MARA RUBIA KELLER SARTORI

ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE FRAES DE

EXTRATOS E COMPOSTOS PUROS OBTIDOS DAS
FLORES DA Acmela brasiliensis SPRENG
(Wedelia paludosa) (ASTERACEAE)
ITA1AI - 2005
UNIVERSIDADE DO VALE DO ITA1AI
CENTRO DE CINCIAS DA SAUDE
PROGRAMA DE MESTRADO ACADMICO EM CINCIAS
FARMACUTICAS
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE FRAES DE
EXTRATOS E COMPOSTOS PUROS OBTIDOS DAS
FLORES DE Acmela brasiliensis SPRENG
(Wedelia paludosa) (ASTERACEAE)
Dissertao submetida
Universidade do Vale do Itaja
como parte dos requisitos para a
obteno do grau de Mestre em Cincias armacuticas
MARA RUBIA KELLER SARTORI
Itaja! jul"o de #$$%
#
&rientador'
(ro)* Dr* +le,andre -ella Cru.
Co/orientador'
(ro)* Dr* Valdir Cec"inel il"o
0
1s min"as queridas )il"as! Cristina e ernanda!
pelo amor! dedicao! apoio e incentivo
em todos os momentos de nossa camin"ada*
2
AGRADECIMENTO
+gradeo ao (ro)essor Dr* +le,andre -ella Cru.! pela constante ateno! apoio e
orientao durante o trabal"o de elaborao desta dissertao*
+gradeo tamb3m ao (ro)essor Dr* Valdir Cec"inel il"o pela ami.ade! pacincia!
incentivo e orientao durante a reali.ao deste trabal"o! oportuni.ando um intercambio com
a Universid 4acional de 5osario! contribuindo para a concluso deste trabal"o*
1 pro)essora Dra* 6usana +* 7acc"ino da Universidad 4acional de 5osario /
+rgentina! que com sua cordial ateno e ami.ade nos ajudou e orientou! juntamente com sua
equipe! na elaborao das pesquisas da atividade anti)8ngica deste trabal"o*
1s pro)essoras e queridas amigas Ins 6to))el e 9osiane Vitorino pela valiosa ami.ade!
incentivo e carin"o nas "oras di)ceis*
+gradeo ao (ro)* 9os3 5oberto -resolin e (ro)* Dra* :ania -elle -resolin pelo
incentivo e ami.ade! desde o momento que esta etapa era apenas uma vontade*
1 toda a equipe da arm;cia <scola Comunit;ria da U4IV+=I pela colaborao
prestada*
1 equipe de pro)essores e organi.adores do Mestrado em Cincias armacuticas pela
dedicao e competncia*
1 todos os colegas do curso de mestrado! pela ami.ade e discuss>es interessantes que
contriburam para o crescimento pro)issional*
1s queridas colegas 9uliana e 5osangela! por dividirmos e somarmos es)oros na
conquista de mais uma etapa de vida*
+os meus pais! 5enato e :"amar! pelo amor! carin"o e dedicao em todos os
momentos de min"a vida*
1s min"as amadas )il"as! Cristina e ernanda! que muito me incentivaram e sempre
me au,iliaram na superao das di)iculdades e comemoraram alegremente as vit?rias de
nossas vidas* (elo amor e compreenso quando estive ausente* +gradeo a Deus por ter/me
dado a graa de t/las ao meu lado nesta jornada*
+o ernando! que de onde estiver! estar; torcendo por n?s*
%
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE FRAES DE
EXTRATOS E COMPOSTOS PUROS OBTIDOS DAS FLORES
DE Acmela brasiliensis SPRENG
(Wedelia paludosa) (ASTERACEAE)
Mara 58bia @eller 6artori
A<sta Dissertao )oi julgada adequada para obteno do :tulo de Mestre em Cincias
armacuticas! Brea de Concentrao Microbiologia! e aprovada em sua )orma )inal pelo
(rograma de Mestrado em Cincias armacuticas da Universidade do Vale do ItajaC*
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
&rientador (ro)* Dr* +le,andre -ella Cru.
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
Coordenadora do (rograma de Mestrado em Cincias armacutica
(ro)a* Dra* :ania Mari -elle -resolin
-anca <,aminadora'
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
(residente da -anca (ro)* Dr* +le,andre -ella Cru. EU4IV+=IF
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
Co/orientador (ro)* Dr* Valdir Ce"inel il"o EU4IV+=IF
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
(ro)
a
* Dr* Marco +ntGnio -acelar -arreiro EU4IV+=IF
DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD
(ro)* Dr* 5osendo +ugusto Hunes EU6CF
I
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS ....................................................................................................... 9
LISTA DE TABELAS .................................................................................................... 10
RESUMO ......................................................................................................................... 11
ABSTRACT .....................................................................................................................12
INTRODUO ...............................................................................................................13
OB1ETIVOS ....................................................................................................................15
REVISO BIBLIOGRFICA ...................................................................................... 16
3.1 PLANTAS MEDICINAIS ........................................................................................ 16
3.2 ATIVIDADE ANTIMICROBIANA ........................................................................21
3.3 BACTRIAS ............................................................................................................. 21
3.3.1 Membrana Citoplasmtica Bacteriana ................................................................ 22
3.3.2 Parede Celular.........................................................................................................23
3.3.3 Bactrias Gram positivas .......................................................................................24
3.3.4 Bactrias Gram negativas ..................................................................................... 26
3.4 FUNGOS .................................................................................................................... 28
3.4.1 Dermatfitos ........................................................................................................... 29
3.5 ANTIMICROBIANOS ............................................................................................. 30
3.5.1 Classificao dos Agentes Antimicrobianos ........................................................ 32
3.6 Acmela brasiliensis SRENG ASTERACEAE ........................................................ 39
3.6.1 Caractersticas gerais .............................................................................................39
3.6.2 Estudos fitoqumicos de Acmela brasiliensis SRENG ......................................... 40
3.6.3 Estudo Analtico - Cromatografia em camada delgada ..................................... 43
3.6.4 Estudos biolgicos de Acmela brasiliensis SRENG ............................................. 43
3.7 ENSAIOS DE ATIVIDADE ANTIMICROBIANA .............................................. 45
3.7.1 Estudos Microbiolgicos - Mtodo de diluio ................................................... 45
3.7.2 Ensaio de toxicidade (Artemia salina) .................................................................. 46
3.7.3 Avaliao da atividade antifngica das fraes e compostos obtidos das
flores da Acmela brasiliensis (Wedelia paludosa) Spreng por inibio de
parede celular.......................................................................................................... 46
J
MATERIAL E MTODOS ........................................................................................... 47
4.1 Preparao dos extratos e extratos e compostos puros de A. brasiliensis
SRENG ASTERACEAE .......................................................................................... 47
4.2 Cromatografia em Camada Delgada .......................................................................48
4.3 Microrganismos .........................................................................................................48
4.4 Preparao dos inculos bacterianos ...................................................................... 49
4.5 Preparo do inculo de fungos leveduriformes ........................................................49
4.6 Preparo dos inculos dos fungos filamentosos ....................................................... 50
4.7 Avaliao da atividade antibacteriana ....................................................................51
4.8 Mtodo da concentrao bactericida mnima (CBM) ............................................51
4.9 Avaliao da atividade antifngica ......................................................................... 52
4.10 Estudos preliminares do mecanismo de ao das fraes e compostos
obtidos das flores da Acmela brasiliensis Spreng contra fungos .........................53
4.11 Ensaio de toxicidade (Artemia salina) ................................................................... 54
RESULTADOS E DISCUSSO ....................................................................................56
5.1 SISTEMA DE SOLVENTES - CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA .................................................................................................................56
5.2 RESULTADOS PARA BACTRIAS GRAM POSITIVAS E GRAM
NEGATIVAS .............................................................................................................57
5.3 RESULTADOS PARA FUNGOS ............................................................................64
5.4 ENSAIO DA Neurospora crassa .............................................................................. 67
5.5 ENSAIO DE TOXICIDADE (Artemia salina) ........................................................68
CONCLUSES................................................................................................................ 70
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS........................................................................... 72
K
LISTA DE FIGURAS
ILU5+ M (+5<D< C<=U=+5 D< -+C:N5I+6 L5+M (&6I:IV+6 < L5+M
4<L+:IV+6 < D<:+=O< D+6 (&5I4+6 D+6 L5+M
4<L+:IV+6 ************************************************************************************************#2
ILU5+ # 5<(5<6<4:+PQ& D+ <6:5U:U5+ D+ (+5<D< C<=U=+5
R4LIC+ **************************************************************************************************** 0%
ILU5+ 0 -I&66S4:<6< D& <5L&6:<5&= < D& C&=<6:<5&=* &6 TU+D5&6
1 DI5<I:+ D+6 =<CO+6 M&6:5+M +6 <47IM+6 TU<
(+5:ICI(+M 4<6:+ <:+(+ D+ -I&66S4:<6<* &6 TU+D5&6 1
<6TU<5D+ D+6 =<CO+6 M&6:5+M I4I-ID&5<6 D<6:+6
<47IM+6***************************************************************************************************** 0K
ILU5+ 2 =&5 D+ Acmela brasiliensis 6(5<4L *************************************************** 0U
ILU5+ % <6:5U:U5+ M&=<CU=+5 D& :<5(<4VID< BCID&
C+U5<4VIC& ******************************************************************************************* 2M
ILU5+ I <6:5U:U5+ M&=<CU=+5 D& =+V&4VID< =U:<&=I4+************* 2#
ILU5+ J <6TU<M+ L<5+= (+5+ &-:<4PQ& D< <W:5+:&6
DI5<:+M<4:< D< (=+4:+6 M<DICI4+I6 &5I<4:+D& (+5+
+4B=I6< -I&=VLIC+ ****************************************************************************** 2J
ILU5+ K <6:5U:U5+ M&=<CU=+5 D& BCID& C+U5<4VIC&********************** IM
ILU5+ U <6:5U:U5+ M&=<CU=+5 D+ =U:<&=I4+*************************************** I#
U
LISTA DE TABELAS
:+-<=+ M C=+66IIC+PQ& D+6 MIC&6<6 OUM+4+6 M+I6 C&MU46 ******** 0$
:+-<=+ # D<:<5MI4+PQ& D+ C&4C<4:5+PQ& I4I-I:V5I+ MS4IM+
EgXm=F D+6 5+PY<6 D&6 <W:5+:&6 D+6 =&5<6 < (=+4:+
I4:<I5+ D+ Acmela brasiliensis 6(5<4L < &6 C&M(&6:&6
(U5&6 EBCID& C+U5<4VIC& < =U:<&=I4+F C&4:5+ C<(+6
(+D5Q& D< -+C:N5I+6 L5+M (&6I:IV+6 ************************************ %K
:+-<=+ 0 D<:<5MI4+PQ& D+ C&4C<4:5+PQ& -+C:<5ICID+ MS4IM+
EgXm=F D+6 5+PY<6 D&6 <W:5+:&6 D+6 =&5<6 < (=+4:+
I4:<I5+ D+ Acmela brasiliensis 6(5<4L C&4:5+ C<(+6 (+D5Q&
D< -+C:N5I+6 L5+M (&6I:IV+6 *******************************************************I2
:+-<=+ 2 D<:<5MI4+PQ& D+ C&4C<4:5+PQ& I4I-I:V5I+ MS4IM+
EgXm=F (+5+ U4L&6 C&4:5+ 5+PY<6 D&6 <W:5+:&6 D+6
=&5<6 D+ Acmela brasiliensis 6preng < D< D&I6 C&M(&6:&6
(U5&6 EBCID& C+U5<4VIC& < =U:<&=I4+F ********************************** I%
:+-<=+ % :<6:< D< :&WICID+D< +:IVID+D< (+5+ Artemia salina D+6
5+PY<6 O<WZ4IC+6 < DIC=&5&M<:+4& D&6 <W:5+:&6 D+6
=&5<6 < (=+4:+ I4:<I5+ D+ Acmela brasiliensis 6(5<4L ********** IU
M$
5esumo da Dissertao apresentada U4IV+=I como parte dos requisitos necess;rios para
obteno do grau de Mestre em Cincias armacuticas*
ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE FRAES DE
EXTRATOS E COMPOSTOS PUROS OBTIDOS DAS FLORES
DE Acmela brasiliensis SPRENG
(Wedelia paludosa) (ASTERACEAE)
Mara Rbia Keller Sartori
9ul"oX#$$%
&rientador' (ro)* Dr* +le,andre -ella Cru.
Co/orientador' (ro)* Dr* Valdir Cec"inel il"o
(alavras/c"ave' Acmela brasiliensis! Wedelia paludosa! atividade antimicrobiana!
concentrao inibit?ria mnima! luteolina! ;cido cauren?ico*
48mero de p;ginas' IU
& crescente n8mero de pacientes imunocomprometidos nas 8ltimas d3cadas! trou,e um
aumento da incidncia de in)ec>es bacterianas e )8ngicas! as quais so a maior causa de
morbidade eXou mortalidade* +s plantas utili.adas pela medicina popular so recursos
promissores! no tratamento destas patologias! aliada s pesquisas que con)irmem estas
propriedades teraputicas* <ste en)oque 3 particularmente interessante para o -rasil! pois
encontra/se aqui uma rica biodiversidade devido ao clima tropical e o tradicional uso de
plantas medicinais* oi escol"ido para o estudo a Acmela brasiliensis 6preng
E+6:<5+C<+<F anteriormente classi)icada como Wedelia paludosa DC* <sta 3 uma planta
medicinal nativa do pas! usada na medicina popular para tratar v;rias patologias! incluindo
in)ec>es do trato respirat?rio! in)lama>es e a)ec>es em geral! revelando atividade
antibacteriana e anti)8ngica* <ste trabal"o avaliou atividade antimicrobiana das )ra>es de
e,tratos das )lores da A. brasiliensis! atrav3s do m3todo de diluio! revelando atividade
contra bact3rias Lram positivas EStaphylococcus aureus e Bacillus cereusF e dermat?)itos
EEpidermophyton floccosum, Trichophyton rubrum e Trichophyton mentagrophytes)* +s
)ra>es "e,[nicas! diclorometano e butan?lica! demonstraram atividade! com concentrao
inibit?ria mnima ECIMF entre #%$ e M$$$ \gXm=* Dois composto puros apresentaram
atividade antimicrobiana* & ;cido cauren?ico apresentou atividade para dermat?)itos ECIM de
%$ a M$$ \gXm=F e a luteolina apresentou CIM de %$$ a K$$ \gXm= para bact3rias Lram
positivas e CIM entre M#% e #%$ \gXm= para dermat?)itos* & ensaio para avaliao da
to,icidade usando o microcrust;ceo Artemia salina demonstrou que as )ra>es mais ativas
"e,ano e diclorometano no so t?,icas*
MM
+bstract o) Dissertation presented to U4IV+=I as a partial )ul)illment o) t"e requirements )or
t"e degree o) Master in ("armaceutical 6cience
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF EXTRACTS, FRATIONS
AND PURE COMPOUNDS OF FLOWERS FROM
Acmela brasiliensis SPRENG
(Wedelia paludosa) (ASTERACEAE)
Mara Rbia Keller Sartori
9ul]X#$$%
+dvisor' (ro)* Dr* +le,andre -ella Cru.
Co/advisor' (ro)* Dr* Valdir Cec"inel il"o
@e] ^ords' Acmela brasiliensis_ Wedelia paludosa_ anti)ungal activit]_ minimum in"ibitor]
concentration! `aurenoic acid! luteolin*
4umber o) pages' IU
:"e gro^ing number o) immunocompromised patients in t"e last t^o decades! led to an
increase in t"e incidence o) microbial and )ungal in)ections! ^"ic" "ave become a major
cause o) morbidit] orXand mortalit]* &ne o) t"e most promising sources o) ne^ antimicrobial
compounds are plants used in )ol` medicine )or treating ailments related ^it" t"e searc"ed
activit]! in t"is case! plants used to treat in)ections* :"is approac" is particularl] interesting in
-ra.il! ^"ic" possess a biodiversit] ver] ric" because o) its tropical climate and a long
tradition in t"e usage o) medicinal plants* :"e selected plant in t"is stud] ^as t"e Acmela
brasiliensis 6preng E+steraceaeF! in t"e past classi)ied as Wedelia paludosa DC, a native
-ra.ilian medicinal plant used in )ol` medicine against several disorders! including in)ections
o) t"e respirator] tract! in)lammations! and a))ections in general! reveled antimicrobial and
anti)ungal activit]* :"is ^or` evaluated antimicrobial activit] o) )rations o) )lo^ers e,tracts
)rom A. brasiliensis, b] dilution met"ods and revealed activit] against Lram positives bacteria
EStaphylococcus aureus and Bacillus cereusF and dermatop"]tes EEpidermophyton floccosum,
Trichophyton rubrum and Trichophyton mentagrophytesF* :"e "e,ane! dic"loromet"ane and
butanol )ractions! s"o^ed activit], ^it" minimum in"ibitor] concentration EMICF bet^een
#%$ and M$$$ \gXm=* :^o pure compounds s"o^ed antimicrobial activit]* :"e `areunoic
acid and luteolin s"o^ed activit] against dermatop"]tes EMIC a %$ to M$$ bgXm= and M#% to
#%$ bgXm=! respectabl]F and Lram positives EMIC a %$$ to K$$ bgXm=F* :"e plant e,tracts
E)ractions "e,ane and dic"oromet"aneF avaliable b] micro^ell to,icit] assa] using Artemia
salina s"o^ed no to,icit]*
M#
1 INTRODUO
4as 8ltimas d3cadas o uso irracional de antimicrobianos determinou o surgimento de
cepas de microrganismos multirresistentes! impulsionando a comunidade cient)ica pesquisa
nas ;reas de qumica! )armacologia e microbiologia para descoberta de novos agentes
antimicrobianos EC<COI4<= I=O&! #$$$_ M+CI<= et al.! #$$#_ 6&U7+ et al*! #$$0F*
=in"as de pesquisas tm sido desenvolvidas com ,ito por diversos pesquisadores! baseadas
nas propriedades antin)ecciosas e antiin)lamat?rias de muitas plantas de utili.ao consagrada
pela medicina popular e podero contribuir inovadoramente na teraputica antimicrobiana
EH+M+M&:& e &L+c+! #$$#_ O&=<:7 et al., #$$#_ 7+CCOI4& et al.! #$$0F* &s
produtos naturais so respons;veis direta ou indiretamente! por cerca de 2$ d de todos os
);rmacos disponveis na teraputica moderna e! se considerarmos os usados como antibi?ticos
e antitumorais! esta porcentagem pode c"egar a apro,imadamente J$ d E(OI==I(6&4! #$$$_
HU4<6 e C+=IW:&! #$$MF*
&s avanos constatados nos 8ltimos anos na ;rea da qumica medicinal e da biologia
molecular! possibilitaram o surgimento de novos alvos biol?gicos! passando de % mil para M$
a M% mil* + qumica combinat?ria permite sinteti.ar mil"ares de compostos em curto espao
de tempo! e t3cnicas de triagem em alta escala permitem que sejam testados mil"ares de
compostos simultaneamente E7+CCOI4& et al*! #$$MF* (rogramas computacionais au,iliam
na modelao de mol3culas ativas e a biotecnologia vem desenvolvendo novos );rmacos
recombinantes mais potentes e com ao seletiva em alvos moleculares bem de)inidos
E-+55<I5&! #$$MF*
<mbora a presena de subst[ncias antimicrobianas nos vegetais superiores no seja um
)ato recente! somente a partir da descoberta da penicilina 3 que esta busca teve grande impulso
E:+V+5<6! MUUI_ C&<=O& et al.! #$$2F* +s plantas possuem v;rias vias metab?licas
secund;rias que do origem a diversos compostos como alcal?ides! )lavon?ides!
iso)lavon?ides! taninos! cumarinas! glicosdeos! terpenos! poliacetilenos que! por ve.es! so
espec)icos de determinadas )amlias! gneros ou esp3cies! e cujas )un>es! at3 pouco tempo!
eram descon"ecidas EC&c+4! MUUU_ C=+5@< et al*! #$$M_ 6IMY<6 et al., #$$0_ 6&U7+
et al., #$$0F* Com o avano das pesquisas! )oram atribudas s re)eridas subst[ncias!
import[ncias relevantes nos mecanismos de de)esa das plantas contra seus predadores! sejam
)ungos! bact3rias! vrus! parasitas! insetos! moluscos ou animais superiores E=IM+! #$$M_
4I<5& et al.! #$$0F* +l3m disso! em determinadas circunst[ncias! algumas plantas
M0
superiores! podem )ormar subst[ncias de nature.a antimicrobiana! denominadas )itoale,inas*
<stas so produ.idas como resposta imediata a agress>es por )ungos! bact3rias! vrus ou
nemat?ides ou em )uno de determinados estmulos! como radia>es! agentes qumicos e
outras inj8rias EL4+4+M+4IC@+M! MUKM_ =IM+! MUUI_ HU4<6 et al.! #$$MF* +s plantas
produ.em e estocam grande n8mero de metab?litos secund;rios em diversas partes E)ol"as!
caules! ra.es! )lores! sementesF que so liberados para o meio ambiente! sendo que muitos
deles apresentam ao alelop;tica* + alelopatia tem sido de)inida como sendo a inibio da
germinao! crescimento ou metabolismo de uma planta em )uno da liberao de
subst[ncias qumicas org[ncias por outra planta! e 3 recon"ecida como importante mecanismo
ecol?gico e agrcola mel"orando a produtividade de col"eitas EM+=O<I5&6 et al*! #$$MF*
+ terapia para in)ec>es bacterianas e )8ngicas! particularmente em paciente
imunocomprometidos! representa um desa)io para pesquisadores e clnicos* &s );rmacos
disponveis esto AperdendoC para a resistncia que os microrganismos adquirem )rente ao uso
no racional e pouco seguro dos medicamentos ou devido a to,icidade que provocam* <studos
que contribuam na obteno de );rmacos naturais! seguros! est;veis! padroni.ados e e)icientes
podero servir como modelos para o desenvolvimento de mol3culas sint3ticas apropriadas
para a produo de antimicrobianos e)etivos e mais espec)icos contra bact3rias! )ungos!
"elmintos! proto.o;rios! vrus! ou ainda como antitumorais* <sta especi)icidade tamb3m
contribui para que se redu.am e)eitos colaterais e indesej;veis ao "ospedeiro! )ato este! que
muitas ve.es limita a terapia medicamentosa instituda aos pacientes*
M2
2 OB1ETIVOS
2.1 OB1ETIVO GERAL
+valiar a atividade antimicrobiana de )ra>es e compostos puros obtidos a partir do
e,trato das )lores da Acmela brasiliensis EWedelia paludosaF 6preng*
2.2 OB1ETIVOS ESPECIFICOS
#*#*M Determinar a Concentrao Inibit?ria e -actericida Mnima das )ra>es do
e,trato e compostos puros obtidos das )lores da Acmela brasiliensis EWedelia paludosaF
6preng*
#*#*# Determinar a Concentrao Inibit?ria e ungicida Mnima das )ra>es do e,trato
e compostos puros obtidos das )lores e planta inteira da Acmela brasiliensis EWedelia
paludosaF 6preng.
#*#*0 (ropor possvel mecanismo de ao antimicrobiana dos princpios ativos
e,trados das )ra>es das )lores da Acmela brasiliensis EWedelia paludosaF 6preng.
#*#*2 +valiar o potencial de to,icidade de e,tratos das )lores e de planta inteira da
Acmela brasiliensis EWedelia paludosaF 6preng pelo M3todo da Artemia salina.
M%
3 REVISO BIBLIOGRFICA
3.1 PLANTAS MEDICINAIS
<m muitas civili.a>es antigas! a origem das plantas medicinais est; relacionada ao
poder divino* 6egundo a mitologia "indu! quando o "omem surgiu na :erra! o Deus Indra
previu que os atos "umanos desarmGnicos podiam gerar males )sicos e doenas* (ediu ento
a -ra"ma! o sen"or absoluto! que insu)lasse nas plantas o poder de curar* & pedido de Indra se
reali.ou e )oi assim que as plantas / at3 ento todas semel"antes entre si / gan"aram uma
enorme diversidade de )ormas! aromas e virtudes teraputicas* + mitologia grega conta que
+polo! compadecido ante o so)rimento que as doenas tra.iam aos "omens! dotou as ervas de
poderes curativos e trans)eriu esse con"ecimento a seu )il"o +scl3pio Deus da medicina!
c"amado de <scul;pio pelos romanos E-&4:<M(&! MUU$F*
(ovos como os c"ineses! ;rabes! caldeus! egpcios! incas e muitos outros dominaram
Eno passadoF os segredos da ao das plantas sobre o organismo "umano* 4a Idade M3dia e na
<ra Moderna! as escolas m3dicas s? diplomavam aqueles que demonstrassem um pro)undo
con"ecimento sobre as plantas medicinais EHU4<6 et al*! #$$MF*
& )ato de a mat3ria viva ser constituda em 8ltima an;lise! dos mesmos elementos que
a mat3ria no viva! perturbou os cientistas e pensadores por um bom tempo* (or3m! a
observao da A)ora vitalC no s3culo WVIII! atribuda qumica org[nica Eteoria vitalistaF!
vislumbrou o incio da compreenso dos sistemas vivos' a e,istncia de um padro de
organi.ao inerente vida EC+(5+! MUUJ_ -I+V+::I! #$$MF*
(or volta de MUJ$! a &rgani.ao Mundial de 6a8de recon"eceu os bene)cios da
medicina c"inesa Eparadigma oriental base de e,tratos de plantasF! onde surgem pesquisas e
desenvolvimento de medicamentos obtidos de )ontes naturais* =evantamentos reali.ados no
perodo de MUKM a #$$# pela Anual Reports of Medicinal hemistry demonstraram que dentre
U$ novas subst[ncias com potencial )armacol?gico analisadas! IM delas eram derivados semi/
sint3ticos de plantas e eram oriundas de produtos naturais E6IW<= e (<CI4+==I! #$$#_
4<cM+4 et al., #$$0F*
+ medicina popular 3 rica em e,emplos de plantas utili.adas para os mais diversos
)ins! que substituem! muitas ve.es! a prescrio m3dica EMI:6CO<5 et al* MUKJF* Isto 3
justi)icado! em parte! pelo alto grau de aceitabilidade das plantas medicinais! bem como! a
grande disponibilidade destes recursos! di)erente do que ocorre com os medicamentos
MI
industriali.ados! que na maioria! dependem de tecnologia e mat3ria/prima e,ternas
E+M&5IM et al.! #$$0*F*
+ quantidade de plantas e,istente no planeta! recon"ecida sob o ponto de vista
cient)ico! situa/se entre #%$ a %$$ mil esp3cies! sendo que somente cerca de % d tm sido
estudas )itoquimicamente e uma porcentagem menor avaliadas sob os aspectos biol?gicos
EC<COI4<= I=O& e HU4<6! MUUK_ HU4<6 et al.! #$$MF* & valor da biodiversidade!
principalmente nas )lorestas tropicais! tem sido muito discutido pela ind8stria )armacutica!
devendo/se considerar ainda que os tratamentos baseados em produtos naturais so de uso
corrente por K$ d da populao mundial E9&HC<! MUU2_ -I+V+::I! #$$M_ 4<cM+4 et al*!
