V o l . 4 5 , N o .

3
A P P L I E D A N D E N V I RON ME N TA L MI C ROB I OL OG Y , Ma r . 1 9 8 3 , P . 1 1 2 6 - 1 1 2 8
0 0 9 9 - 2 2 4 0 / 8 3 / 0 3 1 1 2 6 - 0 3 $ 0 2 . 0 0 / 0
C o p y r i g h t 1 9 8 3 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r Mi c r o b i o l o g y
C o m p a r i s o n o f V e r i f i c a t i o n P r o c e d u r e s f o r t h e Me m b r a n e
F i l t e r To t a l C o l i f o r m Te c h n i q u e
MA RK W. L E C HE V A L L I E R, S US A N C . C A ME RON , A N D G ORD ON A . Mc F E TE RS *
D e p a r t m e n t o f Mi c r o b i o l o g y , Mo n t a n a S t a t e Un i v e r s i t y , B o z e m a n , Mo n t a n a 5 9 7 1 7
Re c e i v e d 1 4 J u l y 1 9 8 2 / A c c e p t e d 2 9 D e c e m b e r 1 9 8 2
V e r i f i c a t i o n o f m e m b r a n e f i l t e r t o t a l c o l i f o r m c o l o n i e s f r o m d r i n k i n g w a t e r w a s
i n c r e a s e d 8 7 % b y t e s t i n g f o r t h e p r e s e n c e o f P - g a l a c t o s i d a s e a n d c y t o c h r o m e
o x i d a s e , c o m p a r e d w i t h v e r i f i c a t i o n b y d e t e r m i n a t i o n o f g a s p r o d u c t i o n i n l a u r y l
t r y p t o s e b r o t h . Ov e r 9 0 % o f t h e c o l i f o r m s v e r i f i e d b y t e s t i n g f o r
P - g a l a c t o s i d a s e
a n d c y t o c h r o m e o x i d a s e w e r e r e p r e s e n t a t i v e o f t h e t y p i c a l c o l i f o r m g e n e r a .
Th e m e m b r a n e f i l t e r ( MF ) t e c h n i q u e i s u s u a l l y
t h e m e t h o d o f c h o i c e f o r t h e a n a l y s i s o f t o t a l
c o l i f o r m s f r o m p o t a b l e w a t e r . Th e MF m e t h o d i s
r a p i d a n d s i m p l e a n d y i e l d s d e f i n i t i v e r e s u l t s .
Ho w e v e r , f a c t o r s s u c h a s e l e v a t e d t u r b i d i t y ( 8 ,
1 0 , 1 2 ) , i n j u r e d c o l i f o r m s ( 1 1 , 1 4 ) , h i g h n u m b e r s
o f n o n c o l i f o r m b a c t e r i a ( 4 , 1 0 ) , a n d m e m b r a n e
f i l t e r t y p e ( 1 4 , 1 6 ) m a y s e v e r e l y i n f l u e n c e t h e
s e n s i t i v i t y o f t h e p r o c e d u r e . Th e U. S . E n v i r o n -
m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y h a s a d o p t e d a v e r i f i -
c a t i o n p r o c e d u r e b e c a u s e n o t a l l o f t h e t y p i c a l
c o l i f o r m c o l o n i e s r e c o v e r e d b y t h e MF t e c h -
n i q u e p r o d u c e g a s i n l a c t o s e - c o n t a i n i n g m e d i a
( 2 , 3 , 6 , 7 , 9 , 1 5 ) . Th i s p r o c e d u r e c o n s i s t s o f
s u b c u l t u r i n g t y p i c a l c o l i f o r m c o l o n i e s i n t o l a u r y l
t r y p t o s e b r o t h ( L TB ) a n d e x a m i n i n g t h e c u l t u r e
t u b e s f o r g a s p r o d u c t i o n a f t e r i n c u b a t i o n f o r 2 4
t o 4 8 h ( 2 , 9 ) . F u r t h e r c o n f i r m a t i o n o f c o l i f o r m
o r g a n i s m s i s o b t a i n e d b y s u b c u l t u r i n g L TB -
p o s i t i v e t u b e s i n t o b r i l l i a n t g r e e n - l a c t o s e - b i l e
b r o t h ( B G L B ) . Th e MF t o t a l c o l i f o r m c o u n t i s
t h e n a d j u s t e d b y t h e p e r c e n t a g e o f c o l o n i e s
v e r i f i e d a s c o l i f o r m s . Th e a c c u r a c y a n d s e n s i t i v -
i t y o f t h e MF t e c h n i q u e c a n t h e r e f o r e b e g r e a t l y
i n f l u e n c e d b y t h e e f f i c i e n c y o f t h e v e r i f i c a t i o n
p r o c e d u r e .
