UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS FACULDADE DE ENGENHARIA QUMICA

REA DE CONCENTRAO Sistemas de Processos Qumicos e Informtica

Anlise de Viabilidade Econmica de um Processo de Extrao e Purificao da Bromelina do Abacaxi

Autor Ana Claudia Wabiszczewicz Cesar Orientador Prof. Dr. Elias Basile Tambourgi

Tese de Doutorado apresentada Faculdade de Engenharia Qumica como parte dos requisitos exigidos para a obteno do ttulo de Doutor em Engenharia Qumica.

Campinas - So Paulo Dezembro - 2005

Aos meus pais Ary Cesar e Janina Wabiszczewicz Cesar(in memoriam)

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Agradecimentos

Deus, por ter me dado oportunidade de merecer este caminho. Ao Prof. Dr. Elias Basile Tambourgi pela orientao, confiana e amizade. Aos Prof.s Dr.s Jabra Haber, Jlio Csar Dutra e Luiz Carlos Bertevello, pelo apoio e pelas valiosssimas contribuies. Aos professores da UNINOVE pelo apoio, colaborao e discusso dos resultados. Ao amigo mdico, Odair Manzini Jr., por demonstrar, sua maneira, a importncia da minha determinao para concluso deste trabalho. Ao prezado amigo MsC.Paulo Eduardo Orlandi Mattos da Universidade Federal de So Paulo, UNIFESP, por partilhar a paixo e o conhecimento pelos bioprodutos. minha famlia, pelo amor, pacincia e compreenso nas minhas ausncias. Aos meus fiis companheiros Fbio De Chiara e Giovanni Cesar De Chiara, sem os quais, no teria motivos para seguir nesta jornada.

NOTAO E NOMENCLATURA A Ae Aefundo Aetopo ABIFARMA BSA Cf Ct CT Da g/g IBGE K Kbioesp KDa Kconf Keletro Khfob Ktam M MPEG P PEG pI Ptopo Pfundo p/p PV R s SBA sefeitpo TCA v/v Xm xi Atividade Enzimtica (U) Atividade Especfica (U/mg) Atividade especfica da Fase Inferior Atividade Especfica da Fase Superior Associao Brasileira da Indstrias Farmacuticas Albumina Bovina ( Bovine Serum Albumin) Concentrao da Fase Inferior Concentrao da Fase Superior Custo Total daltons Grama/grama Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica Coeficiente de Partio Fator de Afinidade Bioespecfica Kilo Dalton Fator de Conformao Fator eletroqumico Fator de afinidade hidrofbica Fator Tamanho Molaridade ou Molar Massa Molecular do PEG Protena Total (mg/L) Polietileno Glicol Ponto Isoeltrico Concentrao de Proteinas na Fase Superior (mg/L) Concentrao de Proteinas na Fase Inferior (mg/L) Peso/peso Preo de Venda Retorno sobre o Investimento Desvio padro Sistemas Bifsicos Aquosos Desvio Padro dos Efeitos cido Tricloroactico Volume/volume Mdia dos resultados Obtidos Grandeza Medida

VI

LISTA DE FIGURAS Figura 1: Exemplo de um Diagrama de Fases. Figura 2: Ciclo de vida de um produto Figura 3: Preparo da amostra Figura 4: Descrio dos testes de liquefao da gelatina . Figura 5: Resultados dos volumes de perfurao da gelatina. Figura 6: Curva de solubilidade em etanol da bromelina e das protenas presentes no abacaxi Figura 7 : Esquema da micro-coluna de campnulas pulsantes. Figura 8: Variao do preo de venda em relao margem de lucro. Figura 9: Evoluo do preo de vendas em funo da margem de lucro Figura 10: Prazo de retorno sobre investimento (payback) em funo as margem de lucro LISTA DE TABELAS Tabela 1: Dados da concentrao das amostras de polpa do fruto, casca e talo do abacaxi. Tabela 2: Dados de protena total, atividade e acares redutores. Tabela 3 - Produo de Frutas, Brasil 1994/1995 e 2004/2005 (1000 toneladas) Tabela 4: Produo Mundial de abacaxi em 2005. Tabela 5: Vantagens e desvantagens da liderana tecnolgica Tabela 6: Exemplo de aplicao de um modelo de pontuao para avaliao de projetos. Tabela 7: Resultados do volume de perfurao (VP) Tabela 8 Variveis estudadas na operao da Micro-coluna Tabela 9 - Descrio dos nveis e efeitos. Tabela 10 - Efeitos calculados para porcentagem de recuperao de protena total Tabela 11 - Porcentagem de recuperao de protena total Tabela 12 - Clculo dos efeitos para recuperao da protena total Tabela 13 - Porcentagem de recuperao de atividade enzimtica Tabela 14 - Clculo dos efeitos para recuperao de atividade enzimtica Tabela 15 : Descrio dos valores de investimento em equipamentos para extrao Tabela 16: Custos de matria -prima para produo de 8 kg de precipitado. Tabela 17: Descrio de despesas e tributos Tabela 18 : Variao do Preo de venda em Funo da Margem de Lucro Tabela 19: Quantidade de precipitado necessria para o retorno sobre o investimento em funo da margem de lucro Tabela 20: Custos de equipamentos para extrao em contnuo. Tabela 21: Custos com matria -prima para extrao em contnuo Tabela 22: Custos com matria- prima para purificao na obteno de 1 grama Tabela 23: Evoluo de preo de venda do extrato purificado em funo da margem de contribuio. Tabela 24: Quantidade em gramas de extrato purificado a ser vendida em funo da margem de lucro para retorno sobre investimento 07 07 07 08 44 56 61 67 69 69 70 70 71 72 75 76 77 77 78 79 79 80 80 81 32 41 59 60 61 63 64 78 81 82

VII

SUMRIO Lista de Tabelas e Figuras 1. INTRODUO 2. FUNDAMENTAO 2.1. Protenas 2.1.1. Bromelina 2.1.2. Enzimas 2.1.3. Desnaturao 2.1.4. Protena Total, Atividade e Acares Redutores 2.2. Abacaxi 2.2.1. Fruticultura Brasileira 2.2.2. Cultivo e Colheita 2.2.3. Caracterizao da Fruta 2.2.4. Composio Qumica 2.2.5. Processamento da Fruta 2.2.6. Produtos e Subprodutos do Processamento. 2.3. Consumo de Bromelina. 2.4. Separao e Purificao de Protenas 2.4.1. Precipitao por Etanol 2.4.2 Extrao Lquido-Lquido 2.4.2.1. Sistemas de Duas Fases Aquosas 2.4.2.2. Tipos de Sistemas de Duas Fases Aquosas 2.4.2.3. Sistema PEG/Sal 2.4.2.4. Polietileno Glicol 2.4.2.5. Recuperao de Sais e Polmeros 2.4.3. Teoria de Formao das Fases 2.4.3.1. Tempo de Separao das Fases 2.4.3.2. Fatores que Influenciam no Sistema de Fases 2.4.3. 3. Diagrama de Fases 2.4.4. Fundamentos da Partio das Protenas 2.4.4.1. Coeficiente de Partio 2.4.4.2. Influncia do Peso Molecular do Polmero e da Protena no Coeficiente de Partio 2.4.4. 3. Influncia do pH do Sistema no Coeficiente de Partio 2.4.4.4 Influncia das Interaes entre a Protena e o Sistema de Fases no Coeficiente de Partio 2.4.4.5. Influncia da Concentrao dos Componentes do Sistema no Coeficiente de Partio 2.4.4.6. Influncia da Concentrao de Protenas no Coeficiente de Partio 2.4.4. 7.Modelagem Matemtica do Coeficiente de Partio 2.5. Planejamento Fatorial 3. INOVAO TECNOLGICA 3.1. Tecnologia e Inovao 3.2. Desenvolvimento de Produtos 3.3. Liderana Tecnolgica 3.4. A Adoo de uma Nova Tecnologia VII 01 03 03 03 05 06 06 07 07 08 10 11 11 12 15 17 18 20 20 23 24 25 26 27 29 30 31 33 34 34 35 36 36 37 37 38 39 39 40 42 45

4. CUSTOS 4.1. Custos Diretos e Custos Indiretos 4.1.1. Fatores que Afetam as Classificaes de Custos Diretos Indiretos 4.2. FIXAO DO PREO DE VENDA 4.2.1. Formao de Preos com Base em Custos 4.3. ANLISE ECONMICA DE PROJETOS 4.3.1Avaliao de Projetos de Inovao Tecnolgica 4.3.2. Modelo de Deciso por mltiplos Atributos ou de Pontuao 4.4. Anlise Linear de Equilbrio 4.4.1. Ponto de Equilbrio entre Receitas e Despesas 5. MATERIAIS E MTODOS 5.1. Extrao por Batelada 5.1.1. Preparo da Amostra 5.1.2. Extrao com Etanol 5.2. Extrao em Contnuo 5.2.1 Descrio do Equipamento 5.2.2. Procedimentos de Operao da Micro-Coluna 5.2.3. Variveis Estudadas 5.3. Extrao Contnua Utilizando Uma Micro-Coluna De Campnulas Pulsantes 5.3.1. Planejamento de Ensaios 5.3.2 Efeito da Razo entre as vazes das fases (RV) e da Freqncia da pulsao (FP) das Campnulas na Porcentagem de Recuperao de Protena Total com Bromelina P.A. 5.3.3. Efeito da Razo entre as vazes das fases (RV) e da Freqncia da pulsao (FP) das Campnulas na Recuperao de Protena Total. 5.3.4. Efeito da Razo entre as vazes das fases (RV) e da Freqncia da pulsao (FP) das Campnulas na Recuperao da Atividade da Bromelina. 5.4. Mtodos Analticos 5.4.1. Determinao de Protena Total 5.4.2. Determinao da Atividade Enzimtica 5.5. Metodologia de Clculo 5.5.1.Coeficiente de Partio 5.5.2. Atividade Especfica 6. RESULTADOS E DISCUSSO. 6.1. Custos da Extrao por Batelada 6. 2. Custos de Purificao 7. COMENTRIOS FINAIS E CONCLUSES 8. SUGESTO DE TRABALHOS FUTUROS 9. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS ANEXOS

48 48 49 51 51 52 55 55 57 57 59 59 59 60 64 64 65 66 67 68 69

69 70 72 72 72 73 73 74 75 75 79 83 85 86 95

RESUMO O Brasil encontra-se entre um dos maiores produtores mundiais de abacaxi ocupando o terceiro lugar no ranking mundial. Visando o aproveitamento do material considerado resduo agrcola (caule e folhas) e resduos do processamento do fruto, muitos estudos tem sido realizados para a obteno de enzimas proteolticas do abacaxi. As enzimas proteolticas de origem vegetal so provenientes principalmente do figo (ficina), do mamo (papana) e do abacaxi (bromelina). Por bromelina entende-se o conjunto de enzimas proteolticas produzidas por plantas da famlia das Bromeliaceae. uma enzima de amplo uso na indstria alimentcia para o amaciamento de carne e clarificao da cerveja, para o amaciamento de couro, e na indstria farmacutica, em medicamentos destinados a distrbios de digestibilidade,e tambm por sua ao antiinflamatria e antimucoltica. O desenvolvimento de novos processos de extrao e purificao de protenas muito importante, uma vez que esta uma etapa limitante na produo de bioprodutos. O presente trabalho prope um processo de recuperao da bromelina do fruto de abacaxi por tcnica de precipitao do caldo prensado com etanol frio onde foram obtidos resultados demonstrando que em uma precipitao em 1 estgio com 80% v/v de etanol a 5C possvel recuperar praticamente toda a enzima originalmente presente, aumentando de 3 a 5 vezes a atividade especfica inicial e purificao atravs da extrao lquido-lquido em duas fases aquosas, formado por duas fases aquosas imiscveis ou parcialmente miscveis entre si , obtidas pela adio de polmeros hidroflicos ou um desses polmeros e um sal , como o sistema PEG ( polietileno glicol ) e o fosfato de potssio. O trabalho apresenta um estudo sobre os custos do processo e estimativas sobre o preo de venda e retorno sobre o investimento , demonstrando a viabilidade econmica da proposta quer para utilizao como pr-processo nos tradicionais sistemas cromatogrficos, quer para sua comercializao direta, como alternativa para o produtor do abacaxi, ou do fabricante de sucos e compotas.

Palavras Chave: Custos, Abacaxi, Extrao Lquido-Lquido

ABSTRACT

Brazil is one of the worlds largest producers of pineapples, its production being the third one in the world. To take advantage of the residues from fruit processing, many studies have been conducted to obtain proteolytic enzymes from them. These proteolytic enzymes are extracted mainly from fig (ficine), papaya (papain), and pineapple (bromelain). Bromelain is a mixture of proteolytic enzymes found in Bromeliaceae family. It is an enzyme with ample use in food industry for meat tenderizer and beer clarification, in leather and pharmaceutical industries, in drugs for digestion disorders, anti-inflammatory action, and anti-colitis action. The development of new extraction and purification processes of proteins is very important, as this is a limiting step in the production of byoproducts. The present work proposes a recovery process of bromelain from pineapples by precipitation of their pressed juice with cold ethanol, whereby a one stage precipitation with 80% v/v of ethanol at 5C made possible the recovery of practically all originally present enzyme, increasing from 3 to 5 times the initial specific activity and purification by a liquid-liquid extraction in two aqueous phases, formed by immiscible aqueous phases or partially miscible ones, which are obtained from the addition of hydrophilic polymers or one of these polymers and a salt, such as PEG system (polyethylene-glycol) and potassium phosphate. This work presents a study about the costs of this process and the estimated sale prices as well as its return of investment, showing its economic viability, whether it is for use as a pre-process in traditional chromatographic systems or direct commercialisation, as an alternative for the pineapple producer of the juice market.

Key-words: costs, pineapple, liquid-liquid extraction

1. INTRODUO O abacaxizeiro produz frutos de sabor e aroma aceitveis no mundo todo. O Brasil um grande produtor de abacaxi, sendo conhecidas cinco espcies de Ananas e uma de Pseudoananas. Dentro da espcie Ananas comosus esto includos todos os cultivos de interesse agrcola, onde os principais cultivados no Brasil so o Prola e o Smooth Cayenne (SANTOS, 1995). O abacaxi fruto a parte comercializvel da planta, porm, esta poro representa somente 63% do total da planta, enquanto que o restante, formado por caule, folha, casca, coroa e talos, considerado resduo agrcola, e no tem sido devidamente aproveitado, resultando em perdas econmicas. Trabalhos j realizados demonstram que estes resduos apresentam teores representativos de carboidratos, protenas e enzimas proteolticas, que possibilitam a sua utilizao industrial como matria-prima para a obteno de bromelina, amido, fibras, lcool etlico e raes animais (BALDINI et.al., 1993). Bromelina o nome genrico dado ao conjunto de enzimas proteolticas encontradas nos vegetais da famlia Bromeliaceae, da qual o abacaxi o mais conhecido. A bromelina tem diversos usos, todos baseados em sua atividade proteoltica, como nas indstrias alimentcias e farmacuticas. Pode-se mencionar sua utilizao no amaciamento de carnes, na clarificao de cervejas, na fabricao de queijos, no preparo de alimentos infantis e dietticos, no pr-tratamento de soja, no tratamento do couro, na indstria txtil, no tratamento da l e da seda, no tratamento de distrbios digestivos, feridas e inflamaes, preparo de colgeno hidrolisado, etc. Muitas tcnicas tm sido utilizadas para a recuperao e purificao de protenas e enzimas de origem animal, vegetal ou microbiana. Tcnicas mais antigas como a precipitao, extrao com solventes e filtrao geralmente tem alto poder de concentrao e baixa purificao e tcnicas mais modernas como a cromatografia de afinidade, troca inica ou gel-filtrao, eletroforese, extrao em duas fases aquosas, extrao com micela reversa, recuperam e purificam, com alto grau de seletividade.

2 A separao de protenas de meios aquosos por precipitao um dos mtodos mais tradicionais para a recuperao e parcial purificao dessas biomolculas. Os precipitados de protenas so agregados de molculas proticas, grandes o suficiente para serem decantados ou centrifugados. uma tcnica de fcil ampliao de escala e com viabilidade para operao contnua a custos aceitveis para grandes volumes. Porm uma tcnica mais de concentrao do que propriamente de purificao. A extrao lquido-lquido uma operao unitria de transferncia de massa, utilizada para separao de componentes presentes em uma mesma soluo, distribuindo-se entre as duas fases lquidas e insolveis entre si. A extrao em duas fases aquosas uma tcnica que vem sendo aplicada na indstria, principalmente em separao de enzimas, por se tratar de um processo de baixo custo, alta seletividade e com possibilidade de reciclagem dos reagentes. Alm disso, as enzimas permanecem estveis no sistema, devido alta concentrao de gua e utilizao de reagentes no desnaturantes. O interesse em novos processos biotecnolgicos vem crescendo substancialmente nas ltimas dcadas e os estudos nesta rea esto bastante consolidados. Porm para que os mesmos possam contribuir de forma efetiva para a sociedade, h a necessidade de definio dos custos dos processos desenvolvidos para tornar os processos cientficos tangveis aos olhos dos investidores. Assim, o presente trabalho faz uma anlise dos custos diretos de fabricao envolvidos na proposta de um processo de recuperao e purificao da bromelina do abacaxi, baseado na anlise dos processos de precipitao por etanol e extrao lquidolquido em duas fases aquosas.

3 2. FUNDAMENTAO 2.1. Protenas Berzelius cunhou a palavra protena em 1838, para salientar a importncia dessa classe de molculas. Protena vem do grego Proteios, que significa o que vem em primeiro lugar, sendo responsveis pelo funcionamento das funes vitais dos organismos animais, nos quais so alguns dos principais constituintes. As protenas so as molculas orgnicas mais abundantes nas clulas e constituem 50% ou mais de seu peso seco. So encontradas em todas as partes das clulas, uma vez que so fundamentais sob todos os aspectos da estrutura e funo celular. Existem muitas espcies diferentes de protenas, cada uma especializada em determinada funo biolgica diferente. 2.1.1. Bromelina Bromelina o nome genrico dado ao conjunto de enzimas proteolticas encontradas nos vegetais da famlia Bromeliaceae, da qual o abacaxi o mais conhecido. As enzimas proteolticas encontradas nos talos recebem o nome de bromelina do talo e tem o nmero sistemtico EC 3.4.22.4, e as encontradas no fruto so chamadas de bromelina do fruto ou ainda, bromelina e tem o nmero sistemtico EC 3.4.22.5. A bromelina uma glicoprotena, tendo um resduo oligosacardeo por molcula, que est covalentemente ligado cadeia peptdica. A bromelina do talo uma enzima sulfidrlica, e este grupamento essencial para a sua atividade proteoltica. A bromelina do fruto uma protena cida, e seu ponto isoeltrico foi determinado por focalizao isoeltrica como pH 4,6 e mudanas conformacionais irreversveis ocorrem em valores de pH maiores que 10,3 (MURACHI, 1976). A enzima no est presente nos primeiros estgios de desenvolvimento do fruto, porm, seu nvel aumenta rapidamente, mantendo-se elevado at o amadurecimento, onde tem um pequeno decrscimo. Essa uma das vantagens da utilizao das proteases do abacaxi em comparao com outras proteases vegetais. Apesar da diminuio da atividade proteoltica durante a maturao, o abacaxi o nico fruto que possui concentraes relativamente altas de proteases no estado maduro. No mamo e no figo, tanto a papana como a ficina, somente so encontradas em altos nveis quando o fruto est verde; com o completo amadurecimento, a concentrao de proteases praticamente desaparece.

4 Diferentes partes da planta podem ser usadas como matria-prima para a obteno da bromelina: folhas, talos, polpa da fruta, cascas e resduos industriais do processamento do fruto. Outras fontes de enzimas proteolticas so as proteases microbianas, por exemplo, de: Bacillus subtilis, Aspergillus sp., Actinomyces sp., e as proteases animais tripsina (EC 3.4.21.4) e pepsina (EC 3.4.23.1), alm das vegetais papana (EC 3.4.22.2), ficina (EC 3.4.22.3) j citadas. Algumas das proteases microbianas so geralmente proteases alcalinas e tm sido usadas na produo de sabes e detergentes para a remoo de manchas de sangue, por exemplo. A bromelina tem diversos usos, todos baseados em sua atividade proteoltica, como nas indstrias alimentcias e farmacuticas. Pode-se mencionar sua utilizao no amaciamento de carnes, na clarificao de cervejas, na fabricao de queijos, no preparo de alimentos infantis e dietticos, no pr-tratamento de soja, no tratamento do couro, na indstria txtil, no tratamento da l e da seda, no tratamento de distrbios digestivos, feridas e inflamaes, preparo de colgeno hidrolisado etc. Foi verificado por ROWAN et. al. (1990) que a bromelina do fruto tem uma atividade proteoltica maior que a bromelina do talo em diversos substratos proticos, e sua atividade mxima em pH 8,0 e a temperatura de 70C. A bromelina do talo apresentou atividade mxima a 60C e pH 7,0. A forma de bromelina comercialmente encontrada a bromelina do talo, apesar da grande quantidade de resduos de abacaxi fruto proveniente das indstrias de conservas de abacaxi. As preparaes de bromelina so impuras, e geralmente as principais enzimas contaminantes so outras enzimas proteolticas e enzimas no proteolticas, tais como: fosfatases, peroxidases, celulases e outras glicosidases (MURACHI, 1976). SUH et. al. (1992) purificou a bromelina do fruto e do talo at a homogeneidade (18 e 46 vezes de aumento de pureza respectivamente) por cromatografia de gel-filtrao e determinou os pesos moleculares em 32.5 e 37 KDa respectivamente, com rendimento de 23% em atividade. MURACHI (1976) purificou a bromelina do talo de abacaxi por cromatografia de gel-filtrao, e determinou que o peso molecular da frao pura era de 28 KDa por SDSPAGE. (ROWAN et. al. 1990) descreve a presena de quatro proteases principais presentes em abacaxis (Ananas comosus): bromelina do fruto, bromelina do talo, ananana e comosana.