#$$0F* + pesquisa de novos agentes )armacologicamente ativos obtidos de plantas tem
permitido descobrir muitos );rmacos clinicamente 8teis para tratar muitas doenas* 4o -rasil
apenas Kd das esp3cies vegetais nativas )oram estudadas em busca de mol3culas bioativas
E+M&5IM et al.! #$$0F*
De acordo com Lri)o e 5osent"al EMUUJF! %J d dos M%$ medicamentos mais prescritos
pelos m3dicos cont3m no mnimo um componente derivado da diversidade biol?gica* +
&rgani.ao Mundial de 6a8de considera como b;sicos e essenciais cerca de #%$
medicamentos! sendo que MM d so e,clusivamente obtidos de plantas medicinais a partir de
)onte natural E4I<5& et al.! #$$0F* -iodiversidade re)ere/se ao n8mero e variedade de genes!
esp3cies! populao! comunidades e ecossistemas que prov3m base da vida no planeta*
<sp3cies tropicais tm grande valor por suas nature.as qumica! devida em parte! s condi>es
clim;ticas adversas e o ataque sem Atr3guaC dos seus predadores! desenvolvendo assim
proteo qumica contra predadores! parasitas e microrganismos! podendo ser interessante
)onte de subst[ncias para uso teraputico "umano* <specula/se que menos de M d do potencial
qumico oriundo da diversidade vegetal ten"a sido e,plorado at3 o momento E=IM+ et al*!
#$$M_ 4I<5& et al*! #$$0F*
-aseados no con"ecimento emprico sobre as propriedades teraputicas de algumas
plantas! desenvolveram/se alguns dos mais valiosos medicamentos utili.ados na medicina
cient)ica! como os digit;licos! quinina! mor)ina! atropina! aspirina! entre outros E6IMY<6 et
al*! #$$0F*
Dentre os v;rios e,emplos demonstrando a import[ncia dos estudos com plantas!
podemos destacar a pilocarpina! alcal?ide isolado de gnero !ilocarpus E+4D5+D< 4<:&!
MUKUF! empregado na preparao de uns dos poucos );rmacos usados no combate do glaucoma
EM+:&6! MUU$F! a capsaicina e,trada de apsicum sp** com ao anest3sica! a colc"icina
MJ
e,trada da olchicum autumnale com agente anti/reum;tico EHU4<6 et al*! #$$M_ 4I<5& et
al*! #$$0F* Como agentes cardiovasculares citam/se os e)eitos ben3)icos dos e,tratos de
"igitalis purp#rea e "igitalis lanata que levaram descoberta de glicosdeos cardacos como
a digo,ina e a digito,ina EC=+5@! MUUIF! um antiarrtmico e a quinidina! isolada da
inchona sp** e ainda a reserpina isolada da Rau$olfia sp** com potente ao anti/"ipertensiva
E-+55<:&! #$$M_ 4I<5& et al.! #$$0F*
In8meros alcal?ides apresentam propriedades centrais! sobretudo derivados ind?licos
que ocorrem em plantas utili.adas pelos amerndios e por povos a)ricanos como bebidas
sagradas em )estas pags com propriedades alucin?genas* Dentre elas a iboimbina isolada da
Tabernanthe iboga! que apresenta propriedades a)rodisacas e apresenta similaridade
estrutural com a serotonina_ a "uper.ina/+ isolada da erva rasteira %uper&ia serratae e a
galantamina isolada da 'alantus ni(alis utili.adas para o tratamento da doena de +l."eimer_
a bicuculina isolada da "icentra cucullaria com emprego em neuro)armacologia_ a "ipericina
um dos componentes do e,trato alcool?lico de %ypericum perforatum com propriedades
antidepressivas E-+55<:&! #$$MF*
+ contribuio das plantas medicinais na ;rea da oncologia! podem ser reiteradas com
a citao dos alcal?ides vimblastina e vincristina e,tradas de atharanthus roseus! utili.ados
no tratamento de lin)omas e leucemias_ o ta,ol! diterpeno isolado de plantas do gnero Ta)us
que se encontra disponvel no mercado )armacutico e vem demonstrando e)eitos positivos
em pessoas portadoras de c[ncer! principalmente de carcinoma ovariano e pulmonar_ a
camptotecina! alcal?ide e,trado da amptotheca acuminata E@I4L6:&4! MUUM_ O&5cI:7!
MUU2_ -+55<:&! #$$M_ 4I<5& et al*! #$$0F* &utros agentes que comp>em o arsenal
teraputico no combate ao c[ncer so derivados semi/sint3ticos de compostos e,trados das
plantas como do doceta,ol! derivado do ta,ol e apresenta maior solubilidade e o dobro da
potncia do composto natural_ irinotecano usado no tratamento do c[ncer ovariano e cervical_
o etoposdeo e tenoposdeo derivados sint3ticos da podo)iloto,ina e,trada do ri.oma da
!odophyllum peltatum E4I<5& et al.! #$$0F* &s )lavonodes apresentam atividade antic[ncer
sendo demonstrada sua import[ncia na alimentao EcI=O<=M I=O& et al*! #$$M_
CO&cDOU5H et al*! #$$#F*
&s terpen?ides e compostos ester?ides so largamente distribudos no reino vegetal e
e,ibem distintas propriedades )armacol?gicas* <ntre outras a>es! os terpen?ides que ocorrem
naturalmente! apresentam propriedades antiin)lamat?rias e antinoceptivas! inibem a agregao
plaquet;ria e inter)erem a nvel intracelular em v;rios passos do mecanismo de transduo
EC+=IW:& et al.! MUUK_ #$$$F* & isolamento e identi)icao de v;rios terpenos com e)eito
MK
antinoceptivo! antin)lamat?rio! antimicrobiano! antiparasit;rio! tripanomicida! larvicida!
"ipoglicemiante tem sido demonstrado em estudos preliminares* & ;cido cauren?ico!
componente da Acmela brasiliensis 65<4L E+6:<5+C<+<F anteriormente con"ecida por
Wedelia paludosa 3 um diterpeno que apresenta os e)eitos citados E-=&C@ et al.! MUUK a!b_
-5<6CI+4I et al*! #$$$_ 6+5:&5I et al*! #$$0_ -5<6CI+4I et al*! #$$2F* &utras plantas
como a Annona glabra E&=IV<I5+ et al*! #$$#F! marrubin! a )uranolactona diterpeno da
Marrubium (ulgare! )olidotin e #2/metilenocicloartenal isolado do Epidendrum mosenii!
moretenona e glutinol! isolado da Sebastiana schottiana EL+<5:4<5 et al.! MUUUF! f/
am]rin e g/ am]rin da Aleurites moluccana EM<H5</6I=V+ et al.! MUUKF! iquigoside M da
Rubus imperialis E4I<5& et al.! MUUUF e,ibiram signi)icativa ao antinoceptiva no ensaio
com ;cido ac3tico! )ormalina e testes de capsacina EC+=IW:& et al., #$$$F* :erpenos
polio,igenados do e,trato da ;rvore 'in*go biloba! os gin`goldeos apresentam importantes
propriedades anti/tromb?ticas entre outras E-+55<:&! #$$MF*
<studos preliminares tm demonstrado que v;rios )lavon?ides possuem relevantes
a>es biol?gicas que previnem acidentes vasculares! sendo utili.ados pela ind8stria
)armacutica na preparao de agentes vasodilatadores como a diosmina e a rutina* &utros
)lavon?ides como a quercetina e luteolina so abundantes na nature.a e produ.em
signi)icativa resposta antin)lamat?ria! antinoceptiva quando testados com ;cido ac3tico!
)ormalina e capsacina EC+=IW:& et al.! #$$$F! al3m de atividade antimicrobiana
E6CO<=<M(<5 et al*!MUUK_ 6+5:&5I et al*! #$$0F! "ipoglicemiante E4&V+<6 et al*!
#$$MF*
&s )lavon?ides tamb3m tm demonstrado atividade antio,idante sendo amplamente
encontrados nos alimentos de origem vegetal! como )rutas! vegetais! sementes! )lores e )ol"as!
)a.endo parte da dieta "umana* +s o,ida>es biol?gicas reali.adas atrav3s do o,ignio
molecular representam a principal )onte de energia utili.ada pela maioria de plantas
E)otossnteseF e animais Erespirao mitocondrialF* <stas rea>es bioqumicas se desenvolvem
de tal maneira que geram produtos secund;rios! na ordem de # d dos produtos )inais EO
#
& e
C&
#
F* <stes intermedi;rios da reduo parcial do o,ignio so con"ecidos como esp3cies
reativas de o,ignio E<5&F e possuem reatividade qumica mais acentuada que o o,ignio
molecular* &s radicais <5& so' o [nion super?,ido E&
#
/
F! o per?,ido de "idrognio EO
#
&
#
F! o
radical Ee&OF! o radical 5&&/F e o o,ignio singlete E&
#
F e )a.em parte do processo de
lipopero,idao E-&V<5I6 et al.! #$$$_ cI=O<=M et al.! #$$M_ 6I=V+ et al.! #$$#F*
Lrande interesse tem sido voltado para o papel das <5& na etiologia de v;rias
doenas* +s propriedades antio,idantes dos )lavon?ides tm! assim! atrado a ateno para a
MU
nutrio preventiva! pois eles protegem os constituintes alimentares contra o dano o,idativo!
podendo contribuir na preveno de patologias! como doenas cardiovasculares!
envel"ecimento! c[nceres e outras ECO&cDOU5H et al*! #$$#_ 6CO5&<D<5/V+4 D<5
<=6: et al.! #$$0_ U<D+ et al.! #$$2F* <,istem relatos de que os )lavon?ides e,ibem e)eitos
biol?gicos! tais como! ao antimicrobiana! antiviral! antimalaria! antiin)lamat?ria!
antial3rgica e vasodilatadora! e capacidade neuroprotetora EO+4+6+@I et al*! MUU2_
-&V<5I6 et al*! #$$$_ (OI==I(6&4! #$$$_ D+9+6 et al.! #$$0F* +l3m disso! inibem in
(itro a pero,idao lipdica! a agregao plaquet;ria! a permeabilidade capilar! a )ragilidade
capilar! e a atividade de en.imas! como ciclo/o,igenase e lipoo,igenase E-&V<5I6 et al*!
#$$$F* &s )lavon?ides e,ercem esses e)eitos como antio,idantes! seqhestradores de <5&!
quelantes de c;tions divalentes e como seqhestrantes de pero,initrito E(<5<7/L+5CI+ et
al*! #$$$_ HU4<6 e C+=IW:&! #$$MF*
<,tratos naturais de misturas "erb;ceas tm sido usados empiricamente "; mil"ares de
anos no tratamento de processos in)ecciosos* +lguns tm demonstrado propriedades
bacteriost;ticas! no destruindo as bact3rias! mas impedindo/as de se multiplicarem com
conseqhente diminuio da possibilidade de ocorrncia de muta>es bacterianas EC+(5+!
MUUJ_ (OI==I(6&46! #$$$F* Muitos estudos esto voltados para o potencial antimicrobiano
das plantas medicinais como o diterpeno bi)lorina isolado das ra.es de apraria biflora_ o
triterpeno maitenina isolado de esp3cies das )amlias Velasteraceae e Oippocrateacae_ primina
e miconidina isolado da Miconia sp*_ alcal?ides como anonana e isoboldina da Annona
sa&mani E=IM+! #$$MF e )ilantimida isolada de !hyllanthus sello$ianus_ )lavon?ides como
luteolina E6CO<=<M(<5 et al*! MUUK_ 6+5:&5I et al.! #$$0F_ ,anto,ilina constituinte da
Sebastiana schottiana! e,tratos de !olygonum sp* e +anthium sp* com signi)icativa ao
anti)8ngica E7+CCOI4& et al.! MUUKF* + relev[ncia destes compostos dentro da )armacologia
3 devida s a>es analg3sicas! antiespasm?dicas! antibacterianas! anti)8ngicas!
antiparasit;rias! antiviral sendo que a correlao entre o uso popular e a atividade
)armacol?gica positiva para os agentes antimicrobianos 3 de %%!# d E-5I:&! MUU0_ =IM+!
#$$MF*
#$
3.2 ATIVIDADE ANTIMICROBIANA
&s trabal"os relacionados atividade antimicrobiana de plantas tiveram incio na
d3cada de MU2$* <m MU20! &sborn! pesquisando a atividade de #*0$$ plantas superiores contra
Staphylococcus aureus e Escherichia coli! veri)icou que plantas pertencentes a I0 gneros
contin"am subst[ncias que inibiam o crescimento de um ou de ambos os microrganismos*
<mbora v;rios estudos ten"am avaliado e con)irmado as propriedades antimicrobianas em
di)erentes e,tratos contra bact3rias Lram positivas e Lram negativas E(<D<56&4! MU22F!
veri)icou/se tamb3m! que outros e,tratos estimulavam de modo acentuado! o crescimento de
Bacillus subtillis e Escherichia coli E6+4D<56! MU2%F*
4o -rasil! as pesquisas sobre subst[ncias antimicrobianas de origem vegetal tiveram
incio com Cardoso e 6antos EMU2KF que avaliaram e,tratos de M$$ di)erentes plantas!
indicadas em teraputica como antiin)lamat?rias ou cicatri.antes* Destas! apenas cinco
e,tratos apresentaram atividade inibit?ria contra Staphylococcus aureus, Escherichia coli e
!roteus W/MU*
+ partir de MU%$ )oram isolados os primeiros compostos de esp3cies vegetais' o
diterpeno bi)lorinina! e o triterpeno maitenina* &utros compostos )lavon?ides com
propriedades antimicrobianas e)etivas contra Staphylococcus aureus resistentes a meticilina
EM56+F )oram isolados! como a primina! a miconidina! lapac"ol e derivados! a plumbagina! a
,anto,ilina! )ilantimida! luteolina! mirecetina EWU e =<<! #$$M_ 7+CCOI4& et al., #$$MF*
Com relao aos anti)8ngicos! pesquisa/se );rmacos com alvos espec)icos! para
diminuir a to,icidade! j; que c3lulas )8ngicas e "umanas so semel"antes e compartil"am de
muitas vias metab?licas intermedi;rias! onde "; en.imas similares* +s pesquisas! no que
tange aos anti)8ngicos! buscam inibidores da biossntese do ergosterol! da inibio das
topoisomerases ou ainda da parede celular )8ngica E7+CCOI4& et al*! #$$MF*
3.3 BACTRIAS
-act3rias so c3lulas procari?ticas uni ou pluricelulares! com organi.ao celular
relativamente simples* +presentam taman"o em m3dia de M a # \m por M a 2 \m! com
membrana citoplasm;tica EILU5+ MF sem ester?ides apresentando cadeias de
peptidoglicanos que vo in)luenciar na )orma da bact3ria dependendo do taman"o destas
cadeias e da quantidade de interliga>es e,istentes entre os peptidoglicanos* + membrana
#M
nuclear est; ausente e o ;cido deso,irribonucl3ico ED4+F 3 uma macromol3cula em )orma de
dupla )ita circular! com comprimento de apro,imadamente M*M$$ nm! altamente empacotada*
&s ribossomos J$6 esto distribudos no citoplasma E:5+-U=6I et al*! MUUUF* (odem ser
autotr?)icas E)otossint3ticas ou quimiossint3ticasF ou "eterotr?)icas Esapr?)itas e parasitasF*
+ parede celular das bact3rias Lram positivas so compostas de apro,imadamente
U$ d de peptidoglicanos di)erindo das Lram negativas que 3 mais comple,a E:5+-U=6I et
al*! MUUUF*
&s agentes antimicrobianos podem in)luenciar sobre a parede celular eX ou membrana
celular! sobre a atividade en.im;tica ou estrutura do protoplasma! bloqueando certas rea>es
en.im;ticas ou snteses de en.imas na c3lula microbiana! podendo levar a destruio desses
microrganismos E5+4L et al*! MUUJ_ :5+-U=6I et al*! MUUUF*
3.3.1 Membrana citoplasmtica bacteriana
<strutura de apro,imadamente K nm de espessura! respons;vel pela separao do
citoplasma Emeio internoF com o meio e,terno* N composta de I$ d de protenas imersas em
uma bicamada )os)olipdica E2$ dF! variando entre di)erentes esp3cies bacterianas e condi>es
de cultivo* &s ;cidos gra,os dos lipdios so respons;veis pela condio "idro)?bica da
poro interna da membrana enquanto a parte "idro)lica dos mesmos )ica e,posta ao meio
e,terno aquoso* +l3m das intera>es "idro)?bicas e pontes de "idrognio! c;tions como Mg
i#
e Ca
i#
so respons;veis pela manuteno da integridade da membrana E-+5&4 e
I4<L&=D! MUU$F*
Como )un>es da membrana plasm;ticas tm/se E-+5&4 e I4<L&=D! MUU$_
6CO+<CO:<5 et al.! #$$#F'
M/ :ransporte de solutos e + membrana plasm;tica atua como barreira altamente seletiva!
por3m! mol3culas "idro)licas polares como ;cidos org[nicos! amino;cidos e sais minerais
no conseguem passar livremente pela membrana e portanto so transportados com o
au,lio de Aprotenas de transporte de membranaC* + maioria das protenas envolvidas no
transporte est; locali.ada ao longo da membrana com por>es e,postas tanto ao
citoplasma como ao meio e,terno* +trav3s de mudana con)ormacional na protena! o
soluto que se ligou do lado e,terno 3 liberado para o lado interno* <ste mecanismo de
transporte que envolve protena transportadora e que ocorre sempre a )avor de gradiente!
denomina/se di)uso )acilitada* &s solutos tamb3m podem ser transportados contra um
##
gradiente de concentrao! sendo necess;rio gasto energ3tico* <sta energia pode ser obtida
de compostos com liga>es )os)ato como o )os)oenolpiruvato! ou outra reao que libere
energia na c3lula ocorrendo de duas maneiras' ou por transporte ativo onde a subst[ncia a
ser transportada se liga a um carreador utili.ando +:(! ou por translocao de grupo onde
a subst[ncia 3 alterada quimicamente durante a passagem pela membrana E)os)orilao da
mol3culaF*
#/ (roduo de energia por transporte de el3trons e )os)orilao o,idativa envolvendo
citocromos e en.imas da cadeia de transporte de el3trons*
0/ -iossntese / en.imas de sntese de lipdios da membrana e outras macromol3culas que
comp>em estruturas e,ternas membrana Epeptidoglicanos! ;cidos teic?icos!
lipopolissacardeos e polissacardeos e,tracelularesF ligada membrana citoplasm;tica*
Depois de sinteti.adas! as macromol3culas so permeadas ao lado e,terno por canais
denominados de jun>es de -a]er* <stes prolongamentos da membrana ligam/se
membrana e,terna de bact3rias Lram negativas estabelecendo contato entre o citoplasma e
o limite e,terno da c3lula*
2/ Duplicao do D4+
5- 6ecreo / a membrana secreta en.imas "idrolticas que rompem macromol3culas que
sero )ontes de nutriente*
3.3.2 Parede Celular
N respons;vel pela manuteno da )orma bacteriana e desempen"a papel na diviso
celular* +s bact3rias Lram positivas e Lram negativas apresentam di)erenas marcantes sendo
relevante ao estudo dos mecanismos de ao dos quimioter;picos e patogenicidade* + rigide.
da parede celular 3 devida a uma camada composta de peptidoglicanos* 4as Lram positivas
esta camada atinge de M% d a %$ d da massa seca da c3lula e nas Lram negativas no
ultrapassa % d* + )orma da c3lula 3 determinada pelo comprimento das cadeias de
peptidoglicano e pela quantidade de interliga>es e,istentes entre estas cadeias E-+5&4 e
I4<L&=D! MUU$_ 5+4L et al*! MUUJF*
&s agentes antimicrobianos se di)undem com mais )acilidade atrav3s da parede celular
das Lram positivas! por3m devem atravessar os canais de porinas nas Lram negativas
E-+5&4 e I4<L&=D! MUU$F*
#0
+s propriedades da parede nas bact3rias Lram positivas so' )acilitar a ligao e
regulao da entrada e sada de c;tions na c3lula_ regular a atividade das autoli.inas durante o
processo de diviso celular_ constituir stios receptores de bacteri?)agos_ servir de stio de
ligao com o epit3lio do "ospedeiro_ e! devido presena de antgenos celulares possibilita
identi)icao sorol?gica de esp3cies bacterianas E-+5&4 e I4<L&=D! MUU$_ :5+-U=6I
et al.! MUUU_ 6CO+<CO:<5 et al.! #$$#F*
FIGURA 1 / !arede celular de bact,rias 'ram positi(as e 'ram negati(as e detalhe das
porinas das 'ram negati(as.
onte' -aron! #$$%*
3.3.3 Bactrias Gram positivas
Staphylococcus aureus
<sta)ilococos so cocos Lram positivos da )amlia Micrococcaceae! catalase positivos*
&s esta)ilococos so amplamente encontrados na nature.a e )a.em parte da microbiota normal
da pele e mucosa* & gnero Staphylococcus 3 composto por cerca de #J esp3cies! sendo
algumas delas causadoras de in)ec>es de car;ter oportunista em seres "umanos e animais!
como o S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus e S. haemolyticus* Um marcador de
patogenicidade destes microrganismos 3 a capacidade de coagular o plasma E:5+-U=6I et
al*! MUUU_ @&4<M+4 et al*! #$$MF*
#2
& Staphylococcus aureus 3 a esp3cie que geralmente est; envolvida em in)ec>es
piognicas "umanas tanto de origem comunit;ria como "ospitalar! locali.adas na pele
E)oliculites! )urunculose! impetigo! p8stulas ou abscessos cut[neosF ou em regi>es mais
pro)undas Eosteomielites! bacteremias! endocardite! pneumonia e to,in)ec>es alimentaresF*
+tualmente! a esp3cie coagulase negativa! tamb3m tem sido respons;vel por in)ec>es graves
em pacientes imunocomprometidos! ou submetidos a implantes de orteses e pr?teses! nos
ambientes "ospitalares E5+4L et al.! MUUJ_ 6CO+<CO:<5 et al.! #$$#F*
& tratamento de escol"a para in)ec>es esta)iloc?cicas 3 a penicilina para amostras
sensveis! por3m! o surgimento e disseminao de amostras resistentes! atribudo produo
de en.imas denominadas penicilinases ou betalactamases! codi)icadas por genes plasmidiais!
vem limitando a utili.ao deste );rmaco* :amb3m )oi detectado o aparecimento de
resistncia ao uso de meticilina e outras penicilinas semi/sint3ticas Eo,acilina! na)cilina!
clo,acilinaF ap?s dois anos do incio do seu uso! resistncia esta! relacionada s protenas
ligadoras de penicilinase E(-(F! sendo que seus determinantes gen3ticos parecem ser
cromossomais* +tualmente! no caso de in)ec>es graves com Staphylococcus aureus
meticilino resistente! as alternativas teraputicas so os glicopeptdeos Evancomicina!
teicoplaminaF! mas que j; "; relatos de cepas pan resistentes E:5+-U=6I et al*! MUUU_ MIM6
et al.! MUUU_ +4c+5 e -&@O+5I! #$$0F*
Staphylococcus saprophyticus
<sta esp3cie pode ser encontrada na microbiota normal da pele e regio periuretral do
"omem e da mul"er! sendo pat?geno oportunista em in)ec>es do trato urin;rio* 6ua
patogenicidade parece estar relacionada a sua capacidade de se aderir s c3lulas do trato
urin;rio E:5+-U=6I et al*! MUUU_ @&4<M+4 et al*! #$$MF*
Streptococcus agalactiae
&s estreptococos pertencem )amlia 6treptococcaceae* <sto amplamente
distribudos na nature.a E;gua! vegetao! leites e derivadosF! )a.em parte da microbiota
normal! mas muitas esp3cies so respons;veis por uma variedade de mani)esta>es clnicas
E:5+-U=6I et al*! MUUUF*
& Streptococcus agalactiae comporta os estreptococos do grupo - classi)icao de
=ance)ield* 6o encontrados na microbiota normal em vias a3reas superiores! trato intestinal e
vagina* 6ua import[ncia clnica! nos 8ltimos anos! tem sido ressaltada devida ser agente
etiol?gico de meningites! septicemias e pneumonias em neonatos* Staphylococcus agalactiae
#%
so regularmente sensveis a penicilinas! com concentra>es inibit?rias mnimas mais altas
que as encontradas para o Staphylococcus pyogenes! ce)alosporinas! eritromicina e
cloran)enicol EMIM6 et al.! MUUU_ 6CO+<CO:<5 et al.! #$$#F*
Bacillus cereus
& gnero Bacillus compreende bacilos Lram positivos anaer?bios )acultativo
)ormadores de esporos! pertencentes )amlia -accilaceae* + import[ncia clnica do Bacillus
cereus 3 a de ser respons;vel por into,ica>es alimentares! podendo tamb3m participar de
in)ec>es cut[neas acompan"adas de necrose ou gangrena! bacteremia e septicemia e mais
raramente pneumonias! meningites! in)ec>es oculares! etc* E5+4L et al*! MUUJ_ :5+-U=6I
et al*! MUUUF*
3.3.4 Bactrias Gram negativas
Escherichia coli
& gnero Escherichia pertence )amlia <nterobacteriaceae! sendo bacilos Lram
negativos! m?veis ou no* a.em parte da microbiota intestinal! tornando/se patognico em
locali.a>es e,tra intestinais ou mesmo intestinais* <m meio de cultivo <M- E<osina +.ul de
MetilenoF! apresenta colGnias esverdeadas! com bril"o met;lico e geralmente com centro mais
escuro* <sta esp3cie compreende grande n8mero de grupos e tipos sorol?gicos! identi)icados
com anti/soros preparados com trs tipos de antgenos que ocorrem na esp3cie' &! @ e O* &s
sorogrupos que so encontrados na microbiota intestinal podem causar in)ec>es urin;rias!
meningites e septicemia e outros tipos de in)eco* (rovavelmente! nen"uma outra esp3cie
bacteriana 3 to vers;til em sua patogenicidade como a E. coli* Com relao s in)ec>es
intestinais! "; pelo menos seis categorias con"ecidas' Escherichia coli enteroinvasora E<I<CF!
