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SCIENTIA PLENA

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VOL. 7, NUM. 5

2011

Substncias hmicas da matria orgnica do solo: uma reviso de tcnicas analticas e estudos no nordeste brasileiro
D. C. Primo1, R. S. C. Menezes1, T. O. da Silva2
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Departamento de Energia Nuclear, Universidade Federal de Pernambuco, 50740-540, Recife-PE Departamento de Engenharia Agronmica, Universidade Federal de Sergipe,, 49100-000, So Cristvo-SE. darioprimo@gmail.com, rmenezes@ufpe.br, tacios@ufs.br

(Recebido em 30 de janeiro de 2011; aceito em 12 de maio de 2011) O presente estudo objetiva apresentar uma sntese do atual conhecimento sobre os conceitos e fundamentos das substncias hmicas, mtodos de extrao, fracionamento, purificao e caracterizao, atravs do uso de tcnicas espectroscpicas, alm de traar um panorama dos avanos dos estudos cientficos relacionados ao tema na regio Nordeste do Brasil. A matria orgnica do solo (MOS) tem uma srie de funes no meio ambiente, que incluem a fertilidade e a reciclagem de nutrientes e de carbono. No entanto, devido sua natureza extremamente complexa, sua caracterizao sempre foi um desafio na qumica do solo. Dada comprovao da MOS em aumentar a capacidade produtiva dos solos, em particular em solos tropicais, pesquisas visando o melhor entendimento de sua dinmica no solo tem sido incentivadas. H crescente interesse no melhor entendimento de suas fraes estveis, denominadas substncias hmicas (SHs), constitudas por cidos flvicos, cidos hmicos e humina. O estudo das SHs no meio ambiente desenvolveu-se bastante nas ltimas trs dcadas, graas a novas metodologias e equipamentos, porm sua origem e mtodos adequados para mensurar o grau de humificao ainda so tema de discusso. As vrias tcnicas utilizadas atualmente nem sempre so acessveis por serem complexas e requererem equipamentos de alto custo, o que pode ter limitado o desenvolvimento das pesquisas em algumas regies do Brasil, como a Nordeste.
Palavras - chave: Mtodos de extrao, Tcnicas espectroscpicas, Fracionamento da matria orgnica, Regio Nordeste

This study aims to present a synthesis of current knowledge about the concepts and fundamentals of humic substances, methods of extraction, fractionation, purification and characterization, by using spectroscopic techniques, and provides an overview of the developments of scientific studies related to the subject in Northeastern Brazil. The soil organic matter (SOM) has a number of functions in the environment, including fertility, nutrient cycling and carbon. However, by their very nature extremely complex, its characterization has always been a challenge in soil chemistry. Given the evidence of SOM to increase the productive capacity of soils, particularly in tropical soils, research aimed at better understanding the dynamics of the soil has been encouraged. There is growing interest in better understanding of their stable fractions, called humic substances (HSs), consisting of fulvic acid, humic acids and humin. The study of SHs in the environment has grown significantly in the last three decades, thanks the new methods and equipment, but their origin and methods for measuring the degree of humification are still widely discussed. The various techniques used today not always accessible because they are complex and require costly equipment, which may have limited the development of research in some areas of Brazil, like the Northeast.
Keywords: Extraction methods, spectroscopic techniques, Fractionation of organic matter, Northeast Region

1. INTRODUO A matria orgnica do solo (MOS) compreende componentes vivos e no-vivos. Os vivos so as razes de plantas e os organismos do solo, constituindo aproximadamente 4% do total. Os componentes no-vivos representam matria macrorgnica, constituda de resduos de plantas em decomposio, as substncias humificadas e as no humificadas. Sabe-se que a MOS constitui o maior reservatrio de carbono da superfcie terrestre e que dinmico, podendo variar em decorrncia de prticas de manejo. Na maioria dos solos, o teor de MOS pode variar de 5 a 50 g.kg-1 nos horizontes minerais [1,2].

