de longa durao 48
2.8.3. Estabilidade das amostras de plasma no processadas 48
2.8.4. Estabilidade das solues padro 48
2.9. Determinao das Concentraes das Amostras 49
2.10. Parmetros Farmacocinticos 49
2.11. Anlise Estatstica 50
2.11.1. Material 50
2.11.2. Mtodos 50

xxvi
RESULTADOS E DISCUSSO 51
1. ETAPA CLNICA 52
2. ETAPA ANALTICA 58
3. ETAPA FARMACOCINTICA 76
CONCLUSO 82
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 84
GLOSSRIO 93
ANEXOS 101
ANEXO I Termo de Consentimento Livre e Esclarecido 102
ANEXO II Formulrio de Registro de Caso 111
ANEXO III Tabela de Randomizao das duas Formulaes 139
ANEXO IV Declarao do Comit de tica em Pesquisa 141
ANEXO V Grficos das Curvas de Concentraes contra o Tempo e os
Parmetros Farmacocinticos para cada Indivduo 143

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1. CONSIDERAES GERAIS SOBRE ENSAIOS CLNICOS

A impropriedade e ineficincia da teraputica e o desconhecimento da
fisiopatologia das doenas levaram o escritor ingls Richard Gordon a afirmar que a
histria da medicina foi, em grande parte, at os fins do sculo passado, a substituio da
ignorncia por mentiras (GORDON, 1997). Somente depois que Claude Bernard (1813-
1878), em sua obra Introduction la Medicine Experimentale, de 1865, formalizou os
critrios cientficos para reunir informaes baseadas na experimentao, que a medicina
passou a ser considerada uma cincia (GUILLN et al., 1987). Mesmo assim, a aplicao
desses critrios teraputica vinha sendo, at recentemente, lenta e inconsistente. Embora os
aspectos diagnsticos da medicina fossem abordados com sofisticao cientfica, o valor
teraputico dos medicamentos era determinado pela tradio de uso e o testemunho dos
mdicos. Em funo disso, a avaliao da descoberta e do aperfeioamento de novos
medicamentos teve como histria um processo de risco e ineficincia (CHAST, 1995).

Os ensaios clnicos, seguindo princpios ticos e cientficos de experimentao,
so os responsveis pelas bases da avaliao de eficcia e segurana de frmacos ou
medicamentos. Os primeiros estudos de pesquisa clnica controlada foram iniciados por
Harry Gold, em 1930, mdico da Cornell University EUA seguida por Amberson, Mc
Mahon e Pinner (1931), que introduziram os ensaios clnicos simples cegos, randomizados
e controlados. Posteriormente Harry Gold (1950) passou a adotar os ensaios duplos cegos.
Apesar disso, o termo Farmacologia Clnica, referindo-se investigao de frmacos em
seres humanos, somente foi introduzido nos meios cientficos em 1952 (FACKLAND &
FACKLAND, 1992).

As leis do FDA, que regulamentam a introduo de novos frmacos para uso
teraputico, tornaram-se mais rigorosas na dcada de 60, com o Harry-Kefauver
Amendment (1962), aps o desastre internacional da Talidomida, quando se passou, ento,
a exigir a utilizao formal das tcnicas dos ensaios clnicos duplos-cegos, randomizados e
controlados, como forma de comprovar no s a segurana, mas, tambm, a eficcia dos
frmacos candidatos comercializao (UNITED STATES PHARMACOPEIAL
CONVENTION, 1995).

3

A utilizao dos ensaios clnicos foi a resultante lgica das necessidades mdicas
de cobertura de hiatos teraputicos, em permeio com os imperativos econmicos do
crescimento industrial e com o crescente rigor das reparties governamentais de vigilncia
sanitria. Alm de ser tcnica de conhecimento obrigatrio para os especialistas da rea,
figura-se como indispensvel componente da cultura mdica atual, especialmente no que
concerne crtica aos trabalhos teraputicos que perfazem cerca de 20 a 30% das
publicaes mdicas (ROCHON et al., 1998).

No Brasil, as pesquisas frmaco-clnicas foram iniciadas com psicotrpicos, na
dcada de 80, pelo professor Elisaldo Carlini, no Departamento de Psicobiologia da Escola
Paulista de Medicina, atual Universidade Federal Paulista. Entretanto, somente com os
estudos de biodisponibilidade, bioequivalncia e interaes medicamentosas realizados pelos
professores Dr. Gilberto de Nucci (Universidade de So Paulo), Dra. Maria Elisabete Amaral
Moraes, Dr. Manoel Odorico de Moraes e Dr. Fernando Antnio Frota Bezerra
(Universidade Federal do Cear), no incio da dcada de noventa, que a pesquisa com
medicamentos no nosso pas comeou a ser amplamente divulgada no meio cientfico
nacional e internacional (MORAES & MORAES, 2000).

De acordo com o Food and Drug Administration (FDA), produtos farmacuticos
so considerados equivalentes teraputicos somente se eles so equivalentes farmacuticos e
se deles pode-se esperar obter o mesmo efeito clnico e perfil de segurana quando
administrado para pacientes sob condies especficas.

Os estudos de bioequivalncia podem ser estudos abertos e cruzados ou em
algumas situaes especiais, em paralelo. Durante a realizao do estudo, os voluntrios
tomam as formulaes teste e referncia aleatoriamente em dois perodos distintos,
utilizando-se geralmente uma populao pequena de voluntrios adultos e saudveis,
composta de 24 a 36 voluntrios (BENETT, 1999).

A utilizao de voluntrios saudveis baseada no fato de que diversas
patologias podem alterar a biodisponibilidade dos frmacos e podem fornecer dados

4
errneos de suas biodisponibilidades. Para evitar essas variveis os voluntrios so
submetidos a avaliaes clnicas e laboratoriais, a fim de confirmar o seu estado de higidez.

Doses nicas dos medicamentos teste e referncia so administradas em perodos
diferentes, havendo entre eles, um intervalo adequado para garantir que no haja efeitos
residuais, que influenciaria artificialmente os resultados (HOWARD et al., 2000). As
amostras sanguneas so coletadas para posterior quantificao, antes e aps a administrao
de cada formulao, e em intervalos pr-estabelecidos para obteno dos perfis
farmacocinticos necessrios para se determinar a bioequivalncia.

Medidas da rea sob a curva de concentrao plasmtica (ASC) versus tempo e o
pico de concentrao plasmtica (C
max
) so avaliados empregando-se procedimentos
estatsticos (BENETT, 1999). O mtodo mais comumente empregado o mtodo
trapezoidal. Essa curva pode ser descrita por uma srie de trapzios que so determinados a
cada ponto concentrao versus tempo. A rea representada pelos trapzios se aproxima da
rea sob a curva quanto maior o nmero de pontos coletados, quanto maior o nmero de
pontos maior vai ser esta aproximao. A rea do trapzio igual metade do produto da
soma das alturas versus a largura. ASC= (C1+C2) (T2-T1) (GIBALDI, 1999).

O rgo responsvel pelos medicamentos genricos no Brasil, Agncia Nacional
de Vigilncia Sanitria ANVISA, determina que o cronograma de coletas das amostras
sanguneas dever contemplar tempo igual ou superior a 3 a 5 vezes meias-vidas de
eliminao do frmaco ou metablito ativo (BRASIL, 2003b).

A bioequivalncia de duas formulaes fornecida atravs da comparao das
biodisponibilidades dos medicamentos teste e referncia. Um medicamento considerado
bioequivalente quando as taxas e a extenso da absoro verificada atravs dos valores de
C
max
e da rea sob a curva de concentrao versus tempo devem-se encontrar dentro de um
intervalo de 80 a 125% considerando um intervalo de confiana de 90% proposto pelo FDA
e ANVISA (Brasil, 2003b).

As regulamentaes do FDA estabelecem que duas formulaes que apresentam
taxa e extenso de absoro variando entre 20% a +25% so geralmente considerados

5
bioequivalentes. O uso do intervalo de 20% a +25% baseado numa deciso mdica que,
para a maioria dos medicamentos, essa diferena na concentrao do ingrediente ativo no
sangue no ser clinicamente significante (FDA, 1997).

Todos voluntrios selecionados para participar dos estudos de bioequivalncia
devem ser orientados sobre o protocolo, seus riscos e benefcios e assinam um termo de
consentimento livre e esclarecido, autorizando formalmente a sua participao no estudo,
antes do seu incio.

O projeto de pesquisa, com o protocolo experimental e o termo de consentimento
devem ser submetidos a um Comit de tica em Pesquisa. Assim como outros estudos
clnicos, os estudos de bioequivalncia devero ser conduzidos de acordo com a Declarao
de Helsinque (1964) e as revises de Tquio (1975), Veneza (1983), Hong Kong (1989),
frica do Sul (1996) e Edimburgo (2000) e a Resoluo 196/96 e 251/97 do CNS-MS.

O primeiro teste de bioequivalncia realizado no Brasil foi em 1989. At ento,
esse tipo de estudo era desconhecido no pas. Sabia-se apenas da experincia internacional,
enquanto o Brasil era palco para o mercado de centenas de medicamentos similares e com
Denominao Comum Brasileira (DCB), cpias supostamente fiis aos originais que os
inspiravam, porm sem a devida comprovao de qualidade, eficcia e segurana (LEITO,
2001).

Aps 15 anos dos primeiros estudos de bioequivalncia, pode-se observar um
grande avano nessa rea, uma vez que se trabalhava com estrutura precria e com enorme
ceticismo da comunidade cientfica. Atualmente o Brasil conta com tecnologia de ponta,
estrutura fsica adequada e corpo cientfico qualificado, o que contribui para a credibilidade
que agora faz jus a esta nova rea de pesquisa, a Farmacologia Clnica.

6
2. ACETATO DE MEGESTROL

O acetato de megestrol (C
24
H
32
O
4
) um derivado sinttico da progesterona e seu
uso no tratamento do cncer de mama avanado bem estabelecido. Tambm tem papel na
terapia de certos tumores hormnio-dependente (DOLLERY, 1999).

designado quimicamente como 17-hidroxi-6-metilpregna-4, 6-diene-3, 20-
dione acetato, um composto branco cristalino obtido por sntese qumica, cujo peso
molecular de 384,5 g/mol (Figura 1). Possui solubilidade em gua menor que no lcool,
sendo de aproximadamente 1:10000 e 1:60 respectivamente, com coeficiente de partio
octanol/gua elevado (DOLLERY, 1999).

Figura 1. Frmula estrutural do acetato de megestrol.

2.1. FARMACOLOGIA

Existem dois grupos principais de progestgenos: a progesterona e seus
anlogos, e certos anlogos da testosterona. O acetato de megestrol um progestgeno
sinttico que modifica alguns dos efeitos do estrgeno quando age sob o tecido sensibilizado
pelo estrgeno. As propriedades farmacolgicas do acetato de megestrol so similares a
progesterona natural.

A maturao estrgeno-induzida do epitlio vaginal modificada pelo acetato de
megestrol para um estado mais semelhante situao esperada durante a gravidez. Os cinos
na glndula mamria proliferam sob a influncia do estrgeno e dos progestgenos. O
acetato de megestrol possui uma atividade anti-estrognica significante, mas no apresenta
efeito andrognico. Tem alguns efeitos antigonadotrpico e tambm pouca atividade
glicocorticide e mineralcorticide (DOLLERY, 1999).

7

O efeito da administrao crnica de acetato de megestrol no crescimento de
tumor pituitrio estrgeno-induzido tem sido bem estudado em ratos. Esse tumor secreta
prolactina e adrenocorticotrofina (LAMBERTS et al., 1981). No modelo usado, o acetato de
megestrol tem alguns efeitos supressivos em crescimento tumoral no fim do perodo de
tratamento. O acetato de megestrol provavelmente age ligando-se ao receptor de
progesterona.

2.2. TOXICOLOGIA

Estudos de toxicidade animal com o acetato de megestrol tm mostrado
hiperplasia endometrial e depresso da adrenal, timo, tero e ovrios nos testes em ratos aps
administrao por longo tempo. O uso prolongado de acetato de megestrol, em cadelas,
resultou num aumento da incidncia de tumores de mama benignos e malignos (WEIKEL et
al., 1977). No entanto, estudos comparativos entre ratos e macacos no demonstraram este
aumento na incidncia dos tumores acima descritos.

Em pacientes com avanado cncer de prstata hormnio-resistente, o risco de
progresso rpida da doena deve ser lembrado quando progestgenos so administradas
como um tratamento paliativo para caquexia do cncer (TASSINARI et al., 2003).

2.3. FARMACOLOGIA CLNICA

O acetato de megestrol, que apresenta um consagrado efeito progestognico em
humanos, inicialmente usado como tratamento hormonal de alguns tumores, tais como
cncer avanado de mama, do endomtrio e de prstata (ERLICHMAN et al., 2001). Na
dose usada para a atividade progestognica, muitos pacientes apresentaram ganho de peso.
Muitos autores tm hipotetizado um envolvimento de vrias citocinas (fator de necrose
tumoral-alfa, interleucina-1, interleucina-6 e interferon-gama) na patognese da anorexia-
caquexia do cncer e sugeriram que altas doses de progesterona podem levar a uma
diminuio da cascata de citocinas, e representar um importante papel na minimizao da
sndrome anorexia-caquexia (NELSON, 2000; DAVIS et al., 2000; MANTOVANI et al.,

8
1998; GAGNON et al., 1998; MALTONI et al., 2001). Existem raramente efeitos
farmacolgicos clnicos sistmicos, sendo estes referentes a aumento na presso arterial.

2.4. FARMACOCINTICA

O acetato de megestrol completamente absorvido por via oral nas doses de 20,
40, 80 e 200mg. Grandes diferenas intra e interindividuais na absoro e no metabolismo do
acetato de megestrol foram registradas (DIKKESCHEI et al., 1990). Existem alguns
mtodos usados para estimar os nveis plasmticos de acetato de megestrol, incluindo o
radioimunoensaio (ALEXIEVA-FIGUSCH et al., 1984) e a cromatografia gasosa acoplada a
espectrometria de massa, at ento, considerada a tcnica de escolha (BJRKHEM et al.,
1976).

Os nveis plasmticos de acetato de megestrol podem sofrer variao de acordo
com a escolha do mtodo analtico utilizado. Variaes tambm podem ocorrer devido a
fatores que alterem a biodisponibilidade do frmaco, como inativao intestinal e heptica
do frmaco, que podem ser afetadas por fatores como motilidade intestinal, bactrias
intestinais, administrao de antibiticos, peso corpreo, dieta e funo heptica. Trs
maiores metablitos foram identificados como glicurondeo conjugado em urina: 17-
acetoxi-2--hidroxi-6-metilpregna-4,6-dien-3,20-diona; 17-acetoxi-2--hidroxi-6-
hidrometilpregna-4,6-dien-3,20-diona; 17-acetoxi-2--hidroxi-6-hidroximetilpregna-4,6-
dien-3,20-diona. A maior parte da dose administrada, cerca de 57- 78%, excretada na urina
na forma de metablitos. No se tem relato da existncia do acetato de megestrol inalterado
na urina. Cerca de 30% da dose excretada nas fezes (DOLLERY, 1999).

A dose nica diria de 160 mg produz nveis plasmticos similares aos
encontrados aps a administrao das quatro doses de 40 mg. O pico de concentrao
plasmtica foi obtido cerca de 3 horas aps a administrao de uma dose nica. A curva de
concentrao plasmtica parece ser bifsica, com meia-vida plasmtica variando entre 15 a
20h. O acetato de megestrol atravessa a barreira placentria e eliminado pelo leite materno
(DOLLERY, 1999).

9
No h clara evidncia de qualquer relao entre a concentrao plasmtica de
acetato de megestrol e seu efeito contra o cncer (ADLERCREUTZ et al., 1983).

2.5. USOS TERAPUTICOS

2.5.1. Cncer de Mama

O mecanismo pelo qual o acetato de megestrol age no cncer de mama ainda no
est totalmente estabelecido. Como todos os tratamentos hormonais, ele mais efetivo nos
tumores que contm receptores para estrgeno onde promove uma supresso do crescimento
celular ou um aumento na taxa de apoptose por diminuio de receptores. Separando-se
pacientes em dois grupos, sendo um receptor de estrgeno positivo e o outro negativo,
observou-se que mais de 50% dos casos de receptor de estrgeno positivo apresentaram
remisso durante tratamento com acetato de megestrol (BRITISH BREAST GROUP, 1980;
TEULINGS et al., 1980; BENRAAD et al., 1980; ALEXIEVA-FIGUSCH et al., 1981). A
aparente contradio no sucesso do tratamento com altas doses de dietilbistrol no tratamento
do cncer de mama ps-menopausa pode ser explicada por uma diminuio semelhante
induzida por altas doses e exposio contnua prolongada.

Desde as primeiras publicaes de remisso do cncer de mama atravs da
terapia com progesterona no comeo de 1950 (GORDON et al., 1952), doses convencionais
eram usadas com sucesso moderado (STOLL, 1976; MUGGIA et al., 1968), levando a uma
diminuio do interesse nessa terapia. Tornou-se mais efetiva quando altas doses foram
aplicadas (MATTSON, 1978; PANUTTI et al., 1978).

O acetato de megestrol usado como terapia de segunda linha, quando outras
terapias endcrinas falharam. Uma taxa de 64% de resposta foi obtida num estudo com 48
pacientes, com uma durao mdia de resposta de 7 meses (ROSS et al., 1982). Entretanto,
quando o acetato de megestrol tem sido usado como tratamento de primeira linha se obtm
uma taxa de resposta de 24 a 60% (ANSFIELD et al., 1974; GREGORY et al., 1985;
BONOMI et al., 1985; MORGAN, 1985). A durao mdia da resposta nestes casos foi
superior a um ano.

10
2.5.2. Cncer de Prstata

Em 1941, Huggins e Hodges mostraram primeiro a notvel regresso que pode
ser obtida ou com castrao ou terapia estrognica, atravs da reduo da circulao de
testosterona plasmtica (HUGGINS et al., 1941). Entretanto, esses tratamentos so
associados com angstia e graves efeitos colaterais. Mtodos alternativos surgiram ao longo
dos anos e, em particular, progestgenos tem mostrado ser potente no bloqueio andrognico
(GELLER et al., 1967). Tem sido postulado que o efeito antiandrognico mediado pela
glndula pituitria ou por ao direta nas clulas intersticiais da prstata (MALTRY, 1970).

O acetato de megestrol, na dose de 160 mg/dia (JOHNSON et al., 1975), tem
demonstrado um efeito significante com bloqueador andrognico.

Estudos clnicos subsequentes tm confirmado o efeito benfico do acetato de
megestrol (MALTRY, 1970; GELLER et al., 1978; BONOMI et al., 1985). A taxa de
resposta relatada varia consideravelmente de acordo com as circunstncias. Os melhores
resultados foram relatados quando o acetato de megestrol foi usado como terapia de primeira
linha. A durao mdia da resposta foi de aproximadamente um ano. Durante o perodo de
resposta observou-se uma regresso da doena e reduo da fosfatase cida prosttica.

Protocolos para tratamento hormonal de cncer avanado de prstata tm
mudado recentemente e novos dados esto emergindo sobre a manipulao hormonal do
cncer de prstata hormnio-resistente (GOKTAS et al., 1999; SMALL et al., 1997;
DAWSON, 1998; JENSTER, 1999; BRUCHOVSKY et al., 1990; DALIANI et al., 1999;
TAPLIN et al., 1995). Mudanas funcionais nos receptores andrognicos tm sido
hipotetizadas e antiandrgenos podem talvez agir na mutao desses receptores,
representando um papel na promoo do crescimento tumoral e progresso da doena sob o
bloqueio andrognico total (JENSTER, 1999; BRUCHOVSKY et al., 1990; DALIANI et
al., 1999; TAPLIN et al., 1995).

Acetato de megestrol agora tem um lugar bem estabelecido no tratamento de
cncer avanado de prstata, embora ainda no exista um consenso claro de escolha para o
modelo de terapia (CRAWFORD, 1994).

11
2.5.3. Cncer de Endomtrio

Progesterona apresenta um efeito direto sobre o endomtrio, sendo considerado o
tratamento de primeira escolha nos pacientes com carcinoma endometrial avanado ou
recorrente. Tem-se demonstrado sucesso no controle da doena por perodos variveis em 15
a 30% dos pacientes. O acetato de megestrol tem apresentado resposta em 39% dos casos
(WAIT, 1973) e aumentou a sobrevida mdia de 12 para 30 meses (WENTZ, 1985).

A dose recomendada para o tratamento do cncer avanado de endomtrio de
80 mg, quatro vezes ao dia. A dose total diria de 320mg pode ser usada com sucesso
teraputico com mnimos efeitos colaterais.

2.5.4. Caquexia causada pelo Cncer

Um curto perodo de uso de acetato de megestrol resultou em significante ganho
de peso e melhorou a funo pulmonar de pacientes com fibrose cstica (EUBANKS et al.,
2002). A caquexia um srio problema que ocorre com o desenvolvimento do cncer. O
tratamento com o acetato de megestrol eficaz e seguro, tendo obtido bons resultados no
combate a este evento, j que promove aumento do apetite e ganho de peso em pacientes
com sndrome da anorexia-caquexia ou SIDA (LPEZ et al., 2004).

2.6. REAES ADVERSAS

2.6.1. Efeitos Potencialmente Perigosos

O acetato de megestrol pode induzir uma predisposio ao tromboembolismo,
mas no h relatos de caso confirmado.

2.6.2. Efeitos Adversos Severos ou Irreversveis

Raramente pode ocorrer trombose venosa, embolia pulmonar, insuficincia
cardaca e hipertenso. Tendo em vista a populao de pacientes que fazem uso do frmaco,
difcil afirmar se estes so efeitos realmente da medicao.

12

Durante a terapia prolongada com acetato de megestrol, pode-se desenvolver a
sndrome de Cushing (STEER, 1995). Pode ocorrer tambm supresso da adrenal e
insuficincia adrenal aguda aps a descontinuao da terapia (LEINUNG et al., 1995).

Foi relatada catarata subcapsular em pacientes que receberam acetato de
megestrol, mas a relao causa e efeito no foi provada (ARONSON et al., 1993).

2.6.3. Efeitos Adversos Sintomticos

O efeito sintomtico do acetato de megestrol mais constante o ganho de peso,
associado ou no com reteno de lquidos, mas sempre com aumento de apetite. Outros
efeitos sintomticos so nusea, vmito, edema e secura vaginal, face de Cushing,
hiperglicemia e alopcia. A urticria tem sido relatada em alguns casos aps o uso
prolongado.

13
3. ESPECTROMETRIA DE MASSA

A espectrometria de massa uma tcnica analtica poderosa usada para
identificar compostos desconhecidos, quantificar materiais conhecidos e elucidar as
propriedades qumicas e estruturais das molculas. A deteco de compostos pode ser
conseguida para quantidades to pequenas como 10
-15
g para um composto de massa de 1000
dalton. Isto significa que os compostos podem ser identificados em concentraes muito
baixas (da ordem de 10
-12
) em misturas quimicamente complexas. A espectrometria de
massa fornece informao tanto para qumicos, quanto para fsicos, engenheiros,
bioqumicos e bilogos, entre outros profissionais.

Os princpios cientficos em que a tcnica se baseia so simples. A essncia da
tcnica envolve a gerao de ons que so depois detectados. A sofisticao surge nos
mtodos que so usados para a gerao desses mesmos ons e no modo de analis-los (Figura
2).

Figura 2. Esquema de funcionamento do sistema de espectrometria de
massa.

Uma das tcnicas de ionizao, em maior expanso, por eletrospray que passou
por duas fases distintas de investigao e desenvolvimento. A primeira ocorreu antes de
1970 e centrou-se mais nos aspectos fundamentais do processo de produo de carga, como
torn-lo vivel, cabendo, aqui, salientar o trabalho realizado por Dole e colaboradores
(1968). A segunda fase deu-se a partir de 1970 com destaque para o trabalho desenvolvido

14
em 1984 por Yamashita e Fenn, considerado pioneiro da espectrometria de massa de
ionizao por eletrospray (IES). A partir deste trabalho, a tcnica sofreu um aperfeioamento
notrio com o desenvolvimento e construo de fontes inicas comercializveis baseadas no
princpio de carregar gotas eletricamente.

H, essencialmente, trs caractersticas que a diferencia das outras tcnicas de
ionizao. A primeira delas a capacidade para produzir ons multiplamente carregados,
com nmero de cargas elevado, reduzindo, assim a razo m/z, de tal modo que seja possvel
analisar compostos de elevada massa molecular at centenas de kDa, em praticamente todo o
tipo de analisadores. Uma segunda caracterstica que as amostras a serem analisadas devem
ser introduzidas em soluo, tornando possvel o acoplamento com muitas tcnicas de
separao. Por ltimo e no menos importante, h o fato de ser o eletrospray uma tcnica de
ionizao suave, permitindo que as interaes no covalentes entre molculas que existem
em soluo sejam preservadas na fase gasosa.

O desenvolvimento da espectrometria de massa de IES permitiu, assim, novas
possibilidades para anlise de compostos de elevada massa molecular de todos os tipos,
incluindo protenas, nucleotdeos e polmeros sintticos, sendo por isso uma tcnica muito
usada em diversas reas de pesquisa.

Comparvel ao excitante desenvolvimento da ressonncia magntica nuclear
durante as ltimas trs dcadas, a espectrometria de massa entrou em uma fase de
crescimento acelerado nos anos oitenta, comeando com a introduo de mtodos de
ionizao. incrvel a velocidade com a qual a espectrometria de massa tem se expandido
dentro de reas de pesquisa, nas quais, tradicionalmente, era limitado o seu uso (SIUZDAK,
2004).

No comeo da dcada de 40, Lawrence desenvolveu uma separao baseada em
espectrometria de massa para melhorar a radioatividade do urnio
235
U da distribuio
isotpica normal (SMITH et al., 1947; YERGEY & YERGEY, 1997). Como parte do
projeto Manhatan, Lawrence aplicou esse mtodo para purificao do
235
U radioativo, o qual
foi ento usado para construir a primeira bomba nuclear. Desde ento, estes experimentos
iniciais destinados gerao e separao de istopos de urnio esto bem estabelecidos. At

15
agora, a separao de compostos baseados na massa , certamente, uma idia intrigante da
qual no se perde o interesse (SIUZDAK et al., 1999).

A cincia da espectrometria de massa sofreu dramticas mudanas na dcada
passada e a expanso da sua utilidade tem aumentado, como na extenso da massa e
sensibilidade da instrumentao. Mais especificamente, a espectrometria de massa de
eletrospray (FENN et al., 1990) tem sido aplicada em diversas reas, alm da rotina da
determinao molecular, especialmente na qumica e bioqumica (SIUZDAK, 1996).

