Manual de coleta e identicao de cupins

Reginaldo Constantino Universidade de Braslia, Departamento de Zoologia, Laboratrio de Termitologia 2012 R. Constantino

1. Introduo
Este manual foi preparado para uso no Laboratrio de Termitologia da UnB e descreve os procedimentos rotineiros de coleta, organizao de colees e identicao de cupins. Esta verso foi preparada especicamente para pessoas que pretendem enviar amostras para identicao. A coleta de amostras de cupins para identicao feita com muitos objetivos diferentes e por pessoas com formaes diversas, incluindo projetos de Ecologia, controle de pragas urbanas ou agrcolas, estudos de Biologia, Comportamento, Gentica, etc. Independente do interesse, os procedimentos de coleta so os mesmos. A falta de ateno ao protocolo de coleta resulta em desperdcio de tempo e recursos e frequentemente inviabiliza a identicao. Antes de iniciar um projeto envolvendo a coleta de cupins para identicao preciso incluir no planejamento e no oramento os materiais e o trabalho necessrios. So apresentados aqui os protocolos de coleta e preservao de amostras de cupins para estudo taxonmico, que devem ser seguidos por quem pretende enviar amostras ao Laboratrio de Termitologia da UnB. Os direitos autorais relativos a este documento esto protegidos pela legislao vigente. proibida a reproduo total ou parcial do texto ou guras, mesmo citando a fonte. A verso atualizada estar disponvel apenas no site http://termitologia.unb.br.

nagem, sachos etc. (Fig. 1). Essas ferramentas podem ser encontradas em lojas de ferragens e material construo.

2.2. Bandejas plsticas

Bandejas plsticas brancas (Fig. 1A) so muito teis para triar solo e pedaos de ninhos. Elas podem ser encontradas em supermercados e lojas de material para cozinha.

2.3. Pinas
Dois tipos de pinas so usados normalmente para coleta de cupins: pinas entomolgicas leves e pinas de relojoeiro (Fig. 1D). As pinas leves so melhores para coletar e manipular os espcimes, mas so mais difceis de encontrar. Podem ser adquiridas em lojas especializadas em material entomolgico. As pinas de relojoeiro de ponta na podem ser encontradas em relojoarias e em lojas de material de laboratrio.

2.4. lcool
O lcool comercial vendido normalmente no Brasil tem concentrao 92,8 INPM (porcentagem de peso), o que corresponde a 96 GL (porcentagem de volume). Para xao de cupins necessrio diluir esse lcool para 80% (por volume). Para a diluio melhor usar um alcometro Gay-Lussac, que um densmetro graduado com a escala de concentrao do lcool (Fig. 4B). Na ausncia de um alcometro, a diluio deve ser feita por volume, acrescentando 200 mL de gua para cada litro de lcool 96 GL. No entanto, a concentrao do lcool comercial pode apresentar variao e por isso a diluio com auxlio de alcometro mais segura. lcool 80% para uso rotineiro e enchimento de frascos deve ser mantido em pissetas (Fig. 4C).

2. Equipamentos e materiais
Os equipamentos e materiais listados abaixo so em geral necessrios para a coleta, triagem e identicao de cupins. Alguns so opcionais ou podem ser substitudos por outros, dependendo da situao.

2.1. Ferramentas para abrir ninhos e madeira

Cupins podem ser encontrados em madeira, em ninhos ou no solo. Raramente eles so encontrados forrageando na superfcie. Portanto necessrio usar ferramentas para abrir a madeira e cavar ninhos e solo, como picaretas, machados, martelos de pedreiro ou picolas, ps de jardi1

2.5. Frascos
Vrios tipos de frascos podem ser usados para preservar amostras cupins. As caractersticas importantes so as seguintes: a) volume entre 510 ml; b) tampa com boa vedao; c) fundo reto; d) boca larga o suciente

