TRANSAMINASE

OXALACTICA
Cat. 52
ANVISA10009010031
FINALIDADE
PRINCPIO
CARACTERSTICASDOSISTEMA
METODOLOGIA
REAGENTES
1. TGOSubstrato
2. Reagente de Cor
3. NaOH- Estoque-
4. Padro
PRECAUESECUIDADOSESPECIAIS
Sistema para medida da atividade da Transaminase
Oxalactica (TGO) emamostra de sangue por mtodo cintico
de tempofixo e mediode pontofinal.
Somentepara uso diagnsticoin vitro.
A transaminase oxalactica promove a transferncia de
grupamentos aminade -aminocidos para -cetocidos.
TGO
L-Aspartato + -cetoglutarato Glutamato + Oxalacetato
O oxalacetato formado medido atravs da formao de
hidrazona, a qual temintensacor emmeioalcalino.
Osistema Transaminase Oxalactica Labtest contmtodos os
reagentes necessrios a uma segura determinao, utilizando
um processo em 4 etapas e permitindo que a fotometria seja
realizada emqualquer fotmetro que tenha filtros comemisso
entre490 a 540 nm.
Os reagentes so rigorosamente padronizados e estabilizados
visando manuteno de rgidas e timas condies para a
aoenzimtica.
O hidrxido de sdio preparado e titulado em condies de
rigoroso controle, o que elimina a presena de carbonato e
asseguraumaaocorreta do reagente.
Reitmane Frankel.
- Armazenar entre 2 - 8 C.
Contm tampo 67 mmol/L, pH 7,4; cido -cetoglutrico
2,0 mmol/L, cido L-asprtico 99 mmol/L e azida sdica
15,4mmol/L.
- Armazenar entre 2 - 8 C. No congelar.
Contm 2,4-dinitrofenilhidrazina 1,0 mmol/L e cido clordrico
1,0 mol/L.
Armazenar entre15 - 25 C.
Contmhidrxidode sdio1,25mol/L. Reagentecorrosivo.
- Armazenar entre 2 - 8 C.
Contm piruvato de sdio 2 mmol/L. Aps o manuseio
sugere-searmazenar bemvedadopara evitar evaporao.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas
condies indicadas, so estveis at a data de expirao
impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto
sujeitos contaminaes de natureza qumica e microbiana
que podemprovocar reduoda estabilidade.
Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na
manipulaode reagentes.
a a
a
a
ONaOH- Estoque contmhidrxido de sdio que corrosivo e
podeproduzir queimaduras.
O TGO Substrato contm azida sdica que txica. Deve-se
tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com
os olhos, deve-se lavar imediatamente comgrande quantidade
de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar
compostos altamente explosivos comtubulaes de chumbo e
cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o
reagente.
Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa
observao do tempo e da temperatura de incubao de
grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. A
diferena de 1 minuto no tempo de incubao desta dosagem
introduz umerrode 3,3%nos resultados.
Banho-mariamantido temperaturaconstante (37 C)
Fotmetro capaz de medir, com exatido, a absorbncia entre
490 e 540 nm.
Pipetas para medir amostras e reagentes.
Cronmetro.
Amostras hemolisadas produzeminterferncia positiva devido
elevadaconcentraodeTGOnas hemcias.
O alcoolismo crnico aumenta a atividade da TGO de 18 a
100%.
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP)
que estabelea procedimentos adequados para colheita,
preparao e armazenamento da amostra. Enfatizamos que
os erros devidos amostra podem ser muito maiores que os
erros ocorridos duranteo procedimentoanaltico.
Usar soro ou plasma (EDTA, heparina) e lquor. A atividade
enzimtica estvel 4 dias entre 2 - 8 C e 2 semanas a 10 C
negativos.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras
de sangue no transmitem infeces, todas elas devem ser
consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao
manuse-las devem-se seguir as normas estabelecidas para
biossegurana.
