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INDICAO MDICA DO EXAME A determinao dos Triglicrides em amostras de sangue empregada na abordagem laboratorial das hiperlipidemias. PRINCPIO Os Triglicrides so determinados de acordo com as seguintes reaes:
Lipase da lipoprotena

Triglicrides
Glicerolquinase

Glicerol + cidos Graxos Glicerol-3-Fosfato + ADP

Mg +2 Glicerol-3-fosfato

Glicerol + ATP

Glicerol-3-Fosfato + O2
Oxidase

Dihidroxiacetona + H2O2
Peroxidase

2 H2O2

+ 4 Aminoantipirina + 4-Clorofenol

Quinoneimina + 4 H2O

A intensidade da cor vermelha formada diretamente proporcional concentrao dos Triglicrides na amostra. AMOSTRA Preparo do paciente As orientaes para obteno e conservao da amostra esto padronizadas segundo as recomendaes do National Cholesterol Education Program10. O paciente deve estar com peso e dieta estveis por trs semanas e em jejum de 12 a 14 horas (O jejum no imprescindvel para a dosagem de Colesterol total, mas o para a determinao dos Triglicrides e fraes do Colesterol). A abstinncia alcolica desejvel nas 72 horas que antecedem o teste. Obter a amostra com o paciente assentado. O torniquete no deve ser mantido por tempo maior que um minuto e deve-se obter a amostra de sangue aps liberar o torniquete. Tipos de amostra Usar soro ou plasma com EDTA. O analito estvel por dois dias entre 2 - 8 C. Armazenamento prolongado da amostra no recomendado, porque vrias substncias podem ser hidrolizadas liberando glicerol, levando obteno de resultados falsamente elevados. A heparina promove a ativao in vivo ou in vitro da lipase da lipoprotena, fazendo com que a concentrao dos triglicrides se reduza gradativamente em amostras contendo heparina. Este fenmeno ocorre tambm em amostras de soro obtidas em pacientes recebendo doses teraputicas de heparina. Armazenamento e estabilidade da amostra O analito estvel por 2 dias entre 2 8 C. Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Critrios para rejeio da amostra Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. PRODUTO UTILIZADO Triglicrides Liquiform, Catlogo 87 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 ANVISA - 10009010070

Reagentes Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 C. Contem tampo 50 mmol/L, pH 6,9; acetato de magnsio 4 mmol/L; 4-clorofenol 5 mmol/L; 4-aminoantipirina 300 mol/L ATP 1,0 mmol/L; lipase da lipoprotena 1400 U/L; glicerolquinase 1000 U/L e azida sdica 7 mmol/L.

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Padro - 200 mg/dL - Armazenar entre 2 - 30 C. Contm triglicrides 200 mg/dL e azida sdica 7 mmol/L.Aps o manuseio sugere-se armazenar bem vedado, para evitar evaporao.
Precaues e cuidados especiais 1. Como as amostras utilizadas so potencialmente infectantes, sugerimos manuse-las seguindo as normas estabelecidas para Biossegurana. 2. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 3. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais. 4. O Reagente 1 e o padro contm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 5. Para preservar o desempenho do Reagente 1, este deve permanecer fora da geladeira somente o tempo necessrio para se obter o volume a ser utilizado. Evite exposio luz solar direta. O reagente de cor usualmente amarelo claro ou ligeiramente rosa e deve ser desprezado quando sua absorbncia, medida contra a gua, for igual ou maior que 0,300. INFLUNCIAS PR-ANALTICAS Variao Biolgica: como a concentrao de triglicrides influenciada por hbitos dietticos recentes, consumo de lcool, variaes do peso corporal e exerccio fsico, os valores dos triglicrides em um mesmo indivduo so bastante variveis. Usando um mtodo com um CV analtico de 3,0%, os dados obtidos dentro de um ms mostram que a varincia biolgica pode chegar a valores maiores que 90% da varincia intraindividual total. Mesmo nos estados de jejum, ocorre considervel variao biolgica, podendo mostrar diferenas de 21% em medies repetidas no mesmo indivduo. Portanto ao comparar resultados repetidos de triglicrides com intervalos de semanas ou meses deve-se considerar o efeito da variao biolgica. Amostras colhidas com heparina podem fornecer resultados falsamente diminudos. Obter a amostra com o paciente assentado. O torniquete no deve ser mantido por tempo maior que um minuto e deve-se obter a amostra de sangue aps liberar o torniquete. A contaminao do material utilizado com glicerol fornece valores falsamente elevados. Nveis elevados de ascorbato (vitamina C) produzem interferncias negativas por competio com o cromognio na reao da peroxidase. Se houver suspeita da presena de cido ascrbico deixar o soro em repouso durante 90 minutos antes de iniciar a dosagem para no obter resultados falsamente diminudos. EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Fotmetro capaz de medir com exatido a absorbncia em 505 nm ou filtro verde (490 a 520 nm). 2. Banho-maria mantido temperatura constante (37 C). 3. Pipetas para medir amostras e reagentes. 4. Cronmetro. Procedimento automatizado Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos.