5 2.1.2. Enzimas A maior parte da histria da bioqumica a histria da pesquisa sobre enzimas. A catlise biolgica inicialmente descrita e reconhecida no incio do sculo XIX, em estudos sobre a digesto da carne por secrees do estmago e a converso do amido em acares simples pela saliva e por vrios extratos vegetais. Na dcada de 50, Louis Pasteur concluiu que a fermentao do acar em lcool pela levedura catalisada por fermentos. Ele postulou que esses fermentos depois nomeados de enzimas eram inseparveis da estrutura das clulas vivas do levedo, uma hiptese que prevaleceu por muitos anos. Em 1897, Eduard Buchner, descobriu que extratos de levedo podiam fermentar o acar at o lcool, provando que as enzimas envolvidas na fermentao continuavam funcionando mesmo quando removidas da estrutura das clulas vivas. Desde ento numerosos estudos vm sendo realizados na tentativa do isolamento das numerosas enzimas diferentes e o estudo de suas propriedades catalticas. A catlise enzimtica das reaes essencial para os sistemas vivos. Sob condies biolgicas relevantes, as reaes no catalisadas tendem a ser lentas. A maioria das molculas biolgicas muito estvel no ambiente aquoso de pH neutro e temperatura moderada encontrado no interior das clulas. Muitas reaes bioqumicas comuns envolvem eventos qumicos que so muito improvveis nas condies do ambiente celular, como a formao transiente de intermedirios eletricamente carregados e instvel ou a coliso de duas ou mais molculas com a orientao precisa e necessria para que ocorra a reao. ( LEHNINGER, 1995). As reaes necessrias para digerir alimentos, enviar sinais atravs de nervos, ou contrair um msculo simplesmente no ocorrem em velocidade til sem catlise. Uma enzima contorna estes problemas fornecendo um ambiente especfico dentro do qual uma reao dada energeticamente mais favorvel. A caracterstica distintiva de uma reao catalisada enzimaticamente que ela ocorre no interior dos limites de uma cavidade, ou fenda, na estrutura molecular da enzima chamado stio ativo. A molcula que se liga ao stio ativo e que sofre a ao da enzima chamada substrato. O complexo enzima-substrato tem papel central na reao enzimtica, sendo ponto de partida para os tratamentos matemticos que definem o comportamento cintico das reaes catalisadas enzimaticamente e para as descries tericas dos mecanismos enzimticos.

6 2.1.3. Desnaturao Quando uma soluo de protena, como a albumina do ovo, aquecida lentamente at 600 ou 700 C, a mesma torna-se gradualmente leitosa e logo forma um cogulo. Isto comum j que ocorre quando fervemos ovos em gua. A clara do ovo, que contm albumina, coagula pelo aquecimento num slido branco. Depois que o calor coagulou a clara no sofre redissoluo pelo resfriamento, nem forma outra vez uma soluo lmpida como a original. Portanto, o aquecimento transformou a ovoalbumina e, aparentemente, de forma irreversvel. Esse efeito do aquecimento ocorre virtualmente com todas as protenas, no importando seu tamanho ou funo biolgica, embora a temperatura exata para provoc-lo varie. A mudana provocada pelo calor e outros agentes conhecida como desnaturao. H outra importante conseqncia da desnaturao de uma protena, que quase sempre, perde sua atividade biolgica caracterstica. Assim, quando uma soluo aquosa de uma enzima, por exemplo, aquecida at seu ponto de ebulio por uns minutos e depois resfriada, a enzima torna-se insolvel e, principalmente, no mais apresenta atividade cataltica. A desnaturao de protenas pode ser provocada no apenas pelo calor, mas tambm por valores inadequados de pH, por solventes orgnicos, por solutos como a uria, pela exposio da protena a alguns tipos de detergentes, pela agitao vigorosa da soluo protica at formao abundante de espuma, presena de certos ons ou sais caotrpicos na soluo que contm as protenas, oxidao, fora inica, entre outros. Cada uma das formas citadas como causa de desnaturao pode ser considerada como tratamento relativamente suave, isto , a desnaturao pode ocorrer em condies amenas, no h necessidade de ocorrer em condies drsticas. As molculas de protena nativa so frgeis e facilmente desorganizadas pelo calor e outros tratamentos aparentemente suaves. 2.1.4. Protena Total, Atividade e Acares Redutores CESAR (1999) realizou anlises de protena total, acares redutores e atividade enzimtica de amostras preparadas da polpa do fruto, da casca e do talo para a caracterizao do meio inicial. As concentraes e os resultados so mostrados nas Tabelas 1 e 2. O fruto e o talo apresentam o mesmo teor de protena total, porm o talo apresenta cerca de 60% menor quantidade de enzimas proteolticas. O abacaxi utilizado para as

7 anlises foi o fruto maduro, por isso apresentou uma quantidade elevada de acares redutores expressos em glicose, 0,2 a 0,4 g/g de abacaxi. De qualquer forma, o talo e a casca do abacaxi maduro tem um teor de enzima considervel para recuperao, como mostrado na Tabela 2, ainda mais se tratando de resduo de muitas indstrias de conservas. Tabela 1: Dados da concentrao das amostras de polpa do fruto, casca e talo do abacaxi. massa (g) 1734,11 850,50 413,54 Vgua (mL) 600 1000 400 VTOTAL (mL) 3420 1074 980 Concentrao 507 g polpa/L 792 g casca/L 422 g talo/L

Fruto Casca Talo

Tabela 2: Dados de protena total, atividade e acares redutores. Protena Total (mg/L) 1127,00 842,30 893,70 Atividade Enzimtica (mg/g) 2,22 1,06 2,12 Acares Redutores (U/L) 1428,50 865,00 431,50

Fruto Casca Talo

2.2. Abacaxi 2.2.1. Fruticultura Brasileira A fruticultura brasileira cresceu consideravelmente nos ltimos dez anos, como podemos observar utilizando os dados comparativos de produo dos binios 1994/1994 e 2004/2005 apresentados na Tabela 3 . FRUTA Abacaxi Banana Laranja Ma Uva 2005 2.279 6.606 17.998 827 1.133 2004 2.297 6.691 18.270 973 1283 1994 1.558 7.438 14.213 456 807 1995 1.463 7.384 16.004 432 825

Tabela 3 - Produo de Frutas, Brasil 1994/1995 e 2004/2005 (1000 toneladas) Fonte: IBGE (07/2005) Fatores de converso : abacaxi: 1,6 kg/fruto; banana 13kg/cacho; ma 130gramas/fruta ; laranja 250 frutos por caixa com 40,8 kg.

8 No Estado de So Paulo, devido aos diferentes ciclos de maturao (desde muito precoces at tardias) e as diversas regies de cultivo, pode-se dizer que a poca de colheita das frutas se estende por nove meses at pelo ano todo. No caso das frutas de clima temperado e subtropical a colheita se inicia em setembro e se prolonga at junho, enquanto que para tropicais pode durar o ano todo. Em razo de sua posio geogrfica e do cultivo das variedades

especialmente criadas ou adaptadas para as condies de inverno brando, com poucas horas de frio abaixo de 7,20C, a produo paulista mais precoce que as dos estados do Sul do Brasil, assim como de pases produtores como Argentina, Uruguai e Chile, o que traz vantagens econmicas, devido a ausncia de concorrentes no incio da safra. Ao mesmo tempo, para vrias espcies permite-se que sejam exportadas para pases do hemisfrio Norte quando no h produo regional tendo condies de adentrarem os mercados com reduo ou ausncia de tarifas aduaneiras de importao. 2.2.2. Cultivo e Colheita O abacaxizeiro uma planta muito sensvel ao frio, mas resiste bem seca. Exige, por isso, clima quente ou mesotrmico, onde no h perigo de ocorrncia de geadas. A temperatura mdia favorvel situa-se entre 21 e 270C. Quando a temperatura se mantm acima de 320C, verificam-se danos na planta devido transpirao excessiva; quando a temperatura cai abaixo de 200C, a planta entra em estado de inatividade (MEDINA, 1978). Portanto, o Brasil possui um clima muito favorvel para a produo do fruto. Na Tabela 4 podemos observar que o pas encontra-se em segundo lugar no ranking mundial de produo do fruto, contribuindo com mais de 13% da produo mundial. PRODUO(t) PRODUO(t/ha) 15.288.018 843.231 PRODUO (t) PRODUO (t/ha) Tailndia 1.900.000 87.000 Filipinas 1.759.290 48.230 Brasil 1.435.190 54.683 China 1.320.000 70.500 ndia 1.300.000 90.000 Tabela 4: Produo mundial de abacaxi em 2005. Fonte: FAO (2005). Atualizado em fevereiro/2005. ABACAXI Mundial

9 Os frutos colhidos durante o vero apresentam melhor qualidade do que os amadurecidos durante o inverno. Aqueles se apresentam mais aromticos e mais ricos em slidos solveis, menos cidos e com maior contedo de leos volteis. O momento da colheita depende do fim a que se destinam os frutos. Se for para a fabricao de conservas, deve-se aguardar at que os frutos fiquem maduros, ou seja, o momento em que suas qualidades organolpticas sejam timas. Mas, se destina-se exportao como fruta fresca, a colheita deve ser feita com antecipao para que sua maturao total no ocorra at o momento em que seja ofertado ao consumidor. preciso, contudo, neste caso, no colher frutos demasiado verdes. A colorao da casca habitualmente tomada como indicao para julgar se um fruto est ou no maduro. A madureza da polpa e a colorao da casca ocorrem progressivamente, iniciando-se ambas pela base do fruto e se estendendo paulatinamente para o pice. Tal avaliao, contudo, muito mais difcil do que parece primeira vista, pois h necessidade de se levar em conta o tamanho do fruto, as condies ecolgicas, por ocasio da sua maturao e variedade do produto. O abacaxizeiro frutifica dentro de 24 meses aps o plantio, quando as mudas so do tipo coroa. De modo geral, pode-se obter 15 a 20 mil frutas por hectare, por safra, servindo este valor como mdia para as variedades. A poca da colheita est intimamente relacionada poca de plantio e ao tipo e idade da muda. O plantio no Estado de So Paulo feito de dezembro a fevereiro, no perodo que coincide com a colheita das frutas (poca de maior produo) e, conseqentemente, poca favorvel para obteno de mudas. As colheitas das frutas de um abacaxizal no podem ser feitas por meios mecnicos, pois as frutas no amadurecem todas ao mesmo tempo. Todavia, no Hava e em outras regies onde a cultura do abacaxi feita com alto nvel tcnico, os trabalhos de colheita so grandemente facilitados graas utilizao de uma esteira rolante, na qual as frutas so colocadas e transportadas para fora dos talhes to logo sejam colhidas. No Brasil, o trabalho de colheita geralmente feito com auxlio de um faco, com o coletor tendo as mos protegidas por luvas de lona grossa. Enquanto com a mo esquerda segura o fruto pela coroa, com a direita secciona, com o faco, a haste a 5-6 cm abaixo da fruta. As frutas colhidas vo sendo entregues a outro coletor, que encarregado

10 de transport-las em cestas at a margem do carreador. Necessita-se, em mdia, trs carregadores para cada colhedor. A produtividade mdia de 30.000 a 40.000 frutos/ha/ano. Em geral, a comercializao do abacaxi feita com o fruto ainda no campo, antecipadamente e a granel. Leva-se em conta o tamanho e a aparncia do fruto, de acordo com os padres das variedades. Para os grandes mercados consumidores ao natural, seguem os frutos de primeira qualidade, sadios e com peso igual ou acima de 1,5 kg. Os que no atingem esse padro so vendidos nos mercados locais, perto das regies produtoras, ou so destinados industrializao. 2.2.3. Caracterizao da Fruta Em vista da grande comercializao do abacaxi, tanto no mercado interno como internacional, e tambm para a indstria, e cuja produo agrcola vem aumentando de ano para ano, os produtores devem procurar manter um padro de qualidade da fruta a fim de garantir sua comercializao. Para isso, necessrio que sejam observadas as seguintes caractersticas: -COR: a cor revela nas frutas o seu grau de maturao, o que, apesar de ser uma apreciao subjetiva, permite distinguir a qualidade do produto. O abacaxi dever apresentar uma colorao uniforme, porm sem estar muito maduro, o que indesejvel, tanto para a indstria como para o mercado consumidor. -TAMANHO: a uniformidade de tamanho bastante importante, principalmente para a indstria, onde os diferentes comprimentos e dimetros das frutas afetam regulagem das mquinas (ginaca, principalmente). - SABOR: importante conhecer a relao Brix/acidez total titulvel da variedade que vai ser comercializada ou industrializada. Essa relao varia de ano para ano, de acordo com as condies climticas (principalmente), e tambm com a estao do ano. H, portanto, grandes variaes entre as safras de vero e de inverno . -FORMA: esta caracterstica afeta o descascamento mecnico e, portanto, o rendimento, devendo ser a fruta de forma cilndrica para evitar uma perda excessiva de polpa nessa operao. A variedade Smooth Cayenne de origem havaiana, apresenta frutas a

11 mais uniformes e cilndricas do que a variedade Prola (brasileira), que vem facilitar e muito o trabalho das ginacas e um menor desperdcio de fruto na indstria de compotas. 2.2.4. Composio Qumica O abacaxi apresenta uma variao muito grande na sua composio qumica, de acordo com a poca em que produzido. De modo geral, a sua produo ocorre no vero, sendo sua colheita uniformizada atravs da induo qumica do seu florescimento. Neste caso, as frutas apresentam maior teor de acares e menor acidez. Por outro lado, as frutas produzidas fora de poca, ou seja, as frutas tempors , apresentam alta acidez e baixo teor de acares, visto a produo ocorrer nos meses que a temperatura ambiente baixa . O valor nutricional das frutas de abacaxi depende, principalmente, dos seus acares solveis, das vitaminas e dos sais minerais que contm, uma vez que os teores de protenas e de lipdeos so relativamente baixos. O abacaxi uma fruta deliciosa, muito apreciada em todos os pases tropicais; sua polpa sucosa, saborosa e ligeiramente cida muito refrescante. Ao lado das qualidades organolpticas, que o distinguem universalmente, h seu alto valor diettico, comparvel ao das melhores frutas tropicais. O suco de abacaxi um alimento energtico, pois um copo do mesmo propicia cerca de 150 calorias ao organismo humano. O teor de acares varia em geral em torno de 12 a 15%, dos quais aproximadamente 66% so de sacarose e 34% de acares redutores. As cinzas, que apresentam 0,4-0,6% do peso total, so ricas em bases, principalmente em potssio, ao qual seguem o magnsio e clcio, geralmente em partes iguais, e essas caractersticas permanecem em sua maioria nos resduos triturados do abacaxi para o processamento da bromelina, sendo ento este resduo de grande interesse por suas caractersticas de alta riqueza nutricional. 2.2.5. Processamento da Fruta O comrcio mundial de abacaxi in natura atingiu 700 mil toneladas, e o comrcio de abacaxi transformado em suco ou conserva equivalente a quatro milhes de toneladas de frutas frescas (AGRIANUAL, 2000). O fruto presta-se tanto para consumo ao natural como para processamento industrial em suas mais diversas formas (pedaos em calda, suco, pedaos cristalizados,

12 gelias, licor, vinho, vinagre e aguardente). Como subproduto da sua industrializao, pode-se obter lcool, cidos ctrico, mlico e ascrbico, raes para animais e bromelina (enzima proteoltica de uso medicinal). O talo da planta pode ser aproveitado para extrao de bromelina, sendo tambm fonte de amido. As folhas podem ser utilizadas para a obteno de fibras. De alto valor diettico, a polpa do abacaxi energtica (150 calorias por copo de suco); contm boa quantidade das vitaminas A e B1 e da C, no contendo a D. Contm, ainda, a bromelina que favorece a digesto. A fruta em calda, que o principal produto industrializado do abacaxi, ocupa, atualmente, a segunda posio em vendagem no mercado internacional, logo em seguida do pssego em calda. As tcnicas industriais de preparo de fatias e pedaos para enlatamento so conhecidas internacionalmente. Linhas completamente automatizadas encontram-se em vrias fbricas espalhadas pelo mundo tais como Hava, Formosa, Filipinas, Tailndia, Austrlia, frica do Sul e outros pases, no mundo todo. Essas linhas, com capacidade de 80 a 120 frutas por minuto, apresentam, atualmente, rendimentos prximos de 46% de partes slidas da fruta para enlatamento. 2.2.6. Produtos e Subprodutos do Processamento. Na grande indstria do abacaxi, a industrializao da fruta integrada. Isso significa que no existe uma indstria trabalhando com um ou dois produtos, mas procurase tirar o mximo de rendimento da fruta em relao ao produto principal (fruta em calda) e aos produtos de carter secundrio (como o caso do suco simples e do suco concentrado), e mesmo os subprodutos, como o caso especfico do suco da casca e resduos e da rao, esta ltima utilizada na alimentao animal. O processamento tem incio com a lavagem das frutas, que chegam do campo em grandes recipientes ou carretas, j desprovidas da coroa que pode ser utilizada para o replantio da fruta. A seguir, as frutas so conduzidas por meio de transportadoras para uma seo superior onde a lavagem completada. Um sistema de transportadores conduz as frutas lavadas para um segundo pavimento, no qual, feito um corte em uma das extremidades da fruta. Essa operao tem por finalidade principal eliminar as partes

restantes da coroa e talo, a fim de facilitar o trabalho posterior da mquina ginaca. Essas

13 partes eliminadas, seguem, por meio de um transportador, para a linha de processamento de rao. Na etapa seguinte, ainda no segundo pavimento, as frutas so selecionadas por tamanho, seleo esta que feita por meio de roscas sem fim, dispostas de tal forma que permitem a classificao das frutas em trs tamanhos distintos: grande, mdio e pequeno. As frutas de tamanho mdio constituem aproximadamente 60 a 65% do total de abacaxis que entram na usina de processamento. O processo tem por finalidade dar um fluxo contnuo s fases posteriores, reduzindo assim a capacidade ociosa da ginaca. Esta mquina cujo nome foi dado em homenagem a seu inventor o engenheiro havaiano de sobrenome Ginaca, completamente automatizada e de grande capacidade (80-120 frutas por minuto), executando uma srie de operaes sucessivas, e que so as seguintes: - corte das extremidades, descascamento da fruta e encaminhamento do cilindro etapa seguinte do processamento. O equipamento tambm dotado de um dispositivo raspador, que erradica a polpa da casca e das

extremidades do fruto. A maior parte deste material erradicado (polpa erradicada) se destina produo de crush (espcie de salada de frutas) e uma pequena parte produo de suco . Nas ginacas de produo mais antiga tambm havia um dispositivo para remoo do miolo do cilindro da fruta Dentro de um sistema mais moderno, conhecido como sistema de processamento de abacaxi em dois dimetros da Honiron, a remoo da parte central do cilindro da fruta feita em fase posterior. Esse sistema permite maior rendimento industrial em termos slidos, pois o cilindro cortado em fatias quando ainda inteiro, isto , com miolo, e estas apresentam maior resistncia mecnica remoo do miolo, reduzindose assim, o nmero daquelas quebradas. Nas diversas linhas de ginaca geralmente encontradas nas grandes indstrias de abacaxi do mundo, a mquina usualmente regulada para o processamento de frutas dos trs tamanhos anteriormente mencionados. Pode-se ento observar, uma boa fonte da matria-prima a ser utilizada no processo de recuperao e purificao de enzimas do abacaxi, visto que, uma das maiores

14 dificuldades da indstria de processamento do fruto a venda do suco, obtido como subproduto e posteriormente reprocessado, tratado, pasteurizado e embalado para comercializao em um mercado que no responde produo de suco devido ao seu alto custo ocasionado pelo tratamento. Do total de frutos produzidos nos Estados Unidos da Amrica em 2003, aproximadamente 73% foram industrializados (FAO, 2005) e os restantes 27% consumidos na forma fresca. Do total mundial industrializado, 46% foram comercializados no mercado mundial, com seu valor de mercado quintuplicado graas aos custos de processamento, embalagem e distribuio. O Brasil diferencia-se completamente dos grandes produtores e consumidores mundiais de abacaxi, pois quase toda sua produo consumida na forma fresca, sendo a quantidade industrializada insignificante (BERTEVELLO, 2001). Portanto, uma das principais fontes de matria prima para a extrao de enzimas no Brasil, no seriam os subprodutos do processamento e sim os resduos agrcolas, especialmente a sua haste (stem) que tem demonstrado bons resultados nos mais recentes estudos de extrao e purificao (RABELO, 2004) e nas aplicaes teraputicas da Bromelina (MYNOTT, 1999). Uma maneira que vem sendo estudada para a utilizao dos subprodutos a silagem dos resduos do abacaxi. A silagem de resduos industriais de abacaxi, por apresentar caractersticas nutricionais prximas da silagem de milho, poderia substitu-la como fonte de volumoso para animais em confinamento. Alm da qualidade nutricional, um produto de baixo custo por ser considerado um resduo, diferente de outros freqentemente utilizados, como por exemplo, a silagem de milho, que apresenta altos valores no perodo de entressafra do milho, sendo que neste perodo tambm h queda na produo de forragem. Dessa maneira, o produtor passaria a dispor de mais uma alternativa de produto, seja durante o perodo de escassez de forragem, ou como alimento para confinamento.(PRADO et all, 2003). A composio qumica da silagem de resduos industriais de abacaxi varia em funo do tipo de resduo gerado, ou seja, de acordo com o produto da indstria, compondo assim, o resduo, de diferentes partes da planta ou do fruto. RODRIGUES & PEIXOTO (1990) utilizaram frutos descartados sem coroa, cascas e miolos, como resduo ensilado, e obtiveram valores de 12,93% de matria seca (MS); 3,95% de protena bruta (PB); 62,76%

15 de fibra em detergente neutro (FDN) e 41,27% de fibra em detergente cido (FDA). Em outro trabalho, RODRIGUES & PEIXOTO (1990), utilizando outro tipo de resduo, no ensilado, composto de frutos descartados, casca, miolo e coroa. Por outro lado, alguns trabalhos tm sido desenvolvidos com o uso de resduos de plantas de abacaxi aps colheita. Este resduo constitudo da parte superior da planta do abacaxi aps a colheita do fruto. MLLER (1978) observou que a composio qumica dos resduos das plantas do abacaxi e dos resduos da indstria de conserva nutricionalmente diferente. Todos estes dados reforam a idia que subprodutos poderiam ser usados na alimentao animal, principalmente pelo fato de contriburem para minimizar os custos de produo, lembrando sempre que a silagem oriunda de frutos contm alta porcentagem de gua, que acaba dificultando o transporte dos mesmos, devendo a propriedade localizar-se prxima indstria geradora de resduos. Da mesma forma, este produto pode apresentar deficincia em energia e protena ou ambos, exigindo o fornecimento de uma fonte de suplementao adequada (PRADO, 2003) Segundo Prado (2003) a silagem de resduos industriais de abacaxi apresentou composio qumica e caractersticas fermentativas (cor, odor e pH) favorveis, podendo ser utilizada como alimento alternativo para terminao de bovinos de corte, em confinamento, sem alterar o desempenho do animal ou o rendimento da carcaa. 2.3. Consumo de Bromelina. Para a utilizao de bromelina, a indstria alimentcia no se apresenta como um mercado atrativo pois, vem sendo largamente utilizada a papana no amaciamento de carnes e a grande barreira seria romper o cartel de indstrias produtoras da enzima, pois o consumidor s compra a carne amaciada ou o amaciante de carnes sem preocupar-se com o princpio ativo do produto. Tambm, atualmente a frica do Sul vem produzindo e exportando papana a preos muito reduzidos. A indstria de cervejas, onde a bromelina pode ser usada como clarificante, aboliu a utilizao da mesma, alegando que esta enzima produz resduos de difcil retirada dos tanques de armazenagem do produto. A concentrao principal est na indstria farmacutica brasileira. Bromelina uma mistura que contm enxofre, protena da enzima digestiva (enzima proteoltica ou protease), obtida no caule da planta do abacaxi. Bromlia foi reconhecida como agente

16 medicinal em 1957 e, desde ento, mais de 200 documentos integraram a literatura medicinal. A Bromelina tem sido muito bem documentada pelos seus efeitos em todas condies inflamatrias, alm de ter sua eficcia provada em vrios outros problemas de sade tais como: angina, indigesto e problemas respiratrios. Introduzida pela primeira vez como composto teraputico em 1957, a ao da bromelina inclui: inibio da agregao plaquetria, atividade fibrinoltica, ao antiinflamatria, ao antitumoral, modulao de citocinas e imunidade, propriedade debridante de pele, aumento da absoro de outra drogas, propriedades mucolticas; facilitador da digesto, acelerador da cicatrizao, melhora da circulao e sistema cardiovascular. Bromelina bem absorvida por via oral e a evidncia disponvel indica que sua atividade teraputica aumenta com as doses mais altas. Apesar de todos os seus mecanismos de ao ainda no estarem totalmente esclarecidos, foi demonstrado que um seguro e efetivo suplemento. A bromelina parece ter tanto ao direta quanto indireta, envolvendo outros sistemas enzimticos, ao exercer seus efeitos antiinflamatrios. (MATTOS, 2005). A bromelina, uma protease sulfdrica presente nesta espcie, , talvez, o enfoque cientfico mais estudado. Isto se d pela importncia desta protena na farmacologia, onde foi registrada sua interferncia no crescimento de clulas malignas, inibio de cogulos, atividade fibrinoltica e ao antiinflamatria (TAUSSIG & BATKIN, 1998). O Ananas comosus um produto fitoterpico com ao mucoltica e fluidificante das secrees brnquicas e das vias areas superiores (HEBRON, 2005). Contribui para a melhor fluidificao das secrees mucosas do paciente, graas s propriedades mucolticas e fluidificantes destas enzimas, conforme pesquisas realizadas pela Universidade Federal de Pernambuco, Universidade de Pernambuco e Universidade Federal da Paraba. As enzimas bromelina, ribonuclease, glucose oxidase, invertase e diastase contidas no Ananas comosus, catalizam a quebra de ligaes entre as ligaes peptidicas, pela incorporao de molculas de gua, facilitando, assim a fluidificao do muco espesso.