A produo de ons em eletrospray requer essencialmente dois passos: disperso
de gotas altamente carregadas quase presso atmosfrica, seguida de evaporao da gota
em condies que a permitam.

As solues so primeiramente pulverizadas eletrostaticamente com formao de
gotas pequenas e altamente carregadas. A nebulizao da soluo , em alguns casos,
facilitada pela ajuda de um gs nebulizador. Posteriormente, as molculas de analito devem
de alguma forma ser separadas do solvente na forma de ons. Este passo de formao de
ons, como em muitas das tcnicas de ionizao consideradas suaves, provavelmente o
menos compreendido no processo global do eletrospray. Alguns mecanismos tm sido
propostos para a desadsoro de ons a partir de gotas carregadas, sendo que o modelo de
resduo de carga de Dole (1968), aplicado a macromolculas, foi, talvez, o primeiro a servir
de base para a atual tcnica de eletrospray. Nesse modelo considerado que, medida que o
solvente se evapora, a densidade de carga superfcie aumentar at que as foras repulsivas
de Coulomb, entre as cargas superficiais, excedero a tenso superficial levando diviso da
gota inicial. Se esse processo de diviso continuar e se a soluo original for suficientemente
diluda, ser alcanado um estado no qual cada gota conter uma nica molcula que reter
parte da carga inicial, ou seja, formar-se-o macro ons.

Um outro mecanismo, para a gerao de ons pequenos, o da evaporao inica,
foi proposto por Iribarne e Thomson (1976) que sugeriram que a evaporao do solvente
conduz a uma instabilidade das gotas com razes elevadas de densidade de carga
superficial/raio da gota. A energia eletrosttica associada com a gota carregada torna-se,
ento, suficientemente grande para desadsorver ons do analito para a fase gasosa.

16
Este mecanismo foi aplicado a macromolculas por Fenn (1988), o qual props
que, uma parte da molcula carregada podia penetrar a superfcie da gota, devido a
movimento Browniano. A existncia de repulso coulombiana, entre esta parte da molcula e
a superfcie da gota, puxar a molcula para fora da gota.

As fontes inicas dos espectrmetros de massa esto, em geral, situadas numa
regio de alto vcuo. A fonte de IES encontra-se presso atmosfrica e a evaporao do
solvente muitas vezes completada por intermdio de um fluxo contra corrente de um gs,
em geral, argnio. Os ons gerados so, depois, transferidos desta zona de alta presso para a
zona de alto vcuo do analisador de massa.

Muitos so os sistemas de eletrospray que tm sido construdos (COLE, 1997;
NIESSEN, 1999), diferindo, entre si, em alguns dos componentes. Porm, na sua essncia,
so constitudos por um sistema de introduo de amostra, regio da fonte onde os ons so
gerados, um orifcio para amostragem de ons e um sistema de transferncia inica, onde os
ons so transportados para o analisador de massa (Figura 3).

Figura 3. Diagrama esquemtico do processo de eletrospray. Um potencial
eltrico aplicado entre a extremidade do spray e o orifcio do espectrmetro em
combinao com um fluxo criando um cone Taylor de gotas carregadas. A
dessolvatao leva a carga do lquido para o analito, sendo, ento, analisado no
espectrmetro de massa (Direitos Autorais de PharmaGenomics, 2003).

amostra
IES
cone
Taylor
gotas
carregadas
Presso
Atmosfrica
ons
analito
Espectrmetro
de Massa
3 kV
vcuo
gotas
carregadas
Dessolvatao
limite
atingido
repulsso
Coulomb
on
analito
on
solvente

17
Em primeiro lugar, temos um capilar de ao inoxidvel, mantido a um potencial
relativamente elevado em relao a um contra-eletrodo, onde o analito em soluo
introduzido e pulverizado na sua extremidade, sendo que o sinal do potencial aplicado
determina a polaridade das gotas e dos ons formados. A presso entre o capilar e o contra-
eletrodo a presso atmosfrica, sendo em seguida os ons amostrados atravs de um cone
ou orifcio, passando os ons para uma zona intermediria, mantida a uma presso mais baixa
por meio de uma bomba rotatria. Os ons atravessam, em seguida, um skimmer, em direo
ao analisador, que se encontra a alto vcuo. O skimmer funciona como um separador de
momento, sendo que os ons analito mais pesados passam atravs dele, enquanto que as
molculas mais leves de gs e solvente so bombeadas (Figura 4).

Figura 4. Esquema da origem inica por eletrospray (Direitos Autorais de
American Chemical Society, 1985).

A cromatografia gasosa associada espectrometria de massa (GC/MS) tem sido
considerada uma tcnica analtica adequada para a anlise de misturas complexas. Tem, no
entanto, a grande limitao de ser aplicvel apenas a molculas relativamente volteis e
termicamente estveis. Um acoplamento semelhante entre a cromatografia lquida e a
espectrometria de massa (LC/MS) era, por isso, de todo o interesse, para a anlise de
compostos sem essas caractersticas, para os quais a anlise por GC/MS s podia ser
utilizada recorrendo a derivatizaes que tornam o processo analtico muito demorado.

Skimmer
1 Etapa
da
Bomba
2 Etapa
da
Bomba
Quadrupolo
Lentes
Eletrostticas
Capilar
Gs
Eletrodo
Cilndrico
Amostra

18
A IES atravs da espectrometria de massa sofreu um rpido crescimento,
tornando-se, assim, uma tcnica analtica fundamental para anlise de uma vasta gama de
compostos polares, no volteis e termicamente instveis, indo de compostos de baixa massa
molecular at biopolmeros de elevada massa molecular. Os melhores resultados analticos
so, em geral, obtidos para analitos que so inicos em soluo e, de se acreditar que os
ons observados na fase gasosa so, pelo menos, um reflexo qualitativo dos ons na soluo
da amostra original, retendo aspectos da sua estrutura e associaes no covalentes. O maior
sucesso da tcnica tem sido na sua aplicao na anlise de molculas biolgicas no volteis.
Em princpio, todas as molculas que podem ser carregadas so acessveis a uma anlise por
espectrometria de massa. Entre estas, encontram-se os peptdeos e protenas que podem ser
protonados principalmente nas zonas bsicas, ou seja, nos grupos terminais amino. Os
oligonucleotdeos podem ser carregados no modo inico negativo. Neste caso, o grupo
fosfato fornece a carga por abstrao do prton. Molculas neutras, tais como
oligossacardeos, podem tambm ser detectadas, porque podem se ligar a ons sdio ou
outros metais alcalinos como agente de carreamento.

Atravs da tcnica, tm-se estudado as estruturas primrias, secundrias,
tercirias e quaternrias de protenas. No que diz respeito estrutura primria, a tcnica
permite, no s a determinao da massa molecular, como tambm a determinao da
seqncia dos peptdeos na molcula.

O analisador mais utilizado, e mesmo, o primeiro a ser comercializado em
eletrospray atravs da espectrometria de massa, o quadrupolo. Isto se deve, em princpio,
ao fato de os quadrupolos serem relativamente baratos, fceis de usar e capazes de fornecer
bom rigor nos valores de massa medidos.

O analisador de massa quadrupolo constitudo por quatro eletrodos cilndricos
de geralmente 5-11 cm de comprimento. Cada cilindro tem aplicado uma voltagem de
corrente direta e um adicional potencial de freqncia de radio. Dois dos cilindros tm uma
corrente direta de carga positiva, enquanto as outras duas tm carga negativa. A fase de
freqncia de radio oposta para os eletrodos positivos e negativos (Figura 5).

19

Figura 5. Ilustrao do filtro de massa quadrupolo.

As principais caractersticas dos espectros de massa de biomolculas so a
predominncia de ons moleculares multiplamente carregados e a ausncia de fragmentao
que permitem a determinao rigorosa de massas moleculares. No entanto, no que diz
respeito estrutura molecular, pouca informao, em geral, obtida. A dissociao pode
ainda ser provocada por ativao colisional na regio de decomposio de um espectrmetro
acoplado a outro (MS/MS), sendo esta tcnica relevante na obteno de informao
estrutural de molculas. Uma mistura de compostos introduzida e, com o primeiro
espectrmetro de massa, seleciona-se um on de interesse. Este depois dissociado entre os
dois espectrmetros, geralmente por coliso com gs argnio a uma certa presso,
transformando a energia cintica em energia vibracional. O segundo espectrmetro separa e
determina os valores de m/z dos ons fragmentados para posterior deteco (ANTIGNAC et
al., 2000). A Figura 6 mostra o esquema da fragmentao utilizando espectrmetro de massa
triplo-quadrupolo no modo de monitoramento de reao mltipla (MRM).
Voltagens dc e ac Fonte
on ressonante
on no-ressonante

20

Figura 6. Esquema demonstrativo da fragmentao de compostos utilizando
espectrmetro de massa triplo-quadrupolo no modo de monitoramento de reao
mltipla (MRM).

possvel gerar tanto ons atmicos quanto ons moleculares de quase todos os
materiais e introduzir, eficientemente, esses ons no sistema de vcuo do espectrmetro de
massa para anlise. Excetuando os polmeros orgnicos no polares, que so difceis de
ionizar, parece no ter limite de tamanho e complexidade das molculas que podem ser
ionizadas e analisadas. Durante a dcada passada, no foram introduzidos novos mtodos de
ionizao, mas enormes avanos foram feitos na sensibilidade e utilidade deles. Esse
desenvolvimento tem ocorrido em paralelo com o melhoramento dramtico dos analisadores
de massa, incluindo melhor resoluo, acurcia, sensibilidade e velocidade de anlise. A
aplicao dessas tcnicas tem crescido exponencialmente, particularmente nas cincias da
vida. Parece que a tecnologia do espectrmetro de massa est se aproximando da
maturidade, porm as aplicaes ainda esto na infncia (VESTAL, 2001).

Mistura de
compostos
Seleo do
on de
interesse
Dissociao
Seleo do on
fragmento de
interesse
FONTE Q1 Q2 Q3 DETECTOR

21

O
O
B
B
J
J
E
E
T
T
I
I
V
V
O
O
S
S

22

OBJETIVO GERAL:

Determinar um mtodo seguro, sensvel, especfico, de alta resoluo, preciso e
acurcia para quantificao do acetato de megestrol em plasma humano por cromatografia
lquida de alta eficincia acoplada ao espectrmetro de massa por ionizao de eletrospray.

OBJETIVOS ESPECFICOS:

- Avaliar as vantagens da determinao analtica do acetato de megestrol obtidas
pela espectrometria de massa em relao aos mtodos anteriores.

- Analisar os parmetros farmacocinticos do acetato de megestrol para as duas
formulaes administradas em um estudo de bioequivalncia.

23

M
M
A
A
T
T
E
E
R
R
I
I
A
A
L
L
E
E
M
M
T
T
O
O
D
D
O
O
S
S

24

1. PROTOCOLO CLNICO

1.1. MATERIAL E EQUIPAMENTOS

O material e os equipamentos utilizados na etapa clnica esto descritos nas
Tabelas 1 e 2.

Tabela 1: Material utilizado na etapa clnica dos testes de bioequivalncia.
Material Utilizado para Coleta Fabricante
Agulhas descartveis 25x8 BD USA
Agulhas 21G x 1 Vacutainer BD USA
lcool 70% HUWC-UFC
Algodo Johnson and Johnson USA
Coletores de fezes Fornecido pelo LabPasteur
Coletores de urina Fornecido pelo LabPasteur
Pipetas ajustveis (100L, 200L, 1000L) Gilson Pipetman, Frana
Ponteiras plsticas para pipetas (5-200L) Unilab, Brasil
Ponteiras plsticas para pipetas (capacidade
200-1000L)
Unilab, Brasil
Seringas descartveis de 10 mL BD USA
Suporte para conexo da agulha BD USA
Tubos Vacutainer BD USA
Tubos plsticos para armazenar soro Cornning Corning Costar Corporation Canad

25
Tabela 2: Equipamentos utilizados na etapa clnica dos testes de bioequivalncia.
Aparelhos Fabricante
Termmetro thermo flat Becton Dickinson Ind. Cirrgicas Ltda Brasil
Esfignomanmetro Tycos 7050-14 Tycos USA
Estetoscpio Lytmman USA
Eletrocardigrafo Dixtal Brasil
Balana Balmak- Brasil
Centrfuga Eppendorf
Freezer horizontal 20 C Eletrolux-Brasil

1.2. DELINEAMENTO DO ESTUDO

A pesquisa consistiu de um estudo aberto, com replicao, de 30 voluntrios
sadios do sexo masculino. Depois da seleo e observado um perodo de pelo menos 4
semanas, sem fazer uso de qualquer medicao, os voluntrios qualificados para participar
do estudo foram internados por dois perodos de, aproximadamente, 36 horas, com intervalo
de 27 dias entre os internamentos. Em cada internamento, os voluntrios receberam a
formulao Acetato de Megestrol ou Megestat
.

Os voluntrios sero randomicamente designados a uma das seguintes
seqncias de tratamento.

Tabela 3: Definio das seqncias de tratamento.
Perodo de Tratamento I Perodo de Tratamento II
Sequncia
Cdigo do Brao de Tratamento Cdigo do Brao de Tratamento
1 Megestat
Acetato de Megestrol
2 Acetato de Megestrol Megestat

26
1.3. SELEO DO VOLUNTRIO

Os voluntrios foram selecionados atravs de uma avaliao clnica completa,
conduzida por um profissional mdico, que inclua a realizao de exames laboratoriais para
avaliar as funes renal, heptica e hematolgica, bem como avaliao da funo cardaca
atravs de um eletrocardiograma (ECG).

1.3.1. Exames Laboratoriais

Os seguintes exames laboratoriais foram realizados nos perodos pr-estudo
(perodo de avaliao para seleo de voluntrios saudveis) e no ps-estudo (perodo aps o
ltimo internamento):

1) Anlise Hematolgica: Hemoglobina, Hematcrito, Contagem Total e
Diferencial de Leuccitos, Contagem de Plaquetas e VHS.

2) Anlise Bioqumica: Creatinina, Bilirrubina Total, Protena Total, Albumina,
Glicose em jejum, Fosfatase Alcalina, Glutamato Oxalacetato-Transaminase (SGOT),
Glutamato Piruvato-Transaminase (SGTP), Colesterol Total, Triglicrides, cido rico e
Gama GT.

3) Sumrio de Urina

4) Exames realizados somente no perodo pr-estudo: Parasitolgico de Fezes;
Anlise Sorolgica para Hepatite B, Hepatite C, HIV (Sndrome da Imunodeficincia
Adquirida-AIDS).

1.3.2. Critrios de Incluso

Os seguintes critrios teriam que ser satisfeitos para que o voluntrio participasse
do estudo:
1. Voluntrio do sexo masculino com idade entre 18 a 50 anos;

27
2. Voluntrio possua ndice de massa corprea maior ou igual a 19 e menor ou
igual a 28;
3. Ter sido submetido a uma histria clnica e exame fsico, e ser considerado
saudvel;
4. Concordar livremente em assinar o termo de consentimento, aps todos os
elementos essenciais do protocolo serem esclarecidos, antes de qualquer procedimento.

1.3.3. Critrios de Excluso

Qualquer um dos seguintes critrios exclua o voluntrio do estudo:

1. Resultados dos exames laboratoriais fora dos valores considerados normais (
10%), a menos que fossem considerados clinicamente irrelevantes;
2. Ter Participado de qualquer estudo experimental ou ingeriu qualquer frmaco
experimental nos ltimos trs meses que antecedem o incio do estudo;
3. Fazer uso de medicao regular nas ltimas 4 semanas que antecederam o
incio do estudo, ou fez uso de qualquer medicao uma semana antes do incio do estudo;
4. Ter sido internado, por qualquer motivo, at 8 semanas antes do incio do
estudo;
5. Apresentar histria de abuso de lcool ou frmacos, ou tinha ingerido bebidas
alcolicas nas 48 horas que antecederam o perodo de internao para incio do estudo;
6. Possuir histria de doena heptica, renal, pulmonar, gastrointestinal,
epilptica, hematolgica ou psiquitrica;
7. Apresentar hipotenso ou hipertenso de qualquer etiologia que necessitasse
de tratamento farmacolgico;
8. Apresentar histria ou tinha tido infarto do miocrdio, angina e/ou
insuficincia cardaca;
9. Ter doado ou perdido 450 mL ou mais de sangue nos ltimos trs meses que
antecederam ao estudo;
10. Voluntrio do sexo feminino;
11. Ter qualquer condio que o impedia de participar do estudo pelo julgamento
do investigador.

28
1.3.4. Critrios para Retirada do Estudo

As seguintes condies foram consideradas como critrios de retirada do estudo:
o voluntrio no desejava continuar no estudo, por razes outras que a ocorrncia de eventos
adversos do frmaco teste, por exemplo, indisponibilidade ou intolerncia aos procedimentos
do estudo; reaes adversas do frmaco; testes laboratoriais anormais, julgados de relevncia
clnica; doena intercorrente requerendo medicao.

1.4. ENTRADA DO VOLUNTRIO NO ESTUDO

Uma vez avaliada a higidez, os voluntrios foram submetidos a uma entrevista
para avaliao das condies emocionais para participar da investigao. Aps retiradas
todas as dvidas, por parte dos voluntrios, e os mesmos tendo concordado com o protocolo
clnico, o termo de consentimento (ANEXO I) foi assinado, para participao no estudo.

1.4.1. Internamento

Solicitou-se ao voluntrio que se apresentasse para internamento, na Unidade de
Farmacologia Clnica - UNIFAC da Faculdade de Medicina da Universidade Federal do
Cear, aproximadamente s 21:00 horas da noite anterior administrao do medicamento, e
que permanecesse na mesma at 24 horas aps a mesma.

1.4.2. Restries

Todos os voluntrios chegaram Unidade de Farmacologia Clnica tendo feito
uma refeio normal noturna (jantar). A partir das 23:00 horas da noite do internamento, os
voluntrios ficaram em jejum at a manh seguinte e durante o perodo de 2 horas aps a
administrao da medicao, quando um desjejum foi servido. O almoo foi servido entre 5
e 6 horas aps administrao e o jantar aps 12 horas. No foram permitidos outros
alimentos no perodo de internao. Lquidos foram permitidos ad libitum aps as refeies,
mas bebidas contendo xantinas (incluindo ch, caf e cola) foram evitadas.

29
No foi permitido fumar durante o perodo de internamento. Medicaes
concomitantes foram evitadas quando possvel mas, em caso de necessidade, quando
utilizada, foi registrada em formulrio prprio. O consumo de lcool foi limitado durante o
perodo de estudo e evitado completamente durante as 48 horas que antecedem cada coleta
de sangue.

1.4.3. Esquema Experimental

Os voluntrios receberam, conforme a randomizao (ANEXO III), um
comprimido de acetato de megestrol (Tabela 4) como dose nica entre 7:00 e 8:00 da manh
do dia aps o confinamento (o tempo ser anotado no CRF ANEXO II), acompanhado de
200 mL de gua mineral sem gs, aps pelo menos 10 horas de jejum.

Tabela 4: Produtos estudados.
Formulao 1 Formulao 2
Nome Acetato de Megestrol Megestat

Ingrediente Ativo Acetato de Megestrol Acetato de Megestrol
Forma Comprimidos Comprimidos
Dose 160 mg 160 mg
Lote GE7254 2L0110
Data Fabricao 04/02 10/02
Validade 04/04 10/05
Fabricante Indstria Nacional Bristol-Myers Squibb

1.4.4. Coleta de Sangue

As amostras de sangue para determinao da concentrao plasmtica de acetato
de megestrol foram obtidas, atravs de escalpe heparinizado introduzido em veia superficial
do antebrao do voluntrio, imediatamente antes da administrao de uma das preparaes
de acetato de megestrol (tempo zero e pool) e aos seguintes intervalos, a partir da
administrao: 1:00, 1:30, 2:00, 2:30, 3:00, 3:30, 4:00, 5:00, 6:00, 8:00, 12:00, 16:00, 24:00,
36:00, 48:00, 72:00, 96:00, 120:00 e 144:00 horas.

30
A cada intervalo de tempo, foram coletados 8 mL de sangue (exceto antes da
administrao quando foram coletados dois tubos de 8 mL cada tempo zero e pool) e
colocados em tubos vacutainer de vidro contendo 30 L de heparina. Aps centrifugadas a
3.000 rpm, na temperatura de 8C, durante 12 minutos, o plasma foi separado, colocados em
tubos e em seguida os tubos devidamente identificados foram mantidos em freezer, numa
temperatura de 20C, at sua anlise.

Trs dias aps a ltima coleta de sangue, os voluntrios foram reavaliados clnica
e laboratorialmente (perodo de ps-estudo).

1.4.5. Efeitos Adversos

Foi solicitado aos voluntrios que relatassem qualquer evento adverso e quando
este evento ocorreu, para que fosse acompanhado clnica e laboratorialmente, at que os
parmetros alterados voltassem ao normal. Foi tambm inquerido se houve ou no
necessidade de usar medicao adicional. As perguntas realizadas para saber se os
voluntrios tiveram algum evento adverso foram limitadas a perguntas gerais, tais como:
Como vai voc?

Definies de efeitos adversos quanto a intensidade:

Leve: experincia adversa facilmente tolerada.
Moderada: experincia adversa desagradvel o bastante para interferir nas
atividades cotidianas.
Severo: experincia adversa que impossibilita a realizao das atividades
cotidianas normais.

Relacionamento suposto com o medicamento experimental:

No atribudo: Quando no h presena de relatos na literatura sobre o evento
adverso ocorrido, no h provas objetivas ou subjetivas evidentes, a seqncia temporal do
evento com a administrao do medicamento no plausvel e os outros critrios tambm
no so associados, no como atribuir um evento ao frmaco administrada.

31
Possvel: Neste caso, alm de no haver presena do evento observado no caso
de re-administrao do medicamento, no h melhora clnica na administrao de um
antagonista ou aps wash-out do frmaco em estudo. Esse fato sugere a presena de causas
alternativas para o evento adverso avaliado, pois apesar da existncia de dados cientficos e
evidncias, o evento pode estar sendo originado por um outro fator no relacionado ao
medicamento.
Provvel: No se pode comprovar sua atribuio devido ao voluntrio no ter
apresentado o mesmo evento no caso de re-administrao, tanto durante os internamentos
quanto durante outras exposies anteriores.
Atribudo: Para a considerao de um evento adverso atribudo ao medicamento,
ou certo, preciso que o evento j seja conhecido na literatura e que haja provas para
respaldar objetivamente ou subjetivamente o ocorrido. A seqncia temporal aps a
administrao do medicamento tambm deve ser considerada de maneira sensata
clinicamente.

1.5. COMIT DE TICA

O projeto de pesquisa, o protocolo experimental e o termo de consentimento
foram submetidos ao Comit de tica em Pesquisa com Seres Humanos da Universidade
Federal do Cear, credenciado pelo CONEP, Conselho Nacional de tica em Pesquisa do
Conselho Nacional de Sade/MS (ANEXO IV).

O estudo foi conduzido de acordo com a Declarao de Helsinque (1964) e as
revises de Tquio (1975), Veneza (1983), frica do Sul (1996) e Edimburgo (2000), assim
como as regulamentaes locais (Resolues 196/96 e 251/97 do CNS-MS, bem como
Resoluo 135/03 da ANVISA).

1.6. TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

O Termo de Consentimento Livre e Esclarecido uma traduo brasileira
originria do termo francs consentement livre et clair. Esta forma utilizada nas
resolues da Comisso Nacional de Sade (CNS MS), rgo que regula a tica na
pesquisa em seres humanos no Brasil.

32

Segundo a Declarao do Congresso Nacional de Biotica (SIBI), realizado em
junho de 2000, o art. 11, dedicado aos temas da pesquisa e experimentao, relata que os
sujeitos das experimentaes devero dar seu consentimento livre e esclarecido e plenamente
informado.

O termo de consentimento livre e esclarecido uma condio indispensvel na
pesquisa de seres humanos. Trata-se de uma deciso voluntria, verbal ou escrita, realizada
por uma pessoa autnoma e capaz, selecionada aps um processo informativo, para a
experimentao consciente dos seus riscos, benefcios e possveis conseqncias.

A prtica do termo do consentimento livre e esclarecido contribui no exerccio da
tica dignificando e engrandecendo tanto o voluntrio quanto o investigador da pesquisa.

Os voluntrios selecionados para esse estudo de bioequivalncia, receberam
explanao sobre a natureza e os objetivos do estudo. Foi enfatizado que o trabalho teria a
finalidade de pesquisa e que o voluntrio no poderia esperar qualquer efeito teraputico. O
voluntrio tambm tinha conhecimento da sua liberdade para se retirar a qualquer momento
do estudo sem que isto lhe cause qualquer prejuzo no seu atendimento junto a Unidade de
Farmacologia Clnica ou ao Hospital Universitrio Walter Cantdio da Universidade Federal
do Cear. Foi solicitado a cada voluntrio que, caso concordasse com o protocolo de estudo,
assine o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido para a participao do estudo.

1.7. CONFIDENCIALIDADE

Os resultados da avaliao mdica, o eletrocardiograma e os exames
laboratoriais foram registrados em folha individual de cada voluntrio. Todas as informaes
obtidas durante o estudo, referentes ao estado de sade dos voluntrios, ficam disponveis
aos mdicos do Hospital Universitrio Walter Cantdio da Universidade Federal do Cear.
Uma cpia dos exames laboratoriais realizados no perodo pr e ps-estudo foram fornecidas
aos voluntrios, quando solicitada.

33
1.8. ANLISE ESTATSTICA

A anlise estatstica foi feita utilizando o teste T de Student pareado. Dados
iniciais (pr-estudo) referindo-se aos exames laboratoriais e medidas antropomtricas
(relao peso/altura) foram comparados com os obtidos aps o trmino do ensaio (ps-
estudo). Os dados foram calculados e analisados estatisticamente por determinao da menor
diferena significante (p<0,05) usando Microsoft Excel Version 7.0 and Graph Pad Prism
Version 3.02.

34
2. PROTOCOLO ANALTICO

2.1. PRINCPIOS DO MTODO

O analito, acetato de megestrol, e o padro interno, betametasona, foram
extrados do plasma humano por meio de extrao lquido-lquido utilizando hexano/acetato
de etila (1:1v/v). Aps a extrao, as amostras foram secas sob fluxo de ar comprimido,
ressuspendidas em acetonitrila. Alquotas das amostras foram analisadas por Cromatografia
Lquida de Alta Eficincia (CLAE) com deteco por Espectrometria de Massa.

2.2. SEGURANA

Para o manuseio dos reagentes e material biolgico e durante a realizao dos
experimentos laboratoriais, os analistas utilizaram equipamentos de proteo individual. As
normas de segurana laboratorial foram seguidas, bem como os procedimentos adequados
para a eliminao de resduos.