E v a n s e t a l . ( 7 ) h a v e r e p o r t e d s i g n i f i c a n t v a r i -
a t i o n s i n v e r i f i c a t i o n r a t e s , d e p e n d i n g o n t h e
p r o c e d u r e s u s e d . V e r i f i c a t i o n i n m - L A C b r o t h
h a s b e e n s h o w n t o y i e l d a 5 0 % i n c r e a s e i n
c o l i f o r m c o u n t s , c o m p a r e d w i t h v e r i f i c a t i o n i n
L TB o r l a c t o s e b r o t h . Ot h e r i n v e s t i g a t o r s h a v e
s h o w n t h a t a b u f f e r e d l a c t o s e - c o n t a i n i n g m e d i -
u m i n c r e a s e s g a s p r o d u c t i o n a n d r e d u c e s v a r i -
a b i l i t y , c o m p a r e d w i t h r e s u l t s f o r u n b u f f e r e d
s y s t e m s ( 1 5 ) . Th e c o m p o s i t i o n o f l a c t o s e - c o n -
t a i n i n g m e d i a h a s a l s o b e e n k n o w n t o i n f l u e n c e
t h e r a t e a n d a m o u n t o f c o l i f o r m g a s p r o d u c t i o n
( 3 , 5 ) .
Re c e n t l y , a n a l t e r n a t i v e v e r i f i c a t i o n p r o c e -
d u r e h a s b e e n p r o p o s e d ( M. P i c k e t t , T. J . L e a -
h y , a n d W. L i t s k y , A b s t r . A n n u . Me e t . A m .
S o c . Mi c r o b i o l . 1 9 8 1 , Q 1 2 4 , p . 2 2 1 ) . B y t h i s
m e t h o d , p r e s u m p t i v e c o l i f o r m s a r e t e s t e d f o r
t h e p r e s e n c e o f
P - g a l a c t o s i d a s e
a n d c y t o c h r o m e
o x i d a s e ( c - g a l / c o m e t h o d ) . Th e d e v e l o p e r s o f
t h i s m e t h o d h a v e i n d i c a t e d t h a t e n z y m a t i c c o n -
f i r m a t i o n c o r r e l a t e s m o r e c l o s e l y t o t h e t a x o -
n o m i c d e f i n i t i o n o f a c o l i f o r m t h a n d o e s t h e
r e s u l t o f t h e s t a n d a r d v e r i f i c a t i o n p r o c e d u r e .
Th e p r e s e n t s t u d y w a s i n i t i a t e d w h e n r o u t i n e
c o l i f o r m a n a l y s e s o f d r i n k i n g w a t e r s a m p l e s
y i e l d e d a h i g h p e r c e n t a g e o f t y p i c a l p r e s u m p t i v e
c o l i f o r m s t h a t d i d n o t p r o d u c e g a s i n L TB .