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A importncia da adio e conservao da MOS nos solos bastante intemperizados como, por exemplo, no semirido do Nordeste brasileiro, advm do seu baixo teor, associada normalmente ao baixo pH do solo devido presena de xidos de alumnio. Por outro lado, nos sistemas agrcolas onde no h entrada de nutrientes de fontes externas, a matria orgnica do solo (MOS) a principal fonte de nutrientes, como o caso da agricultura de subsistncia da regio semirida do nordeste do Brasil [3]. O uso da matria orgnica em solos com baixo pH e baixa fertilidade natural, permite dentre outros fatores, o aumento da CTC, rpida correo da acidez, tendendo a estabilizar o pH prximo neutralidade e o fornecimento de nutrientes s plantas [4], tornando-se fator de grande relevncia para a melhoria das propriedades fsicas, qumicas e biolgicas dos solos dessa regio. A comprovao da MOS em aumentar a capacidade produtiva dos solos, em particular, em solos tropicais, tem incentivado o desenvolvimento de pesquisas visando melhor entendimento da sua dinmica, especificamente de suas fraes estveis, denominadas de substncias hmicas (SHs). As SHs podem ser entendidas como produtos das transformaes qumicas e biolgicas dos resduos vegetais e animais, assim como da atividade dos micro-organismos do solo. Contudo, os conhecimentos sobre suas origens e processos de humificao, em diferentes sistemas de cultivo e ecossistemas, ainda so hipotticos, principalmente sobre a estrutura fsico-qumica e o potencial de reteno de nutrientes. As SHs, constituintes de aproximadamente 70 a 80% da MOS na maioria dos solos so compostas pelas fraes cidos flvicos (AF), cidos hmicos (AH) e humina (HUM), determinadas com base na solubilidade em meio cido ou alcalino [1, 2]. O estudo das SHs no meio ambiente desenvolveu-se bastante nas ltimas trs dcadas, graas ao desenvolvimento de novas metodologias e equipamentos, porm as rotas de suas origens e os mtodos para mensurar o grau de humificao so ainda tema de discusso, pois no h um modelo definido para a estrutura qumica das fraes humificadas da MOS. Os estudos das SHs vo desde os mtodos de extrao, fracionamento e purificao at a caracterizao por mtodos espectroscpicos. Os mtodos de extrao mais utilizados so Kononova, Dabin, Danneberg & Ullah, Schnitzer, Swift, Benites e os de purificao so os com cido fluordrico (HF), resina DAX-8, dilise e liofilizao. A caracterizao feita por tcnicas espectroscpicas, sendo as espectroscopias na regio do ultravioleta-visvel (UV), na regio do infravermelho (IV), fluorescncia, ressonncia magntica nuclear (RMN) e ressonncia paramagntica eletrnica (RPE) as mais utilizadas ultimamente. Vrias das tcnicas utilizadas atualmente nos estudos das fraes estveis da matria orgnica so de pouca acessibilidade, por serem complexas e os equipamentos necessrios so de alto custo de aquisio e manuteno, o que pode estar limitando o desenvolvimento de pesquisas dessa natureza em algumas regies do Brasil. As reunies bianuais realizadas pela Sociedade Internacional das Substncias Hmicas (IHSS) vem oferecendo grande contribuio na oferta e organizao de informaes sobre as fraes hmicas da MOS no solo e nas guas, sua estrutura e transformao no meio ambiente. Assim, o presente estudo apresenta uma sntese do atual conhecimento sobre os conceitos e fundamentos das SHs, mtodos de extrao, fracionamento, purificao e caracterizao, atravs do uso de tcnicas espectroscpicas, alm de traar um panorama dos avanos dos estudos cientficos relacionados ao tema na regio Nordeste do Brasil. O conhecimento gerado pode servir para a tomada de deciso relacionada ao uso e manejo dos solos dessa regio.

2. DESENVOLVIMENTO 2. 1 CONCEITOS E ESTRUTURA DAS SHs A matria orgnica do solo (MOS) considerada como todo material no solo que contm carbono orgnico, incluindo os micro-organismos vivos e mortos, resduos de plantas e animais em estgios variados de decomposio, a biomassa microbiana, as razes e a frao mais estvel, denominada hmus [5]. A MOS desempenha papel fundamental nas funes do solo, sendo, por

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isso, considerada a principal caracterstica indicadora da sua qualidade, por apresentar forte interrelao com quase todas as caractersticas fsicas, qumicas e biolgicas do solo, exercendo forte influncia na sua capacidade produtiva e, de modo muito intenso, na nutrio das plantas [2]. A MOS tem recebido ateno considerada nas pesquisas, particularmente na ltima dcada. constituda por C, H, O, N, S e P, com os teores 58%, 6%, 33% e os trs ltimos 3% [4]. Estudos mais recentes tm mostrado que a MOS na frao pesada associada ao material sedimentado (areia, silte e argila) geralmente compreende aproximadamente 80% do carbono orgnico total (COT) e nela esto presentes as fraes estveis denominadas de substancias hmicas (SHs). Segundo [1], as SHs podem ser definidas como uma srie de polmeros amorfos de colorao amarela, marrom a preta, de peso molecular relativamente alto e formado por reaes de snteses secundrias, biticas e abiticas, usualmente classificados em relao a sua solubilidade em lcali e cidos. So divididas em trs fraes com distintas caractersticas fsico-quimicas: cidos flvicos (AF), cidos hmicos (AH) e humina (HUM). As SHs contribuem com cerca de 85 a 90% do COT e so o principal componente da MOS, consistindo em grande reserva orgnica do solo [4]. A parte humificada da MOS do solo formado por molculas recalcitrantes de origem vegetal, animal e microbiana e representa um estado indefinido da MOS. Mesmo com os recursos da qumica moderna, a estrutura molecular das SHs ainda assunto de muitos estudos e controvrsias. So formadas por mistura heterognea e bastante complexa de molculas orgnicas, polimerizadas e com massa molecular bastante variada [2]. 2.2. cidos Flvicos Os cidos flvicos so solveis em meio alcalino e em cido diludo. So constitudos, sobretudo, por polissacardeos, aminocidos e compostos fenlicos, que so mais reativos do que as outras duas fraes pela maior quantidade de grupos carboxlicos e fenlicos que contm. Estudos da ao direta das SHs sobre o metabolismo e o crescimento das plantas tm sido centrados principalmente, sobre os AF, a frao humificada considerada de menor massa molecular e maior solubilidade e mobilidade no solo [1, 6]. 2.3. cidos Hmicos Os cidos hmicos so solveis em meio alcalino e insolveis em meio cido diludo. Tm sido definidos como substncias de colorao escura, compostas por macromolculas de massa molecular relativamente elevada, formadas por meio de reaes de sntese secundrias a partir de resduos orgnicos de plantas, animais e micro-organismos [1]. Entretanto, alguns estudos tm sugerido novas concepes para a estrutura complexas dessas fraes. Os AH apresentam maior teor de C, menor de O e teor similar de H que os AF [7]. Isso pode ser comprovado com os estudos realizados por [8] em amostras de um Argissolo Amarelo. A massa molecular relativa dos AH maior do que a dos AF, tendendo a ter mais aromticos e menos carboxlicos e grupos C-O alquil do que os AF [7] possivelmente por possurem maior contedo de estruturas tipo polissacardeos. Entre as SHs, os AF e AH so os mais estudados. As composies mdias de unidades bsicas de AF e AH, em termos de frmulas qumicas, so respectivamente C135 H182 O95 N5 S2 e C187 H186 O89 N9 S2 [9]. Os AH e AF so bastantes reativos e essa elevada reatividade deve-se principalmente, presena de grupos funcionais que contem oxignio, tais como carboxilas e hidroxilas fenlicas que so responsveis pela sua acidez. A acidez dos AH menor que a AF, o que est relacionado com seus menores teores de carboxilas [8]. 2.4. Humina A humina insolvel em meio alcalino e meio cido e pode ter composio variada. Possui reduzida capacidade de reao. A sua no insensibilidade em meio aquoso pode ser devida simultaneame elevada hidrofobicidade e forte interao com os componentes inorgnicos e

