Curso de Manipulao de Animais de Laboratrio

Organizao: Fabienne Petitinga de Paiva

Vitor Valrio Maffili
Ana Carla Sampaio Santos





Salvador - BA
Maio - 2005

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1. Introduo

A pesquisa cientifica contribui com pondervel parcela para o bem estar do homem
e dos animais, entretanto, os conhecimentos da biologia nem sempre podem ser obtidos
somente pela observao e pelo registro daquilo que normalmente acontece e, por isso, a
experimentao cientifica absolutamente necessria para que o ciclo do conhecimento se
complete e se renove.
O uso de animais com objetivos cientficos uma pratica comum, mas para que seja
moralmente aceitvel e apresente resultados confiveis, fundamental ter-se a conscincia
de que o animal, como ser vivo, possui hbitos de vida prprios da sua espcie, apresenta
memria, preserva o instinto de sobrevivncia e sensvel a angustia e dor, razes que
preconizam posturas ticas em todos os momentos do desenvolvimento dos estudos com
animais de experimentao.
No de hoje que a preocupao com a tica na experimentao animal, a questo
dos direitos dos animais e a sua utilizao em pesquisas vm sendo discutidos. Entretanto, a
controvrsia permanece at os dias atuais, no existindo consenso quanto a posio que os
animais ocupam em relao aos humanos. De forma geral, o questionamento entre os
defensores e os contrrios utilizao dos animais se baseavam nas semelhanas e ou
diferenas existentes entre ns humanos e os animais de laboratrio. Por outro lado, o
filsofo Jeremy Bentham em 1789, levou a discusso para outro campo, onde segundo este
autor a questo no se baseava no fato de eles poderem raciocinar ou mesmo pensar e sim:
Podem eles sofrer ?

2. Cuidado com os animais, uma questo histrica
O questionamento quanto utilizao de animais para as mais diversas atividades
um fato antigo, Pitgoras (582-500 aC) acreditava que a amabilidade para com todas as
criaturas no-humanas era um dever.
A utilizao de modelos animais em pesquisas vem sendo realizada desde a
Antigidade. Neste perodo, Hipcrates (450 aC) j relacionava o aspecto de rgos
humanos doentes com o de animais, com finalidade claramente didtica.

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Galeno (129-210 dC), em Roma, foi talvez o primeiro a realizar vivisseco com
objetivos experimentais, ou seja, testar variveis por meio de alteraes provocadas nos
animais.
Acredita-se que a primeira pesquisa cientfica que utilizou animais sistematicamente
tenha sido a realizada por William Harvey, em 1638, sob a forma de livro, com o ttulo
"Exercitatio anatomica de motu cordis et sanguinis in animalibus".
A publicao do livro A Origem das Espcies de Charles Darwin, em 1859,
estabeleceu os pressupostos do vnculo existente entre as diferentes espcies animais num
nico processo evolutivo. Desta forma, a teoria de Darwin possibilitou a extrapolao dos
dados obtidos em pesquisas com modelos animais para seres humanos.
Um importante episdio para o estabelecimento de limites utilizao de animais
em experimentao e ensino foi o que envolveu a esposa e a filha de Claude Bernard. O
grande fisiologista utilizou, ao redor do ano de 1860, o cachorro de estimao da sua filha
para dar aula aos seus alunos. Em resposta a este ato, a sua esposa fundou a primeira
associao para a defesa dos animais de laboratrio. A partir desta deu-se incio a criao
de inmeras sociedades protetoras de animais, bem como, leis que tratam especificamente
da utilizao de animais de laboratrio em pesquisas.
Claude Bernard, em seu livro An Introduction to the Study of Experimental
Medicine, publicado em 1865, justificava a utilizao de animais em pesquisas, alegando
que: Ns temos o direito de fazer experimentos animais e vivisseco? Eu penso que
temos este direito, total e absolutamente. Seria estranho se reconhecssemos o direito de
usar os animais para servios caseiros, para a alimentao e proibir o seu uso para a
instruo em uma das cincias mais teis para a humanidade. Nenhuma hesitao
possvel; a cincia da vida pode ser estabelecida somente atravs de experimentos, e ns
podemos salvar seres vivos da morte somente aps sacrificar outros.
Durante muitos anos as pesquisas que utilizam modelos animais sofreram poucos
questionamentos, devido ao seu alto impacto social, tais como as que possibilitaram o
desenvolvimento das vacinas contra raiva, ttano e difteria. Por outro lado, neste mesmo
perodo surgiram inmeras sociedades de proteo aos animais.
Em 1959, o zoologista William M.S. Russell e o microbiologista Rex L. Burch
publicaram um livro, onde estabeleceram os trs Rs da pesquisa em animais: Replace

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(substitua), Reduce (reduza) e Refine (refine). Tal proposta no impede a utilizao de
modelos animais em experimentao, mas realiza uma adequao no sentido de humaniz-
la.
Graas ao professor Peter Singer em seu livro "Animal Liberation", publicado em
1975, houve o ressurgimento do debate sobre a utilizao de animais em pesquisas e em
outras atividades tais como as realizadas em abatedouros, indstrias de cosmticos, criao
e transporte. Tal livro causou uma polmica mundial, principalmente no tocante aos relatos
das condies a que os animais eram submetidos pela indstria de cosmticos e no processo
de produo de alimentos.
No Brasil, ainda hoje, no existe uma legislao que efetivamente regulamente a
utilizao de animais para fins didticos e de pesquisa. Esta lacuna interfere de forma
contundente na conduta tica dos profissionais envolvidos em experimentao e ainda
agride o prprio bem-estar dos animais. Contudo, graas ao bom senso dos professores,
pesquisadores e alunos tm-se adotado nos centros de pesquisas princpios ticos
fundamentais e imprescindveis visando as boas prticas na experimentao animal.

