Marcadores de DNA so derivados de pequenas regies do DNA que apresentam polimorfismo entre indivduo dentro de uma espcie.

Categoria de marcadores (Andersen e Lubberstedt, 2003 apud Marcadores aleatrios (RDM Radon DNA marckers): so gerados aleatoriamente, de stios polimrficos do genoma; Marcadores gene-alvo ( GTM-gene tarfeted marker): so derivados de polimorfismos dentro de genes; PCR- especficos ou PCR de sequncia especfica; Marcadores funcioanais (FM- Functional markers): so derivados de stios polimrficos dentro de genes envolvidos em determinada variao fenotpica; Colocar o quadro comparao dos tipos de marcadores AVALIAO DO POLIMORFIMO DIRETAMENTE DO DNA RFLP (1980)- fragmentos de DNA de comprimento polomrfico; PCR (1985) reao polimerase em cadeia MINI E MICROSSATLITES (1985)- Sequncias adjacentes que se repetem em nmero variado; RAPD (1990)- polimorfismo de DNA amplificado ao acaso AFLP (1994)- polimorfismo no comprimento de fragmentos amplificados; SNP (1998) Polimorfismo de nucleotdeos nicos;

Marcadores de DNA Hibridizao: RFLP E MINISSATLITES; AMPLIFICAO DO DNA (PCR): RAPD, SCAR, STS, SSR (MICROSSATLITE), AFLP, SNP SEQUNCIAS EXPRESSAS: ESTP, ASP, SNP RAPD fragmentos de DNA amplificados ao acaso (williams et al., 1990 apud Marcadores moleculares annimos distribudos pelo genoma.

Utilizad primers curtos e de sequencias arbitrrias, com sequencia alvo desconhecida; Utiliza um primer nico; Detecta polimorfismo em apenas um par de bases; Baseia-se na amplificao de DNA; No permite distinguir heterozigotos; RAPD-POLIMORFIMSO AMPLIFICADO AO ACASO Oligonucleotdeo (primer)+DNA GENMICO Taq polimerase Mistura: condies cclicas 94grau- desnaturao do DNA 36 anelamento 72- extenso (DNA polimerase) Gerao de fragmentos DNA polimrficos em grande quantidade; Aplicao identificao de cultivares, diversidade gentica, diagnstico, Vantagens: Simplicidade, rapidez, e baixo custo, No requer biblioteca de sondas, LIMITAES Expresso dominante, baixo contedo de informao por bloco, padronizao de condies de amplificao e competio entre stio de amplificao Escolher outro marcador para explicar Marcador molecular: Construo de mapa genticos, anlise da diversidade gentica, mapeamento de caractersticas de interesse agronmico, avaliao de polimorfismos de sequencia de DNA,

Acesso de regies intergnicas, regies que no codificam sequencia gnicas. Interesse: marcadores para identificao de alelos especficos PCR-especficos, Automatizao do sequenciamento de DNA. Marcadores PCR-espcficos (converso de marcadores) Obtidos a partir de marcadores j existentes ou sequncia expressas de banco de dados Uso de primers especficos =sequencia j mapeadas ou caracterizadas= obtido da converso de marcadores RAPD (SCAR), RFLP(STS), AFLP , SSR Converso: Clonagem do DNA amplificado pelo marcador Sequenciamento, Desenho de primers especficos (superior a 20 pares de bases), til na seleo assistida: resistncia a doenas, cor de flor Se o primers estiverem disponveis as tcnicas apresentam custo baixo.

O grupo botnico .... de extremo interesse em virtude de ser constitudo por plantas em extino e por apresentar um grande potencial de explorao econmica. Dentro deste grupo est o mouriri pusa que FALAR DAS CARACTERSTICAS..o Gnero...possuem quantas espcies distribudas... O avano na agricultura e a falta de interesse pelas frutas nativas, at pouco tempo atrs, foram os principais motivos da diminuio do nmero de plantas de...em seu habitat. O estmulo para o uso de espcies nativas como alimentos e fonte de vitaminas uma alternativa vivel para reduzir o processo de extino, promovendo a manuteno e o replantio de espcies, como na caso... O conhecimento sobre a gentica das populaes de pu, existentes na Estado do Tocantins, a base para a amplificao do conhecimento da espcie, visto que a maioria se encontra ameaado de extino. Desta forma, a caracterizao molecular de interesse para futuros