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tambm por conter compostos lipdicos, estruturas de carboidratos e aromticos em diferentes propores [10]. A HUM apresenta baixa acidez em comparao aos AF e AH, o que, ao lado da forte associao com os minerais, acarreta insolubilidade em meio aquoso alcalino [1]. A insolubilidade da HUM pode ser proveniente da sua firme adsoro ou ligao a constituintes inorgnicos do solo. 3. FORMAO DAS SHs Os estudos sobre a formao e estrutura das SHs no so recentes. Ao final do sculo XIX, j se considerava que as SHs possuiam natureza principalmente coloidal e com propriedades fracamente cidas. Havia tambm informaes a respeito de sua interao com outros componentes do solo e a noo de que os AH seriam essencialmente lignina modificada. No incio da dcada de 30 do sculo XX, sabia-se que os AH eram os constituintes mais caractersticos das SH. Inferia-se que havia grupos carboxlicos e os AH eram formados principalmente por compostos nitrogenados (protenas) e anis aromticos derivados da lignina [1]. A via de insolubilizao refere-se humificao dos compostos fenlicos solveis, a partir da sua oxidao a quinona e polimerizao, formando inicialmente dmeros e trmeros que compem a maior parte da policondensao dos ncleos aromticos. A partir da policondensao dos ncleos aromticos destes compostos (dmeros e trimeros) so formados os cidos flvicos, os quais se condensam, formando os cidos hmicos castanhos que, por sua vez, formam os cidos hmicos cinzentos [11]. Por apresentarem alta complexidade qumica e forte interao com a frao coloidal inorgnica do solo, essas substncias decompem-se lentamente e acumulam-se nos solos. As SHs so formadas a partir do processo denominado humificao. Dentre as vrias possibilidades, encontra-se desde a clssica teria que considera que so formadas a partir da lignina modificada at a teoria mais aceita na atualidade, a chamada de rota dos polifenis. As rotas que envolvem a sntese das SHs a partir da condensao de polifenis e compostos aminados so as mais aceitas atualmente [6]. A lignina um polmero disperso numa faixa de massa molecular que varia de menos de 1000 at vrios milhes de Daltons [12] e a sua resistncia degradao biolgica no solo tem sido atribuda a sua estrutura macromolecular. As ligninas so formadas a partir de trs precursores bsicos, que so os lcoois p-cumarlico, coniferlico e sinaplico. Algumas ligninas consistem de polmeros fenilpropanides da parede celular, altamente condensados e muito resistentes degradao. Eles so compostos de unidades p-hidroxifenila, guaiacila e siringila [13]. Muitos pesquisadores tm tentado desenvolver modelos qumicos para representar a estruturas mdias dessas substncias, como as apresentadas para AH por [14] e por [15]. A grande variao no grau de polimerizao e no nmero de cadeias laterais e radicais que podem ser encontradas nas SHs faz com que no existam similaridade entre duas molculas hmicas. Conforme argumento apresentado por [1] as substancias hmicas so quimicamente muito parecidas, mas as fraes podem ser diferenciadas umas das outras pela cor, massa molecular, presena de grupos funcionais, grau de polimerizao e teores de C, O, H, N e S. Estudos com microscopia de ressonncia magntica nuclear tm demonstrado que as SHs resultam da agregao de vrias classes de compostos orgnicos como aucares, aminocidos, steres e teres alifticos e aromticos [16]. Com o uso da tcnica de dosy (difision ordered spectroscopy), [17] afirmou que possvel identificar vrias classes de compostos nos agregados do solo e, demonstrou que as SHs so, na realidade, associaes ou agregaes de molculas de menores pesos moleculares que podem ser rompidas pela ao de cido.

