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Transporte Transmembrana

1o semestre 2003

UFRRJ INSTITUTO DE BIOLOGIA DEPARTAMENTO DE CINCIAS FISILGICAS FISIOLOGIA VEGETAL - IB 311

TRANSPORTE TRANSMEMBRANA

1. Introduo Todas as clulas metabolicamente ativas (procariticas e eucariticas), apesar de possurem uma enorme diversidade funcional e anatmica, possuem estruturas semelhantes que as delimitam fisicamente. Estes limites so feitos por uma membrana externa, chamada membrana plasmtica ou plasmalema , responsvel pelo controle do trnsito de quaisquer substncias entre o interior e o exterior celular, entre outras funes. Desta forma, as clulas conseguem atingir a diferenciao bioqumica e estrutural atravs da compartimentalizao interna, dirigida pelas membranas, formando um sistema metablico complexo e integrado. A compartimentalizao um princpio funcional geral da organizao celular, servindo para ordenar e direcionar todos os processos metablicos, evitando redundncia de funes e gastos metablicos desnecessrios. Dentro da clula, as membranas do retculo endoplasmtico, aparelho de Golgi, mitocndrias e outras organelas envoltas por membrana, mantm as diferenas caractersticas entre os contedos de cada organela e o citosol. A presena do conjunto das enzimas do ciclo de Calvin e do ciclo dos cidos tricarboxlicos (Ciclo de Krebs) nos cloroplastos e mitocndrias, respectivamente, so exemplos de compartimentalizao. Apesar das clulas procariticas e eucariticas serem limitadas externamente pela plasmalema (alguns virus tambm possuem membrana), a clula eucaritica muito mais complexa que a clula procaritica (e muito maior). A diferena fundamental entre os tipos celulares procariticos e eucariticos, a existncia de numerosos sistemas de membranas e organelas (limitadas por membranas) nas clulas eucariticas, muito semelhantes em todos os tipos celulares. Todas as membranas biolgicas tm uma estrutura geral comum: um filme muito fino de lipdios e 1

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de protenas mantidas juntas principalmente por interaes no covalentes. Estas membranas possuem uma tpica estrutura de trs camadas, sendo uma camada hidrofbica central e duas camadas hidroflicas externas. Esta organizao permite uma permeabilidade seletiva, caracterstica fundamental das membranas biolgicas, e propriedade funcional que permite a regulao quantitativa, qualitativa e direcional do transporte de substncias atravs da plasmalema, do tonoplasto e dos demais compartimentos intracelulares. Porm, devido diversidade de funes especializadas dirigidas pelas membranas biolgicas, a permeabilidade seletiva no sua nica funo na clula. Alm da funo regulatria do movimento de substncias entre os lados das membranas (transporte transmembrana ), as membranas biolgicas so tambm stios de recepo e traduo de sinais qumicos e fsicos do meio ambiente, e das condies metablicas internas do organismo. Alm disso, as membranas abrigam enzimas, pigmentos e protenas responsveis por processos biossintticos vitais como, por exemplo, as enzimas responsveis pela polimerizao dos glicdios da parede celular, os pigmentos fotossintticos organizados em complexos protico (antenas) e o sistema de protenas redox vinculadas ao fluxo de eltrons da fotossntese e da respirao celular. O modelo que melhor representa as propriedades fsico-qumicas e biolgicas das membranas denominado Modelo do Mosaico Fluido. De acordo com este modelo, as membranas so comparadas a uma soluo bidimensional na qual os lipdios e protenas tm um considervel grau de liberdade para movimentao (Figura 1). As membranas celulares so portanto estruturas dinmicas, fluidas, e a maior parte de suas molculas so capazes de mover-se no plano da membrana. Todas as membranas celulares apresentam a mesma estrutura bsica que consiste em uma bicamada lipdica contnua com cerca de 5nm de espessura, na qual esto embebidas protenas, muitas das quais se estendem atravs da membrana lipdica, sobressaindo em ambos os lados da membrana, denominadas protenas integrais da membrana. Outras protenas, denominadas perifricas se projetam da bicamada lipdica para a superfcie interna ou externa das membranas. Essa bicamada lipdica fornece a estrutura bsica da membrana e atua como uma barreira relativamente impermevel passagem da maioria das molcula hidrossolveis. A enorme diversidade funcional que as membranas celulares apresentam encontra-se associada diversidade de suas protenas que podem ser estruturais, enzimas, receptores, transportadores, canais ou bombas eletrognicas (Figura 1). 2

