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Classificação filogenética de escherichia coli (APEC)

Classificação filogenética de escherichia coli (APEC)

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CLASSIFICAÇÃO FILOGENÉTICA DE ESCHERICHIA COLI PATOGÊNICA PARA AVES (APEC) E CORRELAÇÃO COM A PRESENÇA DE FATORES DE VIRULÊNCIA

Ana Lívia da Silva Ferreira
Departamento de Microbiologia Universidade Estadual de Londrina

Orientadora: Renata K. T. Kobayashi

Objetivos

‡O objetivo deste trabalho é Classificar as amostras de Escherichia coli isoladas de aves com colibacilose e de frangos comercializados nos grupos filogenéticos A, B1, B2 e D; ‡Comparar esses resultados com a presença/ ausência de fatores de virulência das APEC previamente analisados, observando se há uma relação dos grupos com fatores específicos.

INTRODUÇÃO

Escherichia coli ‡um bacilo gram-negativo; ‡Microbiota intestinal de humanos, outros mamíferos e aves; ‡Comensais, patogênicas intestinais e patogênicas extra-intestinais; ‡Em humanos causa infecções como meningites, septicemias,, pneumonias, infecções urinárias e intestinais; ‡em alimentos, como carnes congeladas, é permitida uma quantidade de 104 UFC/g alimento.

INTRODUÇÃO

Fator de virulência tsh papC, papG felA fimH fac afa/draBC sfaDE sfaS csgA cvaC iutA iss kps cnf1, cnf2

Função hemaglutinina temperatura sensível fímbria P fímbria F11 fímbria tipo 1 RELACIONADOS A ADESÃO adesina afimbrial

fímbria S curli colicina V aerobactina resistência sérica cápsula fator necrozante citotóxico NÃO RELACIONADOS A ADESÃO

INTRODUÇÃO

MATERIAIS E MÉTODOS

‡Foram utilizadas 200 amostras de frangos com colibacilose: estoque da profa. Dra. Marilda c. vidotto; ‡103 Amostras isoladas de frangos comercializados: estoque da profa. Dra. Renata kobayashi. ‡As amostras utilizadas como controle positivo foram gentilmente cedidas pela profa. Dra. Halha Ostrensky Saridakis.

Essas amostras foram crescidas em lb caldo durante 24h. O dna de cada uma delas foi extraído para que pudéssemos realizar pcr.

MATERIAIS E MÉTODOS

A pcr realizada foi descrita por clermont et al., 2000. Ciclo curto: -desnaturação por 4 min a 94ºC, -30 ciclos de 5 s a 94ºC e 10 s a 59ºC -uma extensão final de 5 min a 72ºC. Ao final da reação, as amostras foram mantidas a 4ºC, até sua corrida em gel de agarose 2%. Os primers utilizados foram: -chuA -yja -tspe4.c2

MATERIAIS E MÉTODOS

Gene ChuA Yja Tsp

Seqüencia de oligonucleotideo (CGG ACG AAC CAA CGG TCA GGA T) (TGC CGC CAG TAC CAA AGA CAC G) (CGT GAA GTG TCA GGA GAC GCT GC) (TGC GTT CCT CAA CCT GTG ACA AAC C) (GGG AGT AAT GTC GGG GCA TTC AG) (CAT CGC GCC AAC AAA GTA TTA CGC AG)
KOTLOWSKI et al., 2007; Clermont et al., 2000

pb 279 211 152

Análise estatística: -ANOVA não paramétrico (Kruskal-Wallis), através do programa de estatística Epi Info, versão 3.4.3.