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Figura 1: Ferramentas de coleta: A, bandeja plstica e p de jardinagem; B, sacho; C, picola e martelo de pedreiro; D, caneta nanquim descartvel, pina entomolgica leve e pina de ponta na (relojoeiro).

para permitir a introduo de pina; e) vidro transparente. Exemplos de frascos adequados so apresentados na Fig. 2. Amostras enviadas para o Laboratrio de Termitologia da UnB devem ser obrigatoriamente de um desses tipos. Esses frascos podem ser adquiridos em lojas de embalagens ou em lojas de material para laboratrio. Frascos maiores podem ser necessrios em casos especiais, mas no devem ser usados rotineiramente porque ocupam um espao muito grande na coleo. Alguns tipos de frasco podem ser usados para coleta, mas no so adequados para coleo: frascos mbar, criotubos, frascos de amostra de sangue etc. Caso eles sejam usados, devem ser posteriormente substitudos por um frascos de vidro transparente conforme a especicao acima. Vrias tipos de frascos so totalmente inadequados e no devem ser usados nunca: frascos tipo Eppendorf; vidros tipo penicilina; frascos plsticos ou de acrlico com tampa de presso, etc. Esses frascos no tem vedao adequada e seu uso implica em risco de perda de amostras no transporte e armazenamento. Para armazenamento de longo prazo, os frascos pequenos devem ser mantidos em potes maiores cheios de lcool (Fig. 3B), o que previne a secagem das amostras devido evaporao. Potes plsticos do tipo usado para

mel, com capacidade em torno de 700 mL so adequados e podem ser encontrados em lojas de embalagens ou em lojas de material para apicultura.

2.6. Etiquetas e anotaes

Todas as anotaes e etiquetas devem se feitas com tinta resistente ao lcool. As canetas nanquim descartveis (Fig. 1D) so a melhor opo porque sua tinta permanente e bem legvel. Caneta esferogrca comum no deve ser usada porque a tinta no resiste umidade e ao lcool. O uso de lpis no recomendado porque as anotaes cam pouco legveis, especialmente nas etiquetas, e o lpis pode ser apagado. As anotaes de coleta devem ser mantidas em cadernos de campo individuais. As etiquetas podem ser feitas manualmente, com caneta nanquim, ou impressas a laser. O mtodo tradicional usar papel vegetal e caneta nanquim. Ver mais informaes sobre etiquetas nas instrues de coleta abaixo.

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Figura 2: Frascos: A, frasco tubular de 10 ml com tampa de rosca e batoque; B, frasco tubular reto (shell vial ) de 10 ml com tampa de presso; C, frasco largo de 10 ml com tampa de rosca e batoque.

2.7. Estereomicroscpio
Um estereomicroscpio (lupa estereoscpica) essencial para a triagem e estudo dos cupins. A capacidade de aumento deve ser de no mnimo 40. O iluminador deve ser de boa qualidade, preferencialmente de bra tica. Iluminao transmitida (base opcional com iluminao por baixo) muito til para o exame da pilosidade, mas pode ser substituda por um pequeno espelho embaixo da placa de Petri. Um retculo micromtrico necessrio para medies. O retculo um acessrio opcional que consiste de um crculo de vidro com uma escala graduada que montado na ocular da lupa.

4. Tcnicas de Coleta
Os cupins so encontrados em ninhos, no solo ou em madeira. Os ninhos podem ser epgeos (montculos ou murundus), arborcolas ou subterrneos. Os ninhos devem ser abertos com cuidado e os cupins coletados com pina leve. Pedaos de ninhos podem ser colocados em bandejas plsticas para facilitar a triagem

