MICOTOXICOSES EM SUNOS: NOVOS AVANOS NA PESQUISA

MYCOTOXICOSIS IN SWINE: NEW ADVANCES IN RESEARCH Janio M. Santurio*1 & Claudia Lautert2

1Laboratrio de Pesquisas Micolgicas (LAPEMI), Departamento de Microbiologia, Universidade Federal de Santa Maria Santa Maria, RS. 2 Programa de Ps graduao em Cincias Veterinrias, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Faculdade de Veterinria Porto Alegre, RS. *Autor para correspondncia: janio.santurio@gmail.com

Resumo

As

micotoxinas

so

produzidas

como

metablitos

secundrios

por

microorganismos fngicos. Em geral, as micotoxinas esto associadas a gros armazenados e raes para alimentao animal, especialmente milho com alto teor de umidade, em silagem, semente de algodo, amendoim e soja. O impacto toxicolgico destes metablitos secundrios sobre a produo suna o tema desta reviso, na qual sero evidenciadas as atuais pesquisas relacionadas s principais micotoxinas prejudiciais sade de sunos: aflatoxinas, zearalenona, fumonisinas e tricotecenos, bem como, medidas de controle para as mesmas.

Introduo

H muitos sculos se conhece a toxicidade de certos fungos. Entretanto, somente na dcada de 1850, ao relacionar-se a ingesto de centeio infectado pelo fungo Claviceps purpurea com as caractersticas clnicas do ergotismo, foi levantada a

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possibilidade de haver risco sade humana e animal pela ingesto de metablitos secundrios produzidos por fungos (SANTURIO, 2000). Micotoxinas so metablitos fngicos secundrios contaminantes de uma srie de gros e frutas pr ou ps-colheita. Aflatoxinas, deoxinivalenol, ocratoxina A, fumonisinas, zearalenona, patulina e toxina T-2 so as mais importantes micotoxinas, as quais so caracteristicamente estveis sob alteraes nas condies ambientais e causadoras de diversos efeitos txicos em animais de laboratrio, de produo e em humanos (CHEN et al. 2008). O impacto das toxinas das micotoxinas na sade e produo animal tem sido descrita por vrios autores (KUBENA et al. 1990, HUFF et al. 1992, AZZAM & GABAL. 1997, SANTIN et al. 2002). Essas micotoxinas afetam principalmente o trato digestivo e funes hepticas, e podem reduzir o metabolismo animal, afetando as respostas do sistema imunolgico contra muitos agentes patognicos (AZZAM & GABAL. 1997, SANTIN et al. 2002, SANTIN. 2005). Nestas pginas ser discutida alm da real importncia das micotoxinas sobre a sade dos sunos mas, tambm, seus mitos e modismos sero mostrados.

Aflatoxinas

Toxicidade aguda a partir do consumo de altas doses de aflatoxina (AF) relatada com frequncia (WILSON & PAYNE, 1994). Em sunos, est caracterizada por inapetncia, reduo do ganho de peso, alteraes nos parmetros hematolgicos e bioqumicos, aumento na prevalncia de doenas infecciosas, alm de leses hepticas e renais (SOUTHERN & CLAWSON. 1979, MILLER et al. 1981, HARVEY et al. 1988). Porm, efeitos de exposio crnica a baixas concentraes de aflatoxinas so mais difceis de serem avaliados (MARIN et al. 2002). O potencial imunotxico de aflatoxina conhecido em muitas espcies, incluindo animais domsticos e de laboratrio (OSWALD & COMERA. 1992, BONDY & PESTKA. 2000). Em sunos, AF diminui a resposta blastognica a mitgenos, reduz os ttulos do complemento e a ativao de macrfagos, e deprime a hipersensibilidade tardia (tipo IV) (MILLER et al. 1978, SILVOTTI et al. 1997, MOCCHEGIANI et al. 1998). Entretanto, em outros estudos, utilizando a comparao de doses, nenhuma

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depresso das respostas proliferativas de linfcitos frente a mitgenos foi observada (PANANAGALA et al. 1986, VAN HEUGTEN et al. 1994). Marin et al. (2002) avaliaram os efeitos de duas dietas contaminadas com baixas doses de aflatoxina sobre o crescimento e parmetro hematolgicos e imunolgicos de leites desmamados. A contaminao com aflatoxina causou um decrscimo dosedependente no ganho de peso, modificaes em alguns parmetros sanguneos e alteraes da resposta imune, em particular na expresso de citocinas. Tais resultados demonstram que mesmo a exposio subclnica pode resultar em perdas econmicas devido diminuio do desempenho e alteraes sobre o sistema imunolgico. Estas alteraes imunes poderiam diminuir a resistncia do hospedeiro a infeces e tambm induzir um colapso na imunidade vacinal mesmo em animais adequadamente vacinados. Anlise do soro foi desenvolvida atravs de eletroforese no trigsimo dia de experimento a partir de amostras sanguneas de seis animais por tratamento. Exposio a AF no teve nenhum efeito sobre as concentraes totais de globulina, albumina e protena (MARIN et al. 2002). Contudo, intoxicao com AF induziu um aumento dosedependente de -globulina (P<0.05). A concentrao de -globulina aumentou de 13 1 g/L no grupo controle a 16 3 e 22 4 g/L em leites tratados com 140 ppb e 280 ppb de AF, respectivamente (Tabela 1). Tal fato pode ter como a explicao a hiptese de que em baixas doses, as micotoxinas podem trazer efeitos imunomoduladores, como o de estimular o aumento de clulas especficas do sistema imune e seus produtos, hiptese amplamente estudada dentro da comunidade cientfica.

TABELA 1 - Efeito do consumo de aflatoxina (AF) sobre as protenas do soro de leites aps 30 dias de tratamento Dieta de AF Parmetros Protena total, g/L Globulina total, g/L Albumina, g/L 0 ppb 60.712.1 24.13.3 36.68.4 140 ppb 54.610.3 22.91.6 31.75.7 16.53.3y 280 ppb 61.89.7 23.55.8 38.37.0 22.04.5z

Gama-Globulina, g/L 13.31.6x

Dados so expressos como mdia SEM, n=6.x,y,z (P<0.05) (Marin et al. 2002).