trabalhos de melhoramento gentico, bem com para outros trabalhos que visem a reduzir a ameaa de extino desta espcie. A caraterizao de gentipos, eram realizada com base nas caractersticas morfolgicas e agronmica. Todavia, este tipo de anlise no pode ser realizada em qualquer perodo do ano, e normalmente no possvel ser completado at a produo das frutas, requerendo um custo elevado e tempo prolongado de anlise. Alm disto, as caractersticas so avaliadas de forma subjetiva, podendo sofrer influncias ambientais, principalmente quando se estudam cultivares com caractersticas muito similares (BIANCHI et al., 2002) Atualmente, o suo de marcadores moleculares uma ferramenta complementar para a caracterizao de germoplasma e consequentemente, para identificao de populaes e raas primitivas (FERREIRA; GRATTAPAGLIA, 1996). A tcnica que envolve a deteco de polimorfismo do DNA amplificao ao acaso (RAPD) tem sido eficiente na caracterizao de gentipos em vrias espcies, antes que as caractercticas fenotpica sejam expressam. O potencial de RAPD na revelao de polimorfimos foi verificada em acerola (Malpighia emarginata), observou alta variabilidade gentica entre os acessos estudados (SALLA et al, 2002). Tcnica RAPD mostrou eficiente em pessegueiro e nectarina apesar da baixa variabilidade gentica existente nessas espcies, esta tcnica foi eficiente para a caracterizao molecular (LIMA et al., 2003). RAPD espcies ameixeira, o alto grau de polimorfismo detectado pelos marcadores confirmaram o potencial da tcnica na anlise de fingerprinting e sua utilidade na estimativa da variabilidade gentica (BIANCHI et al., 2003). Mtodos Folhas oriundas dos gentipos de mouriri pusa Extrao de DNA: as amostras sero coletadas em tubo de eppendorf e armazenada a -80C. O DNA genmico ser extrado conforme protocolo descrito por DOYLE; DOYLE (1987), com algumas adaptaes.

As amostras vo ser maceradas com nitrognio lquido e sendo adicionados em cada tubo (tampo de extrao (2% CTAB; 1,4 M NaCl, 20mM EDTA; 100 mM Tris HCl ph 8,0; 1% PVP e 1% Mercaptoetanol). Seguidas as amostraas sero incubadas em baho maria 65 C por 60 min. Depois, em temperatura ambiente, adiciona volume de clorofrmico/lcool isoamlico agitando po 10 min, posteriormente as amostras sero centrifugadas a 13000rpm, por 10 min retirar o sobrenadante transferindo-o para um novo tubo. Em seguida, foi adicionado igual volume de etanol (ver se ir precisar colocar o restante da tcnica). O DNA foi ser quantificado em gel de agarose 0,8% . A estimativa da concetrao de DNA foi realizada com base na comparao da intensidade das bandas padro de DNA Lambda digerido com a enzima e diludo a uma concentrao de para utilizao em reao em cadeia da polimerse (PCR) NUNES, A. M.; et al. Caracterizao molecular de Butizeiro por marcadores RAPD. Rev. Bras. Frutic. Jaboticabal SP, v. 30, n. 3, p. 702-707. 2008.

MARCADOR MOLECULAR INCIARAM O DESENVOLVIMENTO DE TECNOLOGIAS QUE PODEM REVELAR VARIABILIDADES EM NVEL GENMICO DE UMA FORMA RPIDA, SIMPLES E EFICAZ. ESTA TCNICA DE DETECO DE POLIMORFIMSOS NO DNA COMEOU A SER EXPLORADO APS O SURGIMENTO DA TECNOLOGIA DNA RECOMBINANTE E AMPLIFICAO DA MOLCULA DE DNA POR PCR. MACADOR MOLECULAR TORNOU-SE POTENCIALMENTE ILIMITADO. DEVIDA A TAMANHA IMPORTNCIA DOS INUMEROS ESTUDOS DESENVOLVIDOS A RESPEITO DE MARCADORES QUE EXISTEM DIVERSOS BANCOS DE DADOS ESPECFICOS PARA DIFERENTES TIPOS DE MARCADORES (FACILITA O ANDAMENTO DE PESQUISA) RAPD: O POLIMORFISMO RAPD DETECTADO PELA AMPLIFICAO DE LOCOS CROMOSSMICOS USANDO PRIMERS DE SEQUNCIA CURTAS (10 BASES DE SEQUENCIA ARBITRRIA) E POSTERIORMENTE SEPARDOS EM GEL DE POLIACRILAMIDA OU AGAROESE, SENDO A COLORAO FEITA COM NITRATO DE PRATA DE ETDEO SOB LUZ UV, SENDO A DETECO FEITA POR MUTAES OU REARRANJOS QUE ACONTECEM NO PRPRIO SITIO OU

