28 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.

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:uunu.6:guJu:ju:j:
orapia gnica o tratamonto
do doonas lasoado na trans-
torncia do matorial gonti-
co. Im sua torma mais sim-
plos, a torapia gnica consis-
to na insoro do gonos tun-
cionais om clulas com gonos dotoituosos,
para sulstituir ou complomontar ossos
gonos causadoros do doonas. A maioria
das tontativas clnicas do torapia gnica
atualmonto om curso so para o tratamonto
do doonas adquiridas, como AlDS, noo-
plasias malignas o doonas cardiovascula-
ros, mais do quo para doonas
horoditrias. Im alguns proto-
colos, a tocnologia da transto-
rncia gnica vom sondo usada
para altorar tonotipicamonto uma
clula do tal modo a torn-la
antignica o assim dosoncadoar
uma rosposta imunitria. Do
manoira anloga, um gon ostra-
nho podo sor insorido om uma
clula para sorvir como um
marcador gonotpico ou tonot-
pico, quo podo sor usado tanto
om protocolos do marcao g-
nica quanto na prpria torapia
gnica. O panorama atual indica
quo a torapia gnica no so
limita s possililidados do suls-
tituir ou corrigir gonos dotoituo-
sos, ou oliminar solotivamonto
clulas marcadas. Um ospoctro
toraputico muito mais amplo
so aprosonta modida om quo
novos sistomas so dosonvolvi-
dos para pormitir a lilorao do
protonas toraputicas, tais como
hormonios, citocinas, anticorpos,
antgonos ou novas protonas
rocomlinantos. A torapia gnica
a osporana do tratamonto
para um grando numoro do do-
onas at hojo considoradas in-
curvois por mtodos convonci-
onais, das horoditrias o dogo-
norativas s divorsas tormas do
cncor o doonas intocciosas.
A tocnologia lsica onvolvida om qual-
quor aplicao da torapia gnica a trans-
torncia gnica. Vrios mtodos atuais do
transtorncia gnica o suas vantagons o
dosvantagons osto listados nas lalolas 1
a 3. A manoira mais simplos do transtorir
gonos para clulas o tocidos por moio da
inoculao do DNA puro, com tcnicas do
u.:.u~n, ~I~I:j:nn ~ u~Iu
.nI.:I.. Vtodos mais olalorados o
mais oticiontos incluom a administrao do
DNA oncapsulado t~g, I.j:u:), ou
atravs do votoros virais, quo podom sor
tragmontos do DNA do vrus contondo o
DNA a sor transtorido, ou mosmo a part-
cula viral tormada por protonas virais
ompacotando um DNA viral moditicado
do manoira a tornar o votor monos txico,
monos patognico ou no-patognico.
A palavra :~I:, quo doriva do latim
:~I: taquolo quo carroga, ontroga) do-
tino o agonto quo constitui ou contm os
gonos a sorom transtoridos o oxprossos om
uma clula rocoptora. Os divorsos tipos do
votoros so utilizados com o oljotivo do
lovar o DNA toraputico ao nucloo das
!e|ele !
e|e1es Otlmltes jere la|re1tee 1e Oeaes em Celtles 1e eml|eres
Mctodo Vantagcns Dcsvantagcns
DNA-tostato do clcio Vorto colular duranto S ~. :.:, transtoco
o procodimonto mnima, laixa, laixo nvol do
importanto na produo do oxprosso do transgon,
votoros virais rocomlinantos,
simplos o larato, oxprosso
podo sor transitria ou ostvol,
DNA-DIAI doxtran Vais roprodutvol quo o mto- S ~. :.:, transtoco
do antorior, laixa o transitria, s
tunciona om alguns
tipos colularos
DNA-lpido tliposomos) No so intogram ao gonoma Baixa oticincia do transtoc-
hospodoiro, uso .u :.I: ~ .u o om rolao aos sistomas
:.:, carrogam grandos poda- virais, oxprosso transitria
os do DNA tto grandos como do transgon, lovo toxicidado
cromossomos intoiros), dirocio- colular, podom sor inilidos
nvois, no-imunognicos, por componontos sricos
proparaos livros do contami-
nantos tct. votoros virais), alto
grau do puroza, padronizao
DNA-protona Vaior dirocionamonto -
DNA-lpido-protona
HAs tcromossomos No so intogram no gonoma, Im dosonvolvimonto
artiticiais) insoros maioros so possvois,
molhor controlo transcricional
lotos codidas polo autor
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI 29
clulas-alvo. Outra torma do transtorncia
da monsagom gontica onvolvo a ontroga
do RNA dirotamonto ao citoplasma das
clulas, mas o RNA mais instvol quo o
DNA, o quo limita a aplicao dossa moda-
lidado do transtorncia gnica. O uso do
mitocondrias ou DNA mitocondrial tmtD-
NA) como votoros gnicos citoplasmticos
tom aplicao potoncial na roposio do
mtDNA a clulas com doticincia no mota-
lolismo onorgtico da tostorilao oxida-
tiva causada por mutaos no mtDNA.