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Domnio lipdico gelatinoso sem a presena de protenas

Domnio lipdico fluido com agregaes de protenas de membrana Ramificaes de oligossacardeos de glicoprotenas

Bicamada lipdica

Exterior celular

Interior celular (citoplasma) Protena integral de membrana

Plano central da bicamada lipdica

Protenas perifricas de membrana Protena ancorada na cadeia lipdica

Figura 1 - Representaco esquemtica de uma membrana biolgica - Modelo do Mosaico Fluido, com a dupla camada lipdica e incrustraes proticas (baseado em Buchanan et al., 2000).

A maioria dos lipdios que compem a membrana so fosfolipdios dos quais predominam: fosfatidilcolina, esfingomielina, fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina. Os fosfolipdios so molculas anfipticas (possuem regies hidroflicas e regies hidrofbicas), com fosfato em suas molculas. Nestas molculas, duas cadeias de cidos graxos esto ligadas ao glicerol formando a poro hidrofbica, enquanto o grupo polar se liga cadeia de glicerol por uma ligao fosfodister. Dependendo da molcula que se liga ao grupo fosfato teremos um determinado tipo de fosfolipdios. Se for a base nitrogenada colina temos a fosfatidilcolina ou lecitina; se for serina, fosfatidilserina e se for etanolamina, fosfatidiletanolamina. Os cidos graxos constituintes dos fosfolipdios so cidos orgnicos, na sua maioria de cadeia longa (em geral com 14 a 24 C sempre em nmero par) e podem apresentar a cadeia hidrocarbonada saturada ou insaturada. A cadeia saturada do cido graxo possui apenas ligaes simples entre os carbonos. A cadeia insaturada pode possuir uma ou mais ligaes duplas. A dupla ligao faz com que haja uma dobra na molcula por conta dos ngulos que se formam entre os carbonos na dupla ligao (Figura 2).

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H3C C H H

H3 C N+ C O H H C C O O H H O C H C H O O P O H H

Colina Grupo polar

Fosfato

Glicerol O C C H2 C H2 C H2 C H2 C H2 C H CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH HC Insaturao (ligao dupla cis)

Grupo carboxlico

Cadeia de hidrocarbonetos Grupo apolar

H2C H2C H2C H2C H2C H2C H2C H2C H3C

CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2

CH2 H2 C CH2 H3C

Figura 2 - Representaco das molculas constituintes dos fosfolipdios e dos cidos graxos, com uma cadeia saturada e outra insaturada (monoinsatursada). Destaque para a insaturao.

2. Transporte de solutos atravs das membranas Quando procuramos compreender o transporte de uma determinada substncia atravs das membranas celulares temos que considerar, primeiramente, as propriedades fsico-qumicas das molculas que sero transportadas, a saber: polaridade e tamanho da molcula; presena de cargas; As membranas biolgicas so barreiras seletivas passagem de elementos qumicos (ons e molculas sem carga eltrica), e possuem locais especficos (protenas especficas) para o transporte de cada soluto. Entretanto, molculas apolares de pequeno dimetro (como O 2) ou molculas polares pequenas (como CO2 e H2O) podem atravessar as membranas celulares livremente por difuso. A observao de que molculas hidrofbicas podiam se difundir facilmente atravs da membrana plasmtica forneceu a primeira evidncia sobre a natureza lipdica da membrana. Por outro lado, a maior parte das substncias que as clulas necessitam para manter seu

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metabolismo so polares (ex: glicose, frutose) ou carregadas eletricamente (ons). Para estas molculas, a matriz lipdica da membrana representa uma barreira significativa. Nas clulas, o transporte de molculas polares e de ons mediado por protenas especializadas no transporte. Normalmente a protena transportadora especfica para determinado on (ex: K+ ou Na+) ou molcula (ex: sacarose ou determinado aminocido), residindo a o carter altamente seletivo das membranas celulares. A seletividade e acmulo de certas substncias dentro ou fora das clulas ocorre atravs da ao de protenas (do tipo integrais) relativamente especficas para determinado elemento on ou molcula. As protenas transportadoras podem ser agrupadas em trs classes: canais, carreadores e bombas (Figura 3).