Escherichia coli enteroto,icognica E<:<CF! Escherichia coli enteropatognica E<(<CF!
Escherichia coli entero/"emorr;gica E<O<CF! Escherichia coli enteroagregativa E<agg<CF!
Escherichia coli que adere di)usamente ED+<CF E:5+-U=6I et al*! MUUU_ MIM6 et al.! MUUU_
-+5&4 e I4<L&=D! MUU$_ +4c+5 e -&@O+5I! #$$0F*
#I
Proteus sp.
& gnero !roteus inclui !roteus mirabilis e !roteus (ulgaris sendo encontrados
regularmente nos intestinos do "omem* Causam in)ec>es principalmente no trato urin;rio
sendo a primeira causa de in)ec>es comunit;rias e a segunda associada a in)ec>es
"ospitalares* <stes microrganismos "idrolisam ur3ia )ormando amGnia! tornando assim a urina
dos pacientes com in)ec>es crGnicas muito alcalinas! )ato que )avorece )ormao de c;lculos
renais devido diminuio da solubili.ao do c;lcio* -act3rias do gnero !roteus
apresentam resistncia natural as polimi,inas! um grupo de antibi?tico bastante ativo contra as
demais enterobact3rias e outros Lram negativos E:5+-U=6I et al*! MUUU_ +4c+5 e
-&@O+5I! #$$0F*
Salmonella sp.
+ classi)icao atual divide este gnero em duas esp3cies! baseando/se nas
caractersticas bioqumicas' Salmonella enterica! que est; subdividida em seis subesp3cies! e
Salmonella bongori* 6o microrganismo no )ermentadores da lactose e apresentam colGnias
incolores e transparentes no meio de cultura MacCon`e] E@&4<M+4 et al*! #$$MF* 4a rotina
clnica! a identi)icao baseia/se no esquema @au))mann e c"ite! que divide o gnero em
tipos sorol?gicos! baseando/se na composio antignica das 6almonelas com relao aos
seus antgenos & Esom;ticoF! Vi EcapsularF e O E)lagelarF* & "omem 3 o 8nico reservat?rio
natural de Salmonella typhi e Salmonella paratyphi +! - e C* + patogenicidade das
salmonelas varia de acordo com o tipo sorol?gico! idade e condi>es de sa8de do "ospedeiro*
+ capacidade invasora das salmonelas 3 um processo comple,o! envolvendo tanto genes
cromossomais como plasmidiais* +s in)ec>es por Salmonella so geralmente autolimitadas!
sendo que o uso de agentes antimicrobianos al3m de no acelerar a recuperao do paciente
pode selecionar cepas resistentes* 4os casos de complica>es sistmicas e na )ebre ti)?ide
utili.a/se ampicilina! cloran)enicol ou sul)ameto,a.ol/trimetoprima! tanta na )ase aguda da
doena como para tratamento de portadores E:5+-U=6I et al*! MUUU_ MIM6 et al.! MUUU_
6CO+<CO:<5 et al.! #$$#F*
Enterobacter sp.
6o anaer?bios )acultativos! )ermentam glicose e lactose como )onte de carbono!
produ.indo g;s! em meio de cultivo espec)ico )ormam colGnias grandes! muc?ides e r?seas
transparentes com o centro amarron.ado sem bril"o met;lico* <ste gnero tem tido crescente
import[ncia como microrganismo causador de in)ec>es "ospitalares! sendo que alguns
#J
pacientes "ospitali.ados apresentam bacteremia decorrente da aplicao endovenosa de
lquidos contaminados E-+5&4 e I4<L&=D! MUU$_ :5+-U=6I et al*! MUUUF*
Pseudomonas sp.
& gnero compreende grande n8mero de esp3cies! sendo que U$ d dos isolamentos
das amostras clnicas correspondem a !seudomonas aeruginosa! !seudomonas malthophilia e
!seudomonas cepacia! sendo a primeira respons;vel por J$ d das in)ec>es* Uma das
caractersticas da esp3cie 3 a capacidade de produ.ir um pigmento a.ul/esverdeado!
denominado piocianina e pioverdina* + !seudomonas aeruginosa "abita solo! ;gua e vegetais!
podendo ser encontrada tamb3m na pele! )e.es! garganta em 0 a % d dos indivduos normais*
<m pacientes "ospitali.ados a coloni.ao pode ser bastante elevada* <ste microrganismo
causa in)ec>es tipicamente oportunistas! em processos cir8rgicos! queimaduras! p?s
cateteri.ao urin;ria! pneumonias principalmente ap?s procedimentos de entubao! podendo
resultar em bacteremias severas* + identi)icao do microrganismo 3 )eita atrav3s de suas
caractersticas bioqumicas e produo de pigmento das cepas isoladas do material
proveniente do processo in)eccioso* + !seudomonas sp 3 naturalmente resistente aos
antimicrobianos betalact[micos e as tetraciclinas! cloran)enicol! clotrimo,a.ol e outros* N
sensvel aos aminoglicosdeos e algumas penicilinas semi/sint3ticas EcarbenicilinaF E-+5&4
e I4<L&=D! MUU$_ :5+-U=6I et al*! MUUU_ @&4<M+4 et al*! #$$M_ 6ITU<I5+ et al.!
#$$#F*
3.4 FUNGOS
& atual interesse no desenvolvimento de novos agentes anti)8ngicos pode ser
parcialmente e,plicado pelo aumento acentuado do n8mero de casos de 6ID+ e subseqhente
supresso do sistema imune em pacientes doentes* (or e,emplo! mais de U$ d dos
diagn?sticos de OIV/positivos adquirem uma in)eco )8ngica durante o curso da doena* <m
particular! algumas )ormas de dermatomicoses so causa de grande morbidade em pacientes
recebendo quimioterapia antineopl;sica! transplantados e nos e,tremos de idade como idosos
e neonatos E+5M6:5&4L et al*! MUKU_ 6<=I:5<44I@& et al*! MUU#_ c+=6O et al.!
MUU#_ 6CO=<M(<5 et al. MUUK_ -=&C@ et al.! MUUKb_ (OI==I(6 et al.! #$$M_ =+C+7 et
al.! #$$#F <stas in)ec>es so produ.idas por um grupo de )ungos que caracteristicamente
in)ectam ;reas queratini.adas do corpo e )reqhentemente so de di)cil erradicao! sendo que
#K
novos e e)etivos agentes anti)8ngicos t?picos so necess;rios E7+CCOI4& et al*! MUUK_ #$$M_
(OI==I(6 et al.! #$$MF*
Uma das mais promissoras )ontes de pesquisa! para novos compostos biol?gicos ativos
so plantas usadas na medicina tradicional! muitas delas ainda no investigadas do ponto de
vista da composio qumica ou de sua atividade )armacol?gica E7+CCOI4& et al.! MUUK_
#$$M_ U5-I4+ et al*! #$$$_ 6+5:&5I et al*! #$$0F*
3.4.1 Dermatfitos
4o passado as in)ec>es )8ngicas eram classi)icadas como micoses super)iciais!
subcut[neas e pro)undas* & advento da terapia antimicrobiana de amplo espectro e a
utili.ao de );rmacos imunossupressores e citot?,icos para tratamento de patologias
metab?licas crGnicas e neopl;sicas trou,eram uma mudana etiol?gica entre os )ungos
pat?genos e AcontaminantesC! )a.endo com que a classi)icao das micoses )osse revista
EI6O<5 e C&&@! #$$MF*
+ :abela M abai,o apresenta uma classi)icao das micoses que mais )reqhentemente
acometem o "omem! especialmente pacientes imunocomprometidos*
&s )ungos causadores de micoses pro)undas so sempre pat?genos e potencialmente
capa.es de produ.ir en)ermidades graves* &s agentes )8ngicos como Aspergillus fumigatus ou
membros dos gneros -ygomycetes E!hycomycetesF! .ocardia e andida, antes considerados
contaminantes com pouca import[ncia clnica! so atualmente recon"ecidos como causadores
de patologias generali.adas e at3 )atais para o "ospedeiro submetido a imunosupresso
Ec+=6O et al.! MUU#_ I6O<5 e C&&@! #$$M_ =+C+7 et al.! #$$#F*
&utros )ungos ambientais! como Scopulariopsis, /usarium e ladosporium! antes no
recon"ecidos como causadores de doenas! so "oje considerados agentes etiol?gicos
ocasionais de endocardites! queratinites mic?ticas e outras en)ermidades broncopulmonares
al3rgicas como a sndrome pulmonar de granjeiros* +lgumas destas esp3cies produ.em
tamb3m a)lato,inas! que podem provocar transtornos gastrointestinais ou mani)esta>es
neurol?gicas ao serem ingeridas por "omens e animais Ec+=6O et al.! MUU#_ @&4<M+4 et
al.! #$$#F*
#U
TABELA 1 / Classi)icao das micoses "umanas mais comuns*
MICOSES
PROFUNDAS
MICOSES
OPORTUNISTAS
MICOSES
SUBCUTANEA
MICOSES
SUPERFICIAIS
-lastomicoses +ctinomicosesj +ctinomicosesj Dermatomicoses
:inea capitis
:inea corporis
:inea cruris
:inea pedis
:inea versicolor
Coccidioidomicoses +spergiloses Cromomicoses
Criptococoses Candidase Maduromicoses
Oistoplasmoses Leotricoses 4ocardiosesj
(aracoccidiodomicoses
Eblastomicoses
sulamericanaF
<sporotricoses
01s membros da fam2lia Actinomycetaceae, incluindo os g3neros Actinomyces e .ocardia, s4o
considerados atualmente bact,rias e s4o classificados dentro da ordem Schi&omycetes.
onte' @oneman! #$$M*
3.5 ANTIMICROBIANOS
& uso de subst[ncias qumicas e derivadas de plantas 3 to antigo quanto a
"umanidade! mas somente com o crescente desenvolvimento da alquimia a partir do s3culo
WVI! as drogas medicinais passaram a serem obtidas por m3todos laboratoriais* Inicialmente!
)oram testados os )en?is! cres?is! )ormol e outras subst[ncias qumicas! as quais se
comportaram de )orma e)iciente na destruio dos microrganismos! por3m de )orma no
seletiva! restringindo assim seu uso na teraputica antiin)ecciosa devido a to,icidade que
provocam c3lula "ospedeira* + pesquisa planejada condu.iu descoberta das primeiras
subst[ncias que utili.adas em doses adequadas! eram capa.es de destruir os microrganismos
sem destruir a vida "umana E:+V+5<6! MUK2_ MIM6 et al., MUUU_ :5+-U=6I et al., MUUUF*
<vidncias do uso do quinino e,trado de )ol"as das ;rvores de c"inc"ona! pelos ndio
peruanos! para o tratamento de malaria! de outras subst[ncias e,tradas de bolores com ao
antibacteriana e anti)8ngica pelos c"ineses para o tratamento de doenas in)ecciosas e
subst[ncias isoladas de plantas )oram a emetina utili.ada contra amebase e a ipecacuan"a
utili.ada no tratamento de diarr3ias E:+V+5<6! MUK2_ 4I<5& et al*! #$$0F! datam de 0$$$
anos atr;s* &s sum3rios recomendavam emplastros com uma mistura de vin"o! cerveja!
.imbro e amei,a E5+4L et al.! MUUJF e estes tratamentos marcam o incio da quimioterapia
0$
bem sucedida E5+4L et al.! MUUJ_ 4<U e L&&:7! #$$2F*
+ moderna quimioterapia teve incio na +leman"a com (aul <"rlic" com o uso de p/
rosanilina para tratamento de tripanosomase e ars)enamina contra s)ilis! postulando que seria
possvel encontrar agentes qumicos que )ossem seletivamente t?,icos para parasitas e no
t?,icos para seres "umanos*
+ partir dos trabal"os de (asteur e @oc" em MKJK! )icaram demonstradas as origens
in)ecciosas das en)ermidades que acometiam "omens e animais E:+V+5<6! MUK2_ 5+4L
et al.! MUUJ_ MIM6 et al., MUUUF*
<m MU0$! Ler"ard Domag` descobre os e)eitos protetores do prontosil! precursor das
sul)onamidas* + descoberta da penicilina por +le,ander leming em MU#K! deu incio a era da
antibioticoterapia* & advento da antibioticoterapia contribuiu com um aumento da e,pectativa
de vida de v;rias doenas in)ecciosas! antes de di)cil tratamento e de alta mortalidade
E6CO+<CO:<5 et al*! #$$#F* & isolamento da penicilina L ocorre em MU0U na Universidade
de &,)ord por lore] e colaboradores! marcando o incio de seu uso teraputico E4<U e
L&&:7! #$$2F* + quimioterapia sul)amdica e a penicilina impulsionaram as pesquisas e
comearam a surgir por sntese org[nica ou biossntese! novas subst[ncias ou );rmacos com
espectro de ao no s? para bact3ria! mas tamb3m com atividade anti)8ngica que atuavam
por via t?pica ou sistmica em diversas micoses E=+C+7 et al*! #$$#F*
<m MU22! ca`sman isolou a estreptomicina e subseqhentemente descobriu/se agentes
como o cloran)enicol! tetraciclinas e eritromicina em amostras do solo* (or volta de MUI$!
com o desenvolvimento de t3cnicas de )ermentao e o avano da qumica medicinal
permitiram a sntese de in8meros agentes quimioter;picos por modi)icao molecular dos
compostos j; e,istentes E4<U e L&&:7! #$$2F*
+s rea>es adversas aos medicamentos antimicrobianos so restrio importante ao
seu uso teraputico* (ara ameni.ar estes e)eitos adversos! procura/se estudar compostos que
apresentem seletividade de ao* & trimetropim 3 um medicamento que atua no bloqueio da
en.ima catalisadora da sntese de ;cido )?lico* 4a concentrao de $!$$% mM! o trimetropim
inibe apenas a en.ima presente na bact3ria E5+4L et al*!MUUJ_ 6CO+<CO:<5 et al., #$$#F*
& uso abusivo e indiscriminado da penicilina para o tratamento das in)ec>es
bacterianas trou,e a constatao de que algumas patologias no cediam ao seu uso* &bservou/
se tamb3m que alguns microrganismos que anteriormente eram sensveis estavam tornando/se
resistentes EMIM6 et al*! MUUU_ =IM+! #$$MF*
0M
3.5.1 Classificao dos agentes antimicrobianos
3.5.1.1 Agentes Antibacterianos
+ classi)icao dos antibacterianos segue diversos crit3rios como estrutura qumica!
mecanismo de ao! espectro de ao entre outros E5+4L et al.! MUUJ_ MIM6 et al*! MUUU_
6CO+<CO:<5 et al., #$$#F*
6egundo o mecanismo de aos os grupos de agentes antimicrobianos! podem ser
classi)icados em'
+F Inibidores da 6ntese de (arede Celular -acteriana
+ parede celular bacteriana de Lram positivos cont3m peptidoglicanos! ;cido tic?ico e
teicurGnico e as bact3rias podem estar rodeadas por protenas ou envelope de polissacardeos*
-act3rias Lram negativas cont3m na parede celular peptidoglicanos! lipopolisacarideos!
lipoprotenas! )os)olipdeos e protenas* & stio de ataque dos agentes que agem contra a
parede celular 3 a camada de proteo de peptidoglicano que reveste a membrana celular
bacteriana* &s antibi?ticos que agem sobre a sntese da parede celular atuam produ.indo uma
parede com de)eitos estruturais atuando sobre o processo de replicao celular causando dano
ou perdas nesta camada destruindo a rigide. da parede celular e resultando na morte celular*
<sta ao 3 seletiva! visto que as c3lulas dos "ospedeiros mam)eros no apresentam parede
celular (5+4L et al.! MUUJ_ MIM6 et al.! MUUU)*
a) ;rmacos que inibem a biossntese de en.imas / os)omicina! Cicloserina*
bF ;rmacos que combinem com substratos da parede celular e Vancomicina*
cF ;rmacos que combinem com carreadores de mol3culas e -acitracina*
dF ;rmacos que inibem a polimeri.ao e compresso de novos peptidoglicanos parede
celular / (enicilinas! Cepalosporinas! Carbapenens! Monobactans*
-F Inibidores da Membrana Citoplasm;tica
+ membrana citoplasm;tica esta locali.ada abai,o da parede celular e circunda o
citoplasma* +presenta dupla camada lipdica E00 d de lipdeosF com elevado conte8do de
protenas EII dF! estando os lipdeos com seus grupos polares orientados para )ora e as
cadeias apolares voltadas para o interior da membrana e possuem permeabilidade seletiva que
controla a passagem de subst[ncias e nutrientes para dentro da c3lula e a sada de catab?litos
dela E6CO+<CO:<5 et al*! #$$#F*
0#
&s antibi?ticos que atuam por altera>es )sico/qumicas da membrana citoplasm;tica
assemel"am/se aos detergentes catiGnicos! graas a presena em sua mol3cula de grupamentos
b;sicos 4O
0
i
e de uma cadeia lateral de ;cido gra,o* Tuando alcanam a membrana
citoplasm;tica! o ;cido gra,o mergul"a na sua parte lipdica e a poro b;sica permanece na
super)cie* + intercalao das mol3culas do antibi?tico na membrana provoca sua
desorgani.ao alterando sua permeabilidade seletiva com a sada de elementos vitais c3lula
como )os)atos! ons! purinas e ;cidos nucl3icos ou a entrada de subst[ncias nocivas ao
metabolismo bacteriano! resultando em morte celular E5+4L et al.! MUUJ_ :5+-U=6I et al*!
MUUUF*
+ morte da c3lula bacteriana pode ocorrer por danos ao sistema respirat?rio da c3lula!
e por altera>es nos constituintes resultando em uma m; )ormao da membrana
E6CO+<CO:<5 et al., #$$#F* (odem ser classi)icados como'
aF ;rmacos que desorgani.am a membrana citoplasm;tica / :irociclinas! (olimi,inas*
bF ;rmacos que produ.em poros na membrana / Lramicidinas*
cF ;rmacos que alteram estrutura dos )ungos / (olienos E+n)otericinaF*
d) Imida.?is / Cetocona.ol! lucona.ol (MIM6 et al.! MUUU_ 4<U e L&&:7! #$$2F*
CF Inibidores da 6ntese de Bcidos 4ucl3icos
+gentes antimicrobianos podem inter)erir em di)erentes nveis na sntese de ;cidos
nucl3icos* + inibio pode ser da sntese de nucleosdeos ou interconverso* (ara iniciar a
sntese de D4+ 3 necess;ria a ativao pr3via de uma en.ima para produ.ir o desenrolar da
dupla )ita de D4+ e introdu.ir uma superespiral negativa* <sta en.ima 3 a D4+/girase ou
topoisomerase II! e a polimerase pode inter)erir na replicao e transcrio do D4+*
E:5+-U=6I et al*! MUUU_ 6CO+<CO:<5 et al*! #$$#F*
aF Inibidores do metabolismo de nucleotdeos e +denosina arabinose EvrusF! aciclovir
EvrusF! lucitosina E)ungosF*
bF +gentes que prejudicam a )uno do D4+ e +gentes intercaladores! Cloroquina
EparasitasF*
cF Inibidores da replicao do D4+ e Tuinolonas! 4itroimida.?is*
d) Inibidores da 54+ polimerase e 5i)ampicina E5+4L et al.! MUUJ_ 4<U e L&&:7!
#$$2F*
00
DF Inibidores da )uno dos ribossomas'
+lguns agentes se ligam ao ribossoma 0$6 e parecem inibir a ligao do aminoacil/
t54+ no stios dos ribossomas bacterianos! outros inibem a subunidade %$6 ribossomal onde
inibe a )ormao do peptdeo por ligao a en.ima peptidiltrans)erase no ribossoma %$6 ou
rea>es de translocao*
aF Inibidores da Unidade 0$6 e <streptomicina! Canamicina! Lentamicina! +micacina!
<spectinomicina! :etraciclinas*
bF Inibidores da Unidade %$6 e Cloran)enicol! Clindamicina! <ritromicina! Bcido
)usdico*
<F Inibidores do Metabolismo dos olatos'
+gentes que inter)erem com o metabolismo de )olato na c3lula bacteriana por
competividade bloqueando a biosntese da tetra"idro)olato! o qual atua como carreador de
)ragmentos do carbono e um e 3 necess;rio para o t3rmino da sntese do D4+! 54+ e
protenas da parede celular*
aF Inibidor da sntese do ;cido pter?ico e 6ul)onamidas*
bF Inibidores da di"idro)olato redutase e :rimetoprim*
3.5.1.2 Agentes Antifngicos
&s anti)8ngicos e,istentes no mercado atualmente possuem limita>es teraputicas!
principalmente quando se levam em considerao os e)eitos colaterais como a ne)ro e a
"epatoto,icidade* <ntre alguns e,emplos de anti)8ngicos que apresentam e)eitos t?,icos cita/
se a an)otericina -! e o cetocona.ol* & )ato de alguns anti)8ngicos apresentarem ao
)ungist;tica e no )ungicida Ea.?isF! podem contribuir para o surgimento de cepas resistentes*
E5+4L et al.! MUUJ_ 7+CCOI4& et al*! #$$0F*
Muitos dos );rmacos atualmente disponveis apresentam e)eitos colaterais
indesej;veis! e)ic;cia duvidosa contra )ungos reemergentes! ou desenvolvem uma r;pida
resistncia sendo necess;rio urgentemente uma nova gerao de agentes anti)8ngicos* +s
pesquisas esto orientadas na investigao de );rmacos anti)8ngicos! que possam atuar
seletivamente na c3lula )8ngica sem inibir nen"um sistema bioqumico do "ospedeiro*
02
FIGURA 2 / Representa54o da estrutura da parede celular f#ngica
onte' 6elitrenni`o))! #$$M
&s )ungos possuem paredes celulares EILU5+ #F! sendo uma estrutura essencial para
eles! di)erentemente das c3lulas dos mam)eros! e este )ato )a. com que todos os sistemas
en.im;ticos que )a.em parte da sntese e montagem da parede celular )8ngica se trans)ormem
em alvo 8til para o descobrimento e desenvolvimento de novos );rmacos anti)8ngicos com
maior especi)icidade Ec+=6O et al*! MUU#_ 6<=I:5<44I@& et al.! MUU%_ =V(<7 et al.!
