GISELE LUDWIG TESSEROLLI

ANLISE HEMATOLGICA E BIOQUiMICA EM CGADOS

PESCOO-DE-COBRA (Hydromedusa tectifera)
MANTIDOS EM CATIVEIRO
CURITIBA
2004
Dissertao apresentada como requisito
parcial obteno do grau de Mestre, pelo
Curso de Ps-Graduao em Cincias
Veterinrias, do Setor de Cincias Agrrias
da Universidade Federal do Paran - rea
de concentrao em Patologia Animal.
Orientadora: Prof.
a
Dr.
a
Helena Cristina
da Silva de Assis
PS-GRADUAO EM CINCIAS VETERINRIAS

UFPR
PARECER
A Comisso Examinadora da Defesa de Dissertao da Candidata ao Ttulo de Mestre em Cincias Veterinrias,
rea Patologia Veterinria GISELE LUDWIG TESSEROLLI aps a realizao desse evento, exarou o seguinte
Parecer:
1) A Dissertao, intitulada "ANLISE HEMATOLGICA E BIOQUMICA EM CGADOS
PESCOO-DE-COBRA (Hydromedusa tectfera) MANTIDOS EM CATIVEmO" foi
considerada, por todos os Examinadores, como um louvvel trabalho, encerrando resultados que representam
importante progresso na rea de sua pertinncia.
2) A Candidata se houve muito bem durante a Defesa de Dissertao, respondendo a todas as questes que foram
colocadas.
Assim, a Comisso Examinadora, ante os mritos demonstrados pela Candidata, e de acordo com o Art. 78 da
Resoluo n 62/03 - CEPE considerou a candidata 11 r (Z (I v' t) \) y3 concluindo que faz
jus ao Ttulo de Mestre em Cincias Veterinrias, rea Patologia Veterinria.
Curitiba, 16 de Abril de 2004.
)01vJ fJ.;. &
Profa. Ora. HELENA CRIS:fl"NA DA SILVA DE ASSIS

Prof. Dr. DE MOURA LEITE
Membro
/! llt!/Gic
pro;; LOCATELLI DITTRICH
Membro
ii
"Aprender a nica
coisa que a mente
nunca tem medo,
nunca se cansa,
nunca se
arrepende"
Leonardo da Vinci
.-\ G RA D EC I ME NTOS
Agradeo Deus por sempre iluminar meu caminho,
A minha famlia pelo amor e incentivo em todas as horas,
A minha orientadora Prof' Dr
a
Helena Cristina da Silva de Assis, pela
amizade e conhecimentos transmitidos,
s professoras Elizabeth Schmidt Popazoglo e Rosngela Locatelli
Dittrich e ao professor Metry Bacila pela orienra8o e amizade, agradecimento
especial ao professor Rogrio Ribas Lange que foi o idealizador do projeto de
monitoramento de cgados pescoo-de-cobra,
Ao Curso de Ps-Graduao em Cincias Veterinrias, em nome do
Coordenador Prof. Dr. Jos Luciano Andriguetto.
Ao CNPq pela bolsa de pesquisa e PETROBRAS S.A. pelo apolO
financeiro dado a este trabalho,
Ao Hospital Veterinrio e ao Departamento de Farmacologia da UFPR
pelo emprstimo das dependncias de seus laboratrios.
s funcionrias Nara e Vitria, e estagiria Carla Yoko Tanikawa, do
Laboratrio de Patologia Clnica' da UFPR, pela companhia, amizade e contribuio
dada para a realizao deste trabalho,
s bolsistas Rossana Calegari dos Santos e Ana Paula Berger do
Departamento de Farmacologia, e ao professor Aguinaldo Jos do Nascimento, do
Departamento de Bioqumica da UFPR, pela amizade e contribuio na realizao
deste trabalho,
Aos bolsistas do Curso de Medicina Veterinria: Camile Lugarini, Carla
Yoko Tanikawa, Eunice L. Chertenzen, Fbio C. Gouveia, Fabola X. V.
Domingos, Fernanda C. Kandalski, Ferno Diego de S. Lopes, Flvia Maia,
Flvia de Mello Wolff, Gisele Sprea, Juliana B. Ferrari, Lais Fonseca, Larissa
Dantas Roeder, Laerzio C. Neto, Luciano de S. Malanski, Mrcia Tkacz, Michele
K. Lenz, Petra C. Kirsten, Rafael B. Ng.leto e Rodrigo A. M. de Souza, da UFPR
K. Lenz, Petra C. Kirsten, Rafael B. Noleto e Rodrigo A. :\'1. de Souza, da UFPR
que pat1iciparam do projeto "\'Ionitoramento de cgados pescoo-cle-cobra expostos ao
penleo. Araucria-PR".
Ao bilogo DI'. Jlio Csar de 'loura Leite. do 1\luseu de Histria Natural
(Curitiba-PR), pelas sugestes dadas para o enriquecimento deste n-abalho,
Ao Depanamento de Estatstica da UFPR. em especial ao professor
Fernando Perez e ao aluno Amaur\' de Moraes Castro.
A Andra Cristine Franco TesserollL pelo auxlio na cOITeo do abstracf,
Aos queridos amigos adquiridos ao longo desta caminhada, principalmente
a Priscila Paula de Carvalho, com os quais pude dividir muitos momentos
agradveis,
A Gustavo Henrique Ortenzi Peres pela amizade. companheirismo e
incentivo em todos os momentos,
Muito obrigada!
iv
SUMRIO
LISTA DE .......... " ......... " ........................... "............... . .................... vii
LIST4-\ DE TABEL.-\S.................. ............... .... .................. ........... ....................... vii
LISTA DE GRFICOS... ................... . ...................... Vlll
LIST.-\. DE .. "...... .."............................ ............ . ...................... viii
RESUMO....................... ............... ............ .. ............. IX
ABSTRACT .............................................................................................................. X
1 INTRODU . .\O ............................................................................................. .
1.1 COLHEIT.--\ DE SANGUE Eivl QUELN lOS.............. .................... .............. 4
l.2 HEMATOLOGIA DE QUELNIOS ............................................................. 5
1.2.1 Descrio das Clulas Sangneas de Quelnios ............................................. 7
1.2.1.1 Ertrctos .................................................................................................... 7
1.2.1.2 Leuccitos.................................................................................................... 8
1.2.1.2.1 Heterfilos .............................................................................................. 8
1.2.1.2.2 Eosinfilos ............ . ................................. ................. ............... .................. 9
1.2.1.2.3 Basfilos .............. . .............................................................. ...................... 10
1.2.1.2.4 Linfcitos ............ . ............................................................. ....................... 11
1.2.1.2.5 Moncitos .................................................................................................. 12
1.2.1.2.6 Azurfilos....... ......... ....... ........ ..... ...... ......... ...................... .... . ....... .............. 12
1.2.1.3 Trombcitos .................................................................................................. 13
1.3 BIOQUMICA PLASrvtATICA DE QUELNIOS .......................................... 14
1.3.1 Uria .................................................................................................................. 14
1.3.2 Creatinina .......................................................................................................... 15
1.3.3 Fosfatase Alcalina ............................................................................................. 15
1.3.4 cido rico ....................................................................................................... 15
1.3.5 Colinesterase Plasmtica.... ...... ....... .... ......... .... ....... ........ ... .......... ..................... 16
IA ARSNICO E METAIS PESADOS... ........................... ................................... 18
IA. 1 Chumbo ............................................................................................................. 19
1.4.2 Mercrio ............................................................................................................ 20
1.4.3 Cdmio......... ... ............. .......... ............. ... ........ ....... ...... .... ... .... ......... .................. 21
1.4.4 Cobre ................................................................................................................. 22
1.4.5 Arsnico................ ............. ....................................................................... ........ 23
2 MATERIAL E METODOS ............................................................................ 25
2.1 POPULAAo ESTUDADA E BIOTRIO ..................................................... 25
2.2 DIMORFISMO SEXUAL (SEXAGEfvl)......................................................... 26
2.3 COLHEITA DE SANGUE............................. .................................................. 27
2.4 DETERNlINAAO DOS PARMETROS HEMATOLGICOS.................. 28
2.4.1 Hematcrito ...................................................................................................... 28
2.4.2 Dosagem de Hemoglobina Total...................................................................... 28
2.4.3 Contagem de Eritrcitos Totais........................................................................ 29
2.4.4 Contagem de Leuccitos Totais ........................................................................ 29
2.4.5 Diferencial das Clulas Sangneas........................... ....................................... 29
2.5 DETERNlINAAO DOS PARMETROS BIOQUMICOS .......................... 30
v
2.6 ATIVIDADE DA COLl"lESTERASE PLASi\IATIC.-\ ............................ 30
2.7 DOSAGEi'v\ DE ICO E ivIET.-\IS PESADOS.. . ........................... 3 \
2.8 DADOS ESTATSTICOS. ..................... ............ ............ .................. 3\
3 RESUL T .....\.DOS ....... , .... .............................. ........... .0.0 33
3.1 DOS C.-\G.ADOS .............................................................. 33
3.2 DADOS BIOi\'lTRICOS DOS CAGADOS................. .. ................. 33
3.3 TEMPERATURA DURANTE .-\ COLHEITA DE S.-\NGUE ... 37
3.4 PARAlVIETROS HPvlATOLGICOS.. ...................... ..................... 38
3.5 PARl\METROS BIOQLl0.11COS....... .................... .. ................ 39
3.6 ARSENICO E I'/IETAIS PESADOS..... .. .......................................... 40
4 DISCUssAo.............. ....................... ........ ... ........... . .................... 43
5 CONCLUSES................................... ........... ...................... 54
REFERNCIAS BIBLIOGRFiCAS........ .......... .. .......................................... 55
vi
LISTA DE FIGURAS
FIGURA I - EXEiv\PLAR DE f-!vc!ml71edIlSa recllf'I'U (CAG.-\DO PESCOO-DE-
COBRA)........... .............................. ....................... . ......................... 2
FIGURA 2 - RIO IGUAU. EXTENSAo DO VAZ.Vv\ENTO DE LEO NA
REGIAO DE ARAUcARIA. ESTADO DO PARAN.A .......................... 3
FIGURA 3 - BIOTRIO INSTALADO NO HOSPITAL VETERIN.'-\RIO DA
UFPR ....................................................................................................... 25
FIGUR.A.4 - COLHEITA DE S.-\NGUE REALIZADA POR PUNAo DO SEIO
SUPR/-\-OCCI PITAL E 1\,\ Hyd}'()))/edllsa recrij"em ... ........................... 27
LISTA DE TABELAS
TABELA 1 - A1\'\PLlTUDES DE VARIAAo NO PESO E SEXO DOS CAGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERENTES AO GRUPO ACIDENTE,
2000 A 2002 ........................................................................................... 34
. TABELA 2 - AivlPLlTUDES DE VARIAAo NO PESO E SEXO DOS CGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERENTES AO GRUPO REFERNCIA,
2000 A 2002 ............................................. : ............................................ 35
TABELA 3 - AMPLITUDES DE VARIAO NO PESO E SEXO DOS CGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERENTES AO GRUPO MONTANTE,
2000 A 2002 .......................................................................................... 36
TABELA 4 - DATAS DE COLHEITA DE SANGUE DOS CGADOS PESCOO-
DE-COBRA E TEMPERATURAS MXIMAS E MNIMAS
REGISTRADAS, 2000 A 2002 .............................................................. 37
TABELA 5 - MDIAS E DESVIOS-PADRO PONDERADOS DAS VARIVEIS
HEMATOLGICAS DOS GRUPOS ACIDENTE, MONTANTE E
REFERNCIA ....................................................................................... 38
TABELA 6 - MDIAS E DESVIOS-PADRO PONDER.ADOS DA CONTAGEM
DIFERENCIAL DE LEUCCITOS DOS GRUPOS ACIDENTE,
MONTANTE E REFERNCIA. ........................................................... 39
TABELA 7 - MDIAS E DESVIOS-PADRO PONDERADOS DAS VARIVEIS
BIOQUMICAS (URIA, FOSFAT ASE ALCALINA, CREATININA,
CIDO RICO E COLINESTERASE) DOS GRUPOS ACIDENTE,
MONTANTE E REFERNCIA. .......................................................... .40 .