Alto

(c) (a) (b)

Canal

Carreadores

Transporte ativo Secundrio

Bomba Gradiente eletroqumico

(e) (d)

Difuso simples Difuso facilitada Transporte passivo

H+

Energia Baixo Transporte ativo Primrio

Figura 3 . Mecanismos de transporte de molculas atravs das membranas biolgicas: (a) Difuso atravs da matriz lipdica; (b) Canais; (c) e (d) Carreadores e (e) Bombas eletrognicas.

As bombas so protenas integrais ativadas por energia qumica (ATP) ou luminosa. Atualmente so conhecidas bombas da plasmalema do tipo H+-ATPases e Ca2+-ATPases, e bombas do tonoplasto do tipo V-ATPases e V-PPases (ATPases e pirofosfatases vacuolares). Nas clulas vegetais, as bombas de prtons (H+-ATPases) utilizam a energia liberada pela hidrlise do ATP para transportar um prton atravs da membrana. Na plasmalema e no tonoplasto funcionam continuamente H+-ATPases bombeando prtons para fora das clulas (em outras palavras, jogando prtons para a parede celular no caso das bombas localizadas na plasmalema) ou 5

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para dentro dos vacolos (bombas localizadas no tonoplasto), respectivamente. Estas bombas tambm so chamadas de bombas eletrognicas , por gerarem diferenas de potencial eltrico atravs das membranas, sendo responsveis pela gerao de um gradiente de prtons atravs das membranas (transporte ativo primrio). O transporte de inmeras substncias qumicas atravs das membranas vegetais, mediada por carreadores, encontra-se acoplado existncia deste gradiente de prtons (transporte ativo secundrio). Desta forma, o transporte feito contra um gradiente de concentrao realizado a favor de um gradiente energtico ou de potencial eltrico, promovido pelas bombas eletrognicas ou ATPases (Figura 4).

Figura 4 - Modelo esquemtico do transporte ativo primrio, realizado pelas ATP-ases, gerando um
+ gradiente transmembrana de potencial eltrico. As ATPase so responsveis pelo acmulo de H no

exterior das clulas vegetais (baseado em Buchanan et al., 2000)

Os canais so protenas complexas que possuem stios de translocao (poros que atravessam as membranas) para ons especficos, os quais podem ser abertos ou fechados por alteraes na conformao da protena. Os canais possibilitam a passagem de um grande nmero de ons, sempre a favor de um gradiente de potencial eletroqumico (diferenas de concentrao de ons e de potencial eltrico), e funcionam como um porto. O tamanho do poro e a densidade das cargas na superfcie interior do canal determinam a afinidade do on a ser transportado, em uma 6

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regio do canal denominada filtro de seletividade . Um nico canal aberto pode permitir a passagem de mais de 100.000.000 de ons (108 ons) por segundo. Entretanto, os "portes" abrem ou fecham o canal em resposta a estmulos externos, alm do tempo de abertura de um canal ser muito curto (Figura 5).
Canal inico aquoso
Alto K+ K+ K+ K+ Porto Exterior

++

++

or te l e q i u cm o e t ne i da rG

K+

Subunidade reguladora

K+ K+ K+

Filtro de seletividade

Interior Subunidade principal

Baixo

Figura 5 . Modelo esquemtico do canal inico de potssio. O canal composto por um tetrmero protico, formado pelas subunidades . Estas subunidades contm o filtro de seletividade e o porto dependente de voltagem. O porto dependente de voltagem formado por aminocidos bsicos, que conferem as cargas positivas e permitem a resposta a variaes ao potencial transmembrana com a abertura ou o fechamento do canal. As subnidades nem sempre esto presentes (baseado em Taiz e Zeiger, 1998).

