Sade, Santa Maria, vol 33, n 1: p 15-19, 2007

CONTAGEM DE BACTRIAS HETEROTRFICAS NA GUA PARA CONSUMO HUMANO:

COMPARAO ENTRE DUAS METODOLOGIAS
Heterotrophic bacteria counting in the drinking water: comparation between two methodologies

Vanessa Oliveira Domingues1, Gilda Dias Tavares2, Fernanda Stker3, Tiago Mozzaquatro Michelot4,
Luiz Gustavo Brenner Reetz5, Claudia de Mello Bertoncheli5, Rosmari Hrner6.

RESUMO
A contagem de bactrias heterotrficas amplamente utilizada como indicador da qualidade da gua potvel, sendo que os microrganismos so detectados por propagao em meios no-seletivos. O objetivo deste trabalho foi comparar as metodologias de Pour
Plate e a semeadura por esgotamento para a contagem de bactrias heterotrficas em guas provenientes de poos artesianos e demais
fontes alternativas da regio de Santa Maria. Foram analisadas 43 amostras de gua de poos artesianos e fontes alternativas, coletadas
durante o perodo de 11 de julho a 10 de novembro de 2005. O mtodo de semeadura por esgotamento revelou maior sensibilidade
(58,2%) em relao ao Pour Plate (9,2%); houve compatibilidade do nmero de colnias em 32,6% das amostras avaliadas por
ambas as tcnicas. A partir dos dados obtidos foi possvel observar o melhor desempenho da metodologia de semeadura por esgotamento.
Palavras-chave: gua potvel. Anlise da gua. Qualidade da gua.

SUMMARY
The counting of heterotrophic bacteria widely applied as an indicator of the quality of drinking water. In order to perform
the counting, the microorganisms are detected by propagation in non-selective culture media. The objective of the
present work was to compare the methodologies of Pour Plate and streaking on the surface of the plate for the counting
of heterotrophic bacteria in water. The water samples were collected from July 11 to November 10, 2005, from 43
artesian wells and alternative sources of the Santa Maria region. The analyses results showed that the sowing for
exhaustion presented a higher sensitivity (58.2%) as compared to the Pour Plate method (9.2%). There was colony
number compatibility in 32,6% of the samples analyzed by both techniques. The results suggest a better performance for
streaking on the surface as compared to the Pour Plate method.
Keywords: Drinking water. Water analysis. Water quality.

INTRODUO
pases em desenvolvimento so ocasionados pela

A qualidade da gua tornou-se uma questo de sade

contaminao da gua .

pblica no final do sculo XIX e incio do sculo XX, devido

1

compreenso da relao gua contaminada e doena . As doenas

No Brasil, o controle da qualidade da gua para

de veiculao hdrica so caracterizadas principalmente pela

consumo humano tornou-se uma questo de sade pblica a

ingesto de gua contaminada por microrganismos patognicos

partir da dcada de 70 com o decreto federal n 79.367 de

de origem entrica, animal ou humana, transmitidos basicamente

09/03/1977, que estabelecia como competncia do Ministrio

pela rota fecal-oral

2,3,4,5,6,7,8

. Segundo dados da Organizao

da Sade (MS) a definio do padro de potabilidade da

mundial da Sade (OMS), 80% das doenas que ocorrem em

gua para consumo humano. As normas e o padro de

Trabalho desenvolvido no Laboratrio de Bacteriologia (LAB) do Departamento de Anlises Clnicas e Toxicolgicas (DACT), Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Santa Maria, RS.
1- Acadmica do Curso de Farmcia da UFSM Bolsista PIBIC / CNPq UFSM.
2- Professora adjunta do Departamento de Sade da Comunidade (atualmente aposentada).
3- Acadmica do curso dos Cursos de Farmcia e de Biologia da UFSM Bolsista FIEX UFSM.
4- Farmacutico bioqumico.
5- Farmacuticos bioqumicos/ mestrandos do Curso de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM).
6- Professora Adjunta da disciplina de Microbiologia Clnica da Universidade Federal de Santa Maria (UFSM).

15

Domingues et al
potabilidade da gua foram institudos pela portaria n 56/Bsb/

compreendido entre 11 de julho a 10 de novembro de 2005,

1977, que se constituiu na primeira legislao federal sobre a

provenientes da cidade de Santa Maria e regio. As amostras

potabilidade de gua para consumo humano editada pelo MS

foram acondicionadas em recipientes estreis, utilizando

1,10

. Atualmente est em vigor a portaria n 518/2004, a qual

lcool 70% para a assepsia das torneiras anteriormente

estabelece a determinao da presena de coliformes totais e

realizao da coleta, e conservadas temperatura de 4 a 8 C

termotolerantes (E.coli) e a contagem de bactrias heterotrficas

pelo tempo mximo de quatro horas, at o momento da

para verificar a qualidade da gua para consumo humano, sendo

semeadura. As amostras foram semeadas em triplicata nos

que a contagem padro de bactrias heterotrficas no deve

meios de cultura Plate Count Agar (PCA) e Tryptone Soy

exceder a 500 Unidades Formadoras de Colnia por mililitro

Agar (TSA), sendo utilizado 1,0 mL das amostras de gua

(UFC/mL)