A bromelina uma endopeptidase que no necessita de sistema precursor para desempenhar suas atividades farmacolgica e teraputica. Alm disso, o Ananas comosus contm os ctions divalentes dos oligoelementos magnsio, mangans, zinco, ferro e clcio, que atuam como cofatores nas funes das referidas enzimas.

17 As enzimas proteolticas so aplicadas em formulaes tpicas com a finalidade de reduzir a espessura da camada crnea da pele por hidrolisar, em pontos especficos, a queratina cutnea. um peeling mais suave e seguro, comparado aos tradicionais peelings qumicos, e mais eficaz que os mtodos fsicos comumente usados em formulaes cosmticas (RACINE, 2004). A Bromelina tambm usada em forma de soluo para preparao de suspenso de hemcias a ser utilizada na tipagem sangunea . O principal foco industrial da produo de bromelina a indstria faramcutica que um dos setores que mais investe em tecnologias e novos produtos, tendo realizado uma previso de investimentos no perodo de 1997 2000 de US$ 1.300 milhes (ABIFARMA). Reflexos do plano econmico, do primeiro mandato do governo de dos

Fernando Henrique Cardoso, que melhorou substancialmente o poder aquisitivo brasileiros que

esto investindo em sade e medicamentos, o que vem refletindo no

aumento da expectativa de vida pois, segundo o IBGE, o nmero de idosos atualmente o dobro do registrado em 1980 (CESAR, 2000). Ainda segundo Csar (2000), at bem pouco tempo atrs um novo remdio que era lanado no mercado brasileiro no tinha a sua frmula protegida. Ento, logo que era lanado, sem proteo legal, um concorrente logo aparecia. A proteo legal muito importante na indstria de farmacolgicos pois chega-se a gastar 15 anos com pesquisas, o que gera um investimento de capital em torno de US$ 700 milhes . Com esta proteo que dura 20 anos at a patente ser de conhecimento pblico. 2.4. Separao e Purificao de Protenas Muitas tcnicas tem sido utilizadas para a recuperao e purificao de protenas e enzimas de origem animal, vegetal ou microbiana. Tcnicas mais antigas como a precipitao, extrao com solventes e filtrao geralmente tem alto poder de concentrao e baixa purificao e tcnicas mais modernas com a cromatografia de afinidade, troca inica ou gel-filtrao, eletroforese, extrao em duas fases aquosas, extrao com micela reversa, recuperam e purificam, muitas vezes at a homogeneidade. O processo de separao e purificao de bioprodutos, tambm chamado downstream processing, atualmente um segmento muito importante na indstria, pois

18 pode chegar a representar de 80 a 90% do custo de produo. Portanto, o desenvolvimento de um processo eficiente e de baixo custo de extrema importncia (BELTER et al, 1998). A grande questo ao iniciar um processo de purificao o grau de pureza exigido para a protena. Protenas para fins teraputicos ou de uso direto em humanos necessitam de um alto grau de pureza, o que no necessrio para as enzimas que sero aplicadas em processos industriais. Em uma purificao em larga escala, o processo normalmente consiste de 4 a 6 etapas que podem ser divididas em dois grupos. O primeiro formado pelos processos de recuperao da protena: separao e ruptura de clulas, separao dos fragmentos e concentrao da protena. No segundo grupo o objetivo purificar a protena, utilizando-se das etapas de pr-tratamento ou isolamento primrio, purificao de alta resoluo e refinamento final. A purificao de protenas encontra muitas dificuldades, do ponto de vista tcnico, e exige um elevado nmero de etapas. Por exemplo, a remoo dos fragmentos das clulas difcil devido ao pequeno tamanho das partculas e viscosidade da soluo. As etapas de concentrao podem levar a baixos rendimentos e reprodutibilidade limitada. Os procedimentos de alta purificao, como a cromatografia, limitado pela escala de operaes e pelo custo das resinas. Por isso, a extrao lquido-lquido vem despertando tanto interesse a fim de ser utilizada como uma etapa intermediria de separao, que substitui mtodos de separao mais caros ou diminui o nmero de etapas de separao necessrias ao processo (RABELO, 1999). A purificao e separao de protenas baseadas nos princpios de partio em sistemas de duas fases aquosas tem sido muito desenvolvido nos ltimos anos. Esta tcnica de extrao parece ser especialmente adequada para as primeiras etapas dos procedimentos de separao, mas pode substituir etapas cromatogrficas ou ser aplicada antes da cromatografia. (HUSTEDT et al, 1985). 2.4.1. Precipitao por Etanol A separao de protenas de meios aquosos por precipitao um dos mtodos mais tradicionais para a recuperao e parcial purificao dessas biomolculas. Este mtodo implica na alterao da estrutura tridimensional da protena, desconformando-a, e pode ser agressivo, sendo aplicado somente quando a ressolubilizao do precipitado possvel. Os precipitados de protenas so agregados de molculas proticas, grandes o suficiente para

19 serem decantados ou centrifugados. uma tcnica de fcil ampliao de escala e com viabilidade para operao contnua a custos aceitveis para grandes volumes. Porm, uma tcnica mais de concentrao do que propriamente de purificao. A solubilidade das protenas depende da distribuio de grupos ionizveis, zonas hidrofbicas e hidroflicas na superfcie da molcula. Tais caractersticas so responsveis por interaes polares com o solvente aquoso, interaes inicas com os sais presentes no meio, alm da repulso eletrosttica entre molculas de mesma carga. A presena de sais, solventes orgnicos e o pH so fatores importantes na solubilidade das protenas (SCOPES, 1994). A adio de solventes orgnicos miscveis tais como etanol, metanol ou acetona a um meio aquoso contendo protenas causa uma variedade de efeitos, os quais, combinados provocam a precipitao da protena. O solvente destri a camada de hidratao hidrofbica em torno das zonas hidrfobas e passa a circundar tais regies devido maior solubilidade destas em meio ao solvente. Com isso, as regies carregadas com carga positiva ou negativa da superfcie da protena podem interagir, atraindo-se umas s outras, formando agregados. As interaes do solvente com as zonas hidrfobas internas causam uma desconformao irreversvel da protena. Isto pode ser minimizado pela reduo da temperatura at valores da ordem de zero ou abaixo, pois a baixas temperaturas a flexibilidade da molcula menor, reduzindo a capacidade de penetrao do solvente e a desnaturao irreversvel das protenas, sendo que, os lcoois de cadeia mais longa apresentam maior efeito desnaturante do que os de cadeia mais curta (SCOPES, 1994). Uma carga global prxima a zero na superfcie da protena, o que acontece no ponto isoeltrico das protenas (pH =pI= ponto isoeltrico), minimiza a repulso eletrosttica podendo causar precipitao por interao entre as zonas hidrofbicas, e esse processo chama-se precipitao isoeltrica, e realizado apenas com a correo do pH. De modo geral, a precipitao por qualquer mtodo escolhido facilitada no ponto isoeltrico da protena. A adio de sais neutros, principalmente (NH4)2 SO4 a elevadas concentraes 1,5 a 3,0 M, reduz a disponibilidade da gua devido hidratao dos ons, criando condies para a precipitao, a qual ocorre principalmente por interao das zonas hidrfobas. O sal e outros precipitantes no provocam a precipitao de todas as protenas pois o seu efeito o de reduzir a solubilidade. Com isso, a concentrao de sal ou solvente

20 que provoca a precipitao varia com a concentrao da protena e a presena de outras protenas contaminantes. Este fato aproveitado para a realizao de um fracionamento. A precipitao uma operao unitria muito comum, e amplamente utilizada na separao de protenas. A vantagem da utilizao do etanol como agente de precipitao encontra-se na abundncia e baixo custo deste solvente, tornando a recuperao da enzima economicamente interessante, alm do fato de que o etanol pode ser reciclado ao processo por uma operao de destilao, reduzindo impactos ambientais pela liberao de efluentes, como o caso da precipitao com sulfato de amnio. As desvantagens do uso de etanol so: a necessidade de operao em baixa temperatura para minimizar a desnaturao da enzima, e o perigo de inflamabilidade deste solvente. 2.4.2 Extrao Lquido-Lquido Uma situao comum na Engenharia Qumica a separao dos constituintes de uma mistura lquida homognea composta de dois ou mais componentes. Para realizar esta separao existem vrios mtodos cuja aplicao limitada pelas caractersticas fsicas e qumicas dos componentes da mistura a ser separada, pelos custos do processo de separao e pelas condies disponveis para a implantao do processo escolhido. A extrao lquido-lquido um processo que envolve a transferncia de massa entre dois lquidos imiscveis. Na extrao lquido-lquido, a separao de um componente de uma soluo lquida homognea ocorre pela adio de um constituinte lquido, insolvel ou parcialmente solvel, o solvente, no qual o componente a ser extrado da soluo, o soluto, preferencialmente solvel. O soluto difunde-se no solvente com uma velocidade caracterstica at atingir as concentraes de equilbrio em cada uma das fases formadas. Este processo de separao baseado na distribuio do soluto entre as fases e a miscibilidade parcial dos lquidos (RABELO, 1999). 2.4.2.1. Sistemas de Duas Fases Aquosas Na escolha de meios de extrao para aplicaes em biotecnologia, vrios critrios devem ser considerados, j que nesta rea alguns parmetros tais quais, solubilidade e estabilidade dos compostos so importantes e no podem ser desprezados. Entre estes critrios deve-se citar (PORTO, 1998): O meio no deve ser txico ao sistema biolgico nem ao homem;

21 quantidade; Ser possvel de esterilizar; Ser imiscvel ou parcialmente miscvel com solues aquosas; No deve apresentar tendncias de formao de emulses estveis com A recuperao do bioproduto a partir do meio extrator deve ser fcil; Deve ter baixo custo e estar disponvel comercialmente em grande

materiais biolgicos; No ser inflamvel.

Alm disso, em processos de extrao lquido-lquido aplicados a quaisquer sistemas, imprescindvel que os solventes escolhidos formem duas fases (sejam imiscveis ou parcialmente miscveis) e tenham densidades diferentes. Alm destes fatores a separao entre as fases deve ser rpida. Nos processos biotecnolgicos, em que se opera com biomolculas ou clulas, existe um nmero muito limitado de solventes adequados a serem usados. Assim, a introduo dos sistemas de duas fases aquosas em processos biotecnolgicos uma alternativa que possibilita o emprego da extrao lquido-lquido nestes processos, j que estes sistemas caracterizam-se por ajustar-se aos critrios requeridos pelos processos de bioseparao (MATIASSON et al, 1987). O uso de solventes orgnicos , normalmente, limitado pelas caractersticas hidroflicas dos produtos de fermentao, levando necessidade de utilizao de elevadas razes entre as fases orgnica e aquosa, devido aos baixos coeficientes de partio dos produtos em relao ao solvente orgnico. Alm disso, os solventes orgnicos so geralmente txicos para as protenas e, tambm, provocam desnaturao das mesmas. Sistemas de duas fases aquosas formam-se pela adio de solues aquosas de dois polmeros hidroflicos, como PEG (polietileno glicol) e dextrana ou de um polmero e um sal, como PEG e fosfato de potssio. A fase mais leve rica em polietileno glicol enquanto a fase mais pesada enriquecida com dextrana ou sais. Os polmeros e os sais so solveis em gua, mas so incompatveis entre si e se separam em duas fases (ALBERTSSON, 1986). Eles constituem um meio conveniente e adequado para a extrao de substncias de origem biolgica pois a constituio das fases, entre 70% e 90% de gua, proporciona um

22 ambiente ameno para o trabalho com compostos biologicamente ativos, preservando sua estabilidade molecular e permitindo, assim, o seu processamento neste meio (COIMBRA,1995). A separao espontnea, em fases distintas, devido a adio de solues aquosas de dois polmeros foi inicialmente observada pelo microbiologista holands Beijerinck, em 1956, ao misturar gar com gelatina ou amido solvel. A fase inferior era rica em gar e a superior em gelatina (ou amido). Em 1956, Albertsson constatou que sistemas formados por polmeros solveis e solventes orgnicos tambm possibilitam a partio de materiais biolgicos, ou seja, permitiam que uma terceira substncia introduzida no sistema fosse coletada, preferencialmente, numa das fases por ajuste de parmetros fsico-qumicos. Devido a esta particularidade os sistemas de duas fases aquosas so empregados no isolamento e purificao de biomolculas de importncia comercial, tais como, protenas, vrus, fragmentos de membranas e organelas celulares. De acordo com ALBERTSSON (1986), possvel ter uma separao bastante seletiva de substncias usando sistemas aquosos de polmeros. Os sistemas de duas fases aquosas formados por PEG-Dextrana- gua e PEG-Salgua tm sido, nos ltimos anos, os mais freqentemente estudados e utilizados para purificao de um grande nmero de biomolculas (DIAMOND et al, 1992) ALBERTSSON (1986) reconheceu a possibilidade de utilizarem-se sistemas de duas fases aquosas como um mtodo de separao aplicado a materiais biolgicos sob condies que preservam a sua atividade biolgica. Alm disso, os sistemas de duas fases aquosas so usados tambm na determinao de propriedades superficiais de biomolculas, tais como, carga e hidrofobicidade. Assim, ao lado de trabalhos no campo tecnolgico existe tambm o interesse na utilizao da partio como meio de preparao de amostras para uso em tcnicas analticas. Para tanto, so aplicados os diferentes tipos de sistemas de duas fases aquosas existentes. A variada faixa de aplicabilidade dos sistemas de duas fases aquosas tem estimulado o estudo a fim de estabelecer fundamentos para o trabalho com estes sistemas, alm de identificar os mais adequados para a separao de diferentes biomolculas. (GUAN et al, 1993)

23 ALBERTSSON (1971) comparou sistemas de duas fases aquosas com os solventes mais convencionais, de acordo com a natureza hidrofbica, hidroflica. A fase rica em sal mais hidroflica e a fase rica em PEG( polietilenoglicol) mais hidrofbica. Considera-se que a separao de molculas, incluindo protenas, em sistemas de duas fases aquosas dependente das caractersticas da superfcie molecular dos compostos a serem particionados tais como: carga, tamanho e propriedades hidrofbicas. A extrao com sistemas de duas fases aquosas oferece certas vantagens para o processamento em larga escala. Algumas delas so: o elevado rendimento, a faixa de trabalho prxima do equilbrio, a fcil ampliao de escala (scale up) e o processamento contnuo. Com isto, o interesse na aplicao de sistemas de duas fases aquosas deixou de se restringir biologia celular para concentrar-se na anlise dos fundamentos da separao de fases e da partio de protenas, na reduo dos custos do processamento, no aumento da seletividade da extrao (por exemplo, pela adio de ligantes), na pesquisa de novos componentes formadores das fases, especialmente para substituir a dextrana, que um componente de elevado custo, e na operao em mltiplos estgios (COIMBRA, 1995). 2.4.2.2. Tipos de Sistemas de Duas Fases Aquosas. Existem vrias substncias que podem formar duas ou mais fases aquosas ao se misturarem. Estas substncias podem ser polmeros ou compostos de baixo peso molecular, como os sais, que permitem a separao de fases. Os sistemas de duas fases aquosas podem ser divididos em quatro grandes grupos (ALBERTSSON, 1986): a) dois polmeros no inicos exemplos: PEG/ficoll, PEG/Dextrana, PEG/polivinil lcool, polipropileno

glicol/dextrana, metil celulose/hidroxipropildextrana, ficoll/dextrana; b) um polieletrlito e um polmero no inico exemplos: sulfato dextrana de sdio/polipropileno glicol, carboximetildextrana de sdio/PEG, carboximetilcelulose de sdio/ metil celulose; c) dois polieletrlitos

24 exemplos: sulfato dextrana de sdio/carboximetildextrana de sdio,

carbometildextrana de sdio/carboximetil celulose de sdio; d) um polmero no inico e um composto de baixo peso molecular exemplo: polipropileno glicol/fosfato de potssio, PEG/fosfato de potssio, metoxipolietileno glicol/fosfato de potssio, polipropileno glicol/glicose, PEG/glicose, PEG/sulfato de magnsio, PEG / citrato de sdio. H ainda novos sistemas formados por PEG/FeSO4 e PEG/Na2SO4 que apresentam algumas vantagens em relao aos sistemas com sais de fosfato e citrato, como, por exemplo, o baixo nvel de PEG na fase salina, que reduz as perdas do PEG e facilita a purificao das biomolculas e a reciclagem do PEG. Nesse tipo de sistema foi observado que a concentrao de sal na fase PEG e a concentrao na fase salina tendem a diminuir com o aumento da temperatura (PATHAK et al, 1991). Apesar da grande variedade de sistemas de duas fases aquosas, a quantidade de sistemas realmente aplicveis para extrao lquido-lquido fica reduzida basicamente aos formados por PEG/sal (fosfato/citrato/sulfato) e PEG/dextrana, quando se levam em considerao fatores importantes do ponto de vista industrial, como custo e possibilidade de reciclagem dos reagentes, tempo de separao das fases, possibilidade de esterilizao, atoxicidade e faixa de aplicao. Devido a tais fatores, os estudos mais recentes tendem a concentrar-se mais nesses dois sistemas, sendo o sistema PEG/sal o mais estudado devido ao seu baixo custo e menor tempo de separao das fases em relao ao sistema PEG/dextrana (COIMBRA, 1995). 2.4.2.3. Sistema PEG/Sal A formao de sistemas PEG/sal foi primeiro observada por Albertsson nos anos 50, mas os fundamentos tericos ainda no so bem explicados. Eles foram introduzidos para a aplicao prtica da separao de protenas em larga escala devido maior diferena de densidade entre as fases, menor viscosidade e menores custos; levando a uma separao mais rpida que para os sistemas PEG/dextrana. A aplicao industrial de sistemas PEG/sal foi incentivada e desenvolvida pela disponibilidade de separadores comerciais que permitam separaes de protenas continuamente e de forma mais rpida. (KULA, 1990 e FRANCO,1992).