A desativao, ou fechamento de um canal de transporte inico, ocorre quando existe uma baixa diferena de potencial eletroqumico (corrente eltrica) entre os lados da membrana. A inativao de um canal inico se refere ao fechamento permanente de um canal, mesmo a membrana estando sob potenciais de formao de corrente eltrica, e pode ocorrer por interaes do canal transportador com um on inespecfico (como ons de metais pesados). A difuso (passagem) dos ons atravs de um canal controlada de forma bastante eficiente pelos os "portes" do canal, que so protenas sensoras do potencial eletroqumico transmembrana. Estas protenas permitem que o potencial eletroqumico transmembrans seja retificado a valores definidos, quando os canais encontram-se abertos (ou ativos). Existem evidncias da existncia de canais para o transporte de K+, Cl-, NO3-, Ca++ e ons orgnicos como o malato.

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Os carreadores, por sua vez, transportam ons ou molculas polares individualmente atravs das membranas aumentando em 100 a 1.000.000 vezes a sua permeabilidade quando comparado exclusivamente com a matriz bilipdica (ausncia dos carreadores). Neste caso, os carreadores se ligam a uma molcula ou on em um lado da membrana e sofrem modificaes conformacionais, liberando este elemento do outro lado da membrana (Figura 6). Sendo a velocidade do transporte da ordem de 105 ons por segundo; isto representa uma capacidade de transporte 1000 vezes menor do que a de um canal. Estes transportadores ou carreadores so seletivos , trabalham no transporte de poucas espcies inicas, e esto presentes nas membranas da plasmalema e do tonoplasto, e realizam o transporte destas espcies de um lado para outro da membrana utilizando a fora prton motriz gerada pelas bombas eletrognicas, para realizar transportes contra gradientes eletroqumicos.

1)
Interior

2)

NH4+

Exterior H+

3)
Interior

4)

Exterior

Figura 6. Representao esquemtica do transporte transmembrana realizado por um carreador, contra um gradiente de concentrao do soluto, mas a favor de um gradiente de potencial eltroqumico. (1) Protena transportadora apresentando os stios de transporte livres; (2) Interao eltrica entre um prton e a protena transportadora, expondo o stio de ligao com o soluto que no possui carga eltrica; (3) Mudana conformacional da protena transportadora, exponto tanto o soluto quanto o prton para o outro lado da membrana aonde so liberados; (4) A protena transportadora reassume sua conformao relaxada (baseado em Taiz e Zeiger, 1998).

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No transporte de molculas atravs dos carreadores ocorre ligao da substncia a ser transportada nos stios especficos da protena carreadora, provocando uma mudana conformacional da protena e expondo a molcula ao outro lado da membrana onde dissocia-se da protena transportadora. Devido esta necessidade de mudana conformacional da protena transportadora, a velocidade de absoro de uma molcula dependente no s de sua concentrao no meio, mas tambm da quantidade e da eficincia (taxa de turn over) do transportador em relao molcula transportada. Portanto, o transporte mediado por carreadores est sujeito aos fenmenos de saturao, inativao, competio, inibio, etc., dos transportadores responsveis por esta absoro. A cintica de absoro de ons e molculas transportadas por carreadores pode ser estudada utilizando-se o modelo de Michaelis-Menten para sistemas enzimticos. Este modelo caracterizado pela relao hiperblica entre a velocidade de transporte de uma substncia e a sua concentrao na soluo. Estudos da cintica de absoro de uma determinada molcula permitem conhecer a afinidade do carreador em relao molcula transportada (Km) bem como a sua velocidade mxima (Vmax) de absoro (Figura 7).

Vmax
Velocidade de transporte

Concentrao da soluo

Figura 7. Representao esquemtica das relaes entre a velocidade de transporte (absoro) de um determinado on e sua concentrao externa; em Cmin, a absoro lquida zero (influxo = efluxo); Km representa a concentrao do on onde a velocidade de transporte metade da velocidade mxima;

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Vmax a mxima velocidade de transporte da espcie inica determinada pela concentrao de saturao do transportador.