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A contaminao simultnea de duas ou mais micotoxinas em alimentos bastante frequente, baseado nisso, o estudo recente de Chaytor et al. (2011) investigou o crescimento e a resposta imune de leites alimentados com dietas contendo concentraes reduzidas de aflatoxina e deoxinivalenol (DON) a partir de gros de milho naturalmente contaminados. Sessenta fmeas (13.9 0.2 kg de Peso Vivo) foram aleatoriamente designadas a 4 tratamentos: A (dieta controle sem AF e DON detectveis); B (dieta com 60 g de AF/kg e 300 g de DON/kg); C (dieta com 120 g de AF/kg e 600 g de DON/kg) e D (dieta com 180 g de AF/kg e 900 g de DON/kg). O peso corporal inicial dos leites no diferiu entre os tratamentos. Durante os primeiros 14 dias o peso corporal dos sunos no diferiu entre os tratamentos (Tabela 2). Ao fim do 21 dia, sunos do grupo C e D tiveram um decrscimo (P=0.051) no peso corporal comparados com o grupo A de 7.7 e 9.9%, respectivamente, enquanto que nos grupos B, C e D no houve diferenas. Ao fim do 28 dia, sunos dos grupos C e D tiveram o peso corporal reduzido (P=0.054), quando comparado com o grupo A, de 8.7 e 10.9%, respectivamente, e no houve diferenas entre B, C e D. No final do estudo (dia 33), C e D tiveram decrscimo do peso corporal (P=0.084) quando comparados com A de 8.6 e 11.5%, respectivamente, enquanto que em B, C e D no houve diferena. As variveis imunolgicas IgG, IgM e IFN no apresentaram diferenas entre os tratamentos (Tabela 3). As interleucinas IL-4 e IL-6 no foram detectadas em nenhum tratamento. As concentraes no soro suno de TNF no grupo D aumentaram (P<0.05) 12.1 e 15.5% em comparao com os grupos A e C, respectivamente, enquanto que entre D e B no houve diferenas. Os leites dos grupos A, B e C no diferiram em suas concentraes de TNF (CHAYTOR et al. 2011).

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TABELA 2 - Crescimento e desempenho de sunos alimentados com dietas de diferentes concentraes de aflatoxina (AF) e deoxinivalenol (DON).
Item A Peso Corporal, kg Dia 0 Dia 7 Dia 14 Dia 21 Dia 28 Dia 33 Ganho Mdio Dirio, kg/d Dia 0-7 Dia 7-14 Dia 14-21 Dia 21-28 Dia 28-33 Dia 0-33 Consumo Mdio Dirio, kg/d Dia 0-7 Dia 7-14 Dia 14-21 Dia 21-28 Dia 28-33 Dia 0-33 Relao Ganho/Consumo Dia 0-7 Dia 7-14 Dia 14-21 Dia 21-28 Dia 28-33 Dia 0-33
a,b

Tratamento B C D SEM Valor de P

13.9 16.6 19.7 23.6

a

14.0 16.4 19.0 22.5

ab

14.0 16.2 18.6 21.8

b

13.9 15.9 18.6 21.3

b

0.2 0.3 0.4 0.6 0.7 0.9

0.971 0.447 0.317 0.051 0.054 0.084

27.6a 30.9
a

26.1ab 29.0
ab

25.2b 28.3
b

24.6b 27.4
b

0.38c 0.44 0.57

c

0.35cd 0.37 0.50

cd

0.31d 0.34 0.36

de

0.29 0.39 0.38 0.48 0.55 0.41

0.02 0.03 0.04 0.03 0.07 0.03

0.040 0.271 0.020 0.161 0.700 0.058

0.58 0.66 0.52

a

0.51 0.59 0.46

ab

0.49 0.61 0.43

b

0.74 0.92 1.07 1.18

c c

0.69 0.82 1.01 1.10

cd cd

0.66 0.79 0.90

de d

0.66 0.81 0.85 0.96

e d

0.03 0.04 0.05 0.05 0.08 0.04

0.201 0.194 0.025 0.031 0.409 0.061

1.04

1.42 1.04
a

1.34 0.97
ab

1.32 0.92
b

1.23 0.88
b

0.50a 0.49 0.53 0.50 0.45 0.50

0.49a 0.45 0.50 0.47 0.44 0.47

0.47ab 0.43 0.51 0.47 0.46 0.47

c-e

0.43b 0.48 0.47 0.50 0.44 0.47

0.02 0.02 0.02 0.01 0.01 0.03

0.084 0.356 0.313 0.354 0.952 0.138

Significa uma tendncia a diferir (0.05 P < 0.10). Significa diferena (P < 0.05). A: dieta sem suplemento de AF ou DON; B: dieta combinada de AF (60 g/kg) e DON (300 g/kg); C: dieta combinada de AF (120 g/kg) e DON (600 g/kg); D: dieta combinada de AF (180 g/kg) e DON (900 g/kg) (Chaytor et al. 2011).

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TABELA 3 - Variveis imunolgicas de leites alimentados com dietas contendo vrias concentraes de AF e DON por 33 dias Tratamento Item IgG, mg/mL IgM, mg/mL IFN, pg/mL IL-4, pg/mL IL-6, pg/mL
a,b

C 10.89 1.10 6.03 ND ND 290a

D 14.91 1.51 6.10 ND ND 335b

SEM Valor de P 2.28 0.31 1.64 ND ND 9 0.462 0.806 0.900 1.000 1.000 0.023

9.85 12.04 1.32 6.13 ND ND 1.20 4.65 ND ND

TNF, pg/mL 299a 308ab

(P< 0.05); IFN: Interferon-gama; TNF: fator de necrose tumoral . A: dieta sem suplementao de AF ou DON; B: dieta com uma combinao de AF (60 g/kg) e DON (300 g/kg); C: dieta com uma combinao de AF (120 g/kg) e DON (600 g/kg); D: dieta com uma combinao de AF (180 g/kg) e DON (900 g/kg). No detectado atravs da utilizao de um kit ELISA com um nvel de deteco mnimo de 2 e 10 pg/mL para IL-4 e IL-6, respectivamente (Chaytor et al. 2011).

Um sistema imune saudvel importante para os sunos em crescimento, especialmente em setores da indstria nos quais os animais so frequentemente desafiados por diversos patgenos. DON, em particular, causa alteraes sobre o sistema imunolgico. Muitos estudos demonstram que 2.200 a 6.800 g de DON/kg incorporados na dieta causam uma elevao nas concentraes de variveis imunolgicas como IgA e IgM sem causar nenhuma alterao na concentrao de IgG (SWAMY et al. 2002, GOYARTS et al. 2005, TIEMANN et al. 2006, PINTON et al. 2008). J a aflatoxina no parece alterar subgrupos de imunoglobulinas, como demonstrado por Meissonnier et al. (2008), no qual 385 a 1.807 g de AF/kg no resultaram em aumento ou diminuio das imunoglobulinas. De acordo com os resultados de Chaytor et al. (2011), outras pesquisas tambm no demonstram nenhum efeito sobre subgrupos de imunoglobulinas de sunos com reduzidas concentraes de AF (140 a 280 g/kg) ou DON (280 a 840 g/kg) em suas dietas (VAN HEUGTEN et al. 1994, ACCENSI et al. 2006). Citocinas pr-inflamatrias como TNF, IL-6 e IL-1 so importantes no controle de macrfagos e repostas inflamatrias, enquanto que IL-4 inibe a ativao de macrfagos (WOOD, 2006). IFN produzido por linfcitos Th1 e pode estar