Atora o nucloo, a mitocondria a unica
organola quo possui sou prprio DNA.
Uma quosto-chavo da torapia gnica
a oscolha do votor adoquado a cada
situao. Um votor idoal soria aquolo quo
pudosso acomodar um tamanho ilimitado
do DNA insorido, tosso disponvol om uma
torma concontrada, pudosso sor tacilmon-
to produzido, pudosso sor dirocionado
para tipos ospocticos do clulas, no por-
mitisso roplicao autonoma do DNA, pu-
dosso garantir uma oxprosso gnica a
longo prazo o tosso no-txico o no-
imunognico. lal votor ainda no oxisto o
nonhum dos sistomas do ontroga do DNA
atualmonto disponvois para transtorncia
gnica .u :.: portoito com rospoito a
qualquor um dossos pontos. At a prosonto
data, quatro sistomas do transtorncia g-
nica tDNA plasmidial comploxado, voto-
ros rotrovirais, votoros adonovirais o voto-
ros lasoados no virus adono-associado)
toram os mais usados om tontativas do
torapia gnica om humanos, totalizando
uma oxporincia clnica do corca do trs
mil paciontos om todo o mundo.
AA TTan1d1aT 1onpTcxado
Um votor plasmidial uma molcula
do DNA circular puriticada, construda por
moio do tcnicas do DNA rocomlinanto
para contor, alm do gon toraputico do
intorosso, soquncias rogulatrias tipo pro-
motoros o intonsiticadoros, para tacilitar o
controlar a oxprosso do gon. Votoros do
DNA plasmidial podom sor introduzidos
nas clulas por uma variodado do mto-
dos. O mais lvio dolos, concoitualmonto,
a injoo dirota, quo oxigo tcnicas
sotisticadas para injoo om oscala micros-
cpica. Issa tcnica, ontrotanto, limitada
polo tato do quo somonto um numoro
rolativamonto poquono do clulas podo
sor injotado om um dotorminado momon-
to. Aposar das tontativas do automatizar as
tcnicas do microinjoo, o poquono nu-
moro do clulas quo podom sor injotadas
por voz continua sondo uma grando limi-
tao. Isso mtodo do transtorncia gnica
podor tor intorosso o do utilidado clnica
so um poquono numoro do clulas puriti-
cadas da modula ssoa torom injotadas o
condios do cultivo colular torom oncon-
tradas para oxpandi-las sulstancialmonto.
Introtanto, ainda oxistir o prolloma da
oxprosso transitria, pois a maioria das
clulas injotadas com o votor no sor
capaz do mantor a oxprosso por longo
prazo. lsso oxigo outras molhorias na soqu-
ncia do votor, do modo a aumontar, por
oxomplo, a oticincia do sua intograo.
Aumonto da oticincia do transtoco
do DNA plasmidial puriticado podo sor
oltido com a tormao do algum tipo do
comploxo: lipdico, protico, ou misto.
Aps a aplicao dosso comploxo nas
clulas om cultura ou .u :.:, uma poro
sulstancial das clulas ondocita o DNA o
capaz do transportar polo monos parto
dolo para o nucloo, ondo o DNA oxpros-
so transitoriamonto por alguns dias (FIgu-
ra 1). A no sor quo o DNA plasmidial
tonha a capacidado do intograo dirigida,
aponas uma trao muito poquona tgoral-
monto muito monos do 1 por conto) das
clulas rotm o DNA pormanontomonto,
incorporando-o om sous cromossomos o
continuam a oxprossar os gonos introduzi-
dos.