2.3. MATERIAL

O mtodo analtico proposto requer os equipamentos, reagentes e material
biolgico descritos a seguir. Outros equipamentos e reagentes podem substituir os
relacionados abaixo, desde que sejam de especificao equivalentes a estes. Qualquer
mudana de equipamento ou reagente deve ser registrada.

2.3.1. Equipamentos e Material

Os equipamentos e material utilizados esto descritos nas Tabelas 5 e 6.

35
Tabela 5: Descrio dos equipamentos e material.
Descrio Fabricante / Pas de Origem
Pipetas de volume varivel Gilson / Frana
Pipetas de plstico descartveis Sigma / USA
Ponteiras descartveis amarelas e azuis
(volume)
Axygen / USA
Mesa agitadora (finemixer) Fine PCR / Coria
Misturador (vortex) Phoenix / USA
Balana analtica Precisa 40sm-200a / Alemanha

Tabela 6: Componentes do CLAE.
Descrio Fabricante / modelo
Espectrmetro de Massa Micromass / Quattro Micro
TM

Gerador de Nitrognio Domnick Hunter/UHPLC MS 18
Bomba Analtica HP / Quat Pump Series 1100
Auto-injetor HP / ALS Series 1100
Programa Micromass/ Mass Lynx 3.5

2.3.2. Padres

Na Tabela 7 esto descritos os padres de referncia do analito (acetato de
megestrol) e do padro interno (betametasona), respectivamente, utilizados no mtodo.

Tabela 7: Padres de referncia.
Descrio N
o
de Lote Validade Fabricante/Endereo

I Vigente
USP/1260,01 Twinbrook Parkway
Rockville, MD 20852 USA
Betametasona K-1 Vigente
USP/1260,01 Twinbrook Parkway
Rockville, MD 20852 USA

36
2.3.3. Reagentes

Na Tabela 8 esto apresentados os reagentes utilizados na extrao e no preparo
das solues padro e da fase mvel.

Tabela 8: Reagentes.
Descrio Finalidade
cido Frmico (grau P.A.) Preparo da fase mvel
gua (purificada atravs de Milli-Q) Preparo da fase mvel
Acetonitrila (grau HPLC) Preparo da fase mvel e das solues padro de
acetato de megestrol e de betametasona
Acetato de etila (grau P.A.) Extrao lquido-lquido
Hexano (grau HPLC) Extrao lquido-lquido

2.3.4. Material biolgico

Quantidades necessrias de plasma humano foram coletadas de indivduos
diferentes, nas condies de plasma humano normal, lipmico e hemolisado, utilizadas para
preparar os padres da curva de calibrao e as amostras de controle de qualidade.

2.4. PREPARO DAS SOLUES

2.4.1. Solues Padro

Todas as solues padro preparadas foram transferidas para frascos de plstico
rotulados, com batoque e tampa de rosca, armazenadas na geladeira a 4
o
C e substitudas de
acordo com os prazos de validade pr-determinados.

2.4.2. Soluo Padro de Acetato de Megestrol

Uma massa correspondente a 0,00531 g de acetato de megestrol foi
cuidadosamente pesada, colocada em um balo volumtrico (50 mL) e preparada em
acetonitrila, para a obteno de uma soluo de concentrao 100 g/mL.

37
2.4.3. Soluo Padro de Betametasona

Uma massa correspondente a 0,00533 g de betametasona foi cuidadosamente
pesada, colocada em um balo volumtrico (50 mL) e preparada em acetonitrila para a
obteno de uma soluo de concentrao 100 g/mL. A partir desta soluo, retirou-se 1,2
mL que foi colocado em um recipiente com capacidade para 100 mL, onde foi diludo em
acetonitrila com fator de diluio 1:83,3, obtendo-se uma soluo de betametasona na
concentrao de 1,2 g/mL.

2.4.4. Solues de trabalho

As solues de trabalho foram preparadas para consumo nos testes de pr-estudo,
validao e estudo. As instrues de preparo e substituio destas so as mesmas que o das
solues padro.
2.4.5. Fase Mvel usada no trabalho

Para eluir o analito (acetato de megestrol) e o padro interno (betametasona) no
cromatgrafo, foi preparada a fase mvel, composta de acetonitrila-gua (80:20 v/v)
contendo 0,1% de cido frmico, que era preparada de acordo com a necessidade e
substituda a cada corrida analtica. A preparao da fase mvel est descrita a seguir.

Em um recipiente de vidro, colocou-se 500 mL gua e 0,5 mL de cido frmico.
Aps a homogeneizao, a soluo foi filtrada e, antes do uso, desgaseificada. Em outro
recipiente de vidro, colocou-se 500 mL acetonitrila e 0,5 mL de cido frmico. Aps a
homogeneizao, esta soluo foi filtrada e, antes do uso, desgaseificada.

A mistura dessas duas solues para compor a fase mvel foi realizada em uma
bomba analtica HP/Quat Pump Serie 1100.

38
2.5. PREPARO DOS PADRES DA CURVA DE CALIBRAO E DAS
AMOSTRAS CONTROLE DE QUALIDADE

As concentraes dos padres da curva de calibrao e das amostras controles de
qualidade foram definidas de acordo com os procedimentos de rotina para a validao do
mtodo, em funo da faixa prevista das concentraes das amostras a serem analisadas.
Assim, estas concentraes correlacionam-se com a dose para qual o mtodo foi
desenvolvido. A utilizao de outra dosagem pode levar a uma reviso destas concentraes,
se a faixa prevista de concentraes da amostra no for a mesma.

2.5.1. Preparo dos padres da curva de calibrao

A curva de calibrao inclui a anlise de uma amostra branco (matriz biolgica
isenta de padro do frmaco e do padro interno), uma amostra zero (matriz biolgica com
adio de padro interno) e de amostras contendo padro do frmaco e padro interno,
contemplando a faixa prevista de concentraes que se pretende analisar. Os padres da
curva de calibrao foram preparados adicionando-se o analito ao plasma humano. Os dados
referentes ao preparo dos padres da curva de calibrao esto apresentados na Tabela 9.

Tabela 9: Preparo da Curva de Calibrao para o Acetato de Megestrol.
Nvel Amostra
Concentrao
no plasma
(ng/mL)
Volume pipetado (L)/
Concentrao da Soluo
de Acetato de Megestrol
preparada em plasma
Volume Final
(mL)
Fator de
Diluio
B Branco 0 - - -
Z Zero 0 - - -
1 Megestrol 2 400 (100 ng/mL) 20 1:50
2 Megestrol 10 200 (1000 ng/mL) 20 1:100
3 Megestrol 50 1000 (1000 ng/mL) 20 1:20
4 Megestrol 80 1600 (1000 ng/mL) 20 1:12,5
5 Megestrol 100 2000 (1000 ng/mL) 20 1:10
6 Megestrol 150 3000(1000 ng/mL) 20 1:6,67

39
Para o preparo do padro acetato de megestrol 1000 ng/mL (em plasma), uma
alquota de 200 L da soluo de acetato de megestrol 100 g/mL (preparada em
acetonitrila) foi transferida para um tubo de vidro, o solvente foi seco sob fluxo de ar
comprimido e o resduo foi ressuspendido em 20 mL de pool plasma branco. A partir desta
soluo foram feitas diluies com pool de plasma branco, para o preparo dos padres da
curva de calibrao nas concentraes de 10, 50, 80, 100 e 150 ng/mL. A soluo de acetato
de megestrol de 2 ng/mL foi preparada a partir da soluo 100 ng/mL.

Os padres da curva de calibrao foram fracionados em alquotas de 200 L,
armazenadas em tubos tipo eppendorff devidamente rotulados e estocados a 20
o
C at a sua
utilizao. Uma nica amostra para cada uma das concentraes foi descongelada para cada
ensaio, fornecendo volume suficiente para as anlises.

2.5.2. Preparo das amostras dos controles de qualidade

Os controles de qualidade (CQs) definidos tm dois objetivos distintos: o
definido por LQ utilizado para determinar o Limite de Quantificao (LQ) do mtodo
analtico. Para sua determinao, foram feitas anlises da matriz biolgica contendo
concentraes decrescentes do frmaco at o menor nvel quantificvel com preciso e
exatido aceitveis. Os controles de qualidade baixo (CQB), controles de qualidade mdio
(CQM) e os controles de qualidade alto (CQA) foram utilizados para monitorar a preciso e
exatido do mtodo de quantificao durante os ensaios.

Todos as amostras dos controles de qualidade foram preparadas adicionando-se o
analito ao plasma humano. Os dados referentes ao preparo das amostras dos controles de
qualidade esto apresentados na Tabela 10.

40
Tabela 10: Preparo dos controles de qualidade.
CQ Analito
Concentrao
no plasma
(ng/mL)
Volume pipetado (L)/
Concentrao da Soluo
de Acetato de Megestrol
preparada em plasma
Volume
Final
(mL)
Fator de
Diluio
LQ Megestrol 2 40 (100 ng/mL) 20 1:50
CQB Megestrol 6 180 (1000 ng/mL) 30 1:166,7
CQM Megestrol 60 1800 (1000 ng/mL) 30 1:16,7
CQA Megestrol 120 3600 (1000 ng/mL) 30 1:8,33

Para o preparo dos controles de qualidade LQ, CQB, CQM e CQA, alquotas das
solues de acetato de megestrol 100 e 1000 ng/mL (preparadas em plasma) foram
colocados em tubos de vidro e os volumes completados com pool de plasma branco.

As amostras dos controles de qualidade foram fracionadas em alquotas de
200L, armazenadas em tubos tipo eppendorff devidamente rotulados e estocadas a 20
o
C
at a sua utilizao. Uma nica amostra para cada uma das concentraes foi descongelada
para cada ensaio, fornecendo volume suficiente para as anlises.

2.6. PREPARO DAS ANLISES

Quando a sensibilidade, preciso e a exatido do mtodo tiverem sido
determinadas, apenas uma nica anlise dever ser feita se a validao do mtodo
demonstrar que estes parmetros esto rotineiramente dentro de limites aceitveis.

2.6.1. Montagem da seqncia de determinaes das amostras

Cada lote dever conter as seguintes amostras:

1) Uma curva de calibrao, composta por uma amostra branco (matriz biolgica
isenta de padro do frmaco e do padro interno), uma amostra zero (matriz biolgica com
adio do padro interno) e amostras contendo padro do frmaco e padro interno. Cada
amostra, desde a amostra branco at o ltimo padro de calibrao, dever ser includa sem

41
rplica. As concentraes dos padres da curva de calibrao sero checadas pelo clculo de
volta (back-calculation) e se, os valores estiverem dentro das especificaes da curva, a
mesma ser usada para determinar a concentrao do frmaco nas amostras. Caso contrrio,
outra curva dever ser construda. Os dados da curva de calibrao sero armazenados no
software;

2) As amostras a serem analisadas, sem replicatas;

3) Controles de qualidade (CQB, CQM, CQA), intercalados em intervalos
adequados, dependendo do nmero total de amostras a serem determinadas.

2.6.2. Extrao das amostras

Os procedimentos de extrao das amostras descritos a seguir foram aplicados
no apenas para as amostras dos voluntrios analisadas, mas tambm para os padres das
curvas de calibrao e amostras de controle de qualidade. Para a extrao do analito (acetato
de megestrol) e do padro interno (betametasona) das amostras biolgicas, os seguintes
passos foram seguidos:
1) Em tubos eppendorff, colocou-se 200 L de plasma humano, 25 L da
soluo do padro interno (betametasona 1,2 g/mL), 1000 L de hexano:acetato de etila
(1:1 v/v) e agitou-se por 5 min na mesa agitadora (velocidade 9);
2) Centrifugou-se as amostras a 14.000 rpm, durante 5 min, a temperatura de
4C;
3) Transferiu-se 800 L da fase orgnica para tubos eppendorff, evaporou-se o
solvente sob fluxo de ar comprimido, ressuspendeu-se o resduo em 100 L de acetonitrila e
agitou-se por 1 min na mesa agitadora (velocidade 9);
4) Transferiu-se 90 L das amostras para inserts de vidro descartveis e, em
seguida, injetou-se alquotas de 10 L no sistema cromatogrfico.

42
2.6.3. Condies cromatogrficas

As anlises cromatogrficas foram realizadas usando uma coluna analtica
Varian

C
18
(5 m, 50 x 2,0 mm) e uma pr-coluna Securityguard
TM
C
18
(4,0 x 3,0 mm),
mantidas a temperatura ambiente (20
o
C).

O cromatgrafo lquido de alta eficincia com deteco por espectrometria de
massas no modo MS/MS foi programado para operar com fluxo de 0,13 mL/min, volume de
injeo de 10 L e o tempo total de corrida foi ajustado para 3 min.

2.6.4. Condies de deteco no espectrmetro de massas no modo MS/MS

Os parmetros do equipamento utilizados foram: Fonte de ionizao por
eletrospray operando em modo positivo (IES+) e MRM 384,7 > 324,7 e 393,5 > 373,1 para
monitoramento do acetato de megestrol e da betametasona, respectivamente. A temperatura
da fonte foi de 100 C e dessolvatao de 250 C. O fluxo dos gases do cone e dessolvatao
foram de 90 e 400 L/h, respectivamente. Os valores de voltagem do capilar, cone e energia
de coliso foram, respectivamente, 0,50 kV, 30 V e 15 eV para o acetato de megestrol e 0,50
kV, 15 V e 8 eV para a betametasona, tendo como presso de Argnio para a dissociao 2,5
x 10
-3
mbar.

2.7. VALIDAO DO MTODO BIOANALTICO

2.7.1. Validao Pr-estudo

Para a realizao destes testes foram utilizados padres de referncia com
procedncia identificvel para o preparo das solues. A origem, o nmero do lote, bem
como a existncia ou no de um Certificado de Anlise (CA) esto descritos na Tabela 11.

43
Tabela 11: Padres de Referncia Certificados.
Padro Finalidade Origem Lote CA*
Acetato de Megestrol Analito Padro de Referncia USP I 1
Betametasona Padro interno Padro de Referncia USP K-1 1
*1. Padres de referncia com certificado, 2. Padres de referncia obtidos comercialmente, 3. Sintetizados por
laboratrio de anlise, 4. Fornecido pelo agente financiador.

2.7.2. Especificidade

Para confirmar a especificidade do mtodo, foram analisadas amostras branco de
plasma humano, obtidas de seis indivduos nas condies descritas na Tabela 12.

Tabela 12: Amostras do fluido biolgico (plasma).
Indivduo Descrio Origem Lote
1 Plasma Humano Normal HUSF 7997/3
5 Plasma Humano Lipmico HUSF 32513/1
6 Plasma Humano Hemolisado HUSF 34614/4

Cada amostra branco foi testada, utilizando os procedimentos de extrao e as
condies cromatogrficas propostos, para avaliar interferncia no tempo de reteno do
frmaco, do metablito ou do padro interno. Os resultados foram comparados com aqueles
obtidos usando uma soluo aquosa do analito em concentrao prxima ao LQ.

2.7.3. Curva de calibrao

Para definir a relao entre a resposta do instrumento e a concentrao conhecida
do analito, foi gerada uma curva de calibrao com seis padres contendo o frmaco e
padro interno. A curva de calibrao na validao foi feita em triplicata, utilizando-se
depois uma curva mdia (obtida atravs das rplicas) para determinar as concentraes do
analito nas amostras. As concentraes dos padres foram definidos em testes preliminares,

44
incluindo a primeira quantificao de amostras, levando-se em considerao a sensibilidade
do mtodo e a faixa prevista das concentraes das amostras a serem determinadas.

2.7.4. Determinao do limite de quantificao

O limite de quantificao foi definido levando-se em considerao a
sensibilidade, especificidade, preciso e exatido do mtodo analtico. Para a determinao
do LQ, foram feitas anlises da matriz biolgica contendo concentraes decrescentes do
frmaco at o menor nvel quantificvel com preciso e exatido aceitveis. Com isto,
tentou-se assegurar que os menores valores possveis fossem analisados, por meio de
repeties de anlises, com valores sucessivamente menores.

Os seguintes critrios foram seguidos para a definio do LQ:

a) A concentrao do LQ deve ser, no mnimo, 5 vezes maior que qualquer
interferncia na amostra branco no tempo de reteno do frmaco;

b) A concentrao do LQ deve ser identificvel e reprodutvel com preciso de
20% e exatido entre 80-120% em relao concentrao nominal do padro, atravs da
anlise de, no mnimo, cinco amostras de padres.

2.7.5. Linearidade

A linearidade da curva de calibrao foi avaliada dentro dos seguintes critrios:

a) Desvio menor ou igual a 20% em relao concentrao nominal para o LQ,
em pelo menos duas das triplicatas;

b) Desvio menor ou igual a 15% em relao concentrao nominal para as
outras concentraes da curva de calibrao, em pelo menos duas das triplicatas;

45
c) A curva de calibrao deve apresentar seis diferentes concentraes, das quais,
no mnimo quatro, devem cumprir os critrios (a) e (b) acima descritos, incluindo o LQ e a
maior concentrao da curva de calibrao;

d) O coeficiente de correlao ser aceito se for igual ou maior do que 0,98.

2.7.6. Preciso e exatido

Para avaliar a preciso e exatido do mtodo, quatro concentraes distintas, na
faixa esperada de concentraes foram analisadas, utilizando-se determinaes por
concentrao. A preciso e exatido foram determinadas em um mesmo lote (preciso e
exatido intralote) e em lotes diferentes (preciso e exatido interlotes).

2.7.6.1. Validao intralote

A preciso e exatido intralote foram determinadas utilizando-se um lote
contendo as seguintes amostras:

a) Uma curva de calibrao contendo os padres definidos anteriormente;

b) Cinco amostras de cada controle de qualidade (CQ) definido.

Os seguintes critrios foram seguidos, para que a preciso e exatido intralote
fosse considerada aprovada:

a) Preciso: para os controles CQB, CQM e CQA, o coeficiente de variao
(CV) no deveria exceder 15% e para o LQ, admitiu-se valores menores ou iguais a 20%;

b) Exatido: o valor da exatido para as amostras CQB, CQM e CQA, dentro do
desvio de 15% do valor nominal e para o LQ, admitiu-se desvios menores ou iguais a 20%.

46
2.7.6.2. Validao interlotes

Os seguintes critrios foram seguidos para considerar a preciso e exatido
interlotes aprovadas:

a) Preciso: para os controles CQB, CQM e CQA, o CV obtido no deveria
exceder 15% e para o LQ, admitiu-se valores menores ou iguais a 20%;

b) Exatido: o valor da exatido para as amostras CQB, CQM e CQA dentro do
desvio de 15% do valor nominal e para o LQ, admitiu-se desvios menores ou iguais a 20%.

2.7.6.3. Recuperao

O clculo da recuperao do frmaco feito comparando-se as reas dos picos
do acetato de megestrol (CQB, CQM e CQA) das amostras extradas do plasma com as reas
dos picos do acetato de megestrol, preparado em soluo. As reas so correlacionadas com
a concentrao, considerando-se que as reas obtidas para os controles baixo, mdio e alto
preparados em soluo (amostras no extradas) correspondem, respectivamente, as
concentraes nominais de 6, 60 e 120 ng/mL.

2.8. ESTUDO DE ESTABILIDADE DO FRMACO NO FLUIDO
BIOLGICO

Para realizao do estudo de estabilidade devem ser observados os parmetros de
exatido, preciso, linearidade, limite de quantificao, especificidade e robustez,
previamente validados.

A estabilidade do frmaco em lquidos biolgicos depende de suas propriedades
qumicas, da matriz biolgica e do material de acondicionamento utilizado. A estabilidade
determinada para um tipo de matriz e de material de acondicionamento especfico no pode
ser extrapolada para outros.

47
As condies de realizao dos ensaios de estabilidade devem reproduzir as reais
condies de manuseio e anlise das amostras. Deve ser avaliada a estabilidade do analito
durante a coleta e manuseio da amostra, aps armazenagem de longa durao
(congelamento) e curta durao ( temperatura ambiente), aps ciclos de congelamento e
descongelamento e nas condies de anlise. Deve-se incluir tambm avaliao da
estabilidade do analito nas solues-padro, preparadas com solvente apropriado e
concentraes conhecidas.

As determinaes de estabilidade devem utilizar um conjunto de amostras,
preparadas a partir de uma soluo estoque recente do frmaco em anlise, adicionado
matriz biolgica isenta de interferncia.

2.8.1. Estabilidade de curta durao

2.8.1.1. Estabilidade no tempo e condies de anlise

Para avaliar a estabilidade do frmaco no tempo e condies de anlise, as
amostras processadas foram mantidas dentro do auto-injetor, a temperatura ambiente, e cada
amostra de controle de qualidade foi analisada em triplicata nos tempos 0, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12
e 25 horas. Os resultados foram comparados com aqueles obtidos da anlise das amostras
recm-preparadas.

2.8.1.2. Estabilidade do frmaco em ciclos de congelamento e
descongelamento

Para avaliar a estabilidade do acetato de megestrol durante trs ciclos de
congelamento e descongelamento, foram analisadas cinco amostras de cada controle de
qualidade, nas seguintes condies: amostras CQB, CQM e CQA foram congeladas a 20
o
C
e mantidas nesta temperatura por 24 horas. Aps este tempo, as amostras foram submetidas
ao descongelamento natural (degelo 1), a temperatura ambiente, extradas e imediatamente
analisadas. Depois de completamente descongeladas, as amostras foram novamente
congeladas a 20
o
C, mantidas nesta temperatura por mais 24 horas, descongeladas (degelo
2), extradas e analisadas. O mesmo procedimento foi repetido mais uma vez, com o intuito

48
de completar o 3
ciclo de congelamento e descongelamento (degelo 3). Os resultados foram

comparados com aqueles obtidos da anlise das amostras recm-preparadas.

2.8.2. Estabilidade de longa durao

Para avaliar a estabilidade do frmaco, em plasma, sob condies de longa
durao, o tempo de armazenamento deve exceder o intervalo de tempo compreendido entre
a coleta da primeira amostra e a anlise da ltima amostra dos voluntrios. Neste estudo, o
primeiro dia de coleta das amostras dos voluntrios foi no dia 14/12/2003, as amostras do
ltimo voluntrio foram analisadas no dia 25/03/04. A estabilidade de longa durao foi
realizada utilizando-se amostras que ficaram armazenadas, a 20
o
C, por um perodo de 102
dias. Este tempo de armazenamento superior ao intervalo de tempo compreendido entre a
coleta da primeira amostra e a anlise da ltima amostra dos voluntrios.

2.8.3. Estabilidade das amostras de plasma no processadas

Foram realizadas anlises com amostras recm-preparadas e no processadas,
que foram mantidas em espera na bancada durante seis horas, temperatura ambiente,
depois extradas e analisadas no sistema cromatogrfico. Obteve-se, tambm, resultados de
amostras depois de 4 dias de congelamento e, aps o descongelamento natural, temperatura
ambiente, as amostras so extradas e imediatamente analisadas.

2.8.4. Estabilidade das solues padro

Foram desenvolvidas anlises com solues padro de acetato de megestrol
500ng/mL e de betametasona 1,2 g/mL recm-preparadas, com solues padro que foram
mantidas em espera na bancada durante seis horas ( temperatura ambiente) e amostras
dessas solues, que foram armazenadas na geladeira durante 10 dias.

Para avaliar a estabilidade das solues padro, foram comparadas as reas dos
picos do acetato de megestrol e de betametasona das amostras recm-preparadas com as
reas dos picos do acetato de megestrol e de betametasona das amostras mantidas na bancada
durante 6 h e das amostras refrigeradas durante 10 dias.

49
2.9. DETERMINAO DAS CONCENTRAES DAS AMOSTRAS

Na determinao das concentraes das amostras, os clculos foram efetuados
em funo da curva de calibrao, construda para o frmaco analisado, no sistema de dados
do Mass Lynx 3.5, utilizando os padres da curva de calibrao relacionados na Tabela 9. As
funes de calibrao foram calculadas atravs da razo entre as reas dos picos do acetato
de megestrol e do padro interno betametasona. As concentraes do analito nas amostras
foram calculadas a partir da equao de regresso linear da reta, obtida com a curva de
calibrao (concentrao de acetato de megestrol em funo das razes das reas).

2.10. PARMETROS FARMACOCINTICOS

Parmetros farmacocinticos (Tabela 13), tais como a rea sob a curva do tempo
zero ao infinito ASC(
0-
), do tempo zero a 144 horas (ASC
0-144h
), concentrao mxima
atingida (C
max
), tempo para atingir a concentrao mxima (T
max
), meia-vida plasmtica (t
1/2
)
e constante de eliminao (K), foram calculados.

Tabela 13: Parmetros farmacocinticos.
ASC(
0-
): rea sob a curva de concentrao do frmaco versus tempo do tempo 0
(zero) extrapolada ao infinito, calculada pelo mtodo linear-log
trapezoidal. AUC
[0-]
= AUC
[0-144]
+ Ct/K, onde Ct a ltima
concentrao quantificvel;
ASC(
0-144h
): rea sob a curva de concentrao do frmaco versus tempo do tempo 0
(zero) ao tempo de 144 h, calculada pelo mtodo linear-log trapezoidal;
C
max
: Pico de concentrao plasmtica mxima do frmaco, obtida diretamente
dos dados;
T
max
: Tempo para atingir o C
max
.
t
1/2
Representa o tempo em que a concentrao do frmaco no plasma
reduzida a metade. Calcula-se atravs do logaritmo neperiano de 2
dividido pela constante de eliminao, t
1/2
= ln 2/K.
K Determina a taxa de eliminao do frmaco dos vasos sangneos. Serve
para determinar a concentrao do frmaco em um tempo t.

50
2.11. ANLISE ESTATSTICA

2.11.1. Material

Os programas utilizados para esse tipo de anlise foram o WinNonlin
Professional Network Edition, verso 1.5 (Pharsight Corporation, Moutain View, CA, USA),
Programa de Bioequivalencia para Estudos Cruzados em dois Perodos verso 3.4 (autor:
Herman P Wijnand, Bs Oss, The Netherlands), Microsoft Excel version 7 (Microsoft
Corporation, Rermond, WA, USA) e GraphPad Prism version 3.0 (GraphPad Software, Inc.
San Diego, CA, USA).

2.11.2. Mtodos

A constante de eliminao terminal (K) de primeira ordem foi estimada atravs
da regresso linear dos pontos da fase de eliminao numa plotagem log-linear. A meia-vida
foi calculada atravs da frmula (t
1/2
= ln 2/K). A concentrao plasmtica mxima
observada (C
max
) e o tempo para obter esta concentrao (T
max
) foram obtidos diretamente da
curva. A rea sob a curva de concentrao plasmtica de megestrol versus tempo de 0 a 144
horas (AUC
0-144h
) foi calculada atravs do mtodo trapezoidal. A extrapolao dessa rea
para o infinito (AUC
0-
) foi feita adicionando o valor da relao C
144
/K (onde C
144
a
concentrao plasmtica obtida da coleta de 144 horas e K, que a constate de eliminao) a
AUC
0-144h
.

