UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE ESCOLA DE QUMICA E ALIMENTOS CURSO DE ENGENHARIA QUMICA DISCIPLINA DE BIOQUMICA INDUSTRIAL LABORATRIO DE ENGENHARIA

DE BIOPROCESSOS PROFESSOR: ANDR BURKERT

Determinao de Coliformes Termotolerantes e Coliformes Totais

Andressa Silva Leonardo Costa

40754 37227

Melissa de la Rocha 40750 Priscila Campelo Sabrina Farias 42754 42758

Rio Grande, outubro de 2011.

Sumrio 1. Introduo............................................................................................................................. 3 2. Objetivo..................................................................................................................................4 3. Reviso Bibliogrfica ........................................................................................................................5 3.1 Organismos indicadores ................................................................................................... 5 Coliformes Totais ...................................................................................................... 6 Coliformes Fecais ...................................................................................................... 6 Estreptococos Fecais ................................................................................................. 7

3.1.1 3.1.2 3.1.3 3.2

Padres de Qualidade ....................................................................................................... 7 Potabilidade ............................................................................................................... 7 Balneabilidade ........................................................................................................... 7

3.2.1 3.2.2 3.3

Exame de Laboratrio ...................................................................................................... 8 Tcnicas Bacteriolgicas ........................................................................................... 8 Provas da presena de bactrias coliformes .............................................................. 9

3.3.1 3.3.2

3.3.3 Determinao do nmero mais provvel de coliformes totais e fecais Tcnica da Fermentao em Tubos Mltiplos ......................................................................................... 13 4. Materiais e Mtodos..............................................................................................................17 4.1 4.2 Materiais ......................................................................................................................... 17 Mtodos .......................................................................................................................... 17 Teste Presuntivo ...................................................................................................... 17 Contagem de coliformes fecais ............................................................................... 17

4.2.1 4.2.2

5. Resultado e Discuso..........................................................................................................18 6. Concluso..............................................................................................................................20 7. Perguntas.................................................................................................................................21 8. Referncias Bibliograficas.......................................................................................................24

1. Introduo

A preservao da qualidade da gua uma necessidade universal, que exige ateno por parte das autoridades sanitrias e consumidores em geral, particularmente no que se refere gua dos mananciais como poos, minas, nascentes, lagos, entre outros, destinados ao consumo humano, visto que sua contaminao por excretas de origem humana e animal pode torn-las um veculo de transmisso de agentes de doenas infecciosas e parasitrias, os quais influenciam diretamente sade da populao. A avaliao da qualidade microbiolgica da gua pode ser realizada atravs da identificao de indicadores de contaminao fecal e indicadores biolgicos, quando apropriado, utilizando-se organismos e/ou comunidades aquticas. A pesquisa de coliformes baseada nas caractersticas do grupo bastonete que produzem cidos e gs a partir da lactose, fazendo com que seja identificada ou no a presena de coliformes, devido a presena de gs no tubo de Duran aps 24 horas na estufa bacteriolgica 35 C. No presente trabalho foi utilizado como microrganismos indicadores, os coliformes totais e os coliformes termotolerantes (fecais).

2. Objetivo Determinar coliformes totais e termotolerantes utilizando a tcnica de tubos mltiplos e expressar os resultados em termos de NMP.

