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Capitulo 4 Vol2
Capitulo 4 Vol2
Captulo 4
Tcnicas citolgicas
Luzia Ftima Gonalves Caputo
Ester Maria Mota
Lycia de Brito Gitirana
A tcnica citolgica tambm faz parte da histotecnologia e possui grande importncia no diagnstico de algumas doenas que acometem os seres
humanos e os animais. Essa uma ferramenta fundamental no diagnstico de
tumores, funo hormonal e infeces parasitrias. O exame colpocitolgico,
conhecido como Papanicolaou, utilizado para detectar, nas mulheres, tumores de colo de tero. Seu idealizador, dr. George N. Papanicolaou, estabeleceu em 1942 os conceitos bsicos de interpretao citolgica e criou um
mtodo de colorao citolgica que utilizado, universalmente, at hoje.
A citopatologia analisa as clulas individualizadas, descamadas, expelidas
ou retiradas da superfcie de rgos de diferentes partes do organismo. Como
os materiais biolgicos apresentam diferentes caractersticas, devido s distintas
formas de organizao e composio, a coleta do material destinado anlise
citolgica constitui uma etapa fundamental nesse processo. H mtodos especficos para coleta de materiais distintos. Alm disso, nessa fase, so definidos
os tipos de procedimentos mais adequados anlise dos preparados citolgicos.
Mtodo de coleta
Origem da amostra
Disteno celular
(esfregao)
Raspagem
swab
(Figura 11)
Colpocitologia
Imprint
ou decalque
Olhos
Lavado brnquico
Leses cutneas
Bipsias
Peas cirrgicas
Puno aspirativa
Sangue
Lavado brnquico
Lquor espinhal
Amostras pastosas
Expectorao
Puno ou drenagem
Amostras lquidas
Escarro (Figura 6)
Abscessos
Massas necrticas
Espontnea ou por
cateter
Urina
Escovao
Lquido sinovial
Escovao ou lavado
Lquido peritoneal ou
asctico
Lquido pleural
Lquido peritoneal ou
asctico
Lquido pericrdico
Puno
Lavado brnquico
alveolar
Lavado vesical
Lquido estomacal
Lavado brnquico
Lquido sinovial
A. Fixao seca
Esse tipo de fixao utilizado quando se realiza a colorao de MayGrnwald-Giemsa, pois o metanol presente na soluo corante age como
fixador. o tipo de fixao utilizada para distenso de clulas sanguneas,
imprint de bao, gnglios linfticos, entre outros.
B. Fixao por revestimento
usada na obteno dos esfregaos citolgicos. Os fixadores so constitudos de polietilenoglicol (Carbowax) e lcool, comercialmente vendidos na
forma lquida ou em spray. As amostras so fixadas pelo gotejamento do
fixador ou pela pulverizao do aerossol das embalagens em spray (Figura 7),
sendo secas temperatura ambiente, pois o lcool fixa e evapora, enquanto o
polietilenoglicol forma uma pelcula que protege e preserva a amostra. Existem
vrios protocolos para este tipo de fixador; citaremos um dentre os vrios que
existem na literatura.
Figura 10. Formas de distenso celular. Figura 11. Distenso celular por swab.
Forma espiral
Forma ondulada
Forma em distenso
Forma de espalhamento
inflamatria.
Estas amostras podem ser processadas de acordo com sua riqueza celular, por
meio da centrifugao (Figura12) ou citocentrifugao (Figuras 13 e 14).
Centrifugao
preferida quando o material se apresenta hipercelular.
Procedimento:
1- Colocar o lquido em tubos Falcon com tampa.
2- Centrifugar a 1.500 rpm por 10 minutos.
3- Descartar o sobrenadante.
4- Aspirar o sedimento com pipeta Pasteur.
5- Colocar o sedimento em lminas limpas e desengorduradas
e proceder distenso celular.
6- Deixar secar ao ar e /ou fixar em lcool 95% imediatamente; a secagem ao ar necessria se o mtodo de colorao for
o May-Grnwald-Giemsa.
Observao: As amostras podero vir em tubos com anticoagulante ou no.
Figura 12. Procedimento para centrifugao
Citocentrifugao
Possibilita a anlise citolgica de lquidos com baixssima densidade celular (hipocelulares). Esse mtodo necessrio para concentrar as clulas em suspenso, que com a centrifugao se depositam diretamente sobre uma regio das lminas de vidro, perfazendo um dimetro de 5 mm, enquanto o meio de suspenso
absorvido por papel absorvente prprio.
