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Histrico
M. TSWEET (1903): Separao de misturas de pigmentos vegetais em colunas recheadas com adsorventes slidos e solventes variados.
ter de petrleo mistura de pigmentos
CaCO
3
pigmentos separados
CROMATOGRAFIA
Princpio Bsico
Separao de misturas por interao diferencial dos seus componentes entre uma FASE ESTACIONRIA (lquido ou slido) e uma FASE MVEL (lquido ou gs).
CROMATOGRAFIA GASOSA
Histrico
1940
CGS rudimentar CGL proposta (Martin e Synge) Separao de cidos orgnicos por CGL: primeiro cromatgrafo (Martin e James)
1950
Primeiro equipamento comercial (Griffin & George) Detector por Densidade de Gs (Martin e James) Detector por Ionizao em Chama (McWillian e Dewar) Detector por Captura de Eletrons (Lovelock e Lipsky)
1960
Presentemente: Vendas de equipamentos e acessrios para CG nos EUA estimadas em mais de US$ 750.000.000 (1995).
CROMATOGRAFIA
Modalidades e Classificao
CROMATOGRAFIA GASOSA
Aplicabilidade
Quais misturas podem ser separadas por CG ?
(para uma substncia qualquer poder ser arrastada por um fluxo de um gs ela deve ser dissolver - pelo menos parcialmente nesse gs)
VOLTEIS (=evaporveis)
DE FORMA GERAL: CG aplicvel para separao e anlise de misturas cujos constituintes tenham PONTOS DE EBULIO de at 300oC e que termicamente estveis.
O Cromatgrafo a Gs
1 2 6
5 3
1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso. 2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra. 3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal. 6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador). Observao: em vermelho: temperatura controlada
INSTRUMENTAO
Gs de Arraste
Fase Mvel em CG: NO interage com a amostra - apenas a carrega atravs da coluna. Assim usualmente referida como GS DE ARRASTE
Requisitos:
INERTE No deve reagir com a amostra, fase estacionria ou superfcies do instrumento.
PURO Deve ser isento de impurezas que possam degradar a fase estacionria.
Impurezas tpicas em gases e seus efeitos:
H2O, O2 hidrocarbonetos
INSTRUMENTAO
Gs de Arraste
Requisitos:
CUSTO Gases de altssima pureza podem ser muito caros.
A = 99,995 % (4.5) B = 99,999 % (5.0) C = 99,9999 % (6.0)
CUSTO
C B A
PUREZA
COMPATVEL COM DETECTOR Cada detector demanda um gs de arraste especfico para melhor funcionamento.
Seleo de Gases de Arraste em Funo do Detector:
He , H2 N2 , H2 N2 (SS), Ar + 5% CH4
INSTRUMENTAO
Alimentao de Gs de Arraste
Componentes necessrios linha de gs:
controladores de vazo / presso de gs dispositivos para purificao de gs (traps) 3 4 2 1 6
5 1 - Cilindro de Gs 2 - Regulador de Presso Primrio 3 - Traps para eliminar impurezas do gs 4 - Regulador de Presso Secundrio 5 - Regulador de Vazo (Controlador Diferencial de Fluxo) 6 - Medidor de Vazo (Rotmetro) Nota: Tubos e Conexes: Ao Inox ou Cobre
INSTRUMENTAO
Dispositivos de Injeo de Amostra
Os dispositivos para injeo (INJETORES ou VAPORIZADORES) devem prover meios de introduo INSTANTNEA da amostra na coluna cromatogrfica
Injeo instantnea: t=0
t=x
INSTRUMENTAO
Parmetros de Injeo
TEMPERATURA DO INJETOR Deve ser suficientemente elevada para que a amostra vaporize-se imediatamente, mas sem decomposio Regra Geral: Tinj = 50oC acima da temperatura de ebulio do componente menos voltil VOLUME INJETADO Depende do tipo de coluna e do estado fsico da amostra
COLUNA
empacotada = 3,2 mm (1/4) capilar = 0,25 mm Amostras Lquidas
0,2 L ... 20 L 0,01 L ... 3 L
Amostras Gasosas
0,1 ml ... 50 mL
INSTRUMENTAO
Microsseringas para Injeo
LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 L, 5 L e 10 L
Microseringa de 10 L:
mbolo agulha (inox 316)
corpo (pirex)
INSTRUMENTAO
Colunas: Definies Bsicas
EMPACOTADA = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m
Recheada com slido pulverizado (FE slida ou FE lquida depositada sobre as partculas do recheio)
INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna
Alm da interao com a FE, o tempo que um analito demora para percorrer a coluna depende de sua PRESSO DE VAPOR (p0). Estrutura qumica do analito
p0 = f
Temperatura da coluna
Temperatura da coluna
Presso de vapor
Velocidade de migrao
INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna
TEMPERATURA DA COLUNA
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um Forno: AMPLA FAIXA DE TEMPERATURA DE USO Pelo menos de Tambiente at 400oC. Sistemas criognicos (T < Tambiente) podem ser necessrios em casos especiais. TEMPERATURA INDEPENDENTE DOS DEMAIS MDULOS No deve ser afetado pela temperatura do injetor e detector. TEMPERATURA UNIFORME EM SEU INTERIOR Sistemas de ventilao interna muito eficientes para manter a temperatura homognea em todo forno.