3. Reviso Bibliografica As doenas de origem hdrica geralmente vem de organismos vivos e no de matria orgnica morta ou sais minerais dissolvidos, tais como sais de chumbo, zinco, nitratos, etc. universalmente conhecido que os excrementos dos homens e animais contm bactrias coliformes, em grande nmero (100 a 1000 milhes/g). As bactrias coliformes so Gram Negativas, em forma de basto no formadores de esporo, capazes de se desenvolverem em presena de sais de bile, fermentadoras da lactose com formao de gs, facilmente cultivveis, quer aerbica ou anaerbica. Por sua habilidade em fermentar a lactose produzindo gs e cido, se distinguem de um grande grupo que incluem organismos patognicos, como bactrias tifides e paratifides. As bactrias patognicas no se multiplicam e nem se desenvolvem na gua, eles se debilitam e tendem a morrer por terem perdido seu alimento e as condies ideais de vida. Por esta razo difcil isolar e identificar diretamente qualquer organismo de doena presente na gua de consumo, ento se recorre a um mtodo que permite identificar a presena de organismos pertencentes ao Grupo Coliforme de origem intestinal. Quando o grupo coliforme est presente na gua, ele visto como uma indicao de poluio com esgoto e provvel presena de bactrias patognicas. Um curso dgua pode ser poludo com esgoto e no ter organismos patognicos, mas a presena de coliformes indica uma gua potencialmente perigosa, que necessita de tratamento de desinfeco.

3.1 Organismos indicadores A qualidade de uma gua de abastecimento avaliada usando organismos indicadores. A probabilidade de existncia das doenas na gua passadas a ela por fezes de indivduos doentes, se faz por contagem de microrganismos no patognicos, produzidos em grande nmero no intestino, sendo uma referncia, ao invs de uma contagem verdadeira de patgenos, mais difceis de identificar. Segue abaixo as principais razes para o uso de organismos indicadores: Aparecem em grande quantidade nas fezes humanas, bilhes produzidos por dia/individuo, com grande probabilidade de serem encontrados na gua; So encontrados apenas nas fezes de animais de sangue quente ou homeotermos, classe que inclui o homem e todos os mamferos. Essa caracterstica importante, pois uma vez

identificada a sua presena, pode-se afirmar que a gua teve contato com excretas desses animais; Do ponto de vista da resistncia s condies ambientais (temperatura e outros agentes desinfetantes), so muito semelhantes aos microrganismos patognicos intestinais. Tratase de uma caracterstica importante, pois se fossem mais suscetveis (sobrevivessem menos tempo que os patognicos), no poderiam ser identificados, isto , no seriam indicadores. Se fossem menos suscetveis (sobrevivessem por mais tempo), poderia aparecer em guas j livres dos patognicos; Sua identificao, do ponto de vista laboratorial, requer tcnicas simples e econmicas, ao contrrio daquelas necessrias identificao dos microorganismos patognicos. Os organismos usados como referncia pertencem a um grupo de bactrias chamados Coliformes dividido em trs sub-grupos: coliformes totais, coliformes fecais e estreptococos fecais.

3.1.1

Coliformes Totais

Rene um grande nmero de bactrias, entre elas a Eschrichia coli, de origem exclusivamente fecal e que dificilmente se multiplica fora do trato intestinal. O problema que outras bactrias dos gneros Citrobacter, Eriterobacter e Klebsiella, igualmente identificadas pelas tcnicas laboratoriais como coliformes totais, podem existir no solo e nos vegetais. Desta forma, no possvel afirmar categoricamente que uma amostra de gua com resultado positivo para coliformes totais tenha entrado em contato com fezes. Estas bactrias so bacilos gram negativos, aerbios ou anaerbios facultativos, no formadores de esporos, capazes de crescer na presena de sais bilhares ou outros compostos com propriedades similares de inibio de crescimento e, que fermentam a lactose com produo de gs e cido a 35C em 48 horas.

3.1.2

Coliformes Fecais

Pertencem a esse subgrupo os microorganismos que aparecem exclusivamente no trato intestinal. Em laboratrio, a diferena entre coliformes totais e fecais feita atravs da temperatura (os coliformes fecais continuam vivos mesmo a 44C, enquanto os coliformes totais tm crescimento a 35C). Sua identificao na gua permite afirmar que houve presena de matria fecal, embora no exclusivamente humana.