Vantagens:
Requer pouco volume (0,1 a 0,5 mL por lmina).
Alta confiabilidade do resultado: as clulas da amostra sero depositadas numa regio pequena da lmina medindo 5 mm de
dimetro.
Procedimento:
1- Pipetar 0,5 mL da amostra no citofunil, previamente
Formalina 10%:
Formaldedo comercial..........................................100 mL
gua destilada ..................................................900mL
Formol-Salina:
Formaldedo comercial.........................................100 mL
gua destilada..................................................900 mL
Cloreto de sdio (NaCl).........................................9 g
AFA ou FAA lcool - formalina - cido actico (muito
Soluo de lugol:
Iodo (I2)...........................................................2,5 g
lcool 70%....................................................500 mL
Procedimento para cell-block:
1- Centrifugar as amostras por 10 minutos a 1.000 rpm.
2- Desprezar o sobrenadante, retirar o sedimento e fixar as amos-
Figura 15. Processamento manual para cell-block (esquema adaptado do original do Dr. N. Fukushima, Doai Memorial Hospital, Tquio).
4. Coloraes citolgicas
mos agora retirar a gua das clulas com banhos alcolicos de concentraes crescentes.
Colorao citoplasmtica: nesta etapa, o citoplasma das clulas cora-
Solues:
Hematoxilina de Harris (Harris, 1900)
Hematoxilina.......................................................5,0 g
Etanol 100%.................................................50,0 mL
Almen de potssio [KAl(SO4)2]................100 g
gua destilada...............................................1.000 mL
xido de mercrio (HgO p vermelho)..................2,5 g
Dissolva o almen em gua destilada com o auxlio de uma placa aquecedora e um agitador magntico em um recipiente com capacidade para 2.000
mL, para evitar que derrame quando a soluo entrar em ebulio. Misture a
hematoxilina no lcool temperatura ambiente em outro recipiente separado.
Lentamente, combine as duas solues aquecendo em placa aquecedora, at
entrar em ebulio. Retire da fonte de calor e acrescente lentamente o xido
mercrio, com cuidado, pois o xido reage com a soluo fazendo-a entrar
rapidamente em ebulio, podendo sair, inclusive, do recipiente. Retorne a
soluo para a fonte de calor at que tome a tonalidade prpuro-escura.
Esfrie, e a soluo estar pronta.
Para uso:
Acrescente 20 mL de cido actico glacial para intensificar a colorao
dos ncleos.
Filtre sempre antes de cada uso.
cido-lcool a 1%:
Light-green SF.....................3 g
gua destilada................................................100 mL
B. Mtodo de May-Grnwald-Giemsa
Solues:
Soluo estoque de May-Grnwald (vendida comercialmente arti-
go Merck 1524).
Soluo estoque de Giemsa (vendida comercialmente artigo Merck
9204).
Tampo Sorensen pH 6,8.
Soluo A - fosfato de sdio monobsico (NaH2PO4) 0,2 M:
NaH2PO4...............................................27,8 g
gua destilada.......................................1.000 mL
Soluo B - fosfato de sdio dibsico (Na2HPO-4. H2O ) 0,2 M:
Na2HPO-4. H2O....................................28,39 g
gua destilada ......................................1.000 mL
Soluo de uso:
49 mL
100 mL
Mtodo de Shorr
Fast Green........................................................1,0 g
cido fosfomolbdico H3P(Mo3O10)4.......................5,0 g
cido fosfotngstico [H3P(W3O10)4].......................5,0 g
cido Actico Glacial.........................................10 mL
Etanol 50 %...............................................1.000 mL
Mtodo:
1- Etanol 80%......................................5-10 mergulhos
2- Etanol 70%......................................5-10 mergulhos
3- Etanol 50%.......................................5-10 mergulhos
4- gua destilada.....................................5-10 mergulhos
5- gua destilada....................................5-10 mergulhos
6- Hematoxilina de Harris...............................1-5 minutos
7- gua destilada....................................5-10 mergulhos
8- Diferenciar em lcool-cido..........................3 mergulhos.
9- gua destilada.....................................5-10 mergulhos
10- Banho de gua amoniacal..........................5 mergulhos