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envolvido, em alguns casos, em respostas imunes mediadas por clulas; e em outros, com efeitos reguladores e anti-inflamatrios (WOOD & SAWITZKI, 2006). Chaytor et al. (2011) demonstraram que as concentraes no soro de IFN no diferiram entre os tratamentos, e que IL-4 e IL-6 foram inferiores a 2 e 10 pg/mL, respectivamente, e suas concentraes no foram detectadas por ficarem abaixo do limite de referncia padro. Semelhante ao estudo de Chaytor et al. (2011), tambm Accensi et al. (2006) descobriram que 280 a 840 g de DON/kg no afetam as concentraes sricas de IL-4 ou IFN em sunos. Embora as concentraes destas duas citocinas, tanto no soro com o no plasma, no demonstraram alterao, a anlise de TNF no estudo de Chaytor et al. (2011) mostrou que leites alimentados com 180 g de AF/kg e 900 g de DON/kg apresentaram aumento nas concentraes do soro quando comparado com leites do grupo A. Este aumento (12.1%) de TNF no soro pode indicar uma reao de fase aguda em resposta a inflamao causada por efeitos txicos de AF e DON. As rotas metablicas envolvidas na bioativao e detoxificao de AFB1 tm sido descritas em detalhes, mas poucos estudos investigam o impacto de aflatoxinas sobre a atividade de enzimas metabolizadoras de drogas no fgado. AFB1 tem efeito limitado em enzimas conjugantes, mas esta toxina em especfico prejudica o sistema microssomal heptico P450 durante aflatoxicose aguda ou subaguda (GALTIER et al. 1984, GAWAI et al. 1992, RAISUDDIN et al. 1994). O estudo de Meissonnier et al. (2007) investigou o impacto da exposio subcrnica a doses baixas de AFB1 sobre enzimas metabolizadoras de drogas no fgado de leites. Atividades de drogas de metabolizao heptica em sunos e humanos so muito semelhantes (ANZENBACHER et al. 1998, DONATO et al. 1999, SOUCEK et al. 2001), portanto a espcie suna representa um bom modelo experimental de aflatoxicose em humanos. Aps 28 dias de exposio a AFB1, o ganho de peso e vrios parmetros bioqumicos do plasma, relacionados disfuno heptica, foram mensurados conforme demonstrado na Tabela 4.

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TABELA 4 - Efeito da ingesto de AFB1 por leites, durante 28 dias, sobre o ganho de peso, peso heptico, parmetros bioqumicos plasmticos e atividades enzimticas. Meissonnier et al. (2007) Item Dieta AFB1 385 Controle Ganho de peso (kg) Fgado (% PV) Colesterol (mmol/L) Triglicerdeos (mmol/L) Glicose (mmol/L) Protenas totais (g/L) Albumina (g/L) FA (UI/L) -GT (UI/L) AST (UI/L) ALT (UI/L) 67.42.3a 40.01.3a 60662a 464a 5310a 443
a

AFB1 867 g/kg 18.11.6 3.20.1 2.30.3,b 0.760.15b 5.10.2 61.62.7,b 35.82.3 66759 488 679 573

AFB1 1807 g/kg 11.71.7b 2.90.1 1.60.5

g/kg 19.91.3a 3.00.2a 2.60.3a,b 0.650.08a,b 5.20.4a 60.03.3,b 35.81.2 48213 509 6510 465

22.00.7a 2.90.1a 2.70.1a 0.510.07a,b 5.9 0.3a

0.400.12 4.20.3b 50.08.8b 26.65.2b 1761391b 8013b 434 496

Notas: Resultados so expressos como mdia SE para cinco animais. FA, fosfatase alcalina; -GT, -glutamil transpeptidase; AST, aspartato transaminase; ALT, alanina transaminase. a, b One-way ANOVA foi utilizado para comparar os tratamentos. Tratamentos que no compartilham um sobrescrito em comum so significantemente diferentes (P<0.05) (Meissonnier et al. 2007).

Leites expostos a 385 g ou 867 g de AFB1/kg de dieta apresentaram um leve decrscimo no ganho de peso em comparao ao grupo controle (90% e 80% do peso dos controles, respectivamente). Ao contrrio, leites expostos a 1807 g de AFB1/kg de dieta tiveram uma significativa perda de peso (-53% em relao ao controle). Na necropsia, controles e leites expostos a 385 g de AFB1/kg de dieta apresentaram fgado de colorao vermelha escura, de aparncia homognea. O fgado de um leito exposto a 867 g de AFB1/kg de dieta teve aspecto marmorizado. Dois leites do grupo exposto a 1807 g de AFB1/kg de dieta tiveram fgados marmorizados e trs leites fgados de colorao amarela e descoloridos com padro lobular pronunciado. A Tabela 5 demonstra que as atividades de benzfetamina e aminopirina foram diminudas, isto ,

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no metabolizadas devido exposio micotoxina. A atividade de aminopirina Ndemetilase foi significantemente maior em leites expostos a 867 e 1807 g de AFB1/kg de dieta em relao ao grupo controle, alcanando 123% e 157% do valor controle, respectivamente. Um padro semelhante tambm foi observado na atividade de benzfetamina N-demetilase neste dois grupos de animais (141% e 182% do valor controle, respectivamente). A atividade de anilina hidroxilase em microssomos hepticos no foi afetada por AFB1, independente do nvel de contaminao, mas variabilidades maiores nesta atividade foram observadas em leites expostos a 867 e 1807 g de AFB1/kg de dieta (MEISSONNIER et al. 2007). TABELA 5 - Efeito da ingesto de AFB1 sobre as atividades de drogas de metabolizao heptica Substrato Dieta Controle Benzfetamina Aminopirina Anilina PNP CDNB 3.90.4 4.40.2 0.630.02 10.420.50 1.190.15 AFB1 385 g/kg AFB1 687 g/kg AFB1 1807 g/kg 5.00.4, b 5.00.2, b 0.670.04 11.880.85 1.230.10 5.50.4b 5.40.2b 0.630.10 11.150.59 1.090.10 7.10.7c 6.90.4c 0.620.10 9.820.51 1.040.07

Notas: Resultados so expressos como mdia SE para cinco animais e dois lobos hepticos (direito e esquerdo). a-c Two-way ANOVA Tratamentos que no compartilham um sobrescrito em comum so significantemente diferentes (P<0.05). Os ensaios de Benzfetamina N-demetilase, aminopirina Ndemetilase e anilina hidroxilase so expressos como nmol/min/nmol P450. Ensaios de PNP UDPglicuronosil transferase so expressos como nmol/min/mg de protenas microssomais. Ensaios de conjugao de CDNB glutationa so expressos como mol/min/mg de protenas citoslicas. (Meissonnier et al. 2007).

Meissonnier et al. (2007) concluram que AFB1 prejudica seletivamente o funcionamento de enzimas P450 na ausncia de sinais clnicos associados a toxicose heptica. Em sunos, P450 1A o primeiro alvo de AFB1, e a exposio subcrnica a AFB1 no teve efeito sobre as atividades de UGT ou GST. Seus resultados confirmam que exposio subcrnica dieta com baixos nveis de AFB1 podem no estar associados a sinais clnicos. Contudo, o comprometimento sutil de certas enzimas metabolizadoras de drogas hepticas pode ocorrer em sunos expostos a AFB1 na dieta,

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com possveis consequncias sobre o metabolismo normal de compostos endgenos ou xenobiticos associados.