#$$M_ 7+CCOI4& et al.! #$$M_ 6<=I:5<44I@&* #$$MF* In)eli.mente! as c3lulas )8ngicas
e "umanas apresentam muitas semel"anas* Compartil"am a maioria das vias de metabolismo
intermedi;rio! utili.ando en.imas muito similares no sendo );cil encontrar alvos que
o)eream a seletividade requerida para obter/se um anti)8ngico seguro* &s alvos que
apresentam maior possibilidade de levar a anti)8ngicos seletivos so os inibidores da
biossntese do ergosterol! a inibio das topoisomerases )8ngicas e a inibio da parede celular
)8ngica EU5-I4+ et al.! #$$$_ 7+CCOI4& et al.! #$$M_ =+C+7 et al*! #$$#F*
+ parede celular )8ngica como alvo e,tremamente 8til para detectar anti)8ngicos
seletivos e! portanto no t?,icos para o "ospedeiro! surgiu recentemente* 9; que a parede
celular )8ngica 3 uma barreira protetora! evita sua ruptura osm?tica e l"e con)ere )orma! 3
0%
essencial para seu crescimento e viabilidade* <la 3 constituda por muitos componentes
macromoleculares! entre eles g/glicanos! quitina! manoprotenas e outras protenas* Uma ve.
sinteti.ados! eles interagem entre si! via uma s3rie de en.imas associadas parede! reali.ando/
se liga>es cru.adas! rami)ica>es e outras )un>es* :rs atividades en.im;ticas tm
demonstrado serem essenciais para a )ormao da parede celular )8ngica' M!0 g/glicano
sintetase! M!I g/glicano sintetase e quitina sintetase que catalisam a )ormao de M!0 e M!I/g/
glicanos e quitina respectivamente! sendo portanto! alvos atrativos para o descobrimento de
novos );rmacos anti)8ngicos E7+CCOI4& et al.! #$$0F*
+pesar dos inibidores da biossntese do ergosterol terem demonstrado uma grande
seletividade! eles podem inibir vias comuns de biossntese de ester?ides "umanos! o que os
tornam potencialmente t?,icos* + investigao de anti)8ngicos seletivos 3 direcionada para a
inibio da etapa de adio de um grupo metil no C/#2 da cadeia lateral dos ester?ides* &
mecanismo de ao do doador do grupo metil 3 a 6/adenosil metionina* + etapa da biossntese
do ergosterol! como a #2 metilao! no C/#2 da cadeia lateral dos ester?ides 3 uma das ;reas
mais promissoras da investigao de anti)8ngicos seletivos! j; que no ocorre nas c3lulas dos
mam)eros! redu.indo as c"ances de to,icidade EILU5+ 0F*
+s topoisomerase I )8ngicas so su)icientemente di)erentes das "umanas! logo tamb3m
podem ser alvos promissores para novos anti)8ngicos* & D4+ celular! tanto cromossomal
como plasmdico! encontra/se como um crculo )ec"ado covalentemente que pode estar em
estruturas topol?gicas di)erentes! rela,ado ou superenovelado* +s D4+/topoisomerases so
um grupo de en.imas capa.es de catali.ar a interconverso entre ambas as )ormas topol?gicas!
permitindo que o mesmo cumpra suas )un>es de transcrio! traduo ou recombinao
dentro da c3lula* <stas en.imas! rompendo transitoriamente uma das cadeias do D4+
Etopoisomerase tipo IF ou as duas Etopoisomerase tipo IIF e logo as rela,ando! permite as
trans)orma>es topol?gicas que seriam de outra )orma impossveis EC+5D<4+6 et al.! MUUU_
7+CCOI4& et al.! #$$M_ #$$0F*
+s D4+/topoisomerases mostraram ser alvos moleculares importantes para o
descobrimento de );rmacos antibacterianos e anticancergenos* 6eus e)eitos citot?,icos
parecem vir da estabili.ao do comple,o cataltico intermedi;rio que se )orma entre a
topoisomerase e o D4+! impedindo o rela,amento da espiral de D4+* <sta estabili.ao
desencadeia um processo descon"ecido que causa a morte celular* <studos demonstram que
v;rias topoisomerases I e,tradas de )ungos seriam alvos promissores para novos agentes
anti)8ngicos mais seletivos E7+CCOI4& et al.! #$$0F*
0I
&s agentes anti)8ngicos podem ser classi)icados em duas categorias' os que a)etam a
membrana celular e os que atuam intracelularmente! interrompendo processos celulares vitais!
como sntese de D4+! 54+ ou protenas E6CO+<CO:<5 et al*! #$$#F*
+nti)8ngicos podem atuar inibindo a biossntese do ergosterol EILU5+ 0F* <m uma
rota sint3tica que inicia com a acetilcoen.ima +! so envolvidas v;rias en.imas at3 a
)ormao do ergosterol para )ungos e o colesterol para animais* &s anti)8ngicos que atuam
nessa rota! in)eli.mente inibem en.imas que so comuns para a )ormao tanto do ergosterok
quanto colesterol* Devido a essa no seletividade desses agentes! a sntese do colesterol em
mam)eros acaba sendo interrompida! provocando e)eitos colaterais como inibio de sntese
"ormonal EU5-I4+ et al*! #$$$_ 7+CCOI4& et al*! #$$0F*
Como e,emplos de drogas que a)etam a membrana celular podem citar os derivados
polinicos! e derivados imida.?licos* <stas subst[ncias combinam/se com ester?is da
membrana! rompendo a mesma ou tornando/a incapa. de e)etuar suas )un>es normalmente
Epermeabilidade e transporteF* + droga )orma um poro na membrana e o centro "idr?)ilo da
mol3cula criam um canal iGnico transmembrana*
(odem ocorrer altera>es na permeabilidade celular e causar a perda de constituintes
essenciais das c3lulas como @
i
! a8cares! protenas! )os)atos inorg[nicos! ;cidos carbo,licos
e 3steres de )os)ato E5+4L et al*! MUUJ_ :5+-U=6I et al*! MUUUF*
0J
FIGURA 3 / Bioss2ntese do ergosterol e do colesterol. 1s 6uadros 7 direita das flechas
mostram as en&imas 6ue participam nesta etapa da bioss2ntese. 1s 6uadros 7 es6uerda das
flechas mostram inibidores destas en&imas
onte' 7acc"ino! #$$M
0K
3.6 Acmela brasiliensis SPRENG (Wedelia paludosa) (ASTERACEAE)
3.6.1 Caractersticas gerais
Acmela brasiliensis 6preng! anteriormente classi)icada como Wedelia paludosa! 3
pertencente )amlia das +steraceae EILU5+ 2F* N planta "erb;cea! prostrada! radicante nos
n?s! possuindo ra.es bastante super)iciais_ caules cilndricos de #/% mm de largura e at3 # m
de comprimento! verde ou castan"o avermel"ado! esparsamente piloso e com ramos
espor;dicos! )ol"as simples! opostas curto peciolada! membran;cea! com base regularmente
atenuada! dois pequenos lobos laterais agudos! ;pice agudo e margens irregularmente
denteadas! comprimento at3 K cm por 2 cm de largura! verde escura e super)cie bril"ante na
)ace ventral! mais clara e pilosa na )ace dorsal_ pecolo semicilndrico! ciliado! com 2mm de
comprimento_ captulos isolados! # e 0 cm de di[metro! com ped8nculo piloso! )ino e reto!
c"egando a M$ cm de comprimento a partir de uma a,ila )oliar_ br;cteas involucrais )oli;ceas!
verdes! em duas s3ries! K e M# mm de comprimento! pilosas no dorso_ "erma)roditas! com
corla tubulosa! abrindo/se em % lobos com min8sculos plos! tamb3m amarelos_ androceu
com anteras lineares! negras! de bases sagitada_ gineceu com estilete de ramos glabros!
carnosos! obtusos! semicilndricos e um estigma b)ido_ aqunio trqueto! glabro! estreitado na
base! com ciati)ormes de M mm de comprimento EC&55l+! MUK2_ @I66M+44 e L5&:O!
MUUM/MUU#F*
FIGURA 4 / lor da Acmela brasiliensis 6preng
0U
<sta planta! nativa do -rasil! 3 amplamente encontrada em v;rias regi>es do pas!
incluindo o estado de 6anta Catarina* &corre de )orma espont[nea! principalmente em praias e
;reas 8midas* Muitas ve.es 3 cultivada para cobertura de barrancos e margens de camin"os e
como ornamental! pois )orma um vasto Acolc"oC verde com vistosas )lores amarelas
EILU5+ 2F durante quase todo o ano! mais pronunciadamente no vero E@I66M+44 e
L5&:O! MUUM/MUU#_ C&55l+! MUK2_F*
Acmela brasiliensis 6preng 3 con"ecida popularmente como margarido! mal/me/
quer/do brejo! pingo/de/ouro! vedelia! entre outras EC&55l+! MUK2F* <studos desenvolvidos
no 48cleo de Investiga>es Tumico/armacuticas da U4IV+=I com esta planta indicaram
que a mesma produ. v;rios compostos de interesse medicinal* &s e,tratos brutos
apresentaram a>es antibacterianas! analg3sicas! antiespasm?dicas! antiin)lamat?rias e
"ipoglicemiantes EC&5D<I5& et al.! MUUK_ 6CO=<M(<5 et al.! MUUK_ -=&C@ et al.! MUUK_
C<COI4<= I=O&! #$$$_ -5<6CI+4I et al*! #$$$! #$$2F* &s principais constituintes ativos
)oram identi)icados como sendo a luteolina EM&=I4+5I et al.! MUUJF! ;cido cauren?ico
EO+4D+ et al.! MUU#_ 4&V+<6 et al*! #$$MF e uma lactona c"amada paludolactona
EC<COI4<= I=O& et al*! #$$2F*
3.6.2 Estudos fitoqumicos de Acmela brasiliensis (Wedelia paludosa) Spreng.
<studos )itoqumicos anteriores com planta Acmela brasiliensis 6preng demonstraram
o isolamento e identi)icao de alguns compostos! como o ;cido cauren?ico e alguns de seus
derivados E5&TU< et al.! MUKJ_ C+5V+=O& et al.! MUU%_ -+:I6:+ et al.! MUUI_
-5<6CI+4I et al.! #$$$! #$$0! #$$2F! duas lactonas sesquiterpnicas Eeudesmanolide lactona
M e eudesmanolide lactone #F E<55<I5+ et al.! MUU2_ C<COI4<= I=O& et al*! #$$2F! o
0g/&/acil/olean/M#/en/#K/ol! o estigmasterol! glicosdeos de estimasterol 3steres ali);ticos!
uma mistura de 0g/D/glicopiranosilsitosterol e 0g/D/glicopiranosilestigmasterol
EC+5V+=O& et al., MUU%_ C+5V+=O& et al*! #$$MF e )riedelan/0g/ol E-+:I6:+ et al.!
MUUUF*
+ an;lise )itoqumica indicou que as ra.es apresentam a maior concentrao de
terpen?ides! enquanto as )lores produ.em di)erentes )lavon?ides que no so encontrados nas
outras partes da planta E-=&C@ et al* MUUKF* Um destes )lavon?ides )oi identi)icado como a
c"alcona coreopsina E5&D5ILU<6 et al.! MUUKF*
2$
3.6.2.1 Terpenos
& ;cido cauren?ico 3 o principal composto da planta e possui di)erentes atividades!
tais como antibacteriana EcI=@<46 et al.! #$$#F! anti)8ngica E6+5:&5I et al*! #$$0F
larvicida! tripanosomida E-+:I6:+ et al*! MUUUF e antinociceptiva E-=&C@ et al*!MUUKF* N
tamb3m um potente estimulador da contrao uterina* + an;lise do per)il cromatogr;)ico por
O5LCXID EOig" 5esolution Las C"romatograp"] lame Ioni.ation DetectionF! de di)erentes
partes da Acmela brasiliensis 6preng Era.! caules! )ol"as! )loresF na )rao "e,ano!
demonstrou que a maior concentrao do ;cido cauren?ico est; nas ra.es EI!I% mgXg da
planta secaF E-5<6CI+4I et al.! #$$$F* <ste estudo con)irma estudos anteriores em
Cromatogra)ia em Camada Delgada ECCDF E-=&C@ et al*!MUUKF* & ;cido cauren?ico )oi
identi)icado por co/injeo de amostra autntica de ;cido cauren?ico* Veri)icou/se que ";
outros compostos! comuns em todas as )ra>es! presumivelmente um diterpeno do tipo
caureno! ainda no identi)icado* :amb3m observou/se v;rios picos! os quais )oram
identi)icados como uma mistura de ester?is ou triterpenos! incluindo estigmasterol! acetato g/
amirina e ;cido olean?lico E-5<6CI+4I et al.! #$$$! #$$0F*
+ estrutura molecular do ;cido cauren?ico EILU5+ %F mostra que como outros
caurenos pertence classe dos diterpenos os quais possuem um esqueleto tetracclico rgido*
<les so intermedi;rios da biossntese das giberelinas! os quais so "ormGnios de crescimento
de v;rias plantas! alguns metab?litos de )ungos e de alcal?ides triterpenos ELUI6+=-<5:I!
MUUJF* Bcido <nt/MI/`auren/MU/oico ou ;cido cauren?ico 3 um dos mais importantes
membros desta )amlia! com in8meras propriedades biol?gicas j; citadas E-5<6CI+4I et al.!
#$$#F*
FIGURA 5 e Estrutura molecular do terpen8ide 9cido cauren8ico
2M
&s terpen?ides so sinteti.ados de unidades acetato e dividem origem com os ;cidos
gra,os di)erindo destes por serem cclicos*
3.6.2.2 Flavonides
6o con"ecidos cerca de 2 mil )lavon?ides naturais e em geral so encontrados nas
)ra>es mais polares! como acetato de etila EagliconasF e butan?lica E)lavon?ides glicosadosF*
+lguns compostos apolares! como a luteolina! so e,trados com cloro)?rmio ou
diclorometano E4I<5&! #$$$F*
+ luteolina! como mostra sua estrutura molecular EILU5+ IF! 3 um )lavon?ide
presente nas )ol"as e )lores da A. brasiliensis 6preng. lavon?ides so subst[ncias )en?licas
"idro,iladas! mas ocorrem unidas ao CI/C0 e ligadas ao anel arom;tico*
FIGURA 6 e Estrutura molecular do fla(on8ide luteolina
Dados encontrados na literatura demonstram o isolamento de estigmasterol nas )lores
de Acmela brasiliensis 6preng EC+5V+=O& et al.! MUU%F* +trav3s da cromatogra)ia em
camada delgada comparativa com e,tratos das di)erentes partes da planta! utili.ando uma
amostra autntica do )lavon?ide luteolina e revelada com eCl0! demonstraram que este
)lavon?ide est; presente nas )ol"as e )lores e ausente nas ra.es e caules* Compostos de
nature.a )en?lica tamb3m )oram detectados por CCD nas )ol"as e )lores com 5) pr?,imo ao
da isoquercitina utili.ada como amostra autntica E-=&C@ et al.! MUUJ_ -5<6CI+4I et al.!
#$$$F*
&s )lavon?ides so con"ecidos por serem sinteti.ados por plantas em resposta a
in)ec>es microbianas! justi)icando assim sua ao antimicrobiana )rente a v;rios
microrganismos* <sta atividade se d; provavelmente devido a "abilidade de comple,ao com
a parede bacteriana* &s )lavon?ides mais lipo)licos podem lisar a membrana microbiana*
&s )lavon?ides tm grupos "idro,il sobre seu anel - o que aumenta mais sua atividade
contra microrganismos! do que as )lavonas com grupo e&O no ligados ao anel* <ste )ato
2#
pode levantar a "ip?tese de que o mecanismo de ao seja em alvos na membrana plasm;tica*
Compostos lipo)licos podem interromper a estrutura da membrana microbiana e a maior
"idro,ilao do composto pode levar a maior atividade antimicrobiana por aumento de
to,icidade aos microrganismos EC&c+4! MUUUF*
&s compostos )en?licos "idro,ilados atuam possivelmente por inibio de en.imas
atrav3s de rea>es com grupos sul)idrilas e por intera>es inespec)icas com protenas! embora
no ten"a sido comprovada uma relao entre o grau de "idro,ilao e a atividade t?,ica
EcI=O<=M I=O& et al*! #$$MF*
3.6.3 Estudo Analtico - Cromatografia em camada delgada
+ e,trao dos constituintes de plantas 3 um processo de tentativa acertoXerro
utili.ando/se parti>es em solventes de polaridades di)erentes sob variadas condi>es de
tempo e temperatura de e,trao e eluio*
+ Cromatogra)ia em Camada Delgada ECCDF 3 um m3todo 8til para separao!
identi)icao e quanti)icao de compostos antimicrobianos em um cromatograma de um
e,trato bruto ou semipuro! permitindo o isolamento bioguiado do composto ativo* + CCD 3
um m3todo )sico de separao! na qual os compostos a serem separados so distribudos entre
duas )ases! uma )ase )i,a / slica gel! de grande ;rea super)icial! denominada )ase estacion;ria
e outra! onde um )ludo elui atrav3s dela! c"amada )ase m?vel* Utili.a/se para )ase m?vel
solventes com polaridades crescentes EC<COI4<= I=O& et al*! #$$$F*
3.6.4 Estudos biolgicos de Acmela brasiliensis (Wedelia paludosa) Spreng
&s modelos de avaliao de atividade biol?gica utili.ada para investigao de plantas
medicinais )a.em parte da pesquisa e desenvolvimento de um novo medicamento desde
ensaios laboratoriais! triagens! testes pr3/clnicos e clnicos! aprovao em ?rgos
competentes! mar`eting at3 a comerciali.ao E6&U7+! #$$0F*
Considerando os e)eitos )armacol?gicos e biol?gicos demonstrados pela Acmela
brasiliensis 6preng e seu uso na medicina popular! incentiva que seja )eito um controle de
qualidade dos e,tratos das plantas*
20
4o estudo da avaliao de atividade analg3sica )oram utli.ados modelos
)armacol?gicos de dor utili.ados muldialmente e validados internacionalmente como modelos
de dor indu.ida quimicamente em animais para avaliao da atividade antinoceptiva a nvel de
sitema nervoso central e peri)3rico! como os testes das contor>es abdominais indu.idas pelo
;cido ac3tico_ modelo de dor indu.ido pela )ormalina que permite avaliar se a dor 3 de origem
neurogncia por estimulao direta dos neurGnios nociceptivos ou de origem in)lamat?ria
representando a resposta tGnica dor! acompan"ada de uma resposta in)lamat?ria relacionada
a liberao de mediadores qumicos_ teste de dor indu.ida pela capsaicina que procura analisar
a possvel ao modulat?ria sobre a dor de origem neurogncia! onde pode/se evidenciar a
possvel interao dos compostos em estudo sobre os neuropeptdeos envolvidos na
transmisso dolorosa* Modelos de dor indu.ida termicamente como o teste da placa quente ou
modelos de dor indu.ida mecanicamente como o teste da presso das patas / 5andal / 6elito
E-=&C@! MUUK_ 6&U7+ et al*! #$$0F*
-resciani et al. E#$$$_ #$$2F avaliaram a concentrao do ;cido cauren?ico como
importante composto com atividade analg3sica e "ipoglicemiante* <studos demonstram que a
)rao "e,[nica da Acmela brasiliensis 6preng! apresentou signi)icante e)eito
"ipoglicemiante! promovendo uma reduo de #I!2J d da glicemia* & composto majorit;rio
presente nesta )rao que poderia estar e,cercendo o e)eito antidiab3tico seria o ;cido
cauren?ico E-5<6CI+4I et al., #$$2F*
& composto puro luteolina mostrou per)il )armacol?gico analg3sico quando
administrada via intraperitoneal! com DI%$ de #I!# mgX`g para a segunda )ase de dor no teste
de )ormalina* + luteolina )oi cerca de cinco ve.es mais e)etivo do que a aspirina e
paracetamol usados como comparao! con)irmando o uso popular no tratamento de processos
dolorosos e in)lamat?rios E4I<5&! #$$$F* Um estudo comparativo envolvendo as di)erentes
partes da planta E)lores! caules! )ol"as e ra.esF demonstrou que apenas o e,trato das )lores
no )oi e)etivo no combate a dor produ.ida pelo ;cido ac3tico em camundongos E-=&C@ et
al*!MUUKF*
&s )lavon?ides! por serem compostos )en?licos! agem como potentes antio,idantes e
)ormam quelatos com metais* (ossuem atividade contra vrus! bact3rias! )ungos e so
utili.ados na alimentao e desenvolvimento animal* 6o con"ecidos como produtos de
sntese das plantas em resposta a in)ec>es microbianas! e tem sido considerada subst[ncia
e)etiva em sua ao antimicrobiana contra um largo n8mero de microrganismos patognicos*
6ua atividade 3 provavelmente devido a sua capacidade de )ormar comple,os e,tracelulares e
22
solubili.ar proteinase! bem como! comple,ar com parede celular bacteriana* lavon?ides mais
lipo)licos podem tamb3m romper membranas microbianas EC&c+4! MUUUF*
& mecanismo de ao de atividade antimicrobiana dos terpenos ainda no 3 totalmente
compreendido! mas especula/se que envolva a ruptura da membrana celular por compostos
lipo)licos EC&c+4! MUUUF* + avaliao da atividade antimicrobiana Acmela brasiliensis
6preng )oi reali.ado em ensaios microbiol?gicos in (itro! onde so selecionados e utili.ados
cepas catalogadas EpadroF de gneros e esp3cies de bact3rias e )ungos patognicos!
oportunistas e sapr?)itas E6CO=<M(<5! MUUK_ 7+CCOI4&! #$$M_ 6+5:&5I et al.! #$$0_
6&U7+ et al.! #$$0F*
4as avalia>es das atividades biol?gicas da planta tamb3m )oram reali.ados ensaios de
citoto,idade com o composto ;cido cauren?ico contra c3lulas tumorais "umanas! no
apresentando citoto,icidade EOUI et al.!MUKUF*
3.7 ENSAIOS DE ATIVIDADE ANTIMICROBIANA
3.7.1 Estudos Microbiolgicos - Mtodos de diluio
&s m3todos de diluio in (itro detectam possveis atividades antimicrobianas de
compostos! utili.ando m3todos celulares sem alvo espec)ico* & ensaio para determinao da
concentrao inibit?ria mnima ECIMF 3 obtido atrav3s da macrodiluio que consiste em se
preparar dilui>es sucessivas do antimicrobiano a ser testado! em meios de cultura s?lidos ou
lquidos! semear a bact3ria ou )ungo em estudo e ap?s incubao veri)icar a menor
concentrao Emaior diluioF do antimicrobiano que inibiu o crescimento do microrganismo*
Determina/se a CIM! como sendo a menor concentrao que inibe o crescimento do
microrganismo* <ste m3todo apresenta a vantagem de ser quantitativo! podendo ser usado!
tanto para amostras "idrossol8veis! como lipossol8veis EMI:6CO<5 et al*! MUJ#_ 5I&6 et al.!
MUKKF*
2%
3.7.2 Ensaio de toxicidade da Artemia salina
Artemia salina 3 um microcrust;ceo de ;gua salgada que 3 utili.ado como alimento
vivo para pei,es* + simplicidade do bioensaio )avorece sua utili.ao rotineira E6ITU<I5+ et
al*! #$$MF*
& bioensaio com larvas de Artemia salina 3 utili.ado para testar a to,icidade de
in8meras subst[ncias e e,tratos de plantas )armacologicamente ativos! de modo a )acilitar o
isolamento biol?gico destes compostos e avaliar sua to,icidade* & teste de to,icidade atrav3s
do uso do microcrust;ceo Artemia salina serve como uma )erramenta 8til para um estudo
preliminar biomonitorado dos e,tratos de plantas sendo tamb3m sugestivo como triagem da
atividade )armacol?gica E6ITU<I5+ et al*! #$$M_ C+5V+=O& et al*! #$$#F* N um m3todo
r;pido! con)i;vel e barato para determinao de to,icidade E6ITU<I5+ et al*! #$$M_
(+H5&= et al*! #$$MF*
3.7.3 Avaliao da atividade antifngica das fraes e compostos obtidos das
flores da Acmela brasiliensis (Wedelia paludosa) Spreng por inibio de parede celular
& bioensaio da .eurospora crassa permite detectar inibidores da parede! por3m! no
se consegue de)inir qual das etapas de sntese da parede celular )8ngica que estariam sendo
inibidas* & bioensaio est; baseado nas seguintes premissas' quando esto em presena de
inibidores da parede! os )ungos so)rem mal)orma>es de suas "i)as ELU49I et al.! MUK0_
U@U6OIM+ et al.! MUU0_ 7+CCOI4& et al., #$$0F! por3m na presena de um suporte
osm?tico como sorbitol! um )ungo pode crescer a uma concentrao muito mais alta de
inibidor de parede que quando o sorbitol no est; presente! "avendo lise da parede E5&6: et
al.! MUU%F* 4o m3todo de di)uso em agar usando .. crassa! os inibidores de parede so
detectados porque produ.em "alos de inibio manc"ados ao redor dos discos! devido
presena de protoplastos sobreviventes* &s compostos anti)8ngicos que no atuam por este
mecanismo produ.em "alos claros EU@UD+ et al.! MUUM_ 7+COI4& et al*! #$$MF*
2I
4 MATERIAIS E MTODOS
4.1 Preparao dos extratos e compostos puros de Acmela brasiliensis (Wedelia
paludosa)
oram )ornecidas para o desenvolvimento desta pesquisa! quatro )ra>es distintas'
Oe,ano Er* Oe,F! Diclorometano Er* DCMF! +cetato de <tila Er* +c<tF e -utanol Er*
-u&OF! obtidas a partir do e,trato metan?lico bruto E<M-F das )lores da planta Acmela
brasiliensis 6preng! coletada na regio de lorian?polisX6C! no ms de maio de MUUK e
preparadas pela Dr
a
* =ouisiane * -resciani! na 3poca aluna do Curso de (?s/graduao de
Tumica EDoutoradoF! do Departamento de Tumica do Centro de Cincias sicas e
Matem;ticas da Universidade ederal de 6anta Catarina EU6CF e co/orientada pelo
(ro)*Dr*Valdir Cec"inel il"o E-5<6CI+4I! #$$0F*
&s compostos puros )oram obtidos a partir das )ra>es semipuri)icadas atrav3s de
procedimentos cromatogr;)icos usuais! como cromatogra)ia em coluna ECCF e cromatogra)ia
em camada delgada ECCDF! EC<COI4<= I=O& e HU4<6! MUUKF cujo desenvolvimento )oi
no Departamento de Tumica da U6C* + ILU5+ J demonstra a representao esquem;tica
da obteno dos e,tratos de planta medicinais*
FIGURA 7 / Es6uema geral para obten54o de e)tratos diretamente de plantas medicinais
orientados para an:lise biol8gica.
onte' Cec"inel il"o e Hunes! #$$M
2J
PLANTA
Fr. Hex Fr. DCM Fr. AcEt Fr. BuOH
EBM
Macerao com Me&O
EM$ diasF e evaporao
do solvente
6uspenso em ;gua e
partio sucessiva
4.2 Cromatografia em Camada Delgada
&s compostos testes )oram dissolvidos em acetona para obteno de concentra>es
equivalentes a %$$! M$$$ e M%$$ gXm=* +s solu>es testes )oram aplicadas em placas de
camada delgada ECCDF E6lica Lel I$ / M<5C@F em s3ries com as mesmas concentra>es e
em seguida! submetidas eluio em sistema de solvente apropriado*
oram testadas trs )ra>es para este ensaio' "e,ano! diclorometano e butan?lica*
(ara a )rao acetato de etila utili.ou/se como )ase m?vel' cloro)?rmioXmetanol nas
propor>es U$' M$_ K%' M%_ K$' #$_ J$' 0$_ I$' 2$* + revelao )oi )eita com cloreto )3rrico
ap?s observao sob lu. U*V* em comprimento de onda de #2$ nm*
(ara a )rao diclorometano utili.ou/se como )ase m?vel' "e,anoXacetato de etila nas
propor>es de U$' M$_ K$' #$_ J$' 0$* + revelao )oi )eita com anisaldedo e posterior
aquecimento da placa cromatogr;)ica*
(ara a )rao butan?lica utili.ou/se como )ase m?vel o acetato de etilaX acetonaX ;guaX
metanol nas seguintes propor>es #%'K'M'0* + revelao )oi )eita com cloreto )3rrico ap?s
observao sob lu. U*V* em comprimento de onda de #2$ nm*
Como durante a eluio no se conseguiu a separao adequada das )ra>es! no )oram
completados todos os procedimentos para reali.ao do m3todo bioautogr;)ico! "avendo
assim preju.o nos resultados obtidos*
4.3 Microrganismos
&s microrganismos utili.ados para a reali.ao da pesquisa )oram' Bacillus cereus
E+:CCM2%JUF_ Enterobacter cloacae E+:CC0%$0$F_ Escherichia coli E+:CCMMJJ%F_
!roteus mirabilis E+:CCM2#J0F_ !seudomonas aeruginosa E+:CC#JK%UF; !roteus mirabilis
E+:CCM2#J0F_ !seudomonas aeruginosa E+:CC#JK%UF_ Salmonella tiphymurium
E+:CCM2$#KF_ Staphylococcus aureus E+:CCI%0K(F_ Staphylococcus saprophyticus
<+:CC0%%%#)_ Streptococcus agalactiae E+:CCM0KM0F! )ornecidos pela undao :ropical
de (esquisas e :ecnologia +ndr3 :osello de CampinasX6(* (ara os testes com )ungos )oram
utili.adas as seguintes cepas disponveis na Universidade 4acional de 5os;rio' Aspergillus
fla(us <+:CCUMJ$F_ Aspergillus fumigatus E+:CC#IU02F_ Aspergillus niger E+:CCU$U#F_
andida albicans E+:CCM$#0MF_ andida tropicalis ECM0MF_ ryptococcus neoformans
E+:CC0##I2F_ Epidermophyton floccosum ECMM2F_ Microsporum canis ECMM#F_
2K
Microsporum gypseum ECMM%F_ .eorospora crassa E+:CCU#JUF_ Saccharomyces cere(isiae
E+:CCUJI0F_ Trichophyton mentagrophytes E+:CCUUJ#F_ Trichophyton rubrum ECM0JF*
4.4 Preparao dos inculos bacterianos
(ara o preparo do in?culo microbiano )oram utili.adas as cepas de Bacillus cereus!