TABELA 8 - CONCENTRAES DE ARSNICO E METAIS PESADOS NO
SANGUE DE Hydromedusa (ec/ifera, DEZEMBRO DE 2001.. ......... .41
TABELA 9 - CONCENTRAES DE ARSNICO E METAIS PESADOS NO
SANGUE DE Hydrol71edusa lecl?jera, MAIO DE 2002 ....................... .41
TABELA 10 - CONCENTRAES DE ARSNICO E METAIS PESADOS NO
MSCULO DE Hydrol11edusa lecr?jera, SETEMBRO DE 2001.. ..... .42
vii
LISTA DE GRAFICOS
GRFICO I - Al'vlPLlTUDES DE VARIAAo NO PESO DOS CAGADOS
PESCOO-DE-COBRA. REFERENTES .-\0 GRUPO .--\CIDENTE.
PETRLEO, RIO IGlfA(l'. 2000 A 2002 ....................................... 34
GRFICO 2 - AlvlPLlTUDES DE VARL--\Ao NO PESO DOS CAGADOS
PESCOO-DE-COBRA. REFERENTES AO GRUPO
REFERENCI.--\. 2000 A 2002 ............................................................... 35
GRFICO 3 - AlvlPLlTUOES DE VARIAAo NO PESO DOS CAGADOS
PESCOO-DE-COBRA REFERENTES AO GRUPO l'vlONT ANTE,
ALT
ANOVA
AST
BSA
OTNB
2000 A 2002.... .... ..................... ....................... . .............................. 36
LISTA DE SIGLAS
- Alanina aminotransferase
- Anlise de Varincia
- AspaI1ato aminotransferase
- Soro Albumina Bovina
- 5,5-Ditio-Bis-2-Nitrobenzoato
LDH - Lacatato Desidrogenase
MANOV A - Anlise Multivariada
UFPR - Universidade Federal do Paran
UV - Ultra-Violeta
viii
RESUMO
Hydl'o/JIedllSCI {eel/tem (cgado pescoo-de-cobra) pertence a Famlia Chelidae,
Ordem Testudines e Classe Reptilia. No Estado do Paran, essa espcie encontrada
na bacia do Rio Iguau: so animais pouco estudados mas sabe-se que sofrem
pel1urbaes deconentes da acentuada poluio, extrao intensiva de areia e invaso
urbana das vrzeas. O cgado tornou-se alvo de estudos aps ter sido encontrado no
Rio Iguau devido ao segundo maior acidente ambiental brasileiro" oconido em Julho
de 2000, decorrente do denamamento de quatro milhes de litros de leo da refinaria
da no municpio de Araucria-PR. Dentre os 56 cgados resgatados no
local do acidente ambiental, dez animais (grupo acidente) foram mantidos em um
biotrio instalado no Hospital Veterinrio da UFPR, juntamente com 12 cgados
capturados a montante do local do acidente (grupo montante) e 15 cgados capturados
no Zoolgico de Curitiba (grupo referencia). O objetivo desse trabalho foi analisar os
parmeh"OS hematolgicos e bioqumicos e o nvel de metais pesados e arsnico no
sangue e msculo dos tres grupos de cgados. No perodo compreendido entre os anos
de 2000 e 2002, foram realizadas l6 colheitas de sangue de todos os cgados para
avaliaes hematolgicas (erih'ograma e leucograma) e bioqumicas (fosfatase
alcalina, uria, creatinina, cido rico e colinesterase). Trs anlises (sangue e
msculo) foram realizadas em nove cgados para a dosagem de metais pesados e
arsnico. Dentre os parmeh"OS hematolgicos avaliados, houve diferena significativa
na contagem total de eritTcitos para o grupo montante, na contagem total de
leuccitos para o grupo acidente e na contagem diferencial de heterfilos e basfilos
para o grupo acidente. Para as variveis bioqumicas no houve diferena significativa
entre os grupos. Na anlise de metais pesados e arsnico observaram-se altos ndices
de alguns compostos no grupo acidente. Os resultados obtidos nesse estudo mostraram
que poucos parmeh"OS sangneos foram alterados no grupo acidente, mas essas
alteraes correlacionam-se com o acidente ambiental. Por meio desta pesquisa foi
possvel estabelecer valores basais, hematolgicos e bioqumicos para H. /ec/ifera j
que a literatura COITente no apresenta valores nonnais para essa espcie.
ix
ABSTRACT
Hydrumedusa tec/lferu (side-necked tUl1le) belongs to Chelidae Family, Testudines
Order and Reptilia Class. In Parana State. this species is fOLlnd in Iguau River basin.
It is poorly studiecL but it is knowl1 that it is disturbed c1ue to accentuate polluton.
intensive extTaction of sane! urban invasion. The purpose of the study of side-
neeked turtles was clue to the second biggest Brazilian emironmental accident, found
in Iguau R..iveL in July 20()(). duc' to leakage of four millon liters of cuseana oil from
PETROBR.i\S retinery in Araucaria Cit)!, Parana State. Out of 56 freshwater turtles
from accident place, ten animais (aecident group) were kept in <In animal house system
of Veterinary Hospital (UFPR) together with twelve animais captured above the
leakage of oil in Iguau River (llp stream group) and fifteen animais captured in the
Curitiba Zoo (reference group). The puqJose of this study \vas to analyse not only
hematological and biochemical parameters, bllt also arsenic and heavy metal leveis in
the blood and muscle of these freshwater turtle grollps. In the period between the years
2000 and 2002, sixteen blood sampling were performed a11 animais for hematological
(erytrogram and leukogram) and biochemical (alkaline phosphatase, urea, creatinine,
urie acid and cholnesterase) lnalysis. Three other samplings (blood and muscle) were
performed in nine animais to determine arsenic and heavy metal leveis. Among the
hematological parameters evalllated, the red blood cell count for up stream
white blood cell count for accident group, basophils and heterophils differencial count
for accident group were statistical significant. The biochemical parameters did not
show significant difference among the three groups. In the arsenic and heavy metal
analysis it was observed high leveis of some compounds in the accident group. The
results obtained in the present study demonstrated that some hematological parameters
were changed in accident group, but these alterations are related to the environmental
accident. With this Shldy it was possible to establish basal values for H. tectifera,
although the CUlTent lterature does not present nonnal values for this species.
1 INTRODUAo
o gnero Hydromedusa formado por al11mars que peltencem Famlia
Chelidae, Ordem T estudines (que compreende cerca de 300 espcies), da Classe
Reptilia. As duas espcies conhecidas do gnero Hydromedusa so H. /ec/i/era e H.
maxil7lilliani. So animais com hbito de vida aqutico (exclusivamente gua doce) e
sua alimentao baseada em algas e pequenos peixes e moluscos que habitam o
fundo dos rios (JACKSON, 1991, p.230).
A Ordem Testudines composta de rpteis que possuem carapaa. a
ordem mais primitiva dentre os rpteis vivos, e aparentemente uma linhagem de
rpteis primitivos (como indicado pela sua carapaa no especializada). Os exemplares
da Ordem Testudines esto presentes em todos os continentes, exceto na Antrtica. As
. espcies marinhas OCOITem predominantemente nas guas tropicais dos oceanos
Atlntico, Pacfico e ndico, mas muitas tambn1 OCOITem distantes dessas guas
(ERNST e BARBOUR, 1989, p.4).
As espcies pertencentes Famlia Chelidae, que se caracterizam pela
presena de um longo pescoo lateralizado, esto confinadas s pores leste da
Amrica do Sul e Austrlia; algumas espcies tambm oconem em Nova Guin. A
caracterstica marcante desta famlia a presena de articulaes convexas no final da
quinta e oitava vrtebras cervicais. O pescoo pode ser to. longo quanto o
comprimento da carapaa, caracterstica que est presente em exemplares do gnero
australiano Chelodina e nas espcies do gnero Hydromedusa, encontrado na Amrica
do Sul (ALDERTON, 1988, p.179).
Uma marcada tendncia na Famlia Chelidae a reduo dos ossos neurais,
os quais formam uma srie completa somente nos gneros Chelus e Hydromedusa
(HARLESS e MORLOCK, 1979, p.35).
As duas espcies do gnero Hydromedusa, H. maximiliani e H. lectifera
(figura 1) so reconhecidas por seu pescoo extremamente longo e pela posio nica
2
do escudo nucal. que lateralmente expandido c est excludo do contato com a
poro anterior da carapaa pelos escudos marginai s ( HARLESS e iVIORLOCK, 1979.
p.40).
FIGURA 1 - EXEMPLAR DE Hydromedllsa ICCI!!i:ra (CAGADO PESCOO-DE-
COBRA),
NOTA: Foto gentilmente cedida pelo Prof. Rogrio Ribas Lange, UFPR.
Na Amrica do Sul , as espcies de Hy drol71edusa podem ser encontradas no
sudeste do Brasil, no UIUguai e no nordeste da Argentina, No Paran, H. leclifera
encontra-se principalmente na bacia do Rio Iguau. juntamente com o cgado-preto
(Acanloche/ys spixii) e o cgado-rajado (PhlJJnops lV ifliams i) , Essas espcies so
pobremente estudadas, porm sabe-se que sofrem perturbaes decorrentes da
acentuada poluio, extrao intensiva de areia e invaso urbana das vrzeas
(ALDERTON, 1988, p. I72).
Hydromedusa leclijera tomou-se alvo de estudos aps ter sido encontrada no
Rio Iguau (figura 2), durante o segundo maior acidente ambi.ental brasileiro, ocorrido
em 16 de Julho de 2000, decorrente do derramamento de cerca de quatro milhes de
litros de leo da refinaria da PETROBRAS (Petrleo Brasileiro S.A.), municpio de
Araucria, Estado do Paran, Brasil.
Logo aps o acidente foram resgatados. no Rio Igua u. 169 (59%) animais
mOI1OS e 113 (4 1%) vivos. deste total. 121 (44%) eram aves. sendo 35 (29%) vivas e
86 (7 1%) mOItas: 86 (3 1%) rpteis. sendo 72 (84%) vivos e 14 ( 16%) mortos; 8 (3%)
mamferos. sendo -I- (50%) vivos e 4 (50%) !nortos: 5 (2%) anfbios. sendo 2 (40%)
vivos e 3 (60%) mOI1os e 53 ( 19%) peixes mortos.
Durante o per odo compreendido entre 18 de J ui ho c 23 de Agosto de 2000,
os 11 3 animai s resgatados \ivos passaram por um processo de reabilitao (remoo
do leo. hidratao parenreral e aquecimento). A mortalidade durante o perodo de
reabilitao foi de 97% para as aves. 8% para os rpteis. 50% para os mamferos e
50% para os anfbi os (LANGE et aI. . 200 I. p-l-I ).
Dentre os 72 rpteis resgatados \ivos. 56 eram cgados pescoo-de-cobra
(Hydrulll edusa teCI/lera). que representou o mai or nmero de sobreviventes desse
acidente ambiental. logo seria considerada a principal espcie potencialmente
bi oi ndicadora da poluio do R.io Iguau.
FIGURA 2 - R.IO IGUAU. EXTENSO DO VAZAMENTO DE LEO NA
R.EGIO DE ARAUCRIA, ESTADO DO PARAN.
FONTE: FABRlNI, 2000.
PARAN.;:\
cmn ris.c,o no
'--, stfH:i'rnentD de gu a
A segUIr. senI0 descritas as principaIs caractersticas hematolgicas e
bioqumicas de rpteis, mais especificamente de quelnios.