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um Forno: FCIL ACESSO COLUNA A operao de troca de coluna pode ser freqente. AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO RPIDO Importante tanto em anlises de rotina e durante o desenvolvimento de metodologias analticas novas.
INSTRUMENTAO
Programao Linear de Temperatura
Misturas complexas (constituintes com volatilidades muito diferentes) separadas ISOTERMICAMENTE: TCOL BAIXA:
- Componentes mais volteis so separados - Componentes menos volteis demoram a eluir, saindo como picos mal definidos
TCOL ALTA:
- Componentes mais volteis no so separados - Componentes menos volteis eluem mais rapidamente
INSTRUMENTAO
Programao Linear de Temperatura
A temperatura do forno pode ser variada linearmente durante a separao: Consegue-se boa separao dos componentes da amostra em menor tempo
TINI Temperatura Inicial TFIM Temperatura Final tINI Tempo Isotrmico Inicial tFIM Tempo Final do Programa R Velocidade de Aquecimento
TFIM R TINI
tINI TEMPO
tFIM
INSTRUMENTAO
Programao Linear de Temperatura
Possveis problemas associados PLT:
VARIAES DE VAZO DO GS DE ARRASTE
INSTRUMENTAO
Detectores
Dispositivos que examinam continuamente o material eluido, gerando sinal quando da passagem de substncias que no o gs de arraste
Grfico Sinal x Tempo = CROMATOGRAMA Idealmente: cada substncia separada aparece como um PICO no cromatograma.
INSTRUMENTAO
Detectores
Mais Importantes:
DETECTOR POR CONDUTIVIDADE TRMICA (DCT OU TCD) Variao da condutividade
trmica do gs de arraste.
DETECTOR POR IONIZAO EM CHAMA (DIC OU FID) ons gerados durante a queima
causada pela absoro de eltrons por eluatos altamente eletroflicos. ANALGICO REGISTRO DE SINAL
Registradores XY
DIGITAL
Integradores Computadores
TEORIA BSICA
Tempo de Reteno Ajustado, tR O parmetro diretamente mensurvel de reteno de um analito o TEMPO DE RETENO AJUSTADO, tR: tR t R = t R - t M
SINAL
tM
TEMPO tR = Tempo de Reteno (tempo decorrido entre a injeo e o pice do pico cromatogrfico) tM = Tempo de Reteno do Composto No-Retido (tempo mnimo para um composto que no interaja com a FE atravesse a coluna) tR = Tempo de Reteno Ajustado (tempo mdio que as molculas do analito passam sorvidas na FE)
TEORIA BSICA
Volume de Reteno Ajustado, VR Embora no diretamente mensurvel, o parmetro fundamental de reteno o VOLUME DE RETENO AJUSTADO, VR:
vazo do gs de arraste
= t R t M x FC tR
VR = Volume de Reteno (volume de gs de arraste necessrio para eluir um analito) VM = Volume de Fase Mvel (volume de gs de arraste contido na coluna; volume morto) VR = Volume de Reteno Ajustado (volume de gs de arraste consumido enquanto o analito est sorvido na FE) Fatores termodinmicos
VR = f
Parmetros dimensionais da coluna
TEORIA BSICA
Constante de Distribuio, KC
Coluna cromatogrfica: srie de estgios independentes onde acontece o equilbrio entre o analito dissolvido na fase estacionria e no gs de arraste:
KC =
[A]S [A]M
KC = Constante de Distribuio
[A]S = concentrao do analito na FE [A]M = concentrao do analito no gs
Afinidade pela FE
[A]S
[A]M
TEORIA BSICA
Fator de Reteno, k
Exprimindo o equilbrio em termos da MASSA do analito em cada fase, ao invs da concentrao:
FATOR DE RETENO, k: razo entre as massas de analito contidas na FE (Ws) e gs de arraste (WM) RAZO DE FASES, : razo entre volumes de FE e gs de arraste na coluna
WS k = WM VM = VS
df = espessura do filme de FE
(rC
df ) 2rCd f
rC >> df
dC / mm 0.10 0.20 0.20 0.25 0.25 0.32 0.32 0.32 0.53 0.53 0.53
df / m 0.10 0.11 0.33 0.25 1.00 0.17 0.52 1.00 0.88 2.65 5.00
TEORIA BSICA
Relaes entre VR, KC e
VR depende diretamente da constante de distribuio do soluto entre a FE e o gs de arraste e das dimenses da coluna. Outra combinao possvel:
possvel estimar tanto o fator de reteno quanto a constante de distribuio a partir do cromatograma
TEORIA BSICA
Eficincia de Sistemas Cromatogrficos
A migrao um analito pela coluna provoca inevitavelmente o alargamento da sua banda:
TEMPO
Efeitos do alargamento excessivo de picos: Picos mais largos e Separao deficiente de analitos com retenes menos intensos = menor detectabilidade prximas.
TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
Supondo a coluna cromatogrfica como uma srie de estgios separados onde ocorre o equilbrio entre o analito, a FE e o gs de arraste:
tR
N
wb
TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
ALTURA EQUIVALENTE A UM PRATO TERICO (H) Tamanho de cada estgio de equilbrio
(L = comprimento da coluna)
Valores tpicos de H e N:
dC 0.10 0.25 0.32 0.32 0.32 0.32 0.53 0.53 2.16 2.16 df 0.25 0.25 0.32 0.50 1.00 5.00 1.00 5.00 10% 5% H 0.081 0.156 0.200 0.228 0.294 0.435 0.426 0.683 0.549 0.500 N 370370 192308 150000 131579 102041 68966 70423 43924 3643 4000
Capilares, L = 30 m
Empacotadas, L = 2 m
Valores de H para colunas capilares e empacotadas so prximos, mas como L para capilares MUITO maior tipicamente elas so mais eficientes
TEORIA BSICA
Otimizao da Eficincia
A altura equivalente a um prato terico funo da velocidade linear mdia do gs de arraste u:
O valor de H pode ser minimizado otimizandose a vazo de gs de arraste
H
HMIN uMAX
(A, B, C = constantes)
- Colunas Capilares: Equao de Golay
FASES ESTACIONRIAS
Conceitos Gerais
FASES ESTACIONRIAS
Conceitos Gerais
LQUIDOS Depositados sobre a superfcie de: slidos porosos inertes (colunas empacotadas) ou de tubos finos de materiais inertes (colunas capilares)
FE lquida SUPORTE Slido inerte poroso Tubo capilar de material inerte
FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
SELETIVA Deve interagir diferencialmente
com os componentes da amostra.
Regra geral: a FE deve ter caractersticas tanto quanto possvel prximas das dos solutos a serem separados (polar, apolar, aromtico ...)
FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
AMPLA FAIXA DE TEMPERATURAS DE USO Maior flexibilidade na otimizao
da separao.
FASES ESTACIONRIAS
FE Lquidas: Absoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE lquida a ABSORO
A absoro ocorre no interior do filme de FE lquida (fenmeno INTRAfacial) Filmes espessos de FE lquida Grande superfcie lquida exposta ao gs de arraste Interao forte entre a FE lquida e o analito (grande solubilidade)
ABSORO
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
POLIGLICIS Muito polares; sensveis a
umidade e oxidao; ainda muito importantes. Principal: Polietilenoglicol (nomes comerciais: Carbowax, DB-Wax, Supelcowax, HP-Wax, etc.) Estrutura Qumica: H
O CH2 CH2
OH n
AMINAS ALIFTICAS Coluna:4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH Gs de Arraste: N2 @ 20 mL.min-1 TCOL: 200oC (isotrmico) Detector: FID Amostra: 0,01 L da mistura de aminas
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Maior parte das aplicaes em CG moderna Quatro grandes grupos estruturais:
POLISTERES steres de dilcoois com dicidos. Polares; altamente sensveis a umidade e oxidao; uso em declnio. Principais: DEGS, EGA, EGS.
STERES METLICOS DE CIDOS GRAXOS Coluna:5%DEGS-PS s/ Supelcoport 100/120 mesh; 6 x 1/8 TCOL: 200oC (isotrmico) Gs de Arraste: N2 @ 20 ml.min-1 Detector: FID Amostra: 0,5 L de soluo em clorofrmio contendo 0,5 g de cada ster
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
SILICONES (polisiloxanas) As FE mais empregadas em CG. Cobrem ampla faixa de polaridades e propriedades qumicas diversas.
CH3 H3C Si CH3 R1 O Si R2 CH3 O Si CH3 n CH3
- Ligao Si-O extremamente estvel = elevada estabilidade trmica e qumica das FE.
- Silicones so fabricados em larga escala para diversas aplicaes = minimizao de custo do produto + tecnologia de produo e purificao largamente estudada e conhecida.