Enterobacter cloacae! Escherichia coli, !roteus mirabilis, !seudomonas aeruginosa!
Salmonella tiphymurium! Staphylococcus aureus! Staphylococcus saprophyticus,
Streptococcus agalactiae* +s bact3rias )oram ativadas em tubo com caldo de in)uso de
c3rebro e corao E-OIF! incubados a 0% mC por MK "oras* (ara o isolamento de colGnias
jovens! alquota de cada cultura ativada )oi trans)erida para placa de (etri com agar Mueller/
Ointon e incubado a 0%mC por apro,imadamente #2 "oras* +p?s o perodo de incubao
selecionou/se 0 a 2 colGnias! trans)erindo/as para um tubo est3ril contendo % m= de soluo
salina E$!KI dF* + turvao da suspeno celular )oi medida em espectro)ometro lendo/se em
comprimento de onda de %0$ nm em UV VI6I-=< 6(<C:5&(O&:&M<:<5 E6OIM+D7U
UV eMI$MF* + soluo salina est3ril )oi empregada como branco* Tuando necess;rio! )e./se
diluio para alcanar a concentrao desejada de apro,imadamente M!% , M$
K
c3lulasXm=!
compatvel com a escala $!% de Macarland* <sta soluo )oi ento diluda para obter o
in?culo com concentrao entre % , M$
%
e J!% , M$
%
c3lulasXm= E4CC=6! MUU0_ -+5&4 e
I4<L&=D! MUU$F*
(ara cada bact3ria testada )oram adicionados dois tubos contendo somente o meio de
cultura / tubos controles Eum branco e outro contendo o solvente empregado nas dilui>es das
amostras / soluo de DM6& e ;guaF*
+s leituras )oram consideradas v;lidas quando o crescimento nos tubos brancos e com
solvente )oram observados*
4.5 Preparo do inculo de fungos leveduriformes
& in?culo )oi preparado com cepas de' andida albicans! andida tropicalis,
ryptococcus neoformans! Saccharomyces cere(isae*
&s )ungos leveduri)ormes )oram semeados em tubos de +gar 6abouraud de,trosado
EMerc`F inclinados! pelo menos duas ve.es para assegurar pure.a e viabilidade das culturas
2U
jovens e incubados a 0J mC por #2 a 2K "oras* +p?s incubao! trans)eriu/se entre 2 a %
colGnias de levedura com ala est3ril para um tubo est3ril contendo salina a $!K% d*
+ suspenso )oi ajustada por espectro)otometria em comprimento de onda de %0$ nm
para obteno de U% d de transmit[ncia* Como branco! )oi utili.ada ;gua puri)icada est3ril
ajustando/se a transmit[ncia para M$$ d* + concentrao )inal obtida )oi de apro,imadamente
M$
%
a M$
I
c3lulas por m=* + con)irmao da concentrao )inal )oi )eita atrav3s de contagem
dos microrganismos em c[mara de 4e^bauer*
&s in?culos )oram arma.enados sob re)rigerao de acordo com a esp3cie de )ungo*
Eandida albicans, andida tropicalis, Saccharomyces cere(isiae arma.enados e #$ mC e
ryptococcus neoformans arma.enados a e 2 mCF*
4.6 Preparo dos inculos dos fungos filamentosos
& in?culo de )ungos )ilamentosos )oi preparado com Aspergillus fumigatus,
Aspergillus fla(us! Aspergillus niger! Microsporum canis, Microsporum gypseum!
Epidermophyton floccosum, Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes,
.eorospora crassa.
&s )ungos )ilamentosos )oram semeados em tubo de +gar 6aboraud de,trose!
incubando/se a temperatura ambiente por M# dias* & mic3lio )oi trans)erido para um
erlenme]er de M#% m= contendo ;gua puri)icada est3ril e p3rolas de vidro* oram agitados por
em agitador de tubos EVorte,F durante % minutos* (ara a suspenso dos microcondeos a
soluo )oi )iltrada em seringa est3ril para remover os )ragmentos dos mic3lios* oi )eita a
centri)ugao das condeas a 0$$$ rpm por M% minutos e lavando/se o sedimento trs ve.es
com ;gua destilada est3ril*
+ contagem das condeas )oi )eita em c[mara de 4e^bauer* + seguir! )oram )eitas as
dilui>es necess;rias para se alcanar a concentrao desejada entre M$
%
e M$
I
c3lulasXm=*
+p?s obteno e padroni.ao dos in?culos! estes )oram arma.enados sob re)rigerao
de acordo com a esp3cie e requerimento de cada )ungo )ilamentoso EAspergillus fumigatus,
Aspergillus fla(us, Aspergillus niger, Trichophyton mentagrophytes arma.enados e 2mC;
Microsporum canis! Microsporum gypseum! Epidermophyton floccosum, Trichophyton
rubrum arma.enados K mCF*
%$
4.7 Avaliao da atividade antibacteriana
+ avaliao da atividade antimicrobiana Econcentrao inibit?ria mnimaF do e,trato!
)ra>es e compostos obtidos da Acmela brasiliensis 6preng, )oi reali.ada pela diluio em
agar con)orme descrito por 4ational Committee )or Clinical =aborator] 6tandards EMUU0F*
+ CIM )oi determinada por diluio em ;gar como descrito por 4CC=6 EMUU%F com
modi)ica>es* <m )rascos de vidro de % m=! os e,tratos! )ra>es e compostos )oram
dissolvidos em soluo de dimetil sul)?,ido EDM6&F e ;gua na proporo de 2'I! e
adicionados em s3ries de de. )rascos em concentra>es que variaram de M$$ a M$$$ \gXm=*
<m seguida! a cada )rasco )oi adicionado M m= do meio de cultura agar Mueller/Ointon est3ril
e a mistura )oi "omogeini.ada* &s )rascos )oram inclinados e ap?s a solidi)icao dos meios
de cultura! os microrganismos previamente ativados )oram inoculados nas s3ries
correspondentes! sendo ento incubados a 0% C por MK a #2 "oras* +p?s o perodo de
incubao! )oram reali.adas leituras da concentrao inibit?ria mnima atrav3s da veri)icao
do crescimento microbiano EO+D+C<@ e L5<L<5! #$$$F*
Durante os testes )oram reali.ados controles com o solvente utili.ado na solubili.ao
dos e,tratos! )ra>es ou compostos EDM6& / ;guaF! a )im de se veri)icar seu e)eito sobre os
microrganismos testados* + concentrao do DM6& no ultrapassou a # d em relao ao
volume total de cada e,perimento*
4.8 Mtodo da concentrao bactericida mnima (CBM)
+ concentrao bactericida mnima 3 a quantidade mnima de agente antimicrobiano
necess;ria para inviabili.ar a c3lula microbiana! ou seja! provocar danos irreversveis a c3lula
bacteriana! sendo possvel avaliar se o composto 3 bacteriost;tico ou bactericida E-+5&4 e
I4<L&=D! MUU$F*
(ara determinar a concentrao bactericida mnima EC-MF! )oram selecionados os
)rascos que apresentaram inibio do desenvolvimento de bact3rias no ensaio de CIM* &s
microrganismos )oram isolados desses )rascos e inoculados em meio Mueller/Ointon isento
de composto e incubados por #2 a 2K "oras a 0J C* +p?s a incubao! as culturas )oram
inspecionadas para a veri)icao visual do crescimento microbiano* &s testes )oram )eitos em
triplicata*
%M
(ara a interpretao dos resultados )oram considerados os seguintes crit3rios'
Crescimento do microrganismo no meio de cultura! signi)icou ao bacteriost;tica_
+usncia de crescimento do microrganismo no meio de cultura! signi)icou ao
bactericida*
4.9 Avaliao da atividade antifngica
+s amostras testadas que e,ibiram atividade )ungicida importante podem ser
consideradas potenciais anti)8ngicos de uso clnico* <stabeleceu/se que os e,tratos )ossem
testados em concentra>es menores de M$$$ \gXm= e nos casos de compostos puros!
#%$\gXm= E7+COI4&! #$$M_ 6+5:&5I et al*! #$$0F*
& etanol! ;gua! acetona e DM6& )oram os solventes mais adequados para a preparao
das solu>es j; que estudos preliminares demonstraram que no produ.iam inibio dos
cultivos quando estes solventes eram utili.ados em concentra>es )inais de # d* Como os
ensaios se reali.aram em tubos contendo uma concentrao )inal de meio de cultura de %$$
\=! adicionou/se ao mesmo! quantidades de amostra no superiores a M$ \=*
4o m3todo de diluio em agar! as amostras testadas )oram "omogeni.adas em
concentra>es con"ecidas com o meio de cultivo! no qual se inoculou o microrganismo teste*
<ste m3todo quantitativo 3 utili.ado para determinao da concentrao inibit?ria mnima de
um composto )rente a um microrganismo determinado* + CIM )oi considerada a menor
concentrao do e,trato de Acmela brasiliensis 6preng que inibiu o crescimento visvel dos
microrganismos ensaiados ap?s incubao*
(rocedeu/se a )uso do meio de cultivo e colocando/se %$$ \= em tubos de `"an
est3reis Etubos de ensaio de % m=F! a seguir! adicionou/se aos tubos com o meio de cultura
)undido a quantidade necess;ria da amostra a ser testada* +p?s es)riar inclinado! preparou/se
todos os tubos em duplicata para cada )ungo teste*
(ara cada )ungo testado )oi adicionado dois tubos contendo somente o meio de cultura que
eram os tubos controles Ebranco apenas com o solvente como controle positivo e um contendo
0$ \gXm= de cetocona.ol como controle negativoF*
+p?s solidi)icao do meio de cultivo! )oi inoculado o )ungo com ala calibrada est3ril
E% \=F! sobre a super)cie do agar* &s tubos )oram incubados a #K mC o tempo necess;rio
segundo os requerimentos do microrganismo*
%#
4a leitura dos resultados )oi considerada v;lida a bateria onde "ouve crescimento
)8ngico nos tubos brancos contendo apenas meio de cultivo e solvente e no "ouve
desenvolvimento )8ngico no tubo que contin"a cetocona.ol*
4.10 Estudos preliminares do mecanismo de ao das fraes e compostos obtidos
das flores da Acmela brasiliensis (Wedelia paludosa) Spreng contra fungos.
&s estudos preliminares do mecanismo de ao dos compostos ativos presentes nas
)ra>es e compostos obtidos das )lores da Acmela brasiliensis 6preng! )oram reali.ados no
laborat?rio do Departamento de amacognosia! da Universidade 4acional de 5osario
E5os;rioX+rgentinaF! em colaborao com (ro)
a
* 6usana +* 7acc"ino*
& estudo para veri)icao da atividade dos e,tratos! )ra>es e dos compostos ;cido
cauren?ico e luteolina em inibir a parede celular )8ngica )oi reali.ado atrav3s da observao
de mal)orma>es das "i)as com uso de protetor osm?tico sorbitol e no ensaio da .. crassa*
4o ensaio qualitativo da .eurospora crassa )oi utili.ado meio de cultura com a
seguinte composio' 0$ m= de meio contendo $!% d de protease peptona E-ritania $#/$J$$F!
e,trato de levedura E-ritania /$$I/$%F! 2!$ d sacarose Egrau reagenteF e M!% d agar EMerc`
MIM0F )oi autoclavado a MM% nC por M% min* & meio de cultivo )oi distribudo em placas de
(etri EU cm de di[metroF e ap?s res)riamento parcial )oi semeado 0$ \= do in?culo de esporos
de .. crassa e incubado a temperatura ambiente sob lu. direta* +guardou/se a solidi)icao do
meio! e aplicou/se sobre este! discos de $!I% mm E-a,ter /#KK#/MF* +s amostras dissolvidas
em DM6& )oram colocadas sobre os discos E#% \gXdiscoF*
(ara preparar o in?culo dos esporos de .. crassa! o cultivo )oi )eito em meio contendo
$!#% d de protease peptona EDi)co $M##/$MF EpXpF! $!#% d de e,trato de levedura EpXpF M d de
sacarose EpXpF e M!% d agar EpXpF por 2/% dias de incubao a temperatura ambiente e lu.
produ.indo uma colorao laranja no crescimento das "i)as com esporos* & in?culo )oi )eito
em tampo contendo $!$J% gXM$$ m= @
#
O(&
2
Egrau reagenteF em soluo de glicerol e ;gua
M%'K%*
&s discos contendo somente DM6& como controle negativo tamb3m )oram includos
no ensaio e* M!#% \= de micona.ol E6igma M/0%M#F tamb3m )oi adicionado ao disco como
controle positivo os quais produ.iram um "alo claro*
.eorospora crassa 3 um )ungo )ilamentoso que quando em presena de inibidores da
parede celular )8ngica e sob certas condi>es E0J nC e meio osm?ticoF! cresce como
%0
protoplasma Esem parede celularF e que microscopicamente mostra mal)orma>es E"i)as curtas
e rami)icadasF E6<=I:5<44I@&! MUU#F* &s "alos de inibio )oram e,aminados
macroscopicamente para veri)icar se "avia m; )ormao das "i)as e se a aparncia era de
aspecto enevoado ou manc"ado! seguindo/se a incubao das placas a temperatura ambiente
por #2 "oras sob lu. direta*
4.11 Ensaio de toxicidade da Artemia salina
oram preparadas baterias com diversas concentra>es das )ra>es de e,tratos das
)lores da Acmela brasiliensis que apresentaram nos ensaios pr3vios! os mel"ores resultados de
atividade antimicrobiana*
<sta metodologia necessita de quantidades relativamente grandes de composto a testar
E#$ g para e,tratos brutos e 2 mg para compostos purosF e o preparo das dilui>es limita o
n8mero e as dilui>es que podem ser testadas em um e,perimento* & teste )oi reali.ado de
acordo com a t3cnica descrita por Me]er et al* EMUK#F* &s ovos de Artemia salina )oram
colocados para eclodir em ;gua do mar arti)icial Esoluo de 4aCl a 0!K dF e dei,ados em
temperatura ambiente por 2K "oras* (ara o preparo da ;gua marin"a dissolveu/se 0!K g de
cloreto de s?dio em ;gua puri)icada* Manteve/se o pO da ;gua entre K e U* (ara ecloso dos
microcrust;ceos! )oi utili.ada uma cai,a contendo divis?ria! de maneira que apenas um dos
lados )ique iluminado para permitir! por )ototropismo! a migrao das larvas E6&=I6 et al*!
MUU0F* &s ovos do microscrust;ceo incubados a temperatura de #K a 0$ mC com )orte aerao e
sob contnua luminosidade* +s larvas no )oram alimentadas* & e,perimento )oi reali.ado em
triplicata*
&s e,tratos )oram pesados! adicionou/se M m= de DM6& EM d do volume )inal! vXvF
para )acilitar a dissoluo do e,trato e a seguir adicionou/se lentamente ;gua do mar arti)icial
at3 completar um volume )inal de M$ m=* + concentrao )inal do e,trato )icou entre K a
%$$ gXm=* + partir desta soluo! obteve/se as concentra>es de K! #2! 2K! M#2! #2K e
%$$ gXm=*
(ara as )ra>es testadas! pesou/se 2 mg de amostra e adicionou/se % m= de ;gua do mar
arti)icial* Tuando necess;rio dei,ou/se alguns minutos no ultra/som* Desta soluo! tomou/se
%2
respectivamente em triplicata I#%! 0M#! M#%! I#! e #% \= que correspondem as doses de #%$!
M#%! %$! #% e M$ \gXm=* Completou/se o volume de # m= com ;gua do mar arti)icial *
& controle negativo )oi reali.ado com # m= de ;gua do mar arti)icial e o controle
positivo por dicromato de pot;ssio em concentra>es de K$$! I$$ e 2$$ \gXm=*
+p?s a ecloso dos ovos E2K "orasF! adicionou/se K/M$ larvas de Artemia salina no
pocin"o! juntamente com o e,trato e dei,ou/se incubar a #% oC por #2 "oras para cada
e,perimento! sendo os pocin"os mantidos sob iluminao*
& resultado )oi obtido contando/se o n8mero de mortos e vivos em cada pocin"o!
atrav3s de visuali.ao macrosc?pica e a an;lise estatstica )oi )eita da contagem do n8mero
de sobreviventes calculando/se a porcentagem de mortos* &s microcrust;ceos )oram
considerados mortos quando no e,ibiam nen"um movimento interno ou e,terno ap?s v;rios
secundo de observao EM<H<5 et al.! MUK#_ 6&=I6 et al*! MUU0_ 6ITU<I5+ et al*! #$$M_
MUUK_ (+H5&= et al.! #$$M_ C+5-+==& et al. #$$#F* (ara termos certe.a que a mortalidade
dos microcrust;ceos observada no bioensaio pudessem ser atribudas ao composto testado e
no a )alta de alimento! comparou/se a mortalidade de cada tratamento com as larvas
controles* +s larvas de Artemia salina sobrevivem at3 2K "oras sem alimentao
EC+5-+==& et al*! #$$#F*
+ porcentagem de mortalidade Ed MF )oi calculada como' d M a porcentagem de
sobreviventes no controle e porcentagem de sobrevivientes com composto teste EC+5-+==&
et al*! #$$#F*
%%
5 RESULTADOS E DISCUSSO
<mbora uma planta possa conter centenas de metab?litos secund;rios! apenas os
compostos presentes em maior concentrao so geralmente isolados e estudados pela
)itoqumica cl;ssica* + an;lise de subst[ncias ativas 3 muito mais comple,a e longa! j; que
geralmente os compostos presentes em menor proporo na planta so os que apresentam
mel"ores e)eitos biol?gicos EC<COI4<= I=O& et al.! #$$M_ M+=O<I5&6 et al*! #$$MF*
+ planta Acmela brasiliensis 6preng apresentou atividade antimicrobiana!
con)irmando estudos preliminares reali.ados anteriormente E-=&C@ et al*! MUUJ_
6CO=<M(<5 et al*! MUUK_ C&5D<I5& et al*! MUUKF*
oram reali.adas an;lises da atividade dos e,tratos da planta inteira e )lores*
<speci)icamente com relao a planta inteira! ainda )oram analisadas os e,tratos de plantas
obtidos em dois locais di)erentes Ejardins da U6C e praiaF*
+ coleta de di)erentes locais )oi )eita com o intuito de observar possveis altera>es na
resposta de atividade antimicrobiana em )uno do ambiente* 6egundo Morrisse] EMUUUF e
6elitrenni`o)) E#$$MF! o ambiente in)luencia na produo de subst[ncias antimicrobianas
como resposta s Aagress>esC por agentes pat?genos e estressse ambiental*
5.1 SISTEMA DE SOLVENTES - CROMATOGRAFIA EM CAMADA
DELGADA
Considerando que a planta A. brasiliensis 6preng em estudo 3 recon"ecida por seus
e)eitos biol?gicos! submeteu/se o e,trato etan?lico das )lores e das )ra>es obtidas com
solventes de polaridade crescente E"e,ano e O<W! dicloromentano / DCM! acetato de etila e
+c<t e butanol e -u&OF cromatogra)ia em camada delgada testando/se diversos solventes
para escol"er aqueles que nos )ornecessem a mel"or resoluo para e)etivao de um ensaio
de bioautogra)ia para o direcionamento da pesquisa que visava a locali.ao dos compostos
ativos presentes na planta! pois sua locali.ao nas )ra>es )avoreceria seu posterior
isolamento*
+s )ra>es O<W! DCM! +c<t e -u&O )oram escol"idas para a cromatogra)ia! por
terem )ornecido preliminarmente os mel"ores resultados na triagem de atividade
antimicrobiana* <sta triagem preliminar )oi )eita testando/se todos os e,tratos EO<W! DCM!
+c<t! -u&O! Me&OXO
#
&F das )lores e planta inteira coletadas na praia e jardins da U6C na
%I
concentrao de M$$$ \gXm= contra um coco Lram positivo e um bacilo Lram negativo
Eescol"eu/se aleatoriamente Staphylococcus aureus e Escherichia coliF* +s )ra>es que
apresentaram atividade antimicrobiana para o coco Lram positivo na concentrao testada
)oram escol"idas para o ensaio cromatogr;)ico*
&s sistemas solventes utili.ados EMUF no apresentaram boa resoluo para justi)icar a
utili.ao do m3todo bioautogr;)ico para locali.ar os compostos com atividade
antimicrobiana* + 8nica )rao que "ouve uma pequena separao )oi a )rao DCM com )ase
m?vel de "e,anoXacetato na proporo de J$' 0$!
por3m esta separao inadequada dos compostos pode inter)ir no resultado dos "alos
de inibio )rente s cepas bacterianas a serem testadas*
5.2 RESULTADOS CONTRA BACTRIAS GRAM POSITIVAS E GRAM
NEGATIVAS
+s propriedades microbiost;ticas e microbicidas a partir de produtos vegetais tm sido
comprovadas atrav3s de intensivas pesquisas em todo o mundo* Leralmente! so estudas!
avaliadas e con)irmadas atrav3s de ensaios biol?gicos in (itro em testes de susceptibilidade ou
sensibilidade E6&U7+ et al*! #$$0F! como )oi reali.ado no presente trabal"o*
Dentre as bact3rias utili.adas para determinao da atividade antimicrobiana ELram
positivas' Bacillus cereus! Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus!
Streptococcus agalactiae, e Lram negativas' Enterobacter cloacae! Escherichia coli!