1.1 COLHEITA DE SANGUE PvJ QUELN [OS
A avaliao do estado de sade e diagnstico ele doenas em animais
silvestres freqentemente requer a colheita de material biolgico apropriado para
investigao laboratorial (JACOBSON, 1993, p.144).
A quantidade total de sangue que pode ser seguramente colhida de um rptil
depende do seu tamanho e do seu estado de sade. O volume sangneo total em
rpteis varia conforme a espcie, mas geralmente representa de 5 a 8% do seu peso
corporal total. Muitos rpteis toleram a perda de cerca de J 0% do seu volume
sangneo total, sem nenhum efeito adverso sade (MADER, 2000. p. 1126).
Locais para obteno de amostras de sangue em quelnios so: corao, veia
jugular, veia ou artria braquial, veia coccgea ventral, seio orbital, veia escapular e
pelo corte das unhas (JACOBSON, 1993, p.145).
A puno intracardaca, embora no recomendada, tem sido usada em
quelnios jovens antes da calcificao da carapaa, a agulha pode ser passada atravs
do plastro, at o corao. Em quelnios adultos, que tm a carapaa calcificada, a
perfurao do plastro para a puno cardaca torna-se mais difcil (JACOBSON,
1992, p.51).
Em cgados e tartarugas, o selO orbital pode ser usado para obteno de
pequeno volume de sangue em tubos capilares. No entanto, deve-se evitar dano dos
tecidos peri-oculares e possveis traumas crnea (JACOBSON, 1993, p.146).
Em quelnios, os vasos associados com os membros raramente podem ser
visualizados atravs da pele. Em adio, os vasos linfticos dos membros so bem
desenvolvidos, ento a obteno de sangue desses vasos pode resultar em
hemodiluio com linfa (JACOBSON, 1992, p.54).
5
Os locais mais utilizados para puno sangnea em quelnios so a veia
jugular e a artria cartida. O maior problema encontrado para puncionar esses locais
esto na extenso e controle do pescoo e cabea do animal (JACOBSON, 1992.
p.59). Quanto aos cgados do genero HydromedllsCl, que tem corno caracterstica um
pescoo bastante longo, recomenda-se a puno da veia jugular (GARCIA-
NAVARRO e PACHAL Y, 1994, p.126).
Muitas tanarugas, cgados e crocodilianos possuem grandes seios venosos
pareados imediatamente caudais regio occipital, esses seios so locais onde pode ser
feita puno de um volume suficiente de sangue. Benett (1986) descreveu esta
tcnica em tartarugas marinhas e considerada o mtodo preferido para venopuno
em quelnios e crocodilianos (FRYE. 1991, p.21 O).
Em geral, para estudos hematolgicos, o sangue deve ser colhido em tubos
contendo o anticoagulante EpT A (cido etilenodiaminoactico). No entanto, o EDTA
causa hemlise em algumas espcies de rpteis, especialmente em quelnios; ento, o
'uso do anticoagulante heparina toma-se necessrio. O plasma heparinizado pode ser
usado para anlises bioqumicas (CAMPBELL, 1996, p.248).
A heparina pode causar manchas azuladas no esfregao sangneo e
agrupamento de trombcitos e leuccitos em rpteis (MADER, 2000, p.1129). Os
esfregaos de sangue de rpteis sero melhor avaliados se forem elaborados com
sangue sem nenhum tipo de anticoagulante (CAMPBELL, 1996, p.248).
1.2 HEMATOLOGIA DE QUELNIOS .
O principal local de produo das clulas sangneas de rpteis e anfbios a
medula ssea, mas alguns rgos viscerais, como fgado e bao, por exemplo, tambm
podem assumir essa funo (CANFIELD, 1998, p.793).
A avaliao do hemograma e do esfregao sangneo e uma impOltante
ferramenta de diagnstico para rpteis. Dados hematolgicos proporcionam indcios da
existncia de condies que podem estar afetando os componentes celulares no sangue
perifrico desses animais. O hemograma pode ser usado para detectar anemia.
inflamao, parasitemia, neoplasia hematopoitica e desordens de hemostasia. A
avaliao do hemograma inclui lnlise dos eritrcitos. leuccitos e trombcitos 110
sangue perifrico (CAiVIPBELL 1996. p.248).
A morfologia elas clulas sangneas varia consideravelmente entre grupos
(por exemplo, rpteis e aves) e entre diferentes espcies de rpteis (por exemplo.
iguanas e quelnios) (FRYE, 199 L p.221).
A avaliao laboratorial dos eritrcitos ou eritrograma ele J"pteis inclui:
hematcrito, concentrao de hemoglobina, contagem de eritrcitos totais e
observao dos eritrcitos em esfregao sangneo corado (FR YL 1991, p.221).
A tcnica manual padro para obteno do hematcrito por centrifugao
de tubos capilares a 12.000 x g por cinco minutos. Valores normais de hematcrito
para rpteis esto entre 20 e 40% (CAMPBELL, 1996, p.248).
A concentrao de hemoglobina pode ser determinada usando-se as mesmas
tcnicas para mamferos, pelo mtodo da Cianometahemoglobina. Valores mdios
nonnais para concentrao de hemoglobina em rpteis esto entre 6 e 12 miligramas
por decilitro de sangue (CAMPBELL, 1996, p.249).
A contagem total de eritrcitos em rpteis pode ser feita manualmente por
meio de hemocitmetro (tambm chamado de cmara de Neubauer) ou por contadores
eletrnicos de clulas, previamente calibrados para a espcie em questo (MADER,
2000, p.1127).
A avaliao dos leuccitos ou leucograma inclui o clculo total de
leuccitos, detenninao da contagem diferencial de leuccitos e avaliao da
morfologia das clulas em esfregao sangneo corado. Os leuccitos granulcitos de
rpteis so classificados em: heterfilos, eosinfilos e basfilos, baseado na aparncia
da clula em esfregaos sangneos corados com corantes do tipo Romanowsky (por
exemplo, corante de Wright). Os leuccitos mononucleares so representados pelos
7
linfcitos, moncitos e azurfilos (MADER, 2000. p. I 128).
A contagem total de leuccitos no sangue de rpteis pode ser determinada
em hemocitmetro, em contadores eletrnicos de clulas ou por estimativa no
esfregao sangneo corado. Conta-se o nmero total de leuccitos no esfregao em
aumento de 40 vezes, em dez campos diferentes. A mdia desses dez campos deve ser
multiplicada por 1000, para ter o nmero total de leuccitos por milmeh'o cbico de
sangue (JACOBSON, 1993, p.148).
1.2. I Descrio das Clulas Sangneas de Quelnios
1.2.1.1 Eritrcitos
A contagem total de erih'citos em rpteis pode vanar de acordo com a
estao do ano, temperatura ambiente, sexo (machos tem mais erih'citos do que
fmeas em algumas espcies) e estado nutricional; no perodo pr-hibemao existem
mais eritrcitos do que no perodo ps-hibemao (CAMPBELL, 1996, p.249).
Em rpteis existe uma relao inversa entre o tamanho do eritrcto e o
nmero total de eritrcitos circulantes. O tempo de vida mdio de erih'citos na
circulao, para o co e o gato, de 68 e 115 dias, respectivamente, comparados ao
intervalo de 600 a 800 dias em rpteis. Suspeita-se que esse longo perodo de vida dos
eritrcitos seja devido a baixa taxa metablica de rpteis comparados aos mamferos
(MADER, 2000, p,1128),
Os eritrcitos de rpteis so elipsoidais, com um ncleo posicionado
centralmente. Possui de 13 a 25 ~ m de dimetro. O citoplasma cora-se em rosa-
alaranjado e possui textura homognea. O ncleo toma-se mais condensado conforme
a clula fica mais velha (CAMPBELL, 1990, p.197).
Eritrcitos imaturos podem estar presentes no sangue perifrico de repteis
em casos de crescimento, ecdise e anemia regenerativa, Essas clulas so menores que
os eritrcitos maduros. possuem um ncleo grande e citoplasma basofllco
(CANFIELD, 1998, p. 796).
A policromatofilia UIll bom indicador de anemia responsiva em rpteis.
Ncleo mittico, binucleao e outras anonnalidades nucleares so descobertas em
rpteis com anemias regenerativas, doenas inflamatrias e durante o perodo ps-
hibemao. Anisocitose, policromatotlia e poiquilocitose so achados comuns no
sangue de rpteis normais, mas podem estar exagerados no doena (!vlADER, 2000.
p.1128).
1.2.1.2 Leuccitos
1.2.1.2.1 Heterfilos
o heterfilo uma clula exclusiva de rpteis, peIxes, aves e alguns
mamferos, como o coelho, por exemplo. Possui de 16 a 19 pm de dimetro. Essa
clula toma a interpretao do hemograma difcil, pois sua morfologia varia entre
grupos, gneros e espcies de rpteis. Funcionalmente, o heterfilo de rpteis similar
ao neutrfilo de mamferos. Essas clulas respondem infeces e inflamaes e sua
funo primria a fagocitose. Em rpteis saudveis, os heterfilos conespondem de
30 a 45% do total de leuccitos (MADER, 2000, p.1129).
O aumento de heterfilos no sangue de rpteis, denominado heterofilia,
indica resposta a uma doena inflamatria (infeco ou injria teci dual). Estresse,
neoplasias e leucemia mielide podem causar heterofilia. Em quelnios, os grnulos
dos heterfilos so to numerosos que deslocam o ncleo para a periferia da clula. O
ncleo cora-se em azul claro e pode aparecer lobulado em algumas espcies de
lagartos (MADER, 2000, p.1129).
Heterfilos imaturos no so comumente vistos no sangue perifrico de
rpteis. A presena dessas clulas geralmente indica excessiva demanda de heterfilos
')
maduros, em casos de severas infeces. A presena ele heterfilos anormaIs
(vacuolizados, com basofilia citoplasmtica, degranulao. etc) so indicaes de
infeco bacteriana ou doena inflamatria (CAMPBELL 1996, p.250).
Os heterfilos so capazes de fazer a fagocitose de bactrias e debris
celulares, tambm podem estar associados com reaes imunes tais como alergias e
imunidade a parasitas (CANFIELD, 1998, p.797).
O nmero ele heterfilos no sangue perifrico de rpteis influenciado pela
estao do ano: um aumento c1eheterfilos ocone no vero e uma diminuio durante
o perodo de hibemao (CAMPBELL, 1996, p.250).
1.2.1.2.2 Eosinfilos
O eosinfilo de rpteis diferente do de mamferos. Em rpteis, caracteriza-
se por ser uma clula grande (10 a 14 ~ m de dimetro), com grnulos citoplasmticos
eosinofilicos esfricos, que reage positivamente a corantes base de peroxidase. O
ncleo pode ser simples ou lobulado e geralmerite se apresenta no centro da clula
(MADER, 2000, p.1130).
O tamanho dos eosinfilos varia conforme a espcie: cobras tm eosinfilos
mmores, tartarugas e crocodilianos tm eosinfilos intermedirios e lagartos tm
eosinfilos pequenos (CAMPBELL, 1996, p.250).
A contagem total de eosinfilos no sangue de rpteis saudveis varia de 7 a
20%, mas ocorrem variaes com a estao do ano, sendo que as menores contagens
ocorrem no vero e as maiores no inverno. Lagartos, em geral, possuem baixo nmero
de eosinfilos circulantes (FR YE, 1991, p.232).
Eosinofilia tambm influenciada por estmulo parasitrio ou outros
estrhulos antignicos. Em rpteis da Famlia Chelidae, os eosinfilos participam da
resposta imune fagocitando complexos imunes (CAMPBELL, 1996, p.250).
dificil distinguir eosinfilos e heterfilos em no-mamferos. Em rpteis
lO
comum no diferenciar essas clulas, ento o nmero total de eosinfilos e heterfilos
representado como acidfilos. Essas duas clulas podem ser lcilmente distinguidas
por meio de corantes citoqumicos. os grnulos do eosnfilo coram-se com benzidina
peroxidase ao passo que os grnulos do heterflo no se coram (ALLEl'vIAN et aI..