4. Diretrizes bsicas para a utilizao de animais em experimentos cientficos
A possibilidade de generalizao dos conhecimentos obtidos em animais no deve
justificar todo e qualquer experimento. Deve ficar claro que no so todos os
conhecimentos gerados em animais plenamente extrapolveis para o ser humano, existem
idiossincrasias que devem ser continuamente relembradas.
A pesquisa em animais, assim como toda e qualquer proposta de investigao
cientfica, deve sempre ser avaliada por meio de trs grandes critrios: gerao de
conhecimento, exeqibilidade e relevncia.
A gerao de conhecimentos inerente ao ato de pesquisar, a sua justificativa
bsica e finalidade. Este critrio ganha ainda mais importncia na perspectiva de que o
conhecimento sempre reconstrudo, e no apenas acumulado.
A exeqibilidade, habitualmente, o critrio mais detalhado no processo de
avaliao. A avaliao dos aspectos metodolgicos e ticos pode ser feita de forma
seqencial ou conjunta. Contudo, a avaliao metodolgica no pode ser dissociada da
tica, pois ambas esto intrinsecamente relacionadas. Uma inadequao metodolgica

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implica em uma inadequao tica, pois o conhecimento gerado poder estar incorreto ou
sequer haver a gerao de qualquer conhecimento novo.
O critrio da relevncia da pesquisa o mais difcil de ser avaliado, pois implica em
uma anlise de valor agregado e no apenas de mtodo ou conhecimento.
Os Comits de tica em Pesquisa existem justamente para realizar a avaliao
adequada dos projetos de pesquisa. Estes comits so a garantia de que a sociedade exerce
algum controle sobre as atividades de pesquisa.
A avaliao dos projetos de pesquisa em animais deve ter o mesmo rigor que a
realizada em seres humanos. Os animais utilizados devem merecer todo o cuidado e
ateno. A antiga e famosa proposta dos trs R's da experimentao animal, feita por
Russel e Burch, na metade do sculo passado, era constituda pelas possibilidades de
substituir (replace), reduzir (reduce) e refinar (refine) a utilizao destes modelos em
pesquisa.
Replace - A substituio de animais j avanou muito. Inmeras alternativas j so
utilizadas, tais como o uso de culturas de clulas, de modelos matemticos e
simuladores, entre outros.
Reduce - A reduo do nmero de animais utilizados nos experimentos pode ser
obtida de maneira bastante simples e rpida. Os Comits responsveis pela
avaliao devem exigir que os pesquisadores apresentem o clculo de tamanho da
amostra que iro utilizar no projeto. Quando no for possvel realizar este clculo o
pesquisador dever apresentar uma estimativa do nmero de animais. Este
questionamento tem reduzido sensivelmente o nmero de animais utilizados, alm
de aprimorar o aspecto metodolgico do projeto.
Refine - O refinamento dos projetos de pesquisa acarreta um aprimoramento
metodolgico e tico dos mesmos. Os experimentos devem ser melhor planejados e
as instalaes devem ser adequadas. O aspecto mais importante deste item deve ser
o relacionado ao questionamento dos deveres dos pesquisadores para com os
animais de experimentao. Os animais merecem serem tratados de forma que
tenham criao, manuteno e manejo adequados, no sofram estresse, dor ou
outros sofrimentos desnecessrios e tenham morte adequada. Os pesquisadores
devem ser capacitados para fazerem pesquisa em animais dentro desta perspectiva.

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4. Manipulao dos animais
O animal de laboratrio deve ser visto como um reagente biolgico. Tudo o que o
circunda, de uma ou outra forma, pode exercer influncia nas caractersticas desse reagente.
Esta interferncia reflete-se principalmente na resposta do animal a determinados
experimentos. A manuteno de condies ambientais estveis, portanto, ir assegurar a
reproduo dos resultados experimentais, uma vez que resultados diferentes podero ser
obtidos para idnticos parmetros experimentais com animais em diferentes condies
ambientais.
4.1. Espao destinado aos animais
As gaiolas utilizadas na experimentao com animais convencionais de laboratrio
tendem a manter dimenses padronizadas. No Biotrio do CPqGM trabalha-se basicamente
com dois tamanhos de caixa, uma pequena e duas grandes nos formatos retangular e
quadrado. Na Tabela 1 encontra-se descrito as dimenses das caixas, bem como, o nmero
mximo por caixa.
As gaiolas ainda podem ser providas de filtros que visam proteger os animais,
especificamente os imunodeficientes, ou o operador no caso de infeco por agentes
potencialmente patognicos. Estas gaiolas so os chamados micro ou mini-isoladores.





Tabela 1. Nmero de animais por caixa para as diferentes espcies animais.
Nmero de animais
Dimenses
Camundongo Hamster Rato Jovem Rato Adulto Tipo de caixa
CxLxA*
Pequena 30x20x13 5 - - -
Grande Retangular 49x34x16 20 10 8 4
Grande quadradra 41x34x16 20 10 8 4
* comprimento x largura x altura em centmetros


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4.2. Rudos
A maioria dos animais, incluindo os de laboratrios, ouve sons em freqncias
superiores ou inferiores aquelas audveis pelos homens, os denominados ultra e infra-sons.
Sabe-se tambm que os animais podem se adaptar de forma satisfatria a rudos que so
contnuos. Contudo, rudos inesperados ou alteraes nas intensidades de sons, como
conversas em demasia no Biotrio de Experimentao, podem provocar estresse e
alteraes imunolgicas e metablicas que podem influenciar sobremaneira os resultados
das pesquisas.

4.3. Conteno dos animais
O mtodo utilizado para a conteno dos animais de laboratrio dependente do
comportamento, conformao fsica e tamanho de cada espcie. A maioria dos roedores
possui cauda e esta pode ser utilizada para suspender o animal, desde que se trate de uma
manobra rpida e cuidadosa, em que ele seja prontamente colocado em uma superfcie de
apoio, para que seja evitado o desconforto. Quando este tipo de conteno adotado, deve
ser realizada pela base da cauda para prevenir que ocorram fraturas, divulso da pele e
conseqentes ferimentos, alm disso, tal manobra dificulta que, devido a sua agilidade, o
animal se vire e morda o operador.

4.3.1. Camundongos
Para a conteno do camundongo, a manobra inicial consiste em sua retirada da
gaiola, suspendendo o animal pela base da cauda, e a seguir, deve-se, rapidamente apia-lo
em uma superfcie na qual ele possa se agarrar, como por exemplo, a tampa da gaiola. A
utilizao da tampa da gaiola como ponto de apoio para o camundongo favorece ao animal
que nela se agarra e nos d mais firmeza para a realizao de contenes posteriores. A
conteno de camundongos por pequenas distncias, para a sexagem ou para a
administrao de drogas deve ser realizada mediante a sua colocao sobre a tampa da
gaiola. Devemos pression-lo levemente sobre ela, segurando, primeiramente a pele da
regio dorso-cervical, entre os dedos indicador e polegar. Em seguida devemos fixar sua
cauda entre os outros dedos e a palma da mo, para a limitao total de seus movimentos.