D r i n k i n g w a t e r s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d f r o m
t h e d i s t r i b u t i o n s y s t e m s o f t w o s m a l l c o m m u n i -
t i e s n e a r B o z e m a n , Mo n t . Th e f i r s t s y s t e m s e r v -
i c e s 2 , 0 0 0 r e s i d e n t s a n d c o n s i s t s o f b o t h s u r f a c e
a n d w e l l w a t e r t h a t i s o n l y i n t e r m i t t e n t l y c h l o r i -
n a t e d . Th e s e c o n d s y s t e m s e r v i c e s 8 , 0 0 0 r e s i -
d e n t s a n d c o n s i s t s o f a n e t w o r k o f e i g h t u n c h l o r -
i n a t e d w e l l s . Ra w w a t e r s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d
f r o m t h e E a s t G a l l a t i n Ri v e r a p p r o x i m a t e l y 0 . 5
m i l e ( 0 . 8 k m ) d o w n s t r e a m f r o m t h e o u t f a l l o f a
s e w a g e t r e a t m e n t p l a n t . L a b o r a t o r y - c h l o r i n a t e d
s a m p l e s w e r e p r e p a r e d i n o n e o f t h e f o l l o w i n g
w a y s . ( i ) S u r f a c e w a t e r w a s t r e a t e d w i t h 1 . 0 m g
o f f r e e r e s i d u a l c h l o r i n e p e r l i t e r ( a v e r a g e p H,
7 . 7 ; a v e r a g e t e m p e r a t u r e , 1 0 C ) p r e p a r e d d a i l y
f r o m s t o c k s o l u t i o n s o f b l e a c h ( 6 % [ b y w e i g h t ]
s o d i u m h y p o c h l o r i t e [ S e r c o b l e a c h ; S . E . Ry -
k o f f C o . , L o s A n g e l e s , C a l i f . ] ) . ( i i ) C h l o r i n a t e d
d i s t r i b u t i o n w a t e r ( f r e e r e s i d u a l c h l o r i n e l e v e l s
v a r i e d f r o m 0 . 5 t o 1 . 2 m g / l i t e r , p H 7 . 6 ; t e m p e r a -
t u r e , 1 0 C ) w a s m i x e d w i t h 1 0 % s u r f a c e w a t e r .
B o t h p r e p a r a t i o n s w e r e d e c h l o r i n a t e d w i t h s o d i -
u m t h i o s u l f a t e a f t e r 1 0 m i n o f c o n t a c t ( 1 ) .
Wa t e r s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d i n s t e r i l e 2 - l i t e r
p o l y p r o p y l e n e c o n t a i n e r s w i t h ( d r i n k i n g w a t e r )
o r w i t h o u t ( s u r f a c e w a t e r a n d s a m p l e s f o r l a b o -
r a t o r y c h l o r i n a t i o n ) a d d e d s o d i u m t h i o s u l f a t e
( 1 ) . S a m p l e s w e r e p l a c e d o n i c e a n d t r a n s p o r t e d
t o t h e l a b o r a t o r y w i t h i n 1 h a f t e r c o l l e c t i o n a n d
a n a l y z e d w i t h i n 5 h a f t e r c o l l e c t i o n .
1 1 2 6
N OTE S 1 1 2 7
To t a l c o l i f o r m s w e r e e n u m e r a t e d b y t w o MF
t e c h n i q u e s . Th e s t a n d a r d MF t e c h n i q u e w a s
c o n d u c t e d a c c o r d i n g t o s t a n d a r d p r o c e d u r e s ( 1 )
w i t h HA m e m b r a n e s ( p o r e s i z e , 0 . 4 5 r a m ; Mi l l i -
p o r e C o r p . , B e d f o r d , Ma s s . ) a n d m - E n d o b r o t h
( D i f c o L a b o r a t o r i e s , D e t r o i t , Mi c h . ) s u p p l e -
m e n t e d w i t h 1 . 5 % a g a r ( D i f c o ) . A n e w m e d i u m ,
m - T7 a g a r , w a s a l s o u s e d , s i n c e i t w a s d e s i g n e d
t o i m p r o v e r e c o v e r i e s o f i n j u r e d c o l i f o r m s f r o m
d r i n k i n g w a t e r ( 1 1 ) .