1992, p. 1646).
1.2.1.2.3 Basfilos
o basfilo de rpteis e muito semelhante ao basfilo de mamferos. So
clulas pequenas, com grnulos citoplasmticos que se coram em prpura, e ncleo
central no .Iobulado, O ncleo freqentemente est encoberto pelos grnulos
citoplasmticos (MADER, 2000, p. I 130).
O tamanho dos basfilos varia, conforme a espcie, de 7 a 20 ~ l m Lagartos
tm basfilos pequenos e quelnios e crocodilianos tm basfilos maiores
(CAMPBELL, 1996, p.250).
A funo dos basfilos em rpteis muito semelhante a dos basfilos em
mamferos: esto envolvidos com o processamento de imunoglobulinas de superfcie e
liberao de histamina (MEAD, BORYSENKO e FfNDLA Y, 1983, p.335). Basofilia
pode ocorrer na presena de parasitas sangneos (como Haemogregarina e
Trypanosoma) e em infeces virais (CAMPBELL, 1996, p.251).
Diferentemente dos demais leuccitos de rpteis, os basfilos no
apresentam variao sazonal. Mdias nOlTIlais de basfilos no sangue esto entre O e
40%, dependendo da espcie de rptil. Quelnios tm um alto nmero de basfilos na
circulao quando comparado a outras espcies, em alguns casos a contagem total de
basfilos pode ultrapassar 50 ou 60%; esse alto nmero debasfilos no sangue de
quelnios no est associado a patologias (CANFIELD, 1998, p.SOO).
O basfilo comumente encontrado no sangue de rpteis no-hibernantes. O
nmero de basfilos diminui na circulao durante o perodo de hibernao (FR YE,
11
1991, p.242).
1.2.1.2.4 Linfcitos
Assim como em mamferos, os rpteis tambm tem linfcitos pequenos (5 a
1 O L m e grandes (15 ~ L m ; os pequenos linfcitos so freqentemente confundidos
com troinbcitos (ALLEMAN et aI., 1992, p. 1649).
O citoplasma dos linfcitos de rpteis basoflico, pode conter pequenos
grnulos azuroflicos e projees citoplasmticas ilTegulares (CAMPBELL, 1990,
p.198).
Os linfcitos de rpteis originam-se do timo, medula ssea, bao e outros
tecidos linfopoiticos. As clulas B so responsveis pela produo de algumas
imunoglobuhnas e as clulas T moderam a resposta imune (CAMPBELL, 1996,
p.2S1).
Como em outras clulas sangneas de rpteis, existe uma influencia sazonal
no nmero de linfcitos circulantes no sangue perifrico; baixa contagem de linfcitos
ocorre durante o invemo e no perodo de hibemao e alta contagem ocorre durante os
meses quentes; isto sugere que a resposta imune de rpteis seja menos eficiente
durante os meses mais frios (FRYE, 1991, p.25l).
Para a maioria dos rpteis, os linfcitos so as clulas mais prevalentes na
circulao, podendo ultrapassar 80% em algumas espcies. O nmero de linfcitos
menor em machos e tambm em animais desnutridos. Linfocitose pode ocorrer na
presena de inflamao, doenas virais, cicatrizao de feridas e em certas doenas
parasitrias (CAMPBELL, 1996, p.250).
Em casos de bacteremia, os linfcitos de rpteis so freqentemente
observados com incluses que contm microorganismos. Sob condies de severo
estresse ou neoplasia linforreticular, linfcitos jovens podem ser encontrados na
12
circulao perifrica. Durante os perodos de ecdise (troca ele pele) a contagem de
linfcitos tende a diminuir discretamente (FRYL 199 L p.257).
1.2.1.2.5 tvloncitos
Os moncitos ele rpteis so muito similares aos moncltos de mamferos.
So as maIOres clulas sangneas (8 a 20 ,Llfn), apresentam citoplasma
moderadamente granular, com ou sem vacolos. com ncleo riniforllle (CAlvIPBELL
1990, p.198).
Nonnalmente os moncitos de rpteis aparecem menos elo que 10% do total
de leuccitos. Em cobras, a contagem de moncitos chega a 15 ou 2 0 ~ ~ (MADER,
2000, p.1131).
Assim como os basfilos, os moncitos apresentam pouca variao sazonal.
A contagem total e moncitos pode aumentar com estimulao antignica e em
doenas infeciosas, monocitose persistente sugere um processo infeccioso crnico. Os
monctos tm um impOltante papel na resposta inflamatria, em gI'anulomas e na
fonnao de clulas gigantes. Em rpteis, os moncitos participam das interaes
antgeno-anticorpo, especialmente envolvendo IgM e IgY (CAMPBELL, 1996, p.251).
Os moncitos so precursores dos macrfagos. A transformao em
macrfago ocorre principalmente nos tecidos, mas pode aCOITeI' na circulao
sangnea (CANFIELD, 1998, p.802).
Bactrias, debris celulares, vacolos e outros materiais pmticulados podem
ser descobertos no citoplasma de moncitos ativos de rpteis (FR YE, 1991, p.269).
1.2.1.2.6 Azurfilos
O termo azurfilo refere-se a uma forma celular semelhante aos moncitos,
que contm numerosos grnulos citoplasmticos que se coram em prpura e com 10 a
17 ~ l m de dimetro. Essas clulas ocorrem em anfbios e rpteis (principalmente em
[3
cobras) (CANFIELD, 1998, p.798).
O azurfilo foi descrito em rpteis inicialmente por Frye em 1973 e
denominado de neutrfilo azurfilo. Segundo FR YE (1991, p.220), rpteis saudveis
possuem de 3 a 7% de azurflos na contagem total de leuccitos e raramente excede
10%.
MOURA.. et a!. (1999, p.46) descreveram o azurfilo no sangue do jacar-do-
pantanal (Caiman crocodilus yacare) como sendo uma clula com contorno irregular,
citoplasma intensamente basoflico com grnulos citoplasmticos fortemente
azurfilos. O ncleo apresenta-se esfrico, com contorno iITegular e posio
excntrica.
ALLEMAN et a!. (1992, p.1646) encontraram azurfilos no sangue do
testudneo terrestre Gopherus agassizii; a clula caracterizou-se pela presena de
pequenos grnulos citoplasmticos azuroflicos.
Segundo CAMPBELL (1996, p.251) os azurfilos OCOITem em grande
nmero em muitas espcies de cobra, podendo chegar a 20% do total de leuccitos.
SALAKIJ et a!. (2002, p.37) encontraram azurfilos como o segundo leuccito mais
observado (cerca de 36%) em cobras d'gua (Homalopsis buccata); segundo esses
autores, o azurfilo estaria relacionado com a fagocitose de trypanosomas.
Acredita-se que a contagem de clulas azurfilas tende a aumentar, em
rpteis, com estmulo antignico e doenas infecciosas (MADER, 2000, p.1131).
1.2.1.3 Trombcitos
O trombcito de rpteis polimrfico; comumente descoberto em
agregados e tem caractersticas e funes similares s plaquetas dos mamferos. Possui
ncleo elipsoidal; ncleos polimrficos so associados a doenas inflamatrias. Seu
tamanho varia de 8 a 16 ~ de dimetro (CANFIELD, 1998, p.809).
Os trombcitos tm importante papel na coagulao do sangue, formao de
~
trombas e cicatrizao de feridas (MADER, 2000. p.1128).
O nmero normal de trombcitos na circulao de rpteis varIa entre
espcies e de acordo com alteraes ambientais. iVldias normais esto entre 25 e 250
trombcitos por 100 leuccitos (CAMPBELL 1996, p.252).
A diferenciao entre trombcitos e linfcitos de rpteis difcil.
Similarmente aos linfcitos, os tTOmbcitos possuem ncleo basoflico, citoplasma
claro e ocasionalmente podem apresentar grnulos azuroflicos, quando ativados o
citoplasma pode apresentar vacuolizao (ALLEMAN et aI., 1992, p. 1649).
1.3 BIOQUMICA PLASMTICA DE QUELNIOS
1.3.1 Uria
Os rpteis so uricotlicos, ou seja, no f01111am uria como produto final do
metabolismo de nitrognio pois esse direcionado biossntese de purinas, resultando
em cido rico (TROIANO et al., 2001, p.16). Logo, os valores normais para uria
sangnea so baixos (menores que 10 mg/dI) para a maioria dos rpteis. No entanto,
valores normais para alguns quelnios terrestres so mais altos do que para outros
rpteis, com valores entre 20 e 100 mg/dl (CAMPBELL, 1996, p.253).
Concentraes plasmticas elevadas de uria podem ocorrer em rpteis que
habitam reas desrticas, especialmente algumas espcies de cgados (CAMPBELL,
1996, p.253).
A uria plasmtica age aumentando a osmolalidade plasmtica, reduzindo a
perda de gua corporal. Elevaes na uria plasmtica, em rpteis, podem estar
relacionadas com doena renal, azotemia pr-renal e grande quantidade de protena na
dieta (CAMPBELL, 1996, p.253).
15
1.3.2 Creatinina
A creatinina filtrada livremente atravs dos glomrulos renais e aparece no
filtrado glomerular na mesma concentrao em que est no plasma (FINCO, 1997,
p.471).
Valores normais de creatinina plasmtica em rpteis so geralmente muito
baixos. A creatinina de rpteis pode estar elevada em casos de severa desidratao e
doena tenal; no entanto, a mensurao da creatinina plasmtica parece ser um teste
insignificante para diagnosticar doenas renais e pr-renais em rpteis (CAMPBELL
1996, p.253).
\.3.3 Fosfatase Alcalina
A enzima fosfatase alcalina est amplamente distribuda no orgamsmo de
rpteis; no entanto existem poucas informaes em relao interpretao de valores
sricos elevados dessa enzima para esses animais. Em alguns rpteis, a elevada
atividade srica da fosfatase alcalina pode estar relacionada com atividade
osteoblstica aumentada ou doena hepatobiliar. Normalmente, atividade aumentada
da fosfatase alcalina no soro ou plasma poder ocorrer em rpteis jovens quando
comparado com adultos da mesma espcie. Valores de referncia normais para
fosfatase alcalina em rpteis so muito variveis e dependem da espcie em questo
(CAMPBELL, 1996, p.253).
1.3.4 cido rico
O metabolismo uricotlico est associado ao desenvolvimento do ovo e o
metabolismo ureotlico esta associado viviparidade. Em lugar da amnia, que e
txica, o ovo elimina nitrognio na forma de cido rico porque mesmo a uria seria
nociva em excesso. Esse fato condiciona o comportamento uricotlico preferencial de
16
rpteis e aves, j que os mamferos, que so vlvlparos. no necessitam excretar
nitrognio como cido rico e o fazem principalmente como uria, para detoxificao
da amnia produzida (BACILA 2003, p.485).
O cido rico o produto tinal do catabolismo pnmano de protenas,
nitrognio no protico e purinas em rpteis. Do total do nitrognio excretado, 80 a
90% esto na forma de cido rico em rpteis tenestres (TROIANO et aI., 2001, p.lS).
Valores normais para cido rico sangneo esto entre zero e 10 mg/dl, para
a maioria dos rpteis. Valores acima de 15 mg/dl so considerados elevados.
Hiperuricemia pode estar associada com doena renal severa e gota rica.
Nefrocalcinose associada com altos nveis de clcio na dieta ou hipervitaminose D
podem resultar em hiperuricemia (CAMPBELL 1996, p.253).
Bacteremias e septicemias severas, drogas nefrotxicas (tais como
aminoglicosdeos e sulfas) podem causar doena renal, que ter como conseqncia a
elevao dos nveis sangneos do cido rico (CAMPBELL, 1996, p.253).