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4.3.2. Ratos
Filhotes de ratos podem ser manipulados de maneira similar aos camundongos.
Ratos maiores devem ser contidos firmemente, porm de forma gentil, colocando-se a mo
firmemente sobre o dorso e a caixa torcica. A cabea pode ser segura com o polegar e o
indicador, imediatamente atrs da mandbula.

4.3.3. Hamsters
A conteno de hamsters uma prtica fcil, pois apesar de sua agressividade,
adapta-se rapidamente ao manejo, tornando-se um animal muito dcil. Para manuse-lo
importante assegurar que o animal no esteja dormindo, pois ao acordar assustado, pode
morder o operador. Ao entrar em contato com pessoas estranhas ou mesmo um outro
indivduo de sua espcie, o hamster assustado com o novo contato, pode ranger os dentes,
emitir vocalizaes e assumir a posio vertical, o que parece estar mais associado a um
mecanismo de defesa do que a um comportamento agressivo.
Vrias manobras so realizadas para conter um hamster. Para ser transportado de
uma gaiola para outra podemos envolv-lo com ambas as mos, formando uma espcie de
concha, dentro da qual o animal fica retido seguramente. Outro modo seria envolv-lo com
apenas uma das mos ao redor de seu corpo, principalmente na altura do trax. O hamster
repousado em decbito dorsal na palma da mo, com a exposio da sua regio ventral,
apresenta um comportamento tranqilo. Como sua pele extremamente frouxa, ainda
podemos cont-lo erguendo-o pela pele do dorso na altura do pescoo, sempre com o
cuidado de promover movimentos firmes, mas de modo gentil.
Para a administrao de drogas por via oral ou para injees intraperitoneal e
subcutnea, pegamos o mximo de pele de todo o dorso do animal, cuidando para que se
promova uma conteno mais firme na altura do pescoo, para evitar que o animal vire-se e
morda.
No hamster, assim como em camundongos e ratos, injees subcutneas so
realizadas na regio dorso-lateral, na altura do gradil costal, ou na regio da nuca.




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4.3.4.Coelhos
A conteno de coelhos deve ser realizada por tcnicos bem treinados, e deve evitar
que o animal se movimente, pois enquanto ele se debate, pode ferir-se. Fraturas de coluna
vertebral so freqentemente identificadas em animais recentemente manipulados. Devido
a contenses inseguras, com desconforto e dor, os coelhos podem arranhar o operador.
Para ser retirado de sua gaiola ou para transporte a curtas distncias, o coelho pode
ser suspenso pela pele da regio cervical, enquanto que com a outra mo, sustentamos os
membros posteriores. A orelha deve ser mantida junto da pele, mas no deve sofrer
nenhuma fora de conteno. Com essa manobra podemos sentar o animal, apoiando-o
sobre uma superfcie, para que seja possvel a sexagem.

5. Vias e locais de administrao de drogas
Todos os animais devem ser corretamente imobilizados para que a administrao
das injees seja conduzida sem risco para o pesquisador ou animal. Considerando que
qualquer fator externo pode alterar a homeostase, e ainda ser apontado como um fator
estressante, fundamental que se aguarde tempo suficiente para que o animal se adapte a
manipulao e torne-se familiarizado com o pesquisador. A manipulao incorreta ou
brusca pode implicar estresse e, conseqentemente, desequilbrio de funes orgnicas, o
que determina a ocorrncia de alteraes fisiolgicas.
Os procedimentos recomendados para a administrao de substncias aos animais
so descritos a seguir:

5.1. Via oral (VO) e gavage
A substncia introduzida na cavidade oral ou no aparelho digestrio por meio de
um tubo esofgico ou estomacal. Para a maioria das espcies, um tubo flexvel (ou agulha)
com a ponta arredondada introduzido na boca do animal e gentilmente empurrado pelo
esfago at o estmago. necessrio ser cauteloso para assegurar que o tubo no tenha
penetrado inadvertidamente a traquia. Os tubos utilizados para camundongos (4cm) so
menores do que para os ratos (8cm de comprimento). O volume mximo para roedores de
1mL de soluo para cada 100g de peso corporal, no entanto, se a administrao for de
soluo aquosa, o volume pode ser de at 2mL para cada 100g de peso corporal. Deve-se

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lembrar que os roedores ingerem alimento e gua muitas vezes ao dia, e por isso
dificilmente esto com o estmago vazio. A distenso mxima do estmago se d no final
do perodo escuro, em contrapartida quantidade mnima no final do perodo claro. Nesse
sentido, pequenos volumes devem ser administrados no incio do perodo claro (fase de
repouso).

5.2. Subcutnea (SC)
a injeo de soluo sob a pele do animal, a qual deve ser levantada antes da
aplicao. realizada com agulha hipodrmica curta (normalmente 25x5 mm ou mais fina),
passando apenas pela derme, o mais prximo da superfcie, formando uma ppula aps a
administrao da substncia. As reas dorsolaterais do pescoo, ombro e flancos so as
regies de escolha. uma via que raramente induz dor e realizada em animais
conscientes. Antes de injetar a substncia, deve-se aspirar exercendo uma leve presso no
mbolo da seringa para assegurar que a agulha no esteja penetrando em um vaso
sangneo.

5.3. Intramuscular (IM)
A substncia injetada no msculo esqueltico na forma de solues oleosas ou
suspenses. Os msculos de grande superfcie, como os da poro posterior dos mmros
posteriores, so as regies mais utilizadas. Devem ser usadas agulhas de tamanho similar s
empregadas nas injees subcutneas e a profundidade no tecido deve ser de
aproximadamente 5mm. Estruturas sseas, nervos e vasos sanguneos devem ser evitados.
Antes de injetar deve-se assegurar que a agulha no est em um vaso sanguneo, exercendo
uma leve presso de retirada no mbolo da seringa. O tamanho da agulha geralmente
25x5 ou 25x7mm ou mais fina, e o volume mximo, de 0,5mL por stio de administrao
em ratos e hamster e de 0,3 em camundongos. Na Tabela 2 encontra-se um resumo com as
principais vias de administrao e volumes recomendados.