3.1.3

Estreptococos Fecais

Embora sua identificao no seja rotina em laboratrios de anlise de gua, trata-se de um subgrupo importante, j que fazem parte dele as espcies do gnero Streptococcus spp. que ocorrem apenas no trato intestinal do homem e de animais de sangue quente, como os Coliformes Fecais. Existe uma correlao entre a ocorrncia de Coliformes Fecais e Estreptococos Fecais. Normalmente empregada em cursos de gua, consiste em quantificar o nmero de microorganismos de cada um dos subgrupos existentes em uma amostra. Se a relao CF/EF resultar maior que 4, diz-se que a amostra apresenta contaminao fecal predominantemente humana. Se essa relao for menor que 1 a contaminao fecal predominante ser de animais de sangue quente. Os resultados que se encontrarem entre esses dois valores no permitem inferir nada a respeito da origem da contaminao fecal.

3.2 Padres de Qualidade Dependendo da finalidade que a gua ter, ela dever apresentar uma qualidade mnima prevista pela legislao. Dentre diversas medidas de qualidade da gua temos a potabilidade e a balneabilidade, os quais medem a quantidade de coliformes na gua.

3.2.1

Potabilidade

Indica se a gua analisada potvel, ou seja, prpria para o consumo humano, cujos parmetros microbiolgicos, fsicos, qumicos e radioativos atendam a um padro que no oferea riscos sade. A gua potvel deve estar em conformidade com o padro microbiolgico, descrito pela vigilncia sanitria.

3.2.2

Balneabilidade

Balneabilidade a medida das condies sanitrias das guas destinadas recreao de contato primrio. A balneabilidade feita conforme a Resoluo CONAMA 274 de 29 de novembro de 2000, aps 5 semanas de coletas e anlises microbiolgicas para Coliformes Fecais, Escherichia coli e/ou Enterococos, nos dias e locais de maior afluncia do pblico. Quando da utilizao de mais de um indicador biolgico as guas tero as suas condies avaliadas de acordo com o critrio mais restritivo. Ressalta-se que os padres referentes aos

Enterococos aplicam-se, somente s guas marinhas. O monitoramento da balneabilidade realizado nos meses de vero, perodo de maior procura por parte das pessoas para banho e recreao. O aumento populacional e as chuvas intensas influenciam negativamente na qualidade das guas, pois incrementam o lanamento direto ou indireto de esgotos. A partir dos resultados das anlises de Coliformes Fecais das 5 semanas consecutivas, so emitidos resultados na forma de boletins semanais. O boletim informa a qualidade das guas quanto balneabilidade, que pode ser enquadrada nas categorias "prpria" ou "imprpria" para recreao de contato primrio. A categoria prpria pode ser subdividida em classes: excelente, muito boa e satisfatria. Essas classificaes esto relacionadas com a quantidade de coliformes presentes na gua.

3.3 Exame de Laboratrio

3.3.1

Tcnicas Bacteriolgicas

Os mtodos de exame bacteriolgico da gua so apresentados no livro Standard Methodos for the Examination of Water and Wastewater, preparado e publicado, conjuntamente, pelas associaes Americam public Health Association, Americam Water Works associatiom e Federation of Sewage and Industrial wastes Associations. Tal como se indica no ttulo, os mtodos so padronizados e os detalhes tcnicos devem ser rigorosamente seguidos, a fim de haver significao oficial nos resultados obtidos. Torna-se indispensvel seguir, com ateno, os seguinte detalhes, quando amostras de gua forem submetidas anlise bacteriolgica: 1- A amostra deve ser colhida em recipiente estril; 2- A amostra deve ser representativa do universo do qual foi colhida; 3- Deve-se evitar a contaminao da amostra durante e aps a coleta; 4- A amostra deve ser examinada logo aps sua obteno; 5- havendo a necessidade de uma demora na realizao da anlise, A amostra deve ser guardada a uma temperatura entre 0 e 10C. Os processos bacteriolgicos rotineiros consistem em uma contagem em placa para determinao do nmero de bactrias presentes na amostra e em provas que revelam a existncia de bactrias do grupo coliforme.