4. IMPORTNCIA DAS SHs PARA O SOLO E AS PLANTAS As SHs exercem influncia amplamente reconhecida nas propriedades qumicas, fsicas e biolgicas do solo e, conseqentemente, no crescimento das plantas [18]. No encontrando

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estudo na regio Nordeste, citou-se um estudo recente desenvolvido na regio Sudeste, objetivando estudar os efeitos de concentraes de C-cido hmico na nutrio e no crescimento de mudas de Eucalipto em soluo nutritiva, em que [19] afirmaram que a altura e o dimetro de caule reduziram de modo linear com a aplicao de concentraes de C-cido hmico. A utilizao do material hmico, em baixas concentraes de C-cido hmico (0,07-4,3 mg.L-1), propiciou a mxima produo de matria seca de raiz, caule, folha e total. Adicionalmente, as SHs melhoram a estrutura do solo, aumentam a produtividade e a qualidade dos cultivos, disponibilizam fsforo adsorvido na frao argila, aumentam a superfcie especfica, a CTC e o efeito tampo, dando maior estabilidade ao solo e atuam como reservatrio de N, P, S e micronutrientes. Neste contexto, as SHs so, portanto, importantes reguladores funcionais dos processos qumicos e biolgicos do solo e das plantas, representando, por isso, um forte fator para a sustentabilidade dos ecossistemas terrestres [2]. Segundo [20] as SHs tm poder redutor suficiente para transformar Fe3+ em Fe2+, forma absorvida pelas plantas. Os AF desempenham importante papel na complexao de metais polivalentes alm de alterarem as reaes de soro e disponibilidade de P. Combina-se com os xidos de Fe e de Al, argilas e outros compostos orgnicos. Possuem propriedades redutoras e formam complexos estveis com Fe, Cu, Ca e Mg [20]. As SHs podem se ligar frao mineral do solo atravs de ctions polivalentes [21]. Os grupos cidos reativos distribuem-se por toda a macromolcula e, dessa forma, a ligao com ctions polivalentes pode ocorrer em diferentes partculas de argila simultaneamente. Como resultado, aumenta a agregao das partculas do solo. Essa adsoro no somente une as partculas de argila, mas tambm orienta a poro hidrofbica das substancias hmicas para o lado externo do agregado reduzindo a infiltrao de gua e aumentando a estabilidade do solo [22]. Estudos realizados por [23] em Cambissolos derivados de calcrio na regio de Irec-Ba constataram diferenas pedogenticas em funo do grau de polimerizao das SHs. Em certos perfis houve predomnio de compostos pouco polimerizados (AF) e maiores quantidades de compostos bem polimerizados (HUM). Em ambientes diferentes a do Nordeste brasileiro, como de florestas subtropicais, [24] observaram que a substituio de mata nativa por cultivo de pinheiro (Araucaria cunninghamii) com 51 anos de idade resultou na diminuio do estoque de C da frao AF, enquanto o estoque de C da frao AH ficou inalterado. Isso mostrou que a frao AF mais sensvel mudana de uso do solo que a AH. Os AH ajudam na germinao das sementes, aumentando a reteno de calor pelo solo, graas colorao, tipicamente escura, que possuem. Esses cidos exercem efeitos fisiolgicos na planta na permeabilidade das membranas das clulas, absoro de nutrientes e atividade enzimtica [25]. A ao detergente e o conseqente aumento da fluidez das membranas defendida at hoje como um dos principais efeitos das SHs no metabolismo celular dos vegetais [26].
5. MTODOS ANALTICOS DE EXTRAO DAS SHs

Muitos trabalhos so realizados utilizando extratores brandos como pirofosfato de sdio, agentes complexantes, cido frmico, misturas cidas e solventes orgnicos. Mesmo havendo risco de alteraes estruturais, h pesquisadores que preferem extrao mais completa das SHs utilizando lcalis. A International Humic Substances Society (IHSS) mtodo [27] recomenda um procedimento baseado em 4 horas de extrao com soluo de NaOH 0,1 mol.L-1 temperatura ambiente, na razo solo/extrator 1:10 (m/v). Entretanto, vrios fatores influenciam no procedimento de extrao e muitas questes ainda esto por serem respondidas. Atualmente so conhecidos vrios mtodos de extrao e fracionamento das SHs: Kononova [28], Dabin [29], Danneberg e Ullah [30], Schnitzer [31], Swift [27], Benites [32], purificao com cido fluordrico (HF), resina DAX-8, dilise e liofilizao, Swift [27]. Esses mtodos diferem quanto ao uso de substncias extratoras, relao massa da amostra/extrator, tempo de agitao, centrifugao e formas de purificao. O mtodo Dabin utiliza pirofosfato de sdio (Na4P2O7 0,1 mol.L-1), relao solo/extrator de 1:20. O mtodo Danneberg e Ullah utiliza gua deionizada e resina quelatizante saturada com