Para descartar os reagentes e o material biolgico sugerimos
aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteo
ambiental.
Valores de Bilirrubina at 5 mg/dLe Triglicrides at 170 mg/dL
no produzeminterferncias significativas.
Amostras hemolisadas produzeminterferncia positiva devido
elevadaconcentraodeTGOnas hemcias.
Valores de Triglicrides entre 170 e 900 mg/dL produzem
interferncia positiva que pode ser minimizada utilizando o
BrancodeAmostra.
Misturar 3,0 mL de NaCl 150 mmol/L
(0,85%) com 0,05 mL da amostra. Medir a absorbncia em
505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o zero com gua
destilada ou deionizada. Subtrair a absorbncia assim obtida
da absorbncia do teste e obter a atividade da transaminase
oxalactica utilizando a curva de calibrao. Este sistema de
correo aplicvel apenas nos casos em que a amostra
produz interfernciafotomtrica.
MATERIALNECESSRIOENOFORNECIDO
INFLUNCIASPR-ANALTICAS
AMOSTRA
INTERFERNCIAS
MinimizaodaAode Interferentes
Branco de Amostra:
Instrues de Uso
PREPARODOREAGENTE
NaOHde Uso:
CURVADECALIBRAO
TRAADODACURVADECALIBRAO
PROCEDIMENTO
Ver observaes 1 e 2.
Transferir quantitativamente o contedo do frasco n 3
(160 mL) para um balo volumtrico ou proveta, completar
para 500 mL com gua destilada ou deionizada livre de CO e
homogeneizar. Estvel 12 meses em recipiente de plstico
entre15 - 25 C.
A gua utilizada deve ter resistividade 1 megaohm ou
condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos
<0,1 mg/L.
Como o sistema de medida Reitman-Frankel (Unidades/mL)
no segue a lei de Beer, impossvel utilizar o mtodo do fator
para clculo, sendo necessria a preparao de curva de
calibrao.
Tomar 5 tubos de ensaioe proceder comoa seguir:
Misturar e deixar a temperaturaambientedurante20 minutos.
Misturar e deixar a temperatura ambiente durante 5 minutos.
Determinar as absorbncias ou T% em 505 nm ou filtro verde
(490 a 540), acertando o zero com gua destilada ou
deionizada. Acor estvel por 60 minutos.
Traar a curva de calibrao correlacionando as leituras
obtidas com os valores em Unidades/mL expressos na tabela
abaixo, utilizando papel linear (para absorbncias) ou monolog
(paraT%).
Ver observao3.
Tomar 1 tubode ensaioe proceder comoa seguir:
Incubar embanho-maria a 37 Cdurante 2 minutos. Onvel da
gua no banho deve ser superior ao nvel dos reagentes nos
tubos de ensaio.
Misturar e incubar em banho-maria a 37 C exatamente 60
minutos.
Misturar e deixar a temperaturaambiente20 minutos.
2

Misturar e esperar 5 minutos. Determinar as absorbncias ou

T% em 505 nm ou filtro verde (490 a 540), acertando o zero
comguadestiladaou deionizada. Acor estvel 60 minutos.
Obter o valor de TGO usando a curva de calibrao (ver
Desempenhodo Sistema).
O procedimento sugerido para a medio adequado para
fotmetros cujo volume mnimo de soluo para leitura igual
ou menor que 3,0 mL. Deve ser feita uma verificao da
necessidade de ajuste do volume para o fotmetro utilizado.
Os volumes de amostra e reagente podem ser modificados
proporcionalmente sem prejuzo para o desempenho do teste
e o procedimento de clculo se mantminalterado. Emcaso de
reduo dos volumes fundamental que se observe o volume
mnimo necessrio para a leitura fotomtrica. Volumes da
amostra menores que 0,01 mL so crticos em aplicaes
manuais e devemser usados comcautela porque aumentama
imprecisoda medio.