3.3.1.1 Determinao do nmero total de bactrias por mililitro de gua Cada colnia desenvolvida se considera como representando uma nica bactria existente na amostra de gua utilizada. Os resultados obtidos no podem ser considerados absolutamente certos, porque a amostra representa uma frao muito pequena da gua cuja qualidade est sendo investigada. Se a amostra for diluda a impreciso ser maior, pois as bactrias no se distribuem uniformemente na gua e duas pores de gua igualmente diludas podem apresentar contedo total muito diferente.

3.3.1.2 Determinao da presena ou ausncia do grupo coliforme o mais importante, no permitido isolar, identificar ou enumerar as bactrias patognicas existentes na gua. Esse mtodo apenas indica o grau de contaminao das guas, com despejo de origem humana ou animal. Qualquer possibilidade na presena do grupo coliforme indica que a gua no satisfatria e nem de qualidade sanitria segura.

3.3.2

Provas da presena de bactrias coliformes

Diversos tipos de meios seletivos e diferencias aceleram o processo de exame das guas para comprovar a presena de organismos coliformes. O exame compreende trs etapas sucessivas: o teste presuntivo, o teste de confirmao e o teste completo.

3.3.2.1 Teste Presuntivo Consiste na semeadura em Caldo Lauryl Sulfato Triptose (LST), onde ocorre enriquecimento de organismos fermentadores da lactose. A produo de gs, a partir da fermentao da lactose no meio de cultura empregado nesse ensaio prova presuntiva para a presena de bactrias do grupo coliforme. O teste dito presuntivo porque outras bactrias no pertencentes ao grupo coliforme podem fermentar a lactose e produzir gs.

3.3.2.2 Teste de Confirmao Verifica a veracidade do teste presuntivo, consiste em inocular uma frao do caldo lactosado fermentado em um meio seletivo que s permite o desenvolvimento do grupo coliforme, inibindo o crescimento das outras bactrias fermentadoras da lactose. Um dos meios que pode ser utilizado o Caldo Lactosado Verde Brilhante (VB), no qual a formao de gs ser a confirmao da presena de coliformes totais. Um outro meio que usado e o gar Eosina

Azul de Metileno (EMB) no qual os germes do grupo coli-aergenes formam colnias caractersticas. A Escherichia coli forma colnias pequenas, escuras com centro quase negro, com um brilho metlico esverdeado, j a Enterobacter forma colnias grandes mucides e rseas, com o centro escuro, raramente demonstrando brilho metlico. A presena de colnias tpicas confirma a ocorrncia de coliformes fecais. A Figura 1 mostra o mtodo de inoculao da amostra em placa de Petri com gar Eosina Azul de Metileno.

Figura 1: Inoculao de amostra em placa de petri.

Para a confirmao de coliformes fecais pode ser utilizada tambm a transferncia de um inoculo de cada cultura com resultado positivo em LST para tubos contendo Caldo EC. A produo de gs prova confirmativa para Coliformes Fecais. A Figura 2 mostra o procedimento para realizao do teste presuntivo e o teste confirmativo.

Figura 2: Procedimento para realizao dos testes presuntivo e confirmativo.

3.3.2.3 Teste Completo As colnias mais tpicas so selecionadas da placa de gar Eosina Azul de Metileno (sendo utilizado o Caldo Lactose verde Brilhante no teste de confirmao, o crescimento previamente plaqueado em EMB) e inoculadas em Caldo Lactosado (os coliformes produzem gs) e em gar em Bisel (fazer o mtodo de Gram; os coliformes so Gram-negativos e no formam esporos). A fermentao do caldo lactosado e a demonstrao de bacilos gram-negativos noesporulados constituem um teste positivo para a presena de algum membro do grupo coliforme de gua examinada.