A Vmax representa o ponto aonde todos os transportadores esto saturados, ou seja, cada transportador est associado a uma uma molcula para transporte. Neste ponto, a velocidade de transporte torna-se independente da concentrao da espcie inica na soluo. A ciintica de Michaelis-Menten pode ser descrita na equao:

v = Vmax [S] Km + [S]

Onde v a velocidade de transporte de uma espcie inica, Vmax a velocidade mxima de transporte (em uma concentrao infinita da espcie inica) e Km (que dependente de Vmax) representa uma constante caracterstica para cada sistema transportador (ou sistema enzimasubstrato), e est relacionado com a constante associao do transportador (ou enzima) pela espcie inica (ou substrato), sendo portanto uma medida de afinidade. A determinao de Km feita pela determinao da concentrao da espcie inica que satura metade dos transportadores para este on, sendo a concentrao do on a Vmax/2. Quanto menores os valores de Km para uma classe de transportadores, maior ser a afinidade destes transportadores pela espcie inica. Caracteristicamente, capacidade de absoro de nutrientes por uma espcie vegetal herdada geneticamente. Esta caracterstica funo da capacidade da espcie vegetal perceber concentraes especficas de molculas presentes na soluo do solo, e promover a absoro seletiva destas molculas em concentraes adequadas e no limitantes ao crescimento. Para isso, diversas estratgias foram naturalmente selecionadas por um sem nmero de espcies de plantas, para suprir as carncias de determinado nutriente na soluo do solo. A acidificao e/ou a seleo da microbiota associada rizosfera, a associao com microrganismos benficos como fungos micorrzicos e bactrias fixadoras de nitrognio atmosfrico, o aumento no contedo de matria seca destinado s razes visando um aumento no volume de solo explorado, entre outros fatores, promovem um incremento no quantidade e velocidade bruta de assimilao de nutrientes. Estes fatores contudo no so completamente entendidos, e tampouco atuam diretamente nos 10

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transportadores isoladamente. A capacidade final de absoro de um determinado nutriente resulta da carga gentica total da planta.

3. Termodinmica do transporte 3.1 - Transporte ativo: O transporte de uma molcula polar ou on do ambiente exterior para o interior da clula ou vacolo e vice-versa considerado ativo quando ocorre contra um gradiente de potencial qumico (molcula apolar) ou eletroqumico (ons). Se o transporte ativo, dever haver introduo de energia no sistema para que o fluxo ocorra contra o gradiente de potencial qumico ou eletroqumico. O transporte ativo pode ser caracterizado como primrio ou secundrio. O transporte ativo primrio no caso do transporte de H+ ou Ca2+ pelas bombas que consomem energia bioqumica (ATP) diretamente no transporte; ativo secundrio quando o transporte da substncia depende do gradiente de prtons (fora proton-motriz) gerado atravs da ao contnua das bombas eletrognicas. Diz-se que o transporte ativo secundrio encontra-se acoplado e dependente do gradiente de prtons gerado no transporte ativo primrio. Por exemplo, carregamento de sacarose no floema se d forma ativa, por transporte ativo secundrio, em cotransporte com H+. 3.2 - Transporte passivo: O transporte de molculas polares e ons passivo quando ocorre a favor de gradientes qumicos e eletroqumicos, respectivamente. Em clulas animais e vegetais, ons podem ser transportados passivamente atravs de canais inicos ou por carreadores. No caso de solutos apolares e polares, para se definir o tipo de transporte em termos energticos, basta considerar a diferena de concentrao da substncia estudada entre compartimento celulares separados por membranas. Assim, o transporte ser passivo quando ocorrer a favor do gradiente de potencial qumico, ou seja, quando ocorrer a passagem desta substncia do meio mais concentrado para o meio onde h menor concentrao. Para substncias no carregadas eletricamente, o equilbrio ser atingido quando a concentrao interna celular for igual concentrao externa clula.