10,11,12,14

para a semeadura pelo mtodo de Pour Plate e 0,1 mL

A contagem de bactrias heterotrficas, genericamente

para semeadura por esgotamento. Aps este procedimento

definidas como microrganismos que requerem carbono orgnico

as placas foram incubadas em estufa bacteriolgica, por 24/

como fonte de nutrientes, fornece informaes sobre a qualidade

48h a 35 C 2 C. Para a metodologia de Pour Plate o

bacteriolgica da gua de uma forma ampla. O teste inclui a

meio de cultura at o momento da semeadura era mantido

deteco, inespecfica, de bactrias ou esporos de bactrias, sejam

em banho-maria a 44-46 C, para impedir sua solidificao,

de origem fecal, componentes da flora natural da gua ou

e posteriormente vertido sobre as amostras, quando ento

resultantes da formao de biofilmes no sistema de distribuio.

era homogeneizado atravs de movimentos circulares suaves

Servindo, portanto, de indicador auxiliar da qualidade da gua,

da placa, no sentido horrio. Aps o perodo de 48 horas de

ao fornecer informaes adicionais sobre eventuais falhas na

incubao, as colnias eram contadas, sendo que para a

desinfeco, colonizao e formao de biofilmes no sistema de

metodologia de esgotamento, o nmero encontrado era

distribuio

9,14

multiplicado pelo fator da diluio (10x), e o resultado das

duas metodologias expresso em Unidades Formadoras de

As tcnicas adotadas pela portaria n 518/2004 para

Colnias por mililitro (UFC/mL).

quantificar os coliformes e hetertrofos na gua visam atender

as especificaes do Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater, publicao da American Public Health

RESULTADOS E DISCUSSO

Association (APHA), American Water Works Association

(AWWA) e Water Environment Federation

11,12,14

As duas metodologias mais utilizadas para contagem de

A procedncia das 43 amostras de gua analisada neste

bactrias em placa so: o mtodo de esgotamento em placa e o

estudo esta representada na Tabela 1, onde o maior nmero

mtodo Pour Plate

8,11,12,13,14

de amostras (22; 51,2%) eram provenientes de caixa dgua.

. Pela metodologia de Pour Plate

verte-se o meio fundido e estabilizado em banho Maria sobre a

amostra, o que permite o crescimento bacteriano no interior do
gar. Essa metodologia apresenta algumas desvantagens, uma

Tabela 1 Procedncia das amostras de gua utilizadas no

vez que alguns microrganismos sensveis ao calor podem ser

estudo.

danificados pelo gar fundido resultando em um nmero inferior

de colnias do que o verdadeiro. Devido a essa desvantagem o
mtodo do esgotamento utilizado, onde a amostra depositada
na superfcie do gar j solidificado e, a seguir, uniformemente
espalhada

8,12,13,14

O objetivo deste trabalho foi comparar as metodologias de

Fonte

n (%)

gua hospitalar

3 (7,0)

gua de poo artesiano

3 (7,0)

Fonte natural (vertente)

4 (9,3)

gua de poo raso

11 (25,5)

heterotrficas em guas provenientes de poos artesianos e

Caixa dgua

22 (51,2)

demais fontes alternativas da regio de Santa Maria.

TOTAL

43 (100)

Pour Plate e por esgotamento para a contagem de bactrias

Das 43 amostras analisadas, 25 (58,2%) apresentaram

MATERIAIS E MTODOS

maior nmero de UFC/mL pela tcnica de semeadura por

esgotamento, e apenas 4 (9,2%) obtiveram maior nmero de

Foram analisadas 43 amostras de gua de poos artesianos

UFC/mL pela metodologia de Pour Plate, houve

e demais fontes alternativas (guas hospitalares, poos rasos,

compatibilidade de resultados em 14 (32,6%), conforme

fontes naturais canalizadas, vertentes e caixa dgua), no perodo

apresentado na Figura 1.

16

Domingues et al
Figura 1 Relao entre o maior nmero de colnias contadas conforme a tcnica utilizada.