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sdio numa relao solo/resina/gua de 1:2,5:5, agitao por 16 horas e centrifugao por 30 minutos a 15.000 rpm. O mtodo Kononova usa soluo de pirofosfato de sdio (Na4P2O7 0,1 mol.L-1), relao solo/soluo de 1:20, com agitao e centrifugao. O mtodo Schnitzer usa hidrxido de sdio (NaOH 0,1 mol.L-1), relao solo/soluo de 1:10 agitao horizontal a 250 rpm, por 24 horas, e centrifugao. O mtodo de Benites usa o hidrxido de sdio (NaOH 0,1 mol.L-1), relao solo/extrator de 1:10 agitao por 4 horas, centrifugao 15 minutos a 2,5 rpm e o mtodo de Swift usa cido clordrico (HCl 0,1 mol.L-1) e hidrxido de sdio (NaOH 0,1 mol.L-1), relao solo/extrator de 1:10, agitao por 1 hora e centrifugao de 9000 rpm por 10 minutos. Os mtodos de extrao, fracionamento e purificao so procedimentos antecedentes aos estudos de caracterizao das SHs por meio de tcnicas espectroscpicas. 6. CARACTERIZAO ESPECTROSCPICAS DAS SUBSTNCIAS HMICAS POR TCNICAS

As Substncias hmicas extradas do solo apresentam, normalmente, uma quantidade elevada de impurezas inorgnicas, podendo em alguns casos chegar at 50%, devendo ser, portanto, eliminadas antes dos estudos de caracterizao. Uma reduo considervel dessas impurezas inorgnicas obtida atravs de redissolues e reprecipitaes sucessivas, modificando-se o pH da suspenso. Particularmente, eficiente o tratamento do extrato com soluo diluda da mistura de cido clordrico e fluordrico [33]. O extrator ideal deve retirar completamente as substncias hmicas sem alterar suas caractersticas [1]. Nesse sentido, diversas tcnicas tm sido empregadas como as espectroscopias na regio do ultravioleta-visvel (UV), na regio do infravermelho (IV), a fluorescncia, a ressonncia magntica nuclear (RMN) e a ressonncia paramagntica eletrnica (RPE). 6.1. Espectroscopia na regio do ultravioleta-visvel A tcnica de UV construiu o caminho para as outras tcnicas espectroscpicas. Apesar de representar um salto histrico, hoje raramente a espectroscopia de UV-VIS usada como o principal mtodo na anlise estrutural. Isso porque espectros UV-VIS de substncias hmicas apresentam pouca definio, e a absoro decresce linearmente com o aumento do comprimento de ondas, fornecendo pouca informao estrutural. A espectroscopia de absoro de luz UV-Vis utilizada especialmente para medidas da razo E4/E6 (absorbncia a 465 nm/absorbncia a 665 nm) que tem sido associada tambm ao grau de humificao das SHs. Razo E4/E6 baixo significa constituintes aromticos mais humificados, alto - estruturas alifticas menos humificadas. Quanto menor E4/E6 maior grau de condensao da amostra [33]. Resultados contraditrios podem ser obtidos por essa tcnica e, apesar da simplicidade do procedimento experimental, os dados precisam ser utilizados com cautela, sendo recomendado, portanto, comparao com outros mtodos mais exatos [34]. Essa tcnica baseia-se nas transies eletrnicas, resultantes de absoro de luz por molculas. Durante o processo de irradiao, a molcula absorve energia e um dos eltrons excitado do orbital que ocupa no seu estado funcional para outro orbital de maior energia [10]. uma tcnica muito utilizada devido ao fcil manuseio, a rapidez e ao baixo custo operacional. Porm possui baixos limites de deteco e os espectros correspondem a um grfico de freqncia ou comprimento de ondas de absoro, relacionada com a intensidade de absoro medida em transmitncia ou absorbncia. Essa tcnica largamente utilizada em estudos com SHs de solo para avaliar o grau de humificao, principalmente de AF e de AH [35]. Entretanto, no pode ser utilizada para determinao direta de grupos funcionais quando da anlise de cidos hmicos [36]. Para investigao da MO, o maior interesse em espectroscopia de UV.vis reside em anlises qualitativas [37].

