Protocolo experimental 4º SEMANA

1.Leitura do exame cultural

1.1- Exame Macroscópico:

• Abundância da cultura
• Presença de cultura pura, predominante ou mista
• Aspecto das colónias em predomínio:
o Tamanho
o Cor
o Mucoides
o Aderentes ao agar
o Brilhantes

2. Testes de Identificação
2.1- Teste da Catalase:
Colocar 2 gotas de H2O2 na tampa caixa de petri e
com pipeta Pasteur de vidro, depositar 2 colónias
sobre o peróxido de hidrogénio.
catalase
2H2O2 2H2O + O2

• Há formação de bolhas => catalase + => Streptococcus –

• Não há formação de bolhas => catalase - => Streptococcus +

Guilhermina Fragoso 1/3

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2.2- Galeria de identificação API 20Strep:

a) Preparação do inoculo
Fazer uma suspensão muito densa num tubo com 2 ml
de ADE, a suspensão deverá apresentar uma opacidade
superior ao nº4 da escala de Mc-Farland.

b) Inoculação da galeria
• Na 1ª metade da galeria (testes VP a LAP), colocar
150 µl de suspensão na cúpula e para o teste ADH,
encher apenas o tubo (micropipeta de 200µl e pontas
amarelas)
• Na 2ª metade da galeria (testes RIB a GLYG), abrir
uma ampola de ‘GP medium’ e transferir para esta
ampola o resto da suspensão em ADE.
• Homogeneizar bem.
• Repartir esta solução nos tubos, com ajuda de uma
micropipeta de 1000µl e pontas azuis.
• Encher as cúpulas dos testes sublinhados (ADH a
GLYG) com óleo de parafina.

c) Preparação da galeria
• Juntar o fundo e a tampa de uma caixa de incubação e
distribuir cerca de 5 ml de água destilada nos alvéolos
para criar uma atmosfera húmida.
• Colocar a galeria no interior e fechar
• Incubar a galeria 24h/37ºC

Guilhermina Fragoso 2/3

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2.3- Tipagem dos Estreptococos

Teste de aglutinação em latex – Classificação de Lancefield
(Slidex Strepto Kit)

1- Preparação do extracto:
a) Colocar num tubo de hemólise vazio, 0.4 ml de solução
de enzima de extracção.
b) Suspender 2 colónias na solução de enzima de extracção
c) Incubar 10-15 min./37ºC

2- Determinação do grupo:
a) Homogeneizar bem as suspensões de látex
b) Colocar numa placa, uma gota de cada látex, nos círculos
correspondentes
c) Com uma pipeta Pasteur de plástico, colocar uma gota do
extracto ao lado de cada suspensão de látex
d) Com ajuda de um palito, misturar as duas gotas
utilizando toda a superfície de cada círculo
e) Agitar a placa, com movimento de rotação, durante 2
minutos
f) Observar a olho nu, a presença ou ausência (suspensão
homogénea) de aglutinação

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