A dosagem do cido rico sangneo no um teste sensitivo para doena
renal em rpteis, pois mais de dois teros dos rins devem estar afuncionais para que
haja elevao na concentrao do cido rico sangneo. Rpteis carnvoros tm
maiores concentraes de cido rico no sangue do que rpteis herbvoros, j que
dietas com altos teores de protena e uria podem aumentar a concentrao do cido
rico (CAMPBELL, 1996, p.253).
1.3.5 Colinesterase Plasmtica
A colinesterase foi descoberta em 1906. Em 1943, descobriu-se que existem
dois tipos de colinesterases: colinesterase verdadeira e pseudocolinesterases. A
colinesterase verdadeira chamada de acetilcolinesterase, e a propioni1colinesterase e
a butiri1colinesterase so classificadas como pseudocolinesterases (KOZLOVSKA Y A
etal., 1993, p.117).
17
A funo da butirilcolinesterase no organismo dos animais ainda obscura.
Acredita-se que essa enzima, assim como a acetilcolinesterase, esteja associada com o
metabolismo da acetilcolina. Sabe-se que a acetilcolinesterase e a butirilcolinesterase
diferem significativamente em propriedades cinticas e especificidade a substratos
(KOZLOVSKA YA et aI., 1993. p. I 19).
A acetilcolinesterase est presente na medula espinhal. nas fibras pre-
ganglionares do sistema nervoso autnomo simptico e parassimptico, nas fibras
motoras simpticas e na membrana dos eritrcitos. uma enzima essencial para a
transmisso sinptica colinrgica nos sistemas nervosos central e autnomo e nas
telminaes nervosas dos msculos estriados (SPINOSA, GORNIAK e BERNARDI,
1999, p.62). A principal funo da acetilcolinesterase a hidrlise da acetilcolina, o
mediador de sinapses colinrgicas no sistema nervoso. Existem dados que indicam a
participao dos sistema acetilcolinesterase-acetilcolina na condutncia neural ao
longo do axnio (KOZLOVSKA Y A et aI., 1993, p. 120).
A inibio da colinesterase plasmtica tem sido utilizada como parmetro
indicativo de exposio a compostos organofosforados e carbamatos, porm j foram
encontradas alteraes nessa enzima por outros compostos, como metais pesados e
organoclorados (BAATRUP, 1991, p.256). Detergentes e hidrocarbonetos so
substncias que podem conter inibidores da colinesterase plasmtica. No entanto,
pouco se sabe sobre a relao entre as propriedades cinticas da colinesterase de
organismos aquticos e o efeito inibitrio de poluentes com ao anticolinestersica
(MONSERRAT e BIANCHINI, 2001, p.63).
O peixe Barbus conchonills, aps exposio a nveis agudamente txicos de
cdmio, apresentou aumento da atividade da acetilcolinesterase no crebro, msculos
esquelticos e figado, mas a enzima se mostrou inibida nas brnquias (GILL,
TEWARI e PANDE, 1991, p.S03).
Em outras espcies aquticas, principalmente cgados e tartarugas, no
foram encontrados relatos sobre a influncia que o contato com metais pesados pode
IX
ter em relao atividade da colinesterase plasmtica.
1.4 ARSENICO E METAIS PESADOS
O petrleo possui algumas substclncias txicas em sua composio. tais
como: hidrocarbonetos aromticos, arsnico e metais pesados (cobre, chumbo .
. mercrio e cdmio) (CLARKE e CLARKE, 1978, p.29).
Sabe-se que os metais pesados, dentre outros poluentes qumicos, prejudicam
o sistema imune e provocam estresse em aniinais e no homem. O estresse mediado por
poluentes qumicos causa mudanas morfofsiolgicas. C0l110 a proliferao celular
(tumor de pele, por exemplo, que tem sido documentado em algumas espcies
aquticas) e uma maior predisposio a agentes infecciosos (AGUIRRE et aI., 1994.
p. 110). Alm disso. os metais pesados so capazes de levar a malformaes tanto
estruturais como funcionais no organismo dos animais e do homem (SPINOSA
. GRNIAK e BERNARDI, 1999, p.63).
Pouco tem-se estudado sobre contaminantes ambientais em repteis, e
somente alguns trabalhos tm sido publicados sobre metais pesados em quelnios
(AGUIRRE et aI., 1994, p.IIl).
Os metais pesados no podem ser destrudos e so altamente reativos do
ponto de vista qumico, o que explica a dificuldade de encontr-los em estado puro na
natureza. Nonnalmente apresentam-se em concentraes muito pequenas, associados a
outros elementos qumicos, fonnando minerais em rochas. Quando lanados na gua,
na fonna de resduos industriais, podem ser absorvidos pelos tecidos animais e
vegetais. Os metais contidos nos tecidos dos organismos vivos tambm so
depositados nos sedimentos, representando um estoque permanente de contaminao
para fauna e flora aquticas (ZAKRZEWSKI, 1991, p.207).
O chumbo, o mercrio, o cdmio e o arsnico so elementos que no existem
naturalmente em nenhum organismo, tampouco desempenham funes nutricionais ou
19
bioqumicas em microorganismos, plantas ou animais: ou seja, a presena desses
metais em organismos vivos prejudicial em determinadas concentraes (CLARKE e
CLARKE, 1978, p.32).
1.4.1 Chumbo
o chumbo usado na indstria petrolfera na fase de adio do chumbo
tetraetila gasolina para aumentar seu poder antidetonante. Devido a presena desse
elemento na gasolina, a vegetao prxima s rodovias pode ter at 500 ppm de
chumbo (CLARKE e CLARKE, 1978, p.4 7).
Apesar da poluio por chumbo ser essencialmente um problema urbano, as
tenas agrcolas, lagos e rios tm sido freqentemente afetados por esse metal pesado.
O chumbo tem muitos efeitos txicos, incluindo inibio da fonnao de clulas
vermelhas, danos renais e ao sistema nervoso. O mecanismo de toxicidade do chumbo
ainda pouco conhecido, mas sabe-se que ele inibe a ao de alguns sistemas
enzimticos (ZAKRZEWSKI, 1991, p.207).
Os sinais de intoxicao aguda por chumbo em bovinos e ovmos so:
convulses, espasmos musculares, tetania e bito, que pode ocorrer aps duas horas do
incio dos sinais clnicos; em intoxicaes crnicas observam-se anorexia, constipao,
danos renais, decbito lateral e morte. Sunos so considerados mais resistentes
intoxicaes por chumbo do que outros animais domsticos. A ingesto diria de seis a
sete e de dois a quatro miligramas por quilograma de peso constituem doses letais para
bovinos e eqinos, respectivamente. Dose de dez miligramas por quilograma de peso
por dia leva a bito um co em at sete semanas (CLARKE e CLARKE, 1978,. p.62).
Segundo TURK e CASTEEL (1997, p.829) a intoxicao por chumbo
intenompe a sntese do grupamento heme da hemoglobina a nvel da formao da
protoporfirina e causa o acmulo do cido delta-aminolevulnico. O aumento da
excreo urinria deste metablito indicativo de intoxicao por chumbo.
20
Em ces intoxicados por chumbo observam-se anoreXia, vmito, clica,
diania, salivao e convulses epileptiformes. Em gatos, os sinais clnicos so
semelhantes aos observados em ces (CLARKE e CLARKE, 1978, p.67).
Qualquer que seja a via de absoro, o chumbo vai ao fgado onde parte
excretado pela bile, outra parte almazenada, e uma terceira frao atinge a circulao
na forma de fosfato de chumbo, que ser depositado nos ossos (95%), fgado, rins,
bao, crebro e msculos (CLARKE e CLARKE, 1978, p. 71).
Poucos estudos so feitos em relao ao do chumbo em quelnios, mas
muitos trabalhos tratam do assunto em espcies de peixes. Segundo BA.A TRUP (1991,
p.254) a presena de chumbo no organismo de peixes causa aumento dos nveis de
histamina, serotonina, lipdeos, colesterol e protenas sricas; mas causa a diminuio
do GABA e da acetilcolinesterase .
A investigao histoqumica da ao do chumbo no orgalllsmo de peIxes
demonstrou que esse metal se acumula em ossos, brnquias, bao e fgado; esses
animais tambm podem demonstrar anemia (GILL, TEW ARI e PANDE, 1991, p.503).
1.4.2 Mercrio
o mercrio, como muitos outros metais pesados, sofre o problema da
bioacumulao, e escassas quantidades desse metal so concentradas por algumas
espcies animais. A forma orgnica do mercrio, o metilmercrio, altamente txica.
A forma inorgnica tambm txica, mas no facilmente assimilada pelos
organismos biolgicos (ZAKREZWSKI, 1991, p.213).
Os sinais de intoxicao so dependentes da quantidade e da periodicidade
de exposio ao metal, e a longo prazo sua toxicidade OCOITe principalmente aos
sistemas nervoso e renal. Aps absoro oral, o mercrio distribui-se pela conente
sangnea aos rins, fgado e msculos. O mercrio possui efeito teratognico e, no
organismo animal, tem altas taxas de acumulao e baixas taxas de excreo
21
(ZAKREZWSKI, 1991, p.215).
Os sinais de intoxicao aguda em animais domsticos so: gastroenterite e
dialTia, choque e nefrite aguda. Em bovinos bito pode OCOITer rapidamente aps
clica e hipertermia (CLARKE e CLARKE, 1978, p.85).
Segundo BAA TRUP (1991, p.257) o mercrio ataca fosfatos e cadeias de
protenas, causando alteraes estruturais e inibio de enzimas pelo bloqueio de
grupamentos sulfidrlicos; tambm liga-se e altera a configurao de purinas,
pirimidinas e cidos nuclicos, e interfere com a integridade estrutural e propriedades
fsicas das membranas das clulas.
O mercrio altamente txico para peixes; em concentraes subletais causa
ll1Junas estruturais, fisiolgicas e bioqumicas ao sistema nervoso desses animais
(BAATRUP, 1991, p.257).
1.4.3 Cdmio
O cdmio um dos elementos qumicos mais txicos. A nvel bioqumico,
esse metal pode afetar negativamente o DNA, o RNA, a sntese de ribosomos e
tambm pode desativar uma srie de sistemas enzimticos. No organismo, o cdmio
conhecido por ser teratognico e embriotxico (RIE, LENDAS e CALLARD, 2001,
p.20).
O principal sinal clnico de intoxicao por cdmio, em animais domsticos,
e a incoordenao, no entanto pode-se encontrar anemia, ulcerao de estmago e
degenerao gordurosa de fgado e rins. Envenenamento experimental de ratos com 62
ppm de cdmio causou hipertrofia cardaca, severa anemia e hiperplasia de medula
ssea (CLARKE e CLARKE, 1978, p.90).
A exposio crnica ao cdmio pode causar disfuno renal, anemia e m
formao ssea em seres humanos. Em coelhos, o envenenamento crnico pode
causar anemia hipercrmica microctica. Em bovinos, cerca de 82% do cdmio
ingerido excretado nas fezes e apenas 0,022% excretado no leite. Os efeitos txicos
do cdmio podem ser magnificados devido sua habilidade de bioacumulao em
tecidos e sua baixa taxa de excreo (ZAKRZE\VSKL 199 L p.216).
As rotas primrias de exposio ao cdmio. para o homem, so: inalao.
dieta e absoro cutnea. Dentre as espcies animais, as rotas de exposio podem ser
similares, no entanto a distribuio em tecidos-alvo e bioacumulao podem variar. A
distribuio orgnica do cdmio tem sido descrita em muitas espcies de anfbios.
tubares, tartarugas e peixes (RIE, LENDAS e CALLARD, 200 L p.23).
O cdmio tem uma ao txica para peixes que varia de moderada a severa.