25 Para sistemas PEG/sal, os efeitos de salting out parecem atuar aumentando o comprimento da linha de amarrao, retirando as protenas da fase salina para a fase rica em PEG, ou, se a solubilidade da protena na fase rica em PEG no for suficiente, elas tendem a precipitar na interface. Os limites de solubilidade e salting out so dependentes das protenas, portanto uma resposta diferencial esperada quando uma mistura de protenas manipulada (KULA,1982). 2.4.2.4. Polietileno Glicol O polietileno glicol, HO-(CH2CH2)n-CH2CH2OH, um polister sinttico neutro, linear ou de cadeia ramificada, disponvel numa grande variedade de pesos moleculares, de poucas centenas milhares de daltons. Solubiliza-se em gua e em diferentes solventes orgnicos. A sua solubilizao em gua atribuda ligao das molculas de gua a muitas ou todas as molculas em torno da cadeia de polietileno. Essa ligao ocorre pelo mecanismo de pontes de hidrognio. Ligaes deste tipo so relativamente fracas e podem ser quebradas de vrias maneiras. O PEG tambm conhecido pelos nomes comerciais de poliglicol E, carbowax E, dependendo da empresa que o fabrica. Para pesos moleculares acima de 20000 daltons so denominados xidos de polietileno, PEO. So fornecidos na forma de solues incolores estveis ou pastas se possurem pesos moleculares menores que 1000. Os de pesos moleculares elevados, acima de 1000, so encontrados na forma de p ou de flocos brancos. Podem ser estocados temperatura ambiente, embora a 40 C a ocorrncia de oxidao em solues seja retardada. A oxidao do PEG, detectada pela diminuio do pH devida a liberao de grupos cidos, altera a colorao da soluo para marrom (COIMBRA, 1995). Sendo no antignico nem imunognico foi aprovado pelo FDA, Food and Drug Administration. Devido sua capacidade de formao de uma camada protetora, o PEG pode diminuir a taxa de rejeio de materiais em sistemas biolgicos em humanos. Devido s suas propriedades, o PEG tem uma srie de aplicaes farmacuticas, biolgicas e bioqumicas. Ele pode formar um composto ativado PEG-protena que mantm a protena ativa e diminui consideravelmente a reao imune, alm de aumentar o tempo de vida de soros sangneos. Ele pode ser ligado tambm a superfcies, formando uma camada protetora e biocompatvel, para ser empregado em aparelhos de diagnsticos, substituio

26 de artrias e dispositivos relacionados a sangue. O PEG protetor pode ser usado tambm para evitar a adsoro de protenas em anlises bioqumicas de eletroforese por zona capilar, que uma importante tcnica analtica empregada em bioqumica. Alm disso, o PEG pode ser usado com lipossomas para a liberao controlada e distribuio seletiva de medicamentos, pois os lipossomas sem o PEG podem ser rapidamente atacados e eliminados do corpo humano, sem cumprir a sua funo. Por ser solvel em muitos solventes orgnicos, o PEG pode ser utilizado para solubilizar enzimas neste meio sem desnatur-las atravs da formao de uma camada protetora. Alm disso, compostos insolveis em gua podem tornar-se solveis quando ligados ao PEG, como por exemplo substratos de enzimas, cofatores, corantes, etc. (HARRIS, 1992). 2.4.2.5. Recuperao de Sais e Polmeros A possibilidade de reutilizao dos constituintes das fases deve ser considerada ao se efetuar o scale up pois os custos dos componentes das fases aumentam linearmente com a escala de produo (KRONER et al., 1982). A reciclagem de PEG pode ser facilmente integrada ao processo, chegando a nveis de recuperao em torno de 90 a 95% (HUSTEDT et al.,1988). As tcnicas de recuperao de PEG mais usadas so a ultrafiltrao e a extrao com solvente orgnico seguida de evaporao (COIMBRA, 1995). O descarte de sais geralmente mais problemtico. Em sistemas contendo clulas, cido nucleico, protenas solveis e insolveis, a separao de sais da fase primria por tcnicas de separao mecnica, tais como a centrifugao ou ultrafiltrao muito difcil de ser conduzida eficientemente. A eletrodilise considerada um mtodo geral para a reciclagem de sais e para a dessalinizao da fase rica em PEG (HUSTEDT et al., 1988). Sais tambm podem ser recuperados usando uma mistura lcool aliftico-sal-gua. Especificamente para a separao de fosfato de potssio, um resfriamento abaixo de 60 C provoca a precipitao do sal, possibilitando a sua reutilizao (PAPAMICHAEL et al., 1992, COIMBRA,1995). GREVE & KULA (1991) recentemente estudaram maneiras de reciclar a fase fosfato desses sistemas para minimizar a poluio ambiental. A reciclagem da fase fosfato foi obtida pela sua separao atravs do uso de lcoois. O PEG da fase do topo rica em

27 PEG pode tambm ser reciclado, como pode ser visto em alguns trabalhos de KULA E HUSTEDT, principalmente. 2.4.3. Teoria de Formao das Fases Existem diversos modelos e teorias para a formao dos sistemas de duas fases aquosas que tentam prever a curva binodal dos sistemas polmero-polmero e polmero-sal. A existncia de tantos modelos deve-se ao pouco conhecimento das misturas lquido-lquido, principalmente de polmeros e solues eletrolticas. Na realidade no existe, at o momento, uma boa compreenso das teorias de misturas de lquidos. (CABEZAS Jr, 1996) A grande maioria dos modelos est contida em dois grupos bsicos: um grupo baseado na teoria da soluo de polmeros, e outro grupo com teorias adaptadas dos tratamentos termodinmicos do equilbrio de fase lquida. Dentro desses dois grupos, a modelagem de formao das fases pode ser dividida em quatro tipos: modelos baseados em expanso virial osmtica; modelos baseados na extenso da teoria de Flory-Huggins; modelos incorporando a teoria da equao integral como principal elemento; modelos que no se encaixam em nenhuma destas categorias, como o modelo de volume excludo. Existe ainda, o modelo Pitzer que o mais aplicvel para os sistemas polmero-sal. No caso dos sistemas polmero-sal, ainda no existem muitas teorias que se apliquem bem a este tipo de sistema, pois a maioria no considera o efeito dos eletrlitos nas solues, levando a um erro na modelagem da formao das fases. Alm disso, o estudo de tais sistemas ainda muito recente (CABEZAS Jr, 1996, WU et al, 1996, WALTER et al. 1991). As condies utilizadas para a modelagem da formao das duas fases so a igualdade dos potenciais qumicos de cada componente (o solvente, a gua, e os solutos, o polmero ou sal) nas duas fases aquosas e o balano de massa de cada componente, ambos aps o equilbrio entre as fases (CABEZAS Jr, 1996). O modelo de expanso virial osmtico ficou mais conhecido com o desenvolvimento do trabalho de Edmond e Ogston. O equacionamento matemtico e a interpretao fsica dos parmetros do modelo no so complicados. Existem dois tipos diferentes de expanso virial osmtica: uma a teoria de McMillan - Mayer e a outra a teoria de Hill. Na teoria de McMillan - Mayer, o solvente tratado como uma substncia sem caractersticas especiais, e, portanto considera-se somente a interao entre as

28 molculas do soluto, simplificando muito os mecanismos estatsticos do problema. Porm, aqui existe a necessidade de correo da presso pois como o solvente no importante, o seu potencial qumico deve ser constante e independente do soluto e portanto a presso no pode ser constante. Logo, para se utilizar esse modelo em condio de presso constante, deve-se acrescentar a presso osmtica da soluo. J a teoria de Hill no considera o solvente como uma substncia secundria e por isso os potenciais qumicos dos componentes podem ser determinados em temperatura e presso constantes (CABEZAS Jr, 1996). A teoria da trelia uma idia de modelagem macromolecular de misturas lquidas em termos de uma trelia de cristal. A idia principal que em uma trelia as macromolculas e as molculas pequenas podem se distribuir e redistribuir at que todos os arranjos ou configuraes possam ser estudados. Basicamente um estudo estatstico de como essas molculas podem ser arranjadas. A teoria de Flory-Huggins utiliza-se destes princpios. a mais utilizada em sistemas polmero-polmero, chegando a oferecer uma tima aproximao da curva binodal. A sua grande vantagem em relao a outras teorias a simplicidade aliada qualidade de suas previses e correlaes da formao de fases. Nesse modelo o sistema representado por uma trelia tridimensional, onde cada lado preenchido com uma molcula de solvente ou um segmento de um dos polmeros. O problema bsico obter a expresso da energia livre de Gibbs de mistura. Existem tentativas de adaptar esta teoria para os sistemas polmero-sal, porm estes modelos ainda no esto muito ajustados para a formao de fases neste tipo de sistema (CABEZAS Jr, 1996, WALTER et al, 1991, BROOKS et al., 1985, WU et al., 1996). Outra teoria muito utilizada nos sistemas polmero-polmero, para modelar a curva binodal, a do volume excludo, baseada em argumentos estatsticos e geomtricos: as duas fases esto saturadas com cada polmero, ou seja, todo o volume est ocupado pelas molculas dos dois polmeros e da gua de hidratao; a concentrao de cada polmero em cada fase determinada pela quantidade de molculas de cada polmero ajustado no volume da fase. A teoria geomtrica estatstica aplicada em sistemas polmero-polmero considera as seguintes hipteses: as molculas da mesma espcie esto distribudas randomicamente na fase homognea; a estrutura da soluo est geometricamente saturada em termos de tamanho e forma de todas as molculas do sistema; a existncia de interaes moleculares

29 no muda a natureza da distribuio molecular. A formao das duas fases explicada da seguinte forma: na situao monofsica, as molculas do soluto esto separadas e as molculas adicionais de soluto ainda podem ser inseridas no espao livre que existe. No ponto de separao de fase, as molculas do soluto esto bem prximas umas das outras e a soluo no aceita mais molculas adicionais de soluto. Quando a concentrao total do soluto aumenta, ocorre a formao de duas solues geometricamente saturadas e estruturalmente diferentes(GUAN et al., 1994). A teoria de Debye-Huckel a mais adequada para os sistemas que contm solues com cargas, como o caso dos sistemas polmero-sal ou sistemas polmero-polmero com sais. Essa teoria leva em considerao a distribuio dos ons na soluo para o clculo de potencial qumico e mais utilizada em solues com concentrao inica at 0,1 M, de onde se obtm timos resultados. medida que a concentrao inica aumenta, o desvio entre os resultados tericos e experimentais aumenta. Isso ocorre porque a teoria precisa apenas para solues diludas, onde o comportamento eletrosttico domina. Em solues concentradas, o comportamento eletrosttico reduzido devido presena de muitos ons que tendem a isolar as cargas eletrostticas entre si (CABEZAS Jr, 1996). O modelo virial de Pitzer um modelo que pode ser aplicado com sucesso em sistemas polmero-sal. Ele utiliza o excesso de energia livre de Gibbs nos sistemas polmero-sal, combinando os parmetros eletrostticos com a equao virial. Esse modelo uma extenso do modelo de Debye-Huckel, pois alm das interaes eletrostticas, considera-se o efeito da fora inica. Com a utilizao do termo da equao virial, o modelo leva em considerao tambm os solutos no-eletrlitos, como o caso dos polmeros, o que faz com que ele se adapte melhor aos sistemas polmero-sal (WU et al., 1996). 2.4.3.1. Tempo de Separao das Fases O tempo de separao das fases aps a mistura dos componentes depende do tipo de sistema. Sistemas contendo PEG/sal possuem um tempo de separao das fases muito menor que os sistemas PEG/dextrana devido densidade e viscosidade do sistema. Em sistemas dextrana/ficoll, o tempo varia de 1 a 6 horas pela ao da gravidade, enquanto em sistemas PEG/dextrana esse valor cai para 5 a 30 minutos, dependendo da concentrao e

30 do peso molecular dos polmeros. Nos sistemas PEG/fosfato, o tempo de separao entre as fases inferior a 5 minutos (COIMBRA, 1995). Outro fator que tambm influencia o tempo de separao a velocidade de coalescncia das pequenas bolhas que se formam durante a agitao. Quando se agita um sistema de fases de maneira a uniformiz-lo, inicialmente ocorre a formao de pequenas regies ricas em cada componente. Com o tempo, essas regies aumentam e separam-se em duas regies distintas (BAMBERGER et al, 1985). A posio em relao ao ponto crtico tambm exerce influncia no tempo de separao das fases. Nos sistemas prximos ao ponto crtico, o tempo de separao maior devido a uma pequena diferena de densidade. J no caso dos sistemas muito distantes do ponto crtico, a viscosidade aumenta devido ao aumento da concentrao do polmero, tornando a separao de fases mais lenta. 2.4.3.2. Fatores que Influenciam no Sistema de Fases Os principais fatores que influenciam no sistema de fases e

conseqentemente alteram o diagrama de fases so: peso molecular do polmero, concentrao dos componentes do sistema e temperatura. Quanto maior o peso molecular do polmero, menor a concentrao necessria para a formao de duas fases. Isso significa que a curva binodal desloca-se no sentido da regio monofsica medida que o peso molecular do polmero aumenta. Para um sistema polmero-polmero (PEG/dextrana, por exemplo) a curva binodal torna-se cada vez mais assimtrica a medida que a diferena entre os pesos moleculares dos polmeros aumenta. O peso molecular do polmero afeta tambm o tempo de separao das fases, mas tal problema pode ser minimizado pela centrifugao do sistema aps a mistura das fases (ALBERTSSON, 1986, ALBERTSSON et al., 1994). A massa molecular afeta tambm o comprimento da linha de amarrao, que tende a aumentar com o aumento da concentrao dos polmeros (FORCINITI et al., 1991). A concentrao dos componentes do sistema pode afetar a viscosidade e a densidade do sistema, causando diferenas no tempo de separao das fases e na razo de volumes. A temperatura causa influncia no diagrama de fases, pois altera a composio das fases no equilbrio, deslocando a curva binodal, e modificando tambm o

31 comprimento da linha de amarrao. Em geral, o comprimento da linha de amarrao diminui com o aumento de temperatura. O seu efeito varia de acordo com o tipo de sistema. No caso de sistemas PEG/dextrana, a formao das fases facilitada em temperaturas baixas (menores que a ambiente) e para os sistemas PEG/fosfato, a situao oposta, pois temperaturas mais altas e prximas do ambiente facilitam a separao entre as fases. Quando o sistema est prximo ao ponto crtico, ele mais instvel devido ao deslocamento da curva binodal, podendo atingir mais facilmente a regio monofsica. O aumento da temperatura do sistema causa ainda, em um sistema PEG/sal, aumento na concentrao de PEG na fase polimrica e reduo da sua concentrao na fase salina. Esse efeito uma das razes de se trabalhar com a temperatura do sistema fixa. O pH e o tipo de ction tambm so variveis que podem influenciar no diagrama de fases. Diminuindo o valor do pH, as concentraes necessrias de polmero e sal de um sistema PEG/sal aumentam, deslocando a curva binodal para a direita. Esse fato pode ser explicado pelo aumento da razo H2PO4-/HPO42-. Para o caso do fosfato, com a diminuio do pH, pois como o nion monovalente menos efetivo no salting out do PEG (fenmeno de expulso devido ao tamanho do PEG), ser necessria uma concentrao maior dos componentes para formar o sistema bifsico. No caso do tipo de ction, a substituio de fosfato de potssio desloca a curva binodal para a direita, e portanto a concentrao dos componentes necessria para a formao do sistema de duas fases aumenta, sugerindo que o ction sdio mais eficiente que o ction potssio para o efeito do salting out do PEG. 2.4.3. 3. Diagrama de Fases A formao das duas fases aquosas depende da concentrao dos componentes do sistema. O diagrama de fases mostra a regio monofsica e bifsica de acordo com a concentrao de cada componente expressa em % p/p. A curva que separa a regio de duas fases da regio de uma fase chamada curva binodal ou curva de equilbrio. A regio acima da curva binodal chamada bifsica e abaixo monofsica.

32

%p/p PEG T N M

Figura 1: Exemplo de um Diagrama de Fases

%p/p Sal

A Figura 1 mostra um exemplo genrico de um diagrama de fases. A composio inicial do sistema dada pelo ponto M e a composio final de cada fase aps atingir o equilbrio dada pelos pontos T (fase superior ou de topo) e F (fase inferior ou de fundo). O segmento TMF chamado de tie-line ou linha de amarrao, e todos os sistemas cuja composio inicial est contida nessa linha possuem a mesma composio de fases aps o equilbrio, porm com diferentes razes de volumes entre as fases: superior e inferior. J a linha de amarrao determinada pelo ponto N define uma nova linha de amarrao que aumentou proporcionalmente a concentrao entre as fases em relao linha de amarrao determinada por M. Como se pode observar, o fato de mudarmos da linha de amarrao, definida pelo ponto M, para a linha definida pelo ponto N, variando proporcionalmente a concentrao dos componentes das fases, no se obtm uma melhora significativa na recuperao e purificao da protena em estudo.

33

2.4.4. Fundamentos da Partio das Protenas Devido ateno que vem sendo dada produo de protenas pela engenharia gentica e o desenvolvimento da tecnologia de enzimas renovaram-se os interesses pelos processos de separao de protenas e suas descries quantitativas que servem de base para o scale up. Os fundamentos de partio de biomolculas entre as duas fases ainda no so totalmente compreendidos. A tendncia de separao de fases apresentada por dois polmeros, quando adicionados num solvente comum, ocorre porque a baixa concentrao molar dos polmeros na soluo (tipicamente menos que 0,05 M) leva a um pequeno ganho de entropia durante a mistura. Por outro lado, cadeias polimricas tm uma rea superficial por molcula maior do que compostos de baixo peso molecular, tanto que as energias de interao entre dois polmeros se sobrepem energia de Gibbs do sistema. Estes fatores levam formao de duas fases em sistemas ternrios polmero-polmero-gua, em baixas concentraes de polmeros. A modelagem quantitativa da partio de protenas em sistemas de duas fases aquosas representa um complexo problema pelo fato do comportamento do sistema depender de vrios fatores, tais quais: tamanho da molcula, conformao, estrutura da superfcie, interaes de polmeros com as cadeias de protenas e com diferentes sais, interaes polmero-polmero, sal-protena, protena-protena e, quando usados, as interaes dos ligantes com os outros componentes presentes. Estudos empricos com sistemas de duas fases aquosas mostraram que a distribuio da protena funo de diversos fatores, como ( BASKIR et al. , 1989): tipo dos polmeros que formam as fases: peso molecular mdio, distribuio

do peso molecular, modificaes qumicas polimricas. composio das fases: comprimento da linha de amarrao, tipos de ons

presentes ou adicionados ao sistema, fora inica. biomolcula: tamanho, carga, propriedades superficiais, concentrao. pH e temperatura.

34 As condies adequadas para a partio devem ser encontradas experimentalmente devido interdependncia dos fatores citados anteriormente. 2.4.4.1. Coeficiente de Partio O coeficiente de partio K uma grandeza que representa a relao de concentrao da substncia de interesse na fase superior e inferior depois de atingido o equilbrio: K= CT/CF Onde: CT a concentrao da substncia de interesse na fase superior no equilbrio CF a concentrao da substncia de interesse na fase inferior no equilbrio. O K uma varivel que mede a eficincia do processo de separao da substncia de interesse pois mostra a sua distribuio nas duas fases aquosas. Pode ser calculado tanto para a substncia de interesse como para os contaminantes ou protenas totais presentes na amostra, podendo-se comparar estes valores. O que se deseja que os dois coeficientes tenham uma ordem de grandeza bem distinta entre si. Como os sistemas em duas fases aquosas so aplicados aos processos de separao em biotecnologia, geralmente as substncias de interesse so produtos biotecnolgicos, principalmente protenas e enzimas, s quais normalmente o K est associado. Diversos tipos de interaes podem ocorrer entre as substncias de interesse e os componentes do sistema, tais como: interaes de cargas, interaes entre as pontes de hidrognio, fora de van der Waals e interaes hidrofbicas. Portanto existe uma srie de fatores que podem influir na eficincia da partio (ALBERTSSON, 1986). Nos sistemas de duas fases aquosas, os pigmentos tm preferncia pela fase superior, pois so substncias hidrofbicas (LAHORE et al., 1995, HUSTEDT et al., 1985). 2.4.4.2. Influncia do Peso Molecular do Polmero e da Protena no Coeficiente de Partio O peso molecular do polmero influencia o valor de K. Em um sistema PEG/sal, se o peso molecular do PEG for elevado, a partio da protena ser mais favorvel fase salina. Caso o peso molecular do PEG seja baixo, ocorrer o oposto, sendo a partio equao 1

35 favorvel fase polimrica. O mesmo ocorre nos sistemas PEG/dextrana: se o peso molecular do PEG for elevado e o da dextrana for baixo, a partio ser favorvel fase contendo dextrana. Isso ocorre provavelmente devido ao aumento do efeito do volume excludo que ocorre na fase PEG. Esse efeito menor para substncias de baixo peso molecular. O peso molecular da substncia a ser separada tambm influencia em K, pois quanto maior for a molcula, maior ser a rea de contato que interage com os componentes do sistema e, de acordo com as caractersticas da molcula e com o tipo de interao, ela ser mais favorvel a uma das fases. Esse fator muito importante quando se deseja separar duas substncias com pesos moleculares muito diferentes (JOHANSSON, 1994; ALBERTSSON, 1986; YANG et al., 1994). O K depende tambm do peso molecular da protena. Ele diminui com aumento do peso molecular e a magnitude dessa diminuio maior para PEG com baixo peso molecular e tende a ficar estvel para PEG com alto peso molecular (BAMBERGER et al., 1985, ALBERTSSON, 1986, FORCINITI et al., 1991). O tipo de protena tambm influi no valor de K, porque as protenas so macromolculas polieletrlitas que carregam cargas quando esto em solues aquosas. As cargas dependem da composio, da seqncia de aminocidos, e tambm das propriedades da soluo aquosa, como o pH e a concentrao dos solutos (SCHLUCK et al., 1995). 2.4.4. 3. Influncia do pH do Sistema no Coeficiente de Partio Outro fator importante que influencia o K o pH do sistema. Alterando o pH, ocorrem mudanas na distribuio de cargas da protena. Em baixos valores de pH ocorre o aumento da carga positiva e em valores altos de pH, da carga negativa. Trabalhando-se em um valor de pH prximo ao ponto isoeltrico (pI), onde a somatria de cargas da protena praticamente nula, existir apenas o efeito do tamanho e concentrao do polmero e do tamanho e composio da superfcie da protena, considerando-se apenas os efeitos eletrostticos (FORCINITI et al., 1991). Na partio da cutinase, o K aumenta com o aumento do pH devido ao deslocamento da curva binodal. Alm disso, aumentando o pH, a concentrao do nion HPO42- aumenta em relao ao nion H2PO4-, o que aumenta o efeito do salting out fazendo com que a cutinase migre para a fase PEG (SEBASTIO et al., 1994)

36 2.4.4.4 Influncia das Interaes entre a Protena e o Sistema de Fases no Coeficiente de Partio Para o entendimento da influncia de alguns fatores em K, importante compreender o que solubilidade de protenas. Uma protena apresenta uma superfcie formada por regies carregadas positivamente e negativamente, alm de possuir regies hidroflicas e hidrofbicas. A distribuio dessas regies depende do tipo de protena. A solubilidade da protena determinada pelas interaes entre tais regies e o solvente que est presente no meio onde ela est contida. A solubilidade depende, portanto, de fatores termodinmicos que favorecem ou no a sua solubilidade no solvente. O aumento da proporo de zonas hidrfobas na superfcie da protena resulta no aumento da afinidade a solventes apolares, como o caso do PEG, fazendo com que esta permanea na fase superior. A solubilidade das protenas nas solues de PEG depende da interao hidrofbica entre a protena e o grupo etileno do PEG. Isso pode explicar a alta tendncia das protenas hidrfobas de se deslocarem para a fase superior rica em PEG. Neste caso, o PEG tende a interagir fortemente com as regies apolares da protena (SCHMIDT et al., 1996). 2.4.4.5. Influncia da Concentrao dos Componentes do Sistema no Coeficiente de Partio A concentrao dos componentes do sistema e, portanto, o comprimento da linha de amarrao, tambm afetam o K. Em sistemas prximos ao ponto crtico, as protenas em geral apresentam uma partio igual entre as duas fases, portanto o valor de K igual a 1. Com o aumento da concentrao dos componentes, que corresponde a um aumento no comprimento da linha de amarrao, o valor de K ser maior ou menor que 1 dependendo do tipo de protena. Existem excees a essa regra, podendo ocorrer valores de K diferentes de 1 para sistemas prximos ao ponto crtico, ou K pode aumentar com o aumento da concentrao dos componentes at um mximo e depois diminuir. Para o caso de clulas ou particulados, o K maior para os sistemas prximos ao ponto crtico. O efeito do comprimento da linha de amarrao em K maior em protenas com alto peso molecular. Alm disso, para um sistema PEG/sal, um aumento no comprimento da linha de amarrao leva a um aumento da concentrao de sal na fase inferior e a um valor praticamente