A distribuio da populao foi analisada usando o plote do histograma do valor
da transformao normal (NTV), plote do probito e o teste de Kolmogorov-Smirnov,
mostrando-se consistente com a distribuio Gaussiana se p>0,05 (CHOW, 1992). A anlise
da varincia entre as populaes foi observada atravs do teste F (Snedecor).

51

R
R
E
E
S
S
U
U
L
L
T
T
A
A
D
D
O
O
S
S
E
E
D
D
I
I
S
S
C
C
U
U
S
S
S
S
O
O

52

1. ETAPA CLNICA

O desenho consistiu de um estudo aberto, randomizado, com replicao, de 30
voluntrios, como preconizado por Benett em 1999, que utiliza, geralmente, uma populao
pequena de 24 a 36 voluntrios saudveis. O nmero de voluntrios sadios deve sempre
assegurar poder estatstico suficiente para garantir a confiabilidade dos resultados do estudo
(BRASIL, 2003b). O termo voluntrio normal ou sadio deve ser interpretado como indivduo
adulto, sem anormalidades clnico-laboratoriais capazes de prejudicar a interpretao do
experimento ou aumentar a sensibilidade do indivduo ao potencial txico do frmaco em
estudo. A idade variou entre 18 e 45 anos (26,17 6,56), altura variando de 158 a 188,5 cm
(172,97 7,70) e ndice de massa corporal mdio de 24,1 2,51 kg/m
2
.

Em 1983, Adlercreutz e colaboradores realizaram um estudo para avaliar os
nveis plasmticos de acetato de megestrol em 10 voluntrios sadios do sexo feminino, com
idade variando entre 21 e 40 anos, os quais foram internados e receberam um comprimido de
60 mg ou quatro de 15 mg de acetato de megestrol. Uma semana depois o experimento foi
repetido utilizando um desenho cruzado. Entretanto, para o presente estudo, foi selecionada
uma populao exclusivamente composta por voluntrios sadios do sexo masculino, a fim de
reduzir as possveis interferncias na biodisponibilidade e variao interindividual, com
administrao de 160 mg de uma das formulaes de acetato de megestrol.

Os voluntrios qualificados para participar do estudo foram internados por dois
perodos de aproximadamente 36 horas, com vinte e sete dias de intervalo entre os
internamentos, para garantir que no haja um efeito residual do primeiro frmaco
administrado, que inflaria artificialmente os resultados do segundo (HOWARD et al., 2000).

O rgo responsvel pelos medicamentos genricos no Brasil, Agncia Nacional
de Vigilncia Sanitria ANVISA, determina que o cronograma de coletas das amostras
sanguneas dever contemplar tempo igual ou superior a 3 a 5 vezes meias-vidas de
eliminao do frmaco ou metablito ativo (BRASIL, 2003b). Deve-se incluir o maior
nmero possvel de amostras na regio prximo a concentrao mxima atingida para que
possibilite a determinao da rea sob a curva de concentrao sangnea (BRASIL, 2003a).
Amostras sangneas para a determinao dos nveis plasmticos de acetato de megestrol

53
foram obtidas antes da administrao (tempo zero e pool) e aps a administrao (1, 1:30, 2,
2:30, 3, 3:30, 4, 5, 6, 8, 12, 16, 24, 36, 48, 72, 96, 120 e 144 horas) de uma das formulaes
de acetato de megestrol.

Verificou-se, atravs de estudos com pacientes da sndrome anorexia-caquexia,
que muitos deles apresentaram ganho de peso e aumento no apetite, representando um
importante papel no seu tratamento, em doses usadas para a atividade progestognica,
compreendidas entre 400 e 800 mg/dia (NELSON, 2000; DAVIS et al., 2000;
MANTOVANI et al., 1998; GAGNON et al., 1998; MALTONI et al., 2001; LPEZ et al.,
2004).

No presente estudo, no observou-se variao estatisticamente significante no
que diz respeito ao ndice de massa corporal mdio, antes e aps o trmino da etapa clnica.
De acordo com a literatura, verifica-se que em uma simples dose de 160 mg de acetato de
megestrol no reflete em ganho de peso (Figura 7).

Figura 7. Anlise da mdia dos ndices de massa corporal pr e ps-estudo,
em 29 voluntrios sadios do sexo masculino, p<0,05.

Os voluntrios foram acompanhados durante o perodo do estudo atravs de
aferies de sinais vitais, pulso, presso sangunea sistlica e diastlica, que foram realizadas
a cada perodo de coleta de sangue. No foi evidenciada qualquer anormalidade clnica para
esses parmetros.

Pr-Estudo Ps-Estudo
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
I
M
C

(
k
g
/
m
2
)

54
Durante a terapia prolongada com acetato de megestrol, pode-se desenvolver a
sndrome de Cushing (STEER, 1995). Pode ocorrer tambm supresso da adrenal e
insuficincia adrenal aguda aps a descontinuao da terapia (LEINUNG et al., 1995).
Diminuio significante nos nveis sricos de cortisol foi observada na maioria dos pacientes
com fibrose cstica que receberam o acetato de megestrol. Notou-se um aumento nos nveis
de insulina depois de seis meses de tratamento (EUBANKS et al., 2001) e o frmaco tem
sido associado com o desenvolvimento de diabetes em pacientes com fibrose cstica
(MARCHAND et al., 2000).

O uso de 160 mg de acetato de megestrol, preconizado para o tratamento de
cncer de mama e prstata, no foi verificado, por meio da anamnese e do exame clnico,
nenhum sinal ou sintoma de supresso da adrenal. Atravs dos exames laboratoriais, no
foram evidenciadas alteraes no metabolismo dos carboidratos, protico e lipdico,
caractersticos da sndrome de Cushing.

As duas formulaes de acetato de megestrol foram bem toleradas pelos
voluntrios. Dos trinta voluntrios que participaram do estudo, sete (23,3%) relataram algum
evento adverso de intensidade leve a moderada. Nenhum voluntrio relatou a ocorrncia de
eventos severos, estando de acordo com os achados de Lpez e colaboradores, em 2004. Os
eventos adversos, observados durante os dois perodos de internao, no foram atribudos
ao medicamento, devido aos seguintes critrios: no h informaes cientficas prvias sobre
o evento; no h provas com evidncias objetivas (exames laboratoriais, presso arterial, e
outros parmetros) ou subjetivas (clnicas); evento com seqncia temporal improvvel aps
a administrao do medicamento; presena de causas alternativas que podem ter causado o
evento observado; ausncia de melhora clnica plausvel aps retirada do medicamento (aps
eliminao); ausncia de reao semelhante com o uso do mesmo medicamento no primeiro
internamento ou com o uso de medicamentos do mesmo grupo farmacolgico e ausncia de
reincidncia quando da nova administrao do medicamento (GUZZO, 2004). A relao dos
eventos adversos, juntamente com sua intensidade e a ao adotada, esto relacionadas na
Tabela 14.

55
Tabela 14: Eventos adversos intensidade, relacionamento com a medicao e ao
adotada relatados pelos trinta voluntrios do sexo masculino.
Voluntrio Descrio
Intensidade
Leve Mod. Sev.
Atribuda ao
frmaco?
Sim Pos No Des
Ao adotada
07. LS150468 Dor de Garganta (X) ( ) ( ) ( ) ( ) (X) ( ) Observao
08. MS150271 Dor de Garganta ( ) (X) ( ) ( ) ( ) (X) ( )
Amoxiclina
500mg /
Cepacana
10. GG291279 Hemorrida (X) ( ) ( ) ( ) ( ) (X) ( ) Venalot
15. JS070385 Suspeita de Colite ( ) (X) ( ) ( ) ( ) (X) ( ) Colonoscopia
Cefalia (X) ( ) ( ) ( ) ( ) (X) ( ) Observao
18. UJ070680
Dor de Garganta (X) ( ) ( ) ( ) ( ) (X) ( ) Observao
19. ML300974 Leso Ocular ( ) (X) ( ) ( ) ( ) (X) ( ) Epitezan
23. IR270679 Diarria (X) ( ) ( ) ( ) ( ) (X) ( ) Imosec

Vinte e sete voluntrios concluram todas as etapas do estudo, havendo duas
desistncias por razes pessoais, uma aps a primeira e outra durante a segunda fase do
estudo, sendo que o ltimo foi o nico a no retornar para a realizao do ps-estudo.
Ocorreu, tambm, uma retirada durante a primeira fase devido a doena intercorrente
requerendo medicao.

Para cada voluntrio, foi preenchida uma ficha clnica contendo os critrios de
admisso, histria mdica pr-estudo, exame fsico geral pr e ps estudo, resultado ECG pr
e ps estudo, fichas de administrao, coleta de sangue e aferio de sinais vitais do 1 e 2
internamentos, registro de eventos adversos, medicao para tratamento de eventos adversos,
trmino prematuro do estudo, determinaes laboratoriais e comentrios adicionais. Para
exemplificar, encontra-se em anexo a ficha clnica do vol. 01 GC020579 (ANEXO II).

Os exames clnicos e laboratoriais ps-estudo no apresentaram alteraes
estatstica e clinicamente significantes, quando comparados aos exames realizados no
perodo pr-estudo. A Tabela 15 expe as mdias das determinaes laboratoriais pr e ps-
estudo juntamente com os valores de referncia estipulados pelo laboratrio de anlise,
representando a funo heptica (SGTP, SGOT, bilirrubina total e gama GT) e metablica

56
(glicose e colesterol), de vinte e nove voluntrios do sexo masculino. As Figuras 8 e 9
representam a anlise da funo hematolgica e renal, respectivamente.

Em 2001, Eubanks e colaboradores realizaram um estudo utilizando 17 pacientes
peditricos portadores de fibrose cstica, que reflete em perda de apetite e m nutrio. O
estudo consistia na administrao de 7,5 mg/kg/dia. Aps seis meses de administrao de
acetato de megestrol em 10 pacientes, foi relatado um leve crescimento nos nveis de SGTP
e SGOT em um deles. Alteraes dos demais exames laboratoriais no foram encontrados na
literatura. A dose utilizada no presente estudo foi inferior a relatada no ensaio realizado por
Eubanks e colaboradores, uma vez que este ltimo envolveu pacientes com anorexia e
caquexia (dose de 400-800 mg/dia) enquanto que, no atual estudo, foi utilizada uma dose
estabelecida para tratamento de cncer de mama ou prstata (dose de 160 mg/dia).

Tabela 15: Anlise das funes heptica e metablica das mdias dos valores dos
exames laboratoriais pr e ps-estudo de 29 voluntrios do sexo masculino.
Heptica e
Metablica
SGTP (U/L) SGOT (U/L) Bilirrubina
total (mg/dL)
Gama GT
(U/L)
Glicose
(U/L)
Colesterol
(mg/dL)
Pr-Estudo

22,09 9,25

20 4,63

0,99 0,51

25,83 14,13

85,48 4,83

155,17 27,91
Ps-Estudo

23,82 8,30

21,69 11,18

1,05 0,55

27,10 16,45

86,24 6,76

158,72 28,13

Valores de
Referncia
21 72 17 59 0,2 1,3 15 73 70 110 At 200
* Estatisticamente significante do pr-estudo (p < 0,05)

Figura 8. Anlise hematolgica das mdias dos valores dos exames
laboratoriais pr e ps-estudo de 29 voluntrios do sexo masculino, *p<0,05. Valores de
referncia: Hemoglobina = 13,5 a 18 g/dL (A) e Leuccitos = 3,6 a 10 x10
3
/mm
3
(B).
Pr-Estudo Ps-Estudo
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
H
e
m
o
g
l
o
b
i
n
a

(
g
/
d
L
)
A
Pr-Estudo Ps-Estudo
0
2
4
6
8
10
12
14
16
L
e
u
c
c
i
t
o
s

(
1
0
3
/
m
m
3
)
B

57

Figura 9. Anlise da funo renal das mdias dos valores dos exames
laboratoriais pr e ps-estudo, de 29 voluntrios do sexo masculino, *p<0,05. Valores
de referncia: Creatinina = 0,7 a 1,3 mg/dL (A) e Uria = 10 a 50 mg/dL (B).

Com esses dados, notou-se que as variaes ocorridas, aps o trmino do estudo,
esto dentro dos valores de normalidade e no eram estatisticamente significantes. Dessa
forma, garantiu-se com segurana o estado de higidez dos voluntrios.

Pr-Estudo Ps-Estudo
0.0
0.5
1.0
1.5
C
r
e
a
t
i
n
i
n
a

(
m
g
/
d
L
)
A
Pr-Estudo Ps-Estudo
0
10
20
30
40
50
U
r
e
i
a

(
m
g
/
d
L
)
B

58
2. ETAPA ANALTICA

A validao do mtodo bioanaltico um processo utilizado para garantir que um
mtodo analtico quantitativo sustentvel para aplicaes biomdicas. Um mtodo
desenvolvido envolve avaliao e otimizao de vrias etapas de preparao de amostras,
separao cromatogrfica, deteco e quantificao. A validao garante que os parmetros
de eficincias analtica, como sensibilidade, seletividade, preciso, exatido, recuperao e
estabilidade, esto adequados ao seu uso (CAUSON, 1997).

O mtodo descrito foi linear at 150 ng/mL e possui menor limite de
quantificao de 2 ng/mL. Isso significa que, neste intervalo de quantificao superior e
inferior, essa metodologia analtica capaz de demonstrar que os resultados obtidos so
diretamente proporcionais concentrao do analito na amostra (BRASIL, 2003c). Atravs
de mtodos estatsticos, foi obtido um coeficiente de correlao maior que 0,98 (r =
0,998759) estipulado pela legislao vigente (BRASIL, 2003c).

Em 1990, Dikkeschei e colaboradores realizaram uma dosagem de acetato de
megestrol e acetato de ciproterona no plasma de pacientes portadores de cncer de mama
avanado, atravs de cromatografia lquida de alta eficincia, e obteveram linearidade at
626 ng/mL (y = 1,712x + 0,0012; n = 6; r = 0,999) para o acetato de megestrol. O menor
limite de quantificao obtido foi de 5 ng/mL para os dois esterides. Analisando este ltimo
dado, conclui-se que o mtodo aqui proposto possui uma melhor sensibilidade do que os
estudos desenvolvidos anteriormente.

A curva de calibrao, representada na Figura 10, mostra a relao entre a
resposta do instrumento e a concentrao conhecida do analito. Observa-se, ento, a
linearidade da curva mdia de calibrao realizada com seis diferentes concentraes (2, 10,
50, 80, 100 e 150 ng/mL) de acetato de megestrol, tendo como equao y = 0,0155893x +
0,000268986 (r = 0,998759). A preciso e a exatido, encontradas nas curvas de calibrao
de um dos lotes da validao, foram de 7,04%, 6,14%, 2,62%, 2,56%, 1,34% e 1,85%, e
-0,50%, 2,67%, -3,53%, -1,41%, 1,55% e 1,12%, respectivamente. Obtendo-se, dessa forma,
desvios menores que 20% para o LQ e menores que 15% para as demais concentraes, em
relao concentrao nominal, critrios exigidos pela ANVISA (BRASIL, 2003c).

59

Figura 10. Linearidade da curva de calibrao realizada com seis diferentes
concentraes de acetato de megestrol (r= 0,998759).

A capacidade de medir exatamente um composto, em presena de outros
componentes tais como impurezas, produtos de degradao e componentes da matriz,
determina a especificidade e a seletividade do mtodo bioanaltico (MASSART, 1988). A
especificidade pode ser investigada pela anlise de pelo menos seis amostras de origem
diferente da matriz alvo, checando as interferncias dos componentes endgenos. Qualquer
interferente deve ser menor que 20% da deteco do LQ (CAUSON, 1997). Cada amostra
branco foi testada, e os resultados mostraram que no foram encontradas interferncias
significativas, seja em plasma branco normal, lipmico ou hemolisado, como demonstrado
nos cromatogramas apresentados na Figura 11.
0
0,5
1
1,5
2
2,5
0 30 60 90 120 150
Concentrao de Acetato de Megestrol (ng/mL)
R
e
s
p
o
s
t
a

d
o

D
e
t
e
c
t
o
r

(
n
g
/
m
L
)

60

a

1 5 : 1 8 : 2 0 1 2 - M a r - 2 0 0 4
L o t e : 7 9 9 7 / 3
2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0
S c a n 0
1 0 0
%
0
1 0 0
%
B r a n c o _ 0 1 M R M o f 2 C h a n n e l s E S +
3 9 3 . 5 > 3 7 3 . 1
4 . 8 3 e 4
1 . 2 0
0 . 2 6
0 . 4 6 1 . 0 2 0 . 9 8
0 . 7 2
2 . 7 6
2 . 6 8
2 . 0 6 1 . 9 6
1 . 8 8
1 . 7 6
2 . 5 8
2 . 3 2
3 8 4 . 7 > 3 2 4 . 7
7 . 9 5 e 3
1 . 2 2
0 . 5 6
0 . 3 8
0 . 3 0
1 . 0 4 0 . 9 8
1 . 3 2
1 . 4 6
1 . 7 4 1 . 8 0 2 . 2 4 2 . 7 6 2 . 6 4

b

1 5 : 2 2 : 1 1 1 2 - M a r - 2 0 0 4
L o t e : 4 2 2 0 5 / 1
2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0
S c a n 0
1 0 0
%
0
1 0 0
%
3 9 3 . 5 > 3 7 3 . 1
5 . 0 0 e 4
1 . 0 2
0 . 2 2 0 . 3 2
0 . 6 2 0 . 6 8
1 . 2 0
2 . 7 0
2 . 5 6
2 . 0 2
1 . 9 6
2 . 1 0
2 . 3 6
2 . 7 8
3 8 4 . 7 > 3 2 4 . 7
9 . 6 5 e 3
1 . 2 2
1 . 0 4 0 . 0 6 0 . 9 2
0 . 2 6 0 . 7 6
1 . 3 2
2 . 2 4 2 . 1 0 1 . 8 4
1 . 5 2
2 . 3 0
2 . 6 6 2 . 7 8

c

15: 25: 59 1 2- Mar- 20 0 4
Lot e: 1 7 67 9/ 5
20 40 60 80 10 0 12 0 14 0
Sca n 0
10 0
%
0
10 0
%
Br a nco _ 03 MRM of 2 C h an n el s ES+
39 3. 5 > 3 73 .1
6. 39 e4
1. 02
0. 36 0. 08 0. 62
1. 20
2. 68
2. 08 2. 04
1. 46
2. 22
Br a nco _ 03 MRM of 2 C h an n el s ES+
38 4. 7 > 3 24 .7
4. 65 e3
1. 22
0. 02
0. 30 0. 92 0. 60
2. 66 2. 62 2. 16 1. 98
1. 36
1. 48
2. 34 2. 78

d

1 5 : 2 9 : 4 3 1 2 - M a r - 2 0 0 4
L o t e : 4 2 2 0 7 / 1
2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0
S c a n 0
1 0 0
%
0
1 0 0
%
3 9 3 . 5 > 3 7 3 . 1
6 . 9 3 e 4
1 . 2 0
1 . 0 2
0 . 9 2
0 . 7 0
0 . 2 2 0 . 5 6
2 . 7 0 2 . 0 0 1 . 8 6
2 . 0 8
3 8 4 . 7 > 3 2 4 . 7
5 . 8 7 e 3
1 . 2 0
1 . 1 2
0 . 1 8 1 . 0 6
0 . 2 4 0 . 4 4
2 . 0 0 1 . 8 8
1 . 8 2
1 . 3 0
1 . 6 2
2 . 1 2 2 . 2 4
2 . 4 6
2 . 6 0

e

0 9 : 5 3 : 4 6 1 6 - M a r - 2 0 0 4
B r a n c o L i p e m i c o
2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0
S c a n 0
1 0 0
%
0
1 0 0
%
3 9 3 . 5 > 3 7 3 . 1
2 . 7 7 e 4
1 . 3 8
1 . 1 8
0 . 6 2 0 . 1 0 0 . 5 0
0 . 8 2
1 . 5 4 2 . 4 2 2 . 3 6
2 . 1 6 1 . 6 0
1 . 9 6
2 . 5 0
2 . 7 4
3 8 4 . 7 > 3 2 4 . 7
3 . 4 3 e 3
1 . 4 0
1 . 1 8 0 . 8 0 0 . 4 8 0 . 3 8
1 . 4 8
2 . 3 2 2 . 0 8 1 . 9 6
1 . 7 2
2 . 4 4 2 . 6 6
2 . 8 4

f

0 9 : 5 7 : 5 0 1 6 - M a r - 2 0 0 4
B r a n c o H e m o l i s a d o
2 0 4 0 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0
S c a n 0
1 0 0
%
0
1 0 0
%
3 9 3 . 5 > 3 7 3 . 1
2 . 6 6 e 4
1 . 3 8
1 . 1 8
1 . 1 0
0 . 3 0 0 . 4 8
0 . 8 0 1 . 5 0
2 . 4 2 2 . 2 6
2 . 1 0
1 . 8 8
2 . 6 6 2 . 9 2
3 8 4 . 7 > 3 2 4 . 7
3 . 5 8 e 3
1 . 3 8
0 . 6 2 0 . 2 4
0 . 4 6 0 . 8 0 1 . 1 6
2 . 2 2 2 . 1 4
2 . 0 2
1 . 8 6
2 . 2 8
2 . 9 8 2 . 4 2 2 . 4 6

Figura 11. Cromatograma MRM de plasma branco humano: a) Plasma
branco normal, lote 7997/3, b) Plasma branco normal, lote 42205/1, c) Plasma branco
normal, lote 17679/5, d) Plasma branco normal, lote 42207/1, e) Plasma branco
lipmico, lote 32513/1, f) Plasma branco hemolisado, lote 34614/4.

Durante a corrida analtica, o tempo necessrio para a deteco do pico do
analito ou do padro interno, caracteriza o tempo de reteno dessas substncias, sendo de
2,2 e 1,5 minutos, respectivamente, sugerindo que o mtodo desenvolvido possui um elevado
grau de especificidade. A Figura 12 apresenta um cromotograma MRM de plasma coletado

61
trs horas aps a administrao oral de uma dose de 160 mg de acetato de megestrol, com os
respectivos tempos de reteno.

Figura 12. Cromotograma MRM de plasma coletado trs horas aps a
administrao oral de uma dose de 160 mg de acetato de megestrol: (1) acetato de
megestrol e (2) betametasona.

Na deteco do mtodo utilizado, a dissociao induzida por coliso (CID)
fornece uma energia controlada pelo potencial de separao, ocorrendo entre o orifcio e o
skimmer. A nebulizao da soluo , em alguns casos, facilitada pela ajuda do gs
nitrognio. Posteriormente, as molculas de analito so separadas do solvente, na forma de
ons, por quebra das ligaes atravs da energia vibracional gerada a partir da energia de
coliso. O acetato de megestrol (m/z 384,7) apresentou fragmentos de ons de m/z 324,7 e
para a betametasona (m/z 393,2) fragmentos de m/z 373,1 (Figura 13). Esses produtos foram
obtidos a partir da dissociao provocada por ativao colisional (CAD), onde o gs argnio
produz uma energia vibracional fragmentando os ons precursores. Isso ocorre quando essas
molculas so submetidas ao modo de monitoramento de reao mltipla (ANTIGNAC et
al., 2000).

62

Figura 13. Espectro de massa do on fragmento do acetato de megestrol (A)
e betametasona (B).

A preciso a avaliao da proximidade dos resultados obtidos em uma srie de
medidas de uma amostragem mltipla de uma mesma amostra. Esta considerada como a
concordncia entre os resultados dentro de um curto perodo de tempo com o mesmo analista
e mesma instrumentao, chamada de preciso intralote, e a concordncia entre os resultados
do mesmo laboratrio, mas obtidos em dias diferentes, com analistas diferentes e/ou
equipamentos diferentes, chamada de preciso interlote (CAUSON, 1997).

A proximidade dos resultados obtidos pelo mtodo em estudo em relao ao
valor verdadeiro define a exatido de mtodo analtico. Deve ser determinada em uma
mesma corrida analtica, a exatido intralote, e em corridas diferentes, a exatido interlote
(BRASIL, 2003c).

Para obter a preciso e a exatido, foram utilizadas 4 concentraes distintas
dentro da faixa das concentraes esperadas, incluindo o LQ e as concentraes do controle
de qualidade. Por definio, o coeficiente de variao (CV), para a preciso, no pode
exceder 15% para cada concentrao analisada tolerncia at 20% da concentrao do
limite de quantificao. Em se tratando da exatido, deve estar dentro de 15% do valor atual
em relao mdia das amostras de cada concentrao tolerncia at 20% da concentrao
do limite de quantificao (BRASIL, 2003c).

m/z 384.7
A
m/z 393.2
B

63
A Tabela 16 apresenta as concentraes das amostras controle de qualidade e os
critrios utilizados para a definio de tais concentraes, de acordo com o guia para
validao de mtodos analticos e bioanalticos da ANVISA (BRASIL, 2003c). Vale
salientar, que no foi encontrado na literatura, nenhum relato de mtodos que tenham
utilizados amostras de controle de qualidade baixo, mdio e alto para a determinao do
acetato de megestrol em plasma humano.

Tabela 16: Definio dos Controles de Qualidade (CQ).
Tipo do CQ
Identificao
do CQ
Definio de Faixa
Valor Definido
(ng/mL)
CQ-LQ LQ Mesma concentrao do LQ 2
CQ Baixo CQB Menor ou igual a 3 x LQ 6
CQ Mdio CQM Aproximadamente a mdia entre CQB e
CQA
60
CQ Alto CQA 75-90% da maior concentrao da curva
de calibrao
120

As precises e as exatides intralote foram 3,16%, 4,65% e 2,68%, e 6,77%,
6,23% e 5,73% para CQB (6 ng/mL), CQM (60 ng/mL) e CQA (120 ng/mL),
respectivamente, sendo determinadas para um nico lote em quintuplicata e os resultados das
anlises esto apresentados na Tabela 17.

O estudo realizado por Dikkeschei e colaboradores, em 1990, testou a preciso e
exatido intralote do seu ensaio aplicando cinco amostras de plasma, uma nica
concentrao de 70,9 ng/mL de acetato de megestrol. Obteve um coeficiente de variao de
1,3% e exatido de 3,53%. Apesar dos valores encontrados serem inferiores aos obtidos no
presente estudo, no possvel compar-los isoladamente com a finalidade de afirmar a
superioridade na preciso e exatido da metodologia de Dikkeschei, uma vez que foi
utilizada, para anlise, uma nica e diferente concentrao daquelas desenvolvidas nesse
estudo.