A l l s m o o t h , y e l l o w , c o n v e x c o l o n i e s o n m - T7
a g a r a n d c o l o n i e s w i t h a t y p i c a l g r e e n s h e e n o n
m - E n d o a g a r w e r e c o u n t e d w i t h t h e a i d o f a
d i s s e c t i n g m i c r o s c o p e ( x 1 5 t o x 2 0 ) . A t l e a s t 1 0
p r e s u m p t i v e c o l i f o r m c o l o n i e s w e r e p i c k e d f r o m
t h e MF a n d s t r e a k e d f o r i s o l a t i o n o n TS L a g a r
( t r y p t i c s o y b r o t h w i t h o u t d e x t r o s e , 1 . 0 %o l a c -
t o s e , 1 . 5 % a g a r [ a l l f r o m D i f c o ] ) . P l a t e s w e r e
i n c u b a t e d f o r 2 4 h a t 3 5 C . Mu l t i p l e c o l o n i e s
f r o m TS L a g a r w e r e i n o c u l a t e d i n t o t u b e s o f
L TB ( D i f c o ) . B G L B ( D i f c o ) t u b e s w e r e i n o c u -
l a t e d f r o m g a s - p o s i t i v e L TB t u b e s i n s o m e s a m -
p l e s a n d i n c u b a t e d f o r u p t o 4 8 h a t 3 5 C . I n
a d d i t i o n , m u l t i p l e c o l o n i e s w e r e t r a n s f e r r e d i n t o
t u b e s c o n t a i n i n g 1 - m l p o r t i o n s o f a 0 . 7 5 M o -
n i t r o p h e n y l - p - D - g a l a c t o p y r a n o s i d e ( ON P G ; S i g -
m a C h e m i c a l C o . , S t . L o u i s , Mo . ) s o l u t i o n ( 1 3 )
d i s s o l v e d i n p h o s p h a t e b u f f e r ( 1 ) . ON P G t u b e s
w e r e i n c u b a t e d a t 3 5 C f o r 4 h , a t w h i c h t i m e 0 . 1
m l o f 0 . 5 M N a 2 C O3 w a s a d d e d t o e n h a n c e c o l o r
p r o d u c t i o n . Th e c y t o c h r o m e o x i d a s e t e s t ( 1 3 )
w a s p e r f o r m e d b y p l a c i n g a f e w d r o p s o f a 1 . 0 %
p - a m i n o d i m e t h y l a n i l i n e o x a l a t e s o l u t i o n o n c Q l -
o n i e s g r o w n o n TS L a g a r . Ox i d a s e - p o s i t i v e o r -
g a n i s m s p r o d u c e d a d e e p p u r p l e - b l u e c o l o r w i t h -
i n 1 0 m i n . C o l i f o r m s w e r e i d e n t i f i e d b y t h e A P I
2 0 E s y s t e m ( A n a l y t a b P r o d u c t s , P l a i n v i e w ,
N . Y . ) .
A t o t a l o f 6 8 2 p r e s u m p t i v e c o l i f o r m c u l t u r e s
w e r e g r o w n f r o m 2 1 c o n t a m i n a t e d d r i n k i n g a n d
s u r f a c e w a t e r s a m p l e s . Of t h e s e p r e s u m p t i v e l y
p o s i t i v e i s o l a t e s , 5 7 7 ( 8 4 . 6 %) w e r e v e r i f i e d a s
c o l i f o r m s b y t h e p - g a l / c o m e t h o d , w h e r e a s o n l y
4 0 2 ( 5 8 . 9 %) w e r e v e r i f i e d a s c o l i f o r m s b y d e t e r -
m i n a t i o n o f g a s p r o d u c t i o n i n L TB b r o t h ( Ta b l e
1 ) . Wh e n v e r i f i c a t i o n p r o c e d u r e s i n c l u d e d
B G L B s u b c u l t u r i n g , t h e v e r i f i c a t i o n r a t e f o r
l i q u i d m e d i a d r o p p e d t o 5 0 . 4 %. F o r u n t r e a t e d
a n d l a b o r a t o r y - c h l o r i n a t e d s u r f a c e w a t e r s , t h e
p - g a l / c o
m e t h o d v e r i f i e d 8 8 . 3 a n d 8 2 . 8 %, r e s p e c -
t i v e l y , o f t h e p r e s u m p t i v e c o l i f o r m s , w h e r e a s
7 6 . 9 a n d 6 9 . 8 % o f t h e r e s p e c t i v e i s o l a t e s p r o -
d u c e d g a s i n L TB . Th e m o s t d r a m a t i c d i f f e r e n c e
b e t w e e n t h e t w o v e r i f i c a t i o n t e c h n i q u e s o c -
c u r r e d f o r d r i n k i n g w a t e r s a m p l e s : t h e
p - g a l / c o
m e t h o d v e r i f i e d 8 1 . 5 % o f t h e 1 4 6 p r e s u m p t i v e
c o l i f o r m s , w h e r e a s o n l y 1 0 . 3 % o f t h e i s o l a t e s
p r o d u c e d g a s i n L TB ( Ta b l e 1 ) .