37 constante na fase superior, favorecendo o efeito do salting out da fase rica em sal para a fase rica em PEG (BAMBERGER et al., 1985, ALBERTSSON, 1986, MINAMI, 1997). 2.4.4.6. Influncia da Concentrao de Protenas no Coeficiente de Partio O K depende tambm da concentrao da protena presente na amostra. Para determinar seu valor importante trabalhar com concentraes no muito altas de protenas (de preferncia menores que 1g/L), pois essas concentraes podem provocar a precipitao da protena devido a presena de PEG (SCHMIDT et al, 1996). A concentrao de protenas tambm importante perto do ponto crtico, pois ao se adicionar uma pequena quantidade de protena em um sistema prximo ao ponto crtico, o diagrama de fases pode modificar-se deslocando a curva binodal, como ocorre quando adicionamos uma pequena quantidade de gua. Com isso, o valor de K poder mudar (MINAMI, 1997). Quando o sistema est afastado do ponto crtico, no ocorre deslocamento da curva binodal para concentraes muito baixas de protena, pois a

composio das fases praticamente no se modifica com a adio de protena. Porm, para altas concentraes pode haver influncia na formao das fases que provoca redistribuio dos componentes do sistema, modificando o diagrama de fases e, conseqentemente, o valor de K (GUAN et al, 1994). 2.4.4. 7.Modelagem Matemtica do Coeficiente de Partio Como o valor de K depende de diversos fatores, o desenvolvimento de um modelo para prediz-lo torna-se especfico para um tipo de sistema ou substncia. Existem vrios trabalhos para o desenvolvimento de equaes que possam predizer o valor de K, mas que so especficas (ASENJO et al., 1994; EITEMAN et al., 1994). Segundo ALBERTSSON (1986), pode existir, na partio de substncias, cinco fatores diferentes que podem atuar separadamente (predominncia de um fator em relao aos outros) ou em conjunto de acordo com o tipo de substncia e do sistema de fases. So eles: Fator do tamanho, que existe quando a partio depende do tamanho da

molcula ou da rea superficial das partculas; Fator eletroqumico, que surge quando o potencial eltrico existente entre as

fases do sistema usado para separar as molculas de acordo com a sua carga eltrica;

38 Fator de afinidade hidrofbica, que a utilizao das propriedades

hidrofbicas do sistema de fase para separar as molculas em funo da sua hidrofobicidade; Fator de afinidade bioespecfica, que utiliza a afinidade entre os locais da

molcula como ligantes do polmero para a separao; Fator de conformao, que considerado quando a conformao da

molcula o fator predominante. Esses fatores podem ser agrupados na seguinte equao: ln K = ln K0 + ln Keletro + ln Kbioesp + ln Ktam + ln Kconf Onde: Keletro o fator eletroqumico; Kbioesp o fator de afinidade bioespecfica; Ktam o fato do tamanho; Kconf o fator de conformao; K0 so os outros fatores que podem causar influncia em K. 2.5. Planejamento Fatorial O planejamento fatorial uma ferramenta estatstica que vem sendo utilizada com muita freqncia em trabalhos experimentais. Consiste na realizao de um estudo sobre um fenmeno, que possua muitas variveis que precisem ser analisadas de maneira organizada, a fim de delinear um caminho que conduza ao objetivo planejado utilizando-se de um nmero mnimo de experimentos. Por esta tcnica possvel constatar quais so as variveis de maior importncia para os resultados esperados no processo, a influncia individual de cada uma delas e as interaes que estas variveis possuem entre si, concernente a resposta global do fenmeno. Quando rigorosamente aplicado, o mtodo gera a possibilidade de avaliar os erros experimentais e de regresso e a modelagem matemtica emprica dos resultados em funo das variveis escolhidas, caracterizando o fenmeno. BRUNS et al (1996), faz uma descrio detalhada do mtodo.

39 3. INOVAO TECNOLGICA 3.1. Tecnologia e Inovao Uma das caractersticas da sociedade moderna sua enorme permeabilidade mudana. Mas quando transformada em padro cultural, a mudana adquire rumo vertiginoso e a adaptao ao futuro passa a ser um dos principais problemas do presente (HABER, 2004). A situao mais grave no mundo dos negcios, onde evolues acontecem em ondas sucessivas, sem tempo para que consolidemos o aprendizado de que so portadoras. Segundo BATEMAN; SNELL (1998), tecnologia a comercializao da cincia. a aplicao sistemtica do conhecimento cientfico a um novo produto, processo ou servio. Para BULGERMAN; MAIDIQUE (1998), tecnologia refere-se ao conhecimento, saber, habilidades e artefatos que podem ser usados para desenvolver um novo produto, servio, sistema de produo e sistema de entrega. O conhecimento cientfico resultado da pesquisa cientfica bsica e envolve geralmente novos conhecimentos de natureza fsica, qumica ou biolgica. O acmulo de conhecimento resultante da pesquisa forma o substrato para as descobertas que, atravs do desenvolvimento tecnolgico podem ou no se transformar em novos produtos, processos ou servios. A essa transformao, d-se o nome de inovao. Segundo BATEMAN, SNELL (1998), inovao uma mudana na tecnologia um abandono nas maneiras anteriores de fazermos algo. Existem dois tipos fundamentais de inovao: inovao de produtos e inovao de processo. O aumento na utilizao de inovaes vem aumentado substancialmente e justifica-se por ser esta uma forma de obter vantagem competitiva e a mais segura abordagem para defender posies estratgicas (HABER, 2004). Porm, nem sempre as inovaes trazem bons resultados. Muitas inovaes falham devido cultura e rotina das empresas, a estruturas inadequadas e avaliaes equivocadas (TIDD; BESSANT; PAVITT, 1997). Quando o imprio comunista desmoronou, no comeo dos anos 90, alguns pases do bloco sovitico, especialmente a antiga Alemanha Oriental, apresentavam indicadores sociais incomparveis aos de pases ocidentais avanados. O grande abismo a dividir os

40 dois mundos era o tecnolgico, em especial a capacidade de inovao. O lado ocidental estava prestes a entrar em uma fase vibrante que resultaria na popularizao do computador pessoal e na universalizao da internet. O lado comunista mergulhara na estagnao criativa. A tenso produzida por esses extremos seria uma das razes do colapso do mundo comunista. Desde ento, a incapacidade de inovar continua sendo fator determinante para o desmoronamento de imprios no mais os polticos, mas os empresariais. "A nica fonte de lucro, a nica razo para investir em uma empresa sua capacidade de inovar e se diferenciar", resume o americano JEFFREY IMMELT, o principal executivo da General Electric (GE), a maior companhia do mundo em valor de mercado (370 bilhes de dlares) e uma das mais criativas. 3.2. Desenvolvimento de Produtos Anteriormente aos fenmenos da globalizao, informtica e internet que deram suporte a disseminao de informao e um maior acirramento de concorrncia, novos produtos levavam anos para serem planejados e desenvolvidos, eram padronizados e

produzidos em massa. Os ciclos de vida dos produtos eram medidos em dcadas e os processos produtivos utilizavam equipamentos dedicados a produo exclusiva destes produtos previamente padronizados. A economia em grande escala propiciava a reduo de custo. Porm, para os consumidores deste novo sculo, h a necessidade eminente do desenvolvimento de novos produtos. Segundo HABER (2004) o desenvolvimento de produtos constitui, hoje, uma corrida cujo objetivo tornar-se o primeiro a lanar produtos inovadores, com ciclos de vida muitas vezes medidos em meses. Em anlise realizada pela economista Mariana Rebouas, responsvel pela Pintec, do IBGE: "A pesquisa indica uma mudana no patamar da competitividade da indstria brasileira. Em vez de concentrar todo o esforo em cortar custos e alterar processos de produo, a tendncia ganhar mercado diferenciando produtos", diz. "O fato de as pequenas empresas terem puxado a taxa de inovao para cima, mesmo que preponderantemente copiando produtos j existentes no mercado, mostra que a base da pirmide da indstria est brigando para se renovar.Na verdade, a criao de produtos e processos industriais novos no mercado nacional caiu entre 2001 e 2003 em relao ao perodo de 1998 a 2001(NUCCI ET ALL, 2005)

41

A histria econmica recente est crivada de vtimas da incapacidade de criar. Em certos segmentos da economia, como o de tecnologia digital, a produo de riqueza flui diretamente da inovao radical e no mais simplesmente do aperfeioamento de tcnicas e produtos j conhecidos. H muito o termo inovao deixou de significar um estalo de gnio que produz um item campeo. Tornou-se um conceito multidimensional, que inclui gesto, distribuio, marketing, design e, portanto, saiu do gueto da tecnologia para ser o ingrediente vital para o crescimento dos mais diversos setores econmicos. Qualquer que seja um novo produto, ele tem um ciclo de vida, que genericamente pode ser considerado uniforme para os mais diversos produtos, variando na durao dos estgios. A anlise da Figura 2 mostra a diviso do ciclo de vida em quatro estgios:

$
Vendas
Introduo Crescimento

Maturidade

Declnio

Tempo

Figura 2 : Ciclo de vida de um produto. Fonte: MARTINS E LAUGENI,2003. Introduo perodo de crescimento lento das vendas medida que o produto vai sendo introduzido no mercado. O lucro inexistente porque as despesas de lanamento so muito grandes. Crescimento perodo de rpida aceitao do mercado e melhoria substancial nos lucros. Maturidade perodo de reduo do crescimento de vendas porque o produto foi aceito pela maioria dos compradores potenciais. O lucro estabiliza ou entra em declnio em

42 funo do aumento de despesas de Marketing para defender o produto contra a concorrncia. Declnio perodo em que as vendas mostram forte queda e o lucro desaparece. 3.3. Liderana Tecnolgica As inovaes em processos podem ser sofisticadas demais para que possam ser implementadas com sucesso e as inovaes envolvem riscos, pois podem encontrar pouca demanda de mercado (WRIGHT; KROLL; PARNELL, 2000). O lanamento de uma inovao tecnolgica implica a criao de uma novidade, que contm, normalmente, novos elementos que ainda no so completamente dominados e sobre os quais paira enorme incerteza (OLAVE; AMATO NETO, 2001). Incerteza significa que as informaes que o administrador possui no so suficientes para conhecer as conseqncias das aes e o risco existe quando a probabilidade de uma ao ser bem sucedida menor que 100% (BATEMAN; SNELL, 1998). Segundo FREITAS (1996), os riscos que uma inovao apresenta so, basicamente de dois tipos: os riscos resultantes da concorrncia, dos processos de produo e das mudanas do mercado e os riscos resultantes dos erros de gesto. A incerteza resultante da concorrncia inevitvel quando existe grande concorrncia no mercado, pois existem situaes em que o mercado to vasto que pode absorver a produo de vrias empresas, mas pode, algumas vezes, saturar-se rapidamente. A incerteza resultante do processo de produo ocorre quando um produto que parea promissor em escala de laboratrio pode revelar-se invivel devido a baixos rendimentos, pouca confiabilidade, conquista de mercado etc. A incerteza resultante do mercado ocorre quando a inteno de compra identificada no estudo de mercado revela-se diferente da deciso de compra aps o lanamento. Muitas vezes, a demora no lanamento dos produtos pode comprometer o resultado. O laboratrio Ach lanou em junho de 2005 o primeiro medicamento fitoterpico criado no Brasil com matria-prima nacional. A companhia gastou 15 milhes de reais no desenvolvimento do produto. "Para ns um investimento grande, mas a nica forma de a

43 indstria brasileira deixar de ser importadora sendo inovadora", diz o diretor mdico do laboratrio, Jos Roberto Lazzarini. O princpio ativo do remdio uma erva da Mata Atlntica, a Cordia verbenacea, ou erva-baleeira. Com ela, foi desenvolvida uma pomada antiinflamatria. O mercado de fitoterpicos movimenta 21,7 bilhes de dlares por ano no mundo, ou 4,5% do setor farmacutico. Com a nova pomada, o Ach quer comear a exportar. O laboratrio fatura 680 milhes de reais por ano e investe em pesquisa 10 milhes de reais 1,4% do total (NUCCI et all, 2005). H tambm, segundo HABER (2004), a incerteza resultante dos erros de gesto que ocorrem devido a interpretao das tendncias de mercado, concepo do novo produto, a erros na concepo da patente e etc. O que torna a liderana tecnolgica atraente o potencial de lucros altos e as vantagens do pioneirismo na adoo da nova tecnologia. Quando a empresa adquire habilidade de continuar inovando com velocidade suficiente, essa vantagem competitiva pode ser prolongada. A maioria dos estudos indica que a empresa pioneira de mercado obtm mais vantagem, pois pesquisas tm mostrado que os consumidores, freqentemente, preferem marcas pioneiras porque a experimentaram e gostaram (KOTLER, 1998). Contudo, a inovao tecnolgica nem sempre conduz a vantagens imediatas e altos lucros. A Tabela 5 mostra as vantagens e desvantagens da inovao tecnolgica.

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VANTAGENS Ser o primeiro a adotar a nova tecnologia Pouca ou nenhuma concorrncia Maior Eficincia Maiores margens de lucro Reputao de Inovador Estabelecer barreiras de entrada Ocupar os melhores nichos do mercado Oportunidades de aprender

DESVANTAGENS Maiores Riscos Custo de desenvolvimento de mercado e educao do consumidor Custos de infra-estrutura Custos de aprendizagem e eliminao de defeitos Possvel canibalizao dos produtos existentes Vantagens da liderana tecnolgica

Tabela 5: Vantagens e desvantagens da liderana tecnolgica Fonte: BATEMAN; SNELL (1998), adaptado por HABER (2004). O principal atrativo de ser o primeiro a adotar a nova tecnologia o potencial de lucratividade, pois a inexistncia ou pouca concorrncia pode possibilitar, inicialmente, a fixao de um preo de venda mais alto. Normalmente, a liderana tecnolgica aumenta a eficincia em relao aos concorrentes e isso alcana uma vantagem de custo, podendo, se necessrio, fixar preos de venda mais baixos. Patentes e outras barreiras institucionais podem ser utilizadas para bloquear os concorrentes e manter a liderana tecnolgica. O lanamento inicial do produto possibilita a ocupao dos melhores nichos de mercado. Preos e lucros maiores podem pagar os custos de desenvolvimento de novas tecnologias. A reputao de um ser inovador pode criar uma vantagem competitiva contnua e ainda influenciar outros produtos da empresa (HABER, 2004). O aprendizado que a inovao traz empresa muito significativo, pois enquanto os concorrentes podem ser capazes de copiar ou adotar uma nova tecnologia, as pequenas melhorias que a liderana tecnolgica traz so difceis de alcanar. BUZZEL; WISERMA (1981) constataram que as empresas que apresentam ganhos de mercado superaram seus concorrentes com o lanamento de produtos novos em seu portflio ou com o aumento de produtos em suas linhas tradicionais.

45 3.4. A Adoo de uma Nova Tecnologia A dimenso mais importante em uma tecnologia seu valor competitivo, uma vez que uma nova tecnologia pode modificar completamente as regras da concorrncia dentro de um setor industrial. Os problemas que se apresentam so: qual a tecnologia a ser utilizada, qual seu custo, qual seu benefcio e quando adot-la. As tecnologias atuais podem ser divididas em quatro categorias (BATEMAN; SNELL, 1998): TECNOLOGIAS DE BASE: so aquelas comuns. Elas

podem oferecer pequena vantagem competitiva. TECNOLOGIAS CHAVE: so eficazes e fornecem uma

vantagem estratgica porque nem todos as utilizam. O conhecimento e a disseminao dessas tecnologias so limitados. TECNOLOGIAS JOVENS: ainda no tiveram seu valor

provado, mas possuem potencial de alterar as regras da competio, por fornecerem vantagens significativas. TECNOLOGIAS EMERGENTES: esto ainda em

desenvolvimento e no esto comprovadas. Uma organizao deve avaliar sua necessidade tecnolgica atravs da anlise das tecnologias atuais utilizando-se do benchmarking e do scanning (BATEMAN; SNELL, 1998). O benchmarking uma tcnica largamente utilizada no campo empresarial e foca o que est sendo feito atualmente, basicamente as tecnologias chaves e algumas tecnologias jovens. Benchmarking o processo de comparar as prticas de uma organizao com as de outra organizao.A possibilidade de se realizar um benchmarking de tecnologias pode variar em funo do setor que a empresa atua. Em alguns casos, o caminho mais utilizado o benchmarking internacional, ou seja, a importao de novos processos tecnolgicos. O scanning pesquisa de fontes de novas tecnologias. O seu foco so as tecnologias jovens e tecnologias emergentes

46 As fontes de fornecimento de tecnologia so muito diferentes, dependendo do setor em que a empresa atua e incluem fornecedores, fabricantes, usurios, outros setores industriais, universidades e governo. As grandes empresas competiro pelas novas idias geradas pelas pequenas empresas e estas precisaro do capital, dos recursos de produo e distribuio das grandes (HABER, 2004). Para DAUSCHA (2005), torna-se cada vez mais necessrio aproximar os empresrios das instituies de pesquisa do pas, de forma a criar um ambiente inovador. Segundo ele, as empresas com mais de 500 funcionrios so as que apresentam as maiores taxas de investimento em P&D. DAUSCHA (2005) acredita que a inovao nas empresas menores vai ocorrer no momento em que elas tiverem uma viso mais abrangente do mercado e conseguirem evoluir nas tcnicas de gesto industrial e de fabricao. Para isso, elas precisam ser ajudadas. Em mdia, os empresrios que trabalham com pesquisa e desenvolvimento no aplicam mais que 0,64% de seu faturamento em inovao, seja na melhoria de seus produtos ou na compra de equipamentos. Os dados foram apresentados por Ronald Martin Dauscha, presidente da Associao Nacional de Pesquisa, Desenvolvimento e Engenharia das Empresas Inovadoras (ANPEI). A Lei de Inovao representa um grande avano no setor, pois permite s empresas inovadoras abaterem no Imposto de Renda, por exemplo, 160% do total investido em pesquisa e desenvolvimento (P&D), podendo chegar a 200% caso apresentem, em seus quadros, mestres e doutores, alm de produtos patenteados (DAUSCHA, 2005). O custo de desenvolvimento interno de um produto novo pode alcanar valores muito elevados (KOTLER, 1998). O meio ideal para uma empresa crescer mais rapidamente a compra de tecnologia, principalmente se no se dispe de recursos financeiros suficientes (HABER, 2004). Em polticas de compra de tecnologia, a atitude bsica mais difundida comprar o mximo de patentes e licenas, estejam ou no relacionadas com tecnologias de ponta. Esta atitude foi muito utilizada pelo Japo no incio dos anos 70 e ainda persiste atualmente, pois 15% das suas inovaes so baseadas em invenes estrangeiras. Na Gr Bretanha este nmero de 12% e 7% nos Estados Unidos (VICO MAAS, 2001).