Quando for obtido um valor igual ou maior que 190
Unidades/mL, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%),
realizar nova medio e multiplicar o resultado obtido pelo fator
de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado
se situe entre 50 e 150 Unidades/mL. Sugerimos a verificao
do desempenho do sistema no mnimo semestralmente,
utilizandoamostras comvalores at 190 Unidades/mL.
Olaboratrio deve manter umprograma de controle interno da
qualidade que defina claramente os objetivos, procedimentos,
normas, critrios para limites de tolerncia, aes corretivas e
registro das atividades. Ao mesmo tempo deve manter um
sistema definido para monitorar a variabilidade analtica que
ocorre em todo o sistema de medio. Portanto, o uso de
controles para avaliar a impreciso e inexatido das
determinaes deve ser prtica rotineira do laboratrio clnico.
Sugere-se usar um controle com um valor situado na faixa de
referncia ou no nvel de deciso e outro controle comumvalor
emoutra faixa de significncia clnica. Deve-se criar uma meta
de estado de controle para que a variao mxima encontrada
seja de 10% ou ento utilizar o sistema de regras mltiplas de
Westgard para avaliaodo estado de controle.
Sugere-se utilizar as preparaes estabilizadas da linha
Qualitrol da Labtest para controle interno da qualidade em
ensaios de qumicaclnica.
Estes valores devem ser usados apenas como orientao.
Recomenda-se que cada laboratrio estabelea, na
populaoatendida, sua prpriafaixade valores de referncia.
Soro: 4 a 36 Unidades/mL
UI =Unidades/mLx 0,482
Em duas amostras com concentraes de transaminase
oxalactica iguais a 22 e 129 Unidades/mL foram adicionadas
quantidades diferentes da enzima obtendo-se recuperaes
entre 104 e 108%. O erro sistemtico proporcional mdio
obtido em um valor de 60 Unidades/mL foi igual a 3,6
Unidades/mLou 6,0%.
DESEMPENHODOSISTEMA
CONTROLEINTERNODAQUALIDADE
VALORESDEREFERNCIA
CARACTERSTICASDODESEMPENHO
Exatido
7
8
mL mL mL mL mL mL mL mL mL mL
Tubo n Tubo n 1 1 22 33 44 55
gua destilada ou deionizada 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Reagente de Cor (n 2) 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0
Padro (n 4) --- 0,1 0,2 0,3 0,4
TGO Substrato (n 1) 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6
NaOH de Uso 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0
Zero 24 61 114 190 TGO (Unidade/mL)
Tubo n 1 2 3 4 5
0,25 mL TGO Substrato (n 1)
Teste
Amostra 0,05 mL
Reagente de Cor (n 2) 0,25 mL
NaOH de Uso 2,5 mL
Vrias drogas comumente usadas encontram-se relacionadas
ao aumento da AST: isoniazida, fenotiazinas, eritromicina,
progesterona, esterides, opiceos, indometacina, halotano e
metildopa.
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so
fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e
obtenode resultados corretos.
2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade
adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e
usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou
condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos
<0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua
pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou
condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar
gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua
capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com
liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande
poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes
em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de
modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um
programade controleda qualidadeda gua.
3. Para uma reviso das fontes medicamentosas de
interferncia nos resultados e na metodologia, sugere-se
consultar Young, DS.
, 3 edio, Washington: AACCPress, 1990.
1. KarmenA. J ClinInvest 1955;34:131.
2. ReitmanS, Frankel S. AmJ ClinPath1957;28:56.
3. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry, W.B.
Saunders Co, 1970.
4. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-
Chilcott Laboratories, Diagnostic Reagents Division,
Scarborough, Canada, 1972.
5. Varley H. Practical Clinical Biochemistry, Willian Heinemann
Medical Book Ltd. 1967.
6. Wroblewski F, CabaudP. AmJ ClinPath1957;27:235.
7. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Growth T.1981;27:493-
501.