Transporte de ions No caso de substncias carregadas eletricamente deve-se levar em considerao o efeito da concentrao (potencial qumico) e o efeito das cargas envolvidas ( potencial eltrico). O 11

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potencial eltrico relevante porque o citoplasma carregado negativamente em relao ao meio extracelular e aos vacolos devido atividade das bombas eletrognicas e protenas que acumulam cargas negativas devido ao pH citoplamtico. O equilbrio fisiolgico celular depende da manuteno do potencial de membrana de cada tipo de clula (En). Qualquer desequilbrio de cargas entre o citossol e o meio externo prontamente corrigido pelo metabolismo celular. Assim sendo, no transporte das substncias carregadas eletricamente, o equilbrio s ser atingido quando a fora que promove o fluxo dessas substncias a favor do gradiente de potencial qumico for equivalente fora que favorece o fluxo dessas mesmas substncias a favor do gradiente eltrico, mantendo do potencial de membrana constante (Figura 8).

Mitocndria Citoplasma pH 7,5

Na+ Ca++

H+

Vacolo pH 5,5

Cloroplasto

H+

H+

H+

H+

Golgi pH 3,6

Ction nion

ons inorgnicos, acares e aminocidos

H+

Figura 8 . Representao esquemtica de alguns dos mecanismos utilizados para a manuteno do potencial eletroquimico transmembrana constante (baseado em Buchanan et al., 2000)

Para maior compreenso do transporte de substncias carregadas eletricamente, o pesquisador Nernst desenvolveu uma equao na qual ele combinava tanto o potencial qumico quanto o potencial eltrico para explicar o equilbrio inico celular, possibilitando o clculo dessa interao de foras. A equao de Nernst mostra a relao entre as concentraes internas e 12

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externas de uma espcie inica e as diferenas de potencial eltrico atravs da membrana quando o equilbrio atingido. Considerando-se esta equao, temos trs variveis mensurveis pela utilizao de metodologias prprias (potencial de membrana determinado com microeletrodos e concentrao dos ons nos lados da membrana atravs de mtodos qumicos analticos). A equao determina que:

En = - 2,3 x R x T x log Ci/Ce zxF

Onde:

En : potencial transmembrana (En = diferena de potencial eltrico entre o apoplasto e o interior da clula vegetal)

R : constante dos gases T : temperatura absoluta (oK) z : valncia do on F : constante de Faraday Ci / Ce : concentrao interna do on / concentrao externa do on Para o transporte de um on monovalente a 25oC, teremos:

En = 59 x log Ci/Ce

No equilbrio, uma diferena de concentrao de 10 vezes de um ion monovalente, atravs da membrana, equivale a uma diferena de potencial eltrico de -59 mV (a 25oC) A equao de Nernst tem aplicao prtica. Ela permite prever se um determinado ion esta sendo transportado de forma ativa ou passiva. Pela equao de Nernst, tendo-se o potencial de membrana (En) e a concentrao externa do on poderemos calcular a concentrao interna esperada deste on quando o sistema encontra-se em equilbrio (concentrao calculada - Ccal). Ao compararmos a concentrao interna observada de um on ( Cobs) com o valor calculado pela equao de Nernst (Ccal) poderemos saber se o transporte daquele on foi ativo ou passivo. A Cobs determinada atravs de mtodos qumicos de anlise das clulas estudadas(Tabela 1). Cobs = C cal transporte passivo 13

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Cobs Ccal transporte ativo (pode ser influxo ou efluxo )

Tabela 1: Uso da equao de Nernst para verificar se a absoro de ions em razes de ervilha (Pisum sativum) ativa ou passiva. A diferena de potencial eltrico entre a soluo e as clulas da raiz foi determinada com auxlio de microeletrodos e apresentou valores mdios de 110 mV (Salisbury & Ross, 1992).

on
+ +

Conc. externa (mM)

Conc. Calculada (mM) 74 74 5400 0,027 0,014 0,00047

Conc. observada (mM) 75 8 1,0 28 21 9,5

Tipo de Transporte Difuso (passivo) Efluxo (ativo) Efluxo (ativo) Influxo (ativo) Influxo (ativo) Influxo (ativo)