47 Ainda segundo VICO MAAS ( 2001), o processo de escolha de uma tecnologia no Brasil segue o processo utilizado em outros pases, porm as empresas ainda no investem muito em desenvolvimento das prprias tecnologias, sendo mais usual a compra de tecnologia. Segundo DAUSCHA (2005), apenas 30% de todas as empresas brasileiras fazem algum tipo de inovao, sendo os setores de informtica, eletrnico e qumico os que mais inovam. Admitindo-se que a inovao fundamental para a capacidade competitiva das empresas em longo prazo e que uma parcela significativa das empresas tm conscincia deste fato, DACORSO; YU (2000) questionam o motivo das empresas relutarem em se decidir pela inovao. Uma das razes, segundo MATHESON (1998), o fato deve-se a complexidade das decises, pois afetam todo o ambiente do negcio e so particularmente difceis, devido s muitas incertezas que os cercam. Para CLEMEN (1996), a tomada de deciso na rea de inovao uma tarefa bastante difcil, pois depende de quatro fatores, basicamente: a) a prpria complexidade do problema que envolve a deciso b)a incerteza a uma tomada de deciso c) a existncia de mltiplos objetivos d)diferentes perspectivas do problema

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4. CUSTOS Contadores definem custos como um recurso sacrificado ou renunciado para conseguir um objetivo especfico. Um custo normalmente medido como a quantidade a ser paga para adquirir bens ou servios. Um custo real (HORNGREN, 2004) o custo incorrido em comparao a um custo orado ou previsto. Para dirigir suas decises, os investidores querem saber quanto um determinado produto, processo ou servio especifico custa. Este produto chamado de objeto de custo que pode ser considerada como qualquer elemento para o qual a medida de custos e desejada. Segundo HORNGREN (2004) um sistema de custeio tpico justifica custos em dois estgios bsicos: acmulo seguido por apropriao. O acmulo a coleta de dados, de alguma forma organizada, por meio de um sistema de contabilidade. Para CHALOS (1992), os mtodos de custeio padro so comuns na fundamentao dos sistemas de controle das empresas. Porm, os sistemas no so estticos e devem ser revisados e adequados de acordo com a produo e o ciclo de vida dos produtos. Alm dos processos de melhoria contnua que visam reorientar as formas de trabalho, reduzindo assim seus custos. O custo representa um sacrifcio de recursos. O preo de cada item mede o sacrifcio feito para adquiri-lo. Independente de ser pago imediatamente ou no futuro, o custo de um item estabelecido pelo seu preo. 4.1. Custos Diretos e Custos Indiretos Os custos diretos de um objeto de custo so relativos ao objeto de custo em particular e podem ser rastreados para aquele objeto de custo de forma economicamente vivel. So relacionados diretamente ao objeto representando insumos fundamentais para a produo ou confeco do objeto. O termo rastreamento de custos usado para descrever a apropriao de custos diretos para o objeto de custo em particular (HORNGREN, 2004). Os custos indiretos so relativos ao objeto de custo em particular, mas no podem ser rastreados de forma economicamente vivel (HORNGREN, 2004). Os insumos que compem os custos indiretos de fabricao so indispensveis para a produo e

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composio do produto, porm no acrescem valor direto ao objeto. So as atividades como a de superviso que tem suas despesas relativas ao objeto, porque a superviso necessria para administrar a produo e a venda do objeto de custo. A superviso pode ser considerada indireta, pois a atividade pode ser realizada em mais de um produto. Diferentemente do consumo de matria-prima, um custo indireto apresenta maior dificuldade de rastreamento. O termo apropriao de custos usado para descrever a distribuio dos custos indiretos para um objeto de custo em particular. 4.1.1. Fatores que Afetam as Classificaes de Custos Diretos Indiretos Vrios fatores afetam a classificao de um custo como sendo direto ou indireto (HORNGREN 2004). Quanto maior a quantia de um custo, mais provvel que seja economicamente vivel rastrear aquele custo para um objeto em particular. Determinadas quantias destinadas a divulgao ou apresentao de um produto representam uma pequena parcela diante dos custos efetivos do objeto a ser fabricado. Melhorias na tecnologia de coleta de informaes e a velocidade de transmisso das mesmas esto fazendo com que seja possvel considerar um nmero cada vez maior de custos como custos diretos. Segundo HORNGREN (2004) muitas peas de componentes tem um cdigo de barra que pode ser escaneado em todos os pontos do processo de produo. Os cdigos de barra podem ser lidos para um arquivo de custos de produo, da mesma maneira rpida e eficiente que os caixas de supermercado entram com o custo de cada item comprado por um cliente. Classificar um custo como direto mais fcil se a instalao de uma empresa (ou alguma parte dela) for usada exclusivamente para um objeto de custo especfico, como um produto especfico, ou um cliente em particular. Sistemas de custeio registram os custos de recursos adquiridos e rastreiam como so ento usados. O registro dos custos de recursos adquiridos e usados permite a observao do comportamento dos custos. Encontram-se dois tipos bsicos de padro de comportamento de custos em muitos sistemas contbeis: o custo varivel muda no total em proporo s mudanas no nvel relativo de atividade ou volume total. O custo fixo permanece inalterado no total por um dado perodo de tempo, apesar de mudanas amplas no nvel de atividade ou volume total. Custos so definidos como sendo fixos ou variveis

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com respeito a um objeto de custo especifico e por um dado perodo de tempo. Segundo HORNGREN (2004) as pesquisas prticas empresariais indicam que a identificao de um custo como varivel ou fixo ajuda na previso dos custos totais e na tomada de decises administrativas. CHALOS (1992), salienta que o sistema de custeio padro tem sido deficiente nas trs reas de gerenciamento de custos: matria-prima, produtos em processo e produtos acabados. A qualidade da matria prima afeta diretamente o custo do produto. Segundo CHALOS (1992) muitos estudos realizados nos Estados Unidos demonstram a grande quantidade de defeitos encontrados em componentes adquiridos de fornecedores europeus e japoneses mesmo as empresas americanas especificando os padres de qualidade exigidos em seus contratos. Para minimizar os problemas os processos de inspeo de matria prima so comumente utilizados adicionando um custo indireto matria-prima, insumo apropriado como custo direto. O material em processo custeado por diferentes ndices. Alguns so focados por unidades equivalentes e outros ainda por produtos acabados por perodo. Os sistemas produtivos de tecnologia mais avanada como os de manufatura celular, resultam num maior rateio de custos indiretos dos materiais em processos entre os departamentos e ainda aumenta a qualidade, a flexibilidade e a velocidade de produo. As novas formas de produo tm influncia importante no inventrio e controle dos produtos em processos. Uma forma importante, porm cansativa, de calcular o custo de bons produtos acabados, o clculo do custo por unidade de cada uma das famlias de produtos. So includos os tempos de ciclo de produo e os custos de material em processo so minimizados. A metodologia tradicional dos custos concentra-se muito mais nas variaes de custo da matria prima do que no controle dos custos gerados pelos produtos em processo. Esta metodologia gera uma subestimativa dos custos traados por linha de produtos gerando diferentes nveis de qualidade nos produtos acabados. Com isso os produtos tm seu ciclo de vida reduzido e os custos com a obsolescncia dos equipamentos aumenta. Como resultado, pode-se observar que os sistemas de custos so deficientes para adequar verdadeiramente os custos dos produtos acabados.

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4.2. Fixao do Preo de Venda generalizada a idia de que uma das finalidades da contabilidade de custos o fornecimento do preo de venda. Para administrar preos de venda, necessrio conhecer o custo do produto; porm essa informao, por si s, embora seja necessria, no suficiente. Alm do custo preciso saber a elasticidade da demanda, os preos dos produtos concorrentes os preos de produtos substitutos ou similares, e tudo isso depende tambm do mercado em que a empresa atua, que pode ir desde o monoplio at a concorrncia perfeita. Segundo MARTINS (2003), o importante que os sistemas de custos produzam informaes teis e consistentes com a filosofia da empresa, particularmente com a sua poltica de preos. Considerando-se esses aspectos citados, os preos podem ser fixados: com base nos custos, com base no mercado ou numa combinao de ambos. 4.2.1. Formao de Preos com Base em Custos Nesta forma de calcular preos de dentro para fora -, o ponto de partida o custo do bem ou servio apurado, segundo os critrios de custos de fabricao. Sobre este custo agrega-se uma margem, denominada markup, que deve ser estimada para cobrir os gastos no includos no custo, os tributos e comisses incidentes sobre o preo e o lucro desejado pelos investidores (MARTINS, 2003). Segundo BERNARDI (1998), o markup a utilizar ser estruturado conforme a incidncia de impostos, as despesas variveis de venda, a incluso de despesas operacionais e o lucro desejado de venda, observadas as circunstncias e interesses mercadolgicos e financeiros. O preo formulado com markup um referencial a ser analisado e no mais uma imposio do mercado. Numa situao bastante simples, MARTINS (2003), apresenta os seguintes dados: Custo unitrio: $8 Despesas Gerais e Administrativas: (DGA): 10% Comisses dos Vendedores (COM): 5% Tributos (IMP): 20%

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Margem de lucro desejada (MLD) : 5%

O markup seria ento a somatria destes itens e portanto seu total seria de 40% sobre o preo de venda bruto. O preo de venda (PV) ser o custo acrescido de 40% do PV PV= $8 + 0,4 PV PV 0,4PV = $8 PV = $13,33 Por este mtodo o preo de venda seria fixado em $13,33. Esse preo seria, ento, uma referncia, sujeita a ajustes para mais ou menos-de acordo com as condies de mercado e com as negociaes especficas com cada cliente (MARTINS, 2003). O preo, sendo um componente do composto mercadolgico, fundamental para a estratgia de vendas da empresa. Assim, muito importante que a empresa, uma vez definida sua poltica de vendas, considere o preo como fator competitivo em suas polticas, de modo atingir seus objetivos e isto est intimamente relacionado aos custos e a estruturao do markup. (BERNARDI, 2003)

4.3. ANLISE ECONMICA DE PROJETOS Tomando por base os dados tcnicos dos processos desenvolvidos, partir-se- para a anlise de viabilidade econmica que essencialmente avalia os benefcios e custos dos projetos, reduzindo-os a uma medida comum. E tendo-se mais de uma alternativa econmica, h a necessidade de compar-las a fim de selecionarmos a mais conveniente para o problema em questo. Se o problema for escolher um equipamento, dever ser escolhido aquele que oferecer o menor custo.

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Se o problema for selecionar um investimento, dever ser escolhido aquele que oferecer maior rentabilidade. Quando se tratar de avaliao de custos, dever ser escolhida a alternativa que apresenta menor custo (HIRSCHFELD, 2000). Os principais mtodos de anlises de alternativas econmicas so: 1) Mtodo do Valor Presente Lquido

Tem como finalidade determinar um valor no instante considerado inicial (data zero). Este valor obtido utilizando a taxa de juros s mercado ou taxa mnima de atratividade. 2) Mtodo do Valor Futuro Lquido

Tem por finalidade determinar um valor no instante considerado final, partindo-se de um fluxo de caixa. Para obter-se esse valor, utiliza-se a taxa de mercado ou taxa mnima de atratividade. 3) Mtodo do Valor Uniforme Lquido

Quando se trata de um investimento que apresenta diferentes valores, podemse transformar tais valores em uma srie uniforme equivalente que auxiliar na anlise de alternativas econmicas. Para a transformao dos valores utilizada a taxa mnima de atratividade. 4) Mtodo da Taxa de Retorno

Quando investimos em um bem, seja uma aplicao financeira ou um empreendimento, fazemo-lo, movidos pelo desejo de receber, em devoluo, uma quantia que, em relao quantia investida, constitui uma parcela porcentual denominada taxa de retorno. Quando esta parcela superior taxa mnima de atratividade o projeto considerado vantajoso. 5) Mtodo do Prazo de Retorno ou Prazo de Recuperao do Investimento Fornece o nmero de perodos do fluxo de caixa, nos quais a somatria dos benefcios se iguala somatria dos custos. tambm denominado payback. Esse mtodo pode ser considerado de duas formas, com juros nulos e com juros reais. Para utilizao deste mtodo, desprezam-se os valores residuais do bem, existente no final da vida til.

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6)

Mtodo do Benefcio-Custo

empregado em maior escala na anlise de obras pblicas, onde o prazo de durao geralmente muito grande e a conceituao de benefcios , s vezes, mais delicada do que em investimentos privados. A relao benefcio-custo (B/C) tem como finalidade nica verificar se a alternativa analisada vivel ou no. Benefcios so as avaliaes especficas de receitas, faturamentos, dividendos e tudo mais que tende a beneficiar o empreendimento previsto. Os benefcios podem ser tangveis ou intangveis (HIRSCHFELD, 2000). Benefcios Tangveis: so aqueles que podem ser expressos em valores econmicos com relativa facilidade, visto seguirem um raciocnio simples e lgico em que todas as variveis so determinadas com simplicidade. Benefcios Intangveis: So aqueles que no podem ser expressos em termos econmicos com relativa facilidade, visto suas determinaes serem objetos de apreciaes subjetivas que necessitam embasamentos bem estruturados para no serem refutados (HIRSCHFELD, 2000). Segundo CHALOS (1992), os benefcios podem ser classificados em: Estratgicos: Satisfao do cliente, penetrao em novos mercados, desenvolvimento de uma tecnologia, transferncia de tecnologia; Quantitativos: rentabilidade, utilizao da capacidade ociosa; Qualitativos: reputao, estabilizao da fora de trabalho. A mensurao destes benefcios muito complexa, principalmente quando envolve tecnologias avanadas, tais como automao ou mudana de processos. (CHALOS, 1992; HABER, 2004) Segundo Chalos (1992), alguns dos custos e benefcios podem ser facilmente identificveis, tais como: Reduo dos custos diretos de fabricao; Aumento dos custos indiretos de fabricao; Reduo de estoques de material em processo;

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Reduo dos tempos de parada de mquinas e conseqente aumento da capacidade produtiva.

Porm, alguns custos ou benefcios, tais como reputao tecnolgica, participao do mercado, inovao tecnolgica, confiana no produto podem no ser mensurveis na anlise de investimento a ser realizado. Segundo HABER (2004), e CHALOS (1992), quanto mais avanada for a tecnologia, maior a dificuldade de se quantificar os custos. Muitas empresas, quando decidem investir em tecnologia avanada, enfatizam mais os fatores qualitativos do que os quantitativos, mesmo que eles sejam valores difceis de apurar (CHALOS, 1992). 4.3.1.Avaliao de Projetos de Inovao Tecnolgica Quando so analisados os investimentos em tecnologia avanada, devem ser considerados os aspectos quantitativos, qualitativos e estratgicos do investimento. A anlise de projetos de tecnologia avanada pode utilizar-se de outros mtodos que suplementam a anlise do valor presente lquido, pois h grande dificuldade em analisar matematicamente dados que medem diferentes atributos. 4.3.2. Modelo de Deciso por Mltiplos Atributos ou de Pontuao utilizado quando necessrio encontrar a correlao matemtica de dados quantitativos, qualitativos e estratgicos no comparveis. Segundo CHALOS (1992), este mtodo mais preciso que as tcnicas de anlise por custos e benefcios, pois atribui pesos relativos a todos os atributos de deciso. Metodologia de Aplicao (HABER, 2004): Um conjunto de atributos estratgicos, qualitativos e quantitativos necessrios para analisar o projeto coletado. Cada atributo recebe um peso relativo baseado no sucesso da empresa no mercado, perfazendo um total de 100. Esse peso pode ser obtido atravs do consenso entre as pessoas chave dos departamentos envolvidos no processo; Atributos estratgicos, qualitativos e quantitativos devem receber um valor em uma escala pr-determinada, por exemplo, de 1 a 5;

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incorporada a confiana ou certeza de que o projeto ter xito. Esta incorporao feita atravs da probabilidade, por anlise subjetiva, ou estatstica, de ser atingida a meta escolhida naquele atributo;

Os resultados finais, obtidos atravs da somatria do produto das colunas (peso x valor x confiana) a pontuao final do projeto.

Segundo HABER (2004) esse modelo o mais apropriado para investimentos em tecnologia avanada, pois incorpora fatores qualitativos e estratgicos no capturados nos mtodos tradicionais de anlise financeira. A Tabela 6 mostra um exemplo de aplicao de um modelo de pontuao para avaliao de projetos. ATRIBUTO PESO VALOR CONFIANA PRODUTO 1. Estratgico Reputao tecnolgica 12 4 1,0 48 Participao e mercado 10 2 0,8 16 Posio Competitiva 14 3 0,7 29 Inovao de Produtos 8 4 1,0 32 2. Quantitativo Valor Presente lquido 30 4 0,9 108 Prazo de retorno 10 2 0,8 16 3. Qualitativo Diversidade de produtos 4 4 1,0 16 Confiana do Produto 3 4 1,0 12 Tempo de resposta 3 1 1,0 3 Nmero de partes 4 0 0,8 0 Medidas em tempo real 2 5 0,9 9 Total 100 289 Tabela 6: Exemplo de aplicao de um modelo de pontuao para avaliao de projetos. Fonte: HABER (2004) Segundo HABER (2004), o mtodo de Deciso por Mltiplos Atributos um mtodo que, em seu conceito, sintetiza razoavelmente vrios outros mtodos que so normalmente utilizados em anlise de viabilidade econmica de projetos. abrangente o suficiente para permitir uma viso geral de todos os fatores envolvidos na anlise de viabilidade de projetos e aborda diferentes aspectos para a avaliao de projetos de inovao tecnolgica. utilizado quando existem diversos projetos entre os quais deve-se escolher em quais investir.

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4.4. Anlise Linear de Equilbrio A anlise de equilbrio tem como objetivo a verificao de um ponto em que duas alternativas, funes de um mesmo parmetro e comparadas em idnticas condies de instantes e prazos, apresentam o mesmo valor. Tal ponto chamado de ponto de equilbrio (breakeven point). Pela definio apresentada por HIRSCHFELD (2000), a anlise de equilbrio no se prende, somente a estudos de comparao entre receitas e despesas com a determinao do ponto em que ambos os valores so iguais e a partir do qual comea a haver lucro. De forma geral, as anlises que procuram determinar o ponto de equilbrio consideram as duas linhas, representadas por duas equaes lineares que devem representar o fluxo de caixa de cada uma das alternativas em estudo. Na fase de planejamento, tais consideraes retilneas podem ser consideradas perfeitamente normais, HIRSCHFELD (2000), e virtude de informaes mais detalhadas e confiveis e que, eventualmente, poderiam demonstrar que aquelas linhas retilneas poderiam no s-las. As concluses obtidas a partir de uma anlise linear de equilbrio so bastante confiveis e aceitveis na fase de planejamento. Posteriormente, na fase de acompanhamento do desempenho, com os informes reais coletados, pode-se obter uma maior exatido das curvaturas das linhas que se cruzam, apresentando ento um ponto de equilbrio que poder no coincidir com aquele determinado na fase de planejamento, mas de forma significativamente prxima desde que no hajam grandes variaes de mercado e que a anlise dos custos tenha sido realizada com rigor. Os elementos ento colhidos podero fornecer outras concluses que, igualmente, como na fase de planejamento, sero teis para a tomada de novas decises.(HIRSCHFELD,2000) 4.4.1. Ponto de Equilbrio entre Receitas e Despesas De modo genrico, um fluxo de caixa apresenta as seguintes contribuies: investimento inicial, receitas operacionais, despesas operacionais e valores residuais dos equipamentos.

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No escopo deste trabalho o aprofundamento especfico na tcnica da Contabilidade de Custos, onde as receitas e despesas podem ser classificadas de diversas maneiras. A abordagem ater-se- a classificao em que os custos, ou despesas so classificados em fixos e variveis em funo de determinadas premissas, cujos critrios utilizados podem, eventualmente, variar entre vrios classificadores. A premissa, em geral adotada, a de custo fixo e varivel quando seu valor, respectivamente, no aumenta em funo de uma produo. Como custos fixos podem ser citados: despesas administrativas, impostos e taxas fixas, aluguel, pesquisas seguros, propaganda, despesas de condomnio, encargos e salrios. Como exemplos de custos variveis podem ser citados: direitos autorais de tecnologia, desperdcios, despesas com embalagens, manutenes, matria prima de produtos vendidos e comisses de vendas. Existem custos cujas classificaes em fixos ou variveis depende muito da sensibilidade da interpretao, ao se analisar o seu valor, tipo, tamanho ou outro elemento influente. HIRSCHFELD (2000) afirma que nesta interpretao que reside grande valor, pois a classificao certa das despesas fixas e variveis pode determinar um preo de venda conveniente em determinadas situaes excepcionais, quando for necessrio estudar profundamente um preo especial a fim de no se perder a oportunidade comercial.

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5. MATERIAIS E MTODOS O trabalho experimental foi realizado no Laboratrio de Bioqumica da Faculdade de Engenharia Industrial - FEI. Foram utilizados abacaxis de variadas espcies adquiridos no mercado. Os demais reagentes utilizados foram de grau analtico. 5.1. Extrao por Batelada. 5.1.1. Preparo da Amostra As amostras foram preparadas com abacaxi de diversos tipos, encontrados em mercados e, exceto a coroa, foram triturados e filtrados eliminando as fibras, e armazenados, temperatura de 180 C. Para os ensaios as amostras foram descongeladas e utilizadas no mesmo dia. Caso a quantidade de amostra descongelada no fosse utilizada, era novamente congelada. A Figura 3 demonstra esquematicamente a rotina de preparao da amostra.

ABACAXI

Triturar

FILTRO PRENSA

- Eliminao das fibras - Armazenamento

Figura 3: Preparo da amostra

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5.1.2. Extrao com Etanol No incio da pesquisa foram realizados ensaios para a avaliao qualitativa da capacidade hidroltica da bromelina em gelatina slida. O objetivo foi avaliar o volume de perfurao causado pela enzima presente em diferentes partes do abacaxi: suco do fruto, talo, coroa, folhas e casca, na presena e ausncia de metabissulfito de potssio, verificando assim a sua atuao como ativador enzimtico da bromelina. A Figura 4 descreve como foram realizados os testes:

Figura 4: Descrio dos testes de liquefao da gelatina . Durante a hidrlise da gelatina, a bromelina hidrolisa as protenas em peptdeos, sendo que alguns podem chegar a aminocidos. Para verificar a presena de aminocidos na gelatina liquefeita foram realizados alguns testes com soluo actica de ninidrina, que indica, aps aquecimento uma cor violcea na presena de aminocidos e peptdeos de cadeia curta. O volume relativo de perfurao foi calculado considerando a perfurao de forma circular, medindo-se o dimetro mdio (mdia aritmtica do maior e menor dimetro) e a altura mdia de perfurao. A Tabela 7 mostra os resultados do volume de perfurao.

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fruto casca com fruto casca com 4,25 2,01 gua talo 3,65 2,83 coroa 1,09 0,82 folhas 0,42 Tabela 7: Resultados do volume de perfurao (VP), amostra com e sem bissulfito de potssio. A Figura 5 demonstra graficamente os resultados do volume de perfurao da gelatina.

VP (cm3) com KHSO3 10,58 4,42

VP (cm3) sem KHSO3 11,31 4,95

Liquefao da gelatina 5% Volume de perfurao (VP)

12 10 8 6 4 2 0
fruto casca c/ fruto casca c/ gua talo coroa folhas s/ KHSO3 c/ KHSO3

Figura 5: Resultados dos volumes de perfurao da gelatina. Os resultados mostram que a amostra relativa ao fruto possui o maior poder de hidrlise. Esta ser utilizada, portanto para os ensaios de precipitao. A casca possui 40% da capacidade hidroltica do fruto, o que interessante para a recuperao da enzima. Coroa e folhas no apresentam capacidade proteoltica considervel e com isso no sero considerados para estudo. Com exceo do fruto e da casca com fruto o metabissulfito de potssio no aumentou a capacidade hidroltica da enzima e no foi usado como ativador

VP (cm )

62 enzimtico. Na observao dos testes com ninidrina, todos os testes apresentaram cores violceas, indicando a presena de aminocidos e peptdeos de cadeia curta devido hidrlise da gelatina. Realizaram-se as anlises de protena total, acares redutores e atividade enzimtica de amostras preparadas da polpa do fruto, da casca e do talo para a caracterizao do meio inicial. As concentraes e os resultados so mostrados nas tabelas 1 e 2. O fruto e o talo apresentam o mesmo teor de protena total, porm o talo apresenta cerca de 60% menor quantidade de enzimas proteolticas. O abacaxi utilizado para as anlises foi o fruto maduro, por isso apresentou uma quantidade elevada de acares redutores expressos em glicose, 0,2 a 0,4 g/g de abacaxi. importante conhecer o teor de acares e carboidratos na amostra, pois o etanol pode precipitar carboidratos, contaminando a enzima recuperada. De qualquer forma, o talo e a casca do abacaxi maduro tem um teor de enzima considervel para recuperao, como mostrado na tabela 3, ainda mais tratando-se de resduo de muitas indstrias de conservas.