ENTRE OS SITIOS DE HIBRIDIZAO DOS PRIMERS, PREM VALE RESSALTAR QUE MUTAES DE PONTO SO CAPAZES DE INIBIR COMPLETAMENTE A AMPLIFICAO. ESTES PRIMERS, POR SUA VEZ, SO COMPOSTOS DE PELO MENOS 50% DE CG E TEM A CAPACIDADE DE REVELAR VRIOS LOCOS, POIS SUA SEQUENCIA DETERMINDA DE FORMA ALEATRIA E COMO J EVIDENCIADO EM DIFERENTES ESPCIES, OS LOCOS RAPD ESTO DISPERSOS PELO GENOMA SCAR:

. Como ilustram as figuras 8 e 9, os fragmentos submetidos tcnica de RAPD so clonados e sequenciados, e, ento, so desenhados primers maiores (fig. 9A), os quais justamente por conterem sequncias mais longas sero provavelmente especficos para o locus de interesse, e espera-se que no amplifiquem outros loci. Entretanto, pode ser que esses primers amplifiquem os dois alelos (fig. 9B), e ser possvel detectar polimorfismos internos e esses primers, os quais so polimorfismos entre os dois alelos (fig. 9C). Caso esses polimorfismos possam ser identificados, ento deve ser possvel sintetizar novos primers, os quais amplificaro uma regio de apenas um dos alelos (fig. 9D). esse novo marcador baseado em PCR que denominado SCAR

Brasil tem uma enorme biodiversidade; um dos principais centros de diversidade gentica de espcies frutferos nativas e naturalizados; Porm, a sua quase totalidade continua pouco explorado; A frutferas representa um papel importante no cenrio scio-econmico do Brasil Famlia Melastomatacea ; til no tratamento de distrbios gastrointestinais como as ulceras, gastrites (medicina popular);

Mouriri elliptica Mart., conhecida popularmente como pusa-coroa; Ocorre em vrios Estados brasileiros; MARIRI, F. S.; ANDREO, M.A. et al. As frutas contm, alm dos nutrientes essenciais e de micronutrientes (como minerais e fibras, agentes como vitaminas A, C e E e diversos compostos secundrios de natureza fenlica (antocianinas, flavonoides, flavonas, etc), carotenoides, clorofilcas, cidos graxos e folatos (HARBONE; WILLIAMS, 2000; BURNS et al., 2003);

Estados: MA, MT, MS, TO, PI, CE; Vulgarmente conhecida por croadinha, croada, pu e manipua.; Botanicamente classificada pertencente diviso Magnoliophyta (Angiospremae); Classe Magnoliopsida (Dicotiledonae); Subclasse Rosidae; Famla Melastomataceae, gnero Mouriri, espcie elliptica e nome cientfico Mouriri elliptoca mart. (SILVA et al., 2001; ZICODEZOO, 2007); Regio norte: o clima tropical mido permite o desenvolvimento de uma frutferas exticas e peculiar, grande potencial de explorao; ANTIOXIDANTES: substncias capazes de restringir a propagao das reaes em cadeia e as leses induzidas pelos radicais livres (RUFINO, 2006); CONTRIBUEM : preveno de doenas degenerativas tais como: cardiopatias, aterosclerose, problemas pulmonares alm de danos ao DNA, como mutagnese e carcinognese (BIANCHI, 1999);

TOCANTINS: Constituem uma preciosa fonte de riqueza e de alimentos, necessitando serem estudadas e preservadas;

ROESLER, et al., 2007 Indicou o grande potencial de fraes de frutas do bioma do cerrado em sequestrar radicais livers, confirmando seu poder antioxidante; Necessrias pesquisas com o pu coroa de frade com a finalidade de gerar conhecimento de sua atividade antioxidante e o benefcio deste fruto; Brasil um dos principais centros de diversidade gentica de espcies frutferas nativas e naturalizadas (VIEIRA NETO, 2002); Aproveitamento scio-econmico e demanda de pesquisas de frutferas nativas refletem na oferta de novas alternativas de frutas frescas para o consumo in natura e matria-prima para agroindstria;

Conservao de recursos genticos desta espcies; Trs tipos de cor: carotenoides, clorofila e antocianinas; Carotenoides e clorofila: cloroplastos e nos cromoplastos; Pigmentos fenlicos (antocianinas, flavonoides e protoacianinas) presentes nos vacolos (SOUZA, 2007); ANTIOXIDANTES: DEFINE A CAPACIDADE PARA CAPTURAR RADICAI LIVRES E SEQUESTRANTES DE CARCINGENOS E DE SEUS METABLITOS, EXCERCENDO AO PROTETORA CONTRA A EVOLUO DOS PROCESSOS DEGENERATIVOS QUE CONDUZEM S DOENAS E AO ENVELHECIMENTO PRECOCE (SLAGA, 1995);