5.4. Endovenosa
A administrao feita diretamente na corrente sangnea, por meio de vasos
superficiais. As solues a serem aplicadas no devem ser irritantes e o veculo deve ser do

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tipo aquoso. A veia da cauda o vaso sanguineo de escolha em camundongos no-
anestesiados; entretanto, sua perfurao requer habilidade e prtica. O movimento do
animal tambm pode ser contido dentro de um pequeno recipiente para facilitar a
administrao. A visualizao da veia facilitada por procedimentos como a imerso da
cauda em gua quente a 40-50
o
C por alguns segundos ou proximidade de uma lmpada
quente.
Obs. 1: nunca se deve aplicar medicamentos diludos em veculo oleoso, sob pena de causar
mbolos no animal com a conseqente morte do mesmo.
Obs. 2: vrios dispositivos foram desenvolvidos para facilitar injees endovenosas junto
veia lateral da cauda, alguns dos quais so obtidos comercialmente. Basicamente, estes
dispositivos consistem de um cilindro transparente, de dimetro apropriado, com divisor de
comprimento ajustvel, com uma fenda para exteriorizao da cauda.

5.4. Intraperitoneal
A via intraperitoneal normalmente a mais utilizada na experimentao com
roedores. A substncia injetada na cavidade peritoneal entre os rgos abdominais.
Normalmente, injeta-se na metade posterior do abdome com o animal contido pelo dorso. O
tamanho das agulhas normalmente utilizado de 25x5 ou 25x7 mm. A imobilizao
adequada pr-requisito bsico para o sucesso deste tipo de aplicao.

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Tabela 2. Vias e locais de administrao de drogas, volume mximo recomendado para
injeo e dimenso mxima de agulhas para cada espcie
Espcies Subcutnea Intramuscular Intraperitoneal Intravenosa
Camundongo Nuca
2 a 3 ml
agulha 25X5
Quadrceps e parte
posterior da coxa
0,3 ml
25X5
2 a 3 ml
25X5
lateral da cauda
0,2 ml, 25X5
Rato Nuca, dorso
5 a 10 ml
agulha 25X5
Quadrceps e parte
posterior da coxa
0,5 ml
25X5 e 25X7
5 a 10 ml
25X5 e 25X7
Dorsal do pnis,
lateral da cauda
0,5 ml, 25X5
Hamster Nuca
3 a 4 ml
agulha 25X5
Quadrceps e parte
posterior da coxa
0,5ml
25X5
3 a 4 ml
25X5
Femoral, jugular
0,3 ml, 25X5
Coelho Nuca, Flanco
30 a 50 ml
agulha 25X7
Quadrceps e parte
posterior da coxa
2,0 ml
25X5 e 25X7
50 a 100 ml
25X7
Marginal da orelha
1 a 5 ml, 25X5

Obs: O estmulo luminoso produz variaes nos nveis hormonais dos animais, assim, o
ciclo reprodutivo de muitas espcies controlado pelo ritmo circadiano imposto ao
animal. Uma determinada dose de uma droga aplicada em diferentes horrios do dia
produz efeitos diferentes. Logo, o horrio para a realizao de um experimento deve ser
sempre especfico e mantido durante todo o experimento.

6. Tcnicas anestsicas em animais de laboratrio
O animal de laboratrio, freqentemente utilizado como material de pesquisa que
envolve procedimentos cirrgicos diversos, necessita, por questes de melhor manejo e
acima de tudo humanitrias, ser submetido anestesia. A anestesia deve ser realizada
sempre que o procedimento implique em dor ou desconforto dos animais. No sero
necessrios anestsicos, analgsicos ou tranqilizantes quando isto no ocorre, como em
procedimentos que incluem administrao de fluidos, imunizao, medicao oral, coleta
de sangue (exceto intracardaca e periorbital).
Para minimizar a dor e o desconforto devem ser utilizadas drogas anestsicas,
analgsicas, tranqilizantes e ainda a eutansia. Alguns procedimentos que envolvem dor e
requerem anestesia incluem: cirurgias, agentes que envolvem inflamao excessiva e
necrose e coleta de sangue pelas vias intracardaca e periorbital.

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Alteraes substanciais no estado de alerta, padro respiratrio do animal, presena
de secrees nasais ou oculares e diarria podem sinalizar a ocorrncia de anormalidades.
Uma vez detectada a alterao, o procedimento experimental deve ser adiado e a causa
identificada.

6.1. Monitoramento da anestesia
A profundidade anestsica deve ser avaliada por meio da presena ou ausncia de
determinados sinais como reflexo da cauda, replexo palpebral e corneal e das alteraes das
freqncias cardaca (FC) e respiratria (FR), que sofrem modificaes de acordo com os
planos atingidos (profundidade da anestesia).

6.2. Anestsicos comumente utilizados em animais de laboratrio
6.2.1.Ratos
Tabela 3. Frmacos que podem ser utilizados como medicao pr-anestsica para ratos
Frmaco Dose e via de administrao
diazepan ou midazolan 2 mg/Kg IV; 4 mg/Kg IM/IP
acepromazina 1 mg/Kg IM
Quetamina 25 mg/Kg IM
Xilazina 1 a 3 mg/Kg/IM
atropina 0,05 mg/Kg SC/IP


Tcnicas anestsicas sugeridas:
Xilazina 5 a 10 mg/Kg + 50 a 75 mg/Kg Quetamina misturadas na mesma seringa
IP
Perodo de latncia Perodo hbil
2 a 5 min 30 min

Pentobarbital* 30 a 40 mg/Kg IP
Perodo de latncia Perodo hbil
2 a 5 min 60 a 80 min




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Tiopental* 25 mg/Kg IV
Perodo de latncia Perodo hbil
15 a 20 seg 5 a 10 min
* A utilizao prvia de acepromazina, xilazina, midazolam ou diazepan reduz metade as
doses acima mencionadas de pentobarbital e tiopental.

