Metabolismo de RNA: Transcrio procarioto/eucarioto

Controle do nvel de protenas

DNA
inibio

RNA

degradao

inibio

Protena

degradao

Tipos de RNA produzidos em uma clula

Abundancia dos diferentes RNAs em uma celula

Transcrio de RNA

O RNA transcrito a partir de uma fita molde de DNA. Reao de polimerizao anloga a DNA polimerase No necessrio um primer para inicio da polimerizao

Gene
corresponde seq. que codificam: os polipeptdeos, rRNA, tRNA e outros, alm de seq. no transcritas ou no traduzidas Em eucariotos: a maioria dos genes que codificam protenas (genes estruturais) so transcritos individualmente. Em procariotos: freqentemente unidos: policistrnicos Unidades genticas: OPERONS so transcritos

Quantos genes codificantes um organismo possui

30,000

Procariotos possuem unidades transcricionais chamadas Operons

Ativadores RNA Polimerase Repressores

mRNA policistrnico 2 6 genes, at 20

A sntese de RNA inicia-se em stios especficos no DNA molde Como a enzima acha o incio do gene ou operon? A RNA polimerase liga-se a promotores Seqncias especficas, reconhecidas pelo fator

~40pb localizados a 5do incio da transcrio (Seqncias consenso) Em E.coli:

Pribnow box
5

Incio da transcrio

TTGACA
-35

TATAAT
-10 +1

A holoenzima faz contato nas regies 10 e -35

A ligao dissocia ~11 pb

Molculas de RNA polimerase aderem fracamente ao DNA deslizando sobre a fita. O fator sigma determina uma ligao forte especifica com regies promotoras Aps o inicio da transcrio o fator sigma se separa do resto da enzima que se movo ao longo da cadeia de DNA

E.coli sigma factors: 1. 70 (RpoD) - the "housekeeping" sigma factor, transcribes most genes in growing cells. 2. 38 (RpoS) - the starvation/stationary phase sigma factor 3. 28 (RpoF) - the flagellar sigma factor 4. 32 (RpoH) - the heat shock sigma Factor 5. 24 (RpoE) - the extracytoplasmic stress sigma factor 6. 54 (RpoN) - the nitrogen-limitation sigma factor 7. 19 (FecI) - the ferric citrate sigma factor

Seqncia de eventos da transcrio

Importncia da orientao da RNA polimerase

Seqncias promotoras

A sntese de RNA inicia-se em stios especficos no DNA molde

A partir das sequncia de diversos promotores estudados possvel deduzir uma consenso para os promotores de E.coli

Terminao da Cadeia = fim da transcrio

Tambm h stios especficos de terminao: 1) 4 a 10 pares consecutivos de A/Ts na ou antes da terminao; 2) uma regio rica em G+C palindrmica que precede a srie A/T

Formao de estrutura secundaria desestabiliza a ligao do RNA com a protena.

Terminao dependente de Rho

Para alguns dos transcritos a ao de uma protena (Rho) necessria para a terminao da transcrio Protena Rho liga-se ao RNA nascente e passa a pux-lo. Ao atingir a bolha transcricional possui uma atividade de RNA-DNA helicase

Transcrio em eucariotos
Mesmos princpios fundamentais de procariotos; Distingue-se por ter mltiplas RNA polimerases e seqs. de controle: RNA pol. I sintetiza a maioria dos rRNAs RNA pol. II sintetiza os precurssores do mRNA; RNA pol. III sintetiza os precurssores do rRNA 5S, tRNAs e outros RNA pol. mitocondriais e em cloroplastos. Em geral: variam de 500 a 700 kDa.

RNA polimerase de eucarioto necessita de fatores gerais de transcrio para iniciar a transcrio

Fosforilao da cauda C-terminal da RNA polimerase necessria liberao do complexo de elongao.

Regulao de expresso gnica de eucariotos

Promotor- regio onde os fatores gerais de transcrio e a polimerase se ligam. Se encontra adjacente ao sitio do inicio de transcrio. Existem promotores mais fortes que tem um nvel basal de transcrio alto e mais fracos que necessitam de ativao por protenas acessrias para atingir altos nveis de transcrio. Seqncias regulatrias- Regies nas quais protenas de regulao gnica se ligam para regular a taxa de processos de associao ao promotor

Promotores eucariticos
So mais complexos e variados; Posies e orientaes variveis em relao seq. transcrita. Seqncias bem distantes podem funcionar como intensificadores ou silenciadores da transcrio; H pelo menos 6 fatores de transcrio (GTFs), funcionando de forma anloga ao fator . H a formao de um complexo pr-iniciao, com uma protena ligadora de TATA box. Outros fatores se ligam para formar o complexo.

Atividade da RNA polimerase gera tenso na fita de DNA. Resoluo atravs da atividade da DNA topoisomerase.