Zearalenona

Zearalenona (ZEA) pertence ao grupo de micotoxinas com fortes efeitos estrognicos. produzido como um metablito secundrio por um nmero determinado de espcies de Fusarium, incluindo, F. culmorum e F. graminearum (HESTBJERG et al. 2002, GLENN. 2007) e comum no milho e no trigo (YAMASHITA et al. 1995, BINDER et al. 2007, KRSKA et al. 2007). Entre os animais domsticos e aves, fmeas pr-pberes de sunos parecem ser mais sensveis a ZEA (FINK-GREMMELS & MALEKINEJAD, 2007). Edema e hiperemia de vulva so os sinais clnicos externos de intoxicao por ZEA em sunos (ZINEDINE et al. 2007). Milho e soja so os dois principais ingredientes da alimentao animal, e como ZEA e isoflavonas (ISO) frequentemente coexistem em dietas com tais ingredientes pode haver interao entre elas. ISO so um subgrupo de flavonides encontrados, predominantemente, nos gros de soja (REINLI & BLOCK, 1996) em concentraes de 0.01% a 0.5% (WANG & MURPHY, 1994). Geralmente, se acredita que ZEA tem efeitos negativos sobre a produo animal e sade humana (ZINEDINE et al. 2007), enquanto de forma contrria, ISO tem potenciais efeitos benficos sobre a produo animal (GREINER et al. 2001, PAYNE et al. 2001). O estudo de Wang et al. (2010) demonstrou a habilidade de ISO neutralizar a influncia estrognica de ZEA na dieta de leitoas pr-pberes de quando administrado, posteriormente, em uma dose alta (2 mg/kg). Esta influncia neutralizante pode ser atribuda ligao competitiva de receptores de estrgeno nas clulas reprodutivas e alteraes dos nveis de E2, FSH e LH, resultando em um enfraquecimento dos efeitos estrognicos de ZEA. Dietas suplementadas com 600 mg/kg ISO (isoflavona) reduziram a elevao no peso de rgos reprodutivos induzidos por ZEA a 2 mg/kg (P<0.05) (Figura 1). A Figura 2 apresenta dados, sobre a largura das vulvas, mensurados no dia 21. Esta medida pareceu aumentar em resposta a elevaes na concentrao tanto de ZEA como de ISO (P<0.05). Uma significante interao (P<0.05) foi observada entre a suplementao com ZEA e ISO, na qual fmeas alimentadas com ambos os suplementos, simultaneamente,

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tiveram vulvas maiores (P<0.05) em relao quelas com dietas de 0 ou 0.5 mg/kg de ZEA isoladamente. ISO em uma concentrao de 600 mg/kg reduziu a largura de vulvas

induzidas por de 2 mg/kg de ZEA (P<0.05). FIGURA 1 - Interao de ZEA e ISO sobre os pesos relativos dos rgos reprodutivos de leitoas pr-pberes. Tecidos reprodutivos incluem ovrios, tubas uterinas, tero, crvix e vagina.
Eixo Y= Peso relativo do rgo= Peso do rgo (g)/ Peso corporal Os dados so expressos como mdias SD, n=5. Letras diferentes sobrescritas indicam uma diferena significante estatisticamente em P<0.05. Os valores de P dos principais efeitos so: ZEA, P<0.0001; ISO, P=0.5504; ZEA x ISO, P< 0.0001.

(Wang et al. 2010).

FIGURA 2 - Interao de ZEA e ISO sobre a largura da vulva (em cm no eixo Y) de leitoas pr- pberes em 21 dias.
Os dados so expressos como mdias SD, n=5. P<0.05. Os valores de P dos principais efeitos so: ZEA, P< 0.0001; ISO, P<0.0001; ZEA x ISO, P<0.0001. (Wang et al. 2010).

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Os dados mostrados nas Figuras 1 e 2 so a chave para responder a uma pergunta muito comum, ou seja, porque as raes serem positivas para zearalenona e as fmeas sunas no apresentaram sintomatologia alguma, ou vice versa. Poucos so os estudos que investigam o efeito de ZEA sobre a imunidade inata e adquirida. Alm disso, os efeitos de ZEA e seus derivados sobre neutrfilos, uma populao celular com funo importante no processo da resposta imune inata, so raramente estudados. Neutrfilos ou clulas polimorfonucleares (PMNs) so fagcitos estritos, constituindo a parte principal da defesa inata contra um extenso nmero de microorganismos ambientais potencialmente patognicos (WITKO-SARSAT et al. 2000). A sua produo de espcies reativas de oxignio (ROS), incluindo nion superxido (O-2, perxido de hidrognio (H2O2) e xido ntrico), considerada fundamental na defesa do hospedeiro contra microorganismos invasores, mas tambm pode ser responsvel por danos teciduais (BABIOR. 1984, MILLER & BRITIGAN. 1995). Para responder inflamao dos tecidos, os neutrfilos migram aos stios de inflamao nos quais eles produzem e tambm so expostos a numerosos sinalizadores, incluindo citocinas. O estudo de Marin et al. (2010) investigou os efeitos in vitro de ZEA e alguns de seus derivados, -zearalenol (-ZOL), -zearalenol (-ZOL) e zearalanona (ZAN), sobre as funes de neutrfilos, como, proliferao, sntese de citocina e estresse oxidativo em clulas PMN de sunos. O nmero de clulas viveis, aps estmulo com acetato de forbol miristato (PMA) e incubao com ZEA ou seus derivados, foi avaliado atravs do ensaio de reduo de MTT. A adio de concentraes (1-50 M) mais elevadas de micotoxinas nas culturas estimuladas por PMA inibiu a viabilidade celular de maneira dose-dependente. O efeito foi observado em todas as toxinas, a dose mais alta (50 M) induzindo uma significante inibio de viabilidade (P<0.001) quando comparada populao celular estimulada com PMA (Tabela 6).

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TABELA 6 - ndice de viabilidade de neutrfilos de sunos atravs do teste de MTT Toxinas Concentrao da micotoxina (M) 0 ZEA -ZOL -ZOL ZAN 100 ** 100 *** 100 *** 0.1 88.510 a,b 10514 ** 10413 ** 1 91.110 * 94.713 ** 98.410 *** 10 89.69.1 * 95.37.6 ** 91.910 ** 50 71.219b 65.517b 51.110b

100 *** 10814 *** 98.313 *** 96.69.2 *** 62.615b

Resultados demonstram mdia SD para cinco experimentos diferentes. a,b diferena significativa. *(P<0.05); **(P<0.01); ***(P<0.001) (Marin et al. 2010).

Embora o mecanismo de ao preciso destas micotoxinas ainda permanea desconhecido, os resultados do estudo de Marin et al. (2010) sugerem que ZEA e seus derivados podem apresentar efeitos divergentes sobre importantes parmetros da imunidade inata em sunos, tais como, viabilidade celular e sntese de IL-8 e O-2. Derivados metablitos de ZEA tambm manifestam um efeito mais txico do que ZEA propriamente. Devido ao papel crucial de PMNs na resposta imune inata do hospedeiro contra infeces bacterianas e ao fato das respostas destas clulas serem moduladas por ZEA e seus derivados, maiores estudos so necessrios para elucidar os mecanismos especficos pelos quais estas toxinas influenciam as funes de PMNs. Mesmo que sistemas de culturas de clulas in vitro nem sempre produzam prognsticos precisos de toxicidade em animais, eles podem ser usados para avaliar os riscos e definir os mecanismos pelos quais as micotoxinas agem sobre clulas reprodutivas (MINERVINI & DELLAQUILA, 2008). Diversos ensaios de culturas de clulas in vitro tm sido empregados para determinar os efeitos de ZEA e seus metablitos sobre rgos reprodutivos de sunos (SAMBUU et al. 2011). Alguns estudos revelaram que a exposio a essas micotoxinas afeta a maturao de ocitos, formao do pr-ncleo e desenvolvimento embriognico (ALM et al. 2002, MALEKINEJAD et al. 2007), assim como, sua viabilidade, motilidade e reaes acrossmicas no smen (TSAKMAKIDIS et al. 2006, BENZONI et al. 2008). Contudo, os efeitos agudos de exposio ZEA durante fertilizao in vitro permanecem desconhecidos.