Fentanil-droperidol 2 ml/Kg IM
Perodo de latncia Perodo hbil
2 min 30 min

Tiletamina-zolazepan 20 a 30 mg/Kg IM
Perodo de latncia Perodo hbil
2 min 20 a 40 min

6.2.2.Camundongos
Tabela 4. Frmacos que podem ser utilizados como medicao pr-anestsica para
camundongos
Frmaco Dose e via de administrao
diazepan 5 mg/Kg IP
atropina 0,04 mg/Kg SC/IP/IM
clorpromazina 25 a 40 mg/Kg IM

Tcnicas anestsicas sugeridas:

Xilazina 10 a 15 mg/Kg + 100 a 150 mg/Kg Quetamina misturadas na mesma
seringa IP
Perodo de latncia Perodo hbil
5 min 60 a 100 min

Pentobarbital 60 mg/Kg IP
Perodo de latncia Perodo hbil
2 a 5 min 120 min

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Tiopental 40 a 80 mg/Kg IP
Perodo de latncia Perodo hbil
5 min 60 min

Fentanil-droperidol 0,2 a 0,5 ml/ Kg IP + Diazepan 5 mg/ Kg IP
Perodo de latncia Perodo hbil
5 a 7 min 30 a 60 min

Tiletamina-zolazepan 20 a 30 mg/Kg IM
Perodo de latncia Perodo hbil
2 min 20 a 40 min

6.2.3. Hamsters

Tabela 5. Frmacos que podem ser utilizados como medicao pr-anestsica para hamsters
Frmaco Dose e via de administrao
diazepan 5 mg/Kg IP
atropina 0,04 mg/Kg SC/IP/IM

Tcnicas anestsicas sugeridas:

Xilazina 10 mg/Kg + 200 mg/Kg Quetamina misturadas na mesma seringa IP
Perodo de latncia Perodo hbil
2 a 5 min 80 min

Fentanil-droperidol 1,2 ml/100 g IM
Perodo de latncia Perodo hbil
5 a 7 min 60 min


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Tiletamina-zolazepan 15 a 20 mg/Kg IM
Perodo de latncia Perodo hbil
2 min 20 a 40 min
Obs: Os barbitricos no so indicados nesta espcie em razo da alta taxa de
mortalidade.

6.2.4. Coelhos

Tabela 7. Frmacos que podem ser utilizados como medicao pr-anestsica para coelhos
Frmaco Dose e via de administrao
diazepan 5 mg/Kg IP
Clorpromazina 7,5 mg/Kg IV; 25 a 100 mg/Kg IM*
quetamina 50 mg/Kg IM
acepromazina 1 mg/Kg IM
atropina 1 a 3 mg/Kg SC/IM
* Por esta via pode haver necrose tecidual.

Tcnicas anestsicas sugeridas:

Xilazina 5 a 10 mg/Kg + 35 a 50 mg/Kg Quetamina misturadas na mesma seringa
IM
Perodo de latncia Perodo hbil
2 a 5 min 90 min

Acepromazina 1 mg/Kg IV ou xilazina 5 mg/Kg IM ou diazepam 5 mg/Kg,
associado com quetamina 50 mg/Kg IM
Perodo de latncia Perodo hbil
5 min 30 a 40 min


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Diazepam 5 mg/Kg IM e quetamina 25 mg/Kg IM administrados em seringas
diferentes. Moderados sedao e grau de analgesia.
Pentobarbital 37 mg/Kg IP
Tiopental 10 mg/Kg IV
Fentanil-droperidol 0,2 mg/Kg IM


Tiletamina-zolazepam 5 a 10 mg/Kg IM
Perodo de latncia Perodo hbil
5 min 30 min

Tiletamina-zolazepam 0,3 mg/Kg IM + Fentanil-droperidol 0,4 ml/Kg IM
Perodo de latncia Perodo hbil
5 min 40 a 60 min

Tabela 8. Agentes utilizados em anestesia: princpio ativo, nome comercial, laboratrio e
apresentao
Princpio ativo Nome comercial Laboratrio Apresentao
Acepromazina Acepran 0,2 % Univet 2,0 mg/ml
Atropina Sulfato de atropina Apset 0,25 mg/ml
Clorpromazina Amplictil Rhodia 25 mg/ 5ml
Diazepan Valium Roche 5 mg/ml
Fentanil Fentanil Johnson & Johnson 0,05 mg/ml
Fentanil-droperidol Inoval Johnson & Johnson
Halotano Halotano Hoescht Frascos 50, 100 e 250 ml
Levomepromazina Neozine Rhodia 25 mg/ 5ml
Meperidina Dolantina Hoescht 50 mg/ml
Metoxiflurano Pentrane Abbott Frasco 100 ml
Midazolan Dormonid Roche 15mg/3ml
Pentobarbital Hypnol Cristlia 30 mg/ml
Quetamina Ketalar Parke-Davis 50 mg/ml
Tiletamina-zolazepan Zoletil Virbac 50 mg/ml
Tiopental Thionembutal Abbott 0,5 e 1,0 g
Xilazina Rompum Bayer 20 mg/ml


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Alternativas para a anestesia de outras espcies de animais

Tabela 9. Drogas e dosagens para anestesia em ces.
Droga Dosagem (mg/kg) Via Perodo hbil
Quetamina / Xilazina 5 + 1-2 IV ou IM 30 a 60 min
Propofol 5 a 7,5 , mantendo com
0,2 a 0,4 mg/kg/min
IV 5 a 10 min com a dose
inicial
Tiopental* 10 a 18 IV 5 a 15 min
Pentobarbital* 20 a 30 IV 30 a 40 min
* O uso da Acepromazina (0,05 a 1 mg/kg IM) como pr-anestsico leva a uma induo anestsica e
recuperao mais suaves, alm de reduzir a quantidade necessria de barbitrico em at 50%.