Th e i n a b i l i t y o f c o l i f o r m s t o p r o d u c e g a s w a s
a p p a r e n t l y n o t r e l a t e d t o t h e p r e s u m p t i v e i s o l a -
t i o n m e d i u m , s i n c e 3 1 . 5 a n d 3 1 . 2 % o f t h e c o l i -
f o r m s i s o l a t e d o n m - E n d o a n d m - T7 a g a r s , r e -
s p e c t i v e l y , w e r e v e r i f i e d b y t h e p - g a l / c o m e t h o d
b u t w e r e a n a e r o g e n i c i n L TB . A l l g a s - p r o d u c i n g
o r g a n i s m s i d e n t i f i e d a s t y p i c a l c o l i f o r m s ( E s c h e -
r i c h i a , Kl e b s i e l l a , E n t e r o b a c t e r , o r C i t r o b a c t e r
s p p . ) w e r e a l s o v e r i f i e d b y t h e p - g a l / c o m e t h o d .
I d e n t i f i c a t i o n o f c o l i f o r m s t h a t w e r e v e r i f i e d
b y t h e P - g a l / c o m e t h o d a n d w e r e a n a e r o g e n i c i n
L TB r e v e a l e d t h a t 9 1 . 5 % o f t h e o r g a n i s m s b e -
l o n g e d t o o n e o f t h e f o u r c o m m o n l y a c c e p t e d
c o l i f o r m g e n e r a ( Ta b l e 2 ) . E n t e r o b a c t e r a g g l o m -
e r a n s w a s t h e m o s t c o m m o n a n a e r o g e n i c c o l i -
f o r m ( 5 1 . 6 %) , a n d E s c h e r i c h i a c o l i w a s t h e
s e c o n d m o s t c o m m o n ( 2 3 . 9 %o ) . A e r o m o n a s s p p .
w e r e n o t o b s e r v e d a s a n a e r o g e n i c i s o l a t e s a n d
c o m p r i s e d <3 % o f t h e t o t a l a e r o g e n i c c o l i f o r m
p o p u l a t i o n .
A t o t a l o f 1 6 2 b a c k g r o u n d b a c t e r i a ( n o n c o l i -
f o r m s ) w e r e e x a m i n e d b y t h e p - g a l / c o m e t h o d .
ON P G - p o s i t i v e , c y t o c h r o m e o x i d a s e - n e g a t i v e
o r g a n i s m s n o t b e l o n g i n g t o a n y o f t h e c o l i f o r m
g e n e r a w e r e f r e q u e n t l y e n c o u n t e r e d ( 1 4 . 8 %) .
Th e s e o r g a n i s m s w e r e i d e n t i f i e d a s P s e u d o m o -
n a s m a l t o p h i l i a , P . c e p a c i a , S t a p h y l o c o c c u s
s p p . , a n d B a c i l l u s s p p . Th e s e o r g a n i s m s m a y
o c c u r f r e q u e n t l y i n s u r f a c e a n d d i s t r i b u t i o n w a -
t e r s b u t r a r e l y , i f e v e r , y i e l d t y p i c a l p r e s u m p t i v e
c o l i f o r m r e a c t i o n s .