Foram realizados ensaios de precipitao, em diferentes concentraes de etanol (20 a 90 %v/v) da amostra de fruto, para a obteno da curva de solubilidade da bromelina em etanol frio. As curvas demonstradas na Figura 6 so importantes para o conhecimento do comportamento de solubilidade da enzima em diferentes concentraes de etanol e estudar a possibilidade de uma precipitao fracionada em dois cortes, capaz de fornecer uma recuperao considervel da enzima com aumento de pureza da mesma. As condies experimentais foram: precipitao em um nico estgio, temperatura de precipitao de 5C, pH original da amostra (o pH varia com a adio de etanol de 3,2 a 4, dependendo da quantidade de etanol adicionada), tempo de contato entre o etanol e as protenas presentes na amostra de 15 minutos. A adio do etanol foi feita lentamente at 20 %v/v de etanol na amostra devido evoluo de calor, depois o etanol frio foi adicionado de forma batch. Os resultados obtidos mostram que com 80% v/v precipita-se praticamente toda a bromelina presente, porm precipita-se somente cerca de 20% das protenas iniciais, o que

63 leva a um aumento de pureza de at 5 vezes, o que bastante considervel para uma tcnica de baixo poder de purificao como a precipitao. Portanto, mesmo realizando uma precipitao batch, ou seja, com apenas um nico estgio de adio do etanol, purifica-se consideravelmente a enzima presente no abacaxi. A recuperao de cerca de 100% da atividade importante, pois isso significa uma economia no custo do produto final, uma vez que o controle da temperatura em 5C essencial. No possvel prever se em escala piloto seriam obtidos os mesmos dados de recuperao obtidos em escala de laboratrio, porm esses dados de solubilidade podem indicar tendncias a serem seguidas em escalas maiores de trabalho. Foi verificada a possibilidade de realizao de uma precipitao fracionada, em dois cortes, como mostra a Figura 6 :
120

corte 1
100

corte 2

% no recuperada

80

60

Enzima
40

Proteina Total
20

0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

% etanol

Figura 6: Curva de solubilidade em etanol da bromelina e das protenas presentes no abacaxi. Uma precipitao fracionada seria realizada para obter um maior grau de purificao da enzima. Trata-se de uma primeira adio de etanol em uma porcentagem volumtrica adequada para a precipitao de uma parte das protenas presentes exceto a enzima de interesse realizando-se assim uma pr-purificao. O sobrenadante recolhido sofre ento uma nova adio de etanol para aumentar a sua concentrao volumtrica, afim ento de precipitar a enzima de interesse em uma nova fase precipitada. Muitos fracionamentos seguidos poderiam ser utilizados com o intuito de obter um maior grau de purificao, porm, optou-se por purificar o precipitado utilizando um mtodo mais moderno e seletivo, que a extrao lquido-lquido em duas fases aquosas.

64 5.2. Extrao em Contnuo Para a extrao em contnuo foi utilizada uma micro-coluna para extrao lquido-lquido em duas fases aquosas, num sistema PEG/sal. A linha de amarrao utilizada foi determinada por Csar (2000), utilizando caldo prensado de abacaxi. Porm, ao inserir o caldo na micro-coluna observou-se que a alta concentrao de protenas contaminantes bem como as guas deslocavam o equilbrio do sistema tornando a extrao invivel, pela no formao das fases. Partiu-se ento para a utilizao do processo na micro-coluna como uma etapa de purificao, utilizando para isso, precipitado obtido da extrao com etanol. 5.2.1 Descrio do Equipamento Um esquema da micro-coluna de campnulas pulsantes mostrado na Figura 7 Esta micro-coluna, constituda de um tubo de acrlico de 30 cm de altura, com dimetro interno de 2,70 cm em parede de 0,15 cm de espessura. (BERTEVELLO, 2001)

Figura 7 : Esquema da micro-coluna de campnulas pulsantes.(Bertevello, 2001) No centro da micro-coluna, est localizada uma haste de ao inox, na qual esto coladas trs campnulas que esto distanciadas 6cm uma das outras. O dimetro da base das campnulas de 2,68 cm. As campnulas so construdas com uma base de lato e uma peneira de ao de malha MESH 24 e, portanto, possui uma rea livre para o escoamento de 38%.

65 Durante o pulso, a campnula movimenta-se num percurso de 2 cm para baixo e 2cm para cima, o que faz uma amplitude de 4 cm. Os pulsos so fornecidos por um dispositivo, que proporciona um movimento harmnico controlado por um motor. Os bocais de alimentao e sada so de ao inox e possuem um dimetro interno de 2,5 mm e um dimetro externo de 3 mm. Tanto as conexes da base, como do topo da micro-coluna so de Teflon. A alimentao na coluna de cada fase, tanto a leve como a pesada feita atravs de duas bombas peristlticas independentes, previamente calibradas. Os tubos que conduzem as entradas e sadas das fases so de silicone, com dimetro interno de 2 mm. Os tubos de silicone, alm de serem muito flexveis, so compatveis com as solues utilizadas. Os experimentos foram realizados com temperaturas na faixa de 19 C a 23 C. 5.2.2. Procedimentos de Operao da Micro-Coluna. Para operao da micro-coluna, com a finalidade de obter-se dados relativos hidrodinmica, transferncia de massa e eficincia, foi desenvolvido o seguinte procedimento : Primeiro, enche-se a micro-coluna com a fase contnua, ou seja, a fase rica em Sal, que neste caso a fase pesada. Em seguida, coloca-se em operao a bomba peristltica com alimentao da fase pesada, ajustando-se a vazo de entrada e sada. Aps o ajuste da vazo, aciona-se o sistema de pulsao e ajusta-se a sua freqncia no valor desejado. Posteriormente, coloca-se em operao a bomba peristltica que alimenta a fase dispersa, que a fase leve (fase rica em PEG), iniciando sua alimentao com a vazo desejada. O controle de vazo da sada da fase leve feito em nvel, ou seja, sua sada feita quando esta completa o espao na micro-coluna relativo a sua coalescncia e decantao da fase pesada que possa ter sido arrastada na operao.

66 Aps o incio da alimentao da fase leve, anota-se o tempo at que esta comece a sair da coluna, onde tem-se ento efetivamente o incio de operao do equipamento. Quando do inicio da sada da fase leve, comea-se a contagem de tempo de operao da micro-coluna. O tempo de operao foi inicialmente de 40 minutos, quando se pode definir o tempo em que o sistema entrava em regime permanente (estado estacionrio), para as condies de operao definidas neste trabalho. Posteriormente, para os ensaios de transferncia de massa e eficincia este tempo foi reduzido a 30 minutos de operao efetivamente, sendo que o estado estacionrio atingido com menos de 20 minutos. No estado estacionrio, as concentraes de sada das duas fases praticamente no variam com o tempo, havendo pequenas oscilaes, o que ocorre normalmente nos sistemas reais. Num sistema em regime permanente, teoricamente as concentraes no variam com o tempo, ou seja, em sistemas que trabalham muito prximos dos sistemas ideais. Durante a operao do equipamento foram feitas coletas peridicas de amostras nas sadas das fases leve e pesada da micro-coluna, para posterior anlise de protena total e atividade enzimtica. Foram realizadas tambm medidas de vazo, atravs da coleta de um volume conhecido num determinado perodo de tempo. Com esses dados pode-se conhecer tanto o comportamento das concentraes, como das vazes ao longo do tempo de operao. A fase contnua (pesada) e dispersa (leve) entram em contato no interior da microcoluna, onde ocorre a transferncia de soluto entre as fases. As fases que deixam a coluna so: extrato que constitudo principalmente por solvente e o soluto extrado(neste caso, a sada da fase leve), e a fase refinado, que rica no meio de alimentao e do soluto no extrado. 5.2.3. Variveis Estudadas No trabalho de BERTEVELLO, 2001, foram analisadas as influncias de algumas variveis de operao sobre a transferncia de massa e hidrodinmica da micro-coluna, possibilitando a identificao das melhores condies de operao do sistema. Na Tabela 8, so apresentadas as variveis que so avaliadas na operao do equipamento e seus valores.

67 Razo entre as fases Freqncia de pulsos(pulso/min) Tabela 8 :Variveis BERTEVELLO, 2001 estudadas Valor mnimo 0,8 33 na operao da Valor mximo 1,1 43 Micro-coluna Fonte:

Nos experimentos em descontnuo, variou-se a composio, pH e peso molecular do sistema de duas fases aquosas a fim de se encontrar as melhores condies termodinmicas (coeficiente de partio), de extrao. Foram estudados duas linhas de amarrao, dois nveis de pH e dois pesos moleculares de PEG. Com o objetivo de estudar a influncia das vazes e da freqncia de pulso das campnulas na transferncia de massa da coluna, trabalhou-se com um peso molecular, um pH e uma linha de amarrao definida pela extrao em descontnuo apresentada anteriormente por CSAR (2000).

5.3. Extrao Contnua Utilizando Uma Micro-Coluna De Campnulas Pulsantes A seleo de sistemas de extrao lquido-lquido para aplicaes em larga escala implica o recurso de regras convencionais bem definidas em processo de engenharia qumica: diferenas de densidade entre as fases superiores a 5% so desejveis, a viscosidade de ambas as fases devem ser inferiores a 10 mPas e a tenso superficial deve situar-se entre 1 a 50 mPam. Estas condies so desejadas para a formao de uma disperso de fases adequada (CUSACK te al., 1991). Os SBA possuem propriedades fsicas que os tornam diferentes dos sistemas convencionais orgnicos-aquosos empregados em engenharia qumica. Nos sistemas aquosos, a fase pesada exibe valores de viscosidade superiores a 10 mPas e tenso interfacial superior a 1 mPam. A diferena de densidade entre as fases constitui o nico parmetro que se encontra dentro dos limites referidos anteriormente. Apesar das dificuldades, os sistemas bifsicos tm sido aplicados com sucesso a processos de extrao lquido-lquido em larga escala. De modo geral, as colunas de extrao, pela sua simplicidade de construo e operao, constituem uma alternativa atrativa quando se deseja misturar, equilibrar e separar duas fases lquidas imiscveis. A

68 grande vantagem no recurso das colunas a eliminao do emprego de dispendiosas centrfugas, uma vez que a separao de fases promovida pela gravidade (BERTEVELLO, 2001) Para os ensaios de extrao em contnuo BERTEVELLO, 2001, utilizou o sistema PEG 1500 e fosfato de potssio em pH 7, nas concentraes globais de 17,5%peso e 17,5%peso respectivamente. O sistema foi escolhido por se tratar de um sistema que alm da disponibilidade de material, suas caractersticas e propriedades j foram amplamente estudadas (RABELO, 1999). 5.3.1. Planejamento de Ensaios Para a investigao da influncia dos parmetros de operao da micro-coluna, BERTEVELLO (2001), utilizou a metodologia de planejamento fatorial, onde a definio de cada ensaio apresentada a seguir com os efeitos e seus nveis . Ensaio tipo E1 Relao entre as vazes das fases leve e pesada (RV): 1,1 Freqncia de pulsao das campnulas perfuradas (FP): 43 pulsos/min Ensaio tipo E2 Relao entre as vazes das fases leve e pesada: 1,1 Freqncia de pulsao das campnulas perfuradas: 33pulsos/min

Ensaio tipo E3 Relao entre as vazes das fases leve e pesada: 0,8 Freqncia de pulsao das campnulas perfuradas: 33pulsos/min Ensaio tipo E4 Relao entre as vazes das fases leve e pesada: 0,8

69 Freqncia de pulsao das campnulas perfuradas: 43pulsos/min

O efeito combinado das variveis representado pela Tabela 9 Efeito 1 2 (-) 0,8 33 (+) 1,1 43

Razo entre a vazo das fases Freqncia de pulso(Pulso/min)

Tabela 9 : Descrio dos nveis e efeitos. Fonte: BERTEVELLO, 2001 5.3.2 Efeito da Razo entre as vazes das fases (RV) e da Freqncia da pulsao (FP) das Campnulas na Porcentagem de Recuperao de Protena Total com Bromelina P.A. Para uma primeira investigao das influncias dos parmetros de operao da micro-coluna, foi utilizada Bromelina P.A. solubilizada na fase salina. Este procedimento permite, num primeiro momento, localizar condies mais adequadas de operao da coluna e determinar faixas de variao das variveis independentes avaliadas nesse processo (BERTEVELLO, 2001). Pode se observar na Tabela 10, que o resultado mais significativo o da interao entre os efeitos, e que se aumentando a razo entre as fases, ou aumentado-se a freqncia de pulso h um aumento na porcentagem de recuperao. Efeito Mdia 1 2 12 Erro

94,4 2,1 1,8 5,6 1,1

Tabela 10 : Efeitos calculados para porcentagem de recuperao de protena total. 5.3.3. Efeito da Razo entre as vazes das fases (RV) e da Freqncia da pulsao (FP) das Campnulas na Recuperao de Protena Total. A necessidade de desenvolver sistemas mais econmicos e aplicveis em processos de larga escala torna tambm a coluna de campnulas pulsadas uma candidata com atrativos, quando se deseja estudar a sua capacidade de recuperao de protenas a

70 partir de uma soluo inicial. Assim fica clara a importncia de um estudo da influncia das variveis independentes na recuperao da protena total. A Tabela 11 mostra os resultados encontrados para porcentagem de recuperao de protena total nos ensaios realizados, sendo que o ensaio E4 realizado em triplicata, e o valor para este ensaio corresponde a mdia obtida na triplicata. Pode-se observar na Tabela 11 que os resultados encontrados para recuperao da protena a partir da solubilizao do precipitado do caldo de abacaxi, apresentam resultado satisfatrio para recuperao de protena total, 60% em mdia. RV 0,8 0,8 1,1 1,1 FP 33 43 33 43 %Rec. PT 60,10 55,63 66,50 70,00 60,06

E3 E4 E2 E1 Mdia

Tabela 11 - Porcentagem de recuperao de protena total A Tabela 12 apresenta o clculo do efeito de cada varivel e do efeito combinado de ambas na recuperao da protena total. Na Tabela 12 observa-se que o efeito mais significativo a relao entre as vazes das fases leve e pesada, quanto maior esta relao, ou seja, quanto maior a vazo da fase leve, maior ser a recuperao de protena, como era esperado. Verifica-se tambm que a freqncia de pulsao no significativa para a faixa de trabalho e que a combinao dos efeitos no tambm to significativa Efeito (1)RV (2)FP 12 erro

10,385 -0,97 7,97 6,01

Tabela 12 - Clculo dos efeitos para recuperao da protena total 5.3.4. Efeito da Razo entre as vazes das fases (RV) e da Freqncia da pulsao (FP) das Campnulas na Recuperao da Atividade da Bromelina.

71 O efeito das variveis independentes do equipamento na recuperao da atividade enzimtica foi avaliado tambm por BERTEVELLO, 2001 pelos ensaios propostos no planejamento experimental. Em se tratando de enzimas, a porcentagem de recuperao de atividade enzimtica nos apresenta a capacidade de seletividade do sistema empregado na separao e recuperao. A Tabela 13 mostra o resultados encontrados para porcentagem de recuperao de atividade enzimtica nos ensaios realizados, sendo que o ensaio E4 realizado em triplicata, e o valor para este ensaio corresponde mdia obtida na triplicata. Pode-se observar Tabela 13 que os resultados encontrados para recuperao da atividade a partir da solubilizao do precipitado do caldo de abacaxi, apresentam excelentes resultado para recuperao de atividade enzimtica, o que mostra uma grande eficincia do processo na recuperao da bromelina

E3 E4 E2 E1 Mdia

RV 0,8 0,8 1,1 1,1

FP 33 43 33 43

Atividade 38,52 59,72 59,7 74,05 57,99

Tabela 13 - Porcentagem de recuperao de atividade enzimtica. A Tabela 14 apresenta o clculo do efeito de cada varivel e do efeito combinado de ambas na recuperao da atividade. Na Tabela 14 observa-se que ambos os efeitos das variveis independentes so significativos, e que o aumento da relao entre as vazes das fases leve e pesada, aumenta a recuperao da bromelina. Mas na freqncia de pulsao das campnulas esse efeito praticamente o dobro. BERTEVELLO (2001), observa que o efeito combinado das variveis no significativo neste estudo.

72 Efeito (1)RV (2)FP 12 erro

17,755 35,55 -6,85 9,06

Tabela 14 - Clculo dos efeitos para recuperao de atividade enzimtica.

5.4. Mtodos Analticos 5.4.1. Determinao de Protena Total O mtodo de BRADFORD (1976) foi utilizado para determinar a concentrao de protenas totais presentes nas duas fases. Este mtodo baseia-se na ligao da substncia Coomassie Brilliant Blue G-250 com a protena, formando um complexo colorido que possui mxima absoro de cor na faixa de 465 a 595 nm. O reativo foi preparado dissolvendo-se 100 mg de Coomassie Brilliant Blue G-250 em 50 mL de etanol a 95% sob vigorosa agitao. A esta soluo adicionaram-se 100 mL de cido fosfrico a 85% e diluiu-se com gua destilada at o volume final de 1 L. Procedimento: Em um tubo de ensaio colocam-se 100 L da amostra e 5 mL do reativo. Agita-se o tubo em vrtice e deixa-se em repouso por 5 minutos. Em seguida, l-se a absorbncia das amostras a 595 nm. O branco foi preparado com gua destilada . Para os clculos da concentrao de protena, fez-se uma curva de calibrao utilizando solues de albumina bovina (BSA) com concentraes variando de 100 a 1000mg/L. 5.4.2. Determinao da Atividade Enzimtica A atividade proteoltica foi determinada pelo mtodo descrito por MURACHI (1976) e BALDINI et. al. (1993) atravs da hidrlise enzimtica da casena a 1,2% (p/v) pH 6,0 a 35C durante 10 minutos, seguindo-se de precipitao do substrato no hidrolisado com soluo de cido tricloroactico (TCA). No branco, a adio de soluo de TCA foi

73 feita antes da adio da enzima. A quantidade de produtos hidrolticos no precipitados, ou seja, de peptdeos solveis em TCA foi determinada a 280 nm contra um branco. Uma unidade de atividade enzimtica corresponde a quantidade de enzima capaz de variar em uma unidade a leitura de absorbncia a 280 nm, durante 10 min a 35C. A atividade especfica foi expressa como unidades de enzima por mg de protenas. 5.5. Metodologia de Clculo 5.5.1.Coeficiente de Partio

K=

[ fasesup erior ] [ faseinf erior ]

Equao 2

Kp =

Ptopo Pfundo
Equao 3

Ento:

Ka =

Atopo A fundo

Equao 4

Onde: Atopo a atividade enzimtica da fase superior (U/mg de protena) Afundo a atividade enzimtica da fase inferior (U/mg de protena)

74 Ptopo a concentrao de protenas totais na fase superior (mg/L) Pfundo a concentrao de protenas totais na fase inferior (mg/L)

5.5.2. Atividade Especfica A atividade especfica foi calculada pela equao 5:

Ae =

A P

Equao 5

Onde: A atividade enzimtica (mg/L) P a concentrao de protenas totais ( mg/L)

75

6. RESULTADOS E DISCUSSO. O processo de extrao e purificao das enzimas proteolticas presentes no abacaxi que proposto neste trabalho tem por objetivo demonstrar uma metodologia de apurao dos custos e viabilidade de um processo desenvolvido no mbito da universidade, mas com grande aplicao mercadolgica. Prope-se fomentar a anlise econmica dos processos cientficos desenvolvidos na universidade, a fim de estimular o investimento de empresas que necessitam de inovaes tecnolgicas no seu processo produtivo. Foram identificados os custos diretos de fabricao de cada uma das etapas: extrao em descontnuo (precipitao) e extrao em contnuo (extrao lquido-lquido), levando em considerao os rendimentos obtidos em escalas laborais por CSAR (1999) e BERTEVELLO (2001). Para a anlise de viabilidade econmica, foi utilizado o mtodo do markup, pois este, independe de um diagrama de fluxo de caixa. Os clculos foram realizados baseados em uma escala laboral, executada por um funcionrio de nvel tcnico, com jornada de trabalho de 40 horas semanais. Os encargos salariais foram baseados nos valores mdios praticados aos empregados enquadrados no regime da CLT (confederao das leis trabalhistas).

6.1. Custos da Extrao por Batelada A extrao por batelada realizada adicionando-se etanol no caldo prensado de abacaxi. Para tanto so necessrios os equipamentos e seus valores listados na Tabela 15: Equipamento Centrfuga Triturador Agitador Vidraria Espectofotmetro TOTAL Preo Mdio em R$ 1650,00 780,00 350,00 1000,00 10.000,00 13780,00 Fornecedor Quimis Aparelhos Cientficos LTDA Quimis Aparelhos Cientficos LTDA Quimis Aparelhos Cientficos LTDA Quimis Aparelhos Cientficos LTDA Quimis Aparelhos Cientficos LTDA

Tabela 15 : Descrio dos valores de investimento em equipamentos para extrao por batelada. Cotao realizada em julho/2005.

76 A matria-prima bsica para realizar a extrao so etanol e abacaxi, que tiveram, seus preos mdios cotado em R$5,20/L e R$1,10/ kg (Casa Americana e CEASA/SP, julho, 2005). As amostras foram preparadas com abacaxi de diversos tipos, encontrados em mercados e, exceto a coroa, foram triturados e filtrados eliminando as fibras. Os resultados obtidos mostram que com 80% v/v precipita-se praticamente toda a bromelina presente, porm precipita-se somente cerca de 20% das protenas iniciais, fato que permite concluir que da massa inicial de abacaxi, somente 20% correspondem ao material de interesse. Pode-se estimar que mensalmente seriam obtidos 8 kg de precipitado. O custo para este montante poderia ento ser calculado, como sendo a somatria da quantidade necessria de abacaxi e etanol. Se somente 20% da amostra ser purificada, seriam ento necessrias 46 kg de amostra e conseqentemente, 1001 litros de etanol. Na Tabela 16 esto listados os custos com a matria - prima para uma produo mensal de 8 kg de precipitado. Matria - Prima Abacaxi 46 kg Etanol 1001 L TOTAL Custo R$ 50,60 5255,80 5306,40

Tabela 16: Custos de matria-prima para produo de 8 kg de precipitado. A mo de obra a ser considerada configura-se no salrio mensal mdio de um tcnico, que estimada em R$ 500,00 por ms com jornada de 40 horas semanais. Os encargos trabalhistas somam algo em torno de 133% do salrio base, portanto teramos: R$ 500,00 + R$ 665,00 = R$1165,00 de mo de obra direta por 40 horas semanais. Se a produo de 8 kg de bromelina estimada para um ms de trabalho: Custo total de Mo de Obra: R$ 1165,00 O custo total do produto seria: CT= Custo da Matria - Prima + Custo da Mo de Obra CT = 5306,40 + 1165,00 = 6471,40, que corresponde a produo de 8 kg de precipitado. O custo por kg , seria ento de R$ 808,90.

77 Para calcular o preo de venda necessrio considerar algumas despesas, alm da carga tributria, que esto descritas na Tabela 17. Despesas ICMS PIS/COFINS Despesas de Venda Despesas Administrativas Total Porcentagem 18% 9,25% 4% 6% 37,25 %

Tabela 17: Descrio de despesas e tributos

O preo de venda (PV) definido pela equao: PV=

CT 1 Despesas + Im postos + M arg em

Equao 7

Portanto tem-se o preo de venda em R$ 1289,00/kg sem acrescentar qualquer margem de lucro. A Tabela 18 demonstra a variao do preo de venda por kg de precipitado, com a margem de lucro. Margem de Lucro (%) 10 20 30 40 50 60 Preo de Venda (R$/kg) 1533,5 1892,2 2470,0 3555,6 6344,0 29414,0

Tabela 18 : Variao do Preo de venda em Funo da Margem de Lucro.

