Protenas do plasma seminal de caprinos relacionados com o ndice pluviomtrico e a qualidade do smen

Souza A.F.; Leito M. C. G.; Batista A. M.; Porto A. L. F.; Filho J. L. L.; Guerra M. M. P
Cincia Rural, Santa Maria, Online ISSN0103-8478

Monalisa Eva Santos Evangelista 20/03/2011

Introduo
Regies tropicais e subtropicais
Fatores ambientais
(NUNES, 1988)

Temperaturas ambientais
Estresse; Parmetros fisiolgicos
Desempenho reprodutivo
(RIVER & RIVEST, 1991)

Introduo
Motilidade; Plasma seminal Sobrevivncia; Transporte espermtico.
Sistema reprodutor: masculino e feminino
(TPFER-PETERSEN et al., 2004)

Composio do plasma seminal

Tipos e atuao das protenas espermticas
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Objetivo
Identificar

as protenas presentes no plasma seminal de caprinos da raa Alpina Americana criados na regio Nordeste do Brasil, colhido nos perodos de baixa (BIP) e alto (AIP) ndice pluviomtrico, que esto relacionadas com a qualidade dos parmetros seminais.
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Material e Mtodos
Camocim de So Felix;
Tropical mido Temperatura mnima: 10C; Umidade: 40-70%;
Temperatura mxima: 26C.

Material e Mtodos
Caprinos da raa Alpina Americana:
Idade:

24-48 meses.

Regime semi-intensivo; Suplementao;

gua e sal mineral.

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Material e Mtodos
Colheitas
ndice pluviomtrico (IP):

AIP: IP=210mm; Temperatura mdia: 18,8C

BIP: IP= 0 mm; Temperatura mdia= 22,7C

Laboratrio de Meteorologia do Instituto Tecnolgico de Pernambuco (ITEP/LAMPE, 2007)

Material e Mtodos
Duas colheitas por animal:
Pool

dos ejaculados

Amostra de smen

Vagina artificial e fmea como manequim; 2 amostra de smen/semana

Totalizando quatro amostras de cada reprodutor/perodo
Correspondendo 24 amostras de smen no final
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Material e Mtodos
Avaliao macroscpica e microscpica;
Anlise de integridade de acrossoma: Alquotas de 10l diludas em 1,0ml de soluo Tris; Esfregao 4C; protegidos da luz
Tcnica de colorao de flourescena isothiocianatoconjugada ao Peanut aglutinina
(ROTH et al., 1998)

Material e Mtodos
200 espermatozides/lmina:
Acrossomas intactos (fluorescncia verde

- regio acrossomal);
Acrossomas reagidos (fluorescncia

verde - regio equatorial da cabea ou no)

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Material e Mtodos
Analise do DNA: 10l da amostra
ARMAZE NADOS

990l da soluo TNE

0,1576g de TRIS-HCL, 0,877g de NaCl, 37,2mg de EDTA, pH 7,4

-196C; Avaliao da integridade de DNA espermtico

Corante Laranja de Acridina

(EVENSON et al., 2002)

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Material e Mtodos
Avaliadas 200 clulas
Microscpio de fluorescncia
DNA integro: colorao verde;

DNA danificado: colorao vermelhas,

laranja ou amarela.

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Material e Mtodos
Dosagem das protenas totais
BRADFORD (1976) e eletroforese bidimencional do plasma seminal
1,0ml da amostra de smen

Centrifugado

600; 10 minutos
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Material e Mtodos
Eletroforese em SDS-PAGE de duas

dimenses(2D):
Focalizao isoeltrica (FI) - fitas

Immobiline Dry stripe (7cm, pH de 3 10); 3h30min; voltagem total de 8,5kVh. Duplicata para cada amostra analisada dos perodos.
(BERKELMAN & STENSTEDT, 2004)

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Material e Mtodos
Fitas;
Reidratadas 15 horas a 28C em

soluo tampo:
uria, CHAPS a 2%, Ditiotreitol a 1%, gradientes imobilizados de pH- IPG (pH de 3-10) a 2% e azul de bromofenol a 0,002%
60 g de plasma seminal.
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Material e Mtodos
Gel de poliacrilamida a 12,5%:
LAEMMLI (1970)

Corrente constante de 15mA por gel;

Sistema vertical (BIO-RAD);

Corados com prata.

Programa Image Mster TM(2-D Platinum software; Amersham Biociences, England)

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Material e Mtodos
Delineamento inteiramente casualizado
Esquema fatorial 3x2; 48 repeties.

Testes estatsticos:
F; t-Student; Mann-Whitney; Kruskal-Wallis.

SPSS (Statistical Package for the Social

Sciences), verso 13.
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Resultado e Discusso

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Resultado e Discusso

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Resultado e Discusso

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Resultado e Discusso

AIP: 2,3x109 ml-1, 79,8%, 4,2; BIP: 2,3x109ml-1, 81,3%, 4,0.

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Resultado e Discusso

AIP: 147,9g ml-1; BIP: 103,8g ml-1.

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Resultado e Discusso
AIP:
96 spots de protenas; 47spots-massa molecular relativa de 4 -106kDa;

Ponto isoeltrico de 3 - 8,96.

BIP:
49 spots de protena; Massa molecular relativa de 15 - 97kDa; Ponto isoeltrico de 4,48 - 9,83
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Resultado e Discusso
AIP: 90,3% de espermatozides com

acrossomas ntegros

Protenas cidas (aSFP; 13kDa); Enzimas desidrogenases lcticas C4

(SILVA et al.,2003)

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Resultado e Discusso
Protena seminal caprinal (GSP; 14-

15kDa):
Induzem

a motilidade progressiva; com as BSP

Capacitao espermtica
(VILLEMURE et al., 2003)

Relacionadas

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Resultado e Discusso

AIP: 90,3%; BIP: 80,3%

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Resultado e Discusso
AIP: caltrinas
Protenas

Baixo peso molecular (510kDa)

decapacitante.
AIP BIP

% DNA ntegro:
Valores

prximos a 100% Reprodutor; Perodo; Reprodutor x perodo.

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Concluso
O smen de caprinos da raa Alipna

Americana criados na regio Nordeste de Brasil apresentam-se com melhor qualidade quando colhidos no perodo de alto ndice pluviomtrico, o que pode ser atribudo presnea das protenas de 13kDa e 45kDa.
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