ESPECTROSCOPIA VISVEL E ULTRAVIOLETA

Princpios bsicos

A espectrofotometria visvel e ultravioleta um dos mtodos analticos mais usados nas determinaes analticas em diversas reas. aplicada para determinaes de compostos orgnicos e inorgnicos, como, por exemplo, na identificao do princpio ativo de frmacos. A espectroscopia de absoro molecular valiosa para a identificao dos grupos funcionais na molcula. Mais importante, entretanto, so as aplicaes da espectroscopia de absoro visvel/ ultravioleta para a determinao quantitativa de compostos contendo grupos absorventes. A regio ultravioleta do espectro geralmente considerada na faixa de 200 a 400 nm, e a regio do visvel entre 400 a 800 nm. As energias correspondentes a essas regies so ao redor de 150 a 72 k.cal.mol-1 na regio ultravioleta, e 72 a 36 k.cal.mol-1 para a regio visvel. Energias dessa magnitude correspondem, muitas vezes, diferena entre estados eletrnicos de muitas molculas. A absoro da regio visvel e ultravioleta depende, em primeiro lugar, do nmero e do arranjo dos eltrons nas molculas ou ons absorventes. Como conseqncia, o pico de absoro pode ser correlacionado com o tipo de ligao que existe na espcie que est sendo estudada. De um ponto de vista prtico, o aspecto mais importante do clculo quntico a determinao de quanta luz absorvida pela amostra. Isto descrito pela lei de BeerLambert, que d a relao entre a intensidade da luz incidindo na soluo (I0), e a intensidade da luz saindo da soluo (I).

Log (I0/ I) =A=cl A= absorbncia = absorvidade molecular ou coeficiente de extino c= concentrao do material absorvedor l= espessura da amostra da amostra atravs da qual a luz passa.

A absoro pelos compostos orgnicos e inorgnicos relacionada com uma deficincia de eltrons na molcula. Nos inorgnicos, o comprimento de onda de absoro das

transies d-d depende do metal envolvido, do nmero de grupos coordenados, da basicidade, dos tomos doadores e da geometria dos grupos coordenados. Nos compostos orgnicos, os que possuem dupla ligao absorvem fortemente no ultravioleta remoto. Os compostos que possuem ligaes simples e duplas alternadamente, chamadas de ligaes conjugadas, produzem absoro em comprimentos de ondas maiores. Quanto mais extenso for o sistema conjugado, mais longos sero os comprimentos de onda absorvidos, podendo chegar regio do visvel.

Desvios da Lei de Lambert-Beer

Desvios qumicos Deslocamento do equilbrio : quando um analito dissocia, associa ou reage com um solvente para formar um produto que tem um espectro de absoro diferente do analito. Ex: indicador cido-base.

Dissociao de complexos: excesso ou insuficincia de agente complexante.

Desvios instrumentais Em solues muito concentradas, as molculas de soluto influenciam umas s outras devido a suas proximidades, pois quando ficam muito perto umas das outras, a absorvidade pode mudar um pouco.

Espectrofotmetros

Espectrofotmetros so instrumentos capazes de registrar dados de absorvncia ou transmitncia em funo do comprimento de onda. Este registro chamado de espectro de absoro ou de espectro de transmisso, segundo o dado registrado for de absorvncia ou transmitncia, respectivamente. O espectro de absoro caracterstico para cada espcie qumica, sendo possvel a identificao de uma espcie qumica por seu espectro de absoro. A caracterstica mais importante dos espectrofotmetros a seleo de radiaes monocromticas, o que possibilita inmeras determinaes quantitativas regidas pela Lei de Beer. Quando a regio espectral usada a ultravioleta/visvel, so necessrios componentes

ticos de quartzo e detectores altamente sensveis capazes de detectar radiaes nessa extensa faixa espectral em que atua o instrumento. Os espectrofotmetros, em geral, contm cinco componentes principais: fontes de radiao, monocromador, recipientes para conter as solues, detectores e indicadores de sinal.

Fontes de radiao

Monocromador

Compartimento Amostra/padro

Dispositivo de processamentos de dados

Sistema detector

Esquema dos componentes principais de um espectrofotmetro

Fontes de radiao

As fontes de radiao mais comuns baseiam-se na incandescncia e so muito prticas no infravermelho e no visvel, mas devem atuar em temperaturas elevadas na faixa do ultravioleta. As fontes de radiao so constitudas por filamentos de materiais que so excitados por descargas eltricas com elevada voltagem ou aquecimento eltrico. Para que uma fonte de radiao seja considerada de boa qualidade deve: - gerar radiao continua, ou seja, emitir todos os comprimentos de onda, dentro da regio espectral utilizada; - ter intensidade de potncia radiante suficiente para permitir a sua deteco pelo sistema detector da mquina; -ser estvel, isto , a potncia radiante deve ser constante. Alm disso, deve ter vida longa e preo baixo.