Pode-se encontrar no mercado um fitomedicamento com uma quantidade (AnexoA) equivalente de 4,4 x 10-3 mg de Bromelina por mL e sendo o mesmo vendido por R$ 19,46 o frasco com 100 mL pode-se estimar que este laboratrio teria um custo de R$0,0528 com a bromelina, se o processo de precipitao por etanol pudesse ser utilizado. Na Figura 8 so apresentados os resultados da evoluo do preo de venda com a margem de lucro:

78
35000

Preo

30000 25000 20000 15000 10000 5000 0

10

20

30

40

50

60

Margem de Lucro Figura 8: Variao do preo de venda em relao margem de lucro. A facilidade de comercializao do produto seria maior se fosse possvel definir o ndice de purificao desejado para a bromelina, para cada um dos usos a que ela est indicada. Alm do fato de que os medicamentos precisam, necessariamente, seguir uma srie de protocolos para obter o registro no Ministrio da Sade e a autorizao de comercializao. O retorno sobre o investimento pode ser obtido atravs da equao 8: R= Investimento Lucrolquido Equao 8

As quantidades de precipitado necessrias para obter o retorno sobre o investimento so funo da margem de lucro, conforme mostra a Tabela 19.

Margem de Lucro (%) 10 20 30 40 50 60

Massa de precipitado (kg) 19 13 8 5 2,5 0,5

Tabela 19: Quantidade de precipitado necessria para o retorno sobre o investimento em funo da margem de lucro. Sabe-se que em um ms a produo pode chegar at 8 kg de precipitado, nas condies descritas. Analisando os dados observa-se que o maior prazo de retorno sobre o investimento ocorreria para uma margem de lucro de 10%que apresenta um tempo mdio

79

inferior ao desejvel para que um investimento retorno seja considerado vivel que estimado em vinte e quatro meses. Adota-se ento a hiptese de que o ndice de purificao obtido na precipitao no aceitvel para o mercado em que se pretende a comercializao. Surge, portanto a necessidade de aumentar seu teor de purificao e para isso utilizar-se- a extrao lquidolquido em duas fases aquosas.

6. 2. Custos de Purificao

Nos experimentos realizados por BERTEVELLO (2001) foi utilizada uma microcoluna com um sistema de agitao, e 4 bombas peristlticas. Equipamento Microcoluna Bombas (4) Sistema de Agitao TOTAL Valor em R$ 1000,00 7200,00 1800,00 10.000,00

Tabela 20: Custos de equipamentos para purificao em contnuo. A Tabela 21 mostra a cotao da matria-prima a ser utilizada na purificao.

Material Valor em R$ Fornecedor Fosfato de Potssio Monobsico 23,60/kg Casa Americana Fosfato de Potssio Dibsico 28,60/kg Casa Americana Polietileno Glicol 58,40/kg Casa Americana Precipitado 1289,00/kg Tabela 21: Custos com matria - prima para purificao em contnuo. Cotao realizada em julho 2005. Como o sistema de extrao lquido-lquido utilizado para a purificao da bromelina obtida no processo de precipitao, torna-se possvel utilizar a mesma mo de obra, visto que os processos necessitam de preparao e controles, mas podem ser realizados concomitantemente, ou de forma seqenciada. Para a extrao na coluna so utilizados: soluo de fosfato de potssio pH 7 e soluo de PEG 1500, os custos esto estimados para 300 mL de cada uma das solues obedecendo a concentrao global utilizada por BERTEVELLO (2001). Como a eficincia do sistema est atrelada recuperao da protena em atividade enzimtica e o valor mdio

80

obtido de 57,99% da massa de precipitado inserida na coluna, utiliza-se 1,73 g de precipitado na coluna a fim de obter o custo por grama de extrato purificado produzido na coluna de extrao. Massa em g 18,38 g 34,11g 52,5 g 1,73 g R$ 0,44 0,98 3,00 2,20 6,68

Fosfato de potssio Monobsico Fosfato de Potssio Dibsico Polietileno Glicol Precipitado TOTAL DE MATRIA-PRIMA

Tabela 22: Custos com matria -prima para purificao na obteno de 1 grama. Como o tempo necessrio para a coluna entrar em regime permanente gira em torno de 40 minutos, e foi proposta a utilizao da mesma mo de obra, pode-se concluir que o custo total ser obtido somente atravs da matria-prima. Percebe-se que o custo operacional do processo de purificao menor que o custo operacional do processo de extrao, porque utilizada a extrao lquido-lquido em duas fases aquosas, formada essencialmente de gua, com um consumo reduzido de reagentes. Para o clculo do preo de venda as despesas adicionais e tributrias sero as mesmas utilizadas anteriormente, com a equao 7, ento teremos: PV= CT 1 Despesas + Im postos + M arg em

PV = 10,65/g sem margem de contribuio. A Tabela 23 apresenta um estudo da evoluo de preo de venda do extrato purificado em funo da margem de lucro. Margem de Lucro(%) 10 20 30 40 50 60 Preo de Venda (R$) 12,66 15,62 20,40 29,36 52,40 242,90

Tabela 23: Evoluo de preo de venda do extrato purificado em funo da margem de lucro.

81

A Figura 9 demonstra a evoluo do preo de vendas em funo da margem de lucro:

300 Preo 250 200 150 100 50 0

10

20

30

40

50

60

Margem de Lucro Figura 9: Evoluo do preo de vendas em funo da margem de lucro.

O retorno sobre o investimento deve ser calculado, da mesma maneira , utilizando a Equao 8 e portanto teramos: R= Investimento Lucrolquido

ATabela 24 apresenta a mnima quantidade em gramas de extrato purificado a ser vendida em funo da margem de lucro, que justifica o investimento.

Margem de Lucro (%) 10 20 30 40 50 60

Quantidade em g 4975 2012 1025 535 240 43

Tabela 24: Quantidade em gramas de extrato purificado a ser vendida em funo da margem de lucro para retorno sobre o investimento. No caso de ter-se mercado consumidor para a quantidade mnima a ser vendida para justificar o investimento num prazo inferior a dois anos, pode-se processo de purificao com a micro-coluna. considerar o

82

Considerando uma produo de 200 g por ms, o prazo de retorno do investimento (pay back), em meses, poderia ser apresentado em funo da margem de lucro como mostra a Figura 10.

Figura 10: Prazo de retorno sobre o investimento(pay back) em funo da margem de lucro A grande questo ao iniciar um processo de purificao o grau de pureza exigido para a protena. Protenas para fins teraputicos ou de uso direto em humanos necessitam de um alto grau de pureza, o que no necessrio para as enzimas que sero aplicadas em processos industriais. Em uma purificao em larga escala, o processo normalmente consiste de 4 a 6 etapas que podem ser divididas em dois grupos. O primeiro formado pelos processos de recuperao da protena: separao e ruptura de clulas, separao dos fragmentos e concentrao da protena. No segundo grupo o objetivo purificar a protena, utilizando-se das etapas de pr-tratamento ou isolamento primrio, purificao de alta resoluo e refinamento final. No caso do processo proposto neste trabalho podemos verificar que o custo das primeiras etapas pode ser sensivelmente reduzido com alternativas simples, podendo ser posteriormente utilizada a purificao de alta resoluo e refinamento final.

83

Como um processo de baixo investimento, poderia ter seus custos ainda mais reduzidos se instalado diretamente no agronegcio, onde poderiam ser utilizados no processo proposto os resduos agrcolas, ao invs do fruto propriamente dito e o agricultor teria mais um produto a oferecer, diversificando seus ganhos. H ainda a ociosidade que vem sendo observada na indstria farmacutica onde os investimentos em equipamentos seriam muito reduzidos e a proposta de insero de um novo produto com baixos custos produtivos poderia alavancar novos negcios no setor. O desenvolvimento de um novo processo, e a devida apurao de seus custos e prazos de retorno tornam a cincia desenvolvida em tecnologia. Em mdia, os empresrios que trabalham com pesquisa e desenvolvimento no aplicam mais que 0,64% de seu faturamento em inovao, seja na melhoria de seus produtos ou na compra de equipamentos. A Lei de Inovao representa um grande avano no setor, pois permite s empresas inovadoras abaterem no Imposto de Renda, por exemplo, 160% do total investido em pesquisa e desenvolvimento (P&D), podendo chegar a 200% caso apresentem, em seus quadros, mestres e doutores, alm de produtos patenteados. O custo de desenvolvimento interno de um produto novo pode alcanar valores muito elevados (KOTLER, 1998), ento uma alternativa vivel incentivar o desenvolvimento de tecnologias nos centros de excelncia em pesquisa, normalmente concentrados nas universidades, reduzindo os custos de desenvolvimento e aplicando a cincia desenvolvida no prprio pas.

84 7. COMENTRIOS FINAIS E CONCLUSES

A bromelina uma enzima proteoltica promissora e a investigao de um mtodo menos oneroso para sua obteno uma vantagem competitiva.

Assim como o mercado de fitoterpicos, a utilizao da bromelina em medicamentos ainda pequena, mas apresenta grandes possibilidades de expanso.

O processo desenvolvido pode ser utilizado mundialmente, pois utiliza materiais simples e reagentes analticos disponveis, de fcil obteno e baixa toxicidade.

O estmulo ao investimento em novas tecnologias crescente no Brasil que deficiente no desenvolvimento de inovaes.

O mtodo utilizado para apurar os custos de fabricao simples e pode ser aplicado em outros processos em desenvolvimento, facilitando assim a busca de fomento de investidores do setor privado.

O processo pode ser utilizado para a reduo de vrias etapas de recuperao e purificao de protenas de forma mais econmica que os mtodos cromatogrficos tradicionalmente utilizados.

Tendo o clima favorvel e sendo o Brasil o segundo maior produtor de abacaxi, utilizando-se das novas tecnologias desenvolvidas, o agricultor poder diversificar sua oferta de produtos, utilizando resduos agrcolas.

A soluo para a reduo da importao o desenvolvimento interno de produtos e processos, utilizando mo de obra e matria - prima nacional.

Os custos apurados, nas condies propostas so de R$ 808,90/kg de precipitado e R$ 10,65/g de extrato purificado.

A anlise econmica revelou a possibilidade concreta de aplicao comercial do mtodo proposto.

85

8. SUGESTO DE TRABALHOS FUTUROS

Uma vez que no possvel a obteno de um trabalho totalmente completo e abrangente, porque a cincia um organismo vivo e em pleno desenvolvimento torna-se importante a apresentao de algumas sugestes que possam contribuir para aprofundar os conhecimentos no processo de extrao e recuperao proposto. Assim, como continuao do trabalho efetuado, prope-se:

Realizar o biomonitoramento do processo, com o objetivo de identificar precisamente o tipo e grau de purificao da bromelina obtida em cada etapa do processo e suas aplicaes teraputicas.

Realizao de uma pesquisa de mercado para a bromelina Utilizao de outros processos de purificao como a dilise ou a ultrafiltrao.

Realizao dos ensaios utilizando como matria prima o resduo agrcola, tais como a haste (steam) do abacaxi.

86 9. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS

AIRES-BARROS,

MR.,

Extrao

lquido-lquido

de

produtos

biolgicos:

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______________________________________________________________________ 95 ANEXO
Bromelin R$ 19,46 Ananas comosus L. (suspenso oral) MS: 1.1557.0053.001-1 (fr c/ 100ml)

BROMELIN Ananas comosus L.

MEDICAMENTO FITOTERPICO TRADICIONAL FORMA FARMACUTICA E APRESENTAO Suspenso oral: embalagem com frasco pet contendo 100mL, acompanhado de copo-medida. USO PEDITRICO OU ADULTO NOMENCLATURA BOTNICA OFICIAL (gnero, espcie, variedade, autor do binmio e famlia) Ananas comosus L. (Bromeliaceae) PARTE UTILIZADA DA PLANTA Polpa da fruta. COMPOSIO DO MEDICAMENTO, INDICANDO A RELAO REAL, EM PESO OU VOLUME DA MATRIA-PRIMA VEGETAL USADA E A CORRESPONDNCIA EM MARCADORES E/OU PRINCPIOS ATIVOS, QUANDO CONHECIDOS. Concentrado de enzimas naturais. Cada 1mL contm: Extrato de Ananas comosus* .............................................. 0,66g Veculo q.s.p. ......................................................................... 1mL (Nipagin, Nipazol, Mel de abelhas, Benzoato de sdio, lcool etlico, gua purificada) * Equivalente a 4,4 x 10-6g de Bromelina. INFORMAO AO PACIENTE O Ananas comosus um produto fitoterpico com ao mucoltica e fluidificante das secrees brnquicas e das vias areas superiores. Este medicamento deve ser guardado dentro da embalagem original, temperatura entre 15 e 30C, ao abrigo da luz e umidade. Nestas condies, o prazo de validade do medicamento de 24 meses, a partir da data de fabricao. Ao adquirir o medicamento, confira sempre o prazo de validade impresso na embalagem do produto. Nunca tome medicamento com prazo de validade vencido. Aps aberto, consumir at 08 dias. Informe seu mdico a ocorrncia de gravidez na vigncia do tratamento ou aps o seu trmino. Informar ao mdico se est amamentando. "No deve ser utilizado durante a gravidez e a amamentao, exceto sob orientao mdica. Informe ao seu mdico ou cirurgio-dentista se ocorrer gravidez ou iniciar amamentao durante o uso deste medicamento". Siga a orientao do seu mdico, respeitando sempre os horrios, as doses e a durao do tratamento. No interromper o tratamento sem o conhecimento do seu mdico. Informe seu mdico o aparecimento de reaes desagradveis. "TODO MEDICAMENTO DEVE SER MANTIDO FORA DO ALCANCE DAS CRIANAS". Informe seu mdico sobre qualquer medicamento que esteja usando, antes do incio, ou durante o tratamento. 'No h contra-indicao relativa a faixas etrias. Este medicamento contra-indicado nos casos de: hipersensibilidade conhecida a qualquer um dos componentes da frmula, durante a gravidez, se estiver amamentando e em pacientes diabticos.

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"NO TOME REMDIO SEM O CONHECIMENTO DO SEU MDICO, PODE SER PERIGOSO PARA A SADE". INFORMAO TCNICA COMPOSIO O Ananas comosus associa, em sua composio, as enzimas com atividades proteolticas: bromelina, ribonuclease, glucose-oxidase, invertase e diastase. MECANISMO DE AO Contribui para a melhor fluidificao das secrees mucosas do paciente, graas s propriedades mucolticas e fluidificantes destas enzimas, conforme pesquisas realizadas pela Universidade Federal de Pernambuco, Universidade de Pernambuco (estadual) e Universidade Federal da Paraba. As enzimas bromelina, ribonuclease, glucose oxidase, invertase e diastase contidas no Ananas comosus, catalizam a quebra de ligaes entre as ligaes peptidicas, pela incorporao de molculas de gua, facilitando, assim a fluidificao do muco espesso. A bromelina uma endopeptidase que no necessita de sistema precursor para desempenhar suas atividades farmacolgica e teraputica. Alm disso, o Ananas comosus contm os ctions divalentes dos oligoelementos magnsio, mangans, zinco, ferro e clcio, que atuam como cofatores nas funes das referidas enzimas. INDICAES Bromelin est indicado como tratamento coadjuvante nas traqueobronquites e suas manifestaes. CONTRA-INDICAES - Pacientes com hipersensibilidade a qualquer um dos componentes da frmula; - Hipersensibilidade a Bromelina - Gravidez e lactao; - Pacientes diabticos. PRECAUES E ADVERTNCIAS Ateno: Este medicamento contm acar, portanto, deve ser usado com cautela em portadores de diabetes. INTERAES MEDICAMENTOSAS Interaes medicamentosas com uso de Bromelin no foram observadas e/ou registradas. REAES ADVERSAS/COLATERAIS E ALTERAES DE EXAMES LABORATORIAIS No existe registro de reaes adversas, colaterais ou alteraes de exames laboratoriais com o uso do Bromelin. POSOLOGIA Crianas de 3 meses a 1 ano: 2,5mL, 3 vezes ao dia. Crianas de 1 a 8 anos: 5,0mL, 3 vezes ao dia. Crianas acima de 8 anos e adultos: 10mL (copo-medida cheio), 3 vezes ao dia. SUPERDOSAGEM No existe registro de reaes adversas com uso de superdosagem. PACIENTES IDOSOS Pacientes idosos no precisam de cuidados especiais para usar o Bromelin nas dosagens indicadas. MS 1.1557.0053 Farm. Resp.: Rosa Lcia Carneiro da Silva - CRF-PE 1938 Bromelin e Hebron so marcas sob licena da Hebron Farmacutica - Pesquisa, Desenvolvimento e Inovao Tecnolgica CNPJ 05.314.980/0001-10

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Melxi R$ 19,60 Ananas comosus L. (suspenso oral) MS: 1.1557.0054.001-5 Suspenso oral (fr c/ 100ml)

Melxi

Medicamento de origem fitoterpica. Tem como princpio ativo Ananas comosus L., que associa, em sua composio, as enzimas com atividades proteolticas: bromelina, ribonuclease, glucose-oxidase, invertase e diastase. Resultado de pesquisa realizada pela Universidade Federal de Pernambuco- UFPE e Universidade de Pernambuco UPE

MEDICAMENTO FITOTERPICO TRADICIONAL FORMA FARMACUTICA E APRESENTAO Suspenso oral: embalagem com frasco pet contendo 100mL, acompanhado de copo-medida. USO PEDITRICO OU ADULTO NOMENCLATURA BOTNICA OFICIAL (gnero, espcie, variedade, autor do binmio e famlia) Ananas comosus L. (Bromeliaceae) PARTE UTILIZADA DA PLANTA Polpa da fruta. COMPOSIO DO MEDICAMENTO, INDICANDO A RELAO REAL, EM PESO OU VOLUME DA MATRIA-PRIMA VEGETAL USADA E A CORRESPONDNCIA EM MARCADORES E/OU PRINCPIOS ATIVOS, QUANDO CONHECIDOS. Concentrado de enzimas naturais. Cada 1mL contm: Extrato de Ananas comosus* ............................................... 0,66g Veculo q.s.p. ....................................................................... 1mL (Nipagin, Nipazol, Mel de abelhas, Benzoato de sdio, lcool etlico, gua purificada) * Equivalente a 4,4 x 10-6g de Bromelina. INFORMAO AO PACIENTE O Ananas comosus um produto fitoterpico com ao mucoltica e fluidificante das secrees brnquicas e das vias areas superiores. Este medicamento deve ser guardado dentro da embalagem original, temperatura entre 15 e 30C, ao abrigo da luz e umidade. Nestas condies, o prazo de validade do medicamento de 24 meses, a partir da data de fabricao. Ao adquirir o medicamento, confira sempre o prazo de validade impresso na embalagem do produto. Nunca tome medicamento com prazo de validade vencido. Aps aberto, consumir at 08 dias. Informe seu mdico a ocorrncia de gravidez na vigncia do tratamento ou aps o seu trmino. Informar ao mdico se est amamentando. "No deve ser utilizado durante a gravidez e a amamentao, exceto sob orientao mdica. Informe ao seu mdico ou cirurgio-dentista se ocorrer gravidez ou iniciar amamentao durante o uso deste medicamento". Siga a orientao do seu mdico, respeitando sempre os horrios, as doses e a durao do tratamento. No interromper o tratamento sem o conhecimento do seu mdico. Informe seu mdico o aparecimento de reaes desagradveis. "TODO MEDICAMENTO DEVE SER MANTIDO FORA DO ALCANCE DAS CRIANAS". Informe seu mdico sobre qualquer medicamento que esteja usando, antes do incio, ou durante o tratamento. 'No h contra-indicao relativa a faixas etrias.

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Este medicamento contra-indicado nos casos de: hipersensibilidade conhecida a qualquer um dos componentes da frmula, durante a gravidez, se estiver amamentando e em pacientes diabticos. "NO TOME REMDIO SEM O CONHECIMENTO DO SEU MDICO, PODE SER PERIGOSO PARA A SADE". INFORMAO TCNICA O Ananas comosus associa, em sua composio, as enzimas com atividades proteolticas: bromelina, ribonuclease, glucose-oxidase, invertase e diastase. Contribui para melhor fluidificao das secrees mucosas do paciente, graas s propriedades mucolticas e fluidificantes destas enzimas, conforme pesquisas realizadas pela Universidade Federal de Pernambuco, Universidade de Pernambuco (estadual) e Universidade Federal da Paraba. As enzimas bromelina, ribonuclease, glucose oxidase, invertase e diastase contidas no Ananas comosus, catalizam a quebra de ligaes entre as ligaes peptidicas, pela incorporao de molculas de gua, facilitando, assim a fluidificao do muco espesso. A bromelina um endopeptidase que no necessita de sistema precursor para desempenhar sua atividade farmacolgica e teraputica. Alm disso, o Ananas comosus contm os ctions divalentes dos oligoelementos magnsio, mangans, zinco, ferro e clcio, que atuam como cofatores nas funes das referidas enzimas. INDICAES Melxi est indicado como tratamento coadjuvante nas traqueobronquites e suas manifestaes. CONTRA-INDICAES - Pacientes com hipersensibilidade a qualquer um dos componentes da frmula; - Hipersensibilidade a Bromelina; - Gravidez e lactao; - Pacientes diabticos. PRECAUES E ADVERTNCIAS Ateno: Este medicamento contm mel de abelha, portanto, deve ser usado com cautela em portadores de Diabetes. INTERAES MEDICAMENTOSAS As interaes medicamentosas no foram observadas e/ou registradas. REAES ADVERSAS/COLATERAIS E ALTERAES DE EXAMES LABORATORIAIS Ainda no foram relatadas a intensidade e freqncia das reaes adversas, colaterais ou alteraes de exames laboratoriais com o uso do Melxi. POSOLOGIA Crianas de 3 meses a 1 ano: 2,5mL, 3 vezes ao dia. Crianas de 1 a 8 anos: 5,0mL, 3 vezes ao dia. Crianas acima de 8 anos e adultos: 10mL (copo-medida cheio), 3 vezes ao dia. SUPERDOSAGEM No h perigo de superdosagem com o uso de Melxi. PACIENTES IDOSOS Pacientes idosos no precisam de cuidados especiais para usar o Melxi nas dosagens indicadas.

MS 1.1557.0054 Farm. Resp.: Rosa Lcia Carneiro da Silva - CRF-PE 1938

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Melxi e Hebron so marcas sob licena da Hebron Farmacutica - Pesquisa, Desenvolvimento e Inovao Tecnolgica CNPJ 05.314.980/0001