!seudomonas aeruginosa! !roteus mirabilis e Salmonella tiphymuriumF as )ra>es do e,trato
bruto e compostos da planta Acmela brasiliensis 6preng apresentaram atividade somente
contra as bact3rias Lram positivas*
4a :+-<=+ # so apresentados os resultados da determinao de atividade
antimicrobiana das )ra>es e compostos isolados da Acmela brasiliensis 6preng contra as
bact3rias Lram positivas*
& crit3rio utili.ado para classi)icao da atividade dos componentes e,trados da
Acmela brasiliensis 6preng )oi' Concentrao Inibit?ria Mnima ECIMF menor que M$$ \gXm=
)oi considerado como boa atividade antimicrobiana_ quando CIM de M$$ a %$$ \gXm= )oi
considerado moderadamente ativo_ CIM entre %$$ a M$$$ \gXm= )oi considerado pouco ativo
e CIM maior que M$$$ \gXm=! inativo EO&=<:7 et al*! #$$#_ (5<::& et al*! #$$2F*
%J
Como pode ser observado na :+-<=+ #! a )rao "e,[nica das )lores da Acmela
brasiliensis 6preng apresentou atividade contra as duas esp3cies de Staphylococcus testadas*
(or outro lado as )ra>es "e,[nicas da planta inteira coletadas nos jardins da U6C e na praia
mostraram atividade tamb3m contra as outras bact3rias Lram positivas* 5essalta/se que as
CIM )oram consideradas moderadas contra Bacillus cereus! Staphylocccus saprophyticus para
planta inteira coletada nos jardins da U6C e coletada na praia*
TABELA 2 e Determinao da Concentrao Inibit?ria Mnima E\gXm=F das )ra>es dos
e,tratos das )lores e planta inteira da Acmela brasiliensis 6preng e os compostos puros E;cido
cauren?ico e luteolinaF contra cepas padro de bact3rias Lram positivas*
Parte utilizada Frao Concentrao Inibitria Mnima (g/mL)
da planta Bc Sa Ssp Stp
lores Oe, pM$$$ K$$ #$$ pM$$$
lores DCM #$$ 2$$ K$$ M$$$
lores +c<t pM$$$ pM$$$ pM$$$ I$$
lores -u&O pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira Uj Oe, #$$ I$$ #$$ I$$
(lanta Inteira Uj DCM #$$ I$$ #$$ M$$$
(lanta Inteira Uj +c<t pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira Uj Me&OXO#& pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira (j Oe, #$$ I$$ #$$ pM$$$
(lanta Inteira (j DCM K$$ K$$ M$$$ pM$$$
(lanta Inteira (j +c<t pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira (j Me&OXO#& pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
Bc* Cauren?icos
#$$ #$$ #$$ 2$$
=uteolina K$$ %$$ K$$ pM$$$
Bacillus cereus E-cF_ Staphylococcus aureus E6aF_ Staphylococcus saprophyticus E6spF_ Streptococcus
agalactiae E6tpF_ =0>coletadas nos ?ardins da =/S_ !0>coletadas em regi4o de !raia_ +c<ta)rao
acetato de etila_ O<Wa)rao "e,ano_ DCMa)rao diclorometano_ -u&Oa)rao butanol*
6egundo -resciani et al* E#$$$F! bem como Carval"o et al* E#$$MF! solventes apolares
como 3ter e "e,ano possibilitam a e,trao de grupos ester?ides Eestimagmasterol!
sistosterolF! cumarnicos! 3steres do ;cido olean?ico! lactonas sesquiterpnicas! terpen?ides
E;cidos caur[nicosF*
:em sido demonstrado que os terpenos so ativos contra diversos microrganismos* 6eu
mecanismo de ao no est; completamente elucidado! por3m acredita/se que envolve a
ruptura da membrana celular por compostos lipo)licos EC&c+4! MUUU_ D&5M+4 e
D<+46! #$$$_ cI=@<46! #$$#F*
%K
4o )racionamento de e,tratos de plantas! a utili.ao do diclorometano EDCMF
possibilita a e,trao de compostos apolares )en?licos como )lavon?ides! cumarinas!
cromenos! ben.o)uranos! ,antonas! quinonas e taninos EC<COI4<= e HU4<6! MUUK_
HU4<6 e C+=IW:&! #$$MF*
&s )lavon?ides so subst[ncias "idro,iladas )en?licas con"ecidas por serem
sinteti.adas pelas plantas em resposta a in)ec>es microbianas e no 3 surpresa seu e)eito
antimicrobiano in (itro contra diversas bact3rias* <sta atividade 3 provavelmente devida a sua
"abilidade de )ormar comple,os com protenas sol8veis e,tracelulares e com a parede celular!
ou ainda o car;ter lipo)lico dos )lavon?ides ser respons;vel pela ruptura da membrana celular
dos microrganismos E:6UCOIH+ et al*! MUUI_ C&c+4! MUUUF* & grupo "idro,il ligado ao
anel g so ativos contra microrganismos que aqueles com grupos e&O! podendo/se supor que
este seria um alvo na membrana celular! juntamente com o car;ter lipo)ilico do composto
EC&c+4! MUUUF*
+ )rao DCM obtida do e,trato bruto das )lores da Acmela brasiliensis 6preng
apresentou atividade antibacteriana moderada para Bacillus cereus ECIM a #$$ \gXm=F e
Staphylococcus aureus ECIM a 2$$ \gXm=F* (ara as bact3rias Staphylococcus saprophyticus
ECIM a K$$ \gXm=F e Streptococcus agalactiae ECIM a M$$$ \gXm=F a atividade )oi
considerada )raca! como pode ser observado na :+-<=+ #*
<stes resultados con)irmam estudos anteriores E6CO=<M(<5 et al.! MUUKF! onde os
e,tratos DCM mostraram atividade contra bact3rias Lram positivas* 5au"a et al* E#$$$F
sugerem que os compostos mais apolares como a luteolina / )lavon?ide e,trado pela )rao
DCM e presente na planta / possa ser o respons;vel pelos e)eitos antibacterianos*
Com relao s )ra>es DCM das plantas inteiras! )oi veri)icado que a planta coletada
nos jardins da U6C apresentou atividade antimicrobiana mais pronunciada quando
comparada com a planta coletada na praia* <nquanto a planta coletada na U6C apresentou
atividade moderada contra Bacillus cereus ECIM a #$$ \gXm=F e Staphylococcus
saprophyticus ECIM a #$$ \gXm=F e atividade )raca contra Staphylococcus aureus ECIM a
K$$ \gXm=F a planta coletada na praia )oi considerada pouco ativa contra as mesmas bact3rias
bem como para Staphylocccus aureus e )oi inativa contra Streptococccus agalactiae*
+ )rao O<W obtida do e,trato bruto das )lores da Acmela brasiliensis 6preng
apresentou atividade antibacteriana moderada para Staphylococcus saprophyticus ECIM a
#$$\gXm=F e )raca para Staphylococcus aureus ECIM a K$$ \gXm=F* +s )ra>es O<W dos
e,tratos brutos das plantas inteiras coletadas na U6C e na praia apresentaram atividades
%U
moderadas contra Bacillus cereus e Staphylococcus saprophyticus ECIM a #$$ \gXm= para
ambosF e atividade )raca contra Staphylococcus aureus! como observado na :+-<=+ #*
Com relao s )ra>es mais polares Eacetato de etila! butanol e metanolX;guaF! obtidas
dos e,tratos bruto das )lores e planta inteira Ejardins da U6C e praiaF observamos que os
mesmos praticamente no apresentaram atividade antimicrobiana* 6omente a )rao acetato de
etila do e,trato das )lores 3 que apresentou pequena atividade*
V;rios estudos mostram que o acido cauren?ico apresenta moderada atividade
antibacteriana para bact3rias Lram positivas ELI<6O5<CO:! MUKJ_ V<=I@&V+ et al*! #$$$_
cI=@<46 et al*! #$$#F* + parede celular bacteriana dos Lram positivos 3 menos comple,a e
apresenta maior permeabilidade quando comparada aos Lram negativos E5+4L! MUUJ_
:5+-U=6I! MUUUF*
& composto puro ;cido cauren?ico apresentou atividade inibit?ria espec)ica contra
bact3rias Lram positvas* + atividade antibacteriana )oi moderada para Staphylococcus
aureus! Staphylococcus saprophyticus, Bacillus cereus ECIM a #$$ \gXm=F* Contra
Streptococcus agalactie a atividade )oi menor ECIM a 2$$ \gXm=F*
& mesmo per)il de atividade antibacteriana para estes compostos contra bact3rias
Lram positivas tamb3m )oi encontrado por estudos anteriores ELI<6O5<CO:! MUKJ_
D+VI4& et al*! MUKU_ 6CO=<M(<5 et al*! MUUK_ -=&C@ et al*! MUUJ_ V<=I@&V+ et al*!
#$$$_ cI=@<46! #$$#F*
cil`ens et al* E#$$#F! em estudo sobre a atividade bactericida do ;cido cauren?ico
EILU5+ KF! sugere que a membrana e,terna pode atuar como barreira evitando a
apro,imao do ;cido cauren?ico da membrana citoplasm;tica* <ntretanto a ao sobre a
sntese dos peptidioglicanos no deve ser descartada! pois estudos preliminares do mesmo
autor! mostraram que protoplastos de Bacillus cereus so lisados em meio iso/osm?tico
depois de e,postos ao ;cido cauren?ico e perdem a capacidade de reter a colorao Lram*
I$
FIGURA 8 @ Estrutura molecular do :cido cauren8ico <A)
Considerando/se ainda! o ;cido cauren?ico como um ;cido )raco! e sabendo/se que
;cidos )racos )a.em transporte de pr?tons atrav3s da membrana! um possvel mecanismo de
ao do ;cido cauren?ico seria a alterao no transporte de el3trons e subseqhentemente a
)os)orilao o,idativa na membrana citoplasm;tica* &utro possvel mecanismo a considerar
seria o rompimento da membrana citoplasm;tica por interao )sica* <struturalmente! a
presena do ;cido carbo,lico na posio MU parece ser importante na ao antibacteriana!
porque derivados sint3ticos e naturais com este grupo bloqueado ou interagindo com
"idrognio! apresentam nen"uma ou menor atividade EcI=@<46 et al*! #$$#F* De acordo
com Mendo.a et al* EMUUJF! a adio de grupamentos metil diterpenos cauren?icos
acarretam a reduo de sua atividade antibacteriana EC&c+4! MUUUF*
& composto luteolina EILU5+ UF em estudos previamente reali.ados apresentou
atividade inibit?ria contra M56+ EWU e =<<! #$$MF e ao inibit?ria no crescimento e na
en.ima arilamine 4/acetiltrans)erase de cepas de %elicobacter pylori em pacientes com 8lcera
g;strica ECOU4L et al.! #$$MF* <ste composto apresenta )orte e)eito antimicrobiano contra
estreptococo cariognico e periodontopatia por !orphyromonas gingi(alis EH+M+M&::& e
&L+c+! #$$#F*
& resultado da atividade antibacteriana observado na :+-<=+ # com o composto
)lavon?ide luteolina )oi de %$$ \gXm= para Staphylocccus aureus e de K$$ \gXm= para
Bacillus cereus e Staphylococcus saprophyticus*
+ luteolina! presente nas )lores e planta inteira em estudo apresenta dois an3is
arom;ticos E+ e -F e um "eterocclico o,igenado Eanel CF* + "idro,ilao dos an3is a)eta a
"idro)obicidade da mol3cula* Como produto secund;rio do metabolismo das plantas! os
)lavon?ides redu.em parcialmente o o,ignio sendo! e so con"ecidos como esp3cies reativas
de o,ignio E<5&F! possuindo reatividade qumica mais marcante que o o,ignio molecular*
<ste radical "idro,il E/&OF produ. um processo de lipopero,idao! atuando como o,iradicais
IM
de reatividade qumica capa.es de proporcionar rea>es de iniciao e alta capacidade
o,idante EcI=O<=M I=O& et al*! #$$M_ 6I=V+! #$$#F* + membrana citoplasm;tica e as
en.imas que ocupam o citoplasma bacteriano ao passar para o meio e,terno podem estar
so)rendo uma o,idao pelas <5& sendo comple,adas ou inibidas! e assim provocando
inj8ria na c3lula microbiana EcI=O<=M I=O& et al*! #$$MF*
+ luteolina apresenta v;rias propriedades )armacol?gicas! mas pouco se con"ece sobre
seu alvo bioqumico! e um estudo mostra que a luteolina inibe completamente o processo
cataltico da D4+ topoisomerase I dos eucariontes na concentrao de 2$ mM com uma IC%$
de % mM E5&HCO&cDOU5H et al*! #$$#F! e inibe a proli)erao e e,presso do col;geno
das c3lulas "ep;ticas in (itro! e podem ter )uno preventiva ou teraputica na )ibrose "ep;tica
E7O+& et al.! #$$#F*
FIGURA 9 / Estrutura molecular da luteolina <B)
&s compostos )en?licos "idro,ilados atuam possivelmente por inibio de en.imas
atrav3s de rea>es com grupos sul)idrilas e por intera>es inespec)icas com protenas! embora
no ten"a sido comprovada uma relao entre o grau de "idro,ilao e a atividade t?,ica
Ec+=6O! MUU#_ 7+CCOI4&! MUUKF*
+s )ra>es e e,tratos das )lores e planta inteira da Acmela brasiliensis 6preng e
compostos puros E;cido cauren?ico e luteolinaF testados contra Lram negativos no
apresentaram atividade antimicrobiana! con)irmando resultados previamente obtidos E-=&C@
et al*! MUUK a!b_ 6CO=<M(<5 et al.! MUUKF* cil`ens E#$$#F relata que como o ;cido
cauren?ico no 3 ativo contra as bact3rias Lram negativa! "; possibilidade de uma resistncia
natural da membrana e,terna ao diterpeno*
&s resultados indicam que as bact3rias Lram positivas so relativamente inibidas pelos
componentes da Acmela brasiliensis* & per)il qumico de seletividade contra Lram positivos
no 3 restrito a composto de plantas! mas 3 um )enGmeno geral observado entre muitos
antibi?ticos E6CO+<CO:<5 et al*! MUUU_ -+6I=< et al.! #$$$F*
I#
4en"uma atividade )oi observada contra bact3rias Lram negativas EEnterobacter
cloacae! Escherichia coli! !roteus mirabilis! !seudomonas aeruginosa e Salmonella
tiphymuriumF* Isto pode ser e,plicado porque a membrana e,terna das bact3rias Lram
negativas 3 con"ecida por apresentar uma barreira a penetrao de numerosas mol3culas de
antibi?ticos! e o espao periplasm;tico cont3m en.imas! as quais so capa.es de quebrar
mol3culas estran"as introdu.idas neste espao E6CO+<CO:<5 et al*! MUUU_ DUH e
(&c<5! #$$M_ 6+5:&5I et al*! #$$0F*
Muitos microrganismos Lram negativos tamb3m e,ibem alto nvel de resistncia
intrnsica grande n8mero de agentes antimicrobianos e re)ora a "ip?tese sobre a membrana
e,terna e atividade de bomba de e)lu,o como barreira aos antibi?ticos E4I@+ID&! MUKU_
V+4 @q<O=<5! MUUU_ -+M-<@< et al*! #$$0F*
Considerando/se que pacientes imunocomprometidos necessitam da ao bactericida
de antimicrobianos! procedeu/se a determinao da concentrao bactericida mnima EC-IF
das )ra>es dos e,tratos das )lores e planta inteira da Acmela brasiliensis 6preng para
bact3rias Lram positivas*
4a :+-<=+ 0 so apresentados os resultados da determinao de atividade
antimicrobiana de e,tratos )ra>es e compostos de Acmela brasiliensis 6preng <Wedelia
paludosa) contra cepas de bact3rias Lram positivas* &bserva/se que a )rao "e,[nica das
)lores! da planta inteira coletada nos jardins da U6C e planta inteira coletada na praia
apresenta atividade bactericida contra cepas de Staphylococcus aureus e Bacillus cereus*
(ara a )rao O<W da planta inteira coletada nos jardins da U6C! )oi determinada a
Concentrao -actericida Mnima EC-MF em triplicata! contra Staphylococcus aureus como
pode ser observado na :+-<=+ 0* &bserva/se que dentre as )ra>es O<W coletadas e testadas
)oram obtidos resultados de maior atividade bactericida da planta inteira coletada na U6C
EJ$$ \gXm=F* & ;cido cauren?ico apresentou maior atividade bactericida contra bact3rias
Lram positivas do que a luteolina* Condi>es ambientais pouco )avor;veis! condio de
estresse! ou e,posio agentes patognicos podem propiciar que as plantas ten"am seu
padro de metabolismo alterado ou e,acerbado! produ.indo )itoale,inas ou metab?litos
secund;rios para sua de)esa e adequao as condi>es que o meio l"e o)erece EM&55I66<H!
MUUU_ 6<=I4:5<44I@&! #$$M_ -5<6CI+4I et al.! #$$2F*
I0
TABELA 3 e Determinao da Concentrao -actericida Mnima E\gXm=F das )ra>es dos
e,tratos das )lores e planta inteira da Acmela brasiliensis 6preng contra cepas padro de
bact3rias Lram positivas*
Parte utilizada Frao Concentrao Bactericida Mnima (g/mL)
da planta Bc Sa Ssp Stp
lores Oe, M$$$ U$$ pM$$$ pM$$$
lores DCM J$$ J$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira Uj Oe, K$$ J$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira Uj DCM M$$$ M$$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira (j Oe, M$$$ M$$$ pM$$$ pM$$$
(lanta Inteira (j DCM M$$$ M$$$ pM$$$ pM$$$
Bc* Cauren?icos #$$ 2$$ #$$ pM$$$
=uteolina M$$$ K$$ M$$$ pM$$$
Bacillus cereus E-cF_ Staphylococcus aureus E6aF_ Staphylococcus saprophyticus E6spF_ Streptococcus
agalactiae E6tpF_ =0> coletadas nos ?ardins da =/S_ !0> coletadas em regi4o de !raia_ O<Wa
)rao "e,ano_ DCMa )rao diclorometano*
5.3 RESULTADOS CONTRA FUNGOS
&s )ungos so organismos interessantes! pois so capa.es de se desenvolver em
di)erentes super)cies e coloni.ar ambientes! plantas! animais e o "omem* 4as 8ltimas d3cadas
a incidncia de in)ec>es )8ngicas "umanas! especialmente envolvendo pacientes
imunocomprometidos tem aumentado dramaticamente E6<=I4:5<44I@&! #$$MF*
In)ec>es )8ngicas super)iciais! apesar de no apresentarem risco de vida potencial
para indivduos sadios! tem e)eitos debilitantes sobre a qualidade de vida das pessoas!
limitando tanto suas atividades di;rias! como relacionamentos interpessoais! j; que podem
des)igurar a pele e serem transmitidos por contato direto* &s grupos de )ungos que
caracteristicamente in)ectam as partes queratini.adas do corpo so Trichophyton sp*!
Microsporum sp* e Epidermophyton sp* EL5&==! MUUK_ L+5-<5! #$$MF*
Um recurso promissor para o desenvolvimento e descoberta de novos agentes
anti)8ngicos so as plantas usadas na medicina popular para tratamento de )eridas in)ectadas!
p3s de atleta e outras patologias cut[neas*
+s )ra>es e compostos da Acmela brasiliensis 6preng )oram testados )rente a )ungos
dermat?)itos! )ilamentosos e leveduras* + composio qumica prov;vel destas )ra>es
mostradas em estudos anteriores! s quais podemos atribuir sua atividade anti)8ngicas so'
;cido cauren?icos E5&TU<! MUKJ_ -5<6CI+4I et al.! #$$$F! terpenos EC5+V<I5&! MUU0_
I2
VI<I5+! #$$MF! eudesmalolide lactonas E<55<I5+! MUU2_ C+5V+=O&! #$$MF e
)lavon?ides E-=&C@ et al.! MUUKF*
&s resultados da :+-<=+ 2 mostram que nen"um e,trato testado possui atividade
contra as leveduras andida albicans; andida tropicalis; ryptococcus neoformans;
Saccharomyces cere(isiae, nem para os )ungos )ilamentosos Aspergillus fumigatus;
Aspergillus fla(us; Aspergillus niger e Microsporum gypseum* +s determina>es )oram
reali.adas em triplicata*
TABELA 4 e Determinao da Concentrao Inibit?ria Mnima EgXm=F para )ungos contra
)ra>es dos e,tratos das )lores da Acmela brasiliensis 6preng e de dois compostos puros
E;cido cauren?ico e luteolinaF*
Frao / Concentrao Inibitria Mnima (g/mL)
Composto Fungo filamentoso Fungo leveduriforme
Afl Afu An Ef Mc Mg Tm Tr Ca Ct Cn Sc
HEX pM$$$ pM$$$ pM$$$ M$$$ pM$$$ pM$$$ %$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
DCM pM$$$ pM$$$ pM$$$ M$$$ M$$$ pM$$$ #%$ M$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
AcEt pM$$$ pM$$$ pM$$$ M$$$ pM$$$ pM$$$ M$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
BuOH pM$$$ pM$$$ pM$$$ M$$$ M$$$ pM$$$ %$$ #%$ pM$$$ pM$$$ pM$$$ pM$$$
1 p#%$ p#%$ p#%$ %$ p#%$ p#%$ M$$ M$$ p#%$ p#%$ p#%$ p#%$
2 p#%$ p#%$ p#%$ #%$ p#%$ p#%$ M#% p#%$ p#%$ p#%$ p#%$ p#%$
Aspergillus fla(us E+)lF_ Aspergillus fumigatus E+)uF_ Aspergillus niger E+nF_ Epidermophyton floccosum E<)F_
Microsporum canis EMcF_ Microsporum gypseum EMgF_ Trichophyton mentagrophytes <Tm); Trichophyton
rubrum E:rF_ andida albicans ECaF_ andida tropicalis_ ryptococcus neoformans ECnF_ Saccharomyces
cere(isiae E6cF_ O<Wa )rao "e,ano_ DCMa )rao diclorometano_ +c<ta )rao acetato de etila_ -u&Oa
)rao butanol_ M a Bcido cauren?ico_ # a =uteolina*
&s resultados mostram espectro de atividade! e,clusivamente para os dermat?)itos
ETrichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes)! quando testados os e,tratos
"idroalco?lico das )lores e particionado com! "e,ano EO<WF! diclorometano EDCMF! butanol
E-u&OF da Acmela brasiliensis 6preng com CIM compreendidas entre #%$ e M$$$ \gXm=* +
)rao de acetato de etila E+c<tF no mostrou atividade anti)8ngica ou apresentou CIM muito
alta EM$$$ \gXm=F! e )oram desconsideradas neste estudo E6+5:&5I et al.! #$$0F* +s )ra>es
estudadas tiveram atividade contra )ungos dermat?)itos! e devem/se tamb3m considerar as
propriedades antio,idativas dos )lavon?ides E6I=V+ et al.! #$$#F*
Dos compostos puros testados! o Bcido cauren?ico EMF! mostrou atividade para
Epidermophyton floccosum ECIM %$ \gXm=F_ Trichophyton rubrum ECIM M$$ \gXm=F e
Trichophyton mentagrophytes ECIM M$$ \gXm=F* <studos mostram atividade antibacteriana e
anti)8ngica do ;cido cauren?ico e derivados substitudos no carbono/M% ED+VI4&!
I%
LI<6-5<CO: e 5&TU<! MUKUF <m estudos de mecanismo de ao de compostos
diterpen?ides demonstraram que o ;cido careun?ico produ.iria permeabili.ao da parede
celular )8ngica EC&:&5+6! #$$2F*
+lgumas "ip?teses quanto ao mecanismo de ao destas )ra>es )oram avaliadas* 4a
)rao "e,ano encontra/se em maior concentrao! compostos como ;cido cauren?ico
EditerpenoF! estigmasterol EesterolF e ;cido olean?lico EtriterpenoF! sendo que o diterpeno
citado apresenta atividade antimicrobiana E7+CCOI4& et al.! #$$MF* & car;ter lipossol8vel
do diterpeno )avorece sua passagem atrav3s das membranas celulares! as quais tem nature.a
prot3ica e lipdica e esta passagem 3 grandemente determinada pela sua maior ou menor
lipossolubilidade* &s compostos lipossol8veis atravessam rapidamente as barreiras da
membrana por um processo de di)uso passiva! sendo este transporte diretamente
proporcional ao gradiente de concentrao e ao coe)iciente de partio lipdioX;gua da
subst[ncia E5+4L et al., MUUJF*
& grau de ioni.ao de compostos ;cidos E)racosF ou bases E)racasF dependem de
grupos )uncionais capa.es de se ioni.arem* & grau de ioni.ao depende do p@ do composto!
bem como do pO da soluo E)ludo biol?gicoF* &utro aspecto a ser avaliado! 3 que o ;cido
cauren?ico 3 um ;cido )raco "avendo uma predomin[ncia da )orma ioni.ada e com maior
"idrossolubilidade em pO J!2 EplasmaF E5+4L et al.! MUUJF* :amb3m! o meio de cultivo
utili.ado para o estudo in (itro possui pO pr?,imo ao neutro* Considerando o ;cido
cauren?ico um ;cido )raco! e como tal transportaria pr?tons atrav3s da membrana! sendo que
um possvel mecanismo de ao poderia ser atrav3s da alterao do transporte de eletrons e
subseqhentemente a )os)orilao o,idadativa na membrana citoplasm;tica* &utro posssvel
mecanismo! seria o rompimento da membrana citoplasm;tica por interao )sica EcI=@<46
et al.! #$$#F*
+ luteolina E#F apresentou atividade com CIM igual ou superior a #%$ \gXm= para
todos os )ungos testados inclusive para as leveduras andida albicans e andida tropicalis, e
atividade anti)8ngica na concentrao de M#% \gXm= para Trichophyton mentagrophytes*
Considerando que os dermat?)itos so um grupo de )ungos altamente especiali.ados!
que caracteristicamente in)ectam as ;reas queratini.adas do corpo e levando/se em
considerao que as dermatomicoses so muito di)ceis de erradicar! 3 interessante notar que
tantos os e,tratos da Acmela brasiliensis 6preng! como os compostos ;cido cauren?ico e
luteolina! so ativos )rente dermat?)itos e no a outros tipos de )ungos testados* <sta
caracterstica pode ser atribuda di)erenas na membrana e,terna destas esp3cies! visto que
estudos demonstram que o ;cido cauren?ico 3 um ;cido )raco com contante de dissociao
II
)raca EM$
/%
a M$
/I
F e a membrana e,terna celular pode atuar como barreira prevenindo a
penetrao do acido cauren?ico EcI=@<46 et al*! #$$#F! ou ainda apresentar resistncia a
permeabilidade da membrana ao )lavon?ide luteolina* <sta capacidade anti)8ngica torna estes
compostos promissores para o desenvolvimento de anti)8ngicos mais potentes e talve.! mais
seguros que aqueles usados atualmente para tratar as micoses resistentes da pele! produ.idas
por )ungos oportunistas! especialmente em pacientes imunocomprometidos E=+C+7 et al.!