Tipos de fontes de radiao

Lmpada de filamento de tungstnio : incandescente, produz emisso continua na faixa e 320 a 2500nm. O invlucro de vidro absorve toda radiao abaixo de 320nm, limitando o uso da lmpada para o visvel e infravermelho.

Lmpada de quartzo-iodo : incandescente, o invlucro de quartzo emite radiao de 200 a 3000nm. Sua vantagem que pode atuar na regio do ultravioleta. Lmpada de descarga de hidrognio ou de deutrio: a mais usada para emisso de radiao ultravioleta. Consiste em um par de eletrodos fechados em um tubo de quartzo ou vidro, com janela de quartzo, preenchido com gs hidrognio ou deutrio. Aplicando alta voltagem, produz-se uma descarga de eltrons que excitam outros eltrons gasosos a altos nveis energticos. Quando os eltrons voltam a seus estados fundamentais, emitem radiao contnua de 180 a 370nm. Lmpada de catodo oco : tipo especial de fonte de linha. preenchida com um gs nobre, a fim de manter uma descarga de arco. O ctodo tem a forma de um cilindro oco, fechado em uma extremidade, revestido com o metal cujas linhas espectrais se desejam obter. O nodo um fio reto ao lado do ctodo. A energia do arco causa ejeo dos tomos metlicos do revestimento do ctodo os quais, excitados, emitem os seus espectros caractersticos. Laser: pelo processo de emisso estimulada, os lasers produzem uma enxurrada de feixes muito estreitos e intensos de radiao. Todas as ondas procedentes ao material emissor esto em fase entre si, e, por isso, praticamente no apresenta disperso quando se propaga. Isso permite uma concentrao de energia num ponto muito pequeno, mesmo que esteja numa distncia considervel.

Monocromadores So dispositivos essenciais dos espectrofotmetros e tem como funo a seleo do comprimento de onda e que se tem interesse para a anlise. constitudo de uma fenda de entrada de um elemento de disperso de radiao e de uma fenda de sada. O elemento de disperso pode ser um prisma ou uma rede de difrao. 1) Monocromador prismtico: a radiao policromtica procedente da fonte de radiao passa pela fenda de entrada e incide sobre a face de um prisma, sofrendo desvio. Os prismas de quartzo so indicados para trabalhar na regio ultravioleta, embora tenham mais disperso que o vidro. Na regio do visvel so empregados primas de vidro. Os prismas de quartzo apresentam desvantagem de serem altamente refringentes e oticamente ativos.

2) Monocromador reticular: o principal elemento de disperso dos monocromadores reticulares a rede de difrao, que consiste em uma placa transparente com inmeras ranhuras paralelas e de mesma distncia. As redes de difrao dispersam a radiao

policromtica baseadas no fenmeno da interferncia, e a disperso resultante desta rede linear. As redes de difrao possuem resoluo melhor que os prismas e podem ser utilizadas em todas as regies espectrais.

Recipientes

So usados como recipientes cubas ou cubetas retangulares de vidro ou quartzo. As cubetas de vidro so usadas quando se trabalha na regio do visvel. Para a regio do ultravioleta, devem-se usar as cubetas de quartzo, que so transparentes radiao ultravioleta, pois o vidro absorve a mesma. Uma cubeta ideal deve ser de 1 cm, para simplificar os clculos da expresso da Lei de Beer. As cubetas tambm podem ter dimenses diferentes, e esse dado deve ser considerado na hora do clculo.
1 cm

Cubeta convencional

Para aplicaes industriais, como, por exemplo, no controle de qualidade de lotes de produo, utiliza-se um sistema automatizado em que as amostras circulam em srie em cubetas adequadas. Esse sistema chamado de anlise por injeo de fluxo ou FIA (do ingls Flow Injection Analysis)

Tipos de espectrofotmetros para regio visvel e ultravioleta

Os espectrofotmetros variam em sua complexidade e desempenho. Existem modelos simples e mais sofisticados, equipados com softwares especiais de acordo com a necessidade industrial.