4.1. Contedo de cada amostra

Uma boa amostra contm 10 ou mais indivduos de cada casta presente: soldados, operrios e reprodutores. Para o caso de envio de duplicatas para identicao, o nmero de espcimes coletados deve ser maior. Cada amostra representativa de uma colnia. Indivduos de colnias diferentes no devem ser misturados num mesmo frasco. importante coletar soldados porque a casta mais importante para a taxonomia. A regra geral procurar soldados (sem esquecer das outras castas), levando em considerao que a proporo de soldados pode ser muito baixa em algumas espcies. Alguns cupins possuem mais de um tipo de soldado, sendo importante coletar todos os tipos. Por exemplo, a identicao das espcies de Rhinotermes e Dolichorhinotermes

3. Licena de Coleta
Para coletar insetos para ns cientcos no Brasil necessrio obter licena de coleta atravs do Sisbio/ICMBio (http://www.icmbio.gov.br/sisbio). A obteno da licena de inteira responsabilidade do coletor. Ao solicitar a licena necessrio informar o destino nal do material. Caso haja interesse em depositar amostras na coleo da UnB necessrio entrar em contato e obter concordncia do curador antes de solicitar a licena de coleta.

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Figura 3: Coleo de cupins. A, amostra limpa e etiquetada; B, pote plstico com amostras; C, etiqueta com dados de coleta; D, etiquetas de campo.

depende do exame dos soldados maiores, que ocorrem em proporo bem mais baixa que os soldados menores. Todas as espcies apresentam variao morfolgica e muitas vezes preciso dissecar alguns exemplares para identicao. Por isso as amostras devem conter um bom nmero de indivduos.

4.2. Cupins sem soldados

Os cupins da subfamlia Apicotermitinae que ocorrem na regio Neotropical no possuem soldados. Eles so bastante comuns no solo e so coletados com frequncia. No existe nenhuma maneira segura para reconhecer os operrios de cupins sem soldados no campo. O problema nesse caso gastar tempo procurando soldados de espcies que no possuem essa casta ou ento coletar apenas operrios de espcies que possuem soldados e assumir que so Apicotermitinae. A maioria dos Apicotermitinae vive no solo, os operrios so sempre monomrcos (todos iguais) e o abdome geralmente cinza fosco. A tbia anterior geralmente dilatada, o que pode ser observado com lupas de bolso. Algumas poucas espcies constroem ninhos epgeos ou arborcolas; operrios de algumas espcies de Ruptitermes apresentam colorao escura.

longo prazo. Cupins preservados em lcool 95% cam secos e perdem pelos, pernas e antenas, o que inviabiliza a identicao com base na morfologia. Os cupins devem ser xados vivos diretamente no lcool. O lcool deve ser trocado aproximadamente um dia aps a coleta. Durante essa troca, a amostra deve sofrer limpeza, eliminando solo, fragmentos de ninhos e madeira. Essa sujeira prejudica a preservao dos espcimes.

4.4. Etiquetagem
No momento da coleta cada amostra recebe uma etiqueta numerada de campo. Essas etiquetas devem ter uma numerao nica, sem repetio e devem ser simples e legveis. Uma forma tradicional na Zoologia a seguinte: [iniciais do coletor][ano]-[nmero] (Fig. 3D). Exemplo: RC10-001. Anotaes em cadernos de campo devem usar esses nmeros como referncia. Essas etiquetas podem ser preparadas com antecedncia e inseridas nos frascos durante a coleta. Essa numerao car associada permanentemente a cada amostra. Alm da etiqueta de campo, cada amostra recebe uma etiqueta com os dados de coleta: local, data e coletor (Fig. 3C). O local deve ser indicado seguindo a hierarquia geogrca: pas, estado (UF), municpio, localidade. As coordenadas do local de coleta (latitude e longitude) devem ser includas caso estejam disponveis. A data deve ser apresentada na forma dia-ms-ano, com o ms em romanos. O nome do coletor deve ser abreviado, mantendo apenas o sobrenome por extenso. Outras informaes importantes que devem ser informadas caso disponveis: tipo de hbitat

4.3. Preservao
Cupins so insetos frgeis de corpo mole que devem ser sempre preservados em lcool 80%. Concentraes maiores de lcool desidratam os espcimes e concentraes menores no garantem a preservao adequada em

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Figura 4: A, estereomicroscpio (lupa); B, proveta de 1 L com alcometro; C, pisseta com lcool 80%; D, placa de Petri com areia lavada.