Os efeitos de intoxicao por cdmio em organismos aquticos so intensificados
muitas vezes se h presena de outros metais, como cobre e zinco (GILL, TEWARI e
PANDE, 1991, p.504).
1.4.4 Cobre
O cobre largamente difundido na natureza; um metal essencial, sendo
parte integral de muitas enzimas, no entanto, em nveis elevados toma-se um metal
txico ao organismo do homem edos animais (CLARKE e CLARKE, 1978, p.96).
Segundo BACILA (2003, p.lO 1) o cobre faz parte da glicoprotena
plasmtica ceruloplasmina, que a responsvel pelo transporte de ferro atravs da
membrana celular.
Nos animais domsticos, os SlllaIS de intoxicao aguda por cobre so:
nusea, vmito, salivao, dor abdominal, taquicardia, convulso e morte. O exame
post mortem mostra severa gastroenterite e congesto de bao, fgado e nns.
Intoxicaes crnicas podem acarretar sndrome hemoltico-hepato-renal. Poucos
ddos existem sobre os efeitos txicos desse metal em animais. Sabe-se que a dose
txica de sulfato de cobre, via oral, de 25 a 50 mglkgem cordeiros, 130 mglkg em
ovelhas e 200 mg/kg em bovinos (CLARKE e CLARKE, 1978, p.99).
23
o cobre altamente txico para peixes, algas e dfnias (GILL, TEWARI e
PANDE, 1991, p.505). A toxicidade nesses organismos resulta da interao do metal
com a membrana celular e devido a processos lipoperoxidativos. O aumento da
formao de radicais livres e a peroxidao lipdica levam a um severo estresse celular
(BAATRUP, 1991, p.257).
1.4.5 Arsenico
O arsnico pode ser encontrado em duas fonnas: inorgnico (que permanece
por um longo tempo retido nos tecidos) e orgnico (que removido rapidamente dos
tecidos) (ZAKRZEWSKI, 1991, p.218).
Aps absoro oral de substncias arsenicais, absoro pela pele ou inalao,
o arsnico dirige-se ao fgado, rins, bao e pulmes; tambm pode ser depositado em
pelos, ossos e tecidos ricos em grupamentos sulfidrilas (CLARKE e CLARKE, 1978,
p.lOl).
Em animais, a exposio oral aguda pode causar danos gastrointestinais e
neurolgicos. A exposio crnica ao arsnico provoca neurotoxicidade (afetando
sistema nervoso central e perifrico) e alteraes vasculares perifricas que podem
causar leses cutneas (CLARKE e CLARKE, 1978, p. 104).
Estudos em animais de laboratrio mostram que a instilao intratraqueal de
substncias arsemcalS pode causar inflamao e hiperplasia pulmonar, e
imunossupresso. Doses de 27 a 64 ppm de arsnico so consideradas letais para
. bovinos. Os sinais clnicos de intoxicao por arsnico, em animais domsticos, so:
dor abdominal, colapso e paralisia (CLARKE e CLARKE, 1978, p. 110).
Muitos trabalhos indicam as concentraes crticas e letais de compostos
arsenicais para diferentes espcies de peixes; entre essas publicaes existe uma
grande diferena entre as concentraes letais, j que a concentrao txica do
arsnico depende diretamente da forma qumica em que se encontra (cido arsnico,
24
arsenato ou arsenito) (GILL TEWARI e PANDE, 199 L p.S02).
Pouco se sabe sobre o gnero HJ'drumedllsa, e mais especificamente sobre
Hydromedusa {ec/ilera, afinal no existem relatos que descrevam a biologia dessa
espcie. A maioria das referncias hematolgicas e bioqumicas disponveis para
rpteis citam valores genricos para animais saudveis de apenas alguns generos da
Classe Reptilia, dificultando a avaliao clnica desses animais.
Os valores hematolgicos fomecem infonnaes bsicas para controle e
avaliao segura dos animais, pem1itindo a identificao de patologias. A bioqumica
sangnea tem papel fundamental e reconhecido na Medicina Veterinria dos animais
domsticos, mas para a maioria das espcies selvagens, incluindo o cgado pescoo-
de-cobra, h escassez de parmetros de referncia. A utilizao desses parmetros
pennite uma avaliao dos animais doentes, das condies e qualidade de seu habitat e
do impacto ambiental sobre eles.
Este trabalho tem por finalidade principal a detem1nao dos parmetros
hematolgicos (eritrograma e leucograma), bioqumicos plasmticos (fosfatase
alcalina, uria, cido rico, creatinina e colinesterase plasmtica) e anlise de arsnico,
cobre, chumbo, mercrio e cdmio no sangue e msculo de cgados pescoo-de-
cobra.; alm de uma anlise desta espcie como bioindicadora de poluio ambiental.
25
2 MATERIAL E MTODOS
2.1 POPULAO ESTUDADA E BIOTRIO
Aps o acidente ambiental. em .J ulho de 2000. S6 cgados pescoo-de-cobra
foram resgatados no Rio Iguau e levados ao Passeio Pblico (Prefeitura i'vlunicipal de
Curitiba), ' Estado do Paran, onde passaram por um processo de despetrolizao
(remoo do leo) com sucessivos banhos com gua aquecida a 40') C e detergente
lquido neutro. Depoi s disso os animais foram secos com auxlio de toalhas, receberam
fluidoterapia celomtica e foram aq uecidos por lmpadas.
FIGURA 3 - BIOTRIO INSTALADO NO HOSPITAL VETERINRIO DA UFPR.
NOTA: Foto gentilmente cedida pelo Prof. Rogrio Ribas Lange, UFPR.
Dos 56 cgados resgatados no local do derranle de petrleo, dez foram
levados a um biotrio instalado no Hospital Veterinrio da UFPR (figura 3). O biotrio
possui rea coberta de 30 m
2
, com cinco metros de altura, provido de sistema de
ventilao e algumas telhas transparentes que permitem a difuso da luz natural. Nesta
sala tambm h 12 tanques de fibra de vidro (de capacidade de 1000 litros cada) com
aproximadamente 23 centmetros de tanque preenchidos com gua. A gua dos
26
tanques era filtrada continuamente e sua temperatura era controlada por termostato a
aproximadamente 25 C.
Os animais permaneceram em luz artificial fluorescente por 12 horas ao dia.
e uma vez por semana, durante uma hora, cada animal recebeu luz ultra-violeta -UV-
(super UV fluorescente - 3% UVB e 7% UVA). Cada tanque possua duas caixas
plsticas abertas bilateralmente (27cm x 44cm x 15cm), usadas ele abrigo para os
cgados.
Junto com os dez cgados do resgate, foram mantidos 27 cgados (no meSrlW
biotrio e sob as mesmas condies) que fonnaram o grupo controle. Desses 27
alllmms, 15 pel1enciam ao grupo referncia (animais procedentes do Zoolgico de
Curitiba e recebidos de doao) e 12 pel1enciam ao grupo montante (animais
capturados no Rio Iguau, a montante do local elo delTame de leo). Todos esses
animais foram subdivididos nos 12 tanques existentes no biotrio. Cada cgado
recebeu uma marcao numrica na carapaa. A marcao dos animais dos grupos
montante e referncia era precedida pela letra cOlTespondente ao grupo que (j animal
pertencia (M = montante e R = referncia).
Os cuidados dirios com os cgados incluam: inspeo visual de cada
animal, limpeza manual da gua do tanque para remoo de resduos (sobras da
alimentao, fezes e escamas cutneas) com' o auxlio de uma rede especial, e
alimentao base de peixe fresco. Semanalmente pesavam-se todos os animais. A
gua dos tanques era trocada a cada 15 dias, e durante esse processo os tanques eram
limpos com escova e gua.
2.2 DIMORFISMO SEXUAL (SEXAGEM)
Segundo FRYE (1991, p.2I5) os cgados machos possuem uma concavidade
no plastro, caracterstica ausente nas fmeas. No entanto, os animais mais jovens no
possuem dimOlfisrno sexual evidente por meio da observao do plastro. A
27
diferenciao sexual pode ser feita tambm pela observao da cauda: os machos
possuem uma cauda mais longa e larga do que as fmeas e a cloaca dos machos mai s
distai que a das fmeas. Nesse trabalho. a diferenc iao entre machos e fmeas foi
feita pela observao da presena ou ausncia da concavidade no plaSlT<1o.
COLHEITA DE SANGUE
Um total de 16 colheitas de sangue de todos os cgados fo ram realizadas
periodicamente, entre os anos de 2000 e 2002. para avaliaes hematolgicas e
bioqumicas. Os resultados obtidos das colheitas realizadas em 2000 (nos meses de
Outubro e Dezembro) no foram computados nesta pesquisa,. poi s tiveram como
objetivo a padronizao de tcni cas hematolgicas para Hydromedllsa leClife/'C/.
FIGURA 4 - COLHEITA DE SANGUE REALIZADA POR PUNO DO SEIO
SUPRA-OCCIPlT AL EM Hydromedusa leclifera.
NOTA: Foto gentilmente cedida pelo Prof. Rogrio Ribas Lange, UFPR.
Inicialmente, durante o ano 2000, as colheitas de sangue dos cgados foram
realizadas por puno da veia jugular; mas essa tcnica exigia que os animais fossem
previamente deixados por cerca de 20 minutos em gua aquecida a 25" C, a ftm de
promover vasodilatao e facilitar a obteno de sangue. Como essa tcnica dispendia
28
muito tempo, passou-se ento a colher o sangue dos cgados por puno do seio supra
occipital. O seio venoso supra occipitaL localizado na aJ1iculao atlanto-occipitaL
permite uma puno rpida e de volume suficiente de sangue (figura 4).
Aproximadamente dois mililitros de sangue foram colhidos de cada cgado,
em cada colheita. Para a puno sangnea utilizaram-se seringas descartveis de trs
mililitros e agulhas descartveis 13 x 4,5.
As lminas para a contagem diferencial dos leuccitos foram confeccionadas
com uma gota do sangue proveniente da agulha usada durante a colheita. O restante do
sangue foi acondicionado em tubos heparinizados.
Todas as colheitas de sangue foram realizadas no biotrio onde os animais
estavam instalados, no Hospital Veterinrio da UFPR.
2.4 DETERMINAO DOS PARMETROS HEMATOLGICOS
As anlises hematolgicas descritas a seguir foram realizadas no Laboratrio
de Patologia Clnica do Hospital Veterinrio da UFPR.
2.4. I Hematcrito
Para determinao do hematcrito foi utilizado o mtodo do
microhematcrito. Utilizou-se tubos heparinizados, que foram centrifugados a 2000 x
g por cinco minutos, em microcentrfuga. A proporo entre o volume de elementos
figurados foi estimada em porcentagem, com auxlio de uma escala padronizada.
2.4.2 Dosagem de Hemoglobina Total
A concentrao de hemoglobina foi determinada pelo mtodo da
cianometahemoglobina, que mede todos os tipos de hemoglobinas circulantes. Esse
mtodo consiste em adicionar 20 micro litros de sangue total em cinco mililitros de
29
soluo reagente de COL que tem feITicianeto e cianeto de potssio. O feITicianeto de
potssio transforma o feITo da hemoglobina do estado feIToso para o flTico, formando
a metahemoglobina que, por sua vez, combina com o cianeto de potssio fOlmando um
pigmento estvel, denominado cianometahemoglobina. A intensidade de cor obtida
ento determinada em espectrofotmetro a 540 nm.
2.4.3 Contagem de Eritrcitos Totais
Utilizou-se sangue total heparinizado diludo I: 100 em solu<:10 de Azul de
Toluidina a 0,01 %, que foi colocado em cmara de Neubauer. Aps alguns minutos os
elementos celulares depositaram-se no fundo da cmara e a contagem foi efetuada sob
microscopia ptica, contando-se o nmero de eritrcitos de cinco quadrados diagonais
do quadrado central (rea de contagem de eritrcitos) do retculo da cmara. O nmero
de eritrcitos obtido foi multiplicado por 4000, para obteno do nmero total de
eritrcitos por microlitro de sangue (ZINKL, 1986, p.257).