64
Tabela 17: Anlise Intralote dos Controles de Qualidade CQB, CQM e CQA.
Replicatas CQB CQM CQA
1 6,18 60,38 129,89
2 6,26 62,17 124,10
3 6,36 63,10 124,99
4 6,65 68,17 124,22
5 6,58 64,88 131,20
Mdia 6,41 63,74 126,88
DP 0,20 2,96 3,39
CV (%) 3,16 4,65 2,68
Exatido(%) 106,77 106,23 105,73
Concentrao nominal: CQB= 6 ng/mL, CQM= 60 ng/mL e CQA= 120 ng/mL

Na Tabela 18 esto apresentados os resultados dos ensaios realizados para
avaliar a preciso e exatido intra-lote do mtodo analtico, utilizando-se plasmas lipmico e
hemolisado. Observou-se que os valores de preciso foram 3,37%, 3,84% e 4,64% para o
primeiro plasma, e 4,09%, 3,65% e 2,51% para o segundo. A exatido ficou em torno de
6,37%, 0,33% e 0,54%, e 6,93%, -3,73% e -6,4%, para CQB, CQM e CQA,
respectivamente. Foi verificado um alto grau de preciso e exatido intra-lote para as
referidas concentraes, sugerindo no haver variabilidade e discrepncia entre os resultados
das amostras dosadas. Na literatura consultada, no foi encontrado nenhum relato de estudo
prvio utilizando diferentes concentraes de acetato de megestrol em plasma humano
lipmico e hemolisado. Esse trabalho, procurou garantir a reprodutibilidade e concordncia
das anlises, reduzindo, assim, as possveis interferncias nas amostras contendo plasma
lipmico e hemolisado.

65
Tabela 18: Anlise Intralote dos Controles de Qualidade do Acetato de Megestrol
em plasmas Lipmico e Hemolisado.
Plasma Lipmico Plasma Hemolisado
Rplicas CQB CQM CQA CQB CQM CQA
1 6,32 62,15 121,12 6,37 56,60 111,20
2 6,23 56,97 119,22 6,08 60,95 112,03
3 6,27 59,08 115,54 6,46 55,31 115,83
4 6,76 62,63 129,94 6,81 58,14 114,10
5 6,33 60,17 117,39 6,36 58,11 108,45
Mdia 6,38 60,20 120,64 6,42 57,82 112,32
DP 0,22 2,31 5,60 0,26 2,11 2,82
CV(%) 3,37 3,84 4,64 4,09 3,65 2,51
Exatido(%) 106,37 100,33 100,54 106,93 96,37 93,60

As anlises da preciso e exatido interlotes so apresentados nas Tabelas 19 e
20. Sendo includo no clculo, a anlise do limite de quantificao que apresentou 7,53% e
1,20%, respectivamente. Os controles de qualidade baixo-mdio-alto tiveram para esses
parmetros, os seguintes resultados: 7,76%, 6,23% e 6,37%, e 0,08%, 1,51% e 2,11%,
respectivamente.

A avaliao da preciso e exatido interlote realizada por Dikkeschei e
colaboradores, utilizou dezessete amostras de plasma, a uma concentrao de 70,9 ng/mL de
acetato de megestrol. Obteve como resultado um coeficiente de variao de 4% e exatido de
3,53%. Novamente, esses resultados no garantem a superioridade desse mtodo em
relao ao aqui proposto, pois aplicado somente uma nica e diferente concentrao para
determinar a reprodutibilidade e exatido da metodologia.

Essa nova metodologia contou com a anlise da preciso e exatido de quatro
diferentes concentraes, incluindo limite de quantificao (2 ng/mL) e controles de
qualidade (6, 60 e 120 ng/mL). Isso nos permite afirmar que os resultados obtidos na
quantificao do acetato de megestrol, em diversas concentraes plasmticas, bem como na
avaliao do seu perfil farmacocintico, possui um alto grau de confiana.

66
Tabela 19: Anlise Interlotes do Controle de Qualidade LQ.
LQ (ng/mL)
Mdia 2,02
DP 0,15
CV (%) 7,53
Exatido (%) 101,20
Concentrao nominal: LQ= 2 ng/mL

Tabela 20: Anlise Interlotes dos Controles de Qualidade CQB, CQM e CQA.
CQB CQM CQA
Mdia 6,00 60,93 122,53
DP 0,47 3,80 7,80
CV (%) 7,76 6,23 6,37
Exatido (%) 100,08 101,55 102,11

A recuperao absoluta de um mtodo bioanaltico medida comparando os
resultados analticos de amostras extradas de acetato de megestrol (concentrao baixa,
mdia e alta), contemplando a faixa de linearidade do mtodo, com os resultados obtidos
com solues padro no extradas de acetato de megestrol, que representam 100% de
recuperao. A mesma anlise foi feita para 1,2 g/mL de betametasona. Essa recuperao
indica se o mtodo de extrao forneceu condies para que no houvesse desperdcio
significativo do analito presente na amostra (TAYLOR, 1987). Na Tabela 21 esto
apresentados os resultados das anlises de recuperao, que avaliaram a eficincia do
procedimento de extrao do mtodo.

67
Tabela 21: Anlise da porcentagem de recuperao do frmaco e do padro interno.
Acetato de Megestrol Betametasona
Rplicas CQB CQM CQA 1,2 g/mL
1 3,37 49,04 109,07 896,31
2 4,80 51,03 110,96 969,50
3 4,99 51,03 111,63 944,36
4 4,63 51,05 110,72 985,73
5 4,66 53,17 109,30 970,76
Mdia 4,49 51,06 110,34 953,33
DP 0,64 1,46 1,11 35,17
CV (%) 14,29 2,87 1,00 3,69
Recuperao (%) 74,86 85,11 91,95 79,44

Os valores de recuperao para os controles de qualidade baixo, mdio e alto do
acetato de megestrol foram 74,86%, 85,11% e 91,95%, respectivamente. A legislao
vigente (BRASIL, 2003c) permite valores menores que 100%, desde que a recuperao seja
precisa e exata. Embora seja desejvel obter uma recuperao mais prxima de 100% quanto
possvel a fim de maximizar a sensibilidade do mtodo, improvvel que recuperaes
acima de 50% comprometam a integridade do mtodo. Bons ndices de preciso e exatido
podem ser obtidos com uma recuperao moderada, resultando em uma adequada
sensibilidade (CAUSON, 1997).

A validao do mtodo analtico foi realizada com sucesso, uma vez que
cumpriu os seguintes critrios:

a) Especificidade: no ocorreram interferncias nos tempos de reteno do
frmaco ou estas foram menores que 20% da resposta do padro LQ. No houve
interferncia no tempo de reteno do padro interno ou esta foi menor que 5% da resposta
na concentrao utilizada no estudo;

b) Sensibilidade: a menor concentrao da curva de calibrao foi aceito como
LQ uma vez que apresentou CV < 20%;

68

c) Preciso: o coeficiente de variao (CV) calculado para os controles de
qualidade CQB, CQM e CQA foram menores ou iguais a 15% e menores ou iguais a 20%
para o controle de qualidade LQ;

d) Exatido: a exatido calculada para o controle de qualidade LQ e para os
controles de qualidade CQB, CQM e CQA apresentaram valores compreendidos dentro do
desvio de + 20% e + 15%, respectivamente, em relao ao valor nominal.

Estudos de estabilidade mostram que a concentrao de analito presente na
amostra no momento da anlise corresponde concentrao presente no momento da coleta
(DADGAR et al., 1995). As amostras utilizadas nos estudos de estabilidade devem ser
comparadas com as recm-preparadas (controles 100%) e analisadas na mesma corrida
analtica. Valores superiores a 10% podem denotar comprometimento dos dados, embora
variaes acima de 20% podem ser aceitos em certas condies (HILL, 1994). As amostras
sero consideradas estveis quando no se observar desvio superior a 15% do valor obtido
das amostras recm-preparadas, com exceo do LQ, para o qual se aceita desvio de at 20%
(BRASIL, 2003c).

Os resultados da estabilidade do frmaco, no tempo e condies de anlise
dentro do auto-injetor, mostraram que as variaes, em relao s concentraes nominais,
encontraram-se dentro da faixa permitida de + 15% at o tempo de 12 horas, conforme a
Tabela 22.

Estudos de estabilidade so de notria importncia para assegurar a qualidade
nos procedimentos bioanalticos; apesar disso, no foi encontrado nenhum relato, em
publicaes cientficas, a cerca da execuo desses testes nas quantificaes j realizadas
para o acetato de megestrol.

69
Tabela 22: Estudo de estabilidade do Acetato de Megestrol em plasma submetido ao
tempo e condies de anlise dentro do auto-injetor.
t (h) CQB(1) CQB(2) CQB(3) CQM(1) CQM(2) CQM(3) CQA(1) CQA(2) CQA(3)
0 5,75 6,47 5,86 58,17 62,86 58,81 113,93 114,51 118,01
1 5,97 6,55 5,79 56,52 64,67 60,53 110,22 112,73 114,87
2 5,93 6,03 5,42 55,42 61,10 63,04 125,00 123,31 128,74
3 5,96 6,05 5,46 55,48 63,76 62,11 123,88 122,86 127,29
4 6,00 6,56 5,69 58,61 65,94 64,62 124,58 122,04 125,73
6 5,42 5,94 5,98 62,17 63,79 56,86 110,19 110,52 116,95
8 5,97 6,47 6,36 60,90 65,65 60,36 113,50 114,70 119,78
12 6,56 6,54 6,22 61,97 66,50 63,83 120,79 118,48 126,82
25 6,35 7,16 6,37 61,72 66,53 67,18 136,31 138,71 147,68
Mdia 5,99 6,42 5,91 59,00 64,53 61,93 119,82 119,76 125,10
DP 0,32 0,37 0,36 2,79 1,83 3,15 8,65 8,49 9,88
CV (%) 5,42 5,84 6,05 4,72 2,84 5,09 7,22 7,09 7,90
Exatido
(%)
99,83 106,98 98,43 98,33 107,56 103,21 99,85 99,80 104,25

A Tabela 23 apresenta as variaes obtidas quando so comparados os valores
mdios de CQB, CQM e CQA obtidos no tempo 0 h com os valores mdios de CQB, CQM e
CQA obtidos no tempo 12 h. Os resultados obtidos esto abaixo do desvio permitido de 15%
para os trs controles analisados e, portanto, pode-se concluir que as amostras permaneceram
estveis dentro do auto-injetor durante o perodo de 12 h.

Tabela 23: Mdia e Desvios obtidos no estudo de estabilidade do Acetato de
Megestrol em plasma submetido anlise no auto-injetor.
t
(0 h)
CQB CQM CQA t
(12 h)
CQB CQM CQA
Mdia 6,03 59,95 115,48 Mdia 6,44 64,10 122,03
DP 0,39 2,54 2,21 DP 0,19 2,28 4,31
CV (%) 6,44 4,24 1,91 CV (%) 2,96 3,55 3,53
CQB CQM CQA
Variao entre o tempo de 0 a 12 h (%) -6,86 -6,93 -5,67

70
Durante a validao do mtodo, tomaram parte dos estudos de estabilidade,
testes realizados em ciclos de congelamento e degelo. A oscilao de temperatura, qual as
amostras seriam submetidas na quantificao, foi simulada atravs dos ciclos executados
durante o desenvolvimento do mtodo. A finalidade destes testes foi verificar a ocorrncia de
degradao de uma frao significativa da amostra. A avaliao da estabilidade do acetato de
megestrol durante trs ciclos de congelamento e descongelamento para os controles de
qualidade baixo, mdio e alto est apresentada nas Tabelas 24, 25 e 26, respectivamente.

Tabela 24: Estudo de estabilidade do Acetato de Megestrol em plasma submetido a trs
ciclos de congelamento e descongelamento para o controle de qualidade baixo.

Amostras recm-
preparadas
CQB
Rplicas CQB Degelo 1 Degelo 2 Degelo 3
1 5,92 5,89 5,79 5,26
2 6,23 5,46 5,67 5,78
3 5,61 5,83 6,12 5,59
4 5,80 5,21 5,67 5,94
5 6,08 5,41 5,95 5,49
Mdia 5,93 5,56 5,84 5,61
DP 0,24 0,29 0,19 0,26
CV (%) 4,06 5,22 3,32 4,67
Exatido (%) 98,80 92,67 97,33 93,53
Concentrao nominal: CQB= 6 ng/mL

71
Tabela 25: Estudo de estabilidade do Acetato de Megestrol em plasma submetido a
trs ciclos de congelamento e descongelamento para o controle de qualidade mdio.

Amostras recm-
preparadas
CQM
Rplicas CQM Degelo 1 Degelo 2 Degelo 3
1 62,59 54,23 55,56 56,46
2 61,84 57,25 54,11 61,40
3 65,01 56,77 56,11 64,53
4 65,37 66,18 74,22 67,45
5 62,24 57,97 59,39 68,63
Mdia 63,41 58,48 59,88 63,69
DP 1,65 4,53 8,25 4,92
CV (%) 2,60 7,74 13,77 7,72
Exatido (%) 105,68 97,47 99,80 106,16
Concentrao nominal: CQM= 60 ng/mL

Tabela 26: Estudo de estabilidade do Acetato de Megestrol em plasma submetido a trs
ciclos de congelamento e descongelamento para o controle de qualidade alto.

Amostras recm-
preparadas
CQA
Rplicas CQA Degelo 1 Degelo 2 Degelo 3
1 114,06 117,84 55,56 133,89
2 128,61 105,33 54,11 127,06
3 121,46 105,64 56,11 121,56
4 119,33 110,02 74,22 115,46
5 117,85 109,35 59,39 117,59
Mdia 120,26 109,64 59,88 123,11
DP 5,39 5,05 8,25 7,47
CV (%) 4,48 4,61 13,77 6,07
Exatido (%) 100,22 91,36 99,80 102,59
Concentrao nominal: CQA= 120 ng/mL

72
So apresentadas as variaes das mdias para cada controle de qualidade (CQB,
CQM e CQA) em cada ciclo de descongelamento e degelo, em relao s mdias obtidas
para as amostras recm-preparadas, na Tabela 27.

Tabela 27: Variao das mdias dos controles de qualidade nos ciclos de
congelamento e degelo em relao s mdias das amostras recm-preparadas.
CQB CQM CQA
Degelo1 Degelo2 Degelo3 Degelo1 Degelo2 Degelo3 Degelo1 Degelo2 Degelo3
Variao*
(%)
-6,21 -1,48 -5,33 -7,77 -5,57 0,45 -8,84 -6,08 2,37
* Variao das amostras recm preparadas e degelos 1, 2 e 3

A Tabela 27 traz uma comparao das variaes das mdias dos CQB, CQM e
CQA para amostras recm-preparadas (Tabelas 24, 25 e 26) e as mdias dos CQB, CQM e
CQA, em cada ciclo de congelamento e degelo (Tabelas 24, 25 e 26). Com base nestes
resultados, pode-se inferir que o acetato de megestrol analisado no plasma humano estvel
nos trs ciclos de congelamento e descongelamento, quando armazenados a 20C, uma vez
que foram quantificados a cada degelo.

A Tabela 28 apresenta os resultados das anlises realizadas com amostras recm-
preparadas (a fresco) e com as amostras de longa durao, que permaneceram congeladas a
20C, por um perodo equivalente ao compreendido entre a primeira coleta e anlise da
ltima amostra, segundo o preconizado pela ANVISA na RE n 899/2003.

73
Tabela 28: Estabilidade de longa durao para o Acetato de Megestrol no fluido biolgico.
Amostras Recm Preparadas Amostras de longa durao
Rplicas CQB CQM CQA CQB CQM CQA
1 5,98 65,48 108,45 5,63 57,96 111,44
2 6,05 57,21 127,35 5,42 54,06 113,69
3 5,62 59,66 111,54 5,81 58,26 109,82
4 5,71 55,79 109,68 5,40 55,62 113,02
5 6,44 54,75 109,39 5,64 59,10 106,87
Mdia 5,96 58,58 113,28 5,58 57,00 110,97
DP 0,32 4,28 7,94 0,17 2,09 2,74
CV (%) 5,42 7,30 7,01 3,06 3,67 2,47
Exatido (%) 99,33 97,63 94,40 93,00 95,00 92,47

As variaes obtidas, quando so comparados os valores mdios de CQB, CQM
e CQA, para as amostras recm-preparadas, com os valores mdios de CQB, CQM e CQA,
para as amostras armazenadas, durante 102 dias (perodo de armazenamento para o estudo de
estabilidade de longa durao), esto abaixo dos desvios permitidos de 15% para os trs
controles analisados e, portanto, pode-se concluir que o acetato de megestrol, analisado no
plasma humano, permaneceu estvel neste perodo em que as amostras ficaram armazenadas
a 20
o
C e, portanto, apresentam estabilidade de longa durao.

Na Tabela 29, esto apresentados os resultados das anlises realizadas com
amostras recm-preparadas, amostras no processadas (mantidas, em espera, na bancada
durante seis horas, temperatura ambiente, para, ento serem extradas e analisadas no
sistema cromatogrfico) e amostras aps quatro dias de congelamento.

74
Tabela 29: Estabilidade das amostras de plasma no processadas.
Amostras Recm
preparadas
Amostras analisadas aps
6h temperatura ambiente
Amostras analisadas aps 4
dias de congelamento
Rplicas CQB CQM CQA CQB CQM CQA CQB CQM CQA
1 5,92 62,59 114,06 6,13 56,61 117,79 5,24 58,92 116,53
2 6,23 61,84 128,61 5,51 58,02 110,36 5,54 66,24 125,46
3 5,61 65,01 121,46 5,21 57,50 113,63 5,58 57,38 119,84
4 5,80 65,37 119,33 5,53 58,99 112,63 5,45 62,80 124,01
5 6,08 62,24 117,85 5,35 60,32 116,55 5,47 57,57 117,62
Mdia 5,93 63,41 120,26 5,55 58,29 114,19 5,46 60,58 120,69
DP 0,24 1,65 5,39 0,35 1,43 3,00 0,13 3,84 3,91
CV (%) 4,06 2,60 4,48 6,34 2,45 2,63 2,41 6,34 3,24
Exatido
(%)
98,80 105,68 100,22 92,43 97,15 95,16 90,93 100,97 100,58

Comparando-se os valores mdios obtidos, para os controles de qualidade baixo,
mdio e alto das amostras recm-preparadas com as amostras no processadas, com aqueles
obtidos para as amostras analisadas aps quatro dias de congelamento, pode-se notar que as
variaes resultantes so menores que 15% para todos os controles de qualidades, o que
indica a estabilidade das amostras de plasma no processadas durante o processo de
quantificao.

Devem se fazer presentes, ainda, testes para verificao da estabilidade das
solues padro do analito e do padro interno, com a finalidade de assegurar a manuteno
das propriedades fsico-qumicas, mesmo sob as variaes ambientais que decorrem do
processo bioanaltico. Na Tabela 30, esto apresentados os resultados das anlises das reas
dos picos, obtidos em cromatogramas, realizadas com solues padro de acetato de
megestrol 500 ng/mL e de betametasona 1,2 g/mL recm-preparadas, seis horas aps
preparo ( temperatura ambiente) e aps dez dias de refrigerao.

75
Tabela 30: Estabilidade das solues padro para o Acetato de Megestrol e Betametasona.
Recm Preparada
Solues padro 6h aps
preparo a temperatura
ambiente
Solues padro aps 10
dias de refrigerao
Rplicas
Acetato de
Megestrol
Betametasona
Acetato de
Megestrol
Betametasona
Acetato de
Megestrol
Betametasona
1 173571 174825 202012 173261 201124 163855
2 175633 172786 201444 174663 199015 162823
3 173319 162468 199783 161331 200987 163093
Mdia 174174,3 170026,3 201079,7 169751,7 200375,3 163257
DP 1269,51 6624,63 1158,30 7326,13 1180,07 535,19
CV (%) 0,73 3,90 0,58 4,32 0,59 0,33

Comparando-se os valores mdios das reas obtidas para as solues padro de
acetato de megestrol e de betametasona recm-preparadas com os valores mdios obtidos
para as solues padro mantidas temperatura ambiente, expostas durante 6h, e com as
solues padro analisadas aps 10 dias sob refrigerao, pode-se notar que as variaes
obtidas so menores que 15%, o que indica a estabilidade fsico-qumica das solues padro
do frmaco e do padro interno.

76
3. ETAPA FARMACOCINTICA

A metodologia desenvolvida foi aplicada para a quantificar e traar o perfil
farmacocintico de duas formulaes de 160 mg de acetato de megestrol em um estudo de
bioequivalncia. Atravs da etapa de validao do mtodo, foi garantida, por meio de
estudos experimentais, a confiabilidade dos resultados, indicando a adequada especificidade,
linearidade, preciso, sensibilidade, exatido e robustez - capacidade de resistir a pequenas e
deliberadas variaes dos parmetros analticos.

A Figura 14 representa a curva mdia das concentraes plasmticas de acetato
de megestrol dos 28 voluntrios versus tempo. importante ressaltar o fato de que a Figura
14 foi construda a partir das mdias dos valores das concentraes de cada tempo, porm
no avalia a razo das mdias geomtricas de C
max
e ASC
(0-144h)
, no podendo ser utilizada
para questionar a intercambialidade das duas formulaes. No entanto, com ela obtemos uma
representao grfica dos processos farmacocinticos de absoro e excreo dos frmacos.
No anexo V esto apresentados os grficos das curvas de concentraes contra o tempo e os
parmetros farmacocinticos para cada indivduo.

Figura 14. Curva mdia da concentrao plasmtica (ng/mL) versus tempo
(h) aps a administrao de duas formulaes de 160 mg de acetato de megestrol em 28
voluntrios saudveis.

Megestat

Megestrol

77
Para avaliar as variaes inter (seqncia) e intra-individual (perodo) para a
concentrao mxima e a rea sob a curva, utilizou-se de uma anlise de varincia para obter
a variabilidade dos dados, em um delineamento cruzado padro 2x2, como mostra as Tabelas
31 e 32.

Tabela 31: ANOVA para In(C
max
).
Fonte g.l. SQ QM F Valor de p
Inter-individual
Seqncia
Resduos (Inter)

1
26

0,4594
8,5818

0,4194
0,3300

1,2708
2,0244

0,2699
0,0389
Intra-individual
Frmaco
Perodo
Resduos (Intra)

1
1
26

1,6351
0,0256
4,2391

1,6351
0,0256
0,1630

10,0290
0,1570

0,0039
0,6951

Total 55 14,9013

Tabela 32: ANOVA para In(ASC(
0-144h)
).
Fonte g.l. SQ QM F Valor de p
Inter-individual
Seqncia
Resduos (Inter)

1
26

0,4572
12,4736

0,4572
0,4797

0,9531
4,5069

0,3379
0,00017
Intra-individual
Frmaco
Perodo
Resduos (Intra)

1
1
26

0,8737
0,0982
2,7676

0,8737
0,0982
0,1064

8,2083
0,9226

0,0081
0,3456

Total 55 16,6705

Verifica-se que, tanto para C
max
como para ASC
(0-144h)
, o efeito de seqncia no
significante, pois o valor de p maior que 0,05 (valor de p = 0,2699 para C
max
e valor de p
= 0,3379 para ASC
(0-144h)
). Constata-se, atravs desses dados, que h uma variao inter-
individual no significativa entre os valores encontrados para C
max
e para ASC
(0-144h)
.

78
Nota-se tambm que o efeito do perodo no significante (valor de p = 0,6951)
para C
max
, bem como para ASC
(0-144h)
(valor de p = 0,3456). Isso demonstra que a
variabilidade intra-individual no representou um fator de interferncia na absoro do
frmaco e conseqentemente, alterao da biodisponibilidade de ambas as formulaes.
Deve-se ressaltar que entre as administraes houve um intervalo de 27 dias, suficiente para
a completa eliminao do medicamento.

Em 1984, Alexieva-Figusch e colaboradores utilizaram tcnicas de
radioimunoensaio para determinar as concentraes de acetato de megestrol em dez
voluntrios sadios do sexo feminino, aps administrao de um comprimido de 60 mg ou
quatro de 15 mg, em um estudo cruzado. A mdia do C
max
aps 2,6 horas foi de 43,9 ng/mL
(variao de 21,7 a 87,7 ng/mL) e a rea sob a curva obtida de 0 a 24 horas foi de
495ng.h/mL (variao de 288 a 967 ng.h/mL). Este trabalho, atravs da anlise de varincia,
demonstrou a existncia de grande variabilidade intra e inter-individual, sugerindo a
existncia de problemas metodolgicos.

Como, geralmente, so administradas doses elevadas de acetato de megestrol, o
monitoramento dos nveis plasmticos se faz necessrio, dadas as j esperadas diferenas
intra e inter-individuais na absoro e no metabolismo (DIKKESCHEI et al., 1985).
Entretanto, particularmente no estudo aqui relatado, no se observou diferenas intra e inter-
individuais estatisticamente significativas. Deve-se considerar, ainda, que este resultado foi
obtido em um ensaio clnico, que contou com a participao de voluntrios saudveis e do
sexo masculino, eliminando-se assim, a interferncia de doenas um fator de variao
intra-individual e variaes hormonais cclicas um fator de variao inter-individual.

Dikkeschei, em 1990, desenvolveu um mtodo para quantificar o acetato de
megestrol atravs da cromatografia lquida de alta eficincia e, em seguida, para maior
credibilidade do seu ensaio, as amostras foram dosadas por cromatografia gasosa acoplada
ao espectrmetro de massa. Essa tcnica contou com um limite de quantificao de 5 ng/mL,
com a anlise de somente uma concentrao de acetato de megestrol em plasma, para
assegurar a reprodutibilidade e segurana do mtodo bioanaltico. Ao comparar a
metodologia antes utilizada com a atualmente desenvolvida, verifica-se um aumento na
sensibilidade e seletividade, tornando o mtodo mais rpido (cada quantificao foi

79
programada para 3 minutos), permitindo a dosagem incluindo-se aqui, preparo, aquisio e
processamento de dados de mais de 160 amostras diariamente.

Na Tabela 33 esto apresentados os parmetros farmacocinticos mdios, usando
um intervalo de confiana de 90%, obtidos das anlises plasmticas de 28 voluntrios
submetidos ao ensaio entre Megestat
e Acetato de Megestrol.