#$$#_ 7+CCOI4&! #$$0F*
5.4 ENSAIO DA Neurospora crassa
& bioensaio da .eurospora crassa 3 preditivo na maioria dos casos podendo )ornecer
indicao quanto ao mecanismo de ao de compostos ativos! atrav3s da inibio da sntese da
parede celular )8ngica como tamb3m indicar uma possvel inibio da sntese de polmeros e
en.imas envolvidas na sntese dos demais polmeros da parede como! por e,emplo! M!I/g
glicanos ou manoprotenas! al3m daquelas que interv3m na sua organi.ao
E6<=I:5<44I@&! MUU#_ 7+CCOI4&! #$$MF*
4a avaliao in (itro dos e,tratos das )lores da Acmela brasiliensis 6preng e do
composto puro / luteolina / pelo bioensaio da .eorospora crassa que detectam inibidores da
parede celular )8ngica! a atividade apresentada pelas )ra>es e compostos obtidos das )lores da
Acmela brasiliensis 6preng! no m3todo de diluio em agar e no ensaio da .eurospora
crassa! veri)icou/se que estes e,tratos provavelmente atuam por outroEsF mecanismoEsF de
ao sobre a c3lula )8ngica que no a inibio da parede celular da .eurospora crassa! pois
no )oi observado "alo de inibio em torno do disco de papel E6<=I4:5<44I@&! MUK0_
7+CCOI4& et al.! MUUK_ #$$0F* oram testados )ra>es Oe,! DCM! -u&O e os compostos
puros =uteolina e Bcido cauren?ico sendo que nen"um dos e,tratos testados da Acmela
brasiliensis 6preng apresentaram inibio contra a .eorospora crassa* 6egundo t3cnica
utili.ada por 7acc"ino et al* EMUUKF! 3 recomendado o uso como controle positivo do
Cetocona.ol! que apresentou "alo claro mostrando inibio do crescimento )8ngico*
+ interpretao do resultado )oi reali.ada sob microscopia para veri)icar a aparncia
do )ungo observando/se "alos de m; )ormao de "i)as com aspecto enevoado*
IJ
5.5 ENSAIO DE TOXICIDADE COM Artemia salina
(ara a reali.ao do ensaio de to,icidade! selecionou/se um composto isolado de cada
parte da planta* e nen"um dos compostos testados apresentou atividade t?,ica )rente a
Artemia salina.
Con)orme demonstrado na :+-<=+ % observam/se as )ra>es "e,ano e
diclorometano do e,trato das )lores e da planta inteira coletadas nos jardins da U6C da
Acmela brasiliensis no apresentaram to,icidade no bioensaio em microplaca para Artemia
salina. + concentrao )inal do e,trato )icou entre K a %$$ \gXm=* &s resultados do c;lculo da
porcentagem de mortalidade EdMF dos compostos testados )oram semel"antes ao do controle!
mostrando a no inibio das larvas*
Diversos trabal"os tentam correlacionar a to,icicidade sobre Artemia salina com
atividades anti)8ngica! viruscida! antimicrobiana! parasiticida! tripanossomicida! entre outras
E6&=I6 et al*! MUU0_ 6ITU<I5+ et al*! MUUK_ (+H5&= et al*! #$$M_ 6ITU<I5+ et al*! #$$M_
@+4<LU6U@U et al*! #$$#_ M&5<I5+ et al*! #$$0F* (arra et al* E#$$MF utili.ou o teste com
Artemia salina como um teste preliminar para avaliar a to,icidade do composto*
oram testados apenas as )ra>es "e,ano e diclorometano para o bioensaio de
to,icidade com Artemia salina! pois estas )oram as )ra>es que apresentaram maior atividade
antibacteriana e anti)8ngica* 4o )oram reali.ados os testes com os compostos puros ;cido
cauren?ico e luteolina! por no termos quantidade de material su)iciente para reali.ao deste
ensaio*
<studos de cito,icidade reali.ados com e,trados de plantas do mesmo gnero e do
;cido cauren?ico isolado mostraram resultados semel"antes EM&::+@I4+! #$$2F*
Interessante ressaltar que o composto ;cido cauren?ico puro no mostrou citoto,idade quando
testado contra c3lulas tumorais "umanas EOUI! MUKUF*
IK
TABELA 5 - +tividade t?,ica de )ra>es "e,[nicas e diclorometano dos e,tratos das )lores e
planta inteira da Acmela brasiliensis 6preng contra larvas de Artemia salina.
Frao Atividade txica CL
50
(g/mL)
rao "e,[nica das )lores pM$$$
rao diclorometano das )lores pM$$$
rao "e,[nica planta inteira Uj pM$$$
rao diclorometano planta inteira Uj pM$$$
Uj a coletadas nos jardins da U6C
<studos posteriores com as )ra>es citadas na :+-<=+ % podero ser reali.ados
identi)icando oEsF componenteEsF das )ra>es e reali.ando/se modi)ica>es estruturais na
mol3cula! condu.indo a produtos com atividade mais signi)icativa como sugeridos por
6iqueira et al*E#$$MF*
&s resultados encontrados no estudo estabeleceram correlao entre a letalidade das
)ra>es de )lores e planta inteira de Acmela brasiliensis 6preng sobre as larvas de Artemia
salina! demonstrando que os compostos no possuem ao t?,ica! o que 3 indispens;vel no
caso de um tratamento seguro* <ste teste tamb3m pode ser utili.ado em pases em
desenvolvimento! onde K% d da populao )a.em uso de plantas medicinais na teraputica
alternativa E(+55+ et al*! #$$M_ M&::+@I4+! #$$2F*
<studos de to,icidade au,iliam na triagem de uma grande variedade de compostos
com atividade biol?gica para de)inir seu potencial de aplicao teraputica mensurando a
to,icidade apresentada dos possveis )uturos );rmacos EC+5-+==& et al*! #$$#F*
In8meros )itoter;picos utili.ados por prescrio ou por automedicao! carecem de um
maior controle de qualidade! uma ve. que a literatura cient)ica indica que muitas destas
plantas podem apresentar subst[ncias t?,icas ou composio qumica vari;vel E4&=DI4 et
al*! #$$0F*
<speramos que compostos isolados da Acmela brasiliensis 6preng possam
)uturamente )a.er parte do arsenal teraputico para tratamento das in8 meras patologias que
acometem o "omem! a )lora e a )auna! visto que! "; v;rios estudos! muitos deles reali.ados
nesta Universidade! que validam o uso popular desta planta pelas suas propriedades
antiin)lamat?rias! analg3sicas e antimicrobianas entre outras*
IU
6 CONCLUSES
&s resultados obtidos no desenvolvimento do trabal"o permitiram concluir que'
M* + planta Acmela brasiliensis 6preng EWedelia paludosaF apresentou atividade
antimicrobiana contra as bact3rias Lram positivas testadas Bacillus cereus! Staphylococcus
aureus! Staphylococcus saprophyticus! Streptococcus agalactiae e contra os )ungos
dermat?)itos Epidermophyton floccosum! Trichophyton rubrum e Trichophyton
mentagrophytes*
#* &s e,tratos! )ra>es e compostos puros E;cido cauren?ico e luteolinaF no apresentaram
atividade antimicrobiana contra as bact3rias Enterobacter cloacae! Escherichia coli! !roteus
mirabilis! !seudomonas aeruginosa! Salmonella tiphymurium e os )ungos Aspergillus fla(us!
Aspergillus fumigatus! Aspergillus niger! andida albicans! andida tropicalis!
ryptococcus neoformans, Microsporum canis! Microsporum gypseum! .eorospora crassa e
Saccharomyces cere(isiae*
0* +s )ra>es "e,ano e DCM das )lores da Acmela brasiliensis 6preng apresentaram atividade
antibacteriana principalmente contra Bacillus cereus e Staphylococcus saprophyticus ECIM
entre #$$ e M$$$ \gXm=F* oi veri)icado semel"ante per)il de CIM contra Bacillus cereus e
Staphylococcus saprophyticus para as mesmas )ra>es da planta inteira coletada nos jardins da
U6C e da planta inteira coletada na praia* + Concentrao -actericida Mnima das )ra>es
"e,ano e DCM )oram consideradas com )raca atividade bactericida Eentre %$$ a M$$$ \gXm=F
para as bact3rias Lram positivas testadas*
2* &s compostos puros ;cido cauren?ico e luteolina! quando testados contra bact3rias Lram
positivas apresentaram atividade antimicrobiana! sugerindo que esses compostos isoladamente
ou em conjunto com outros compostos sejam os respons;veis pela atividade antibacteriana da
planta em estudo*
%* +s )lores da Acmela brasiliensis 6preng EWedelia paludosaF apresentaram atividade
anti)8ngica contra dermat?)itos! contribuindo para a validao do uso desta parte da planta na
medicina popular para o tratamento de in)ec>es d3rmicas pelos dermat?)itos
Epidermophyton floccosum ECIM %$ \gXm=F_ Trichophyton mentagrophytes e Trichophyton
J$
rubrum ECIM M$$ \gXm=F* (or3m no apresentaram atividade contra leveduras e )ungos
)ilamentosos causadores de micoses sistmicas*
I* + luteolina e principalmente o ;cido cauren?ico parecem ser os constituintes de maior
atividade detectados nesta planta* 6ua seletividade contra dois gneros de dermat?)itos
EEpidermophyton sp* e Trichophyton sp*F 3 particularmente promissora*
J* &s e,tratos das )lores e planta inteira da Acmela brasiliensis 6preng e do composto puro
luteolina! quando testados para avaliar mecanismo de ao pelo m3todo de .eorospora
crassa! no apresentaram atividade*
K* +s )ra>es "e,ano e diclorometano tanto das )lores como da planta inteira de Acmela
brasiliensis no apresentaram to,icidade )rente o ensaio com Artemia salina*
JM
7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
+L5+! M**_ -+5-&6+ I=O&! 9*M* =evantamento da )lora medicinal da (araba e triagem
)itoqumica* Rev. Bras. Farm., v*JM! n*0! p*J#/JI! MUU$*
+=V<6! :*M*+*_ 6I=V+! +**_ -5+4DQ&! M*_ L5+4DI! :*6*M*_ 6MZ4I+! <**+*_ 6MZ4I+
9U4I&5! +*_ 7+4I! C*=* -iological screening o) bra.ilian medicinal plants* Mem. Inst. Oswaldo
Cruz, v*U%! n*0! p* 0IJ/0J0! #$$$*
+M&5IM! <*=*C*_ =IM+! C*6*+*_ OILI4&! 9*6*_ 6I=V+! =*5*6*_ +=-UTU<5TU<! U*(*
itoterapia' Instrumento para uma mel"or qualidade de vida* Infarma, v.M%! n*M/0! p*II/IU! #$$0*
+4D5+D< 4<:&! M* Contribuio ao conhecimento qumico de plantas de Nordeste,
Pilocarpus sp. ortale.a! MUKU* Dissertao EMestrado TumicaF* Departamento de Tumica!
Universidade do Cear;*
+4c+5! M*6_ -&@O+5I 6*5* +ntimicrobial resistence o) comunit] and "ospital acquired
Staphylococcus aureus isolates to o,acillin and glicopeptides* 1. Coll. Physic. Surg. Pak., v*M0! n M!
p* 0/I! #$$0*
-+M-<@<! *V*_ MICO&:! 9*M*_ :U=@<46! (*M* +ntibiotic e))lu, pumps in eu`ariotic cells'
occurrence and impacto on antibiotic cellular parmacoc`inetics! p"armacod]namics and
to,icod]namics* 1. Antimicrob. Chemother., v* %M! p*M$IJ/M$JJ! #$$0*
-+5&4! <*9*_ I4<L&=D* 6*M* Bailey & Scott` s - Diagnostic microbiology, K ed* :"e C*V*
Mosb] Co' 6t* =ouis! MUU$*
-+5&4! 6* Medical microbiology textbook* Disponvel em' "ttp'XXgsbs*utmb*eduXmicroboo`*"tm*
+cesso em' jun"o de #$$%*
-+55<I5&! <*9* Desen"o de );rmacos a partir de produtos naturais* In'HU4<6! 5*+*_ C+=IW:&!
9*-* Plantas medicinais sob a tica da moderna qumica medicinal* C"apec?' +rgos! p* #0J/#UI*
#$$M*
-+55<I5&! <*9*_ 5+L+! C*+*M* Qumica medicinal: As bases moleculares da ao dos
frmacos* (orto +legre' +rtmed <d*! #$$M* #20p*
-+55<::/-<<! @*! 5HD<5! 4* -ioc"emical aspects o) ergosterol bios]nt"esis in"ibition* In'
6U:C=I<! 9*! L<&5L&(+(+D+@&U! 4* E<dsF! Emerging targets in antibacterial and
antifungal chemotherapy. C"apman and Oall! 4e^ Hor`! p* 2MM/20%! MUU#*
-+6I=< +*_ LI&5D+4&! 6*_ =&(<7/6+<7 9* +*_ C&-I+4COI* +ntibacterial activit] o) pure
)lavonoids isolated )rom mosses* Phytochemistry, v* %#! n* K! p* M2JU/K#! dec MUUU*
-+6I=< +**_ 6&5-& 6*_ LI&5D+4&! 6*_ 5ICCI+5DI! =*_ M&4:<6+4& D*_ C&-I+4COI! C*5*_
VU&::&! M*=*_ <55+5+! =* +ntibacterial and allelopat"ic actrivit] o) e,tract )rom astenea
sati(a leaves* Fitoterapia, v* JM! p*MM$/MMI! #$$$*
-+:I6:+! 5*_ COI+4! <*_ &=IV<I5+! +*-* :r]panosomicidal `aurene diterpenes )rom Wedelia
paludosa* Planta Med., v I%* p* #K0/#J2! MUUU*
-<=<M! =** 6tud] o) t"e c"emistr] and antimicrobial activit] o) haetocarpus blanchetii
E<up"orbiaceaeF* In' 6IM(V6I& -5+6I=/COI4+ D< TUSMIC+ < +5M+C&=&LI+ D<
(5&DU:&6 4+:U5+I6! MUU$! 5io de 9aneiro* Resumos*** 5io de 9aneiro' MUU$* p* MI#*
J#
-I+V+::I! M*c* Qumica e bioatividade da Raulinoa echinata, espcie endmica do Vale do
Itaja - SC* #$$M* #2Kp* :ese EDoutoradoF / Universidade ederal de 6o Carlos! 6o Carlos*
-=&C@! =*C* Determinao dos princpios ativos de Wedelia paludosa D.C. (Compositae)*
Monogra)ia de concluso de Curso de arm;cia da Universidade do Vale do Itaja! Itaja/6C! MUUJ*
-=&C@! =*C*_ 6CO<ID:! C*_ 6+4:&6! +*5*6*_ HU4<6! 5*+*_ 6&U7+! M*M*_ D<==< M&4CO<!
* e C<COI4<= I=O&! V* C"emical and p"armacological e,amination o) Wedelia paudosa* 1.
Ethnopharmacol., v*IM! p* K%/KU! MUUKa
-=&C@! =*C*_ 6CO<ID:! C*_ TUI4:Q&! 4*=*M*_ 6+4:&6! +*5*6* e C<COI4<= I=O&! V*
("]toc"emical and p"armacological anal]sis o) di))erents parts o) Wedelia paudosa D*C*
ECompositaeF* Pharmazie, v* %0! n*M$! p* JMI/JMK! MUUKb*
-&4:<M(&! M* Medicina natural. 6o (aulo' 4ova Cultural! MUU$*
-&V<5I6! +*_ +=V+5<7 6*_ +54+I7! 6*+*_ V+=D<7! =* Handbook antioxidants* Cadenas'
(ac`er! =* <ds*! #$$$! 0%M p*
-5<6CI+4I! =**V* et al* Comparative stud] o) di))erent parts o) Wedelia paludosa b] gas
c"romatograp"]* Nat. Prod. Lett., v* M2! n* 2! p* #2J/#%2! #$$$*
-5<6CI+4I! =**V_ HU4<6! 5*+*_ C<COI4<= I=O&! V* 6easonal variation o) `aurenoic acid
Wedelia paludosa EAcmela brasiliensisF* Z. Naturforsch. C]! v* %U! n* 0X2! p* ##U/#0#! #$$2*
-5<6CI+4I! =**V* +n;lise quantitativa dos princpios ativos de algumas plantas medicinais da )lora
catarinense* :ese de Doutorado! U6C! lorian?polis/6C! #$$0*
C+=IW:& 9*-*_ 6+4:&6 +*5*6*_ C<COI4<= I=O&! V*_ HU4<6 5*+* + revie^ o) t"e plants o)
genus !hyllanthus' t"eir c"emistr]! p"armacolog]! and t"erapeutic potencial* Med. Chem. Res., n*MK!
p* ##%/#%K! MUUK*
C+=IW:&! 9*-_ -<I5I:O! +*_ <55<I5+! 9* 6+4:&6! +*5*6*_ C<COI4<= I=O&! V*_ HU4<6!
5*+* 4aturall] occurring antinociceptive substances )rom plants* Phytother. Res., v*M2! p* 2$M/2MK!
#$$$*
C+4:5<==! C*=*_ 5+47-=+U! 6*L*_ I6CO<5! 4*O* +ntim]cobacterial plant terpenoids* Planta
Med., v* IJ! p* IK%/IU2! #$$M*
C+(5+! * Ponto de mutao* 6o (aulo' <ditora Cultri,! MUUJ trad*' Cabral! +*
C+5D<4+6! M*_ C5U7! C*_ D<= (&<:+! M*_ COU4L! 4*_ (<5<C:! 9*_ O<I:M+4! 9* Clin.
Microb. Rev., v*M#! p* %K0! MUUU*
C+5-+==&! 9*=*_ O<54B4D<7/I4C+! 6*=*_ (N5<7! (*_ L+5CI+/L5BV+=&6! M*D* +
comparison bet^een t^o brine s"rimp assa]s to detect in (itro c]toto,icit] in marine natural
products* BMC Biotechnol., v*#! n*M! p*MJ! #$$#*
C+5D&6&! O*:*_ 6+4:&6! M*=* <studos sobre a presena de antibi?ticos nos vegetais* Bras. Med*!
6o (aulo! v* I#! p* IJ/J$! MU2K*
C+5V+=O&! L*9*+*_ C+5V+=O&! M*<* Diterpenos! triterpenos e esteroides das )lores da Wedelia
paludosa* Quim. Nova, v* #2! n*M! p* #2/#I! #$$M*
J0
C<COI4<= I=O&! V* e HU4<6! 5*+* <strat3gias para a obteno de compostos
)armacologicamente ativos a partir de plantas medicinais*Conceitos sobre Modi)icao estrutural para
otimi.ao de atividade* Quim. Nova, 6o (aulo* v* #M! n* M! p* UU/M$%! MUUK*
C<COI4<= I=O&! V* (rincipais avanos e perspectivas na ;rea de produtos naturais ativos' <studos
desenvolvidos no 4IT+5XU4IV+=I Quim. Nova, 6o (aulo! v*#0! n* %! p*IK$/IK%! #$$$*
C<COI4<= I=O&! V*_ HU4<6! 5*+* <studo qumico de plantas medicianis orientado para an;lise
bil?gica* obteno! determinao e modi)icao estrutural de compostos bioativos* In' HU4<6! 5*+*_
C+=IW:&! 9*-* Plantas medicinais sob a tica da moderna qumica medicinal* C"apec?' +rgos!
p* 2J/J%! #$$M*
CO+:&4<:! 9* As plantas medicinais' preparo e utili.ao* 5io de 9aneiro' Martins ontes! MUJU!
MJ%p*
CO+UI! M* Convite a Filosofia* Ked* 6o (aulo' <d* Btica! MUUJ! 22$p*
CO&cDOU5H +*5*_ 6O+5M+ 6*_ M+4D+= 6*_ L&6c+MI +*_ MU@O&(+DOH+H 6*_
M+9UMD<5 O*@* =uteolin! an emerging anti/cancer )lavonoid! poisons eu`ar]otic D4+
topoisomerase I* Biochem 1., n*0II! p* I%0 e IIM! #$$#*
COU4L! 9*L*_ O6I+! :*C*_ @U&! O*M*_ =I! H*C*_ =<<! H*M*_ =I4! 6*6*_ OU4L! C** In"ibitor]
actions o) luteolin on t"e gro^t" and ar]lamine 4/acet]ltrans)erase activit] in strains o) %elicobacter
pylori )rom ulcer patients* Toxicol. In Vitro, v M%! n* 0! p*MUM/K! #$$M*
C=+5@<! 9*M*_ LI==I4L6! M*5*_ +=:+VI==+! 4*_ -<+=<! +*9* :esting natural products )or
antimicrobial activit] e potential problems ^it" )luorescein diacetate assa]s o) cell viabilit] 1.
Microbiol. Meth., v* 2I! n*0! p*#IM! #$$M*
C&<=O& D< 6&U7+! L*_ O++6! +*(*6*_ V&4 (&6<5! L*=*_ 6CO+(&V+=! <*<*6*_
<=I6+-<:6@H! <* <tnop"armacological studies o) antimicrobial remedies in t"e 6out" o) -ra.il* 1.
Ethnopharmacol., v* U$! p*M0%/M20! #$$2*
C&55l+! (*M* Dicionrio das plantas teis do Brasil e das exticas cultivadas* 5io de 9aneiro'
Imprensa 4acional! v* %! p*M0J! MUK2*
C&5D<I5&! * Atividade antimicrobiana de fraes semi-puritificadas e compostos puros de
Wedelia paludosa D.C. (Compositae). Itaja! MUUK* Monogra)ia ELraduao Curso de arm;ciaF*
Centro de <ducao 6uperior de Cincias da 6a8de! Universidade do Vale do Itaja! Itaja/6C*
C&:&5+6! M*_ &=CO! C*_ M<4D&7+! =* C"aracteri.ation o) t"e anti)ungal activit] on -otr]tis
cinerea o) natural diterpenoids `aurenoic acid and # beta/"idro,]/`aurenoic acid*
1. Agric Food Chem., v* %#! n* M$! p* #K#M/ #K#I! #$$2*
C&c+4! M*M* (lant products as antimicrobial agents* Clin. Microbiol. Rev.! v*M#! n*2! p*%I2/%K#!
MUUU*
D+VI4& 6*C*_ LI<6-5CO: +*M*_ 5&TU< 4** +ntimicrobial activit] o) `aurenoic acid
derivatives substituted on carbon/M%* Braz. 1. Med. Res.! v* ##! p*U! p* MM#J/U! MUKU*
D+9+6! *_ 5IV<5+! *_ -=+6I4+ *_ +55<D&4D&! * <CO<V<55H! C*_ =+&4! =*_
M&5TUI&! +*_ O<I7<4! O* Cell culture protection and in (i(o neuroprotective capacit] o)
)lavonoids* Neurotox. Res., v*% n*I! p* 2#%/0#! #$$0*
J2
D&5M+4! O*9*D*_ D<+46! 6*L* +ntimicrobial agents )rom plants' antibacterial activit] o) plants
volative oils* 1. Appl. Microbiol., v*KK! p*0$K/0MI! #$$$*
D+6 D&5<6! 5*L*5*_ VI+4+! =*&*_ (<5<I5+! =*<*_ (<D5&6+! C*D*_ 6I=V+! 5*5*_ (I4O<I5&!
+*C*4*_ 4+6CIM<4:&! C*-*_ 6I=V+! D*C*&*_ C+M(&6! L*-*c*_ -&5L<6! 9*_ +=M<ID+!
9*C*6*_ 5<I:+6! =*6*_ 6I=V+! =*C*_ &4:<6! 6*D*_ (<5<I5+! :*M*C*_ MI5+4D+! :*M*
itoterapia e alopatia' a ateno )armacutica AverdeC* Infarma, v*M% n*0! p*I#/I%! #$$0*
D&6 6+4:&6! D*5*! D< 6&U7+! 5*6*6* Avaliao da atividade antimicrobiana de extratos e
fraes das plantas Bauhinia foorficata !alophyllum brasiliense Epidendrum mosenii e Rubus
imperialis. Monogra)ia de concluso de Curso de arm;cia da Universidade do Vale do Itaja! Itaja!
#$$$*
DUH! C**_ (&c<5! 5** +ntio,idant and antimicrobial properties o) some c"inese plant e,tracts*
Int. 1. Antimicrobiol. Agents, v* MJ! p*%#J/%#U! #$$M*
+546c&5:O 4*5*! -I4L<= +*6* In' New natural products and plant drugs with
pharmacological, biological or therapeutical activity* 6pringer' 4e^ Hor`_ p* IM/J0! MUUJ*
<55<I5+!D*:*_ =<V&5+:&! +*5*_ +5I+! :* 9* et al* <udesmadolide lactones )rom Wedelia
paludosa. Nat. Prod. Lett., v* 2! n*M! p* M/J! MUU2*
<55<I5+ 9*_ =&5I+4I +*<*_ C<COI4<= I=O&! V* +ntinoceptive proprieties o) met"anolic
e,tract and t^o triterpenes isolated )rom <pidendrum mosenii stems E&r"idaceaeF* Life Sci., v* II! p*
JUM/K$#! #$$$*
I6O<5! *_ C&&@! 4*-* Micologia: Fundamentos e diagnstico. 5io de 9aneiro' 5evinter! #$$M*
5<I:+6! =*6*_ 6I=V+! =*C*_ &4:<6! 6*D*_ (<5<I5+! :*M*C*_ MI5+4D+! :*M* itoterapia e
alopatia' a ateno )armacutica AverdeC* Infarma, v*M%! p*I#/I%! #$$0*
L+<5:4<5! M*_ Mr==<5! =*_ 5&&6! 9** et al* +nalgesic triterpenes )rom 6ebastiana sc"ottiana
roots* Phytomedicine, v* IM! p* 2M/22! MUUU*
LOI6+=-<5:I! <*=* :"e biological activit] o) naturall] occurring `aurenes diterpenes* Fitoterapia,
v*IK! p* 0$0/0#%! MUUJ*
L4+4+M+4IC@+M! 6*6*_ M+46I<=D! 9*c* 6elective to,icit] o) ^]rone and ot"er p"]toale,ins
to Lram positive bacteria* Phytochemistry, v* #$! n*%! p*UUJ/M$$! MUKM*
L5I&! * e 5&6<4:O+=! 9* Biodiversity and human health. cas"ington' Island (ress! MUUJ! 0JU
p*
O+D+C<@! *_ L5<L<5! O* :esting o) anti)ungal natural products' met"odologies! comparabilit] o
results and assa] c"oice Phytochem. Anal., v*MM! p*M0J/M2J! #$$$*
O+4+6+@I! H*_ &L+c+! 6*_ U@UI 6* ree 5adical* Biol. Med., v* MI! p* K2%! MUU2*
O&=<:7! *-*_ (<66I4I! L*=*_ 6+4CO<6! 4*5*_ C&5:<7! D*+*L*_ 4+@+MU5+! C*V*_ DI+6
I=O&! -*(* 6creening o) some plants used in t"e bra.ilian )ol` medicine )or t"e treatment o)
in)ectious diseases* Mem Inst Oswaldo Cruz, v* UJ! n* J! p* M$#J/M$0M! #$$#*
&5cI:7! 6*-* Oo^ to ma`e ta,ol )rom strac`* Nature, n* 0IJ! p* %U0/%U2! MUU2*
J%
OUI! H*! 5U((5<CO:! 9*_ =UI! H*_ +4D<56&4! 9*_ 6MI:O! D*_ CO+4L! C*_Mc =+ULO=I4! 9*
-ullatacin and bullatacinone' t^o "ig"l] potent bioactive acetogenins )rom +nnona bullata* 1. Nat.