A s i g n i f i c a n t c o r r e l a t i o n e x i s t e d b e t w e e n l e v e l
o f i n j u r y ( 1 1 , 1 4 ) a n d p e r c e n t v e r i f i c a t i o n ( w i t h
L TB ) o f c o l i f o r m s f r o m m - T7 a g a r ( r =
- 0 . 6 3 ; P
<
0 . 0 0 1 ) . I t i s n o t k n o w n w h e t h e r t h i s c o r r e l a -
t i o n i s r e l a t e d t o s o m e i r r e v e r s i b l e c e l l u l a r i n j u r y
TA B L E 1 . C o m p a r i s o n o f p r o c e d u r e s f o r v e r i f y i n g
t o t a l c o l i f o r m s i n
d r i n k i n g w a t e r , s u r f a c e w a t e r , a n d
c h l o r i n a t e d s u r f a c e w a t e r
N o . o f N o . o f
N o .
( % N o . ( %
S o u r c e s a m p l e s
p r e s u m p t i v e s
ON P G +, g a s + i n
c o - ' L TB b
D r i n k i n g w a t e r 1 2 1 4 6 1 1 9
( 8 1 . 5 )
1 5 ( 1 0 . 3 )
C h l o r i n a t e d 4 2 8 0 2 3 2 ( 8 2 . 8 ) 1 9 0 ( 6 9 . 8 )
s u r f a c e w a t e r
S u r f a c e w a t e r 5 2 5 6 2 2 6 ( 8 8 . 3 ) 1 9 7 ( 7 6 . 9 )
a
P e r c e n t a g e o f t o t a l n u m b e r o f
ON P G - p o s i t i v e , c y t o c h r o m e
o x i d a s e
( c o ) - n e g a t i v e o r g a n i s m s ,
8 4 . 6 .
b
P e r c e n t a g e o f t o t a l n u m b e r o f
o r g a n i s m s p o s i t i v e
f o r
g a s p r o d u c t i o n
i n
L TB ,
5 8 . 9 .
V OL . 4 5 , 1 9 8 3
A P P L . E N V I RON . MI C ROB I OL .
TA B L E 2 . I d e n t i f i c a t i o n o f a n a e r o g e n i c l a c t o s e
f e r m e n t e r s v e r i f i e d b y t h e , B - g a l / c o m e t h o d
N o . o f
t i m e s
Or g a n i s m i s o l a t e d
( %)
Kl e b s i e l l a p n e u m o n i a e
. . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 ( 1 0 . 6 )
E n t e r o b a c t e r a g g l o m e r a n s . . . . . . . . . . . . . . . 2 4 ( 5 1 . 6 )
E n t e r o b a c t e r c l o a c a e . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 ( 2 . 1 )
C i t r o b a c t e r f r e u n d i i . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 ( 4 . 3 )
E s c h e r i c h i a c o l i . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 1 ( 2 3 . 9 )
Y e r s i n i a e n t e r o c o l i t i c a . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 ( 4 . 3 )
S e r r a t i a l i q u e f a c i e n s
. . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 ( 2 . 1 )
Ha f n i a a l v e i . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 ( 2 . 1 )
i n v o l v e d i n g a s p r o d u c t i o n f r o m l a c t o s e o r r e -
f l e c t s a n a s s o c i a t i o n b e t w e e n a n a e r o g e n i c c o l i -
f o r m s a n d a n i n c r e a s e d s u s c e p t i b i l i t y t o a q u a t i c
i n j u r y .