Outros testes que podem ser realizados so a reao do vermelho de Metila, a reao de Voges-Proskauer e o teste do citrato. A Figura 3, mostra o procedimento para realizao do ensaio completo.

Figura 3: Procedimento para realizao do teste completo.

3.3.3

Determinao do nmero mais provvel de coliformes totais e fecais Tcnica da Fermentao em Tubos Mltiplos

Esta tcnica esta baseada no princpio de que as bactrias presentes em uma amostra podem ser separadas uma das outras por agitao, resultando em uma suspenso de clulas bacterianas individuais. A tcnica consiste na inoculao de volumes decrescentes da amostra (diluies decimais consecutivas) em um meio de cultura adequado, sendo cada volume inoculado em uma srie de cinco tubos. A Figura 4 mostra o mtodo das diluies sucessivas.

Figura 4: Diluies sucessivas.

Atravs do decrscimo dos volumes inoculados obtm-se uma determinada diluio em que pelo menos um tubo da ltima srie fornea resultado negativo. A combinao de resultados positivos e negativos permite a obteno de uma estimativa de densidade original das bactrias pesquisadas NMERO MAIS PROVVEL (NMP), atravs da aplicao de clculos de probabilidade. O mtodo do NMP o mais til quando se utiliza o crescimento em um meio lquido diferencial para identificar a bactria (como o caso das bactrias coliformes em anlise de guas). O mtodo do NMP estabelece que h limite de confiana de 95% de probabilidade de que a medida da populao bacteriana esta dentro de uma determinada margem, j que o NMP o nmero estatisticamente mais provvel.

3.3.3.1 Estimativa do nmero mais provvel de coliformes Para estimativa do nmero mais provvel de coliformes se deve registrar os algarismos correspondentes ao nmero de tubos positivos para cada srie (devemos considerar positivo todo tubo que apresentar gs), considerando-se zero para a srie totalmente negativa. O nmero assim formado o Resultado Numrico Total. O resultado numrico total ser composto por tantos algarismos quantas forem as sries de diluies. No exemplo a seguir, constata-se o nmero de tubos positivos em cada uma das sries e registra-se o algarismo correspondente na linha identificada como POS, considerando-se zero para a srie totalmente negativa. Como no exemplo as sries so em nmero de cinco, cinco sero os algarismos que caracterizaro o resultado numrico total. Exemplo: 55210

PORO DA AMOSTRA TUBOS 10ml 1 2 3 4 5 POS + + + + + 5 1ml + + + + + 5 0,1ml + + 2 0,01ml + 1 0,001ml 0

RESULTADO NUMRICO TOTAL: 55210

Aps encontrar o resultado numrico total se deve estabelecer o resultado em nmero mais provvel de coliformes em 100mL de amostra tambm chamado de ndice colimtrico por 100mL. Para este fim se utiliza o ndice do NMP que mostrado na Tabela 1.

Tabela 1: ndice de NMP quando so utilizados inculos de 10mL, 0,1mL e 0,01 mL em sries

de 5 tubos.

3.3.3.2 Regras para leitura na tabela do NMP Para estabelecimento do resultado em NMP necessrio usar os seguintes critrios: 1- Procurar o cdigo (srie crtica): o cdigo dever ser constitudo de trs algarismos, algarismos estes relativos a cada srie. Para isso observa-se o seguinte: partir da srie mais diluda e que apresenta maior nmero de tubos positivos, seguida de duas sries abaixo. No exemplo em questo o cdigo ser 521. 2- Consultar a Tabela para clculo do NMP por 100 ml, utilizando volumes de 10, 1 e 0,1ml de amostra. Localizar na tabela o nmero formado pelos trs algarismos do cdigo e verificar a que NMP corresponde. No exemplo em questo o valor encontrado de 70. 3- Aplicar fatores de correo para NMP: a) emprega-se fator 1 (um) quando o cdigo for constitudo da primeira, segunda e terceira sries, permanecer o mesmo nmero encontrado na tabela. b) Emprega-se fator 10 (dez) quando o cdigo for constitudo da segunda, terceira e quarta sries. O NMP encontrado na tabela dever ser multiplicado por 10. Este o caso de nosso exemplo portanto, o ndice colimtrico por 100ml ser de 700 e bastar acrescentar um 0 (zero) ao 70 encontrado na tabela. c) Emprega-se fator 100 (cem) quando o cdigo for constitudo da terceira, quarta e quinta srie. O NMP encontrado na tabela dever ser multiplicado por 100.