- Praticamente qualquer radical orgnico ou inorgnico pode ser ligado cadeia polimrica = FE ajustveis a separaes especficas + facilidade de imobilizao por entrecruzamento e ligao qumica a suportes
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
FE derivadas de polidimetilsiloxano (PDMS) por substituio de -CH3 por radicais orgnicos, em ordem crescente aproximada de polaridade:
Substituintes
carborano ? fenil 5 % cianopropil 7% fenil 50 % trifluoropropil 50% cianopropil 50% cianopropil 100% fenil 7% fenil 50% -
Nomes Comerciais
SE-30 OV-1 OV-101 SP-2100 Dexsil 300GC SE-52 SE-54 OV-3 OV-5 OV-73 OV-1701 SPB-7 CP-Sil 19CB OV-17 SP-2250 HP-50+ SPB-50 OV-210 QF-1 OV-225 SP-2300 CP-Sil 43CB SP-2340 SP-2330 Silar-9 CP
Observaes
mais apolares da srie pouco seletivas similar a PDMS estvel at > 400oC pouco polar moderadamente polar moderadamente polar retm aromticos moderadamente polar retm compostos carbonlicos polar retem doadores de eltrons altamente polar
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de pesticidas - FE = 100 % PDMS
1 - TCNB 2 - Dichloram 3 - Lindano 4 - PCNB 5 - Pentacloroanilina 6 - Ronilano 7 - Antor 8 - pp-DDE 9 - Rovral 10 - Cypermetrin 11 - Decametrin
17 min
Coluna: CP-Sil 5 (25 m x 0,32 mm x 0,12 m) TCOL:195oC (6,5 min) / 195oC a 275oC (10oC.min-1) Gs de Arraste: He @ 35 cm.min-1 Detector: FID Amostra: 2L de soluo dos pesticidas on-column
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de piridinas - FE = 100 % CNpropilsilicone
1 - piridina 2 - 2-metilpiridina 3 - 2,6-dimetilpiridina 4 - 2-etilpiridina 5 - 3-metilpiridina 6 - 4-metilpiridina
Coluna: CP-Sil 43CB (10 m x 0,10 mm x 0,2 m) TCOL:110oC (isotrmico) Gs de Arraste: N2 @ 16 cm.min-1 Detector: FID Amostra: 0,1L de soluo 1-2% das piridinas em 3-metilpiridina
3 min
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de fenis - FE = fenilmetilsilicones
50% Ph 50% Me
5% Ph 95% Me
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Separao de ismeros ticos: PRODUTOS BIOLGICOS Distino entre produtos de origem sinttica e natural (natural = normalmente substncias oticamente puras; sinttico = muitas vezes so misturas racmicas).
FE Quirais
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
FE oticamente ativas mais importantes:
CH3 O Si CH3 CH3 O CH3 Si CH2
n
C
CH O C O N H
C*
CH CH3 CH3
Chiralsil-Val
CH3 O Si CH3 O
/2
Chiralsil-Metal
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Derivados de ciclodextrinas alquiladas:
-ciclodextrina:
oligosacardeo cclico quiral
Chiralsil-Dex
- Introduzidas em 1983 - Quando ligadas a cadeias de polisiloxano: uso extremamente favorvel como FE lquida (viscosidade baixa, estabilidade ...) - Podem ser quimicamente imobilizadas nas colunas - Colunas disponveis comercialmente
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
leo essencial artificial de limo: separao de terpenos primrios
Coluna: Rt-DEXsm (30 m x 0.32 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 40C / 2C min-1 / 3 min a 200C Gs de Arraste: H2 @ 80 cm.min-1 Detector: FID
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Aroma de bergamota: distino entre aroma natural e artificial
Essncia artificial
Coluna: Rt-DEXse (30 m x 0.32 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 40C / 4C min-1 / 200C Gs de Arraste: He @ 80 cm.min-1 Detector: MS
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Anfetaminas: resoluo dos ismeros
Coluna: Rt-DEXcst (30 m x 0.25 mm x 0.25 m) TCOL: 1 min a 120C / 1,5C min-1 / 3 min A 175C Gs de Arraste: He @ 25 cm.min-1 Detector: MS
COLUNAS CAPILARES
Definies Bsicas
Tubo fino de material inerte com FE lquida ou slida depositada sobre as paredes internas. MATERIAL DO TUBO
slica fundida vidro pirex ao inox Nylon Silcosteel
Colunas de slica so revestidas externamente com camada de polmero (poliimida) para aumentar resistncia mecnica e qumica
COLUNAS CAPILARES
Dimetro Interno dC
=
Eficincia
Colunas de altssima eficincia (amostras complexas, Fast GC); capacidade volumtrica limitada de processamento de amostra
Dimetros mais comuns; capacidade volumtrica limitada de amostra requer dispositivos especiais de injeo
Colunas megabore: menor eficincia, mas maior capacidade de processamento permite uso de injetores convencionais
COLUNAS CAPILARES
Fast GC: Colunas Capilares Finas
Alm de colunas finas: necessrio controle acurado de vazo (controle eletrnico de presso) e altas velocidades de aquecimento da coluna. Destilao simulada de leo diesel:
Coluna: HP-1 (1 m x 0.10 mm x 0.40 m) TCOL: 35C / 40C min-1 / 0,75 min A 310C Gs de Arraste: He @ 90 ml.min-1 Detector: FID
COLUNAS CAPILARES
Colunas Capilares: Injeo
Baixa capacidade de processamento de amostra (sub-microlitro)
1 2 3 4 5
1 - Septo; 2 - Entrada de gs de arraste; 3 - Liner (misturador); 4 - Coluna Capilar 5 - Purga de gs de arraste; 6 - Vlvula de controle de purga.
