INSTRUES DE UTILIZAO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR

PA-254417.02 Rev.: Junho de 2003

BD Mycosel Agar BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide

UTILIZAO PRETENDIDA
O BD Mycosel Agar e o BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide so meios altamente selectivos usados no isolamento de fungos patognicos provenientes de materiais que possuem uma flora abundante ou outros fungos ou bactrias. No so meios de utilizao geral para o isolamento de todos os fungos (incluindo bolores e leveduras saprfitas).

PRINCPIO E EXPLICAO DO PROCEDIMENTO

Mtodo microbiolgico. O meio BD Mycosel Agar baseia-se no meio Mycophil Agar, um meio utilizado para o cultivo, cromogenese e manuteno de fungos.1 O BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide (Agar com Cloranfenicol e Cicloheximida) baseado no meio Sabouraud Glucose Agar, um meio de utilizao geral concebido por Sabouraud para o cultivo de dermatfitos.2 O baixo pH, de aproximadamente 5,6, e a elevada concentrao de glucose favorvel ao crescimento de todos os fungos.1,3 O BD Mycosel Agar e o BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide contm nutrientes fornecidos pelas peptonas. A glucose uma fonte de energia. A Cicloheximida usada numa variedade de meios para o isolamento de fungos patognicos, para inibir certos fungos no patognicos, como os bolores e leveduras saprfitas. especialmente til no isolamento de dermatfitos.4 Dado que a patogenicidade dos fungos e o estado imunitrio do doente variam, deve-se ter ateno quando um meio com cicloheximida usado individualmente para o isolamento dos fungos, porque alguns fungos oportunistas podero escapar.5,6 O Cloranfenicol um antibitico de largo espectro, que possui uma aco inibidora para uma grande variedade de bactrias Gram-negativas e Gram-positivas, mas que poder ter um efeito inibidor sobre vrios fungos patognicos.1 O BD Mycosel Agar e o BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide so muito semelhantes no que respeita a composio e a selectividade, mas o segundo meio tem um pH mais baixo, o que pode constituir uma vantagem para o isolamento de fungos tolerantes ao cido, mas que tambm pode constituir uma desvantagem quando se pretende isolar fungos que preferem um pH mais elevado. Estes meios so utilizados para o isolamento de fungos provenientes de amostras clnicas ou material que se suspeite conter contaminantes bacterianos e fngicos.

REAGENTES
Frmulas* por Litro de gua Purificada
BD Mycosel Agar Hidrolisado papanico de farinha de soja Glucose Cicloheximida Cloranfenicol Agar pH 10,0 g 10,0 0,4 0,05 15,5 6.9 0.2 BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide Hidrolisado pancretico de casena 5,0 g Hidrolisado pptico de tecido animal Glucose Cloranfenicol Cicloheximida Agar pH 5,0 40,0 0,05 0,4 23,5 5.6 0.2

*Ajustada e/ou suplementada conforme necessrio para cumprir os critrios do desempenho.

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PRECAUES
. Apenas para uso profissional. No utilizar as placas que apresentem sinais de contaminao microbiana, descolorao, secura, fissuras ou outros sinais de deteriorao. Consultar as INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO para informao sobre os procedimentos de manuseamento assptico, os riscos biolgicos e os procedimentos de eliminao do produto usado.

ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE

Aps recepo das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8C, dentro do invlucro original at ao momento da utilizao. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As placas podem ser inoculadas at ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e incubadas durante o tempo de incubao recomendado. As placas so fornecidas em pilhas de 10 e, quando uma destas pilhas aberta, as respectivas placas tero de ser utilizadas no prazo mximo de uma semana, se forem conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8C.

CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR

Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO). Consultar a nota de rodap relativa a incubao. Estirpes BD Mycosel Agar BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide Crescimento bom a excelente Crescimento bom a excelente Inibio parcial a completa

*Candida albicans Crescimento bom a ATCC 10231 excelente ***Trichophyton mentagrophytes Crescimento bom a ATCC 9533 excelente ** Aspergillus niger ATCC Inibio parcial a completa 16404 **Saccharomyces cerevisiae Inibio completa Inibio completa NCPF 1211 *Escherichia coli ATCC 25922 Inibio completa Inibio completa *Staphylococcus aureus 25923 Inibio completa Inibio completa Incubao: *48 h / **3 a 4 dias / ***5 a 7 dias, 25C 28C, em condies aerbias