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ou vegetao (oresta, cerrado, pastagem etc) e tipo de ninho (epgeo, arborcola). Essas informaes podem ajudar na identicao. As etiquetas pode ser impressas em impressora laser. Para garantir a durabilidade das etiquetas, as folhas impressas devem ser aquecidas com ferro de passar roupa para xar o toner. Para isso elas so colocadas sobre papel toalha e aquecidas no verso (no no lado impresso). O nmero de etiquetas em cada frasco deve ser o mnimo possvel, de preferncia apenas uma. As etiquetas devem ser inseridas com cuidado dentro de cada frasco, de modo que quem legveis por fora. Para isso elas devem car com o texto virado para fora e acomodadas junto face interna do vidro, sem dobrar ou enrolar (Fig. 3A). Isso facilita muito a organizao e manuseio das amostras.

recolocados no frasco aps a identicao. Os espcimes devem ser manipulados com pinas leves, evitando danos desnecessrios. Aps a separao dos gneros, o trabalho de identicao deve prosseguir trabalhando separadamente e cuidadosamente cada gnero. No caso de gneros com reviso taxonmica recente, o trabalho mais fcil (ver lista abaixo). A identicao por meio de chaves e comparao com a literatura sujeita a erros, especialmente por pessoas inexperientes. A identicao deve ser conferida por comparao com uma coleo de referncia ou auxlio de uma pessoa mais experiente.

4.5. Amostras com vrias espcies misturadas

Um problema comum durante a coleta de cupins a presena de vrias espcies num mesmo cupinzeiro ou em uma mesma pea de madeira ou ainda em uma amostra de solo. Cupinzeiros grandes e velhos de Cornitermes chegam a conter 15 ou mais espcies diferentes. Devido a isso, frequente a presena de indivduos de espcies diferentes num mesmo frasco, especialmente de operrios. A separao desses indivduos pode ser muito difcil e trabalhosa, especialmente dos operrios. Por isso importante tomar cuidado durante a coleta e tentar obter amostras puras. Em todo caso importante preservar a informao de quais amostras foram coletadas num mesmo ninho. Isso pode ser feito atravs da numerao nas etiquetas de campo. Exemplo: em um ninho de Cornitermes cumulans foram coletados amostras de cupins de 5 espcies. As etiquetas de campo seriam as seguintes, respectivamente: RC10-005, RC10-005a, RC10-005b, RC10-005c, RC10-005d. Essa numerao preserva a informao da associao entre as amostras de uma forma simples.

5.1. Lista de chaves de identicao e revises taxonmicas por gnero

1. Angularitermes: Carrijo et al. (2011) 2. Cornitermes: Emerson (1952) e Cancello (1989) 3. Cryptotermes: Bacchus (1987) 4. Curvitermes: Carvalho & Constantino (2011) 5. Cylindrotermes: Rocha & Cancello (2007) 6. Cyrilliotermes: Constantino & Carvalho (2012) 7. Heterotermes: Constantino (2000) 8. Labiotermes: Constantino et al. (2006) Programa de Ps-Graduao em Zoologia UnB 9. Neocapritermes: Krishna & Araujo (1968) e Constantino (1991) 10. Orthognathotermes: Rocha & Cancello (2009) 11. Procornitermes: Emerson (1952) e Cancello (1986) 12. Syntermes: Constantino (1995) Para os gneros restantes existe uma literatura fragmentada. Para alguns existem revises parciais ou antigas, que podem ser usadas mas precisam ser complementadas com trabalhos mais recentes. Consulte o catlogo (Constantino, 1998) ou o banco de dados online Constantino (2011) para obter uma lista da bibliograa existente.