1,0 1,0 1,0 2,0

-

Na Ca

2+

NO3

H2PO4 SO4
-2

1,0 0,25

K+ : Ccal = Cobs segundo a equao de Nernst, o transporte passivo (difuso), uma vez que os valores calculados e observados so semelhantes. Isto indica que o transporte espontneo. A diferena do potencial eltrico tal que possibilita a absoro passiva de K+ mesmo contra o gradiente de potencial qumico (mas a favor de um potencial eltrico); Na+ : Cobs < Ccal transporte ativo pela equao, verifica-se que as clulas teriam condies de absorver passivamente 74 mM Na+, mas continham apenas 8 mM Na+, ou seja, uma concentrao esperada (calculada) muito maior do que a observada. O equilbrio seria obtido se a concentrao observada fosse prxima a 74 mM Na+ (o que no se verificou). Assim, estaria ocorrendo um gasto de energia para manter esse nutriente fora da clula (efluxo de Na+);

Ca2+ : Cobs < Ccal transporte ativo observa-se que as clulas teriam capacidade de armazenar at 5400 mM Ca2+(5,4 M) mas continham apenas 1,0 mM de Ca2+. O equilbrio, caso o transporte fosse passivo, seria obtido se a concentrao interna observada fosse de 5400 mM Ca2+. Como as clulas continham apenas 1,0 mM Ca2+, houve gasto de energia para promover o efluxo de Ca2+;

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NO3- : Cobs > Ccal transporte ativo em condies de equilbrio, as clulas teriam uma concentrao interna deste on de 0,027 mM, mas observou-se que tinha 28 mM NO3- , ou seja, uma concentrao muito maior do que o esperado (1000 vezes maior que a calculada). Assim, a clula estaria gastando energia para manter a concentrao interna maior do que se esperaria pelo clculo da equao de Nernst vlida para o fluxo passivo. Portanto, conclui-se que houve gasto de energia para manter o influxo de nitrato; H2PO4- e SO42- : Cobs > Ccal transporte ativo as concentraes internas calculadas, de ambos os ons considerados para as condies de equilbrio, deveriam ser muito menores do que as concentraes internas observadas, ou seja, estaria havendo um influxo destes ons com gasto de energia para manter essa situao distante do equilbrio.

Assim verificamos que, para substncias carregadas eletricamente (ons), o equilbrio funo no apenas das concentraes em ambos os lados da membrana (potencial qumico), mas tambm do efeito da carga da referida substncia e do gradiente de potencial eltrico entre compartimentos celulares.

4. Sentido do fluxo de solutos transmembrana Com relao direo do fluxo dos solutos transportados podemos ter os seguintes tipos de transporte (Figura 9): Uniporte: refere-se ao transporte de um nico elemento num determinado sentido atravs de um carreador ou canal, com ou sem gasto de energia. Ex.: H+-ATPase: um uniporte de H+ com gasto de ATP, tanto na plasmalema quanto no tonoplasto. Os canais inicos tambm so transportadores do tipo uniporte (Ex: canais de Ca2+, canais de K+); Cotransporte : refere-se ao transporte de duas substncias ao mesmo tempo utilizando o mesmo transpotador. Neste caso, tem-se duas possibilidades: 1) Antiporte : transporte de duas substncias em sentidos contrrios pelo carreador.
+ Ex.: antiporte H /ction: entra um prton na clula ao mesmo tempo em que

ocorre a sada de um ction (Ex: o efluxo de Na do tipo antiporte Na+/H+); 2) Simporte : transporte de duas substncias num mesmo sentido no carreador. Ex.: simporte H+/nion: entra um prton concomitantemente entrada de um nion. 15

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A absoro de on nitrato (NO3-) efetuada em simporte com dois prtons (H+);