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O estudo de Sambuu et al. (2011) analisou os efeitos de exposio a ZEA nos ocitos e smen sunos atravs dos sistemas de maturao e fertilizao in vitro para avaliao do estado de dano do DNA nuclear e de fertilizao. Como demonstrado na Tabela 7, a exposio ZEA durante fertilizao in vitro no afetou a taxa total de penetrao espermtica independente da concentrao da micotoxina. Entretanto, exposio a 1000 g/l de ZEA teve um efeito positivo sobre as taxas de fertilizao normal e poliesprmica de ocitos (P<0.05), quando comparado com as taxas do grupo controle.

TABELA 7 - Efeitos de exposio a zearalenona de ocitos sunos durante inseminao ZEA N de (g/l) ocitos Analisados Penetrao espermtica Controle 1 10 100 1000 123 131 126 114 103 55 (44.2 2.5) 50 (36.6 5.0) 45 (36.1 6.4) 41 (35.9 2.2) 41 (38.0 5.3) Fertilizao normal 23 (41.2 3.5)a 23 (44.7 5.5)a,b 23 (51.7 5.0)a,b 17 (41.9 4.2)a 23 (56.3 5.4)b Fertilizao poliesprmica 32 (58.8 3.5)a 27 (55.3 5.5)a,b 22 (48.3 5.0)a,b 24 (58.1 4.2)a,b 18 (43.8 5.4)b N (%) de ocitos com

*Porcentagens so expressas como a mdia SEM. Oito replicaes foram executadas. Como controle, ocitos foram fertilizados com espermatozide em fertilizao mdia sem ZEA. **Porcentagem do nmero total de ocitos penetrados. a,b Valores com diferentes sobrescritos na mesma coluna diferem significantemente (P<0.05). ZEA, zearalenona (Sambuu et al. 2011).

Fumonisinas

Fumonisina B1 (FB1) a fumonisina de maior abundncia, de ocorrncia natural em alimentos contaminados. Diversas micotoxicoses espcie-especficas em animais de produo, incluindo leucoencefalomalcia eqina e edema pulmonar suno, so causadas por FB1. Esta micotoxina tambm responsvel por alteraes hepatotxicas e nefrotxicas em ratos (VOSS et al. 2007). Em sunos, o consumo de extrato de milho

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rico em FB1 por nove dias aumenta a colonizao intestinal por patgenos entricos (OSWALD et al. 2003) e deprime a resposta imune (TARANU et al. 2005). As principais funes do trato gastrointestinal (TGI) so a digesto, absoro de nutrientes e barreira de defesa contra xenobiticos e patgenos entricos. FB1 exerce efeitos txicos diretos sobre a estrutura e funes do intestino (BOUHET & OSWALD, 2007). Baixas doses de FB1 reduzem a resposta de citocina de clulas epiteliais intestinais (CEI) e a viabilidade celular via inibio da proliferao celular e induo de apoptose, enquanto doses maiores so citotxicas (BOUHET et al. 2004, BOUHET et al. 2006). Lalls et al. (2010) evidenciaram que o consumo contnuo de um extrato de milho rico em FB1 aumenta a expresso tecidual de B-cristalina e COX-1 no clon, com sutis elevaes de vrias protenas do estresse ao longo do TGI, conforme Tabela 8. As concentraes relativas teciduais de B-cristalina no estmago e jejuno no foram influenciadas pelo consumo da micotoxina (P0.05), mas a sua concentrao no clon foi oito vezes maior em sunos tratados com FB1 do que no grupo controle (P<0.001). Fumonisina B1 altera o ciclo das clulas epiteliais intestinais e suas propriedades absortivas, secretrias e de barreira in vitro, mas in vivo faltam dados. Lessard et al. (2009) testaram a hiptese de que a ingesto repetitiva de um extrato de cultura de milho rico em fumonisinas, principalmente FB1, altera os ndices de absoro intestinal, fisiologia secretria e funo de barreira in vivo. Para isso, utilizaram 36 leites desmamados, alimentados com o veculo (controle) ou o extrato (1.5 mg FB1/kg peso corporal) diariamente por 9 dias, iniciando 7 dias aps o desmame. Aps abate, a mucosa jejunal dos sunos foi avaliada em cmaras de Ussing (UC). O consumo do extrato de FB1 durante 9 dias (Tabela 9) diminuiu a relao ganho:alimentao (P=0.04) e aumentou o peso do fgado (P=0.01). Absoro de glicose sdio dependente (P=0.02) e secreo de teofilina induzida (P<0.01) da mucosa jejunal determinadas em UC foram maiores em sunos alimentados com o extrato do que nos controles. Ao contrrio, a permeabilidade jejunal no foi influenciada pelo consumo do extrato. Os vilos ileais tornaram-se mais longos (P=0.07) e a atividade de aminopeptidase N jejunal inferior em sunos alimentados com o extrato (P<0.01). Lessard et al. (2009) concluram que o consumo de um extrato rico em fumonisinas durante 9 dias tem potencial para

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alterar a fisiologia intestinal, arquitetura vilosa e atividades enzimticas, embora os mecanismos subjacentes continuem sendo investigados.

TABELA 8 - Influncia do extrato de FB1 sobre a relativa expresso tecidual de protenas do estresse ao longo do TGI de sunos (Mdia SE, n=7 por tratamento) Protenas do estressea Stio TGI Tratamento Valor de P Controle B Cristalina Estmago Jejuno Clon COX-1 Estmago Jejuno Clon HSP-27 Estmago Jejuno Clon HSP-70 Estmago Jejuno Clon HO-2 Estmago Jejuno Clon Nnos Estmago Jejuno Clon
a b

FB1 57.42.5 21.42.2 59.72.1 60.31.7 Nd 52.45.2 44.72.3 32.41.5 43.91.1 86.00.9 38.30.9 53.32.1 77.41.4 64.61.8 75.33.3 47.90.7 Nd Nd <0.0001 0.26 0.32 0.80 0.40 0.004 0.68 0.84 0.69 <0.001 0.030 0.67 0.34 <0.0001 0.043

58.61.3 19.01.5 7.10.9 53.42.8 ndb 4.30.8 41.61.7 30.41.4 44.31.4 84.41.7 33.41.2 55.34.6 78.02.6 63.13.3 60.31.1 44.31.3 nd nd

COX-2, HO-1 e iNOS no foram detectadas no estmago, jejuno e clon. No detectado. (Lalls et al. 2010).