Tabela 33: Mdia e IC (90%) dos parmetros farmacocinticos obtidos aps a
administrao de 160 mg de Megestat
e Acetato de Megestrol.
Formulao
Parmetros Farmacocinticos
Megestat
ASC
0-144h

(ng*h*mL
-1
)
Mdia
(IC 90%)
1882,97
(1566,99 2198,95)
1577,34
(1242,79 1911,89)
ASC
0-

(ng*h*mL
-1
)
Mdia
(IC 90%)
2113,47
(1734,72 2492,23)
1768,38
(1360,34 2176,42)
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 90,4 90,8
C
max
(ng*mL
-1
)
Mdia
(IC 90%)
66,89
(56,48 77,31)
48,44
(40,31 56,56)
T
max
(h)
Mdia
(IC 90%)
4,41
(3,87 4,95)
6,45
(3,86 9,04)
t
1/2
(h)
Mdia
(IC 90%)
40,96
(34,23 47, 69)
33,52
(29,24 37,80)
K (1/h)
Mdia
(IC 90%)
0,02
(0,018 0,022)
0,02
(0,016 0,024)

Com base nos parmetros farmacocinticos encontrados, as duas formulaes
apresentaram diferenas no que diz respeito rea sob a curva e concentrao mxima.
Entretanto, os valores mdios do tempo mximo para atingir o pico de concentrao
permaneceram sem diferena estatisticamente significante (p = 0,21), para o intervalo de
90% de confiana.

Tendo em vista que ASC
(0-)
consiste de um valor estimado representativo da
extenso total de absoro do frmaco e, que a ASC
(0-144h)
representa a extenso de absoro

80
quantificada na metodologia em estudo, a relao desses dois valores deve ser maior ou igual
a 80%. A mdia de ASC
0-144h
(Megestat
= 1882,97, Megestrol = 1577,34) maior que 80%

da mdia de ASC
0-
(Megestat
80% = 1690,77, Megestrol 80% = 1414,70), para o

medicamento Megestat
e Acetato de Megestrol, conforme preconiza a RE n 899/2003.

As razes das mdias geomtricas do C
max
e ASC
0-144h
da formulao de
comprimidos de acetato de megestrol 160 mg pelo Megestat

160mg foi de 71,05% e
77,89%, respectivamente. O intervalo de confiana de 90% foi de 59,11 85,41% e 67,13 -
90,38%, respectivamente.

A Food and Drug Administration (FDA) props que formulaes farmacuticas
sejam consideradas bioequivalentes quando a razo das mdias de C
max
e AUC
(0-144h)

apresentarem-se entre 80125% (considerando um intervalo de confiana de 90%). Os
resultados estatsticos demonstraram que a formulao de acetato de megestrol 160 mg no
foi bioequivalente formulao Megestat quanto taxa (C
max
) e extenso de absoro
(ASC) aps uma nica administrao.

De acordo com Dollery (1999), a meia-vida de eliminao do acetato de
megestrol de aproximadamente 15 a 20 horas. Nossos resultados demonstraram, no
entanto, que o valor mdio da meia-vida para as duas formulaes testadas foi de 33,52 a
40,96 horas. Tal diferena pode ser justificada pela maior sensibilidade do mtodo (LQ = 2
ng/mL) em relao ao mtodos utilizados em estudos anteriores, tornando possvel a
deteco de nveis plasmticos com preciso e exatido, em um intervalo de tempo para o
qual a quantificao no seria possvel anteriormente.

Uma vantagem da sensibilidade do mtodo descrito permitir, ao investigador,
administrar doses mais baixas da medicao testada e com isso aumentar o grau de
segurana para os voluntrios do estudo, diminuindo a probabilidade de aparecimento de um
nmero maior de eventos adversos, j que, na maioria das vezes, esses so dose-
dependentes. A sensibilidade do mtodo analtico um fator determinante da dose utilizada
no estudo farmacocintico.

81
Devido ao grande uso de acetato de megestrol para o tratamento de vrios tipos
de cncer hormnio-dependente ou da caquexia, a grande variao inter-individual indica
uma forte necessidade de monitorizao dos nveis plasmticos durante o tratamento. A
especificidade e os nveis plasmticos so relativamente altos depois da dosagem
comumente utilizada no tratamento do cncer, tornando a monitorizao das concentraes
plasmticas de acetato de megestrol mais confiveis. Entretanto, no foram desenvolvidos
estudos que relatem os efeitos desse frmaco no tratamento do cncer, obtidos atravs de
suas concentraes sangneas reais.

82

C
C
O
O
N
N
C
C
L
L
U
U
S
S
O
O

83

Atravs da cromatografia lquida de alta eficincia com deteco por
espectrometria de massa no modo MS/MS, desenvolveu-se um mtodo sensvel e altamente
seletivo do que outros j registrados para determinar os nveis de acetato de megestrol no
plasma humano. O mtodo desenvolvido rpido, sendo a quantificao programada para 3
minutos e mais de 160 amostras podem ser dosadas diariamente.

O mtodo bioanaltico foi aplicado com sucesso para analisar os parmetros
farmacocinticos do acetato de megestrol aps a administrao de duas formulaes de 160
mg para voluntrios sadios, que mostraram no ser intercambiveis.

84

R
R
E
E
F
F
E
E
R
R
N
N
C
C
I
I
A
A
S
S
B
B
I
I
B
B
L
L
I
I
O
O
G
G
R
R
F
F
I
I
C
C
A
A
S
S

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84. TEULINGS, F.A.G.; KULPERS, T.J.; BLONK-VAN DER WIJST, J. In: WITTCLIFF,
J.L.; DAPUNT, O. Steroid Receptors and Hormone-Dependent Neoplasias. Masson,
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85. VESTAL, M.L. Methods of Ion Generation. Chemestry Review, v. 101, n. 2, p. 361-
375, 2001.
86. WAIT, R.B. Megestrol acetate in the management of advanced endometrial carcinoma.
Obstetrics and Gynecology, v. 41, p. 129-130, 1973.
87. WEIKEL, J.H.; NELSON, L.W. Problems in evaluating chronic toxicity of
contraceptive steroids in dogs. Journal of Toxicology and Environmental Health, v.
3, p. 167-177, 1977.

92
88. WENTZ, W.B. Progestin therapy in lesions of endometrium. Seminars in Oncology,
v. 12, p. 23-27, 1985.
89. WHITEHOUSE, C.M.; DREYER, R.N.; YAMASHITA, M.; FENN, J.B. Electrospray
interface for liquid chromatographs and mass spectrometers. Journal of Physical
Chemistry, v. 57, p. 675-679, 1985.
90. WONG, S.F.; MENG, C.K.; FENN, J.B. Analyzing organic molecules with
electrospray mass spectrometry. Journal of Physical Chemistry, v. 92, 546p, 1988.
91. YERGEY, A.L.; YERGEY, A.K.J. American Society for Mass Spectrometry, v. 8,
943p, 1997.

93

G
G
L
L
O
O
S
S
S
S
R
R
I
I
O
O

94

Biodisponibilidade Absoluta (F): a frao do frmaco sistemicamente absorvida e a
disponibilidade do frmaco da forma farmacutica quando comparada com a
biodisponibilidade do frmaco aps administrao intravenosa. usualmente calculada
como a razo da rea sob a curva (ASC) da concentrao plasmtica versus tempo, para a
forma farmacutica administrada oralmente em relao a ASC obtida aps administrao
intravenosa do frmaco. Um valor F de 0,80 ou 80% indica que apenas 80% do frmaco
ficou disponvel sistemicamente da forma farmacutica.

Biodisponibilidade Oral: indica a velocidade e a extenso de absoro de um princpio
ativo em uma forma de dosagem, a partir de sua curva concentrao versus tempo na
circulao sistmica ou a partir de sua excreo urinria. a frao da dose de um
medicamento, oralmente administrado, que foi absorvida e atinge a circulao como
princpio ativo (Lei n 9.787, de 10/2/99).

Biodisponibilidade Relativa: disponibilidade sistmica do frmaco a partir de sua forma
farmacutica quando comparada a uma formulao de referncia. calculada como a razo
da rea sob a curva da concentrao plasmtica versus tempo, ASC para a forma
farmacutica em relao ao ASC do referncia. Uma biodisponibilidade relativa de F = 1,0
ou 100% implica que a biodisponibilidade a partir da forma farmacutica a mesma, mas
no indica a completa absoro sistmica do frmaco. A determinao da biodisponibilidade
muito importante em estudos de medicamentos.

Denominao Comum Brasileira: denominao do frmaco ou princpio
farmacologicamente ativo aprovado pelo rgo federal responsvel pela vigilncia sanitria
(Lei n 9.787, de 10/2/99).

Denominao Comum Internacional: denominao do frmaco ou princpio
farmacologicamente ativo recomendada pela Organizao Mundial de Sade (Lei n 9.787,
de 10/2/99).

Equivalncia Farmacutica: dois medicamentos so considerados terapeuticamente
equivalentes se eles so farmaceuticamente equivalentes e, aps administrao na mesma
dose molar, seus efeitos em relao eficcia e segurana so essencialmente os mesmos, o

95
que se avalia por meio de estudos de bioequivalncia apropriados, ensaios
farmacodinmicos, ensaios clnicos ou estudos in vitro.

Equivalentes Farmacuticos: so medicamentos que contm o mesmo frmaco, isto ,
mesmo sal ou ster da mesma molcula terapeuticamente ativa, na mesma quantidade e
forma farmacutica, podendo ou no conter excipientes idnticos. Devem cumprir com as
mesmas especificaes atualizadas da Farmacopia Brasileira e, na ausncia destas, com as
de outros cdigos autorizados pela legislao vigente ou, ainda, com outros padres
aplicveis de qualidade, relacionados identidade, dosagem, pureza, potncia, uniformidade
de contedo, tempo de desintegrao e velocidade de dissoluo, quando for o caso
(BRASIL, 2003a).

Bioequivalncia: dois medicamentos so ditos bioequivalentes quando so administrados na
mesma dose molar, nas mesmas condies experimentais e no apresentam diferenas
estatisticamente significativas em relao biodisponibilidade (BRASIL, 2003a).

Droga: a matria prima mineral, vegetal ou animal da qual se podem extrair um ou mais
princpios ativos. De acordo com esta acepo, os agentes teraputicos de origem sinttica
no so drogas.

Frmaco: a substncia qumica de constituio definida que pode ter aplicao em
Farmcia, seja como preventivo, seja como curativo, seja como agente de diagnstico; a ser
aceita esta definio, a matria prima mineral, vegetal ou animal da qual se podem extrair
uma ou mais bases medicamentosas no frmaco, pois sua constituio qumica no
necessariamente conhecida.

Medicamento: produto farmacutico, tecnicamente obtido ou elaborado, com finalidade
profiltica, curativa, paliativa ou para fins de diagnstico". (Lei n 5.991, de 17/12/73).
uma forma farmacutica terminada que contm o frmaco, geralmente em associao com
adjuvantes farmacotcnicos.

Medicamentos Bioequivalentes: so medicamentos equivalentes farmacuticos que, ao
serem administrados na mesma dose molar, nas mesmas condies experimentais, no

96
apresentam diferenas estatisticamente significativas em relao biodisponibilidade,
segundo a Resoluo RDC n 135, de 29 de maio de 2003.

Medicamento Referncia: medicamento inovador registrado no rgo federal responsvel
pela vigilncia sanitria e comercializado no Pas, cuja eficcia, segurana e qualidade foram
comprovadas cientificamente junto ao rgo federal competente, por ocasio do registro (Lei
n 9.787, de 10/2/99).

Medicamento Genrico: medicamento similar a um produto de referncia ou inovador, que
se pretende ser com este intercambivel, geralmente produzido aps a expirao ou renncia
da proteo patentria ou de outros direitos de exclusividade, comprovada a sua eficcia,
segurana e qualidade, e designado pela DCB ou, na sua ausncia, pela DCI (Lei n 9.787, de
10/2/99).

Estudo Aberto: tanto o pesquisador responsvel como o sujeito da pesquisa so informados
e tm conhecimento sobre a medicao que ser administrada.

Estudo Cruzado: em uma das fases da pesquisa administra-se ao sujeito da pesquisa
(voluntrio) o medicamento referncia e na outra o medicamento teste, ou viceversa. O
mesmo voluntrio deve ser submetido as duas formulaes.

ndice de Massa Corprea (IMC): a razo do peso (Kg) pela altura ao quadrado (m). o
melhor indicador de obesidade, pois enfatiza a adiposidade relativa dos indivduos e
minimiza os efeitos da altura. O valor timo de 20 - 27 segundo Ministry of National
Health and Welfare, Canad, entretanto, a National Academy of Sciences enfatiza que o
IMC aumenta com a idade, de 19 24 para adultos jovens e de 24 29 para acima de 65
anos.

Analito: composto qumico especfico a ser mensurado, podendo ser o frmaco no-
transformado, biomolcula ou seu derivado, metablito ou produto de degradao em uma
matriz biolgica (BRASIL, 2003c).

97
Matriz Biolgica: material distinto de origem biolgica, que pode ser amostrado e
processado de modo reprodutvel (BRASIL, 2003c).

Controle de Qualidade: amostra de matriz biolgica adicionada do analito, usada para
monitorar o desempenho de um mtodo bioanaltico e para avaliar a integridade e validade
dos resultados das amostras desconhecidas, analisadas numa corrida individual (BRASIL,
2003c).

Corrida Analtica: conjunto completo de amostras em estudo, com um nmero apropriado
de padres e controles de qualidade para sua validao e que tem sua anlise completa nas
mesmas condies (BRASIL, 2003c).

Padro Interno: composto, geralmente, com caractersticas estruturais similares ao analito,
adicionado aos padres de calibrao e amostras em concentraes conhecidas e constantes,
para facilitar a determinao do analito (BRASIL, 2003c).

Padro de Calibrao: matriz biolgica a qual foi adicionada uma quantidade conhecida de
analito. Os padres de calibrao so usados para construir a curva de calibrao, com a qual
so determinadas as concentraes do analito nos controles de qualidade e nas amostras
desconhecidas em estudo (BRASIL, 2003c).

Preciso: representa o grau de repetibilidade entre os resultados de anlises individuais,
quando o procedimento aplicado diversas vezes numa mesma amostra homognea, em
idnticas condies de ensaio (BRASIL, 2003c).

Exatido: representa o grau de concordncia entre os resultados individuais encontrados e
um valor aceito como referncia (BRASIL, 2003c).

Linearidade: corresponde capacidade do mtodo de fornecer resultados diretamente
proporcionais concetrao da substncia em exame (analito) (BRASIL, 2003c).

Limite de Deteco: menor concentrao de um analito que o procedimento bioanaltico
consegue diferenciar confiavelmente do rudo de fundo (BRASIL, 2003c).

98

Limite Inferior de Quantificao: menor quantidade de um analito numa amostra que pode
ser determinada quantitativamente com preciso e exatido aceitveis (BRASIL, 2003c).

Especificidade: habilidade do mtodo bioanaltico de medir e diferenciar o analito de
componentes que possam estar presentes na amostra, tais como metablitos, impurezas,
compostos de degradao ou componentes da matriz (BRASIL, 2003c).

Reprodutibilidade: preciso entre dois laboratrios. Tambm representa a preciso do
mtodo sob as mesmas condies operacionais, num curto perodo de tempo (BRASIL,
2003c).

Estabilidade: parmetros que visa determinar se um analito mantm-se quimicamente
inalterado numa dada matriz sob condies especficas, em determinados intervalos de
tempo (BRASIL, 2003c).

Recuperao: eficincia de extrao de um mtodo analtico, expressa como a porcentagem
da quantidade conhecida de um analito, obtida da comparao dos resultados analticos de
amostras branco acrescidas de padro e submetidas ao processo de extrao, com os
resultados analticos de soluo padro no extradas (BRASIL, 2003c).

rea sob a Curva da Concentrao Plasmtica versus Tempo, de Zero ao Infinito
ASC
0-
: relaciona-se com a quantidade ou a extenso de absoro do frmaco. A quantidade
da absoro sistmcia do frmaco diretamente relacionada com ASC que geralmente
calculado pelo mtodo trapezoidal; onde ASC[
0-
] = ASC[
0-t
] + Ct/K, e expresso em
unidades de concentrao vezes tempo.

Concentrao Mxima Atingida no Plasma - C
max
: concentrao mais elevada do frmaco
atingida na circulao sangnea aps administrao de um frmaco. Relaciona-se a
intensidade da resposta farmacolgica. O C
max
ideal deve estar dentro da janela teraputica.

Constante de Eliminao K: representa a soma de todas as taxas constantes para remoo
do frmaco do corpo, incluindo a taxa constante da excreo renal e metabolismo

99
(biotransformao) como descrito atravs da equao: K = K + Km, onde K = constante de
excreo renal e Km = constante de metabolismo. Determina a taxa de eliminao do
frmaco dos vasos sangneos. Serve para determinar a concentrao do frmaco em um
tempo t. inversamente relacionada meia vida do frmaco: K= 0,693/t
1/2
.

Meia Vida de Eliminao do Frmaco t
1/2
: representa o tempo em que a concentrao do
frmaco no plasma reduzida a metade. Calcula-se atravs do logaritmo neperiano (ln) de 2
(ln2= 0,693) dividido pela constante de eliminao. t
1/2
= ln2/K.

Tempo correspondente Concentrao Mxima Atingida no Plasma - T
max
: tempo
correspondente para que o frmaco atinja a concentrao mxima (C
max
).

100

A
A
N
N
E
E
X
X
O
O
S
S

102

A
A
N
N
E
E
X
X
O
O
I
I

103

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Voc est sendo convidado a participar de um projeto de pesquisa. Sua participao
importante, porm, voc no deve participar contra a sua vontade. Leia atentamente
as informaes abaixo e faa qualquer pergunta que desejar, para que todos os
procedimentos desta pesquisa sejam esclarecidos.

O abaixo-assinado, __________________________________________________,
______ anos, RG n________________ declara que de livre e espontnea vontade
que est participando como voluntrio do projeto de pesquisa supracitado, de
responsabilidade dos Mdicos/Pesquisadores Profa Dra. Maria Elisabete Amaral de
Moraes, Prof. Dr. Manoel Odorico de Moraes, Prof. Fernando Antonio Frota Bezerra
e do Farmacutico Ismael Leite Martins, da Unidade de Farmacologia Clnica
(UNIFAC) da Universidade Federal do Cear. O abaixo-assinado est ciente que:

NATUREZA E PROPSITO DO ESTUDO

O objetivo da pesquisa verificar se um comprimido de Megestrol (160 mg)
produzido pela APOTEX do Brasil Ltda. - Formulao Teste - atinge nveis no
sangue equivalentes ao Megestat da Bristol-Meyer Squibb - Formulao
Referncia. Voc receber as duas medicaes, cada uma em uma ocasio diferente.
A ordem que voc tomar cada medicao obedecer um sorteio.

104
PROCEDIMENTOS A SEREM REALIZADOS E RESPONSABILIDADES

Antes de sua participao no estudo e aps a sua participao voc ser
convidado a ir na Unidade de Farmacologia Clnica para avaliar a sua condio de
sade. Voc ser examinado por um mdico que lhe far um exame completo,
medindo o seu pulso, sua temperatura, sua presso arterial. Tambm ser feito um
exame do corao (eletrocardiograma). O mdico lhe perguntar se voc teve ou tem
alguma doena e se voc faz uso de algum medicamento. Durante a visita sero
coletadas amostras de sangue, urina e fezes para exames laboratoriais. Os exames
laboratoriais incluem exame de sangue completo como hemograma completo;
bioqumica sangnea (glicose no sangue, protenas totais, albumina, transaminases
oxalactica e pirvica, gamaglutamil trasnferase, creatinina, uria, cido rico,
colesterol e triglicerdeos); exame sumrio de urina (Urina I). Exames para a hepatite
B e C e para AIDS (HIV 1 e HIV2), no sangue, e exame de fezes
(protoparasitolgico), sero feitos somente no pr estudo.

Durante o estudo, voc ser internado duas vezes por aproximadamente 36
horas cada perodo, com intervalo mnimo de 4 dias. Em cada internamento, a) ser
colhida uma amostra de sangue para dosagem de creatinina, hemoglobina,
hematcrito e transaminases; b) ser administrado um comprimido de Megestrol
(160 mg), acompanhado de 240 mL de gua sem gs; c) sero coletadas 18 amostras
de sangue de 9 mL, cada, atravs de agulha introduzida em veia superficial para a
dosagem do medicamento e mais uma amostra de 20 mL antes da administrao da
medicao para o controle do mtodo de dosagem do acetato de megestrol no plasma.
d) em intervalos regulares, ser verificada sua presso, pulso e temperatura; e) sero
tambm servidas refeies padronizadas (ceia, na noite da internao [se no
interferir com o jejum]; caf da manh, almoo, lanche da tarde, jantar e ceia no dia
de administrao do medicamento; caf da manh no dia de alta) ou bebidas em
horrios preestabelecidos. Aps a coleta de 24 horas voc receber alta da UNIFAC,
devendo retornar para coleta de 36, 48, 72, 96, 120 e 144 horas aps a administrao

105
da medicao, em cada internao. Um total de 400 mL de sangue ser colhido
durante todo o estudo.

A durao total de sua participao na pesquisa est estimada em 60 dias, a
contar da primeira internao, aps o processo de seleo.

RESPONSABILIDADES

condio indispensvel, para participao no ensaio clnico, que esteja em
boa sade e, portanto, no esteja no momento sob tratamento mdico ou fazendo uso
de quaisquer drogas ou medicaes e que tampouco tenha participado de outro estudo
clnico com medicamentos nos ltimos 3 meses. Algumas regras devero ser seguidas
para sua participao no estudo: a) no pode ser dependente de drogas ou lcool e
caso o investigador tenha alguma suspeita, poder solicitar exame de urina para
deteco do uso de drogas; b) no pode ter doado (ou retirado/perdido por qualquer
motivo) sangue ou plasma dentro dos trs meses que antecedem o estudo ou ter doado
1500 mL (um litro e meio) no perodo de um ano antecedendo o estudo; c) no pode
tomar bebidas contendo cafena e xantinas (caf, ch, coca-cola, etc) nas 12 horas que
antecedem as internaes at a ltima coleta.

ainda de sua responsabilidade em relao a sua participao no ensaio
clnico: a) comparecer s internaes na data e horrios informados; b) permanecer
em jejum pelo tempo previsto (pelo menos 12 horas) em cada internao; c) tomar
toda a medicao prevista; d) Ingerir toda a alimentao e lquidos que tenham sido
previstos; e) retornar Unidade 4 vezes em cada internao para a coleta da amostra
de sangue aps a alta de cada uma das internaes, no horrio indicado pela equipe,
relativo coleta de 48h, 72h, 96h, 120 e 144 horas aps a medicao; f) retornar
Unidade na data, horrio e local combinados, para realizao da consulta e exames de
alta, independentemente de haver sido interrompida sua participao no estudo ou de
sua desistncia.

106
POSSVEIS RISCOS E DESCONFORTOS

A administrao pela boca de Megestrol de maneira continuada pode causar
reaes como: Nusea, vmito, urticria, inchao e aumento do apetite. Entretanto o
aparecimento de efeitos indesejveis aps administrao de dose nica de Megestrol
tem menor probabilidade de aparecer. Alm dos efeitos citados, a administrao de
qualquer medicamento pode causar reaes imprevisveis.

A retirada de sangue um procedimento seguro e pode causar um leve
desconforto, alm de uma mancha roxa pequena no local da picada que
freqentemente resolve sem maiores problemas.

BENEFCIOS OU COMPENSAES

A participao neste estudo, no tem objetivo de submet-lo a um tratamento
teraputico. Conseqentemente, no se espera que a participao no estudo traga
qualquer benefcio em funo do tratamento.

INTERCORRNCIAS (efeitos indesejveis)

Se voc sofrer algum malefcio em decorrncia direta de sua participao no
estudo, voc receber tratamento nesta Instituio, sem qualquer custo. No haver
no entanto qualquer compensao de ordem financeira em funo do ocorrido, a no
ser que a condio faa jus da indenizao prevista no Seguro de Vida em Grupo
mencionado abaixo. Contudo, ao assinar este termo, voc no est renunciando
qualquer direito legal que voc possui.

Durante o perodo de 90 dias a partir da data da assinatura deste termo, o
voluntrio estar assegurado (Seguro de Vida em Grupo).

107
RESSARCIMENTO

De acordo com valores previamente estabelecidos, os voluntrios sero
ressarcidos das despesas e tempo despendidos na realizao do supracitado estudo
clnico aps a consulta de alta. Caso desista ou seja dispensado antes do estudo ser
finalizado o voluntrio receber proporcionalmente ao tempo despendido, no final do
estudo. Entende tambm que a desistncia ou dispensa antes do comparecimento para
a primeira internao no d direito a ressarcimento.

Estima-se que durante o perodo de sua participao no Estudo vocs tero
como despesa apenas os gastos de deslocamento da residncia ou trabalho at
Unidade de Farmacologia Clnica para internao e consultas, bem como coletas de
amostras aps a alta; ou ao Laboratrio de Anlises Clnicas para a realizao dos
exames. Ainda deve ser previsto eventuais visitas posteriores para acompanhamento
dos eventos adversos. O ressarcimento destas despesas j est includo no valor
estabelecido no item acima.

PARTICIPAO VOLUNTRIA

Sua participao voluntria e voc tem a liberdade de desistir ou interromper
a participao neste estudo no momento que desejar. Neste caso, voc deve informar
imediatamente sua deciso ao pesquisador ou a um membro de sua equipe, sem
necessidade de qualquer explicao e sem que isto venha interferir no seu
atendimento mdico desta Instituio.

Obteve todas as informaes e esclarecimentos necessrios para poder decidir
conscientemente sobre a participao no referido ensaio clnico.

Independente de seu desejo e consentimento, sua participao no ensaio
clnico poder ser interrompida, em funo a) da ocorrncia de eventos adversos; b)
da ocorrncia de qualquer doena que, a critrio mdico, prejudique a continuao de

108
sua participao no estudo; c) do no cumprimento das normas estabelecidas; d) de
qualquer outro motivo que, a critrio mdico, seja do interesse de seu prprio bem
estar ou dos demais participantes; e) da suspenso do Estudo como um todo.

A Unidade de Farmacologia Clnica o manter informado, em tempo oportuno,
sempre que houver alguma informao adicional que possa influenciar seu desejo de
continuar participando no estudo e prestar qualquer tipo de esclarecimento em
relao ao progresso da pesquisa, conforme sua solicitao.

A interrupo no causar prejuzo ao seu atendimento, cuidado e tratamento
pela equipe da Unidade de Farmacologia Clnica .

DIVULGAO DE INFORMAES QUANTO A PARTICIPAO NO
ESTUDO

Os registros que possam identificar sua identidade sero mantidos em sigilo, a
no ser que haja obrigao legal de divulgao. A Unidade de Farmacologia Clnica
no identificar o voluntrio por ocasio da publicao dos resultados obtidos.