PROCEDIMENTO
Material fornecido Meio BD Mycosel Agar ou BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide, fornecido em placas Stacker de 90 mm. Microbiologicamente controlados. Material no fornecido Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessrio. Tipos de amostra Os produtos descritos neste documento so meios de isolamento para fungos patognicos, provenientes especialmente de amostras dermatolgicas, mas no s (ver tambm CARACTERSTICAS DO DESEMPENHO E LIMITAES DO PROCEDIMENTO). Procedimento do teste Semear a amostra sobre o meio BD Mycosel Agar ou BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide o mais rapidamente possvel, aps a recepo no laboratrio. A placa para cultura usada principalmente para isolar culturas puras das amostras que contm flora mista. Em alternativa, se o material estiver a ser cultivado directamente de uma zaragatoa, fazer rolar a zaragatoa sobre uma pequena rea da superfcie, na extremidade; em seguida, espalhar a partir desta rea inoculada.
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Se a amostra for composta por raspas de pele, cabelo ou unhas, colocar o material no centro da superfcie do meio. Se for possvel, as partculas maiores devem ser ligeiramente prensadas sobra a superfcie por meio de pinas estreis de modo a fazer contacto com o meio. Para o isolamento de fungos que causam micoses sistmicas, devem ser inoculados dois conjuntos de meios, sendo um deles incubado a uma temperatura entre 25 e 30C e um duplicado do meio, a uma temperatura entre 35 e 37C. Recomenda-se a incluso de uma placa de BD Sabouraud Glucose Agar para fornecer uma indicao de todos os fungos patognicos presentes na amostra. Por ltimo, tambm deve ser inoculado um meio no selectivo, como o caso do BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood, para fornecer uma indicao dos elementos patognicos bacterianos presentes na amostra.

Se for utilizado para a deteco de leveduras (por exemplo, Candida species) em amostras clnicas, incubar durante 48 h a uma temperatura entre 30 e 35C. Se houver suspeita de fungos filamentosos, incluindo dermatfitas, incubar durante um mximo de uma semana a uma temperatura de 25 a 30 C. As dermatfitas requerem, ocasionalmente, 3 semanas ou mais para produzir crescimento. Se a incubao durar mais de 3 dias, proporcionar condies adequadas de humidade. As placas podem ser seladas com fita adesiva plstica de modo a evitar que ocorra dessecao. Resultados Aps uma incubao suficiente, as placas podem apresentar colnias isoladas nas reas estriadas, bem como crescimento confluente nas reas de grande inoculao. Examinar as placas para verificar a existncia de colnias fngicas que apresentem morfologia e cor tpicas. Para confirmar os resultados, devem realizar-se testes bioqumicos, bem como procedimentos microscpicos e serolgicos.4-7 Uma vez que existe um grande nmero de fungos, no se incluem aqui pormenores sobre o seu aspecto. Consultar a bibliografa.3-9

CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAES DO PROCEDIMENTO

Estes meios so utilizados para isolar fungos patognicos provenientes de amostras com uma elevada flora contaminadora. Como necessrio uma incubao longa para o isolamento dos dermotfitos (o que permite o crescimento de contaminantes indesejveis, em meios menos selectivos), estes meios proporcionam uma grande ajuda no isolamento de fungos provenientes de doenas dermatolgicas, tais como as espcies Trichophyton e Microsporum e muitas outras. Tambm podem ser usados para o isolamento de Candida albicans e muitas outras espcies de Candida. Alguns fungos patognicos podem ser inibidos pelos antimicrobianos existentes neste meio. Assim, o BD Sabouraud Glucose Agar deve ser tambm inoculado, se forem utilizados meios que contenham cloranfenicol e/ou cicloheximida. Os bolores (ex: Aspergillus spp.) e uma variedade de espcies de levedura so frequentemente consideradas no patognicas, mas podem causar ocasionalmente infeces, especialmente nos doentes graves e imunocomprometidos. Normalmente, estes fungos no crescem em meios que contenham cicloheximida. Assim, devem ser includos meios fngicos que no contenham este inibidor. Devido a uma grande variao nas temperaturas de desenvolvimento dos fungos, poder ser necessrio inocular vrias placas e incub-las a temperatura diferentes. Consultar a seco Procedimento do Teste e a bibliografia apropriada.5-9 Nocardia e Actinomyces so bactrias filamentosas (e no fungos!) pelo que no se desenvolvem nos meios Sabouraud que contm inibidores bacterianos como o cloranfenicol.

BIBLIOGRAFIA
1. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore.
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2. Sabouraud, R. 1892. Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralit des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: 1061-1087. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman. 1963. CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle. 1980. Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. Sutton, D.A. 2003. Specimen collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. Summerbell, R.C. 2003. Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Larone, D.H. 2002. Medically important fungi: a guide to identification. 4th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett. 1992. Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 9. Fromtling, R.A. 1995. Mycology. In: P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

EMBALAGEM/APRESENTAO
BD Mycosel Agar No. de cat. 254417 Meios em placas prontos a usar, 20 placas

BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol and Cycloheximide No. de cat. 255504 Meios em placas prontos a usar, 20 placas

INFORMAES ADICIONAIS
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