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6.2. Espectroscopia na regio do infravermelho Os princpios da espectroscopia de absoro na regio do infravermelho (IV) so os mesmos da espectroscopia na regio do ultravioleta-visvel, exceto que, na regio do IV a quantidade de energia suficiente para provocar somente movimentos vibracionais nas ligaes entre os tomos. Diferentemente das poucas bandas de absoro observadas na regio do ultravioleta visvel para substncias hmicas, o espectro de infravermelho fornece maior quantidade de bandas de absoro e mais bem definidas. Algumas dessas bandas no podem ser interpretadas com segurana. Isso o caso das substncias hmicas. A recomendao para o caso de material hmico o uso do modo comparativo, ou seja, sempre confrontar um espectro contra outro gerando mais informaes sobre processos ocorridos no material do que sobre determinao estrutural. A tcnica de alta energia, absorvida por molculas orgnicas e a energia convertida em rotao molecular. Esta absoro quantizada e assim os sinais de absoro so linhas discretas [33]. O espectro de infravermelho consiste na representao grfica da correlao entre a intensidade de absorbncia (A) ou transmitncia (T) e a energia da radiao de IV, expressa em nmero de ondas. A aplicao dessa tcnica na anlise de substncias hmicas relativamente comum e pode ser aplicada em amostras slidas, lquidas e gasosas. A restrio quanto aplicao mais abrangente em substncias hmicas est relacionada com a complexidade do espectro e com o baixo grau de pureza das amostras analisadas [33]. Os espectros na regio de IV de cidos hmicos, so relativamente simples, quando comparados aos de substncias puras, possuindo poucas bandas de absoro e geralmente alargadas [33]. 6.3. Espectroscopia de fluorescncia induzida a laser (FIL) A espectroscopia de fluorescncia permite diferenciar, rapidamente, as diversas fraes humificadas do solo, uma vez que os comprimentos mximos de emisso e de excitao se encontram-se em faixas maiores para os AH em relao aos AF. O fenmeno de fluorescncia altamente provvel em sistemas moleculares que contm tomos com pares solitrios de eltrons, tais como: C = O, aromticos, fenlicos, quinonas e, sistemas alifticos conjugados insaturados rgidos. Esses grupos funcionais esto presentes nas SHs. As propriedades de fluorescncia so dependentes de uma srie de parmetros tais como massa molar, concentrao, pH, fora inica, temperatura, potencial redox e origem das substncias hmicas. O estudo das relaes entre as propriedades de fluorescncia e estes parmetros pode, portanto, fornecer informaes indiretas sobre as caractersticas moleculares e a qumica das substncias hmicas [38]. Os espectros de fluorescncia podem ser medidos por: a) emisso, no qual um monocromador de excitao mantido com uma seleo de comprimento de onda e o de emisso varre uma banda espectral medindo todos os comprimentos de onda que a amostra emite, sendo o modo mais utilizado de espectroscopia de florescncia; b) espectro de excitao, no qual o monocromador de emisso mantido em comprimento de onda fixo no qual a amostra est emitindo e o monocromador de excitao varre uma banda especfica, fornecendo informaes estruturais do material analisado e localiza a melhor excitao da fluorescncia em observao; c) espectro de varredura sincronizada, no qual ambos os monocromadores varrem o espectro juntos com uma diferena fixa de comprimento de onda e obtem-se a multiplicao entre os espectros de emisso e excitao produzindo um espectro com mximos e picos mais bem definidos e caractersticos de cada fluorforo que compe o material que est sendo analisado e d) espectro tridimensional 3D, onde o grfico composto por um eixo relativo ao comprimento de onda de emisso, outro relativo de excitao e o terceiro de intensidade. Na formao do grfico, vrios espectros de emisso so registrados em diferentes comprimentos de onda de excitao e em seguida o espectro em 3D pode ser construdo [37].

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6.4. Espectroscopia de ressonncia magntica nuclear (RMN) A RMN a absoro ressonante de radiao radiofreqente (MHz) por ncleos com spin nuclear (I) diferente de zero e que estejam sujeitos a um campo magntico. Esta tcnica muito sensvel na caracterizao da estrutura da matria. Embora conceitualmente simples, a RMN pode ser muito complexa, especialmente em experimentos multidimensionais [37]. As anlises das SHs por RMN envolvem a identificao e quantificao dos diferentes grupos funcionais presentes na amostra. A tcnica da RMN tem sido utilizada no Brasil, principalmente na avaliao qualitativa da MO em diferentes solos e sistemas de manejo [37]. Essa caracterizao feita pela identificao dos grupos funcionais alifticos, aromticos e carboxlicos em suas respectivas bandas representadas [1]. O mtodo mais amplamente usado para a caracterizao de SH em geral o do 13C em estado slido, utilizando a polarizao cruzada e rotao no ngulo mgico (CP-MAS), para avaliao do processo de humificao da MOS no solo. O ncleo ideal para estes estudos o 13C, por se encontrar uniformemente distribudo. No entanto, devido sua baixa abundncia natural, as anlises so muito demoradas, requerendo s vezes, um perodo de mais de 24 horas [37]. Aps o primeiro experimento em que essa tcnica mostrou-se capaz de resolver questes qumicas da matria, tornou-se uma das principais tcnicas analticas para os qumicos, porm, devido flexibilidade dos seus mtodos experimentais, tem sido utilizada por outros ramos da cincia alm da qumica [39]. Um dos problemas em anlises por RMN de 13C, especialmente no caso de cidos hmicos isolados de solos de zonas tropicais com predomnio de minerais de argila o considervel teor de Fe, que causa um alargamento dos sinais devido ao seu paramagnetismo, alm de poder alterar o tempo de relaxao, que por sua vez, altera a intensidade relativa dos sinais. O problema ainda mais acentuado pelo fato de que o isolamento dos cidos hmicos envolve a acidificao da amostra de solo, o que causa a degradao dos minerais de Fe, aumentando ainda mais sua concentrao na soluo de cido hmico [33]. 6.5. Espectroscopia de ressonncia paramagntica eletrnica (RPE) A RPE o fenmeno de absoro de energia de eltrons desemparelhados de um tomo, molcula ou on quando estes se encontram sujeitos a aplicao de um campo magntico [40]. Essa tcnica permite analisar amostras slidas, lquidas e gasosas Tem alta sensibilidade, identifica e determina a concentrao do elemento paramagntico, informa o estado de valncia, localiza e identifica os radicais livres [41], para inferir sobre o grau de humificao da MO e dos constituintes hmicos [42]. Tem sido utilizada na quantificao do nmero de radicais livres semiquinona em cidos flvicos e hmicos, o que caracteriza uma avaliao qualitativa das fraes hmicas da MOS [43]. Tem sido utilizada em amostras de solo fracionadas fisicamente com o objetivo em reduzir o risco de alteraes que possam ocorrer durante o fracionamento qumico. Porm, esse procedimento apresenta restrio de aplicaes em amostras com altos teores de xidos de ferro. Isso porque o sinal de RPE do on de Fe3+, que paramagntico, se sobrepe aos sinais dos radicais livres semiquinona. A RPE concerne deteco de eltrons desemparelhados, sendo uma das poucas, entre os mtodos de laboratrio, que podem fornecer informaes estruturais sem artifcios ou condies experimentais restritivas sobre os complexos dos ons metlicos paramagnticos (Fe3+, Cu2+, Mn2+, V4+, Mo5+, Cr3+ e outros), com os cidos hmicos [43]. A maioria dos experimentos em EPR efetuada em uma freqncia ao redor de 9 GHz, que conhecida como banda-X de freqncia, ou de 35 GHz (banda-Q) [43]. O fenmeno de EPR baseado no efeito Zeeman eletrnico, ou seja, a capacidade de desdobrar o estado de energia degenerado no nvel de spin, o que obtido atravs da aplicao de campo magntico. Em seguida, com a aplicao de uma radiao eletromagntica possvel gerar transio dos eltrons com diferentes estados de spins de menor energia para o estado excitado. No retorno ao estado fundamental, essa energia devolvida ao meio e pode ser detectada. No caso do spin eletrnico (S), o estado de menor energia ms = -1/2 e o estado excitado ms = + 31].