1c1orc 11ra1
Vrus so votoros gnicos por oxcoln-
cia o vm ovoluindo h milhos do anos na
naturoza om associao com virtualmonto
todos os organismos, do lactrias at plan-
tas o animais. Os sistomas liomolocularos
ospocticos do transtorncia, rocomlina-
o o oxprosso gnica adotados polos
virus constituom instrumontos podorosos
para a construo do votoros mais oticion-
tos o soguros, com indicaos procisas do
uso. Bactoritagos, laculovirus, rotrovi-
rus, adonovirus o virus adono-associados
so oxomplos do virus quo toram moditi-
cados com sucosso polas tcnicas do DNA
rocomlinanto o j possuom aplicaos na
posquisa, na agricultura o na modicina.
oncoitualmonto, no surproondonto quo
virus do animais ostojam sondo usados
como votoros para a transtorncia do go-
nos para clulas do mamtoros. ontormo
listado na TabcIa 3, vrios virus vm
sondo oxplorados dosta manoira.
1c1orc Rc1ro+1ra1
Um rotrovirus murino, o virus da lou-
comia murina do Volonoy tVoVulV), toi
o primoiro sistoma votorial dosonvolvido
para aplicaos clnicas da torapia gnica.
Os concoitos gorais da produo o uso
dosso tipo do votor osto ilustrados na
FIgura 2: Por moio do tcnicas do DNA
rocomlinanto, os gonos no gonoma viral
nocossrios para a roproduo do Vo-
VulV, gonos gng, jI o ~u:, so romovidos
o sulstitudos por um gon do intorosso. O
quo solra do rotrovirus so sous olomon-
tos rogulatrios: as ropotios torminais
longas tllR), quo tuncionam como sinais
do intograo do provirus o promotoros da
transcrio o um sinal do ompacotamonto,
para pormitir quo o RNA transcrito soja
acomodado om uma partcula viral. Para a
produo dos votoros rotrovirais contondo
o gon do intorosso, utilizada uma I.uIn-
g~u ~IuIn: u~ ~ujnInu~uI contondo
os gonos gng, jI o ~u: incorporados ao
gonoma dostas clulas. Os votoros so
produzidos om altos ttulos nas clulas do
ompacotamonto o a soguir puriticados o
injotados no pacionto ttorapia gnica .u
:.:) ou postos om contato com clulas
colhidas do pacionto o mantidas om codi-
os do cultivo colular ttorapia gnica ~.
:.:). Os votoros tm a halilidado do
ontrar nas clulas-alvo, transcrovor sou
RNA na torma do DNA tgraas atividado
da onzima I:nu::.In:~ :~:~::n), o so into-
grar ostavolmonto om um cromosomo da
clula como rosultado da prosona das
soquncias rogulatrias rotrovirais roma-
noscontos. Uma voz intogrado, o gon inso-
rido podo sor oxprosso para produzir a
protona toraputica dosojada. O votor ro-
troviral, dosprovido dos gonos para a ropli-
cao viral, no compotonto para a
roplicao tdiz-so quo o votor dotocti-
vo), o por isso no capaz do produzir
mais virus compotontos dontro da clula-
alvo. Portanto, o votor ago como um agon-
to tinal do transtorncia gnica, doixando
uma cpia do sua soquncia no gonoma da
clula-alvo.
1c1orc Adcro+1ra1
Os adonovrus humanos so DNA-
vrus, no onvolopados, com um gonoma
dupla-tita linoar do, aproximadamonto, 36
kl, oncapsulado om um capsdoo icosa-
drico modindo 0-100 nm do dimotro. O
capsdoo contm om sous vrticos ospcu-
las por ondo so d a intorao com rocop-
toros colularos. Na naturoza, os adonovirus
so capazos do intoctar clulas do trato
rospiratrio o gastrointostinal, causando
gripos, gastroontoritos om crianas ou con-
juntivitos opidmicas. As glndulas ado-
nidos so um do sous alvos o do ondo so
originou o nomo adonovrus. lntocos
onvolvondo o trato urinrio, vias hopticas
o o sistoma norvoso contral podom ocorror
ospordicamonto. A maioria, sono a tota-
lidado dos adultos j toi oxposta ao adono-
virus o j possui anticorpos anti-adonovi-
rus. Ao contrrio dos rotrovirus, os adono-
virus so roplicam indopondontomonto da
diviso da clula hospodoira, o sou cromo-
somo raramonto so intogra ao gonoma da
clula, pormanocondo opisomal na maio-
ria das vozos. A intograo paroco ocorror
somonto na prosona do altos nvois do
intoco om clulas om diviso, mas osso
ovonto no contrilui signiticativamonto
para a utilidado dostos virus como votoros.