Contudo, o(s) monitor(es) do Estudo, auditor(es), membros do Comit de tica
e Pesquisa Clnica, ou autoridades do(s) rgo(s) governamentais envolvido(s) na
fiscalizao e acompanhamento do estudo tero direito de ter acesso aos registros
originais de dados clnicos de sua pessoa, coletados durante a pesquisa, na extenso
em que for permitido pela Lei e regulamentaes aplicveis, com o propsito de
verificar os procedimentos e dados do ensaio, sem no entanto violar a condio de
que tais informaes so confidenciais. Ao assinar este Termo de Consentimento
Livre e Esclarecido, voc est tambm autorizando tal acesso, mesmo se voc se
retirar do Estudo.

109
CONTATOS E PERGUNTAS

Caso surja alguma intercorrncia, dever procurar a Unidade de Farmacologia
Clnica e solicitar que a mesma contacte os mdicos responsveis pelo ensaio clnico
ou ento entrar em contato diretamente com os mesmos nos telefones indicados no
final deste Termo de Consentimento.

Poder contactar a Dra. Maria Elisabete Amaral de Moraes para receber
informaes adicionais, relacionadas pesquisa ou quanto aos seus direitos como
voluntrio.

Poder contactar a Secretaria do Comit em Pesquisas do complexo hospitalar
da UFC para apresentar recursos ou reclamaes em relao ao ensaio clnico.

Se voc concorda com o exposto acima leia e assine o documento abaixo.

Eu declaro que li cuidadosamente todo este documento denominado Termo de
Consentimento Livre e Esclarecido e que, aps, tive nova oportunidade de fazer
perguntas sobre o contedo do mesmo o tambm sobre o Estudo e recebi explicaes
que responderam por completo minhas dvidas e reafirmo estar livre e
espontaneamente decidindo participar do Estudo.

Ao assinar este Termo de Consentimento Livre e Esclarecido eu tambm estou
certificando que toda a informao que eu prestei, incluindo minha histria mdica,
verdadeira e correta at onde de meu conhecimento, e declaro estar recebendo uma
cpia assinada deste documento.

Ao assinar este Termo de Consentimento Livre e Esclarecido estou
autorizando o acesso s minhas informaes, conforme explicitado anteriormente.

110
Ao assinar este Termo de Consentimento Livre e Esclarecido eu no renunciei
qualquer direito legal que eu venha a ter ao participar deste Estudo.

Fortaleza, _____/_____/______

NOME DO VOLUNTRIO DATA Assinatura

PESSOA QUE EST OBTENDO O
TERMO DE CONSENTIMENTO
DATA Assinatura

TESTEMUNHA
(Somente necessrio se o voluntrio no souber ler)
DATA Assinatura
CONTROLE INTERNO N do Estudo: ______/____ N do Voluntrio: ________

111

A
A
N
N
E
E
X
X
O
O
I
I
I
I

111

HISTRIA CLNICA PR-ESTUDO
Histria colhida em:
28/11/03

Dados do Voluntrio
Nascimento Idade Sexo Raa Ocupao
02/05/79
24
M F C M N A O
Tcnico em Informtica
Caucaside Mulata Negra Amarela Outra
Medidas

Presso Arterial
Sistlica / Diastlica
(Aps 5 min sentado)
Pulso Arterial

Altura Peso Corporal
(Roupas leves)
ndice de Massa
Corporal
Temperatura
(axilar)
130/90 76 1,75 75,5 25 36,9
mm/Hg batimentos/min m Kg Kg/m
2
C

Reviso de Sistemas
Sistema / Histria Normal Anormal Fornea os detalhes que julgar pertinentes
Alergias

Alergia a drogas

Olhos-ouvidos-nariz-garganta

Respiratrio

Cardiovascular

Gastrointestinal

Genitourinrio

Sistema Nervoso Central

Hematopotico-Linftico

Endcrino-Metablico

Dermatolgico

Msculo-esqueltico

Estabilidade Emocional

Abuso de lcool ou Drogas

Histria Familiar

Pai diabtico e hipertenso
Histria Cirrgica

Outras Informaes
O profissional deve tambm averiguar se h suspeita de no enquadramento do voluntrio em funo dos
Critrios de Incluso / Excluso, assinalando o campo apropriado nas folhas onde constam estes critrios.
Hist. Obsttrica Gest..: Partos: Abortos: Cesreas:
DUM:
Voluntrias
Mulheres
ACO ACIM DIU Outro:
Tabagismo Fumante Qtde:
Nunca Doou
Nunca Fumou Ex-Fumante poca:
Doao de Sangue
ltima doao:
Caf
Nega Consumo Qtde. / dia :
Ch
Nega Consumo Qtde. / dia :
lcool
Nega Consumo Qtde. / sem.: finais de semana
Outras inf:

Informar p.ex., o nome do anticoncepcional

Dados Brutos assinados por: Madja Luciana Lima Pimentel CREMEC 7854 28/11/03
Profissional Responsvel pela Avaliao Data da Assinatura

112

EXAME FSICO PR-ESTUDO

Exame Fsico
Item Normal Anormal Fornea os detalhes que julgar pertinentes
Aparncia

Pele/ Mucosas

Cabea e Pescoo

Tireide

Olhos

Ouvidos

Nariz

Boca/ Garganta

Trax

Corao

Fgado

Bao

Gnglios Linfticos

Condio Neurolgica

Extremidades

Msculo-esqueltico

Comentrios Adicionais

Recomendaes
Reiteradas as restries quanto ao uso de medicamentos ?
Sim No

Reiteradas as restries de dieta (alimentos e bebidas) ?
Sim No

Reiterada a possibilidade de falha do ACO / DIU, bem como a
recomendao do uso de preservativos ?
Sim
No
No se Aplica
Reiteradas as demais diretrizes e restries previstas em
protocolo ?
Sim No

Dados Brutos assinados por: Madja Luciana Lima Pimentel CREMEC 7854 28/11/03
Mdico Responsvel pela Avaliao Data da Assinatura

113

EXAMES LABORATORIAIS PR-ESTUDO
1/2

Hematologia Coletado em: 29/11/03 Marque quando solicitar repetio do Hemograma
Data * Parmetro Valor Correo Valores de referncia
Hemoglobina g/dL 13,9 Homem: 13,5 - 18 Mulher: 11,5 16,4
Hematcrito % 41,3 Homem: 40 54 Mulher: 36 - 47
Eritrcitos 10
6
/mm
3
4,7 Homem: 4,5 6,5 Mulher: 3,9 - 5,8
Leuccitos 10
3
/mm
3
5,1 5 10
Contagem Diferencial %
Bastes 1 1 3
Segmentados 60 40 75
Linfcitos 26 20 45
Moncitos 10 2 10
Basfilos 0 0 1
Eosinfilos 3 1 6
Outros - -
Plaquetas 10
3
/mm
3
214 150 - 450
Comentrios Globais

Bioqumica Coletado em: 29/11/03 Marque quando solicitar repetio do Teste
Data * Parmetro Valor Correo Comentrios
Colesterol Total mg/dL 161 < 200
Triglicerdeos mg/dL 63 < 150
Protenas Totais g/dL 6,48 6,6 8,7
Albumina mg/dL 4,46 3,4 4,8
Globulinas g/dL 2,02 -
cido rico mg/dL 5,1 Homem: 3,4 - 7,0 Mulher: 2,4 - 5,7
Bilirrubina Total mg/dL 0,89 At 1,1
Direta mg/dL 0,23 At 0,3
Indireta mg/dL 0,66 At 0,7
Fosfatase Alcalina U/L 187 Homem: < 270 Mulher: < 240
GT U/L 23 Homem: 8 - 61 Mulher: 5 - 36
TGO (AST) U/L 17 Homem: at 38 Mulher: at 32
TGP (ALT) U/L 17,2 Homem: at 41 Mulher: at 31
Uria mg/dL 30,2 10 - 50
Creatinina mg/dL 1,1 0,7 - 1,2
Glicose em jejum mg/dL 87 70 - 105
Comentrios Globais

* A ser preenchida somente quando a data da coleta do material para a 1 realizao de algum teste diferir da data indicada no cabealho. No usar para repeties

114

EXAMES LABORATORIAIS PR-ESTUDO
2/2

Anlise de Urina Coletado em: 29/11/03 Marque quando solicitar a repetio do Ex. de
Urina
Densidade 1022 1005 1030
pH 6,0 4,5 8,0 (mdia 6,0)
Protenas - -
Glicose - -
Corpos Cetnicos - -
Urobilinognio TN Traos Normais
Bilirrubina - -
Nitritos - -
Anlise Microscpica
Glb. Brancos 02 < 03
Glb. Vermelhos - -
Cilindros - 0 1
Cls Epiteliais 01 Algumas
Cristais - -
Bactrias - -
Outros - -
Comentrios Globais

Fezes
Coletado em: 29/11/03
Marque quando solicitar a repetio do Ex. de Fezes
Parasitolgico
Positivo Negativo
Comentrios:

Sorologia
Coletado em: 10/07/03
Marque quando solicitar a repetio do Teste
Parmetro Resultado Comentrios
Hepatite B Positivo Negativo
Hepatite C Positivo Negativo
HIV 1 + HIV 2 Positivo Negativo

Teste Gravidez
Coletado em:
Repetio Solicitada NO APLICVEL

HCG
Positivo Negativo
Comentrios:

Dados Brutos assinados por: Ismael Leite Martins 02/12/03
Responsvel pela transcrio dos dados Data da Assinatura

Dados Brutos assinados por: M Elisabete Amaral de Moraes CREMEC 2145 02/12/03

115

ECG PR-ESTUDO
Exame realizado em: 28/11/03

Parmetros
ECG 12 derivaes Marque quando solicitar a repetio do Exame

FC 60 bpm
Ritmo
Cardaco
Sinusal Intervalo PR 0,14 s

Durao do QRS 0,08 s

QT 0,36 s
Normal

No clinicamente significativo
Diagnstico
Anormal

Clinicamente significativo
Especificao da Anomalia

(preencher caso tenha sido assina-lado
Diagnstico Anormal, indepen-
dentemente de ser significativo)

Concluso
Apto para participao no Estudo No Apto

Apto com restries
Indique as restries
especficas

Observaes

Comentrios

Dados Brutos assinados por: Fernando Antnio Frota Bezerra CREMEC 2367 28/11/03

116

AVALIAO PR-ESTUDO

Repetio de Exames
ASSINALE SE NO REALIZADO

Parmetro
Data Coleta
(dd/mm)
Resultado

Responsvel pela
transcrio dos dados
Rubrica e Data

H
e
m
o
g
r
a
m
a

B
i
o
q
u
m
i
c
a

Exame de Urina

Exame de Fezes

S
o
r
o
l
o
g
i
a

ECG

Comentrios

Concluso da Triagem
Avaliao do voluntrio realizada em conjunto com os Critrios de Admisso
Aps a avaliao inicial, incluindo a histria, exame fsico, exames
laboratoriais, ECG e com base nos critrios de incluso e excluso para
participao em estudos de biodisponibilidade, o mdico responsvel
considerou o Voluntrio:
Apto (p/ participao em estudos de biodisponibilidade)
Apto, com restries (ver Comentrios acima)
No Apto


117

CRITRIOS DE ADMISSO
1/2 Data de Referncia da Avaliao
: 12/12/03

Critrios de Incluso
1. O voluntrio tem entre 18 e 50 anos de idade
Sim No
2. O ndice de massa corprea do voluntrio maior que 19 e menor do
que 28
Sim No
3. O voluntrio foi examinado e considerado com boas condies de sade
ou
sem doenas significativas, a juzo mdico, de acordo com as regras
definidas no Protocolo e avaliaes a que foi submetido: histria clnica,
medidas de presso e pulso, exame fsico, ECG, e exames laboratoriais
complementares.
Sim No
4. O voluntrio capaz de compreender a natureza e objetivo do estudo, inclusive os
riscos e efeitos adversos e com inteno de cooperar com o pesquisador e agir de acordo
com os requerimentos de todo o ensaio, o que vem a ser confirmado mediante a
assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
Sim No

Critrios de Excluso
1. O voluntrio tem hipersensibilidade conhecida a(s) droga(s) a ser(em) estudada(s) ou a
compostos quimicamente relacionados; histria de reaes adversas graves ou
hipersensibilidade a qualquer droga
Sim No
2. Histria ou presena de doena heptica, gastrointestinal ou outra condio que
interfere com a absoro, distribuio, excreo ou metabolismo da droga
Sim No
3. Uso de terapia de manuteno com qualquer droga, exceto ACO Sim No
4. Tem histria de doena, renal, pulmonar, epilptica, hematolgica ou psiquitrica; tem
hipo ou hipertenso de qualquer etiologia que necessite de tratamento farmacolgico;
tem histria ou teve infarto do miocrio, angina pectoris e/ou insuficincia cardaca
Sim No
5. Achados eletrocardiogrficos no recomendados a critrio do investigador para a
participao no estudo
Sim No
6. Os resultados dos exames laboratoriais complementares esto fora dos valores
considerados normais de acordo com as normas deste protocolo, a menos que sejam
considerados no clinicamente significativos pelo investigador
Sim No

A Data de Referncia corresponde ltima data na qual as informaes foram obtidas para fins de utilizao na avaliao dos Critrios de Admisso. Corresponde,
normalmente data do Exame Fsico, salvo a realizao de entrevista, avaliao de resultados de exames laboratoriais complementares ou outro contato por parte equipe
considerado para avaliao dos Critrios de Admisso.

118

CRITRIOS DE ADMISSO
2/2

Critrios de Excluso
7. O Voluntrio fuma mais que dez cigarros por dia. Sim No
8. O voluntrio ingere mais do que 5 xcaras de caf ou ch por dia Sim No
9. Tem histria de abuso de lcool ou drogas Sim No
10. Fez uso de medicao regular dentro das 2 semanas que antecederam o incio deste
estudo, especialmente aquelas que induzem o citocromo P450 IIIA (cetoconazol,
itraconazol, fluconazol, rifampina, eritromicina, claritromicina, etc) ou
anticonvulsivantes (carbamazepina, fenobarbital, fenitona) ou fez uso de qualquer
medicao uma semana antes do incio deste estudo, excetuando-se outras drogas que
no citadas acima em que, com base na meia-vida do frmaco e/ou metablitos ativos,
possa ser assumida a completa eliminao
Sim No
11. Foi internado por qualquer motivo at 6 semanas antes do primeiro perodo de
tratamento deste estudo
Sim No
12. Terapia dentro dos 3 meses prvios ao incio do tratamento deste estudo com qualquer
droga que se conhea ter um potencial txico bem definido nos grandes rgos
Sim No
13. O voluntrio participou de qualquer estudo experimental ou ingeriu qualquer droga
experimental dentro dos 3 meses que antecedem o incio do tratamento deste estudo
Sim No
14. O voluntrio doou ou perdeu 450 mL ou mais de sangue dentro dos trs meses que
antecederam ao estudo.
Sim No
15. O voluntrio tem qualquer condio que o impede de participar do estudo juzo do
investigador
Sim No

Concluso
Aps a avaliao da histria, exame fsico, exames
laboratoriais, ECG, critrios de incluso e excluso o mdico
responsvel considerou o Voluntrio:
Apto para participao no Estudo
No Apto


119

PRIMEIRO PERODO DE INTERNAO
1/6

Internao

ASSINALE SE O VOLUNTRIO NO COMPARECEU

Admitido na UNIFAC
Data 14/12/03 Horrio 21:00
Rubrica:

Exames Laboratoriais*
Material Coletado em: Data 14/12/03
Hemoglobina Hematcrito Creatinina TGO (AST) TGP (ALT)
Rubrica
Valor
14,4 42,3 1,5 17 33
Valores Normais H: 13,5 18,0
M: 11,5 16,4
H: 40,0 54,0
M: 36,0 47,0
0,6 1,3 15 37 30 - 65

g/dL % mg/dL U/L U/L -
* Solicitado somente quando exigido pelo protocolo

Avaliao Segurana / Aderncia
Inicial
Avaliado em: Data 15/12/03
Alguma mudana significativa desde o
exame de seleo ?
No Sim
Comentrios:
Algum sinal, sintoma ou doena desde
o exame de seleo ?
No Sim
Preencher a folha de Sinais e Sintomas Pr-Dose
Ingeriu medicamentos nos 14 dias que
precedem a data do incio do
tratamento ?
No Sim
Preencher a folha de medicao Pr-dose
Suspeita de abuso de drogas ou ingeriu
bebidas alcolicas nas ltimas 12
horas ?
No Sim
Realizar teste previsto no Protocolo
Resultado:
Ingeriu alimentos ou bebidas
constantes nas restries de dieta
No Sim
Comentrios:
Foi hospitalizado por qualquer motivo
No
Sim
Comentrios:
Doou ou perdeu Sangue (> 450mL)
No
Sim
Comentrios:
Se encontra enquadrado em qualquer
outro Critrio de Excluso ?
No Sim
Comentrios:

Avaliao de Aderncia
Pr-Dose
Deixou de cumprir as restries de
dieta, sobretudo perodo de Jejum
No Sim
Comentrios:
Realizou exerccio fsico intenso
durante a Internao (12 horas antes da
medicao)
No Sim
Comentrios:
Deixou de cumprir qualquer outra
restrio ( ou resposta positiva na reavaliao dos
critrios acima )
No Sim
Comentrios:
O voluntrio ratificou seu desejo de
participar do Estudo? (Consentimento Informado)
Sim
No
+
Caso assinalada a coluna direita em qualquer dos 11
itens acima Preencher abaixo

O mdico responsvel (em conjunto com o Pesquisador Principal
no caso de uso de medicamentos) decidiu que o Voluntrio:
permanece apto para participar no Estudo
deve ser desligado do Estudo
Obs.: Complete as Folhas de Sinais e Sintomas Pr-dose e "Medicao Pr-dose" quanto ao status pr-dose.

120

UTILIZAO DE MEDICAMENTOS
2/6

Medicao Pr-Dose

Princpio(s) Ativo(s)
Nome
Comercial
Apresentao
Via Administ.
Data do Incio
Tratamento
(dd-mm-aa)
Hora
(hh:mm ou turno)
Dose
(em unidades)
Int. de Dose
(1x/dia, 8/8h)
Durao
Tratamento
Prescrio

Data do
Trmino
Tratamento
(dd-mm-aa)
T
1

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

T
2

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

T
3

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

T
4

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

Prescrio:
C Equipe UNIFAC C Prescrio Externa C Auto-medicao Data : hora

SINAIS E SINTOMAS PR-DOSE

T
1

T
2
T
3
T
4
^
Utilize o campo acima para qualquer outra informao julgada relevante

Reviso Pr-Dose
A ser realizada imediatamente antes da administrao
da 1 dose da medicao do Estudo.
Revisado em:
(data ) 15/12/03
Foi utilizada alguma medicao desde o prazo de controle
previsto no Protocolo at o incio do Tratamento ?
No
Sim Complementar o quadro acima

Mdico Responsvel pela Reviso Pr-dose Data da Assinatura

121

3/6

Formulao deste Perodo de Internao: TST Megestrol, comp. 160mg, VO (APOTEX)

Administrao(es)
Data
Administrao
(dd/mm/aa)
Jejum
Observou
o jejum previsto?
Administrao
[ 1 ] Administrado de acordo c/
Protocolo
[ 2 ] Erro/Inverso na randomizao

[ 3 ] Erro na dose
[ 9 ] Outro
Rubrica

-
15/12/03
Sim No 1[X] 2[ ] 3[ ] 9[ ]

Indique os detalhes no campo de Observaes disponvel na penltima folha desta seo

Coleta de Amostras

A ser preenchido somente quando houver mais de uma amostra a ser coletada
Neste caso, ser(o) mostrado(s) o(s) nmero(s) da(s) amostra(s) a coletar
Material: Sangue Amostras: [1] Megestrol [2]
Volume por amostra: 9 mL
N de
Ordem
Tempo
de
Coleta
(hh:mm)
Horrio Previsto
(hh:mm)
Horrio Real
(hh:mm)

Desvios

Atrasos /
Indisponibilidade /
Outros
.
Rubrica
-

(coluna para correes) (coluna para correes)

1 00:00
07:20

07:20

2 01:00 08:20 08:20

3 01:30 08:50 08:50

4 02:00 09:20 09:20

5 02:30 09:50 09:50

6 03:00 10:20 10:20

7 03:30 10:50 10:50

8 04:00 11:20 11:20

9 05:00 12:20 12:20

10 06:00 13:20 13:20

11 08:00 15:20 15:20

12 12:00 19:20 19:20

13 16:00 23:20 23:20

14 24:00 07:20 07:20

15 36:00 19:20 19:41 A2

16 48:00 07:20 07:20

17 72:00 07:20 07:20

18 96:00 07:20 07:20

19 120:00 07:20 07:20

20 144:00 07:20 07:20

Atraso na coleta [A1] Problema no acesso venoso [A2] Atraso do Voluntrio [A3] Erro Operacional

No coletada [N1] Problema no acesso venoso [N2] No comparecimento do Voluntrio [N3] Erro Operacional

Outros Casos [6] Amostra Hemolisada [7] Amostra Hiperlipmica [8] Perda no Processamento [9] Outros desvios

122

4/6

Refeies

ltima alimentao ocorreu pelo menos 8h antes da administrao: Sim No
O trmino do jejum ocorreu pelo menos 2h aps a administrao: Sim No
Refeio

Data
(dd/mm)
Horrio
(Relgio 24h)
(hh:mm)
Refeio Ingerida?
(S/N)
Rubrica
-
Ceia
14/12 22:00
S N

Desjejum
15/12 09:23
S N

Almoo
15/12 12:23
S N

Lanche da tarde
15/12 16:00
S N

Jantar
15/12 18:00
S N

Ceia
15/12 22:00
S N

Desjejum
16/12 07:23
S N

S N

S N

Ingesto de Lquidos

Ingesto de lquidos interrompida 2h antes da administrao: Sim No
Liberao de lquidos ocorrida 2h depois da administrao: Sim No

Outras Informaes

Rubrica e Data:

123

5/6

Sinais
Vitais

N
Ordem
Tempo
aps
1 dose
(hh:mm)
Horrio
Previsto
(Relgio 24h )
(hh:mm)
Horrio
Real
(Relgio 24h )
(hh:mm)
Presso Arterial
(Sentado)
(mmHg)
(p/ correes)
Pulso
(Sentado)
(bpm)
(p/ correes)
Temperatura
(axilar)
(C)
(p/ correes)
Rubrica

-
1 00:00
07:20
06:40 120/70 60 36
2 01:00
08:20
09:18 120/85 56 35,8
3 02:00
09:20
09:17 105/80 60 36
4 03:00
10:20
10:15 110/80 64 36,5
5 04:00
11:20
11:16 110/80 64 36,4
6 08:00
15:20
15:15 11080 68 36,2
7 12:00
19:20
20:14 120/80 72 36
8 24:00
07:20
06:20 120/85 68 35,7
9 36:00
19:20
19:43 120/80 68 36,5
10 48:00
07:20
07:20 130/90 76 36
11 72:00
07:20
07:01 130/80 72 36,5
12 96:00
07:20
07:00 120/80 68 36,6
13 120:00
07:20
07:14 130/90 84 36,4
14 144:00
07:20
07:32 120/80 84 36,2

Observaes

Rubrica e Data:

124

6/6

Avaliao Pr-Alta
Avaliado em Data: 16/12/03
Alguma mudana significativa desde o exame
anterior ?
No Sim
Comentrios:
Algum Evento Adverso durante o internamento ?
No
Sim
Preencher a folha de Eventos Adversos.
Ingeriu medicamentos concomitantes ao tratamento
?
No
Sim
Preencher a folha de
Medicao Ps-dose
Deixou de cumprir alguma restrio do Protocolo?
No
Sim
Preencher folha de comentrios adicionais
A alta ocorreu por desligamento do Voluntrio ?
No
Sim
Preencher o quadro de Trmino Prematuro e
comentrios adicionais, caso haja relao.

PREENCHER
ABAIXO SOMENTE NO CASO DE DESLIGAMENTO

Alguma das formulaes sob investigao foi ingerida ?
No Sim
Preencher abaixo:

Reiteradas as restries de doao e participao em estudos ?
Sim No
Concluso: Alta Autorizada Alta inicialmente no autorizada
Rubrica:

+
Caso a Alta no tenha sido inicialmente autorizada, informar a Data e
Horrio em que a Alta foi concedida:
Data Horrio

Sada da UNIFAC
O voluntrio deixou a UNIFAC logo aps a autorizao de alta Rubrica
Efetivada em Data: 16/12/03 Horrio:
08:00


125

SEGUNDO PERODO DE INTERNAO
1/6

Internao

ASSINALE SE O VOLUNTRIO NO COMPARECEU

Admitido na UNIFAC
Data 18/01/04 Horrio 21:05
Rubrica:

Exames Laboratoriais*
Material Coletado em: Data 18/01/04
Hemoglobina Hematcrito Creatinina TGO (AST) TGP (ALT)
Rubrica
Valor
14,3 43,1 1,2 16 40
Valores Normais H: 13,5 18,0
M: 11,5 16,4
H: 40,0 54,0
M: 36,0 47,0
0,6 1,3 15 37 30 - 65

g/dL % mg/dL U/L U/L -
* Solicitado somente quando exigido pelo protocolo

Avaliao Segurana / Aderncia
Inicial
Alguma mudana significativa desde o
exame anterior ?
No Sim
Comentrios:
Algum sinal, sintoma ou doena desde
o exame anterior ?
No Sim
Preencher a folha de Eventos Adversos
Ingeriu medicamentos desde a alta da
internao anterior ?
No Sim
Preencher a folha de medicao Ps-dose
Suspeita de abuso de drogas ou ingeriu
bebidas alcolicas nas ltimas 12
horas ?
No Sim
Realizar teste previsto no Protocolo
Resultado:
Ingeriu alimentos ou bebidas
constantes nas restries de dieta
No Sim
Comentrios:
Foi hospitalizado por qualquer motivo
No
Sim
Comentrios:
Doou ou perdeu Sangue (> 450mL)
No
Sim
Comentrios:
Encontra-se enquadrado em qualquer
outro Critrio de Excluso ?
No Sim
Comentrios:

Avaliao de Aderncia
Pr-Dose
Deixou de cumprir as restries de
dieta, sobretudo perodo de Jejum
No Sim
Comentrios:
Realizou exerccio fsico intenso
durante a Internao (12 horas antes da
medicao)
No Sim
Comentrios:
Deixou de cumprir qualquer outra
restrio (ou resposta positiva na reavaliao dos
critrios acima )
No Sim
Comentrios:
O voluntrio ratificou seu desejo de
participar do Estudo? (Consentimento Informado)
Sim
No
+
Caso assinalada a coluna direita em qualquer dos 11
itens acima Preencher abaixo

O mdico responsvel (em conjunto com o Pesquisador Principal
no caso de uso de medicamentos) decidiu que o Voluntrio:
permanece apto para participar no Estudo
deve ser desligado do Estudo
Obs.: Complete as Folhas de Sinais e Sintomas Pr-dose e "Medicao Pr-dose" quanto ao status pr-dose.