Com base nos resultados obtidos observamos que a

Comparando os meios no-seletivos de TSA e PCA para a

metodologia de Pour Plate teve menor sensibilidade, por

contagem de bactrias heterotrficas (Tabela 2) pela tcnica

apresentar um menor nmero de UFC/mL em relao a tcnica de

de Pour Plate, houve uma compatibilidade de resultados

semeadura por esgotamento perante uma mesma amostra de gua.

em 16 (38,1%) amostras analisadas e maior nmero de UFC/

Este fato pode ser justificado porque a metodologia de Pour

mL no meio de TSA com 17 (40,5%) amostras, sendo que

Plate apresenta algumas desvantagens, uma vez que alguns

uma amostra teve que ser desconsiderada por essa metodologia

microrganismos sensveis a temperatura de 44-46C podem ter

devido o meio de TSA ter contaminado. Pela tcnica de

seu crescimento reduzido e ficarem impossibilitados de formar

semeadura por esgotamento, houve compatibilidade de

resultados entre os dois meios em 18 (41,9%) amostras;

colnias .
A contagem de bactrias heterotrficas amplamente

todavia, o maior nmero de UFC/mL foi observado no meio

utilizada como indicador da qualidade da gua para consumo

de PCA com 14 (32,5%) amostras, enquanto no meio de TSA

humano. A contagem destes microrganismos geralmente realizada

apenas 11 (25,6%) amostras resultaram em maior nmero de

em placas contendo meios no seletivos ricos em nutrientes que

UFC/mL.

15

permitam a multiplicao de uma ampla faixa de microrganismos .

Tabela 2 Comparao dos meios de cultura TSA e PCA em relao ao maior nmero de UFC/mL encontrada e a metodologia
utilizada.
Pour Plate n (%)

Esgotamento n(%)

TSA

17 (40,5)

11 (25,6)

PCA

9 (21,4)

14 (32,5)

Compatibilidade de resultados

16 (38,1)

18 (41,9)

TOTAL

42 (100)*

43 (100)

*Em uma amostra houve contaminao da placa de TSA.

A importncia da determinao da densidade de bactrias

observa que das 43 amostras analisadas 23 (53,5%) resultaram

tem em vista que um aumento na populao bacteriana pode

em mais de 500 UFC/mL. Pela semeadura por esgotamento

comprometer a deteco de bactrias do grupo coliformes. Apesar

observou-se um maior nmero de amostras com o limite de

da maioria das bactrias heterotrficas no ser patognica, pode

UFC/mL acima do permitido pela portaria do Ministrio da

representar riscos a sade, como tambm deteriorar a qualidade da

Sade, a metodologia de Pour Plate detectou apenas 13

gua, provocando o aparecimento de odores e sabores

amostras com mais de 500 UFC/mL.

12

desagradveis . A portaria n518 de 2004 do Ministrio da Sade

A metodologia de semeadura por esgotamento detectou

determina a contagem mensal de bactrias heterotrficas em

10 amostras com mais de 500 UFC/mL no detectada pela

metodologia de Pour Plate, sendo que houve

sistemas de distribuio e limita a contagem destas em 500 UFC/

11

mL . O nmero de UFC/mL obtidos utilizando as duas

compatibilidade de resultados em 13 amostras, ou seja, as 13

metodologias deste estudo esta representada na Tabela 3, onde se

amostras detectadas pela metodologia de Pour Plate tambm

17

Domingues et al
foram detectadas pela metodologia de semeadura por esgotamento.

metodologia de Pour Plate para contagem de bactrias

Estes resultados demonstram a baixa sensibilidade da

heterotrficas.

Tabela 3 Determinao de bactrias heterotrficas em UFC/mL.

Metodologia

Pour Plate

UFC/mL

n (%)

Esgotamento
n (%)

< 500

30 (69,8)

20 (46,5)

>500

13 (30,2)

23 (53,5)

total

43 (100)

43 (100)

recomendada. A menor eficcia da tcnica de Pour Plate

A procedncia das 23 amostras com mais de 500 UFC/mL

pode ser justificada pelo fato de que o meio de cultura necessita

est representada na tabela 4.

ser adicionado ainda quente (44-46 C) amostra de gua, e

isto pode afetar a viabilidade das enterobactrias pesquisadas

Tabela 4 Procedncia das amostras com mais de 500 UFC/mL.

Fonte

n (%)

Fonte Natural (Vertente)

2 (8,7)

Poo artesiano

2 (8,7)

Poo raso

9 (39,1)

Caixa dgua

10 (43,5)

Total

23 (100)

nas culturas de potabilidade da gua, com exceo da

Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, que so
resistentes a estas temperaturas.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Freitas, M.B.; Freitas, C.M. A vigilncia da qualidade da gua

Das 22 amostras provenientes de caixa dgua em 10 (43,5%)

para consumo humano desafios e perspectivas para o Sistema

detectou-se mais de 500 UFC/mL, este resultado pode ser

nico de sade. Cincia & Sade Coletiva 2005; 10(4): 993-

explicado pela falta de informao da populao em relao a

1004.

manuteno, limpeza e higienizao dos reservatrios de gua .