Os votoros adonovirais possuom um largo
ospoctro do intoctividado colular quo in-
clui virtualmonto todas as clulas ps-
mitticas o mitticas (FIgura 3), o tamlm
podom sor produzidos om olovados ttu-
los.
30 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI
A ostrutura gonomica dos adonovirus
mais comploxa quo a dos rotrovirus. O
gonoma adonoviral coditica aproximada-
monto 15 protonas. A oxprosso gnica
viral ocorro do uma manoira ordonada o
dirigida, om grando parto, polos gonos I1A
o I1B, localizados na poro 5 do gonoma
adonoviral. Issos gonos possuom tunos
do transativao para a transcrio do
vrios gonos virais o da clula hospodoira.
omo ostos gonos da rogio I1 osto
onvolvidos na roplicao do adonovirus,
sua romoo torna o virus incompotonto
para roplicao ou dotoctivo. A romoo
tamlm cria ospao para a insoro do um
gon do intorosso toraputico. A rogio I3,
cujo produto ost onvolvido na halilidado
do virus do oscapar do sistoma imunolgi-
co do organismo hospodoiro, tamlm podo
sor sulstituda por um DNA oxgono.
Para a produo do votoros adonovi-
rais, nocossrio utilizar, a oxomplo do
quo ocorro com votoros rotrovirais dotoc-
tivos, uma linhagom do clulas ompacota-
doras contondo gonos virais quo transcom-
plomontam o votor dotoctivo a sor produ-
zido. As otapas principais do produo o
uso do um votor adonoviral osto ilustra-
das na FIgura 4. Uma das modalidados
comoa pola produo do um plasmdoo
ou cosmdoo contondo o gonoma do ado-
novirus com doloos om algumas rogios
ospociais, como a rogio I1. A doloo do
I1 torna o virus dotoctivo. O gon do
intorosso podo sor clonado nostas rogios
dolotadas, o o plasmdoo ou cosmdoo
podo sor multiplicado om uma cultura do
lactria. O plasmdoo ou cosmdoo puriti-
cado onto transtoctado para as clulas
ompacotadoras ondo olo ompacotado na
torma do partculas adonovirais dotoctivas.
Os votoros adonovirais assim produzidos
so isolados do moio do cultivo das clulas
ompacotadoras, o puriticados por ultra-
contritugao om gradionto do cloroto do
csio, quo tamlm concontra o votor om
susponsos com olovada titulao tmais do
10
13
UlP ml
-1
), ou por cromatogratia. O
virus puriticado ostvol om uma varioda-
do do tampos aquosos o podo sor congo-
lado por porodos prolongados som porda
do atividado.
Uma ostratgia altornativa do produ-
o do votoros adonovirais consisto om
proparar um plasmdoo no qual o gon do
intorosso tlanquoado por soquncias do
DNA adonovirais. Istas soquncias sorvom
como rogios controlo o contm sinais do
ompacotamonto o stios para a rocomlina-
o com DNA gonomico adonoviral, quo
sor usado para roconstituir adonovirions
dotoctivos dontro da clula ompacotadora.
A transtoco dosso plasmdoo para clu-
las ompacotadoras, juntamonto com o DNA
gonomico do adonovirus com doloos
solocionadas t~g, I1, I3) lova, por moio
do :~u.unn IuIgn, tormao
do partculas adonovirais com ots)
transgontos) sulstituindo as rogios provi-
amonto dolotadas. Portanto, tanto a clona-
gom dirota, quanto a rocomlinao hom-
loga podom sor usadas para produzir ado-
novirions dotoctivos. om o dosonvolvi-
monto do novas linhagons do clulas do
ompacotamonto contondo um numoro cada
voz maior do gonos adonovirais para a
transcomplomontao, j possvol pro-
duzir votoros adonovirais contondo um
numoro cada voz monor do soquncias
adonovirais o um numoro cada voz maior
do soquncias oxgonas. Um votor adono-
viral all dolotod toi produzido roconto-
monto. Isso votor possua 28 kl do DNA
oxgono tgon da distrotina) o aponas 8 kl
do soquncias adonovirais.