6
- Menor sensibilidade (boa parte da amostra desprezada) - Diviso da amostra raramente uniforme (frao purgada dos constituintes menos volteis sempre menor) - Ajuste da razo de diviso mais uma fonte de erros
FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas: Adsoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel pela interao analito + FE slida a ADSORO
A adsoro ocorre na interface entre o gs de arraste e a FE slida Slidos com grandes reas superficiais (partculas finas, poros) Solutos polares Slidos com grande nmero de stios ativos (hidroxilas, pares de eletrons...)
ADSORO
FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas
Caractersticas Gerais:
- Slidos finamente granulados (dimetros de partculas tpicos de 105 m a 420 m). - Grandes reas superficiais (at 102 m2/g).
Mais usados:
Polmeros Porosos Porapak (copolmero estireno-divinilbenzeno), Tenax (polixido de difenileno) Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen (carves ativos grafitizados), Alumina, Peneira Molecular (argila microporosa)
- Separao de gases fixos - Compostos leves - Sries homlogas
Principais Aplicaes:
GASES DE REFINARIA Coluna:Carboxen-1000 60-80 mesh; 15 x 1/8 TCOL: 35oC a 225oC / 20oC. min-1 Gs de Arraste: He @ 30 ml.min-1 Detector: TCD
1 - Septo; 2 - Entrada de gs de arrast 3 - Liner (misturador); 4 - Coluna Capilar 5 - Purga de gs de arraste; 6 - Vlvula de controle de pu
Aumenta o sinal dos analitos por transferir mais com para coluna.
split 1:50
Modos de injeo para cromatografia a gs Injeo (colunas capilares) Injeo on-column (dentro da coluna)
Vantagens: Substncias termicamente instveis Metil-Carbamatos por GC/MS Evita problemas de injeo Reprodutibilidade Limitaes: Sem injetores automticos Dificuldades de treinamento de pessoal
Modos de injeo para cromatografia a gs Injeo (colunas capilares) LVI (injeo de grandes volumes)
Modos de injeo para cromatografia a gs Injeo (colunas capilares) LVI (injeo de grandes volumes)
Alguns aparelhos so pouco reprodutveis o que dific quantificao. Gastos de grandes quantidades de gs.
Aula 2
DETECTORES
Definies Gerais
Dispositivos que geram um sinal eltrico proporcional quantidade eluida de um analito ~ 60 detectores j usados em CG
DCT TCD
Detector por Condutividade Trmica
DIC FID
Detector por Ionizao em Chama
DCE ECD
Detector por Captura de Eletrons
EM MS
Detector Espectromtrico de Massas
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
QUANTIDADE MNIMA DETECTVEL Massa
de um analito que gera um pico com altura igual a trs vezes o nvel de rudo
SINAL (S)
S =3 N
RUDO (N)
RUDO Qualquer componente do sinal gerado pelo detector que no se origina da amostra
Fontes de Rudo
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
LIMITE DE DETEO Quantidade de analito que
gera um pico com S/N = 3 e wb = 1 unidade de tempo
Mesmo detector, nvel de rudo e massa de analito MAS diferentes larguras de base:
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
VELOCIDADE DE RESPOSTA Tempo decorrido
entre a entrada do analito na cela do detector e a gerao do sinal eltrico.
SINAL
63,2% FSD
Constante de Tempo, : tempo necessrio para o sinal chegar a 63,2 % FSD (full scale deflection = fundo de escala) aps a entrada de amostra
TEMPO A constante de tempo do sistema (detector + dispositivos de registro de sinal) igual ou menor a 10% da largura a meia altura (w0.5 ) do pico mais estreito do cromatograma
>> w0.5
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
SENSIBILIDADE Relao entre o incremento de
rea do pico e o incremento de massa do analito
REA
Sensibilidade
DETECTORES
Parmetros Bsicos de Desempenho
FAIXA LINEAR DINMICA Intervalo de massas
dentro do qual a resposta do detector linear
REA
MASSA O fim da zona de linearidade pode ser detectado quando a razo (rea / Massa) diverge em mais de 5 % da inclinao da reta na regio linear:
REA / MASSA
1,05 S
0,95 S
MASSA
DETECTORES
Classificao
UNIVERSAIS:
Geram sinal para qualquer substncia eluida.