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TABELA 9 Desempenho durante o perodo experimental de 9 dias e pesos finais dos segmentos gastrointestinais e fgado de sunos oralmente tratados com extrato de milho rico em fumonisinas ou com veculo (controle) Controle Extrato Ganho de peso, kg/9 dias Ingesto, kg/9 dias Ganho alimentar, kg de ganho de peso corporal/ kg alimentao Tecido do trato digestrio, g Tecido gstrico, g Tecido intestinal delgado, g Tecido cecal, g Tecido do clon, g Fgado, g 2153 101 111 5 544 24 29.6 2.0 186 7 321 8 2179 155 106 5 548 29 30.8 1.4 190 10 352* 10 3.06 0.10 4.14 0.15 2.79 0.31 4.04 0.27

0.85 0.03 0.77* 0.03

Valores so mdias SEM, n=18. *Diferente do controle, P<0.05 (Lessard et al. 2009).

Santurio et al. (2002) realizaram a primeira descrio de intoxicao espontnea por fumonisina em sunos no Brasil. Neste surto, doze de dezesseis sunos morreram 5-6 dias aps alimentao com quirera de milho (QM), subproduto do processo de prlimpeza do milho. A QM estava contaminada com 112 ppm de fumonisina, consequentemente, os sunos apresentaram distrbios respiratrios e ponta das orelhas arrocheadas. Na necropsia, a leso mais proeminente consistia de edema intersticial e alveolar associado com hidrotrax bilateral caracterizado por lquido citrino claro e translcido. Para confirmar o diagnstico de intoxicao foi conduzido experimento usando quatro sunos jovens que foram alimentados com a mesma QM contaminada por FMN que havia sido consumida pelos sunos afetados espontaneamente. Os achados de necropsia e histopatolgicos nos sunos do experimento foram os mesmos encontrados nos sunos afetados espontaneamente. Conforme Santurio et al. (2002), provvel que o edema pulmonar em sunos, em casos de intoxicao por fumonisinas, esteja relacionado ao bloqueio na disponibilidade de ons Ca2+ tipo-1, mediado pela esfingosina alterada por essas micotoxinas. A baixa disponibilidade nesse tipo de ons clcio causa a insuficincia cardaca e o aumento da permeabilidade vascular pulmonar em sunos (Figura 3).

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FIGURA 3 - Sunos na intoxicao experimental por fumonisina (A) Carcaa com moderada quantidade de lquido citrino claro e translcido na cavidade torcica. (B) Aspecto macroscpico do pulmo. Observe o edema interlobular e peribronquial (cabea de seta). (C) Aspecto histolgico do pulmo. Observe o edema subpleural e interlobular (setas) e a dilatao dos linfticos (cabea de seta). Hematoxilina e eosina. Obj. 5. (D) Aspecto histolgico do pulmo de suno. Observe a congesto e edema intralveolar. Hematoxilina e eosina. Obj. 20. (E) Quirera de milho com 112 ppm de FMN administrada aos sunos. (F) Microbiota fngica, em meio DRBC, isolada da quirera de milho administrada aos sunos, destacando-se macia contaminao por F. verticillioides.

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Tricotecenos

Os tricotecenos constituem uma famlia de mais de sessenta metablicos de sesquiterpenos produzidos por vrios dos gneros fngicos, incluindo Fusarium, Myrothecium, Phomopsis, Stachybotrys, Trichoderma, Trichothecium entre outros (UENO. 1983, SCOTT. 1989). O termo tricoteceno derivado de tricotecin, que foi um dos primeiros membros da famlia a ser identificado. Todos os tricotecenos contm uma estrutura bsica molecular de epoxytrichothene-12,13 em comum e um vnculo

olefinico com varias substituies da cadeia lateral. Eles so comumente encontrados como contaminantes dos alimentos e dos gros e o consumo dessas micotoxinas podem resultar em hemorragia e vmito; o contato direto com o tricoteceno pode causar dermatite (MARASAS et al. 1984, JOFFE. 1986, BEASLEY. 1989) Diacetoxyscirpenol (DAS), deoxynivalenol (DON) e toxina T-2 so os mais estudados dos tricotecenos produzidos pela espcie Fusarium. O deoxinivalenol uma das mais comuns micotoxinas encontradas nos gros, principalemente cereais de inverno como trigo, cevada e aveia. Quando ingerido em altas doses por animais domsticos, ele causa nuseas, vmitos e diarria; em doses menores, sunos e outros animais domsticos apresentam perda de peso e rejeio da rao (ROTTER et al. 1996). Por essa razo, o deoxynivalenol , s vezes, chamado de vomitoxina ou fator de rejeio de alimento. Apesar de menos txico do que muitos outros principais tricotecenos, ele o mais prevalente e comumente encontrado no milho, cevada, trigo, centeio e raes (MILLER et al. 2001). DON causa efeitos txicos em humanos, assim como, em todas as espcies de animais investigadas at o momento (PESTKA & SMOLINSKI, 2005). Entre as espcies animais, o suno pode ser considerado o modelo animal de maior relevncia, apresentando a mais alta sensibilidade a DON (ROTTER et al. 1996) e uma fisiologia digestiva muito semelhante de humanos (KARARLI, 1995). Exposio aguda a altas doses induz efeitos radiomimticos, que so efeitos semelhantes aos da radiao ionizante, entre os quais se incluem diarria, vmito, leucocitose, hemorragia e necrose do trato gastrointestinal. Estudos a respeito da toxicidade crnica demonstraram anorexia, ganho de peso reduzido, eficincia nutricional alterada, imunotoxicidade e necrose no trato gastrointestinal e tecidos linfides (ERIKSEN & PARRERSSON.

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2004, PESTKA & SMOLINSKI. 2005, PINTON et al. 2008). Estudos epidemiolgicos humanos realizados na China, sugerem que DON causa efeitos emticos, diarria e outros sinais de gastroenterite em humanos (PESTKA & SMOLINSKI, 2005). Explantes jejunais de sunos representam um modelo promissor para estudo dos efeitos de DON sobre o trato digestrio, permitindo a demonstrao dose-dependente da toxicidade de DON, em nveis reais de dieta. Como o suno representa a espcie mais sensvel, bem como a mais relevante para o estudo de toxicidade da micotoxina e possui uma fisiologia digestiva muito semelhante a de humanos (KARARLI, 1995), os resultados deveriam ser relevantes para a avaliao de riscos de consumidores humanos. Kolf-Clauw et al. (2009) demonstraram a toxicidade de DON dose-relacionada em modelos de explantes de leites em desmame aps 4 horas de incubao. As leses histopatolgicas observadas no respectivo estudo, aps curta exposio a DON, esto de acordo com as leses necrticas do trato gastrointestinal relatadas em estudos anteriores sobre toxicidade crnica e aguda em animais (PESTKA & SMOLINSK, 2005). Estudos in vivo e in vitro sugerem que DON afeta a integridade do epitlio intestinal. Experimentos in vitro, utilizando altas concentraes da micotoxina, demonstraram absoro alterada de nutrientes: as funes de absoro foram afetadas acima de 10 M na linhagem de clulas humanas intestinais HT-29 (MARESCA et al. 2002) e em 10 mg/L em explantes jejunais de aves (AWAD et al. 2007). No estudo de Grenier et al. (2011), leites foram expostos a doses baixas de duas principais toxinas de Fusarium spp., DON (3 mg/kg) e FB (6 mg/kg), em nveis comumente encontrados em gros. A maioria dos dados atuais relacionados aos efeitos de DON ou FB em animais, incluindo roedores, obtida atravs da utilizao de alimentos monocontaminados (HASCHEK et al. 2001, VOSS et al. 2001, ZHOU et al. 2003, PESTKA et al. 2004). E a partir disso, Grenier et al. (2011) determinaram o efeito da ingesto de alimentos, contaminados com baixas doses dessas toxinas e presentes isoladamente ou em combinao, sobre os parmetros zootcnicos, hematolgicos, bioqumicos, histopatolgicos e imunolgicos de leites. Durante o experimento, os leites foram pesados semanalmente e como demonstrado na Tabela 10, a ingesto individual ou combinada de dietas contaminadas por DON e FB no prejudicaram significantemente o crescimento animal.