1c1orc Adcro-Aoc1ado
Algumas caractorsticas dostavorvois
dos votoros adonovirais o rotrovirais rovis-
tas na TabcIa 3 incluom a incapacidado do
intograo do DNA dos votoros adonovi-
rais ao gonoma da clula hospodoira, oca-
sionando uma oxprosso instvol o a into-
grao aloatria do DNA dos votoros rotro-
virais ao gonoma hospodoiro, podondo
acarrotar mutagnoso insorcional ativado-
ra do proto-oncogonos colularos humanos
ou inativao do gonos suprossoros do
tumor. Alm disso, ossos votoros podom
provocar rosposta imunolgica dos tipos
humoral o colular o podom sor patogni-
cos.
Votoros altornativamonto indicados para
contornar ossos prollomas so lasoados
no virus adono-associado tAAV, nu~u-
n::.nI~u :.:u:), um poquono vrus do
DNA, no onvolopado, no patognico,
portonconto tamlia Parvoviridao. O AAV
possui uma unica molcula do DNA tita
simplos do 4681 lasos, com ropotios
torminais invortidas tllRs, .u:~:I~u I~:u.-
unI :~j~nI:). Os llRs so soquncias palin-
dromicas do 145 paros do lasos onvolvidas
na rogulao do ciclo colular do AAV,
dispostas nas poros torminais 5 o 3 do
gonoma viral, quo sorvom como origom o
iniciadoros para a roplicao do DNA.
llanquoadas polas llRs, duas amplas uI-
uu:n: n~:In: u~ I~.Iu:n coditicam uma
protona rogulatria o outra ostrutural do-
nominadas :~j o nj, rospoctivamonto. A
rogio do loitura situada na poro 5 tgon
:~j) coditica quatro protonas no-ostrutu-
rais onvolvidas com a roplicao gonomi-
ca. A poro 3 contm o gon nj, quo
coditica trs protonas ostruturais para a
tormao do capsdoo viral.
O AAV considorado um u~j~uu:.-
:u: porquo somonto capaz do so roplicar
om uma clula na prosona do um virus
auxiliar tadonovirus ou virus da horpos),
quo lho tornoa, om transcomplomonta-
o, os tatoros auxiliaros ossonciais para
sua roplicao. Na ausncia do vrus auxi-
liar, o gonoma do AAV intogra-so, proto-
roncialmonto, om um stio ospoctico
tAAVS1) no lrao curto do cromossomo
19, ontro q13.3 o qtor, utilizando para isso
os llRs, com alta troquncia o ostalilidado,
para ostalolocor uma intoco latonto tan-
to om clulas mitticas quanto om clulas
ps-mitticas. Rocontomonto, tormas opi-
somais do vrus tamlm toram idontitica-
Mctodo Vantagcns Dcsvantagcns
Vicroinjoo dirota Alta taxa do transtoco, S ~. :.:, potoncial para
ovita a dogradao cito- uso om torapia gnica da
plasmtica o lisossomal linhagom gorminativa
do matorial injotado, aprosonta prollomas
tcnica muito tralalhosa, tcnicos o ticos
roquor clulas muito
lom isoladas
Ilotroporao Alta taxa do transtoco S ~. :.:, muita morto
colular torna o procodimonto
pouco oticionto
lnjoo do plasmdoo Simplicidado, 2-19 kl po- Baixa porcontagom do tilras
dom sor tacilmonto trans- oxprossam o transgon aps a
toridos para musculo, uso injoo, uso rostrito a polo,
om vacinao gnica timo o musculo ostriado
lnjoo lalstica do DNA Alta taxa do transtoco, Ixprosso transitria,
ontroga do dosos procisas, loso colular considorvol
uso om vacinao gnica no contro da rogio atingida
polo disparo
!e|ele I
e|e1es Flsltes jere la|re1tee 1e Oeaes em Celtles 1e eml|eres
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI 31
das o a intograo om stios no
ospocticos toi documontada, porm
no h, at o momonto, nonhuma
rolao dostas tormas com oncogno-
so insorcional. O provrus latonto podo
sor rocuporado o roplicado atravs do
uma suporintoco com o vrus auxi-
liar.