I n c o n c l u s i o n , t h e 3 - g a l / c o m e t h o d p r o v e d t o
b e a n a c c u r a t e a n d s e n s i t i v e p r o c e d u r e f o r v e r i -
f i c a t i o n o f t o t a l c o l i f o r m s e n u m e r a t e d b y t h e MF
t e c h n i q u e . V e r i f i c a t i o n o f c o l i f o r m s b y s t a n d a r d
p r o c e d u r e s ( u s e o f L TB a n d B G L B ) m a y r e s u l t
i n s i g n i f i c a n t u n d e r e s t i m a t i o n s o f i n d i c a t o r o r g a -
n i s m d e n s i t i e s , p a r t i c u l a r l y i n w a t e r s i n w h i c h
c o l i f o r m s m a y b e s t r e s s e d o r i n j u r e d .
We t h a n k Th e r e s a Ra m i r e z , Ma r i e Ma r t i n , Ke i l y Ki m b a l l ,
a n d B r u c e L a p k e f o r t e c h n i c a l a s s i s t a n c e .
Th i s s t u d y w a s s u p p o r t e d b y g r a n t n o . R8 0 7 0 9 2 0 1 f r o m t h e
Mi c r o b i o l o g i c a l Tr e a t m e n t B r a n c h , D r i n k i n g Wa t e r Re s e a r c h
D i v i s i o n , U. S . E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y , C i n c i n n a t i ,
Oh i o .
L I TE RA TURE C I TE D
1 . A m e r l c a n P u b l i c He a l t h A s s o c i a t i o n . 1 9 8 0 . S t a n d a r d m e t h -
o d s f o r t h e e x a m i n a t i o n o f w a t e r a n d w a s t e w a t e r , 1 5 t h e d .
A m e r i c a n P u b l i c He a l t h A s s o c i a t i o n , Wa s h i n g t o n , D . C .
2 . B o r n d e r , R. , a n d J . Wi n t e r ( e d . ) . 1 9 7 8 . Mi c r o b i o l o g i c a l
m e t h o d s f o r m o n i t o r i n g t h e e n v i r o n m e n t . U. S . E n v i r o n -
m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y , C i n c i n n a t i , Oh i o .
3 . C h a m b e r s , C . W. 1 9 5 0 . Re l a t i o n s h i p o f c o l i f o r m b a c t e r i a
t o g a s p r o d u c t i o n i n m e d i a c o n t a i n i n g l a c t o s e . P u b l i c
He a l t h Re p . 6 5 : 9 3 1 - 9 3 6 .
4 . C l a r k , J . A . 1 9 8 0 . Th e i n f l u e n c e o f i n c r e a s i n g n u m b e r s o f
n o n i n d i c a t o r o r g a n i s m s u p o n t h e d e t e c t i o n o f i n d i c a t o r
o r g a n i s m s b y t h e m e m b r a n e f i l t e r a n d p r e s e n c e - a b s e n c e
t e s t s . C a n . J . Mi c r o b i o l . 2 6 : 8 2 7 - 8 3 2 .
5 . D a r b y , C . W. , a n d W. L . Ma l l m a n n . 1 9 3 9 . S t u d i e s o n
m e d i a f o r c o l i f o r m o r g a n i s m s . J . A m . Wa t e r Wo r k s A s -
s o c . 3 1 : 6 8 9 - 7 0 6 .
6 . D u t k a , B . J . 1 9 7 3 . C o l i f o r m s a r e a n i n a d e q u a t e i n d e x o f
w a t e r q u a l i t y . J . E n v i r o n . He a l t h 3 6 : 3 9 - 4 6 .
7 . E v a n s , T. M. , R. J . S e i d l e r , a n d M. W. L e C h e v a l l i e r .
1 9 8 1 . I m p a c t o f v e r i f i c a t i o n m e d i a a n d r e s u s c i t a t i o n o n
a c c u r a c y o f t h e m e m b r a n e f i l t e r t o t a l c o l i f o r m e n u m e r a -
t i o n t e c h n i q u e . A p p l . E n v i r o n . Mi c r o b i o l . 4 1 : 1 1 4 4 - 1 1 5 1 .
8 . F r y t , M. S . 1 9 7 9 . E f f e c t s o f t u r b i d i t y o n m i c r o b i o l o g i c a l
a n a l y s i s , p . 2 8 7 - 3 0 0 . I n P r o c e e d i n g s o f t h e A m e r i c a n
Wa t e r Wo r k s A s s o c i a t i o n . Wa t e r Q u a l i t y Te c h n o l o g y
C o n f e r e n c e . P h i l a d e l p h i a .