Observao : quando sries mais concentradas apresentarem menor nmero de tubos positivos, o que raramente acontece, devemos nos assegurar de que no houve falha tcnica na execuo do exame.

4. Materiais e Mtodos: 4.1 Materiais Segue abaixo os materiais utilizados para realizar o teste presuntivo, a contagem de coliformes fecais e o isolamento da E. coli: tubos de ensaio tubos de Durhan Caldo Lauryl Sulfato Triptose e EC Estufa Ala de cromo-nquel Bico de Bnsen Banho termosttico placas de petri gar Azul de Metileno (EMB) Amostras de gua: Aude Vila da Quinta.

4.2 Mtodos Sero descritos a seguir os procedimentos empregados no teste presuntivo, na contagem de coliformes fecais e no isolamento da E. coli.

4.2.1

Teste Presuntivo

Inoculou-se 1 mL da amostra em cada um dos 5 tubos de Caldo Lauryl Sulfato Triptose contendo tubos Durhan, repetindo o mesmo procedimento nas demais diluies. Em seguida levaram-se os tubos para uma estufa a 35 37C por 48 horas. Aps o perodo de incubao procedeu-se a leitura, onde os tubos que apresentaram formao de gs foram identificados como contendo coliformes fecais.

4.2.2

Contagem de coliformes fecais Primeiramente, com o auxilio de uma ala de cromo-nquel, inoculou uma alada

dos tubos positivos do teste presuntivo para os tubos com Caldo E. coli (EC) com tubos de Durhan, identificando-os conforme a diluio feita no primeiro teste. Em seguida, incubaram-se os tubos em um banho termosttico com circulao de ar a 44,5 45,5C por 24 horas. Aps o

perodo de incubao procedeu-se a leitura, onde os tubos que apresentaram formao de gs foram identificados como contendo coliformes fecais.

4.2.2.1 Isolamento da E. coli Com o auxlio de uma ala de cromo-nquel, inoculou-se uma alada de um dos tubos positivos do teste de coliformes fecais, fazendo estrias em 2 placas de petri contendo Agar Eosina Azul de Metileno (EMB). Em seguida, incubaram-se as placas invertidas em estufa a 35 37C por 24 horas. Aps o perodo de incubao, observou-se as colnias tpicas formadas no gar.

5. Resultados e Discusso: A tabela 2 apresenta os resultados para o Teste Presuntivo: Tabela 2: Resultados Teste Presuntivo Diluio 100 10-1 1 2 3 4 5 + + + + + + + + + + 10-2 + + + + + 10-3 + + -

No teste presuntivo em todas as diluies notou-se a presena de coliformes.

A tabela 3 apresenta os resultados obtidos para o teste de Coliformes Termotolerantes Tabela 3: Resultado para Coliformes Termotolerantes Diluio 100 10-1 10-2 10-3 1 2 3 4 5 Pos + + + + + 5 + + + 3 0 0

Resultado nmerico: 5300

Nas condies para presena de coliformes termotolerantes notou-se a presena destes em duas das concentraes testadas, sendo encontrados em 8 dos tubos do teste. Atravs de tabela de NMP adequada, chegou-se ao valor de 80NMP/100ml porm como foi usado 5 mL para a diluio de 100 e no 1 mL como indicado no roteiro, deixando as demais diluies mais concentradas do que o previsto, esse valor deve ser multiplicado por 2 indicando ento que ter 160NMP/100ml, de coliformes termotolerantes, para a gua analisada. A legislao vigente impem um valor mximo de 250NMP/100ml para coliformes

termotolerantes em gua no-canalisada, logo, a amostra est dentro dos padres, sendo considerada como excelente.