126

2/6

Formulao deste Perodo de Internao: REF Megestat comp. 160mg, VO (Bristol-Meyer Squibb)

Administrao(es)
Data
Administrao
(dd/mm/aa)
Jejum
Observou
o jejum previsto?
Administrao
[ 1 ] Administrado de acordo c/
Protocolo
[ 2 ] Erro/Inverso na randomizao

[ 3 ] Erro na dose
[ 9 ] Outro
Rubrica

-
19/01/04
Sim No 1[X] 2[ ] 3[ ] 9[ ]

Indique os detalhes no campo de Observaes disponvel na penltima folha desta seo

Coleta de Amostras

A ser preenchido somente quando houver mais de uma amostra a ser coletada
Neste caso, ser(o) mostrado(s) o(s) nmero(s) da(s) amostra(s) a coletar
Material: Sangue Amostras: [1] Megestrol [2]
Volume por amostra: 9 mL
N de
Ordem
Tempo
de
Coleta
(hh:mm)
Horrio Previsto
(hh:mm)
Horrio Real
(hh:mm)

Desvios

Atrasos /
Indisponibilidade /
Outros
.
Rubrica
-

(coluna para correes) (coluna para correes)

1 00:00
07:20

07:20

2 01:00 08:20 08:20

3 01:30 08:50 08:50

4 02:00 09:20 09:20

5 02:30 09:50 09:50

6 03:00 10:20 10:20

7 03:30 10:50 10:50

8 04:00 11:20 11:20

9 05:00 12:20 12:20

10 06:00 13:20 13:20

11 08:00 15:20 15:20

12 12:00 19:20 19:20

13 16:00 23:20 23:20

14 24:00 07:20 07:20

15 36:00 19:20 19:20

16 48:00 07:20 07:20

17 72:00 07:20 07:20

18 96:00 07:20 07:31 A1

19 120:00 07:20 07:26

20 144:00 07:20 07:20

Atraso na coleta [A1] Problema no acesso venoso [A2] Atraso do Voluntrio [A3] Erro Operacional

No coletada [N1] Problema no acesso venoso [N2] No comparecimento do Voluntrio [N3] Erro Operacional

Outros Casos [6] Amostra Hemolisada [7] Amostra Hiperlipmica [8] Perda no Processamento [9] Outros desvios

127

3/6

Refeies

ltima alimentao ocorreu pelo menos 8h antes da administrao: Sim No
O trmino do jejum ocorreu pelo menos 2h aps a administrao: Sim No
Refeio

Data

(dd/mm)
Horrio Real
(Relgio 24h)

(hh:mm)
Refeio Ingerida?

(S/N)
Rubrica

-
Ceia
18/01 10:00
S N

Desjejum
19/01 09:20
S N

Almoo
19/01 12:20
S N

Lanche da tarde
19/01 16:00
S N

Jantar
19/01 18:00
S N

Ceia
19/01 21:20
S N

Desjejum
20/01 -
S N

S N

S N

Ingesto de Lquidos

Ingesto de lquidos interrompida 2h antes da administrao: Sim No
Liberao de Lquidos ocorrida 2h depois da administrao: Sim No

Outras Informaes

Rubrica e Data:

128

4/6

Sinais Vitais

N
Ordem
Tempo
aps
1 dose
(hh:mm)
Horrio
Previsto
(Relgio 24h )
(hh:mm)
Horrio
Real
(Relgio 24h )
(hh:mm)
Presso Arterial
(Sentado)
(mmHg)
(p/ correes)
Pulso
(Sentado)
(bpm)
(p/ correes)
Temperatura
(axilar)
(C)
(p/ correes)
Rubrica

-
1 00:00
06:40 06:40 120/80 76 36
2 01:00
08:20 08:20 120/85 80 36,2
3 02:00
09:20 09:17 100/60 64 35,8
4 03:00
10:20 10:16 110/60 68 36
5 04:00
11:20 11:20 110/70 72 36
6 08:00
15:20 15:20 120/80 68 36,7
7 12:00
19:20 19:20 115/80 64 36,5
8 24:00
07:20 06:28 110/90 56 35,6
9 36:00
19:20 18:55 120/80 72 36,8
10 48:00
07:20 07:23 120/80 88 36,8
11 72:00
07:20 07:19 120/85 80 36,7
12 96:00
07:20 07:36 130/90 84 37
13 120:00
07:20 07:26 120/80 84 36,3
14 144:00
07:20 07:15 130/90 76 37

Observaes

Rubrica e Data:

129

5/6

Avaliao Pr-Alta
Avaliado em Data: 20/01/04
Alguma mudana significativa desde o exame
anterior ?
No Sim
Comentrios:
Algum Evento Adverso durante a hospitalizao ?
No
Sim
Preencher a folha de Eventos Adversos.
Ingeriu medicamentos concomitantes ao tratamento
?
No
Sim
Medicao Concomitante
Deixou de cumprir alguma restrio do Protocolo?
No
Sim
Preencher folha de comentrios adicionais
A alta ocorreu por desligamento do Voluntrio ?
No
Sim
Preencher o quadro de Trmino Prematuro e
comentrios adicionais, caso haja relao.

PREENCHER
ABAIXO SOMENTE NO CASO DE DESLIGAMENTO

Alguma das formulaes sob investigao foi ingerida ?
No Sim
Preencher abaixo:

Reiterada a necessidade de comparecer ao Exame Ps Alta ?
Sim No
Sim No
Concluso: Alta Autorizada Alta inicialmente no autorizada
Rubrica:

+
Caso a Alta no tenha sido inicialmente autorizada, informar a Data e
Horrio em que a Alta foi concedida:
Data Horrio

Sada da UNIFAC
O voluntrio deixou a UNIFAC logo aps a autorizao de alta Rubrica
Efetivada em Data: 20/01/04 Horrio:
08:00

Dados Brutos assinados por: Renata Amaral de Moraes CREMEC 8314 20/01/04

130

UTILIZAO DE MEDICAMENTOS
6/6

Medicao Ps-Dose

Princpio(s) Ativo(s)
Nome
Comercial
Apresentao
Via Administ.
Data do Incio
Tratamento
(dd-mm-aa)
Hora
(hh:mm ou turno)
Dose
(em unidades)
Int. de Dose
(1x/dia, 8/8h)
Durao
Tratamento
Prescrio

Data do
Trmino
Tratamento
(dd-mm-aa)
T
1

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

T
2

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

T
3

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

T
4

Via:
:
Dose: Int. Dur.
C C C

Prescrio:
C Equipe UNIFAC C Prescrio Externa C Auto-medicao Data : hora

SINAIS E SINTOMAS PS-DOSE

T
1
T
2
T
3
T
4
^
Utilize o campo acima para qualquer informao julgada relevante

Reviso de Alta
A ser realizada somente na ocasio da Alta
Revisado em: 20/01/04

Foi utilizada alguma medicao desde o incio do Tratamento at
o trmino do Estudo Clnico?
No
Sim Complementar o quadro acima

Mdico Responsvel pela Reviso Data da Assinatura

131

EXAME FSICO PS-ESTUDO
Exame Realizado em:
29/01/04
+
(Ver Encerramento do Estudo)

Medidas
(Se necessrio, preencher Folha de EAs)
Presso Arterial
Sistlica / Diastlica
(Aps 5 min sentado)
Pulso Arterial
(Sentado)
Peso Corporal
(Roupas leves)

Temperatura
(axilar)
120/80 96
78
36,1
mm/Hg batimentos/min kg C

Exame Fsico
Item Normal Anormal Fornea os detalhes que julgue pertinentes
Aparncia

Pele/ Mucosas

Cabea e Pescoo

Tireide

Olhos

Ouvidos

Nariz

Boca/ Garganta

Trax

Corao

Fgado

Bao

Gnglios Linfticos

Condio Neurolgica

Extremidades

Msculo-esqueltico

Comentrios Adicionais

Sem alteraes

+ Assinalar somente no encerramento do estudo, j que o voluntrio pode vir a comparecer em uma nova convocao

Dados Brutos assinados por: Dra. Clia Regina Amaral Uchoa CREMEC 5554 29/01/04

132

EXAMES LABORATORIAIS PS-ESTUDO
1/2

+

Hematologia
Coletado em:
28/01/04
Marque quando solicitar repetio do Hemograma
Hemoglobina g% 13,7 Homem: 13,5 -18 Mulher: 11,5 16,4
Hematcrito % 40,6 Homem: 40 - 54 Mulher: 36 47
Eritrcitos 10
6
/mm
3
4,5 Homem: 4,5 6,5 Mulher: 3,9 - 5,8
Leuccitos 10
3
/mm
3
5,2 5 10
Contagem Diferencial %
Bastes 1 1 3
Segmentados 58 40 75
Linfcitos 26 20 45
Moncitos 11 2 10
Basfilos 1 0 1
Eosinfilos 3 1 6
Outros - -
Plaquetas 10
3
/mm
3
258 150 - 450
Comentrios Globais

Bioqumica
Coletado em:
28/01/04
Marque quando solicitar repetio do Teste
Colesterol Total mg/dL 174 < 200
Triglicerdeos mg/dL 74 < 150
Protena Total g/dL 6,56 6,6 8,7
Albumina mg/dL 4,67 3,4 4,8
Globulinas g/dL 1,89 -
cido rico mg/dL 4,5 Homem:3,4 a 7,0 Mulher:2,4 a 5,7
Bilirrubina Total mg/dL 0,66 At 1,1
Direta mg/dL 0,14 At 0,3
Indireta mg/dL 0,52 At 0,7
Fosfatase Alcalina U/L 184 Homem: < 270 Mulher: < 240
GT U/L 24 Homem: 8 - 61 Mulher: 5 - 36
TGO (AST) U/L 17 Homem: at 38 Mulher: at 32
TGP (ALT) U/L 19,9 Homem: at 41 Mulher: at 31
Uria mg/dL 24,8 10 50
Creatinina mg/dL 1,0 0,7 1,2
Glicose em jejum mg/dL 94 70 105
Comentrios Globais

* A ser preenchida somente quando a data da coleta do material para a 1 realizao de algum teste diferir da data indicada no cabealho. No usar para repeties

133
EXAMES LABORATORIAIS PS-ESTUDO
2/2

Anlise de Urina
Coletado em:
28/01/04
Marque quando solicitar a repetio do Ex. de
Urina
Densidade 1017 1005 1030
pH 5,0 4,5 8,0 (mdia 6,0)
Protenas - -
Glicose - -
Corpos Cetnicos - -
Urobilinognio TN Traos Normais
Bilirrubina - -
Nitritos - -
Anlise Microscpica
Leuccitos < 01 < 03
Hemcias - -
Cilindros - 0 1
Cls Epiteliais < 01 Algumas
Cristais - -
Bactrias - -
Outros - -
Comentrios Globais*


134

AVALIAO PS-ESTUDO

Repetio de Exames


Parmetro Data
Coleta
(dd/mm)
(Novo)
Resultado

Responsvel
Avaliao
Rubrica e Data

H
e
m
o
g
r
a
m
a

B
i
o
q
u
m
i
c
a

Exame de Urina

ECG

O
u
t
r
o
s

Comentrios


135

E C G PS-ESTUDO
Exame realizado em:
29/01/04
+

Parmetros
ECG 12 derivaes
Sinusal
HR 76 bpm

Ritmo
Cardaco

Intervalo PR 0,14 s

Durao do QRS 0,08 s

QT 0,34 s
Normal

No clinicamente significativo
Diagnstico
Anormal

Clinicamente significativo
Especificao da Anomalia

(preencher caso tenha sido assina-lado
Diagnstico Anormal,
independentemente de ser significativo)

Concluso Comparativa
Inalterado ou sem alteraes clinicamente relevantes
(em relao ao ECG pr-tratamento)
Nova alterao ou piora
em relao situao inicial

Preencher a folha de Eventos Adversos,
indicando as condies pr e ps-estudo
Preencher demais folhas complementares s/n

Melhora em relao situao inicial
Outro

Especificar abaixo e preencher a folha de
Eventos Adversos, se aplicvel

No comparado

Observaes:


136

ENCERRAMENTO DA ETAPA CLNICA
1/2 Avaliado em: 03/02/04

Avaliao

Foram evidenciadas diferenas significativas entre
os resultados de exame laboratoriais pr e ps-
estudo ? *
No Sim
Preencher a folha de Eventos Adversos, indicando o
exame e os valores pr e ps-estudo
Preencher demais folhas complementares, se necessrio
Foram evidenciadas diferenas significativas entre os
achados de exame clnico / fsico pr e ps-estudo ? *
No Sim
Preencher a folha de Eventos Adversos, indicando o as
condies pr e ps-estudo

* As alteraes laboratoriais ou de histria clnica/exame fsico consideradas no significativas (N.S.) no devem ser assinaladas como "Sim"

Segura
na

Alguma mudana significativa desde a ltima
avaliao ?
No Sim
Comentrios:
Algum Evento Adverso desde a ltima avaliao ?
No
Sim
Preencher a folha de Eventos Adversos .
Deixou de cumprir restries previstas no
Protocolo desde a ltima avaliao ?
No
Sim
Preencher a folha de Eventos Adversos .
Ingeriu medicamentos concomitantes ao
tratamento ?
No
Sim
Medicao Ps-dose
Sim No

Trmino Prematuro
ASSINALE SE NO HOUVE TRMINO PREMATURO

Antes dos Perodos de Tratamento (antes da 1 internao)
Durante o
Perodo
de Tratamento
Antes da administrao das terapias previstas
Aps a administrao, durante a internao
Aps ter recebido alta da internao
Ocasio em que foi
observada a sada:

Data:
Hora:

No compareceu Avaliao Ps-Estudo ou parte dela
O fato ocorreu:
Em Funo de Devido a
Deciso
da Equipe
Resposta positiva reavaliao de Critrio de Excluso
No Aderncia s exigncias do Protocolo
EAs Outras razes, a juzo do investigador
Deciso
do Voluntrio
Razes Pessoais Retirada Consentimento
EAs Intolerncia aos Procedimentos
Indisponibilidade Outras razes
Informao No Disponvel
Constatao de Simples Abandono (No houve retorno por parte do voluntrio)

bito Data do bito
_____/_____/_____
(ver Eventos Adversos)
Principal Causa Mordis___________________________________________________

Dados Brutos assinados por: Ismael Leite Martins 03/02/04
Responsvel pelas informaes Data da Assinatura

137

ENCERRAMENTO DA ETAPA CLNICA
2/2

Informaes Finais

Data em que foi administrada a ltima dose dos produtos sob Investigao: 19/01/04
(indicar a data relativa ao ltimo perodo de internao)

Encerramento:

Concluso do Estudo - Alta regular da Etapa Clnica aps todas as avaliaes
Desistncia / Retirada do Consentimento antes da 1 internao / administrao terapia
Alta regular aps Trmino Prematuro, com as avaliaes aplicveis *
Encerramento Administrativo do CRF por abandono, sem completar as Avaliaes Ps-Estudo **
Encerramento Administrativo do CRF; o Voluntrio permanece sob acompanhamento ***
(a documentao do acompanhamento ou abandono aps o encerramento do CRF ser anexada ao Arquivo do Estudo)
Encerramento devido bito (ver Eventos Adversos e Trmino Prematuro)

* O voluntrio desistiu ou foi desligado do estudo por qualquer motivo (inclusive EAs), mas compareceu em todos os exames de alta e/ou outras avaliaes aplicveis
** O voluntrio abandonou durante as internaes ou durante as avaliaes ps-estudo, ou no retornou para acompanhamento de EAs .
*** Inclui os casos em que est prevista a concluso das avaliaes e os casos em que EAs permanecem em aberto, sob acompanhamento aps o encerramento do CRF. Envolve
os casos em que, por questo de prazos, h necessidade de encerramento administrativo do CRF, independentemente do potencial de retorno/comparecimento do voluntrio
(Mesmo com Alta regular, o surgimento de Eventos Adversos pode ensejar acompanhamento a posteriori do encerramento deste CRF, que sero documentadas parte e anexadas ao Arquivo do Estudo)
Comentrios Adicionais:

Eu certifico que:

Revisei todos os dados em todas as pginas deste CRF e, at onde de meu
melhor conhecimento, eles esto corretos, completos e, quando transcritos,
correspondem exatamente aos registros originais.

Responsvel pela Garantia da Qualidade Assinatura Data da Assinatura

M Elisabete Amaral de Moraes CREMEC 2145
Investigador Principal Assinatura Data da Assinatura

138

A
A
N
N
E
E
X
X
O
O
I
I
I
I
I
I

139

TABELA DE RANDOMIZAO DAS DUAS FORMULAES

N
Vol
Iniciais 1Fase 2 Fase
1
GC020579

Acetato de Megestrol Megestat
2
EN310578

Megestat Acetato de Megestrol
3
FS061258

4
CG080283

5
FT181265

6
BC130681

7
LS150468

8
MS150271

9
DC100684

10
GG291279

11
RS040572

12
DF161070

13
TO191183

14
DS101179

15
JS070385

16
RD300683

17
PL261277

18
UJ070680

19
ML300974

20
FR050480

21
CA290678

22
MA190676

23
IR270679

24
JC280882

25
WN220682

26
ST090182

27
DT170276

28
JF090174

29
FB130580

30
SS240271


140

A
A
N
N
E
E
X
X
O
O
I
I
V
V

141

DECLARAO DO COMIT DE TICA EM PESQUISA

142

A
A
N
N
E
E
X
X
O
O
V
V

143
GRFICOS DAS CURVAS DE CONCENTRAES CONTRA O TEMPO E
OS PARMETROS FARMACOCINTICOS PARA CADA INDIVDUO

VOLUNTRIO 1

Formulao Parmetros Farmacocinticos
Voluntrio 1 Megestat
Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 2463,04 2266,14
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 2875,3 2542,37
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 85,66 89,13
C
max
(ng*mL
-1
) 78,61 69,71
T
max
(h) 6 2
t
1/2
(h) 50,49 44,74
K (1/h) 0,014 0,016

Megestat
Megestrol

144

VOLUNTRIO 2

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 2423,18 1468,75
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 2457,62 1533,45
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 98,60 95,78
C
max
(ng*mL
-1
) 46,1 70,04
T
max
(h) 4 4
t
1/2
(h) 18,69 22,38
K (1/h) 0,037 0,031

Megestat
Megestrol

145

VOLUNTRIO 3

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1525,75 1624,64
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1600,21 1721,56
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 95,35 94,37
C
max
(ng*mL
-1
) 43,24 28,92
T
max
(h) 2,5 24
t
1/2
(h) 32,55 31,84
K (1/h) 0,021 0,022

Megestat
Megestrol

146

VOLUNTRIO 4

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1976,57 1451,83
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 2143,97 1646,27
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 92,19 88,19
C
max
(ng*mL
-1
) 47,55 30,09
T
max
(h) 4 3,5
t
1/2
(h) 40,71 38,67
K (1/h) 0,017 0,018

Megestat
Megestrol

147

VOLUNTRIO 5

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1685,55 942,18
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1818,03 1012,06
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 92,71 93,10
C
max
(ng*mL
-1
) 47,64 34,63
T
max
(h) 6 6
t
1/2
(h) 21,86 29,84
K (1/h) 0,032 0,023

Megestat
Megestrol

148

VOLUNTRIO 6

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1463,63 1501,19
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1825,77 1731,76
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 80,17 86,69
C
max
(ng*mL
-1
) 57,41 31,05
T
max
(h) 4 6
t
1/2
(h) 75,38 42,85
K (1/h) 0,009 0,016

Megestat
Megestrol

149

VOLUNTRIO 7

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 4584,58 3941,22
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 5138,46 4285,31
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 89,22 91,97
C
max
(ng*mL
-1
) 96,07 96,19
T
max
(h) 6 6
t
1/2
(h) 41,5 33,13
K (1/h) 0,017 0,021

Megestat
Megestrol

150

VOLUNTRIO 8

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 3164,27 2370,15
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 3537,7 2515,83
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 89,44 94,21
C
max
(ng*mL
-1
) 113,17 94,84
T
max
(h) 6 2,5
t
1/2
(h) 39,94 32,68
K (1/h) 0,017 0,021

Megestat
Megestrol

151

VOLUNTRIO 9

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 2721,44 738,97
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 3686,47 919,58
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 73,82 80,36
C
max
(ng*mL
-1
) 120,96 26,91
T
max
(h) 6 1
t
1/2
(h) 100,89 46,02
K (1/h) 0,007 0,015

Megestat
Megestrol

152

VOLUNTRIO 10

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1054,66 1022,42
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1172,03 1145,09
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 89,99 89,29
C
max
(ng*mL
-1
) 36,6 49,57
T
max
(h) 6 2,5
t
1/2
(h) 40,27 40,88
K (1/h) 0,017 0,017

Megestat
Megestrol

153

VOLUNTRIO 11

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 4251,44 4411,29
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 5133,21 5778,45
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 82,82 76,34
C
max
(ng*mL
-1
) 128,87 73,5
T
max
(h) 6 1,5
t
1/2
(h) 57,77 69,17
K (1/h) 0,012 0,010

Megestat
Megestrol

154

VOLUNTRIO 12

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 669,12 1332,52
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 766,82 1426,45
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 87,26 93,42
C
max
(ng*mL
-1
) 29,47 49,71
T
max
(h) 4 6
t
1/2
(h) 41,68 32,61
K (1/h) 0,017 0,021

Megestat
Megestrol

155

VOLUNTRIO 13

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1265,96 560,27
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1347,69 636,11
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 93,94 88,08
C
max
(ng*mL
-1
) 54,88 26,3
T
max
(h) 3 2
t
1/2
(h) 32,12 19,39
K (1/h) 0,022 0,036

Megestat
Megestrol

156

VOLUNTRIO 14

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1295,83 310,54
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1423,08 329,52
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 91,06 94,24
C
max
(ng*mL
-1
) 87,72 14,83
T
max
(h) 2,5 8
t
1/2
(h) 28,23 10,58
K (1/h) 0,025 0,066

Megestat
Megestrol

157

VOLUNTRIO 16

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1374,1 1352,92
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1460,02 1431,72
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 94,12 94,50
C
max
(ng*mL
-1
) 31,68 39,68
T
max
(h) 2,5 5
t
1/2
(h) 31,05 24,97
K (1/h) 0,022 0,028

Megestat
Megestrol

158

VOLUNTRIO 17

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1080,4 774,37
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1178,98 852
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 91,64 90,89
C
max
(ng*mL
-1
) 33,65 44,81
T
max
(h) 6 4
t
1/2
(h) 27,57 31,21
K (1/h) 0,025 0,022

Megestat
Megestrol

159

VOLUNTRIO 18

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1177,36 1054,86
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1260,98 1139,29
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 93,37 92,59
C
max
(ng*mL
-1
) 37,61 43,82
T
max
(h) 2,5 2
t
1/2
(h) 34,78 36,59
K (1/h) 0,020 0,019

Megestat
Megestrol

160

VOLUNTRIO 19

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 3499,63 3358,03
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 4038,82 3930,32
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 86,65 85,44
C
max
(ng*mL
-1
) 129,25 89,72
T
max
(h) 6 6
t
1/2
(h) 47,79 51,65
K (1/h) 0,015 0,013

Megestat
Megestrol

161

VOLUNTRIO 20

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1721,93 1663,01
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1798,34 1720,38
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 95,75 96,67
C
max
(ng*mL
-1
) 41,9 32,98
T
max
(h) 2 24
t
1/2
(h) 27,51 24,35
K (1/h) 0,025 0,028

Megestat
Megestrol

162

VOLUNTRIO 21

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1246,54 1058,85
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1604,01 1159,53
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 77,71 91,32
C
max
(ng*mL
-1
) 59,5 70,62
T
max
(h) 2 4
t
1/2
(h) 99,91 42,36
K (1/h) 0,007 0,016

Megestat
Megestrol

163

VOLUNTRIO 22

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1891,08 3365,99
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 2161,45 3908,26
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 87,49 86,13
C
max
(ng*mL
-1
) 116,01 99,02
T
max
(h) 6 5
t
1/2
(h) 55,61 61,42
K (1/h) 0,013 0,011

Megestat
Megestrol

164

VOLUNTRIO 23

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1641,31 1105,91
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1713,01 1146,86
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 95,81 96,43
C
max
(ng*mL
-1
) 76,49 62,87
T
max
(h) 3,5 1,5
t
1/2
(h) 27,81 19,95
K (1/h) 0,025 0,035

Megestat
Megestrol

165

VOLUNTRIO 24

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1289,02 872,7
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1353,43 941,86
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 95,24 92,66
C
max
(ng*mL
-1
) 66,6 47,24
T
max
(h) 6 6
t
1/2
(h) 23,5 21,98
K (1/h) 0,030 0,032

Megestat
Megestrol

166

VOLUNTRIO 25

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1267,8 772,96
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1357,3 798,21
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 93,41 96,84
C
max
(ng*mL
-1
) 72,85 27,07
T
max
(h) 5 2
t
1/2
(h) 28,72 14,9
K (1/h) 0,024 0,047

Megestat
Megestrol

167

VOLUNTRIO 26

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1152,26 693,97
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1199,31 812,96
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 96,08 85,36
C
max
(ng*mL
-1
) 31,54 24,9
T
max
(h) 6 3
t
1/2
(h) 21,91 29,3
K (1/h) 0,032 0,024

Megestat
Megestrol

168

VOLUNTRIO 27

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1487,33 880,97
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1560,14 969,03
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 95,33 90,91
C
max
(ng*mL
-1
) 40,27 21,78
T
max
(h) 1,5 2
t
1/2
(h) 26,87 26,59
K (1/h) 0,026 0,026

Megestat
Megestrol

169

VOLUNTRIO 28

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 2340,61 1780,7
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 2470,82 1898,93
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 94,73 93,77
C
max
(ng*mL
-1
) 99,23 24,94
T
max
(h) 6 36
t
1/2
(h) 36,39 35,17
K (1/h) 0,019 0,020

Megestat
Megestrol

170

VOLUNTRIO 30

Megestrol
ASC
0-144h
(ng*h*mL
-1
) 1008,69 1488,13
ASC
0-
(ng*h*mL
-1
) 1094,25 1581,55
ASC
(0-144h)
/ ASC
(0-)
(%) 92,18 94,09
C
max
(ng*mL
-1
) 48,15 30,44
T
max
(h) 2,5 5
t
1/2
(h) 35,27 23,31
K (1/h) 0,020 0,030

Megestat
Megestrol

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR

ciclo de congelamento e descongelamento (degelo 3). Os resultados foram

= 1882,97, Megestrol = 1577,34) maior que 80%

80% = 1690,77, Megestrol 80% = 1414,70), para o

e Acetato de Megestrol, conforme preconiza a RE n 899/2003.

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