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O sinal do radical livre detectado na MOS caracterizado por uma nica linha (com g ~ 2), a qual revela estar o radical livre provavelmente associado ao tomo com spin nuclear zero, como, por exemplo, o oxignio, istopo mais abundante, o que explicaria a ausncia de interaes hiperfinas, conforme assegura a multiplicao de linhas dada por 2I + 1 (I=0, ento se tem uma linha). Isso permite supor que o sinal de RPE da MOS seja atribudo a semiquinonas, as quais podem ser reduzidas pela reduo de quinona ou pela oxidao de fenis, e que estejam possivelmente conjugadas a anis aromticos [44]. Com a RPE possvel analisar-se no destrutivamente amostras slidas, lquidas e gasosas. uma tcnica extremamente sensvel e sob condies favorveis o limite de deteco para centros paramagnticos encontra-se no intervalo de 1011 a 1012 spins g-1, o que equivale parte por bilho [39]. 6.6 Comparao entre as tcnicas espectroscpicas descritas As tcnicas espectroscpicas so ferramentas importantes no entendimento de vrias e complexas reaes no solo. A espectroscopia ultravioleta-visvel uma tcnica de manuseio fcil, rpida e de baixo custo, porm com poucas bandas de absoro. Atravs dessa tcnica pode-se avaliar o grau de humificao dos cidos flvicos e hmicos da MOS [37]. Em anlises espectroscpicas por infravermelho os espectros fornecem maior quantidade de bandas e mais bem definidas. A interpretao exata de espectros nem sempre possvel devida a sua complexidade [37]. Contudo, a sobreposio de bandas, em muitas situaes, pode requerer o uso complementar de outros mtodos analticos. Podem ser realizadas anlises em amostras slidas liquidas e gasosa [45]. A utilidade e o potencial de uso da espectroscopia na regio de infravermelho bastante amplo, adiciona-se ainda como vantagem o custo dos equipamentos, que so bem menores comparados aos espectrmetros de massa e os de ressonncia magntica nuclear [33]. A espectroscopia de fluorescncia diferencia rapidamente fraes humificadas em amostras de solo, porque o comprimento de ondas dos espectros de emisso e excitao encontra-se em faixas maiores que os cidos flvicos e hmicos. As anlises podem ser feitas diretamente na amostra, sem necessidade do processo de extrao e purificao. A FIL uma das mais sensveis ferramentas disponveis para propostas analticas [37]. de fcil implementao e, geralmente, no-invasiva, o que bastante til para aplicaes ambientais. Alm das tradicionais medidas de fluorescncia com amostras em soluo, usando espectrmetros comerciais, mais recentemente foram viabilizadas anlises com amostras em solos, em pastilhas e resultados inditos foram obtidos sobre MO humificada [46]. Esse mtodo com aplicao em solos recente e tem demonstrado resultados interessantes na avaliao do grau de humificao da MOS em solos sob diversos tipos manejos. A ressonncia magntica nuclear uma tcnica complexa e bastante demorada. Atravs dessa tcnica, pode ser feita a identificao e a quantificao dos diferentes grupos funcionais da amostra em estudo. Tem sido utilizada em diferentes solos e diferentes sistemas de manejo. A RMN apesar de ser uma tcnica de caracterizao estrutural relativamente recente, constitui poderosa ferramenta para estudar a MOS, por fornecer informao estrutural das caractersticas conformacionais dos ncleos de C e sua dinmica com alguns fatores ambientais, assim como dos seus processos de transformaes e decomposio [47]. utilizada tambm para avaliar o efeito do sistema de manejo do solo sobre a qualidade da MOS [48]. A RMN tem substitudo espectroscopia no infravermelho. A tcnica de 13C CP-MAS NMR s pode ser aplicada a amostras slidas. Cientistas do solo e espectroscopistas tm diferentes expectativas em relao RMN [39]. Por ressonncia paramagntica eletrnica faz-se a avaliao qualitativa das fraes orgnicas, cidos flvicos e cidos hmicos, as mais comumente estudadas [37], sendo utilizada em estudo de amostras de solo aps fracionamento fsico. A tcnica de RPE uma das nicas capazes de
fornecer informaes estruturais, sem artefatos ou condies experimentais restritivas, sobre a complexao de ons metlicos (Fe3+, Cu2+, Mn2+, V5+, Cr3+ e outros) com substncias hmicas de solos, gua e sedimentos [49].