S1

S2

S1

S2
Uniporter Simporter Cotransporte FIGURA 9 Modelo esquemtico dos mecanismos de transporte dos tipos uniporte e cotransporte (simporte e antiporte), utilizando o gradiente de potencial eletroqumico (baseado em Nelson e Cox, 2000). Antiporter

importante ressaltar que o transporte de solutos um processo dinmico e que os mecanismos mencionados acima ocorrem simultaneamente na membrana, havendo absoro simultnea de diversas substncias, e no isoladamente como apresentado. Fisiologicamente, podemos visualizar o cotransporte da seguinte forma: a manuteno do potencial transmembrana depende da manuteno de um equilbrio de cargas. A entrada de uma carga positiva (prton) deve ser acompanhada da sada de uma carga tambm positiva (ction) mantendo assim o potencial transmembrana (tipicamente um antiporte H+/ction). No caso de considerarmos um nion, este pode entrar juntamente com uma carga positiva (prton) sem comprometer o equilbrio de cargas na membrana (potencial transmembrana), ou seja, um simporte H+/nion (Figura 9). Pode ocorrer tambm um simporte H+/substncia no carregada eletricamente (ex.: sacarose). Neste caso, deve haver um bombeamento simultneo de prton para fora da clula (atravs das ATPases), conservando o potencial constante (Figura 8). Vale lembrar que essas 16

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consideraes so gerais; devido especificidade da absoro de ons, sendo que para cada tipo de molcula teremos um mecanismo especfico de transporte. Ao analisarmos o tipo de transporte (uniporte ou cotransporte) e o gasto energtico envolvido, no caso de substncias carregadas eletricamente, no podemos nos esquecer de avaliar cada substncia transportada, segundo a equao de Nernst, para podermos dizer se h ou no gasto energtico no transporte. O transporte ativo de ions e molculas orgnicas regulado em resposta a fatores ambientais e internos. A ttulo de exemplo, podemos comentar a regulao do transporte de K+ nas clulas guarda. Cabe, no entanto, ressaltar que este ction o mais abundante nas plantas, tendo um papel muito importante no alongamento celular, movimento foliar, tropismos, homeostase metablica, germinao, osmoregulao, estresse de Na+, alm do movimento estomtico. Nas clulas guarda, os canais de K+ so controlados pela luz direta e indiretamente, pelo cido abscsico (estresse hdrico) e por concentraes intrafoliares de CO2. Tal controle dos canais de K+ determina o grau de abertura dos estmatos em cada momento e tem um papel fundamental na otimizao do fluxo de CO2 para a fotossntese e do fluxo de gua na transpirao (Figura 10).

Canal de efluxo K+ de potssio

K+

Canal de influxo de potssio AACanal de nions

Ca++ H+

Ca++ K+ ABA

Ca++

H+

Canal de inico de clcio FIGURA 10 - Representao esquemtica dos mecanismos de induo do movimento estomtico (baseado em Buchanan et al., 2000).

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Fisiologia Vegetal/IB/DCF/UFRuralRJ

Transporte Transmembrana

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A disponibilidade de cada on na soluo do solo, frequentemente um fator regulador das suas taxas de absoro. Atualmente so conhecidos trs sistemas de absoro de ons, cada um constitudo por grupos de carreadores diferentes: sistema de carreadores constitutivo de baixa afinidade sistema de carreadores constitutivo de alta afinidade sistema de carreadores indutivo de alta afinidade. A maior parte dos transportadores de alta afinidade esto localizados nas razes. Os genes que codificam os transportadores de alta afinidade para a absoro de ons fosfato e sulfato, por exemplo, so desreprimidos (expressos) pela percepo de deficincia de fsforo e enxfre, respectivamente. Por o utro lado, a expresso dos genes que codificam o transporte do NO3- induzida pela presena do NO3-.

BIBLIOGRAFIA: BUCHANAN, B.B., GRUISSEM, W. & JONES, R.L. 2000. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, Courier Co, Inc, 1 a ed, Waldorf. CD-ROM NELSON, D. L. & COX, M. M., 2000. Lehninger. Principles of Biochemistry. Worth Publishers 3 a ed., New York, CD-ROM. HOPKINS, W.G. 1995. Introduction to Plant Physiology. John Wiley & Sons, Inc., New York, 464pp. MARSCHNER, H. 1995. Mineral Nutrition of Higher Plants. Academic Press, London, 2 ed. 889pp. MOHR, H. & SCHOPFER, P. 1995. Plant Physiology. Springer-Verlag, Berlin, 1 ed., 629pp. SALYSBURY, F. B. & ROSS, C.W. 1992 Plant Physiology. Wadsworth Publishing Co., California, 4 ed. 682pp.

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