Revista Brasileira de Biocincias

Brazilian Journal of Biosciences http://www.ufrgs.br/seerbio/ojs

ISSN 1980-4849 (on-line) / 1679-2343 (print)

ARTIGO Potencial mutagnico das guas do Rio Pirap (Apucarana, Paran, Brasil) em clulas meristemticas de raiz de Allium cepa L.
Ana Paula Peron1*, Edmilson Antnio Canesin1 e Cristiano Marcelo Viana Cardoso1
Submetido em: 29 de outubro de 2008 Recebido aps reviso em: 05 de maio de 2009 Aceito em: 27 de maio de 2009 Disponvel em: http://www.ufrgs.br/seerbio/ojs/index.php/rbb/article/view/1127 RESUMO: (Potencial mutagnico das guas do Rio Pirap (Apucarana, Paran, Brasil) em clulas meristemticas de raiz de Allium cepa L.). Muitos estudos tm sido realizados para avaliar os efeitos dos agentes txicos que provocam poluio dos rios. Para anlise destes efeitos aplicam-se testes de mutagenicidade. Neste estudo foi utilizado como sistema teste as clulas meristemticas de raiz de Allium cepa, para a investigao dos possveis efeitos mutagnicos de seis pontos de gua localizados no Rio Pirap (Apucarana, Paran, Brasil). Foram realizadas duas coletas, uma em dezembro de 2006 (final da primavera) e outra em abril de 2007 (incio do outono). Neste trabalho foram analisadas alteraes no ndice mittico e o aparecimento de aberraes cromossmicas. A anlise estatstica foi feita pelo teste do Qui-quadrado (=0,05). Os resultados obtidos demonstraram que somente as guas coletadas no perodo de outono reduziram, de forma estatisticamente significativa, o ndice de diviso celular das clulas das razes de cebola. No foram verificadas alteraes cromossmicas em nenhum dos pontos de gua avaliados. Palavras-chave: mutagnese, gua natural, sistema-teste vegetal. ABSTRACT: (Mutagenic potential of the Pirapo River (Apucarana, Paran, Brazil) water in meristematic root cells of Allium cepa L). Many studies have evaluated the effects of toxic agents that cause river pollution. To analyze these effects mutagenicity tests are used. In this study the meristematics cells of Allium cepa roots were used as a medium for the investigation of possible mutagenic effects of water that was collected in six locations of the Pirapo River, in Apucarana,Paran, Brazil. Collections were made during two time periods; one in December 2006 (late spring) and another in April 2007 (beginning fall). This research studied the modification on the mitotic index and the appearance of chromosomal aberrations. Statistical analysis was performed by chi-square (=0,05). Statistical analysis revealed that only the water collected in April 2007 showed a statistically significant reduction of the quantity of cell division in onion root cells. Chromosome modifications were not identified in any of the collection samples. Key words: mutagenesis, natural water, plant test systems.

Introduo A ao antropognica tem permitindo a liberao indiscriminada de agentes poluidores, como agrotxicos, efluentes industriais e domsticos, com alta carga de matria orgnica, alm de substncias eutrofizantes (Arajo et al. 2001). A contaminao dos vrios ambientes por meio dessa ao pode resultar em conseqncias, muitas vezes irreversveis, para os biomas que habitam estes ambientes. Estando todos os seres vivos em interao com o meio ambiente, os mesmos sofrem influncia desse meio e esta influncia pode ocasionar modificaes no material gentico desses organimos (Minissi & Lombi 1997, Pascalicchio 2002, Matsumoto et al. 2006). Estas modificaes no ndice de diviso celular e/ou na estrutura do DNA so prejudiciais s clulas, uma vez que podem prejudicar processos vitais, tais como a duplicao do DNA e a transcrio gnica. Elas tambm podem causar mutaes gnicas e aberraes cromossmicas, eventos estes que podem levar ao desenvolvimento de processos cancerosos ou morte celular. A deteco destes produtos poluentes e seus provveis efeitos nos organismos so importantes no estudo do impacto que eles podem trazer s populaes animal, vegetal e, principalmente, humana