7. Cuidados com os animais no ps-cirrgico
Uma vez concludo o procedimento cirrgico, os animais devem ser colocados
isoladamente em suas gaiolas para a recuperao anestsica. Este local deve ser silencioso e
com pouca luz, evitando-se estressar os animais, com um mnimo de manipulao. A
temperatura do ambiente deve variar de 27 a 30
0
C para adultos e 35 a 37
0
C para os
neonatos. Uma vez restabelecidos os parmetros normais, a temperatura pode ser reduzida
para 25
0
C para adultos e 35
0
C para neonatos. Os camundongos so mais sensveis a
hiportermia que as demais espcies.
A cama de proteo do fundo da gaiola no deve permitir o contato do paciente com
resduos tais como poeira e quaisquer detritos que possam se aderir aos olhos, nariz ou boca
do animal e a recuperao de coelhos e cobaias no deve ser realizada em gaiolas
gradeadas, sob risco de ocorrncia de fraturas
O consumo de gua no perodo ps-operatrio est diminudo, devendo-se
monitorar atentamente a ingesto de lquidos. Se o grau de desidratao for importante, a
administrao de fluidos deve ser iniciada pela via oral, subcutnea ou intraperitoneal,
utilizando-se soluo fisiolgica ou glicofisiolgica.
A administrao de analgsicos no perodo ps-operatrio deve ser considerada,
ficando a escolha do medicamento a critrio do pesquisador.


19
Tabela 11. Antiinflamatrios e analgsicos para camundongos
Frmaco Dose e via de administrao Freqncia
Acetaminophen 300 mg / Kg PO; 700 mg / 25g
PO
A cada 4 h
Butorphanol 1-5 mg / Kg SC A cada 6 h
cido acetil saliclico (AAS) 120 mg / Kg PO A cada 4 h
Dexametazona 0,06 mg / 25 g SC IM IV IP -
Prednisona 0,05-0,22 mg / 25 g SC IM -

Tabela 12. Antiinflamatrios e analgsicos para ratos
Frmaco Dose e via de administrao Frequncia
Acetaminophen 110 300 mg/Kg PO; 25-75
mg/250 g
A cada 4 h
Butorphanol 0,05-2 mg/Kg SC; 0,012-0,5
mg/250 g
A cada 4 h
AAS 100 mg / Kg PO; 2,5 mg/250 g A cada 4 h
Dexametazona 0,5-2,0 mg/Kg PO SC A cada 12 h
Prednisona 0,05-0,22 mg SC IM -

Tabela 13. Analgsicos para coelhos
Frmaco Dose e via de administrao Frequncia
Buprenorfina 0,01 a 0,05 mg/Kg SC, IM, IV A cada 8 a 12 h
Butorphanol 0,05-2,0 mg/Kg SC, IM A cada 4 h
Nalbuphina 1-2 mg?Kg IM, SC, IV A cada 4-5 h

8. Eutansia
Por definio, eutansia uma forma de abreviar-se a vida de um ser vivo, sem dor
ou sofrimento. Os critrios primrios para a eutansia em termos de bem-estar animal so:
Utilizao de mtodos sem dor;
Os animais devem atingir rpido estado de inconscincia e morte;
Requerer um mnimo de conteno, e evitar a excitabilidade do animal;
Apropriado para a idade e estado de sade do animal em questo
Causar um mnimo de sofrimento e estresse;
Simples de administrar (em pequenas doses, se possvel);
Seguro para o operador e tanto quanto possvel, esteticamente aceitvel para
este;
Deve ser realizada distante de outros animais.


20
A eutansia realizada por vrias razes, so elas:
Trmino do experimento;
Obteno de material como sangue e outros tecidos para fins cientficos;
Quando os nveis de estresse, dor e sofrimento esto excedendo o previsto;
Quando os animais no esto mais aptos reproduo;
Animais apresentando caractersticas no desejveis ao biotrio.

8.1. Confirmao da morte
Indicativos de morte so a ausncia de movimentos respiratrios, batimentos
cardacos e perda dos reflexos. Entretanto, a morte deve ser confirmada por sangria,
remoo do corao, eviscerao, congelamento ou decapitao antes do descarte dos
cadveres.

8.1.1. Mtodos fsicos: No so mtodos aceitos sem contestao. Devem ser utilizados
somente quando no puderem ser utilizados mtodos qumicos.
a) Deslocamento cervical: Comumente utilizado em roedores com menos de 150 g. Deve
ser evitado em hamsters e cobaios, devido ao pescoo curto, musculatura forte e pele solta
na regio do pescoo e ombros, o que dificulta a realizao adequada da tcnica. Roedores
maiores devem ser sedados antes do deslocamento. Trata-se de uma manobra rpida, que
em fraes de segundos leva o animal a perda total de sensibilidade devido ao rompimento
da medula espinhal e a morte. indicado somente quando a adoo de outros mtodos
possa invalidar o resultado final de determinado experimento e s deve ser realizada
por pessoal treinado. Para roedores de laboratrio, o animal deve ser apoiado sobre uma
superfcie na qual ele possa se agarrar, propiciando maior firmeza na realizao da
eutansia. O deslocamento cervical consiste em segurar a cauda do animal com uma das
mos (pela base) e com a outra apoiar uma pina cirrgica, ou objeto similar,
transversalmente sobre sua regio cervical. A seguir, pressiona-se firmemente a pina para
baixo e para frente, empurrando a cabea do animal, enquanto que, simultaneamente,
traciona-se a cauda em sentido oposto, para trs. Durante alguns segundos pode-se ainda
detectar alguma atividade muscular, todavia tratam-se de movimentos reflexos, pois a perda
total de sensao dolorosa e a morte so imediatas.

21
b) Decapitao: Anestesia prvia no recomendada, uma vez que envolve maior
manipulao e mais estresse para o animal. Outros mtodos para a eutansia so mais
aceitveis. Deve ser utilizado material especfico como a guilhotina. Vale salientar que o
sangue coletado aps a decapitao freqentemente apresenta-se contaminado por
secrees salivares e respiratrias.
c) Congelamento rpido: realizado colocando-se o animal rapidamente no nitrognio
lquido. Deve ser utilizado somente para fetos e pequenos neonatos (< 4g). Animais
maiores no morrero imediatamente.
d) Exsanguinao: realizada por meio de puno cardaca ou de vasos sanguneos de
grande calibre, freqentemente utilizada para a obteno de soro hiperimune de roedores
e coelhos, os quais devem ser previamente sedados ou anestesiados, pois pode-se observar
inquietao associada a hipovolemia.