2.4.4 Contagem de Leuccitos Totais
Para a contagem total do nmero de leuccitos foi utilizada a mesma diluio
que permitiu a contagem de eritrcitos totais. Os leuccitos foram contados em todos
os quadrados, da rea de contagem de eritrcitos, do retculo da cmara de Neubauer.
O nmero obtido foi multiplicado por 1000 para obteno do nmero total de
leuccitos por micro litro de sangue (ZINKL, 1986, p.258).
2.4.5 Diferencial das Clulas Sangneas
A contagem diferencial dos leuccitos foi obtida mediante leitura dos
esfregaos sangneos corados com corante hematolgico de 'vVright. De cada lmina
obteve-se a mdia de 200 clulas contadas. Os leuccitos foram diferenciados em:
heterfilos, eosinfilos, basfilos, moncitos, linfcitos e azurfilos. A leitura foi
efetuada sob microscopia ptica em objetiva de imerso ( 100x).
DETER..MINAAo DOS BIOQUM ICOS
Fosfatase alcalina, uria, creatinina e cido rico foram detenninadasno
plasma heparinizado dos cgados com auxlio de kits bioqumicos comerciais
(Bioclim) e leitura em espectrofotmetro (lv!elrolab 330). O plasma foi obtido aps
centrifugao do sangue total a 2000 x g por cinco minutos.
As anlises bioqumicas foram realizadas no Laboratrio de Patologia'
Clnica do Hospital Veterinrio da UFPR.
2.6 ATIVIDADE DA COLlNESTER..ASE PLASMTICA
Para medir a atividade da enzima colinesterase utilizou-se o mtodo de
ELLMAN et aI. (1961, p.90), modificado para microplaca por STURM et aI. (1999,
p.5). Trata-se de um mtodo fotocolorimtrico que permite quantificar a atividade da
enzima em amostras de plasma.
A atividade da enzima medida de acordo com o aumento da colorao
amarela produzida pela tiocolina quando reage com o on 5,5-ditio-bis-2-nitrobenzoato
(OTNB) de acordo com o acoplamento das seguintes reaes:
Acetiltiocolina AchE tiocolina + acetato
Tiocolina + OTNB cor amarela
A leitura foi realizda em espectrofotmetro de microplaca (Sunrise, Tecan)
em 412 nm.
A concentrao protica das amostras foi detenninada segundo BRADFORD
(1976, p.250). Para isso utilizou-se dez micro litros de amostra de plasma diludo 1 :40
31
e 250 microlitros do reagente de Bradford diludo 1 :5. Para a curva padro foi
utilizado BSA (soro albumina bovina). A leitura foi realizada em espectrofotmeu-o de
microplaca (Sunrise, Tecan) em 610 nm.
A determinao da atividade da colinesterase plasmtica foi realizada no
Laboratrio de Toxicologia Ambiental do Depa11amento de Farmacologia da UFPR.
2.7 DE ARSNICO E METAIS PESADOS
Foram realizadas u-s dosagens de metais pesados (cdmio, chumbo, cobre e
mercrio) e arsnico. As anlises foram feitas em amostras de sangue heparinizadas e
no msculo de animais de cada grupo (acidente, referncia e montante).
Em Setembro de 200 I foram analisadas as concentraes de metais pesados
e arsnico em fragmentos de msculo das patas posteriores de alguns cgados que
haviam morrido. As patas dos animais estavam congeladas e haviam sido separadas
durante necrpsia realizada logo aps o bito dos animais.
Em Dezembro de 2001 e em Maio de 2002 foram analisadas as
concentraes de metais pesados e arsnico no sangue dos animais. Apenas os trs
animais do grupo acidente foram os mesmos nas duas anlises realizadas.
As anlises (sangue e msculo) foram realizadas em laboratrio particular
(Laboratrio Frischmann Aisengart, Curitiba-PR) e a metodologia empregada foi
lCP/MS - espectrmetro de massa acoplado a plasma induzido.
2.8 DADOS ESTATSTICOS
A anlise estatstica realizada teve por finalidade estabeleCer possveis
diferenas entre os parmetros hematolgicos e bioqumicas,. e nveis de metais
pesados e arsnico para os trs grupos de cgados pescoo-de-cobra (acidente,
referncia e montante). Para esse estudo foi utilizado como ferramenta computacional
o Pacote Estatstico R.
32
A anlise de varincia (ANOV A) foi utilizada para estudar se o fator "local
de coleta", ou seja, local de procedncia dos animais (grupo referncia, grupo acidente
e grupo montante) teve efeito sobre as variveis das anlises hematolgicas (eritrcitos
totais, hematcrito, hemoglobina, leuccitos totais, heterfilos, eosinflos, linfcitos,
moncitos, basfilos e azurfilos) e bioqumicas (uria, fosfatase alcalina, creatinina e
cido rico e colinesterase).
Tambm fez-se uma anlise multivariada (lvlANOV A) para avaliar as
variveis em conjunto. Como complementao, aplicou-se um ps-teste paramtrico
(teste de Tukey).
Como nem todas as variveis foram analisadas o mesmo nmero de vezes
para cada animal, as anlises estatsticas foram feitas com base nas mdias ponderadas.
As 13 colheitas de sangue realizadas no ano de 200 I foram subdivididas em trs
perodos (obtendo-se trs mdias para cada grupo):
_la mdia: colheitas realizadas entre Abril de 2001 e Julho de 2001,
_2
a
mdia: colheitas realizadas entre Agosto de 2001 e Dezembro de 2001,
_3
a
mdia: colheitas realizadas entre Janeiro de 2002 e Abril de 2002.
Tambm foi calculada uma mdia ponderada geral para cada grupo
(acidente, montante e referncia) referente a todas as colheitas realizadas em 2001 e
2002.
Para a anlise estatstica de metais pesados e arsnico, foram determinados
apenas a mdia e o desvio padro para cada varivel e para cada grupo de cgados
(acidente, montante e referncia). Isto ocorreu devido ao pequeno nmero de animais
submetidos anlise das variveis supracitadas.
As anlises estatsticas foram realizadas com o auxlio do Departamento de
Estatstica da UFPR.
33
3 RESULTADOS
3.1 MORTALIDADE DOS CAGADOS
Durante o projeto de monitoramento de cgados pescoo-de-cobra (Outubro
de 2000 a Junho de 2002), ocorreu mortalidade nos trs grupos de cgados estudados,
sendo de 9 bitos (90%) no grupo acidente, 8 bitos (67%) no grupo montante e 6
bitos (40%) no grupo referncia.
Todos os cgados pescoo-de-cobra que vieram a bito foram submetidos
necrpsia (Laboratrio de Anatomia Patolgica do Hospital Veterinrio da UFPR). Foi
encontrada grande quantidade de fibrilla na cavidade celomtica dos animais, em
conseqncia ao procedimento de fluidoterapia realizado sob condies mnimas de
higiene e conservao dos fluidos, durante o processo de despetrolizao realizado no
Passeio Pblico (Prefeitura Municipal de Curitiba-PR). O processo de fluidoterapia
celomtica foi realizado apenas nos animais do grupo acidente.
3.2 DADOS BIOMTRICOS DOS CGADOS
Dos 37 cgados mantidos no biotrio durante a pesqUIsa, 15 (41 %) eram
machos, 16 (43%) eram fmeas e seis (16%) eram animais jovens, sendo que nesses
ltimos no foi possvel fazer a sexagem.
Nas tabelas 1, 2 e 3 esto apresentadas as amplitudes de variao no peso
(peso inicial, que corresponde a primeira pesagem e peso final, que corresponde a
ltima pesagem antes da soltura ou bito do animal) e o sexo dos cgados pescoo-de-
cobra que fizeram parte do estudo. Para uma melhor visualizao, os valores referentes
aos pesos inicial e final esto representados graficamente (grficos 1, 2 e 3).
TABELA 1 - AMPLITUDES DE VARIAO O PESO E SEXO DOS CGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERENTES AO GRUPO .-\CIDENTE,
2000 A 2002.
Identificao Sexo Datada la Peso Data da lt ima Peso
do anima l pesage m inicia l pesagem fina l
(kg) (kg)
70 Macho 2 1/09/2000 1.350 * *09/05/ 200 1 1,342
105 Fmea 2 1/09/ 2000 1,320 ** 11 /07/200 1 1,275
65 * 2 1/09/2000 0,560 ** 18/04/200 1 0,697
143 Fmea 2 1/09/2000 1,345 * *26/09/200 I 1,337
2'/ -
-) Fmea 2 1/09/ 2000 1,475 **3 111 0/200 1 1,639
92 Macho 21/09/2000 1,635 **23/05/200 I 1,72 1
169 Fmea 2 1/09/2000 2,765 21/06/2002 2,881
252 Macho 21109/ 2000 2,200 **09/05/2001 2,376
76 Macho 21109/2000 1,490 **02/05/200 I 1,597
18 I Fmea 21109/ 2000 1,7 10 ** 18/04/ 200 I 1,976
NOTA: * Indica animal jovem, no qual no foi possivel faze r a sexagem.
** Indica ltima pesagem antes do bito.
GRFICO 1 - AMPLITUDES DE VARIAO NO PESO DOS CAGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERENTES AO GRUPO ACIDENTE,
PETRLEO, RIO IGUAU, 2000 A 2002.
A-70 A-I 05 A-65 A- 143 A-225 A-92 A- 169 A-252 A-76 A-I SI
ani mais
E1 Peso inicial
O Peso final
35
TABELA 2 - AMPLITUDES DE VARlAO O PESO E SEXO DOS CGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERE TES AO GRUPO REFERNClA,
2000 A 2002.
Identificao Sexo Data da 1" Peso inicial Data da Peso final
do animal
RIO
R9
R2I
RIl
R2
R3
R5
RI
R8
RI5
R16
R17
R20
R19
R4
Macho
Macho
Fmea
Macho
Fmea
Fmea
Fmea
Macho
Fmea
Fmea
*
Fmea
Macho
Macho
*
pesagem
21 /09/2000
21/09/ 2000
03/ 10/ 2000
21 /09/2000
11 /01 /2001
25/09/2000
25/09/2000
21/09/2000
21109/ 2000
06/ 12/200 I
06/ 12/2001
06/12/200 I
17/0112002
17/01/2002
17/01 /2001
(kg)
-
1.12)
2.625
0.475
2.060
1,099
1,885
1,310
1, 135
1, 165
1,072
0,6 14
1,519
1,829
1, 796
0,672
ltima
pesagem
21/06/2002
2 1/06/2002
2 1/06/ 2002
**06/12/ 2001
**29/08/200 I
**09/05/ 2001
**02/05/2001
** 11/07/ 2001
* * 14/0212001
2 1/06/2002
21 /06/ 2002
21/06/2002
NOTA: * Indica animal jovem, no qual no foi possvel fazer a sexagem.
(kg)
1.633
2,5
1,294
2,395
1,278
1,840
1, 160
1,284
1,589
2, 188
1,981
0,741
** Indica ltima pesagem antes do bito. Os animais RIS, RI6 e RI7 foram
pesados apenas uma vez (depois foram soltos no Zoolgico Municipal de
Curitiba, PR).
GRFICO 2 - AMPLITUDES DE VARIAO NO PESO DOS CGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERE TES AO GRUPO
REFERNCIA, 2000 A 2002.
3 ~ ~
RIO R09 R-21 R-lI R02 R-03 R-OS R-OI R-8 R-15 R-I G R- 17 R-20 R-19 R-04
animais
[J Peso inicial
O Peso fmal
36
TABELA 3 - AMPLITUDES DE VARIAO NO PESO E SEXO DOS CGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERE. TES AO GR PO MONTANTE.