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TABELA 10 - Efeitos individuais ou combinados de DON e FB sobre o ganho de peso Dietas Ganho de peso Corporal / dia (kg) Dias 1-14 Dias 14-35 Controle DON (3 ppm) FB (6 ppm) DON + FB

0.360.05a 0.350.03a 0.430.05a 0.320.07a 0.760.05a 0.650.03a 0.740.06a 0.680.03a

Resultados so expressos como mdia SEM para cinco animais (Grenier et al. 2011).

Grenier et al. (2011) concluram que a exposio crnica a essas micotoxinas no evidenciaram sinais clnicos importantes (ganho de peso, hematologia, bioqumica), mas induziram leses microscpicas e resposta imune alterada, especialmente quando as micotoxinas foram combinadas na dieta, como exemplificado na Tabela 11, pela significante diminuio no nmero de neutrfilos dos leites alimentados tanto por FB como pela combinao de FB + DON.

TABELA 11 - Efeitos individuais ou combinados de DON(3 ppm) e FB (6 ppm) sobre parmetros hematolgicos Dietas (6 Parmetros hematolgicos semanas) DON Controle DON FB FB a a a Clulas brancas (milhares/L) 21.21.9 19.62.3 20.32.8 18.21.6a Linfcitos (milhares/L) 12.41.9a 11.41.4a 14.72.1a 12.61.0a Neutrfilos (milhares/L) 7.31.1a 7.01.1a,b 4.50.9b 4.60.6b Clulas vermelhas (milhares/ L) 6.20.3a 5.70.2a 6.10.4a 5.90.4a Volume Corpuscular Mdio (fL) 47.60.8a 47.10.7a 46.20.5a 50.41.9a Hematcrito (%) 29.81.6a 27.00.5a 28.01.9a 29.51.6a Hemoglobina (g/dL) 9.60.5a 9.00.2a 9.40.5a 9.70.5a Hemoglobina Corpuscular Mdia (pg) 15.40.2a 15.60.2a 15.60.2a 16.50.8a Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia (%) 32.40.4a 33.20.3a 33.80.6a 32.80.4a
Resultados so expressos como mdia SEM para seis animais. Valores com diferentes letras sobrescritas so significantemente diferentes.

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A modulao do sistema imune foi somente observada quando o sistema imune foi ativado. Ao considerar que a vacinao ou infeco por patgenos uma situao comum encontrada em animais de produo e natural a ocorrncia destas micotoxinas em alimentos, o experimento de Garnier sugere um rompimento significante no estabelecimento de uma apropriada resposta especfica em animais expostos a dietas contaminadas por DON e/ou FB. O respectivo estudo tambm esclarece a complexidade de interaes micotoxicolgicas; alguns efeitos no so aumentados pela combinao de toxinas (bioqumica, leses pulmonares e renais, contedo especfico de IgA), enquanto outros so (Contedo especfico de IgG, expresso de citocinas, leses hepticas). Estes resultados podem ter algum impacto sobre a atual regulao que somente leva em conta a contaminao individual de micotoxinas e no a multicontaminao de alimentos.

Medidas de controle para as micotoxinas

A simples presena ou deteco de micotoxinas na rao animal, no implica com certeza que a mesma ir produzir efeitos txicos. A dose txica est diretamente relacionada com a sensibilidade doas animais para a micotoxina ingerida e, no caso de aflatoxinas com os nveis de conforto destes, ou seja, quanto menos stress tiver o lote mais resistente ele se torna para nveis mais elevados de aflatoxina. Indubitavelmente o melhor mtodo para controlar a contaminao de micotoxinas em alimentos prevenir o crescimento de fungos. A contaminao de gros por micotoxinas pode ser um problema srio que pode acontecer atravs de condies inadequadas de armazenagem, bem como j na lavoura, durante o perodo pr-colheita. extremamente importante o uso de prticas, como o plantio de gentipos de plantas mais resistentes a contaminao por fungos de armazenagem. So essenciais, tambm, os procedimentos para diminuio da umidade dos gros colhidos e a armazenagem dentro de padres recomendados internacionalmente. O uso de inibidores de crescimento fngico em gros armazenados tem sido muito utilizado como um mtodo preventivo. O controle da atividade dos fungos nas raes e seus componentes tm como premissa bsica conseguir matrias primas livres da produo de micotoxinas durante o processo de armazenamento (SMITH & HAMILTON, 1970).

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No entanto, o crescimento de fungos em gros e raes e a conseqente contaminao por micotoxinas podem ocorrer, apesar dos esforos em direo preveno deste problema. Medidas podem ser tomadas a fim de evitar que animais consumam cereais com fungos e micotoxinas, por exemplo, com a determinao de um nvel mximo de gros alterados visualmente (gros ardidos), tambm o percentual de gros quebrados e impurezas, alm dos nveis mximos de umidade na recepo. Para o nutricionista ter certeza da recepo de gros em condies boas para consumo dos animais, recomendvel um monitoramento dos cereais na recepo das cargas na fbrica de raes ou, at mesmo, antes da compra do cereal junto ao fornecedor. Posto que seja normalmente impraticvel prever a formao das micotoxinas, a indstria alimentcia tem estabelecido mtodos de monitoramento interno. As diretrizes para o estabelecimento limites de contaminao por micotoxinas baseiam-se em dados epidemiolgicos e nas correlaes de modelos animais, levando em conta as inerentes incertezas associadas com ambos os tipos de anlise. Estimativas de uma dose segura apropriadas so normalmente estabelecidas como uma ingesto diria tolervel (KUIPER-GOODMAN. 1994, KUIPER-GOODMAN. 1998). Nas Tabelas 11, 12, 13 e 14 encontra-se a legislao do FDA americano e tambm da Unio Europeia sobre o nveis tolerveis mximos em raes e cereais para algumas espcies animais.