8.1.2. Mtodos qumicos:
So mtodos mais estticos por no causarem trauma aparente ao animal e so
realizados por meio do uso de agentes farmacolgicos inalantes e no-inalantes.
a) Agentes inalantes:
Anestsicos volteis como ter e clorofrmio: O roedor colocado em uma cmara,
com gaze ou algodo embebido com anestsico. O estado lquido desses anestsicos
irritante, deve-se cuidar para que os animais no entrem em contato com o produto
qumico. O clorofrmio apresenta efeitos txicos para o fgado, rins e gnadas
masculinas dos animais e carcinognico para humanos. O ter irritante
para as mucosas e em altas concentraes pode ser estressante para os animais.
Adicionalmente, o ter perigoso para o operador em virtude de suas
propriedades explosivas. No so mtodos aceitos para a eutansia.
Halotano, Enflurano e Isoflurano: Atuam deprimindo os sistemas respiratrio e
cardiovascular. Induzem a anestesia e subseqente morte. So todos agentes
aceitveis quando utilizados com o equipamento apropriado, para evitar o
desperdcio e a contaminao do ambiente. So onerosos.

22

Dixido de carbono: Dos mtodos de eutansia por inalao, o CO

2
o mais
recomendado para pequenos roedores de laboratrio, principalmente para grande
quantidade de animais, pois barato, no inflamvel, no explosivo e seguro, desde
que aplicado com equipamento apropriado. recomendado o uso de 70% de CO
2

no oxignio ou ar para a rpida perda de conscincia, sem hipxia. Isto resulta em
rpida anestesia, seguida por morte, com efeitos reduzidos quanto irritao das
vias areas. 100% de CO
2
recomendado para cobaios. Somente CO
2
disponvel
comercialmente em cilindros deve ser utilizado. Este gs tem rpida ao letal por
provocar depresso do sistema nervoso central, mas ainda assim, aps deteco de
parada respiratria, recomenda-se manter os animais na cmara por mais 10
minutos, para confirmao de sua morte. O tempo utilizado para a eutansia de
animais jovens maior que para animais adultos com a utilizao deste mtodo.
No recomendado para neonatos.

Monxido de carbono: Embora este seja um mtodo relativamente rpido e humano

para ser utilizado em roedores, em virtude do perigo para o operador, deve ser
utilizado com extremo cuidado. Deve ser utilizado somente o gs comercializado
em cilindros e com o equipamento adequado. Os roedores devem ser colocados em
contineres previamente vaporizado com 6% de CO.

b) Agentes injetveis:
Em animais onde h dificuldade em puncionar a veia, prefervel a injeo
intraperitoneal. Entretanto, por esse mtodo, o anestsico leva mais tempo para agir e pode
causar irritao no peritnio. Injees intracardacas e intrapulmonares no devem ser
realizadas, a menos que o animal esteja anestesiado.

Pentobarbital sdico: Injetado via intravenosa ou intraperitoneal age rapidamente e
uma forma aceitvel de eutansia. As pessoas envolvidas devem ser treinadas no
mtodo de injeo. Esta droga pode causar irritao do peritnio, o que pode ser
evitado pela diluio. Para a realizao da eutansia recomendada a utilizao
de trs vezes a dose anestsica. Para a eutansia de ratos e hamsters o
pentobarbital pode ser administrado por via intraperitoneal, na dose de 100 mg/Kg e

23
80-150 mg/Kg, respectivamente, enquanto que para coelhos utilizado na dose de
200 mg/Kg, por via intravenosa.
Quetamina: No um mtodo aceitvel quando utilizada como droga nica.
Quando em combinao com outras drogas (xilazina, benzodiazepnicos) uma
opo apropriada para a eutansia.
Embries
No momento em que o tubo neural desenvolve-se para um crebro funcional (60%
da gestao, em mdia), parece ser o momento no qual o feto passa a ter a percepo da dor
e deve-se, portanto garantir procedimentos humanos de eutansia.
No caso da remoo do feto de uma me anestesiada, na qual o feto tambm
apresenta insensibilizao, este pode ser morto por decapitao ou por remoo do corao.
Entretanto, quando se pretende realizar a remoo dos fetos, uma grande quantidade de
anestsico deve ser utilizada na me e mantido por prolongado perodo, para assegurar a
passagem do anestsico pela placenta. Em muitos casos, anestsicos volteis no
anestesiam os fetos. Fetos abaixo de 4g, no anestesiados antes da remoo, podem ser
mortos pelo rpido congelamento em nitrognio lquido.

Neonatos
So os roedores at os 10 dias de idade. Em termos de estmulos de dor so mais
semelhantes aos embries que aos adultos. Podem ser mortos por decapitao ou por
concusso. A hipotermia tambm pode ser utilizada. O dixido de carbono no deve ser
utilizado, uma vez que os neonatos so mais resistentes.

8.2. Mtodos aceitveis para roedores anestesiados ou no conscientes:
8.2.1. Congelamento rpido em nitrognio lquido:
Deve ser utilizado somente em animais com menos de 4 g.

8.2.2. Exsanguinao:
Somente em animais previamente anestesiados.
8.2.3. Embolismo:
Somente em animais inconscientes, pode ser doloroso.

24
8.2.4. Cloreto de potssio:
cardiotxico e pode causar tosse, vocalizao, espasmos musculares e convulses.
Deve ser utilizado somente em animais totalmente anestesiados.

8.3. Mtodos no aceitveis para a eutansia de roedores:
8.3.1. Hipotermia:
Sob nenhuma circunstncia um roedor deve ser morto colocando-o diretamente em
um freezer. O congelamento em freezer deve ser utilizado somente para a garantia da
morte, aps a realizao da eutansia.
8.3.2. Nitrognio:
Mata os animais por hipxia, antes de causar inconscincia, o que o faz inaceitvel.
Ratos exibem sinais de pnico e estresse antes da inconscincia.
8.3.3. xido nitroso:
Mata por anoxia, lento e os roedores demonstram sinais de aumento de atividade
antes da morte, tornando-o inaceitvel.
8.3.4. Ciclopropano:
Tem ao rpida em roedores, entretanto, no seguro para o operador.
8.3.4. ter e clorofrmio:
No devem ser utilizados para a eutansia de roedores, ambos so extremamente
perigosos para o operador e causam irritao nas vias areas.