(Costa & Menk 2000). O Municpio de Apucarana localiza-se na regio centro-norte do estado do Paran (microrregio Norte Central do estado, a 370 km da capital), a 233130 de latitude sul e 512420 de longitude oeste, a uma altitude mdia de 983 m acima do nvel do mar. O municpio possui uma rea de 563.000 km2, com populao de 107.819 habitantes (Prefeitura Municipal de Apucarana 2008). O clima caracterstico da regio o tropical semi-mido, com uma mdia anual de temperatura de 20,3C. Os recursos hdricos dessa cidade pertencem a tributrios de trs bacias hidrogrficas: a do rio Pirap, do rio Tibagi e do rio Iva, sendo as guas da bacia hidrogrfica do alto rio Pirap de grande importncia com relao captao de guas para abastecimento, desenvolvimento de atividades agropecurias e turismo ecolgico da grande maioria das cidades da regio. O rio Pirap enquadra-se no grande sistema do rio Paran, sendo importante afluente da margem sul (esquerda) do rio Paranapanema (Maack 2002). As guas dessa bacia hidrogrfica so de grande importncia com relao captao de guas para o abastecimento, desenvolvimento de atividades agropecurias e turismo ecolgico da grande maioria das cidades da regio. Nesse ambiente, devido ao desmatamento desenfreado, conseqncia da rpida

1. Faculdade de Apucarana (FAP), Departamento de Cincias Biolgicas. Rua Osvaldo de Oliveira, 600, Jardim Flamingos, CEP 86811500, Apucarana, Paran, Brasil. * Autor para contato. E-mail: anpapegenpes@hotmail.com

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colonizao e do contnuo crescimento urbano, tem-se registrado gradativas alteraes climticas, as quais so refletidas sobre o ciclo hidrolgico local (Peruo 2004). Ao mesmo tempo, inmeros fatores responsveis por degradaes ambientais encontram-se cada vez mais pronunciados na presente localidade. Os impactos causados por agentes txicos no ambiente e sade humana, muitas vezes, no podem ser observados e medidos diretamente e, portanto, devem ser analisados atravs de metodologias de deteco eficientes (Buss 2002, Silva & Fonseca 2003). Os bioensaios com plantas tm sido considerados bastantes sensveis e simples e tm sido validados por instituies internacionais, como a United Nations Environmental Program (UNEP), World Health Organization (WHO) e US Environmental Protection Agency (USEPA), pela sua eficincia no monitoramento dos efeitos genotxicos e mutagnicos induzidos por poluentes ambientais (Grant 1999). Dentre as plantas superiores, Allium cepa L. (cebola) tem sido indicada como um importante organismo-teste de mutagenicidade (Morais et al. 2002, Fernandes et al. 2007, Leme & Marin-Morales 2008). Este sistema tem sido amplamente utilizado na avaliao do potencial citotxico de efluentes, e considerado eficiente na deteco de alteraes no ndice de diviso celular e presena de aberraes cromossmicas em resposta a estes agentes. A eficincia do sistema Allium cepa se deve as suas caractersticas cinticas de proliferao, ao rpido crescimento de suas razes, ao grande nmero de clulas em diviso, a sua alta tolerncia a diferentes condies de cultivo, a sua disponibilidade durante o ano todo, pelo seu fcil manuseio e por possuir cromossomos em nmero reduzido (2n=16) (Fiskej 1994, Mitteregger-Jnior et al. 2006, Carit & Marin-Morales 2008). Portanto, sabendo-se da grande importncia dos recursos hdricos para a manuteno da qualidade de vida biolgica, torna-se indispensvel o monitoramento desses recursos, avaliando-se os impactos gerados nesses ambientes. Diante disso, este estudo objetivou avaliar a ao mutagnica das guas superficiais do Rio Pirap, localizado no Municpio de Apucarana, Paran, atravs da utilizao das clulas meristemticas de raiz de Allium cepa. Materiais e Mtodos Local de Coleta As amostras de gua foram coletadas em afluentes do Rio Pirap em dezembro de 2006 (fim da primavera) e em abril de 2007 (incio do outono), em seis pontos pr-estabelecidos, descritos a seguir: P1, crrego do papagaio; P2, crrego tangar; P3, crrego indai; P4, crrego jurema; P5, gua do ipigu e P6, crrego jurema (Fig. 1). Os pontos de coleta P2, P3 e P4 localizam-se em regies tipicamente agrcolas, j os pontos P1, P5 e P6, esto localizados em regies urbanas, com guas provenientes de pequenos crregos que recebem efluentes

de indstrias dos mais variados tipos. A distncia mdia entre cada ponto estudado de 4 km. A coleta realizada em dezembro de 2006 foi feita em dia ensolarado, com temperatura em torno de 30C, sem a presena de chuva nos dias que a antecederam. J a coleta realizada em abril de 2007, foi feita em dia ensolarado, com temperatura em torno dos 25C e com a presena de chuva em alguns dias anteriores a coleta (aguardou-se 48h sem a presena de chuva para se realizar essa coleta). As amostras de gua foram coletadas superficialmente nos pontos em estudo nos dois perodos avaliados. Avaliao da Ao Mutagnica Para a realizao deste estudo foram adquiridas cebolas de uma fonte comercial e colocadas para enraizar em frascos com gua destilada, temperatura ambiente ( 25C), aerada, at obteno de razes com cerca de 1 a 1,5 cm de comprimento. Para a coleta de gua em cada ponto estabelecido no Rio Pirap foi utilizada uma garrafa plstica transparente com tampa previamente desinfectada. Uma vez colhida a amostra, a mesma era acomodada no gelo para transporte e levada imediatamente para o laboratrio, e em seguida dividida em seis frascos menores (em cada frasco menor foi colocado 40 mL da gua de coleta). Antes de iniciar o experimento, foram retiradas algumas razes para servirem de controle do prprio bulbo (0h) e em seguida os mesmos foram colocados nos frascos menores em