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7. ESTUDOS CIENTFICOS COM SHs NO NORDESTE DO BRASIL Os estudos cientficos com as substncias hmicas na regio Nordeste do Brasil so escassos, os poucos que existem muitas vezes no trata de substncias hmicas e sim de fraes lbeis da matria orgnica como o de [50]. Em outros momentos, iniciou-se os estudos das substncias hmicas, como o de [51] objetivando verificar o impacto do manejo convencional nas propriedades fsicas e no contedo e qualidade das SHs num Latossolo Vermelho-Amarelo do cerrado de So Desidrio-BA, avaliaram quatro reas sob diferentes perodos de uso e uma sob cerrado nativo. A extrao e o fracionamento foram realizados pelo mtodo Dabin. O processo de humificao e a qualidade da matria orgnica foi influenciada pela aplicao de calcrio que favoreceu o aumento dos teores de clcio e a atividade microbiana, o que acelerou o processo de humificao da matria orgnica, e pela rotao de culturas (milho/soja) e que o sistema de cultivo convencional, com o tempo de uso favoreceu o aumento de AF e de HUM e, uma diminuio de AH. [52] avaliaram e caracterizaram por mtodos espectroscpicos (UV-Vis, infravermelho, Fluorescncia e EPR), as possveis mudanas qualitativas no AH extrado de solo fertirrigado com duas fontes de fertilizantes (orgnica e mineral), associadas aplicao de cidos orgnicos comerciais, na cultura da goiabeira no vale do So Francisco, no estado de Pernambuco. A extrao e o fracionamento do hmus para obteno dos AH, bem como sua purificao, foram realizados conforme mtodo da Sociedade Internacional de Substncias Hmicas [27]. O esterco proporcionou maior grau de policondensao dos AH e o uso de esterco associado a cidos orgnicos e fertilizantes minerais favoreceu a formao de AH mais estveis que os tratamentos que no receberam esterco. Entre outro estudo [25], caracterizaram AH extrado de carvo vegetal de Mimosa tenuiflora (jurema-preta) e Aspidosperma pyrifolium (pereiro). A extrao foi feita pela metodologia proposta por Haumeir e Zech (1995) e a caracterizao por anlise elementar, termogravimetria, espectrofotometria no infra-vermelho (IV), espectrofotometria no UV-Visvel e fluorescncia. Esses autores concluram que os AH extrados do carvo apresentaram alta aromaticidade, alta estabilidade, alta CTC e predominncia de COOH e, que as tcnicas utilizadas permitiram identificar semelhana entre os cidos hmicos extrados do carvo vegetal e os AH do solo. Apesar dos escassos estudos realizados at o momento na regio Nordeste do Brasil referente ao tema, h muitos interesses futuros do ponto de vista tcnico cientfico por parte de pesquisadores em ampliar o desenvolvimento de projetos de pesquisas nessa linha. Pois a compreenso dos processos envolvidos na dinmica da MOS do solo fundamental para a definio de estratgias de manejo e uso da terra associadas ao desenvolvimento de sistemas de produo agrcolas racionais, viveis e sustentveis. 8. CONCLUSO A disponibilidade e o uso de tcnicas espectroscpicas no estudo da matria orgnica limitada pelo seu alto custo e difcil acesso, especificamente nas Instituies de ensino e pesquisa na regio Nordeste do Brasil. Estudos sobre substncias hmicas em solos da regio Nordeste do Brasil so escassos. Os trabalhos sobre as substncias hmicas com uso de tcnicas espectroscpicas a serem realizados no Nordeste do Brasil podero fornecer inmeras informaes sobre os diferentes manejos nas reas de cultivo, principalmente com culturas de ciclos curtos. Muito pouco se sabe sobre os processos de reao das fraes estveis da matria orgnica nos solos dessa regio. As prticas de manejo e, ou de conservao de solo nos sistemas produtivos podem interferir no grau de humificao da MOS. Contudo, os estudos de pesquisas buscando esclarecer melhor a origem, a forma estrutural e importncia no sistema solo-planta das fraes estveis da MOS esto aumentando consideravelmente.

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