6. Concluso: Para a amostra de gua do Poo da Vila da Quinta foi encontrado 160NMP/100 mL de coliformes termotolerantes, sendo assim o poo est dentro da legislao para coliformes termotolerantes em gua no canalisada.

7. 1.

Perguntas Quais os principais micro-organismos contaminantes de guas?

Os principais micro-organismos contaminantes de gua e outros alimentos so os coliformes fecais. Essas bactrias geralmente causam infeces intestinais e em raros casos podem causar infeces extra-intestinais como meningite. 2. O que so micro-organismos indicadores? Quais as caractersticas desejadas para

um micro-organismo indicador? So micro-organismos capazes de fornecerem informaes sobre a ocorrncia de contaminao de origem fecal, presena de patgenos, deteriorao potencial, condies sanitrias inadequadas durante o processo, produo ou armazenamento. Critrios que devem ser levados em conta quando se considera um grupo ou microrganismo como sendo indicador: deve ser de rpida deteco, fcil de distinguir de outros microrganismos da microbiota do alimento, no deve estar presente como contaminante natural do alimento, pois assim sua deteco no indicar, necessariamente, a presena da matria fecal ou dos patgenos, deve estar presente quando o patgeno associado estiver, seu nmero deve correlacionar-se com o do patgeno, deve apresentar necessidades de crescimento e velocidade de crescimento semelhantes s do patgeno, deve ter velocidade de morte que seja ao menos semelhante do patgeno e, se possvel, sobrevivncia levemente superior a do patgeno, deve estar ausente nos alimentos que esto livres do patgeno, ou estar presente em quantidades mnimas. 3. Quais os padres microbianos de qualidade para gua potvel estabelecidos pela

legislao brasileira? E para gua de recreao (gua de contato primrio)? Tabela 4: Padro microbiolgico de potabilidade da gua para consumo humano PARMETRO VMP(1) gua para consumo humano(2) Ausncia em 100ml gua na sada do tratamento Coliformes totais Ausncia em 100ml

Escherichia coli ou coliformes termotolerantes(3)

NOTAS: (1) valor mximo permitido. (2) gua para consumo humano em toda e qualquer situao, incluindo fontes individuais como poos, minas, nascentes, dentre outras. (3) a deteco de Escherichia coli deve ser preferencialmente adotada.

No Brasil, as guas doces, salobras de salinas destinadas a balneabilidade tem sua condio avaliada nas categorias prpria e impropria. As guas caracterizadas em prpria so subdivididas em categorias: a) Excelente, com contagens 250 coliformes termotolerantes ou 400 E. coli ou 50 enterococos por 100 mL de amostra, c) Satisfatria, com contagens 1000 coliformes termotolerantes ou 800 E. coli ou 100 enterococos por 100 mL de amostra, Excelente, com contagens 250 coliformes termotolerantes ou 200 E. coli ou 25 enterococos por 100 mL de amostra. (CONAMA 274/200)

8. Referencias Bibliograficas

PELCZAR M., REID R., CHAN E. C. S., Microbiologia, volume 2, editora McGraw-Hill Ltda, So Paulo, 1980.

TORTORA G. J., FUNKE B. R., CASE C. L., Introduccion a la Microbiologia, Editorial Acribia S.A., Espanha, 1993.

Corsan, Curso Bsico de Tratamento de gua e esgoto: Tcnicas Bacteriolgicas, Porto Alegre, 1997.

INTERNET: http://www.snatural.com.br/UV.htm http://www.ambientebrasil.com.br http://www.sabesp.com.br/legislacao/agua/qualidade_agua.htm