O vrus adono-associado tom dos-
portado grando intorosso como um
votor potoncial para transtorncia do
gonos om tontativas do torapia gnica
humana. Intro as suas propriodados
mais tavorvois osto: tl) nonhuma
rolao com doonas humanas, tll)
podor do intoco do uma ampla
gama do linhagons colularos doriva-
das do ditorontos tocidos, tlll) a sua
halilidado do intograr dontro do go-
noma hospodoiro o ostalolocor uma
intoco latonto. Isto tipo do intogra-
o podo ocorror om clulas quo no
ostojam om procosso do diviso, om-
lora acontoa com uma troquncia
monor quo om clulas om diviso.
Soma-so a ostas caractorsticas tavor-
vois o tipo do intograo proporcio-
nado polo AAV. A capacidado do
transduo com AAV rocomlinanto
trAAV) tom sido domonstrada om
uma ampla variodado do tipos colula-
ros, incluindo as ditoronciadas, o quo
sugoro um grando potoncial dosso
sistoma do votor para transtorncia
gnica .u :.: para rgos como mus-
culo, tgado, sistoma norvoso contral
o pulmo.
Votoros rAAV so dorivados do
plasmdoos quo carrogam os llRs
tlanquoando o gon oxgono do into-
rosso. Issos votoros podom sor ompa-
cotados dontro do capsdoo do AAV
pola co-transtoco om clulas intoc-
tadas com tl) adonovrus, o tll) um
sogundo plasmdoo do ompacotamon-
to contondo os gonos :~j o nj (FIgu-
ra 5) O rAAV rocuporado om clu-
las lisadas o o vrus auxiliar romovido.
Dosta torma, quatro olomontos so roquo-
ridos para o ompacotamonto do votor
AAV: tl) clulas oucariticas om cultura,
tll) as protonas rosponsvois pola roplica-
o do gonoma viral o sntoso do capsdoo,
tlll) o DNA do votor o tlV) o vrus auxiliar.
As dosvantagons do utilizar partculas
rAAV como votoros do transtorncia gni-
ca osto no tamanho do sou gonoma
tacima do 5 kl ocorro intortorncia no
oncapsulamonto viral), o quo limita a clo-
nagom do dotorminados gonos, o a diticul-
dado do produzir o votor viral om grandos
quantidados. Introtanto, vrios molhora-
montos tm sido oltidos na produo o
uso do votoros lasoados om AAV. A diti-
culdado do produzir ostos votoros om larga
oscala toi minimizada pola utilizao do
plasmdoos contondo soquncias do llR o
sua multiplicao om linhagons rocomli-
nantos do 1:I~:.I.n I. A rostrio ao
tamanho do gonoma viral tamlm toi
minimizada, visto quo ossos plasmdoos
no procisam sor oncapsulados om um
capsdoo viral, podondo sor introduzidos
om clulas oucariticas utilizando a tcni-
ca do transtoco com lipossomos, som
projuzo do amplo ospoctro do intoctivida-
do colular caractorstico do AAV.
1on1rac dc
1Tcncr1o 11ra1 c Ao-11ra1
A comlinao do olomontos virais o
no-virais tom sido usada para aumontar a
oticincia da transtorncia gnica para c-
lulas om cultura. Um oxomplo do comlina-
o do olomontos virais o no virais uma
altornativa ao uso do partculas do rAAV
moncionada antoriormonto, o consisto na
construo do plasmdoos com soquncias
do llR dolimitando gonos do intorosso para
promovor a transtormao gnica om clu-
las oucariticas o contorir maior porsistn-
cia do DNA transtoctado, so comparada
quola oltida com plasmdoos convoncio-
nais som os llRs. Os vrus AAV podom sor
sulstitudos por osso tipo do construo
comploxada om liposomos, pois os nvois
do oxprosso gnica o rotono do trans-
gon nas clulas transtoctadas por ossos
comploxos so somolhantos aos nvois
oltidos com partculas virais oncapsula-
das.