25
Tabela 14. Caractersticas dos mtodos utilizados para eutansia em roedores
Agente Rapidez Eficcia Facilidade Segurana
para o
operador
Valor
anestsico
Avaliao
(1-5)
Observaes
Halotano,
Isoflurano
Enflurano

++ ++ ++ + ++ 5 Aceitvel
Pentobarbital

++ ++ + + ++ 5 Aceitvel
Concusso ++ ++ + ++ - 4 Animais
Abaixo
de 1 Kg
Deslocamento
cervical
++ ++ + ++ - 4 Animais
Abaixo
de 150 g
Dixido de
Carbono

+ ++ ++ ++ ++ 4 Aceitvel
[ ] > 70%
Decapitao + + + ++ - 2 Preferncia
Por
Outros
Mtodos
Monxido de
carbono
+ + + ++ - 2 Perigoso
Para o
Operador
Congelamento
rpido
- + ++ ++ + 1 Somente
em
Pequenos
Neonatos
(<4g)
Rapidez: ++muito rpido, + rpido, - vagaroso. Eficcia: ++ muito efetivo, + efetivo, - ineficiente.
Facilidade em utilizar: ++ facilmente utilizvel, + requer prtica, - requer treinamento especfico.
Segurana para o operador: ++ sem perigo, + pouco perigo, - perigoso. Valor anestsico: ++ bom, +
aceitvel, - inaceitvel para muitas pessoas. Avaliao: 1-5 com 5 sendo o mais recomendado.
Fonte: Laboratory Animals (1997).


26
9. Referncias bibliogrficas:
BALLS, M. Replacement of animal procedures: alternatives in research, education and
testing. Laboratory Animals, v.28, p.193-211, 1994.
CLOSE, B. et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 1.
Laboratory Animals, v.30, p.293-316, 1996.
CLOSE, B. et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2.
Laboratory Animals, v.31, p.1-32, 1997.
FLECKNELL P.A. Refinement of animal use assessment and alleviation of pain and
distress. Laboratory Animals, v.28, p.222-231, 1994.
Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH 80-23).
HALL, L.W., CLARKE, K.W. Veterinary anaesthesia. 9ed. London: Ballire Tindall,
1991. 410p.
Manual para tcnicos em bioterismo / editores Rosalia Regina de Luca, Sandra Regina
Alexandre, Thais Marques, Nvea Lopes de Souza, Jos Luis Bernardino
Merusse, Silvnia Pires Neves, - So Paulo: Winner Graph, 1996.
Manual sobre cuidados e usos de animais de laboratrio/ National Academic Press.
ed.AAALAC e COBEA. 2003, 162p.
The animal welfare act http://algonet.se/~stifug/act-ordinance.html, 1998.

10. Sites relacionados:

www.iacuc.org
www.nih.gov
www.cobea.org.br
www.fbresearch.org
http:/caat.jhsph.edu
www.aalaslearninglibrary.org



27
Apndice A

1- Classificao Geral dos Animais
Animal Camundongo Rato Coelho Hamster
Filo Chordata Chordata Chordata Chordata
Sub-filo Vertebrata Vertebrata Vertebrata Vertebrata
Classe Mammalia Mammalia Mammalia Mammalia
Ordem Rodentia Rodentia Lagomorpha Rodentia
Famlia Muridae Muridae Ochotonidae Cricitidae
Gnero Mus Rattus Oryctolagus Mesocricetus
Espcie musculus norvegicus cuniculus auratus

2- Caractersticas gerais
Animal Camundongo Rato Coelho Hamster
Peso ao nascimento 0,5 1g 5g 100g 2 3g
Peso ao desmame 9 11g 40 50g 800 1300g 20 30g
Peso macho adulto 20 40g 300 400g 3500 5400g 85 140g
Peso fmea adulta 25 40g 200 300g 3900 6400g 95 120g
N
o
de cromossomos

40 42 44 44
Temp. retal (
o
C) 37,4 38,2 39,5 36,2 37,5
Consumo de gua
mdio/dia
3 a 7 ml 20 a 45 ml - 8 a 10ml/100g de
peso vivo
Consumo de rao
mdio/dia
4 a 5 g 12 a 15 g - 10 a 12g/100g de
peso vivo

3- Parmetros cardiovasculares e respiratrios
Animal Camundongo Rato Coelho Hamster
Batimentos
cardacos/min
330 780 261 600 123 304 280 412
Movimentos
respiratrios/min
84 230 66 114 38 60 33 - 127
Presso arterial (S
1
/D
2
) 113/81 116/90 110/80 110/80
1
sistlica
2
diastlica

28
4- Valores hematolgicos
Animal Camundongo Rato Coelho Hamster
Eritrcitos (milhes/mL) 7,7 12,5 7,2 9,6 4,5 7,0 7,5
Hemoglobina (mg/mL) 14,8 14,8 13,6 -
Hematcrito
(ml/100mL)
41,5 46,0 41,5 -
pH do sangue 7,35 7,35 7,35 7,35
Tempo de coagulao
(segundos)
14 20 60 360 -
Leuccitos (mil/mL) 8,0 14,0 9,0 -
Neutrfilos (%) 22,0 22,0 30,0 50,0 29,9
Eosinfilos (%) 2,0 2,0 1,0 3,0 1,1
Basfilos (%) - 1,0 1,0 8,0 1,1
Linfcitos (%) 75,0 73,0 20,0 90,0 73,5
Moncitos (%) 1,0 2,0 2,0 6,0 30,0 2,5

5- Condies ambientais
Animal Camundongo Rato Coelho Hamster
Temperatura (
o
C) 20-24 20-24 15-21 20-24
Umidade (%) 5510 5510 5510 5510

6- Antecedentes reprodutivos
Animal Camundongo Rato Coelho Hamster
Ciclo estral (polistrico) 4 dias 4 dias 15 16 dias 15 18 dias
Estro (horas) 12 14 9 20 * 6 10
Ovulao 2 3 horas 8 11 horas ** -
Durao da gestao 19 21 dias 21 30 dias 30 35 dias 15 18 dias
Vida sexual til 1 1,5 anos 1 ano 1 3 anos 14 meses
Puberdade do macho Depois da quinta
semana
50 70 dias 6 8 meses 6 semanas
Puberdade da fmea 5 8 semanas 35 80 dias 5 6 meses 6 8 semanas
Nmero de crias 5 - 12 4 10 1 13 4 - 12
* muito prolongado (1 ms), na ausncia do macho
** provocada, horas aps a cpula