8. Labtest: Dados de arquivo.
Termos e Condies de Garantia A Labtest Diagnstica
garante o desempenho deste produto dentro das
especificaes at a data de expirao indicada nos rtulos,
desde que os cuidados de utilizao e armazenamento
indicados nos rtulos e nestas instrues sejam seguidos
corretamente.
OBSERVAES
REFERNCIAS
APRESENTAO
INFORMAESAOCONSUMIDOR

Effects of Drugs on Clinical Laboratory

Tests
a
Especificidade
Repetitividade- Imprecisointra-ensaio
ReprodutibilidadeImprecisototal
Sensibilidademetodolgica
Efeitosda diluioda matriz
SIGNIFICADOCLNICO
O mtodo proposto foi comparado com um mtodo similar
utilizando 80 amostras com valores situados entre 11 e 174
Unidades/mL. A comparao resultou na equao da
regresso: y = 0,895x - 6,818 e umcoeficiente de correlao (r)
igual a 0,99. Oerro sistemtico total (constante e proporcional)
verificado no nvel de deciso (60 Unidades/mL) foi igual a 13
Unidades/mL ou 22%. Como as amostras foram selecionadas
aleatoriamente em pacientes de ambulatrio e pacientes
hospitalizados, pode-se inferir que o mtodo tem uma
especificidademetodolgicaadequada.
Uma amostra protica no contendo transaminase oxalactica
foi utilizada para calcular o limite de deteco do ensaio tendo
sido encontrado umvalor igual a 5,0 Unidades/mL, equivalente
mdiade 20 ensaios mais dois desvios padro.
Duas amostras com valores iguais a 149 e 165 Unidades/mL
foram utilizadas para avaliar a resposta do sistema nas
diluies da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando
fatores de diluio que variaram de 2 a 8 foram encontradas
recuperaes entre88 e 100%.
Elevaes das transaminases ocorrem na hepatite (viral e
txica), na mononucleose, cirrose, colestase, carcinoma
heptico primrio ou metatstico, pancreatite, traumatismo
extenso e no choque prolongado. Nas hepatopatias agudas,
geralmente, o valor da transaminase pirvica (ALT) excede o
da oxalactica(AST).
Atransaminase oxalactica quase sempre est elevada aps o
infarto agudo do miocrdio, fato incomum para a pirvica. A
transaminase oxalactica comea a elevar-se 6 a 12 horas
aps o infarto para alcanar o pico mximo entre 24 a 48 horas,
normalizando-se pelo 5 ou 6 dia. Deve-se ressaltar que a
sensibilidade e especificidade da dosagem de AST no
diagnstico do infarto agudo do miocrdio so baixas,
tornando a determinao desta enzima a menos indicada para
estediagnstico.
Auremiaencontra-seassociada quedada AST.
Elevaes significativas da atividade daASTno lquor tmsido
observadas em pacientes com acidentes cerebrovasculares.
Se o nvel srico da enzima encontra-se tambm elevado,
trata-se provavelmente de dano macio ao parnquima
cerebral. Neoplasias envolvendo o crebro e a medula
espinhal so acompanhadas de vrios graus de elevao na
atividadeda ASTno lquor.
Nos indivduos com meningite bacteriana observam-se,
usualmente, valores dentroda faixade referncia.
MDIA N DP CV%
Amostra 1 20 19 1,53 7,9
Amostra 2 20 61 2,66 4,4
MDIA N DP CV%
Amostra 1 20 20 2,86 14,7
Amostra 2 20 59 3,85 6,53
1 x 50 mL
1 x 4 mL
1 x 50 mL
1 x 160 mL
TGO Substrato
Reagente de Cor
NaOH - Estoque
Padro
Catlogo
N de testes
Volume/Teste
52-200
3,0 mL
200
Reviso: Outubro, 2004 Copyright by Labtest Diagnstica S.A.
Ref.: 181104 Reproduo sob prvia autorizao
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