MATERIAIS E MÉTODOS

Clermont et al., 2000

Resultados e discussão

B1

A

A

B2

D

B1

B1

B2

chuA (279pb) yja (211pb) TSPE4.C2 (152pb)

1

2

3

4

5

6

7

C+

C-

Resultados e discussão

Resultados esperados:

Frangos comercializados

Aves com colibacilose (APEC) B2/ D

B2

JOHNSON et al., 2000 apud MOULIN-SCHOULEUR et al., 2007, PICARD et al., 1999

Resultados e discussão

33; 17% 35; 34% 33; 32% 56; 28%

45; 23%

17; 17%

18; 17% 66; 32%

frango comercializado A B1 B2 D

apec

A

B1

B2

D

Resultados e discussão

APEC:
120,00% de ositi os 100,00% 80,00% 60,00% 40,00% 20,00% 0,00% Grupo A Grupo B1 Grupo B2 Grupo D

Porcenta e

cs gA cv aC

fe lA

iu tA

ts h

pa pC pa pG

iss

ator de irul ncia

kp sI I

fim

in v

H

Resultados e discussão

APEC:
A (56) B1 (66) B2 (45) D (33) TOTAL DE AMOSTRAS POSITIVAS 79 37 32 24 193 1 200 P (0,05) p<0,05 p<0,05 p<0,05 p<0,05 p>0,05 p>0,05 p>0,05

tsh papC papG felA fimH afa/ draBC csgA

13 (16,5%) C: 23,2% 4 (10,8%) C: 7,1% 2 (6,3%) C: 3,6% 1 (4,2%) C: 1,8% 54 (28,0%) C: 96,4% 0 56 (28,0%) C: 100,0%

31 (39,2%) C: 47,0% 6 (16,2%) C: 9,1% 5 (15,6%) C: 7,6% 5 (20,8%) C: 7,6% 61 (31,6%) C: 92,4% 1 (100%) C: 1,5% 66 (33,0%) C: 100,0%

26 (32,9%) C: 57,8% 18 (48,6%) C: 40,0% 17 (53,1%) C: 37,8% 17 (70,8%) C: 37,8% 45 (23,3%) C: 100,0% 0 45 (22,5%) C: 100,0%

9 (11,4%) C: 27,3% 9 (24,3%) C: 27,3% 8 (25%) C: 24,2% 1 (4,2%) C: 3,0% 33 (17,1%) C: 100,0% 0 33 (16,5%) C: 100,0%

Resultados e discussão

APEC:
A (56)* B1 (66) B2 (45) D (33) TOTAL DE AMOSTRA S POSITIVAS 70 126 77 41 P (0,05)

cvaC iutA iss kpsII

11 (15,7%) C: 19,6% 22 (17,5%) C: 39,3% 12 (15,6%) C: 21,4% 6 (14,6%) C: 10,7%

18 (25,7%) C: 27,3% 42 (33,3%) C: 63,6% 25 (32,5%) C: 37,9% 7 (17,1%) C: 10,6%

34 (48,6%) C: 75,6% 39 (31,0%) C: 86,7% 22 (28,6%) C: 48,9% 22 (53,7%) C: 48,9%

7 (10,0%) C: 21,2% 23 (18,3%) C: 69,7% 18 (23,4%) C: 54,5% 6 (14,6%) C: 18,2%

p<0,05 p<0,05 p<0,05 p<0,05

Resultados e discussão

APEC:

Fatores
iutA + tsh + iss APEC

Número de amostras
40 28 17 14

iutA + tsh + iss + cvaC

NMEC UPEC

iutA + tsh + iss + cvaC + kps

tsh + papC + papG + felA

Resultados e discussão

APEC:

DELICATO et al., 2003

Resultados e discussão

Frangos comercializados::

Porcentagem dos frangos que apresentaram os grupos filogenéticos

60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%

A; 55%

22
D; 42,50% B1; 35% A B1 B2 D

17
B2; 22,50%

14

9

Gr

Filogenéticos

CONCLUSÃO

este trabalho visou à correlação entre virulência e classificação filogenética de amostras patogênicas, necessitando de estudos mais profundos para se chegar às amostras com potencial patogênico.

Quando estas relações forem elucidadas, o tratamento e a prevenção de infecções serão mais específicos, tanto em animais quanto em humanos, podendo levar à economia de tempo e de verbas destinadas à saúde pública ou ao controle de qualidade dos produtos do agronegócio.

CONCLUSÃO

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