2. Amaral, L.A.; Nader Filho, A.; Rossi Junior, O.D.; Ferreira,

A contagem de bactrias heterotrficas em poos rasos

L.A.; Barros, L.S.S. gua de consumo humano como fator de

depende das condies do poo como: profundidade, tipo de

risco sade em propriedades rurais. Rev. Sade Pblica 2003;

captao, distncia entre o poo e a fossa sanitria, entre outros.

37(4): 510-514.

Das 11 amostras de poos rasos, 9 evidenciaram mais de 500

3. dAguila, P.S.; Roque, O.C.C.; Miranda, C.A.S.; Ferreira, A.P.

UFC/mL. Silva et al (2003) analisando a qualidade da gua do

Avaliao da qualidade de gua para abastecimento publico do

manancial subterrneo em reas urbanas em Feira de Santana, na

Municpio de Nova Iguau. Caderno de Sade Publica 2000; 16(3):

Bahia, observaram tambm um resultado expressivo de amostras

791-798.

com mais de 500 UFC/mL. Das 119 amostras analisadas naquele

4. Bertagnolli, S.M.M.; Medeiros, J.T.; Tavares,G.M.D.;

estudo, 85 (71,4%) obtiveram mais de 500 UFC/mL.

Limberger, J.B.; Traesel, A.C. Estudo de coliformes totais de

fontes alternativas de gua da zona rural da regio centro do
estado do Rio Grande do Sul. Sade 2003; 29(1): 97-102.

CONCLUSO

5. Silva, R.C.A.; Arajo, T.M. Qualidade da gua do manancial

subterrneo em reas urbanas de Feira de Santana (BA). Cincia

O elevado percentual de amostras com UFC/mL acima do

& Sade Coletiva 2003; 8(4): 1019-1028.

limite permitido pela portaria do Ministrio da Sade

6. Freitas, M.B.; Brilhante, O.M.; Almeida, L.M. Importncia

preocupante, pois favorecem o aparecimento de doenas de

da analise de gua para a sade publica em duas regies do estado

veiculao hdrica que atingem, principalmente, crianas e idosos.

do Rio de Janeiro: enfoque para coliformes fecais, nitrato e

Assim, a utilizao de metodologias de boa sensibilidade e fcil

alumnio. Caderno Sade Pblica 2001; 17(3): 651-660.

execuo so necessrias para a anlise da potabilidade da gua

7. Libnio, P.A.C.; Chernicharo, C.A.L.; Nascimento, N.O. A

para consumo humano. Com os resultados obtidos neste estudo

dimenso da qualidade de gua: avaliao da relao entre

observamos que a metodologia de semeadura por esgotamento

indicadores sociais, de disponibilidade hdrica, de saneamento e

apresentou melhor desempenho que a metodologia de Pour Plate

de sade pblica. Eng. Sanit. Ambient. 2005; 10(3):219-228.

para a contagem de bactrias heterotrficas. Este dado

8. Tortora, G.J.; Funke, B.R.; Case, C.L. Microbiologia. 8 Edio,

preocupante, pois o Pour Plate a metodologia padro

Editora Artmed, 2005.

18

Domingues et al
9. Guerra, N.M.M.; Otenio, M.H.; Silva, M.E.Z.; Guilhermetti, M.;

12. Fundao Nacional da Sade (Funasa) Ministrio da Sade.

Nakamura, C.V.; Nakamura, T.U.; Dias Filho, B.P. Ocorrncia de

Manual prtico de anlise de gua. 1 Edio, Braslia 2004.

Pseudomonas aeruginosa em gua potvel. Acta Sci. Biol. Sci. 2006;

13. American Public Health Association (APHA). Standard

28(1): 13-18.

methods for the examination of water and wastewater. 18 th ed.

10. Ministrio da Sade (MS), Secretaria de Vigilncia em Sade

New York, 1992.

(SVS), Coordenao Geral de Vigilncia em Sade Ambiental (CGVAM),

14. Ministrio da Sade. Comentrios sobre a portaria MS N

Vigilncia da qualidade de gua para consumo humano (Vigiagua).

518/2004: subsdios para implementao. 2005.

Relatrio das atividades vigiagua 1998 a 2005. 2005.

15. WHO World Health Organization, 1993 (apud Guerra, N.

11. Ministrio da Sade. Portaria n 518, de 25 de Maro de 2004.

M. M.), Ocorrncia de Pseudomonas aeruginosa em gua

Normas e padro da potabilidade da gua destinada ao consumo

potvel. Acta Sci. Biol. Sci. 2006; 28(1): 13-18.

humano. Braslia (DF); 2004;

Correspondncia para:
Rosmari Hrner
Departamento de Anlises Clnicas e Toxicolgicas
Centro de Cincias da Sade Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria RS CEP: 97110-970
Telefone: (55)-220-8464
e-mail: rosmari@smail.ufsm.br

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