M11ocrdr1a c AA M11ocordr1aT
A mitocondria a unica organola quo
possui sou prprio DNA tmtDNA). Im
princpio, as mitocondrias so assomolham
Vctorcs Vantagcns Dcsvantagcns
Rotrovirais Alta taxa do transduo, lmunognico, roquor clulas
amplo ospoctro do hospodoiro om diviso, risco do mutagnoso
tsomonto clulas om diviso), insorcional, risco do rovorso para o
sistoma muito lom ostudado tipo solvagom, inativao polo
o conhocido, intograo no complomonto, laixos ttulos,
gonoma hospodoiro, protonas laixa taxa do ontogra .u :.:
do votor no oxprossas no
hospodoiro
Adonovirais Amplo ospoctro do hospodoiro lmunognico, rovorso para o tipo
tclulas mitticas o no solvagom, porodo curto do oxprosso
mitticas), altos ttulos, gnica om clulas om diviso tdopura-
alta oticincia do transduo, o do opissomo), vazamonto do
gonoma viral opissomal, protonas virais
virus solvagom causa doona
lovo, no onvolopado
Adono- Amplo ospoctro do hospodoiro, limito ao ompacotamonto do DNA,
associados nonhuma doona humana intograo no sompro stio-dirigida,
associada, intocta clulas imunognico t?)
om diviso ou paradas, into-
grao dirigida protoroncial
Hlridos Amplo ospoctro, altos ttulos, lmunognico
Adonovirus-AAV alta oticincia do transduo,
intograo dirigida
Horpos simplos Ipissomal, podo induzir intoc- lmunognico, virus ditorontos tm
o latonto por toda a vida tos- solotividado ditoronto, IBV oncog-
pocialmonto no NS), nico, ativao do virus latonto, laixa
acomoda insortos grandos, oticincia do transduo, oxprosso
produo do altos ttulos transitria nos votoros atuais, sistoma
om dosonvolvimonto
HlV lntoctam o transduzom clulas Sistoma pouco conhocido,
mitticas o ps-mitticas, por oticincia laixa .u :.:
longo prazo
Vaccinia Potoncial para dosonvolvimonto Uso limitado aos individuos no
do uma grando variodado do proviamonto vacinados, uso no indi-
vacinas gnicas cado om imunossuprimidos
!e|ele 1
e|e1es 8leleltes jere la|re1tee 1e Oeaes em Celtles 1e eml|eres
32 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI
aos lipossomos utilizados om transtorncia
gnica, constitudos do momlranas lipdi-
cas onvolvondo molculas do DNA. Uma
voz quo mitocondrias podom sor puritica-
das por ultracontritugao do homogona-
dos colularos, olas podoriam sor utilizadas
como votoros do transtorncia gnica. Vi-
tocondrias isoladas do sanguo do doado-
ros podom sor tundidas a clulas rocopto-
ras, gorando hlridos do citoplasma tclri-
dos) vivois. O uso do mitocondrias ou do
DNA mitocondrial tmtDNA) como votoros
gnicos tom aplicao potoncial na roposi-
o do mtDNA a clulas com doticincias
no motalolismo onorgtico da tostorilao
oxidativa causadas por mutaos. Vuta-
os no mtDNA osto ligadas a um grando
numoro do sndromos dogonorativas nou-
romuscularos com padro do horana ma-
torna. Alm disso, mutaos no mtDNA
ocorrom om clulas da linhagom somtica
o so acumulam duranto o onvolhocimonto
o om condios do stross oxidativo, o
podom oxplicar loa parto dos tontipos
caractorsticos da idado avanada, como
traquoza muscular, doona do Alzhoimor o
doona do Parkinson.
1orcTuo c Tcrpcc11+a
Vrias doonas incurvois polos mto-
dos toraputicos convoncionais roproson-
tam porspoctivas tuturas para a aplicao
da torapia gnica. ontudo, ainda oxistom
limitaos com rolao oticincia o diro-
cionamonto dos votoros do transtorncia
gnica da gorao atual. Os votoros virais
rocomlinantos so os voculos mais poton-
tos para a transtorncia gnica, mas a
rosposta imunolgica do hospodoiro o as
diticuldados do produo om larga oscala
o padronizao ainda so grandos larroi-
ras para sou uso clnico. A ontroga do DNA
via lipossomos ou via dirocionamonto a
rocoptoros colularos otoroco altornativas
ologantos para a transtorncia modiada por
virus, mas os nvois do oxprosso gnica
oltidos com ossos mtodos procisam sor
molhorados signiticativamonto antos quo
olos possam sor utilizados para o tratamon-
to do doonas humanas. Alm disso, nosso
conhocimonto do controlo transcricional
incomploto. Istos campos osto sol inton-
sa invostigao, os mtodos do transtorn-
cia gnica ~. :.: o .u :.: osto om tranco
dosonvolvimonto o osporam-so avanos
considorvois na prxima dcada.