Prod., v* %# p*2I0/2IJ! MUKU*
I@5+M! M*_ O+T! I* 6creening o) medicinal plants )or antimicrobial activit]* (art I* Fitoterapia, v*
%M! p* #0M/ #0%! MUK$*
9+466<4! +*M*_ 6CO<<5! 9*9*C*_ 6V<4D6<4! +*-* +ntimicrobial activities o) essencial oils' a
MUJI e MUKI literarure revie^ on possible applications* Pharm. Week Sci., p* MU0/MUJ! MUKJ*
9&HC<! C* Earthly goods: medicine hunting in the rainforest* 4e^ Hor`* <d*=ittle! -ro^n and
Compan]! MUU2! 0$2p*
@I4L6:&4! D* I* :"e c"emistr] o) ta,ol* Pharm. Ther., n* %#! p* M/02! MUUM*
@&4<M+4! <*c*_ +==<4! 6*D*_ 9+4D+! c*M*_ 6CO5<C@<4-<5L<5! (*C*_ cI44 95! c*C*
Diagnstico microbiolgico. % ed* Medsi' 5io de 9aneiro! p*JUI/K$U! #$$M*
@q<O=<5 :*_ (<COs5<!9*_ (=N6I+:!(* -acterial antibiotic e))lu, s]stems o) medical importance*
Cell. Mol. Life Sci., v*%I! p* JJM/JJK! MUUU*
=+C+7! C*6*_ (&5:&! <*_ M+5:I46! 9*<*C*_ O<I46/V+CC+5I! <*M*_ D< M<=&! 4*:* Tratado
de micologia mdica. 6arvier' 6o (aulo! #$$#! MM$2p*
=I! <*_ C=+5@! +* e OU&5D !C*' +nti)ungal evaluation o) pseudolaric acid -! a major constituent
o) !seudolari) *aempferi* 1. Nat. Prod., v* %K! p* %J/IJ! MUU%*
=IM+! <*&* Estudo das dermatofitoses em 1oo Pessoa - Paraba e da atividade antifngica de
plantas medicinais da regio contra alguns dos agentes isolados* 6o (aulo! MUUI* MK$p*
Dissertao EDoutorado ;rea de an;lises clinicasF! aculdade de Cincias armacuticas!
Universidade de 6o (aulo*
=IM+! <*&* (lantas e suas propriedades antimicrobianas' uma breve an;lise "ist?rica. In' HU4<6!
5*+*_ C+=IW:&! 9*-* Plantas medicinais sob a tica da qumica medicinal moderna* +rgos!
C"apec?! p* 2JU/2UU! #$$M*
=V(<7! 6*4*_ C+6:<==I! M*V*_ 7+CCOI4&! 6*+*_ D&MI4LU<7! L*=*_ CO+55I6/CO+55I6! 9*_
C&5:N6! 9 C*L*_ 5I-+6! 9*C*_ D<VI+! C*_ 5&D5ILU<7! +*M* e <45I7! 5*D* Cn (itro anti)ungal
evaluation and struture/ativit] relaons"ips o) a ne^ series o) c"alcone derivatives and s]nt"etic
analogues! ^it" in"ibitor] properties agains pol]mers o) )ungal cell ^all* Bioorg. Med. Chem., p*
MUUU/#$M0! #$$M*
M+CI<=! M*+*M*_ (I4:&! +*C*_ V<IL+ 9*5* (lantas medicinais' + necessidade de estudos
multidisciplinares* Quim.Nova, v* #%! n* 0! p* 2#U/20K! #$$#*
M+=O<I5&6! +*_ (<5<6! M*:*=*(* +lelopatia' intera>es qumica entre esp3cies*In' HU4<6! 5*+*_
C+=IW:&! 9*-* Plantas medicinais sob a tica da moderna qumica medicinal* C"apec?' +rgos!
#$$M* p* %$2/%#0*
M<4D&7+! I_ cI=@<46! M*_ U57U+! +* +ntimicrobial stud] o) t"e resinous e,udates and o)
diterpenoids and )lavonoids isolated )rom some c"ilcan !seudognaphalium E+steraceaeF* 1.
Ethnopharmacol., v*%K! p*K%/KK! MUUJ*
JI
M+:&6! *9* +s* (lantas medicinais brasileiras e um desa)io para os nossos qumicos* Desafio
E5evista de <,tenso e ortale.aF! v* 0! n* M! p* %/M0! MUU$*
M<H<5! -*4*_ <55IL4I! 4*5*_ (U:4+M! 9*<* 9+C&-6<4! =*-*_ 4ICO&=6! D*<*9*_
Mc=+ULO=I4! 9*=* -rine s"rimp' a convenient general bioassa] )or active plant constituents*
Planta Medica. v* 2%! p* 0M/02! MUK#*
MICO+=+@! <* Apontamentos fitoterpicos da Irm Eva Michalak! lorian?polis' <pagri! p* U%!
MUUI*
MIM6! C*_ (=+H+I5! 9*_ 5&I::! I*_ c+@<=I4! D*_ cI==I+46! 5* Microbiologia mdica. # ed*
Manole' 6o (aulo! MUUU! %K2p*
MI:6CO<5! =*+*_ =<V! =* (*_ -+:O&=+! M*6*_ cU! c* 4*_ -<+=! 9*=* +ntimicrobial agents
)rom "ig"er plants* Introduction! rationale and met"odolog]* Lloydia, v* 0%! p*M%J/MII! MUJ#*
MI:6CO<5! =*+*_ D5+@< 6*_ L&==+(UDI! 6*5* e &@U4:<! @* + modern loo` at )ol`loric use o)
antiin)ective agentes* 1. Nat. Prod., v* %$! p* M$#% e 2$! MUKJ*
M&5<I5+! *(*M*_ C&U:I4O&! V*_ M&4:+4O<5! +*-*(*_ C+5&! M*6*-*_ -5ILO<4:<!
I*M*C*_ (I77&=+::I! M*L* lavon?ides e triterpenos de Baccharis pseudotenuifolia D bioatividade
sobre Artemia salina* Qum. Nova, v*#I! n*0! p* 0$U/0MM! #$$0*
M&55I66<H! 9*(*_ &6-&U54! +*<* ungal resistance to plant antibiotics as a mec"anism o)
pat"ogenesis* Microbiol. Env. Microbiology, v* IJ! n* J! p*J$K/J#2! #$$M*
M&::+@I4+! +*@*M*_ CO&cDOU5H-! 5**_ O+ID<5+! M*6*_ O+6+4-! C*M*_ 5+6OID! M*+*
C]toto,it] and antibacterial activit] o) e,tractives )rom Wedelia calendulacea* Fitoterapia, v* J%! n
0/2! p* 0%%/0%U! #$$2*
4+:I&4+= C&MMI::<< &5 C=I4IC+= =+-&5+:&5H 6:+4D+5D6* Met"ods )or diluition
antimicrobial susceptibilit] tests )or bacteria t"at gro^ aerobicall]* Approved standard M7-A3.
4CC=6' Vilanova! MUU0*
4<U! O*C*_ L&&:7! :*D* +ntimicrobial C"emot"erap]* In' -+5&4! 6* Medical microbiology
textbook* Disponvel em' "ttp'XXgsbs*utmb*eduXmicroboo`Xc"$MM*"tm* +cesso em' jun"o de #$$%*
4<cM+4! D*9*_ C5+LL! L*M*_ 64+D<5! @*M* 4atural products as sources o) ne^ drugs over t"e
period MUKM/#$$#* 1. Nat. Prod., v* II! p* M$##/M$0J! #$$0*
4I<5&! 5* Obteno de Novas Molculas com atividade analgsica e antiinflamatria a partir
de plantas medicinais brasileiras* #$$$! :ese EDoutoradoF Universidade ederal de 6anta Catarina!
Centro de Cincias sicas e Matem;ticas* Curso de (?s Lraduao em Tumica* U6C!
lorian?polis! 6C*
4I<5&! 5*_ M+=O<I5&6! +*_ -I::<4C&U5:! C*M*6*_ -I+V+::I! M*c*_ =<I:<! 6*4*_
C<COI4<= I=O&! V* +spectos qumicos e biol?gicos de plantas medicinais e considera>es sobre
)itoter;picos* In' -5<6&=I4! :*M*-*_ C<COI4<= I=O&! V* Cincias Farmacuticas:
Contribuio ao desenvolvimento de novos frmacos e medicamentos* <ditora U4IV+=I! #0U!
#$$0*
4I@+ID&!O* &uter membrane barrier as mec"anism o) antimicrobial resistance* Antimicrob. Agents
Chemother., v*00! p*MK0M/MK0I! MUKU*
JJ
&=IV<I5+! -*O*_ 6+4:t+4+! +*<*L*_ -+6:&6! D*7*=* Determination o) t"e dipertenoid!
`aurenoic acid! in Annona glabra b] O(=C* Phytochemistry. Anal., v* M0! p* 0IK/0JM! #$$#*
&6-&54! <*M* &n t"e occurence o) antibacterial substances in green plants* Br. 1. Exp. Pathol.,
=ondon! v* #2! n* I! p* ##J/#0M! MUU0*
(+H5&=! 9*+*_ M+5:I4<7! M*M*_ C+55+-<&! L*:*_ L+5CI+! &*C* +ctividad )armacol?gica
preliminar del )ruto de Bromelia pinguin E. Epiua de rat?nF* Rev. Cubana Farm., v* 0%! n*M! p* %I/I$!
#$$M*
(<D<56&4! C*6*_ I6O<5! (* -actericidal activit] o) vegetable juice* 1. Bacteriol., -altmore! v* 2J!
p* 2#M/2##! MUK2*
(<57/L+5CI+! *_ +D7<:! :*_ C+4ILU<5+=! 6* Free Radic Res., v* 00! n* %! p* IIM/I%! #$$$*
(OI==I(6! (*_ 6:<V<46! D*+*+*_ VIVI+4I! M* Managing ungal In)ection in t"e #Mst centur]'
ocus on itracona.ole* In' 6tevens D*+* Drugs Supplement, v* IM! n* M! #$$M*
(OI==I(6&4! 9*D* ("]toc"emistr] and medicinal plants* Phytochemistry, v* %I! p*#0J/#20! #$$M*
(5<::&! 9*-*_ C<COI4<= I=O&!V*_ 4U=DI4! V**_ 6+5:&5I! M*5*@*_ I6+I6+6! <*-*_ -<==+
C5U7! +* +ntimicrobial activit] o) )ractions and compounds )rom alophyllum brasiliense* Z.
Naturforsch.! %Uc! p* I%J/II#! #$$2*
5+O+=I6&4 ! =*_ O+M-U5L<5! M*_ O&6:<::M+44! @*_ 5<4@! <* + bioautograp"ic agar
overla] met"ods )or t"e detection o) anti)ungal compounds )rom "ig"er plants* Phytochem. Anal., v*
#! p* MUU/#$0! MUUM*
5+4L! O*(*_ D+=<! M*M*_ 5I::<5! 9*M* Farmacologia* 0 ed! Luanabara @oogan' 5io de 9aneiro!
MUUJ! IU#p*
5+UO+! 9*(*_ 5<M<6! 6*_ O<IM&4<4! M*_ O&(I+! +*_ @+O@&4<4! M*_ @U9+=+! :*_
(IO=+9+! @*_ VU&5<=+! O*_ VU&5<=+! (* +ntimicrobial e)ects o) )innis" plant e,tracts
containing )lavonoids and ot"er p"enoli compounds* Int 1 Food Microbiol., n*#% v* %I p* 0/M#! #$$$*
5<CI&! M*C*_ 5S&6! 9*=*_ VI==+5! +* + revie^ o) some antimicrobial compounds isolated )rom
medicinal plants reported in t"e literature bet^een MUJK e MUKK* Phytother. Res., v* 0! p* MMJ/M#%!
MUKU*
5<7<4D! M*C*_ U57U+! +*_ -&5:&=U77I! +*9*_ VB6TU<7! =* Variation o) t"e antimicrobial
activit] o) (seudoganap"alium vira vira E+steraceaeF' isolation and W/ra] structure o) ent/0g/"idro,]/
MI/`auren/MU/oic acid* 1. Ethinopharmacol., v* J#! p* 2%U/2I2! #$$$*
5I&6! 9*=*_ 5<CI&! M*C*_ VI=+5! + * 6creening met"ods )or natural products ^it" antimicrobial
activit]* 1. Ethnopharmacol., v* #0! p* M#J/M2U! MUKK*
5I(((&4! 9*c* Medical mycology* :"e pat"ogenic )ungi and t"e pat"ogenic actinom]cetes* 0* ed*
("iladelp"ia' c*-*6aunders! MUKK*
5&D5ILU<6! C* +*_ 6+VI! +*&*_ 6CO=<M(<5! V*_ 5<H4+UD! *_ C<COI4<= I=O&! V* +n
Improved <,tration o) marrubiin )rom Marrubium (ulgare* Chromatographia! v* 2J! n* JXK! p* 22U/
%$! MUUK*
5&TU<! 4**_ LI+4<==+! :*=*_ LI<6-5<CO:! +*M*_ -+5-&6+! 5* D< C*6*-*C* @aurene
diterpene )rom Wedelia paludosa. Rev. Latinoamer. Quim., v* MK! p*MM$! MUUJ*
JK
5&TU<! 4* *_ =+L&! 9* O* L*_ H&U4L! M* C* M* +nti)ungal sesquiterpenes )rom stem bar` o)
'uarea macrophylla EMeliaceaeF* Rev. Latinoamer. Quim., v*0$! n*M! p*M# / MI! #$$#*
5&TU<! 4* *_ 4U4<7! C* V*_ +M<<4D&=+! M* C*_ =+L&! 9* O* L* Diterpenes acids )rom
Mi*anis sp* nov* E+steraceaaeF* Biochem. Systemat. Ecol., v*0#! n*M! p*#00 / #0J! #$$2*
6+5:&5I! M*5*@*_ (5<::&! 9*-*_ C5U7! +*-*_ -5<6CI+4I! =**V*_ HU4<6! 5*+*_ 6&5:I4&!
M*_ 7+CCOI4&! 6*+*_ C<COI4<= I=O&! V*! +nti)ungal +ctivit] o) )ractrions and t^o pure
compounds o) )lo^ers )rom Wedelia paludosa EAcmela brasiliensisF E+6:<5+C<+<F! Pharmazie,
v* %K! n* K! p* %IJ/U! #$$0*
6CO=<M(<5! 6*5*M_ C&5D<I5&! *_ -=&C@! =* C*_ C<COI4<= I=O&! V* +tividade
antibacteriana de )ra>es semipuri)icadas e compostos puros de Wedelia paludosa ECompositaeF*
Alcance EItajaF! v*%! n* #! p*M2/MK! MUUK*
6CO+<CO:<5! M*_ <4L=<-<5L! 4*C*_ <I6<46:<I4! -*I*_ M<D&! L* Microbiologia:
mecanismos das doenas infecciosas. 0 ed* Luanabara @oogan' 5io de 9aneiro! #$$#! I2#p*
6CO5&D<5/V+4 D<5 <=6:! 9*(*_ 6MI:! 9*c*_ 5&MI94! O*+*_ V+4 D<5 O<ID<! D* Dietar]
)lavonoids and iodine metabolism* Biofactors, v* MU! n* 0/2! p* MJM/I! #$$0*
6<=I:5<44I@&! C*(* Use o) a temperature /sensitive protoplast )orming .eurospora crassa
strain )or t"e detection o) anti)ungal antibiotics! Antimicrob. Agents Chemother., v* #0! p* J%J/JI%!
MUK0*
6<=I4:5<44I@&! C* 6creening )or anti)ungal drugs* In' I4@<<=6:<I4* D*_ -+==! C*
Biotechnology of filamentous fungi* :ec"nolog] and (roducts* -utter^ort" Oeinemann! -oston* p*
MKU/#MJ! MUU#*
6<=I:5<44I@&! C* In' Antifungal drugs: (1,3) - - glucan synthase inhibitors* Lerman]'
6pringer/Verlag! ed*! p* UM/M0#!MUU%*
6<=I:5<44I@&! C*(* +nti)ungal (roteins* Apllied Enviromental Microbiology, v*IJ! n*J! p*
#KK0/#KU2! #$$M*
6I=V+! M*M*_ 6+4:&6 M*5*_ C+5&C&! L*_ 5&CO+ 5*_ 9U6:I4&! L* MI5+ =* 6tructure/
antio,idant activit] relations"ips o) )lavonoids' a re/e,amination* Free Radical Res., v* 0I! n* MM p*
M#MU/M##J! #$$#*
6IMY<6! C*M*&*_ 6CO<4@<=! <*(*_ L&6M+44!L_ M<==&! 9*C*(*_ M<4:7! =*+*_
(<:5&VIC@! (*5* Farmacognosia: da planta ao medicamento* %ed*! #$$0! MM$#p*
6ITU<I5+! *6*+* Mecanismos de resistncia a -eta/lact[micos em !seudomonas aeruginosa.
Revista do Biomdico, v* #2! #$$#*
6ITU<I5+! 9*M*_ 7IMI4I+4I! M*L*_ 5<6<4D<! U*M*_ -&+V<4:U5+! M*+*D* <studo
itoqumico das cascas do caule de "uguetia glabriuscula D +nnonaceae! biomonitorado pelo ensaio
de to,icidade )rente a Artemia salina =eac"* Qum. Nova, v* #2! n* #! p*MK%/MKJ! #$$M*
6ITU<I5+! 9*M*_ -&MM! M*D*_ (<5<I5+! 4**L*_ L+5C<7! c*6*_ -&+V<4:U5+! M*+*D*
<studo )itoqumico dv =nonopsis lindmanii +nnonaceae! biomonitorado pelo ensaio de to,icidade
sobre a Artemia salina =eac"* Qum. Nova, n* #M! n* %! p*%%J/%%U! MUUK*
JU
6ITU<I5+! 9*M*_ MU==<5! =*_ C+5&==&! C*+* +romadendrane sesquitepenoids )rom t"e
essencial oil leaves o) "uguetia glabriuscula e +nnoaceae* 1. Chil. Chem. Soc., v* #K! n*2! p*KU/U0!
#$$0*
6IW<=! (*9*_ (<CI4+==I! 4*5* 6eleo de plantas para pesquisa )armacol?gica* Infarma, v*M%! n*0!
p*J$/J0! #$$#*
6&=I6! (*4*_ c5ILO:! C*c*_ +4D<56&4! M*M*_ LU(:+ !M*(*_ (OI==I(6&4! D* + micro^ell
c]toto,ocit] assa] using Artemia salina Ebrine s"rimpF* Planta Med., v* %U! n* 0! p* #%$/#%#! MUU0*
6&U7+! M*M*_ -<==+ C5U7! +*_ 6COUM+CO<5! M*-*_ @5U<L<5! M*5*&*_ 5<I:+6! 5*+*_
-<==+ C5U7! 5**C* M3todo de avaliao biol?gica de produtos naturais e sint3ticos* In'
-5<6&=I4! :*M*-*_ C<COI4<= I=O&! V* Cincias Farmacuticas: Contribuio ao
desenvolvimento de novos frmacos e medicamentos. Itaja' <d Univali_ #$$0! #0Up*
:+V+5<6! c* Manual de antibiticos* 0*ed* 6o (aulo' +t"eneu! MUK2! 0J2 p*
:5+-U=6I! =*5*_ +=:<5:OUM! *_ L&M(<5:7! &**_ C+4D<I+6! 9*+*4* Microbiologia 0ed*
6o (aulo' +t"eneu! MUUU*
:6UCOIH+!O*_ 6+:&! M*_ MIH+7+@I! :*_ UHIc+5+! 6*_ &OH+M+! M*_ :+@+6+! :*_
=I4UM+! M* Comparative stud] on t"e antibacterial activit] o) p"]toc"emical )lavones against
met"icillin/resistant Staphylococcus aureus* 1. Ethnopharmacol., v*%$! p*#J/02! MUUI*
U<D+! O*_ H+M+7+@I! C* e H+M+7+@I! M* + "]dro,]l group o) )lavonoids a))ects oral anti/
in)lammator] activit] in"ibition o) s]stemic tumor necrosis )actor/alp"a production* Biosci.
Biotechnol. Biochem., v* IK! n*M! p* MMU/#%! #$$2*
UL+7! &*=* Investigacin fitoqumica* #ed* =ima' ondo <ditorial! (onti)icia Universidad del (eru'
MUU2*
U5-I4+! 9*M*_ C&5:<6! 9*C*L*_ (+=M+! +*_ =V(<7! 6* 4*_ 7+CCOI4&! 6*+**_ <45I7! 5*D*_
5I-+6! 9*C*_ @&U74<:6&V! V*V* In"ibitors o) t"e )ungal cell ^all* 6]nt"esis o) 2/ar]l/2/4/
ar]lamino/M/butenes and related compounds ^it" in"ibitor] activities o) EM/0F w glucan and c"itin
s]nt"ases* Bioorg. Med. Chem. K'%UM/%UK! #$$$*
V+4 -+M-<@<! *_ L=U(C7H46@I! H*! (=N6I+:! (*_ (sCO<5<! 9*C*_ :U=@<46! (*M*
+ntibiotic e))lu, in pro`aruotic cells' occurrence! impact on resistance and strategies )or t"e )uture o)
antimicrobial t"erap]* 1. Antimicrob. Chemother* v*%M! p*M$%%/M$I%! #$$0*
c5IL:O! =*_ 6C&::! <*_ L&5M+4! 6* :"e sensitive o) m]celium! art"rospores and microconidia
o) Trichophyton metagrophytes to imida.oles determined b] in (itro tests* 1ournal of Antimicrobial
Chemotherapy, v* M#! p* 0MJ/0#0! MUK0*
cI=@<46! M*_ +=+5C&4 C*_ U57U+* +*_ M<4D&7+! =* C"aracteri.ation o) t"e bactericidal
activit] o) t"e natural diterpene `aurenoic acid* Planta Med., v*IK n* %! p* 2%#/2%2! #$$#*
cI=O<=M I=O&! D*_ 6I=V+! <*=*_ -&V<5I6! +* lavon?ides +ntio,idantes de (lantas
Medicinais e +limentos' Import[ncia e (erspectivas :eraputicas* In'HU4<6! 5*+*_ C+=IW:&! 9*-*
Plantas medicinais sob a tica da moderna qumica medicinal* C"apec?' +rgos! p0MK/002! #$$M*
WU! O*W*_ =<<! 6** +ctivit] o) plant )lavonoids against antibiotic/resistant bacteria* Phytother.
Res., v* M%! n* M* p*0U/20! #$$M*
H+M+M&:&! O*_ &L+c+! :* +ntimicrobial activit] o) perilla seed pol]p"enols against oral
pat"ogenic bacteria* Biosci. Biotechnol. Biochem., v* II! n* 2! p* U#M/2! #$$#*
K$
HU4<6! 5*+*_ (<D5&6+! 5*C*_ C<COI4<= I=O&! V* ;rmacos e )itoter;picos' + necessidade do
desenvolvimento da ind8stria de )itoter;picos e )ito);rmacos no -rasil* Qum. Nova. v* #2! n. M! p*
M2J/M%#! #$$M*
HU4<6! 5*+*_ C+=IW:&! 9*-* Plantas medicinais sob a tica da moderna qumica medicinal*
C"apec?' +rgos! #$$M! %$$p*
HU4<6! 5*+*! C<COI4<= I=O&! V* -reve an;lise "ist?rica da qumica das plantas medicinais* In'
HU4<6! 5*+*_ C+=IW:&! 9*-* Plantas medicinais sob a tica da moderna qumica medicinal*
C"apec?' +rgos! p*MK/2#! #$$M*
7+CCOI4&! 6*_ 6+4:<CCOI+! C*_ =V(<7! 6*_ L+::U6&! 6*_ MU4&7! 9*_ C5U+4<6! +*_
VIV&:! <*_ C5U+4<6 M*_ 6+=I4+6! +*_ 5UI7! 5*_ 5UI7! 6* Cn (itro anti)ungal evaluation and
studies on t"e mode o) action o) eig"t selected )rom t"e argentine )lora* Phytomedicine! v* %! p* 0KU/
0U%! MUUK*
7+CCOI4&! 6* <strategias para a descoberta de novos agentes anti)ungicos* In' HU4<6! 5*+*_
C+=IW:&! 9*-* Plantas medicinais sob a tica da moderna qumica medicinal* C"apec?' +rgos!
p* 2J/J%! #$$M*
7+CCOI4&! 6*+*_ HU4<6! 5*+*_ C<COI4<= I=O&! V*_ <45I7! 5*D*_ @&U74<:6&V! V*_
5I-+6! 9*C* :"e need )or ne^ anti)ungal drugs' screening )or anti)ungal compounds ^it" a selective
mode o) action ^it" emp"asis on t"e in"ibitors o) t"e )ungal cell ^all* In' 5+I! M*_ M+5<6! D* Plant
derived antimycotics: current trends and future prospects* :"e Oa^ort" (ress! M/2M! #$$0*
7O+&! c*W*! =I+4L! C*=*! CO<4! 7*M*! (+4L! 5*T*! 7O+&! -*! CO<4! 7*=* =uteolin in"ibits
proli)eration and collagen s]nt"esis o) "epatic stellate cells* Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi, v*
M$! n* 0! p* #$2/I! #$$#*
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