Os componentes dos espectrofotmetros esto relacionados com a faixa do comprimento de onda, a exatido e a preciso requeridos para as anlises. Podem ser de dois tipos: - espectrofotmetros mono-feixe; - espectrofotmetros duplo-feixe.

1)

Espectrofotmetros mono-feixe: ajusta-se a transmitncia em 0%,

fechando o obturador entre a fonte de radiao e o detector. Aps ocorre o ajuste de transmitncia em 100%. Coloca-se o solvente (branco) no caminho tico, abre-se o obturador e varia-se a intensidade da radiao at que o sinal seja de 100% de transmitncia. Ento substitui- se o recipiente com solvente pelo recipiente com a amostra e o percentual de transmitncia da mesma lido no indicador de sinal.

2)

Espectrofotmetros de duplo-feixe: dois feixes de radiao so

formados no espao. Um feixe passa pela soluo de referncia (branco) at o transdutor e o segundo feixe, ao mesmo tempo, passa atravs da amostra at o segundo transdutor. Nos espectrofotmetros deste tipo o ajuste do 0% feito com a interrupo de radiao nos dois feixes e o 100% de transmitncia ajustado com o solvente (branco) colocado no caminho tico dos dois feixes.

Procedimentos analticos em espectrofotometria visvel e ultravioleta

Anlise qualitativa: pela analise da absorvncia possvel determinar qual espcie qumica esta presente na amostra. Tambm possvel detectar contaminaes ou processos de decomposio de matrias-primas pela comparao dos espectros de absoro da matria e do padro da mesma.

Anlise quantitativa : a condio essencial para qualquer determinao por espectrofotometria no visvel e ultravioleta a observao da lei de Beer. Outras condies como pH, tcnicas de extrao por solventes, ajuste do estado de oxidao, remoo prvia dos interferentes, controle da fora inica do meio, e as variaes das temperaturas tambm so observadas.

Espectro de protenas - possuem espectro bem caracterstico; -so influenciadas pelo meio local: dependem de fenmenos eltricos; -mostra a quantidade de hlice e folha ; -caso a protena seja desnaturada, a espectroscopia ser diferente.

Espectro de cidos nuclicos -tem a absorbncia menor que a soma das absorbncias dos nucleotdeos individuais (hipocromicidade) e ocorre devido ao empilhamento ou alinhamento dos planos paralelos das bases; -se ocorrer um acrscimo na absoro hipercromicidade -serve para determinar se esto estruturados.

Fluorescncia e fosforescncia Fluorescncia a emisso de luz associada com eltrons que se movem de um estado excitado para o estado fundamental. Fosforescncia a capacidade que uma espcie qumica tem de emitir luz. As duas so freqentemente usadas para se estudar processos biolgicos e so muito mais teis que a absorbncia, por serem consideravelmente mais sensveis, podendo, ento, detectar concentraes bastante baixas.

Automao nos mtodos espectrofotomtricos

Os principais motivos para o desenvolvimento de um sistema que viabilizasse vrias determinaes simultneas com o mnimo de trabalho humano foram: - preencher as necessidades dos laboratrios de analises clnicas, devido crescente nmero de analises; - o aumento do nmero de espcies qumicas a serem determinadas no sangue e na urina como anlise de rotina. O uso desses instrumentos em laboratrios de anlises clnicas foi logo estendido a laboratrios de controle de qualidade de processos industriais num variado tipo de amostras como ar, gua solo, produtos agrcolas e farmacuticos. As vantagens dos mtodos automatizados so: - maior velocidade no processamento das anlises;

- maior confiabilidade nos resultados; - minimizao de contaminaes; - diminuio na gerao de resduos; - menor consumo de amostras e reagentes.

BIBLIOGRAFIA

Silverstein, R. M., Bassler, G. C., Morrill, T. C., Identificao espectromtrica de compostos orgnicos 5 ed., LTC. Vinad, Maria Elisabeth do Canto; Vinad, Elsa Regina do Canto, Mtodos espectroscpicos de analise quantitativa, editora UFSM.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA CENTRO DE CINCIAS NATURAIS E EXATAS

ESPECTROSCOPIA VISVEL E ULTRAVIOLETA

Alice Machado Lemos Aline Paiva Noble Hecson Jesser Segat Isabel Daronco Alexandre Lauren Pappis Letcia Teixeira Nunes Louise Vignoles Neves

Santa Maria, RS, Brasil 2009