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Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. PROCEDIMENTO Procedimento manual 1. Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir: Amostra Padro (n 2) Reagente 1 (n 1) Branco --------1,0 mL Teste 0,01 mL ----1,0 mL Padro ----0,01 mL 1,0 mL

2. Misturar e colocar no banho-maria 37 C por 10 minutos. O nvel da gua no banho deve ser
superior ao nvel do reagente nos tubos de ensaio. 3. Determinar as absorbncias do teste e padro em 505 nm ou filtro verde (490 a 520 nm) acertando o zero com o branco. A cor estvel por 60 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Precaues e Cuidados Especiais Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos <0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. CLCULOS Ver linearidade. Absorbncia do teste Triglicrides (mg/dL) = Absorbncia do padro g/dl = g/dl Devido a grande reprodutibilidade que pode ser obtida com a metodologia, o mtodo do fator pode ser empregado. 200 Fator de calibrao = Absorbncia do padro Triglicrides (mg/dL) = Absorbncia do teste x Fator x 200

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RESULTADOS Unidade de medida mg/dL Converso de mg/dL para Unidade SI: mmol/L = mg/dL x 0,0113

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Triglicrides (mg/dL) < 150 150 - 199 200 - 499 > 500

Valores desejveis ou recomendados Desejvel Limiar Alto Elevado Muito Elevado

LIMITAES DO PROCEDIMENTO Linearidade A reao linear at 1100 mg/dL. Para valores maiores, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L, realizar nova determinao e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 100 e 250 mg/dL. Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio. Interferncias 1- Valores de Bilirrubina at 10 mg/dL e Hemoglobina at 200 mg/dL no produzem interferncias significativas. 2- Valores de Bilirrubina maiores que 10 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos. 3- Nveis elevados de ascorbato (vitamina C) produzem interferncias negativas por competio com o cromognio na reao da peroxidase. Se houver suspeita da presena de cido ascrbico deixar o soro em repouso durante 90 minutos antes de iniciar a dosagem para no obter resultados falsamente diminudos. 4- Para uma reviso das fontes fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia, sugere-se consultar Clin Chem 1975;21:1D-432D. SIGNIFICADO CLNICO A determinao dos triglicrides ocupa lugar de destaque no laboratrio clnico moderno porque dado importante e necessrio para a classificao e fenotipagem das hiperlipoproteinemias. tambm de importncia a ntima correlao que se observa entre a hipertrigliceridemia e o aumento do risco coronariano nas mulheres. As causas de elevao dos triglicrides so as vrias doenas de lpides chamadas hiperlipidemias ou hiperlipoprotenemias. Nestas, sejam de causa primria ou secundria, ocorre elevao dos triglicrides nos tipos I, IIb, III, IV e V. As hiperlipidemias podem estar associadas a doena cardio-vascular e ocorrem comumente no diabetes, alcoolismo, pancreatite, doena do armazenamento do glicognio, sndrome nefrtica, hipotireoidismo, gravidez, uso de anticoncepcionais e mieloma mltiplo entre outras doenas. Vrias mulheres em uso de estrgenos ou contraceptivos orais apresentam aumento nos nveis de triglicrides. Hipertrigliceremia tambm encontra-se associada ao uso de diurticos tiazdicos e bloqueadores beta-adrenrgicos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. Bucolo G, David H. Clin Chem 1973;19:475. 2. Bull World Health Org 1970; 43:891. 3. Fossati P, Prencipe L. Clin Chem 1982; 28:2077. 4. Fredrickson DS, Levy RJ, Lee RS. New Eng Med 1967; 276: 34, 94, 148, 215, 276. 5. Good NE, Winget GD, Winter W, Connoly TN, Isava S, Singh RMM. Biochemistry 1966;5:467. 6. Inmetro Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualitymark eds, Rio de Janeiro, 1997. 7. Mc Gowan MW, Artiss JD, Strandbergh DR, Zak B. Clin Chem 1983;29:538. 8. Nagele V, Hagele E O, Sauer G, Wiedeman E, Lehmann P, Wahlefeld AW, Gruber W J Clin Chem Clin Biochem 1984;22:165. 9. Narayanan S. Indian J Clin Biochem 1996; 11:12-16. 10. Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH. Handbook of lipoprotein testing. AACC Press, Washington, 1997: 75-97. 11. Stein EA, Myers Gl. Clin Chem 1995: 41:1421-26 12. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner Chilcott Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarbourough, Canada, 1972. 13. Trinder P. Ann Clin Biochem 1969;6:24. 14. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-501. 15. Triglicrides GPO-ANA: Instrues de Uso, Labtest Diagnstica.

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