SELETIVOS:
Detectam apenas substncias com determinada propriedade fsico-qumica.
ESPECFICOS:
Detectam substncias que possuam determinado elemento ou grupo funcional em suas estruturas
DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
PRINCPIO Variao na condutividade trmica do
gs quando da eluio de um analito.
A taxa de transferncia de calor entre um corpo quente e um corpo frio depende da condutividade trmica do gs no espao que separa os corpos
Se a condutividade trmica do gs diminui, a quantidade de calor transferido tambm diminui - o corpo quente se aquece.
i
5
3 4
5 Alimentao de corrente
eltrica para aquecimento do filamento
DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
Configurao tradicional do DCT: bloco metlico com quatro celas interligadas em par - por duas passa o efluente da coluna e por duas, gs de arraste puro:
CELAS DA AMOSTRA CELAS DA AMOSTRA CELAS DE REFERNCIA
CORTE SUPERIOR
CORTE LATERAL
CELAS DE REFERNCIA
Quando da eluio de um composto com condutividade trmica menor que a do gs de arraste puro:
Filamentos nas celas de amostra se aquecem Resistncia eltrica dos filamentos nas celas de amostra aumenta
DETECTORES
Detector por Condutividade Trmica
Os filamentos do DCT so montados numa ponte de Wheatstone que transforma a diferena de resistncia quando da eluio de amostra numa diferena de voltagem:
V Fonte de CC / Bateria (18 V a 36 V, tpico) F Ajuste da corrente nos filamentos I Medida da corrente nos filamentos (100 mA - 200 mA, tpico) B1 B2 Balanceamento / ajuste de zero R1 R2 Filamentos das celas de referncia A1 A2 Filamentos das celas de amostra
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
SELETIVIDADE Observa-se sinal para qualquer substncia eluida diferente do gs de arraste = UNIVERSAL
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE Dependendo da configurao particular e do analito: QMD = 0,4 ng a 1 ng com linearidade de 104 (ng - dezenas de g)
VAZO DE GS DE ARRASTE O sinal proporcional concentrao do analito no gs de arraste que passa pela cela de amostra.
Fc = 0
VAZO DE GS DE ARRASTE CONSTANTE DURANTE A ELUIO VARIAO DA VAZO DE GS DE ARRASTE DURANTE A ELUIO
Com DCT, a rea dos picos cromatogrficos MUITO dependente da vazo do gs de arraste !!!
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
NATUREZA DO GS DE ARRASTE Quanto maior a
diferena entre a condutividade trmica do gs de arraste puro, A, e do analito, X, maior a resposta.
Como:
(M = massa molecular)
1
1 2
Usando He ou H2 como gs de arraste, maximizado: MAIOR RESPOSTA Com outros gases, eventualmente X > A: PICOS NEGATIVOS
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
FATORES DE RESPOSTA Quanto menor a condutividade
trmica do analito, maior o sinal.
X
CHCl3 Mistura de quantidades equimolares de:
Etano = 17,5 Clorofrmio = 6,0 Etanol = 12,7
C2H5OH C2H6
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCT
TEMPERATURAS DE OPERAO Quanto maior a
diferena entre a temperatura dos filamentos e do bloco metlico maior a resposta.
Temperatura do filamento, TF: entre 300oC e 350oC. funo da corrente de alimentao dos filamentos, i.
TF
Limitaes:
Sinal
- Correntes excessivas podem fundir o filamento ( tpicos do filamento = 20 m) - Diminuio do tempo de vida til dos filamentos (oxidao por traos de O2 no gs de arraste)
TB
Limitao:
Sinal
- Temperaturas excessivamente baixas podem provocar a condensao de analitos nas celas (erros analticos, danos aos filamentos)
DETECTORES
DCT: Aplicaes
1 Separao e quantificao de compostos que no geram
sinal em outros detectores (gases nobres, gases fixos)
DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
PRINCPIO Formao de ons quando um composto
queimado em uma chama de hidrognio e oxignio
O efluente da coluna misturado com H2 e O2 e queimado. Como numa chama de H2 + O2 possui poucos ons, ela tem baixa condutividade eltrica.
Quando um composto orgnico elui, ele tambm queimado. Como na sua queima so formados ons, a chama passa a conduzir corrente eltrica
DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
COLETOR
AR
FLAME TIP
H2
BLOCO
COLUNA
O ar e o H2 difundem para o interior do coletor, onde se misturam ao efluente da coluna e queimam: Uma diferena de potencial eltrico aplicada entre o flame tip e o coletor - quando se formam ons na chama, flue uma corrente eltrica:
DETECTORES
Detector por Ionizao em Chama
Qumica da Chama de Hidrognio:
Incandescncia
Reao Quebra
Regio de quebra Mistura dos gases, pr-aquecimento, incio da quebra das molculas de H2, O2 e dos analitos. Zona de reao Reaes exotrmicas com produo e/ou consumo de radicais H, O, OH, HO2 (provenientes do H2), CH e C2 (proveniente do analito) e ons CHO+ (analito). Zona de incandescncia Emisso de luz por decaimento de espcies excitadas: OH (luz UV), CH e C2 (visvel).