Figura 1. Localizao dos pontos avaliados no Rio Pirap, Apucarana, Paran. 1, crrego do papagaio; 2, crrego tangar; 3, crrego indai; 4, crrego jurema; 5, gua do apigu; 6, crrego jurema. Fonte: IPARDES (1995).

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Avaliao mutagnica das guas do Rio Pirap

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contato com a gua em estudo. Para anlise da gua de cada ponto foram utilizadas cinco cebolas e o tempo em que cada bulbo ficou em contato com a gua de coleta foi chamado de tratamento. Aps 24h do tratamento, foram retiradas algumas razes de cada cebola e fixadas. As razes restantes foram lavadas e os bulbos novamente colocados em gua destilada, a temperatura ambiente ( 25C), aerada para recuperar (tempo esse chamado de recuperao) por mais 24h, sendo as razes restantes retiradas e fixadas. As razes foram fixadas em Carnoy 3:1 (etanol: cido actico). O pH das amostras de gua coletadas em dezembro de 2006 foi 6,8, para P1, P2 e P6, enquanto que foi igual a 6,5, para P3, P4 e P5. Para as amostras coletadas em abril de 2007, o pH foi 7,5 para todos os pontos. Anlise dos dados A tcnica aplicada para este experimento foi a de Kihlman (1971) com modificaes, onde foi usada a reao de Feulgen e a colorao foi feita com o reativo de Shiff. As lminas foram confeccionadas pelo mtodo de esmagamento suave e analisadas em teste cego ao microscpio ptico (EK 2000) em objetiva de 40X. Foram avaliadas 1.000 clulas por bulbo, totalizando 5.000 clulas para cada grupo controle, tratamento e recuperao. Foram avaliadas alteraes no ndice mittico e anomalias no ciclo mittico: mitoses C (problemas no fuso), pontes anafsicas e telofsicas (cromossomos dicntricos ou intertrocas, cromossomos ou fragmentos livres). O clculo do ndice mittico em porcentagem foi feito pelo nmero de clulas em diviso dividido pela soma do nmero das clulas em interfase e das clulas em diviso. Foi utilizado o teste estatstico Qui-quadrado para a anlise dos dados (=0,05). Resultados e Discusso Os resultados mostraram que o grupo tratamento teve uma reduo drstica, estatisticamente significativa, do ndice de diviso celular em relao aos seus respectivos controles (Tab. 1). Essa diminuio do ndice mittico se manteve mesmo aps o tempo de recuperao em todos os pontos analisados (=0,05). Na tabela 2, os resultados obtidos tanto no tratamento como na recuperao no foram significativos em relao aos valores dos seus

respectivos controles (=0,05). Em nenhum dos pontos analisados foi verificado a presena de alteraes cromossmicas. As principais causas da poluio do alto Rio Pirap (local onde as coletas foram realizadas) so o desenvolvimento agroindustrial e o crescimento populacional. Em Apucarana este rio recebe efluentes industriais de vrias origens, principalmente de lavanderias dos mais variados tipos, de pequeno a grande porte (jeans, malharias em geral e bons), abatedouros de animais, fundies e indstrias de rao animal. fato que o desenvolvimento tecnolgico tende a provocar incremento no consumo de gua, aumento significativo no lanamento de efluentes, e conseqente aumento da carga de matria orgnica e inorgnica. De acordo com Cassaro (1999) mais de 40% de toda esta regio de reas agriculturveis, o que permite constatar que a vulnerabilidade ambiental est tambm concentrada nos processos erosivos e escoamentos superficiais, devido ao uso indevido de reas riprias. O ms de dezembro de 2006 na cidade de Apucarana caracterizou-se como um perodo de escassez de chuvas, com altas temperaturas e de clima seco. Portanto os resultados encontrados caracterizam-se por eutrofizao artificial dos pontos de gua avaliados, decorrida da industrializao e do uso de fertilizantes qumicos utilizados na agricultura. Em funo do pH cido verificados nesses pontos provvel que tenha ocorrido grande concentrao de cianobactrias txicas o que segundo Lopes et al. (2007) gera impacto negativo na qualidade da gua. Segundo esta mesma autora a eutrofizao de corpos dgua aumenta em muito a concentrao de CO2 e tambm est associada presena de nutrientes, especialmente fsforo e nitrognio, em concentraes acima dos nveis encontrados nas condies naturais. J o ms de abril de 2007, ms em que foi realizada a segunda coleta, caracterizou-se como um perodo de grande volume de chuvas. Isto pode explicar os resultados obtidos na tabela 2, ou seja, com o grande volume de chuvas ocorreu uma diluio dos nutrientes e diminuio da concentrao de CO2 nos pontos avaliados. Os resultados obtidos nesse trabalho no indicaram uma ao mutagnica. Apesar da diminuio significativa do ndice de diviso celular obtidos nos grupos