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TABELA 11 - Nveis tolerveis mximos de Aflatoxinas em raes e cereais para algumas espcies animais de acordo com o Food and Drug Administration (FDA)
Commodity Concentrao Aflatoxinas (g/Kg) PPB 300 300 200 100 20 20 20 0.5

Farelo de algodo como ingrediente de rao Raes a base de milho ou amendoim para bovinos em terminao Raes a base milho ou amendoim para sunos em terminao Raes a base milho ou amendoim para matrizes de sunos , bovinos e aves Raes a base milho para animais em desenvolvimento e produtos lcteos de bovinos Todos os produtos, exceto o leite, designado para seres humanos Todos os outros alimentos Leite

Fonte: ACTION LEVELS FOR POISONOUS OR DELETERIOUS SUBSTANCES IN HUMAN FOOD AND ANIMAL FEED http://www.fda.gov/ohrms/dockets/dailys/03/jul03/070303/02N-0275_emc-000024-01.htm

TABELA 12 - Nveis tolerveis mximos em raes e cereais de Fumonisinas para algumas espcies animais de acordo com o Food and Drug Administration (FDA)
Milho e produtos a base de milho Total Fumonisinas (FB1+FB2+FB3) 5 mg/Kg (ppm) (no mais que 20% da dieta)** 20 ppm (no mais que 50% da dieta)** 30 ppm (no mais que 50% da dieta)** 60 ppm (no mais que 50% da dieta)** 100 ppm (no mais que 50% da dieta)** 10 ppm (no mais que 50% da dieta)**

Eqdeos e coelhos Sunos e bagres (catfish) Ruminantes, Aves e Mink para reproduo, *

Ruminantes > 3 meses de idade que sero abatidos Frangos e Perus de Corte Todas as outras espcies de pecuria ou animais pet

*Incluindo vacas de leite e aves poedeiras para consumo humano **Peso base seca http://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/GuidanceComplianceEnforcement/Compliance Enforcement/ucm113409.pdf

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TABELA 13 - FDAe os nveis para deoxynivalenol (DON) em trigo e produtos derivados e outros gros (mg/kg) Produto Derivados de trigo para consumo humano Gros e produtos destinados espcie suna e outros animais (exceto bovinos e galinhas), e que no deve ultrapassar 20% da dieta para sunos (40% para outras espcies) Gros e subprodutos para bovinos em confinamento e galinhas, no exceder 50% da dieta. Concentrao (PPM) 1 5

10

TABELA 14 - Regulamento da Unio Europia para Deoxynivalenol (DON) (mg/kg) Produto Cereais Farinha utilizada como matria-prima em produtos alimentares Concentrao (PPM) 0,5 0,75

Um tempo considervel tem sido dedicado ao desenvolvimento de mtodos analticos para identificar e quantificar as micotoxinas em alimentos e suprimentos. A diversidade qumica e os substratos igualmente diversos nos quais elas ocorrem, representam desafios para a qumica analtica. Cada grupo de componentes e cada substrato apresentam diferentes propriedades qumicas e fsicas, por isso os mtodos para a separao das toxinas dos substratos devem ser desenvolvidos de acordo com cada caso. , por exemplo, uma questo totalmente diferente analisar a aflatoxina da manteiga de amendoim do que identificar a toxina T-2 do milho. As micotoxinas so frequentemente produzidas em concentraes localizadas, portanto a sensibilidade dos sistemas de deteco tambm crucial. Os mtodos tradicionais tm confiado nos solventes para os procedimentos de limpeza e em varias tcnicas cromatogrficas para a quantificao; mais recentemente, analises imunognicas (colunas de imunoafinidade e testes tipo ELISA) que podem ser aplicadas a amostras com pouca ou nenhuma limpeza. Uma vez que as micotoxinas so haptenos de baixo peso molecular, elas so no imunognicas. Todavia, elas podem ser conjugadas por uma protena de transporte e anticorpos contra todas as micotoxinas. Veja protocolos anlises de micotoxinas

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(TRUKSESS & POHLAND, 2001) e o captulo de Wilson et al. (1998) sobre as tcnicas analticas das micotoxinas, bem como as referencias citadas, nesse captulo, para um bom resumo das informaes sobre o equipamento, reagentes e procedimentos para a analise das micotoxinas. Diversas substncias qumicas tm sido testadas e usadas como inibidores de fungos (STEWART et al. 1977). O principal grupo destes anti-fngicos so os cidos orgnicos. Neste grupo esto includas substncias de estrutura simples como o cido propinico, actico, srbico e benzico e seus sais de clcio, sdio e potssio (DIXON & HAMILTON, 1981). O cido propinico e seus derivados, os denominados propionatos, so eficientes inibidores fngicos e tm sido usados h muito tempo nas raes para monogstricos com este objetivo (PASTER, 1979). Mas no podemos esquecer que estas substancias servem unicamente para inibir o desenvolvimento de fungos na massa de gros. As micotoxinas, por acaso j produzidas antes da aplicao do cido orgnico, no sero neutralizadas. Outro mtodo para colaborar no controle de micotoxinas nos animais a utilizao de aditivos minerais ou orgnicos na dieta para reduzir a absoro de destas pelo trato gastrintestinal desta espcie animal. As argilas naturais so recomendadas para adsoro de aflatoxinas (SANTURIO et al. 1999), enquanto adsorventes orgnicos, tendo como componente bsico beta-glucanas, podem ser bons adsorventes de aflatoxinas e zearalenona (YIANNIKOURIS, 2006). Vrias organizaes e agncias internacionais possuem comits e comisses especiais que estabelecem diretrizes recomendadas, desenvolvem protocolos de pesquisa padronizada e mantm informaes atualizadas sobre nveis mximos de tolerncia a estas substncias . Existem tambm varias associaes de pesquisadores em micotoxinas. Os web-sites para essas comisses e organizaes so excelentes fontes para a busca de informaes atualizadas e confiveis. Veja, por exemplo, o Conselho para a Cincia e Tecnologia Agrcola (www.cast-science.org), o Boletim Informativo de Micotoxicologia (www.mycotoxicology.org), a Sociedade para a Pesquisa da Micotoxina (www.mycotoxin.de), a Organizao de Agricultura e Alimento das Naes Unidas (www.fao.org), a Unio Internacional para a Seo da Qumica Pura e Aplicada sobre as Micotoxinas e Ficotoxinas (www.iupac.org), a Associao Japonesa da Micotoxicologia (www.chujo-u.ac.jp/myco/index.html) e o Comit de Administrao de

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Medicamento e Alimento sobre Aditivos e Contaminantes dos Estados Unidos (www.fda.gov).

Concluso

Micotoxinas encontradas em alimentos e raes para sunos podem trazer problemas de desempenho e, at sintomas clnicos, mas a simples presena de uma micotoxina na dieta de modo algum indica perigo ao rebanho. Se isto fosse verdadeiro, como sugerem alguns ignorantes ou mal intencionados, no existiriam animais domsticos ou seres humanos na face da terra. importante, pois, que os responsveis pelos rebanhos, sejam nutricionistas, administradores ou veterinrios, no desviem o foco sobre um determinado evento que esteja acontecendo com os animais e esquecendo que no somente micotoxinas possam estar envolvidas no problema. Por outro lado, no recomendvel ao tcnico seguir ao p da letra as informaes postadas em blogs e sites pseudo-cientficos que infestam a internet. Acredite na pesquisa cientfica publicada em revistas cientficas internacionais, pois estes artigos foram avaliados, auditados e aprovados por comits cientficos responsveis.

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