Queima de H2
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
SELETIVIDADE Seletivo para substncias que contm ligaes C-H em sua estrutura qumica.
(como praticamente todas as substncias analizadas por CG so orgnicas, na prtica o DIC UNIVERSAL)
DIC
CH4 CO2 O2
DCT
N2
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE QMD tpicas = 10 pg a 100 pg com linearidade entre 107 e 108 (pg a mg)
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
VAZES DE GASES Alm do gs de arraste, as vazes de alimentao de ar (comburente) e hidrognio (combustvel) devem ser otimizadas.
Grficos Sinal x Vazo de Gases tpicos:
SINAL
AR
H2
150
300
450
600
15
30
45
60
VARIAES NAS VAZES DE AR E H2 AFETAM APENAS MARGINALMENTE O SINAL = MAIORES REPRODUTIBILIDADE E REPETIBILIDADE
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
TEMPERATURA DE OPERAO O efeito da temperatura sobre o sinal do DIC negligencivel. TRATAMENTO DE SINAL Por causa da baixa magnitude da corrente eltrica gerada (pA a nA) ela deve ser amplificada para poder ser registrada.
2 3 Diagrama eletrnico simplificado de um DIC 1 4
Amplificador Eletromtrico
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DIC
FATORES DE RESPOSTA O fator de resposta de um
determinado composto aproximadamente proporcional ao nmero tomos de carbono. Presena de heteroelementos diminui o fator de resposta.
Mistura com quantidades equimolares de: C2H6 NEC = 2,00 C2H5OH NEC = 1,40 CH3CHO NEC = 1,00
DETECTORES
Detector de Nitrognio - Fsforo
Modificao do DIC altamente seletiva para compostos orgnicos nitrogenados e fosforados
Prola de sal de metal alcalino: RbCl (normal), KCl
(100 pg cada)
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
PRINCPIO Supresso de um fluxo de eletrons
lentos (termais) causada pela sua absoro por espcies eletroflicas Um fluxo contnuo de eletrons lentos estabelecido entre um ando (fonte radioativa -emissora) e um catodo.
Na passagem de uma substncia eletroflica alguns eletrons so absorvidos, resultando uma supresso de corrente eltrica.
DETECTORES
Detector por Captura de Eltrons
1
1 Ando (fonte radioativa - emissora) 2 Sada de gases 4 Cavidade 3 Catodo 5 Coluna cromatogrfica
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
Mecanismo de Captura de Eletrons
Gerao de eltrons lentos pela interao entre a radiao , molculas do gs de arraste G e molculas de bloqueador (quencher) Q + G G + + e + e* energia - + G G* + Q G + e - + Q energia
O decrscimo na corrente eltrica fluindo pela cela de deteco proporcional concentrao a da espcie absorvente no gs de arraste
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
FONTE RADIOATIVA O ando deve estar dopado com um istopo radioativo - ou - emissor
63Ni
Sob a forma de Ta3H3 Maior sensibilidade Tdet deve ser < 225oC
63Ni
- Maior durabilidade (t1/2 = 100 a x 12 a para 3H) - Maior estabilidade trmica - Menor risco de uso (radioatividade)
Raramente usados:
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
POLARIZAO DOS ELETRODOS Vrios modos de polarizao possveis
VOLTAGEM CONSTANTE Pouco usada modernamente - picos cromatogrficos podem ser deformados.
TEMPERATURA DO DETECTOR Dependncia do sinal com temperatura de operao bastante significativa Variao de 3oC na temperatura
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
GS DE ARRASTE Funcionamento do DCE muito dependente da natureza do gs de arraste MAIS USADOS:
N2 Ar + 5% CH4
O gs deve ser o mais puro possvel !!! (traos de H2O e O2 comprometem o sinal do DCE)
Sinal
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do DCE
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE QMD = 0,01 pg a 1 pg (organoclorados), linearidade ~ 104 (pg a ng)
PESTICIDAS 1 tetracloro-m-xileno 2 - BHC 3 Lindano 4 Heptachlor 5 Endosulfan 6 Dieldrin 7 Endrin 8 DDD 9 DDT 10 Metoxychlor 10 decaclorobifenila
Espectometria de massas Utiliza o movimento de ons em campos eltricos e magnticos para classificlos de acordo com sua relao massa carga. Desta maneira, a espectrometria de massas uma tcnica analtica por meio da qual as substncias qumicas se identificam, separando os ons gasosos em campos eltricos e magnticos. Os instrumentos usados nestes estudos chamam-se espectrmetros de massas O dispositivo que realiza esta operao e utiliza meios eltricos para detectar os ons classificados conhecido como espectrmetro de massas.