9 . G e l d r i e c h , E . E . 1 9 7 5 . Ha n d b o o k f o r e v a l u a t i n g w a t e r
b a c t e r i o l o g i c a l l a b o r a t o r i e s , 2 n d e d . U. S . E n v i r o n m e n t a l
P r o t e c t i o n A g e n c y , C i n c i n n a t i , Oh i o .
1 0 . G e l d r i e c h , E . E . , M. J . A l l e n , a n d R. H. Ta y l o r . 1 9 7 8 .
I n t e r f e r e n c e s t o c o l i f o r m d e t e c t i o n i n p o t a b l e w a t e r s u p -
p l i e s , p . 1 3 - 2 0 . I n C . W. He n d r i c k s ( e d . ) , E v a l u a t i o n o f
t h e m i c r o b i o l o g y s t a n d a r d s f o r d r i n k i n g w a t e r . U. S . E n v i -
r o n m e n t a l P r o t e c t i o n A g e n c y , Wa s h i n g t o n , D . C .
1 1 . L e C h e v a l l i e r , M. W. , S . C . C a m e r o n , a n d G . A . Mc F e -
t e r s . 1 9 8 3 . N e w m e d i u m f o r i m p r o v e d r e c o v e r y o f c o l i -
f o r m b a c t e r i a f r o m d r i n k i n g w a t e r . A p p l . E n v i r o n . Mi c r o -
b i o l . 4 5 : 4 8 4 - 4 9 2 .
1 2 . L e C h e v a l l e r , M. W. , T. M. E v a n s , a n d R. J . S e i d l e r .
1 9 8 1 . E f f e c t o f t u r b i d i t y o f c h l o r i n a t i o n e f f i c i e n c y a n d
b a c t e r i a l p e r s i s t e n c e i n d r i n k i n g w a t e r . A p p l . E n v i r o n .
Mi c r o b i o l . 4 2 : 1 5 9 - 1 6 7 .
1 3 . L e n n e t t e , E . H. , E . H. S p a u l d i n g , a n d J . P . Tr u a n t ( e d . ) .
1 9 7 4 . Ma n u a l o f c l i n i c a l m i c r o b i o l o g y , 2 n d e d . A m e r i c a n
S o c i e t y f o r Mi c r o b i o l o g y , Wa s h i n g t o n , D . C .
1 4 . Mc F e t e r s , G . A . , S . C . C a m e r o n , a n d M. W. L e C h e v a l -
l i e r . 1 9 8 2 . I n f l u e n c e o f d i l u e n t s , m e d i a , a n d m e m b r a n e
f i l t e r s o n d e t e c t i o n o f i n j u r e d w a t e r b o r n e c o l i f o r m b a c t e -
r i a . A p p l . E n v i r o n . Mi c r o b i o l . 4 3 : 9 7 - 1 0 3 .
1 5 . Me a d o w s , P . S . , J . G . A n d e r s o n , K. P a t e l , a n d B . W.
Mu l Un s . 1 9 8 0 . V a r i a b i l i t y i n g a s p r o d u c t i o n b y E s c h e r i c h -
i a c o l i i n e n r i c h m e n t m e d i a a n d i t s r e l a t i o n s h i p t o p H.
A p p l . E n v i r o n . Mi c r o b i o l . 4 0 : 3 0 9 - 3 1 2 .
1 6 . S l a d e k , K. J . , R. V . S u s l a v i c h , B . I . S o h n , a n d F . W.
D a w s o n . 1 9 7 5 . Op t i m u m m e m b r a n e s t r u c t u r e s f o r g r o w t h
o f c o l i f o r m a n d f e c a l c o l i f o r m o r g a n i s m s . A p p l . Mi c r o b i -
o l . 3 0 : 6 8 5 - 6 9 1 .
1 1 2 8 N OTE S