5. Identicao
A identicao de cupins pode ser uma tarefa complexa e demorada dependendo do tipo de material. O primeiro passo identicar os gneros, o que pode ser feito usando uma das duas chaves disponveis (Constantino, 1999, 2002). Os cupins devem ser examinados em placa de Petri contendo lcool 80%. Uma camada de areia limpa no fundo da placa facilita o posicionamento dos espcimes e essencial para medies. O exame em placa de Petri sem areia permite melhor visualizao da pilosidade, especialmente usando iluminao transmitida. Os cupins devem ser mantidos cobertos com lcool durante todo o tempo e

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5.2. Apicotermitinae
Os Apicotermitinae neotropicais no possuem soldados, o que diculta muito a identicao porque os operrios apresentam pouca variao na morfologia externa. A taxonomia desse grupo ainda foi muito pouco estudada, de modo que a identicao praticamente impossvel com base na literatura existente. A soluo identicar apenas o gneros e separar as morfoespcies, o que j um trabalho bastante difcil devido ausncia de soldados. A separao deve ser muito cuidadosa, observando os seguintes detalhes: tamanho da cabea, formato do ps-clpeo, formato da tbia anterior, formato da coxa anterior, tubo digestivo (ver por transparncia). O exame da vlvula entrica bastante til na identicao de Apicotermitinae (ver instrues de disseco e montagem em Constantino, 1999).

4. Os frascos devem ser de vidro transparente, de um dos tipos adequados para a coleo permanente (ver item 2.5 acima); 5. Cada amostra deve estar devidamente etiquetada, com etiquetas bem legveis (ver itens 2.6 e 4.4); 6. Cada amostra enviada deve ser uma duplicata numerada; o interessado deve manter a amostra original correspondente com o mesmo nmero; 7. As amostras recebidas sero depositadas na coleo da UnB e no sero devolvidas; 8. Enviar uma planilha devidamente preenchida com a lista das amostras em forma impressa e em forma eletrnica, conforme modelo disponvel no site http://termitologia.unb.br; Amostras enviadas em desacordo com as instrues acima, especialmente os itens 15, no sero examinadas. O material recebido para identicao e incorporado ao acervo da coleo car disponvel para estudos taxonmicos. Como de praxe, os coletores no tm direito a coautoria de trabalhos taxonmicos derivados do estudo dessas amostras. Crditos aos coletores aparecem apenas na lista de material examinado.

5.3. Nasutitermes
Nasutitermes o maior gnero de cupins, com mais de 70 espcies neotropicais. A identicao difcil devido grande diversidade e pouca variao morfolgica nos soldados. A reviso de Holmgren (1910) est ultrapassada e pouco til. A identicao das espcies depende de experincia e comparao com colees de referncia. praticamente impossvel identicar espcies de Nasutitermes com base apenas na literatura.

6.1. Custo do servio de identicao 6. Envio de amostras para identicao

Amostras de cupins podem ser enviadas pelo correio, desde que devidamente embaladas. Nesse caso essencial usar frascos de boa qualidade com boa vedao. Como precauo extra, os frascos devem ser embalados em sacos plsticos lacrados ou bem amarrados. A caixa deve ser preenchida com material leve como ocos de isopor. Frascos soltos dentro da caixa tm grande chance de quebrar e o vazamento do lcool pode estragar a caixa. As instrues para enviar amostras para o Laboratrio de Termitologia da UnB esto listadas abaixo. 1. obrigatrio entrar em contato com antecedncia e obter a concordncia, preferencialmente antes do incio das coletas; 2. As amostras devem estar limpas, em lcool 80% e contendo apenas cupins; 3. As amostras devem conter um bom nmero de indivduos de todas as castas presentes no ninho no momento da coleta; A identicao tem sido feita gratuitamente para a comunidade acadmica, mas provvel que em breve esse servio passe a ser pago. O pagamento ser feito Universidade de Braslia, como uma prestao de servios.

Referncias
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30 de julho de 2012