A MS oferece informao qualitativa e quantitativa sobre a composio atmica e molecular de materiais inorgnicos e orgnicos. Espectometria de massas - Instrumental Os espectrmetros de massas constam de quatro partes bsicas:
O espectrmetro requer um percurso livre para os ons e, por tanto, funciona sob vcuo ou em condies de vcuo.
(em geral da ordem 10-5 a 10-6 torr) As bombas de vcuo podem ser de duas naturesas:
Modos de ionizao
Ionizao qumica Na ionizao qumica, uma pequena quantidade de tomos gasosos ionizada por coliso com tomos produzidos pelo bombardeamento do gs reativo. Alguns dos gases reativos mais comuns so metano, oxignio, amnia e hidrognio.
Modos de ionizao Ionizao por impacto de eltrons O impacto eletrnico o mtodo de ionizao mais usado. Utiliza-se um fecho gerado pela lmpada de tungstnio ou de filamento rnio para ionizar os tomos de fase de gs ou molculas. Formam-se ons durante a coliso do feixe com as molculas da amostra. M + e- M+. + 2eAqui M representa a molcula do analito e M+ seu on molecular. Os ons positivos so acelerados por um campo eltrico e transportados ao Analisador.
Quase todos os espectometros possuem lentes eltricas que aceleram e focalizam os ons gerados na fonte para o analisador de massas.
Analisadores de Massas
O objetivo do analisador de massas separar os ons que so produzidos na fonte de acordo com as diferentes relaes de massa/carga.
Existem diversos modelos de analisadores que utilizam de diversas estratgias para sua separao.
Analisadores de Massas Quadrupolo Um campo quadrupolo formado por quatro rolos paralelos aos quais aplica-se uma corrente contnua que afeta o percurso dos ons viajando pelo trajeto centralizado entre os 4 rolos. Para as voltagens dadas, somente os ons de uma relao massa/carga determinada podem passar atravs do filtro do quadrupolo, enquanto os outros so varridos como molculas descarregadas. Ao variar os sinais eltricos a um quadrupolo, pode-se variar a faixa da relao massa/carga transmitida. Isto possibilita a varredura espectral.
Vantagens: Bibliotecas comerciais (70eV); Baixo custo; Vrias metodologias padronizadas com estes equipamentos; Muitos equipamentos difundidos; Baixa sensibilidade no modo SCAN (Varredura)
Os ons so gerados dentro de uma armadilha onde so retidos. Por variao de radiofreqncia estes so liberados para o detector.
Vantagens: Alta sensibilidade, pois os ons no so jogados fora. Simula quadrupolo no modo SCAN podendo seus espectros de massas serem pesquisados em bibliotecas comerciais obtidas em MS quadrupolo. Possibilidade de realizao de MS/MS
Sistema de recolhimento de ons O sistema de recolhimento de ons mede a abundncia relativa de fragmentos de cada massa. Eletromultiplicadoras
Fotomultiplicadoras
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Interface cromatgrafo - espectrmetro:
CG
EM
Separador Molecular O gs de arraste leve (He) difunde mais rapidamente que o analito e tende a ser drenado para o vcuo.
Coluna Capilar
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Sistema de Controle e Aquisio de Dados:
1 2 3
Gerencia e monitora o funcionamento dos mdulos de CG e EM. Coleta e arquiva espectros de massa em intervalos regulares de tempo e constri o cromatograma. Aps a corrida, compara espectros coletados com bases de dados para identificao dos eluatos.
ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: Gerao do Cromatograma
Espectros de massas completos coletados e arquivados em intervalos regulares de tempo Gerao do cromatograma a partir dos espectros: CROMATOGRAMA DE ONS TOTAIS (TIC = Total Ion Chromatogram)
Para cada espectro o nmero total de ons detectados na faixa de massas varrida somado e plotado em funo do tempo, gerando o cromatograma.
TIC
Universal Similar a DIC
SIM
Seletivo Maior Sensibilidade
ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: TIC x SIM
Aroma de polpa industrializada de caj aps extrao por SPME
TIC
Aparecem os picos correspondentes a todas substncias eludas
ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
1 Seleo manual ou automtica do espectro de
massa correspondente a um eluato.
CONTAGENS
MASSA / CARGA
CONTAGENS
TEMPO
2 Interpretao manual do espectro e / ou comparao automtica com biblioteca de espectros padro do equipamento.
ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
Busca automtica em bibliotecas de espectros: comparao estatstica ( Probability Based Matching )
ESPECTRO DESCONHECIDO
PBM
BIBLIOTECA DE ESPECTROS
# 1
2 3 4 5 6
LIMITAES:
Limitada pelo tamanho da base de dados (NIST = 66.000 espectros) Diferenas entre espectros gerados por diversos EM