Tabela 1. Indices Mitticos (IM) mdios totais obtidos para o controle, tratamento e recuperao em clulas meristemticas de raiz de Allium cepa, de seis pontos de coleta de gua no Rio Pirap. Coleta realizada em dezembro (final da primavera) de 2006. Grupos PONTO 01 PONTO 02 PONTO 03 PONTO 04 PONTO 05 PONTO 06 Co (0h) 9,1 9,3 9,3 9,0 9,7 9,5 Tempo de amostragem Tr (24h) 2,5* 2,7* 2,2* 2,0* 1,9* 2,6* Re (24h) 2,4* 2,0* 2,4* 2,0* 2,5* 2,0*

IM de 5.000 clulas/grupo. Abrevisaturas: Co (0h), Controle; Tr (24h), Tratamento com a gua de coleta; Rec (24h), Recuperao. (=0,05). *Valor estatisticamente significativo em relao ao controle.

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Tabela 2. Indices Mitticos (IM) mdios totais obtidos para o controle, tratamento e recuperao em clulas meristemticas de raiz de Allium cepa de seis pontos de coleta de gua no Rio Pirap. Coleta realizada em abril (incio do outono) de 2007. (=0,05). Grupos PONTO 01 PONTO 02 PONTO 03 PONTO 04 PONTO 05 PONTO 06 Co (0h) 9,1 9,3 9,3 9,0 9,7 9,5 Tempo de amostragem Tr (24h) 7,5 7,7 7,2 7,0 7,9 7,1 Re (24h) 9,4 9,0 9,4 9,5 9,0 9,0

IM de 5.000 clulas/grupo. Abreviaturas: Co (0h), Controle; Tr (24h), Tratamento com a gua de coleta; Rec (24h), Recuperao. P=0,05. *Valor estatisticamente significativo em relao ao controle.

tratamentos da coleta realizada em dezembro de 2006, no foram encontradas nenhuma classe de alteraes cromossmicas. Porm os resultados da tabela 1 podem representar uma toxicidade aguda e ser um dos primeiros nveis de impacto, em nvel celular, nesse ecossistema aqutico estudado. Segundo Houk (1992) e Silva et al. (2004), descargas industriais contm muitas substncias que podem ter efeito agudo, e que so capazes de reduzir, em longo prazo, a sobrevida de organismos via danos em clulas somticas e germinativas. Tais danos celulares podem estar relacionados a desordens genticas hereditrias e alteraes no ndice de diviso celular. Estes danos celulares podem conseqentemente levar ao incio do desenvolvimento do cncer. Inmeras pesquisas tm detectado freqncia anormalmente alta de neoplasias em peixes em regies industrializadas e agricultveis (Wrege 2000). Alguns estudos em plantas e animais selvagens de ambientes impactados por despejos perigosos ou efluentes industriais proporcionam evidncia adicional dos efeitos citotxicos proporcionado por esses locais. Aumento de mutaes cromossmicas e alteraes no ndice de diviso celulares estatisticamente significativas foram verificados em plantas coletadas ao longo de rios contaminados, quando comparadas a plantas crescendo em regies no contaminadas (Moraes & Quinzani-Jordo 2002). Esses dados, aliados aos resultados obtidos neste trabalho, despertam cada vez mais preocupao do ponto de vista ambiental em relao ao organismo humano, pois resultados provenientes de bioensaios genticos so relevantes sade humana em funo do alvo toxicolgico ser a clula. Em geral, perturbaes no ndice de diviso celular e do material gentico podem ser deletrias para o organismo e podem leva a conseqncias severas e irreversveis sade. Portanto, h necessidade de estudos adicionais e de maior investigao das matas ciliares, de monitoramento dos efluentes lanados por instalaes, legais ou irregulares, prximos aos pontos analisados no rio Pirap. Referncias
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