O dosonvolvimonto do sistomas alta-
monto oticiontos do ompacotamonto viral
o o rotinamonto dos procossos do puritica-
FIgura 1. Os comploxos tormados ontro lpidos ou tostolpidos o DNA constituom
liposomos. liposomos cationicos so goralmonto proparados a partir do tostolpidos
lipolaros o consistom do um nucloo hidrotlico, dolimitado por uma camada
lipdica oxtorna. Os lpidos cationicos tormam intoraos olotrostticas com a
molcula tortomonto anionica do DNA do manoira ospontnoa, promovondo o
oncapsulamonto do cido nucloico. Os liposomos assim produzidos possuom um
amplo ospoctro do intoctividado colular
FIgura 2. Produo o uso do rotrovirus
FIgura 3. Amplo ospoctro do intoctividado colular do um votor adonoviral carrogando o gon 1nZ do 1 I., quo coditica a onzima
lota-galactosidaso. A oxprosso do gon donotada pola cor azul do sulstrato X-gal, motalolizado pola onzima nas clulas
intoctadas polo votor. No sontido horrio, comoando polo canto suporior diroito: tl) crtox ronal do coolho, aps intuso
intracarotdoa do votor, tll) tilras do musculo ostriado osquoltico do rato, aps injoo intramuscular do votor, tlll) clulas
ondotoliais om capilar do crolro do rato, aps intuso intracarotdoa do votor, tlV) tilrollastos na pia mator do rato, aps injoo
intraparonquimal do votor, tV) astrcitos no crtox corolral do rato, aps injoo ostorootxica do votor, tVl) nouronio piramidal
do crtox do giro do cngulo, aps injoo ostorootxica do votor no hipocampo do rato
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI 33
o o concontrao podoro molhorar os
ttulos dos votoros virais para valoros quo
podoro pormitir a transtorncia gnica pola
administrao sistmica. O dirocionamonto
da ontroga podor sor possvol pola incorpo-
rao do anticorpos do cadoia unica contra
antgonos do suportcio ou ligantos para
rocoptoros transmomlrnicos incorporados
ao onvolopo do rotrovrus ou protonas pon-
ton do adonovrus, o h sinais oncorajadoros
do quo ossa ostratgia possa alcanar sucos-
so. A mdio prazo, ospora-so a chogada do
votoros do dosonho incorporando os olo-
montos mais utois dos sistomas virais o sint-
ticos disponvois atualmonto, com variaos
dopondondo da aplicao. Por oxomplo, as
ropotios torminais invortidas tllR) dos vi-
rus adono-associados, quo promovom into-
grao cromossomal ostvol, podom sor com-
linadas com soquncias do outros votoros
com maior capacidado do acomodao do
insortos. A intograo podo sor aumontada
atravs do ompacotamonto do uma onzima
rocomlinaso tuncional com a construo
do oxprosso gnica om comploxos lipos-
somais dirocionados a uma clula ospocti-
ca com anticorpos ou protonas ligantos do
rocoptoros. A longo prazo, novos mtodos
do ontroga podoro sor dosonvolvidos para
a transtorncia intranucloar do cromosso-
mos artiticiais humanos tHAs) carrogando
grupos intoiros do gonos com sous olomon-
tos naturais do controlo. No tuturo, a pos-
quisa lsica dovor tontar dotinir os olo-
montos gonomicos quo tornam possvol o
controlo tomporal o ospacial da oxprosso
gnica duranto a vida do um indivduo.
Avanos nossas roas iro roquoror doson-
volvimontos paralolos no dosonho do voto-
ros, antos quo os conhocimontos possam
sor utilizados na prtica clnica.
Da grando quantidado o criatividado
dos sistomas do votoros o mtodos do
transtoco gnica quo osto sondo doson-
volvidos, paroco claro quo, no tuturo, havo-
r uma grando oscolha do mtodos ditoron-
tos para as ditorontos aplicaos clnicas.
lsso cortamonto ampliar as oportunidados
para o uso da transtorncia gnica no
contoxto clnico. A torapia gnica promoto
sor uma roa trtil do posquisa cionttica o
clnica por muitos anos, o no h duvida
quo so tornar uma prtica clnica impor-
tanto nosto novo sculo. A torapia gnica
podor roprosontar uma mudana do para-
digma da modicina, com importantos ro-
porcussos para a sociodado.
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