2000 A 2002.
Identificao
do animal
M3
M9
M4
M8
M7
MIO
M2
MI
MS
M6
Mil
MI2
Sexo
Fmea
*
Macho
Macho
Macho
Fmea
*
Macho
Macho
Fmea
*
Fmea
Datadal"
pesagem
25/09/2000
14/03/ 200 I
15/08/200 I
24/ I 0/ 200 I
24/ 10/200 I
24/ 10/200 I
25/09/2000
25/09/2000
25/09/2000
25/09/2000
17/0 1/2002
24/0 1/2002
Peso ini cial Data da
(kg) ltima

1. 193 2 1/ 06/ 2002
0,343 * *28/03/2002
1.343 **3 1/0 1/2002
1. 270 2 1/ 06/ 2002
1. 872 2 1/ 06/2002
1,386 2 1/06/2002
0,432 * *09/05/200 I
1,429 **0 1/ 08/200 I
1,22 1 * *09/05/200 I
1, 123 * *09/ 05/200 I
0,427 * *28/ 03/ 2002
1,043 **3 1/01 /2002
NOTA: * Indica animal jovem, no qual no foi possvel fazer a sexagem.
** Indi ca ltima pesagem antes do bito.
Peso final
(kg)
-
1,64)
0,324
1,523
1,294
1,842
1,454
0,437
1,645
1,2 14
I, I 13
0,458
1, 125
GRFICO 3 - AMPLITUDES DE VARIAO NO PESO DOS CGADOS
PESCOO-DE-COBRA, REFERENTES AO GRUPO
MONTANTE, 2000 A 2002.
-
Ol
::.
o
VI
aJ
Q.

1,5 'r-
0,5 .
M03 M-09 M-04 M-OS M-O? M-IO M-02 M-Ol M-05 M-06 M- 12
animais
llJ Peso inicial
DPeso final
A amplitude de variao de peso observada nos diferentes grupos mostra que
nos animais do grupo acidente houve um menor ganho de peso e trs animais tiveram
diminuio do peso durante o perodo que permaneceram em cativeiro. Observou-se
37
reduo de peso em quatro animais do grupo montante e em trs animais do grupo
referncia.
3.3 TEMPER..A.. TURA AMBIENTE DURANTE A COLHEITA DE SANGUE
Um total de 16 colheitas de sangue foram realizadas entre os anos de 2000 a
2002. Na tabela 4 esto apresentadas as datas e as temperaturas mxima e mnima
registradas no biotrio no dia da colheita de sangue. O sangue foi colhido de todos os
cgados pescoo-de-cobra que estavam no biotrio no dia da colheita.
TABELA 4 - DATAS DE COLHEITA DE SANGUE DOS CAGADOS PESCOO-
DE-COBRA E TEMPERA TURA.S MAxllvlAS E MNIMAS
REGISTRADAS, 2000 A 2002.
Data da colheita Temperatura Temperatura
de san ue mnima CC) mxima CC)
11/08/2000 * *
24/11/2000 24 25
14/12/2000 24 25
19/04/2001 22 23
03/05/2001 22 23
21/06/2001 16 18,5
05/07/2001 19 21
09/08/2001 19 21
20/09/2001 20 22
11/10/2001 22 23
08/11/2001 21 26
31/01/2002 22 24
28/03/2002 24,5 25
18/04/2002 23 24
12/06/2002 20 21
02/07/2002 19 21
MDIA 21,17 22,84
NOTA: * Indica colheita de sangue realizada no Passeio Pblico (Prefeitura Municipal
de Curitiba).
38
3.4 PARMETROS HEMATOLGICOS
Os valores dos parmetros hematolgicos de Hydrul11edusa teclifera, dos
grupos acidente, montante e referencia so mostrados na tabela :5. Foi observada
diferena significativa na contagem total de erin'citosenn'e os grupos montante e
referncia (na segunda mdia), e na contagem total de leuccitos enn'e os grupos
. acidente e referncia (na segunda mdia).
TABELA 5 - MDlAS E DESVIO-PADR..O PONDER..A.DOS DAS VARIAvEIS
HEMATOLGICAS DOS GRUPOS ACIDENTE, MONTANTE E
REFERENCIA.
Grupo Mdias Eritrcitos Hematcrito Hemoglobina I Leuccitos
totais /111
('X, ) . (g/dl) . I
totais /111
. Acidente
}'\
.:1-81.60()109.957.3 22N.13 8.22.:12 .oU .05023 .677.61
(N=lO)
2"
566.267 159..:1- 78.6 235.17 6.HIA-l 20.733S.250.S7

540.00067.0 16.42 253.27 7.()1.16 13.3301.505.55
-'
Mdia Geral 453.650104.174,32 22,22+4,47 7,19+1,74 31.862,5+15.513,6*
Montante
la
392.000 136.496,5 20.3N.76 8,3H3.0S 19.2509.020,96
(N=12)
2
a
63S.550221.128.9 23.lN.72 7.3l1.77 2.:1-.5005.621.3S

499.50014.:1-.0 12, I 2L76.02 7.952.59 1.:1-.8753.015.11
-'
Mdia Geral 560.800408.568,38* 22+7,81 7,47+1,02 21.997 ,985.484,8
Referncia
la
386.62S109.280,6 2L33.91 7.162.l)<) 16.12S3.30.:1-.04
(N=15)
2
a
475.85 L9lOS.50 22.93.86 7.2S1.53 22.963S.518.58
3
a
48 L333,374.766.6 23.S3.88 7.41.58 13.2S04..:1-73,38
Mdia Geral 432.020,5173.883,4* 21,933,12 7,121,411 18.635,99.215,8*
NOTA: *Indicadiferena significativa (95% de confiana, p<0,05, Teste de Tukey).
la mdia: colheitas realizadas entre Abril de 2001 e Julho de 2001,
2
a
mdia: colheitas realizadas entre Agosto de 2001 e Dezembro de 2001,
3
a
mdia: colheitas realizadas entre Janeiro de 2002 e Abi'il de 2002.
Os valores referentes a contagem diferencial dos leuccitos de Hydromedusa
tectifera para os grupos acidente, montante e referncia so mostrados na tabela 6.
No diferencial de leuccitos observou-se alta contagem de heterfilos no
grupo acidente (15.3292.845,3hll), quando comparado ao grupo referncia
Dentre as trs mdias do grupo acidente observou-se uma maior
contagem de heterfilos na primeira mdia, com diminuio progressiva at a terceira
39
mdia.
Tambm observou-se diferena significativa para a contagem diferencial de
basfilos entre as mdias gerais dos grupos acidente (8.447 1. e referncia
(4.8531.433,lhd). Dentre as trs mdias do grupo acidente observou-se diminuio
considervel no nmero de basfilos da primeira para a terceira mdia.
TABELA 6 - MDIAS PONDERADAS DA CONTAGEM DIFERENCIAL DE
LEUCCITOS DOS GRUPOS ACIDENTE, MONTANTE E
REFERNCIA.
Gi'lIpo Mdias Heter(dilo
I Liy!!cilo
Eosinji/o lv!onciro Azurjilo Basjilo
(,uI) . (I,ul) (,uI) (,uI) (/;.tl)
ACIdente
- - -
la 21.6h67389,) 1.140,8319 b12,23lUU
- - -- - -
3S7A)),30 ))9,6)),17 I 1.774,IS193
(N=lO)
2
a
9.709,S9348,3 lJ47A920,2 3.924,7694,55 SO 1.5413,15 22SJJ63,05 5.121,05162,4
-,a
7.1 mLS946S,6 377,247,53 2.S19,29112,S 1 77.291 1.51 381.247,25 2,421,66247.5
.)
Mdia Geral 5. 691,42411,1I3 8,4471. 902,2'
Montante la 7.555,63395,S 1.54019,64 2.117,5204,S4 1.010,6319,25 625,63S,56 6,41O,2330,S
(N=12)
2
a
12.413,4409,1 803,67,82 3.354,O5246,3 I.IJ33,931.0 1 448,35S,55 6,443,5286,3
-,a
9.091,6278,35 526,586,8S 1.655,591 ns 395,6S24,96 }03A512,22 2.915,5191,4
-'
Mdia Geral llA812.509,9 912,9376,2 2.5762.054,61 893,1+653,34 5. 6362.094,2
Referncia la 5.814,6841,93 735,39,59 3.919,98275,1 543,4119,25 614,3611,51 4,495,65112,6
(N=15)
2
a
11.09829S,6 6204,27 3.605,19304,5 1.572,9731,0 1 636,076,16 5,425,93141,S
3
a
7.606,83496,5 341,S5S,27 2.265,75271,S 231,8S24,96 12 1 ,373,75 2.683, 13 179,6
Mdia Geral 8.0472.543,8 620,6339,1 3.9062.089,1 713,7+687,66 495,71326,13 4.8531.433,1"
NOTA: *Indica diferena significativa (95% de confiana, p<0,05, Teste de Tukey).
1 a mdia: colheitas realizadas entre Abril de 2001 e Julho de 2001,
2
a
mdia: colheitas realizadas entre Agosto de 2001 e Dezembro de 2001,
3
a
mdia: colheitas realizadas entre Janeiro de 2002 e Abril de 2002.
3.5 PARMETROS BIOQUMICOS
Os valores dos parmetros bioqumicos de Hydromedusa tectifera dos
grupos acidente, montante e referncia so mostrados na tabela 7. No foram
observadas diferenas significativas nas variveis bioqumicas entre os trs grupos de
cgados estudados.
.j.()
TABELA 7 - MDIAS PONDERADAS DAS VARIVEIS BIOQUMICAS
(URIA, FOSFATASE ALCALINA, CREATININA, CIDO RICO E
COLINESTERASE) DOS GRUPOS ACIDENTE, MONTANTE E
REFERNCIA.
Grupo I Mdias Uria Fosfatase Creatinina I ~ i d o Colinesterase
I
(mg/dl) Alcalina (mg/dl) I U rico
(nrnol.rnin"l.
rng
"
(UI/I) I (mmol/I)
I.protena)
Acidente
la
30,SlIS,3S 3S11,44 0,300,09 4, 172, 16
(N=5-10)
2
a
22,6S20,27 21,21IO,06 0,250,OS I ,460, 73 6,S22,97
"a
34,S10,99 16,217,3S 0,460,33 1,S71,04 5,4O,OS
.)
Mdia Geral
31,3014,51 28,8513,47 O,28O,O3 1,62O,47 6,131,42
Montante
I a
29,227,26 2S, 7S 1 0,20 0,310,09
(N=8-12)
2
a
22,S69, Ii 23,3S9,92 0,2S0, lS 1,S90,79 4,7S2,S3
"a
40,S223,63 2S,S216,S9 0,330,lS 0,Sl0,13 7, 113, 19
.)
Mdia Geral
27,7217,49 26,3313,59 O,28O,10 1,76O,75 5,821,43
Referncia
la
30,SI11,17 33,447,89 0,3S0,09 6,173,2S
(N=8-15)
2
a
13,6622,36 26,4S12,S2 0,290,11 1,640,S3 S,243,93
"a
3S,112S,61 19,579,94 0,420,14 1,161,25 S,S94,49
.)
Mdia Geral
26,9419,28 28,O510,77 O,33O,12 1,49O,48 6,644,O4
NOT A: (---) indica que a varivel no foi analisada no perodo.
1 a mdia: colheitas realizadas entre Abril de 2001 e Julho de 2001,
. 2
a
mdia: colheitas realizadas entre Agosto de 2001 e Dezembro de 2001,
3
a
mdia: colheitas realizadas entre Janeiro de 2002 e Abril de 2002.
3.6 ARSNICO E METAIS PESADOS
As concentraes de arsnico e metais pesados, medidos no sangue de
Hydromedusa tectifera (trs animais de cada grupo), referentes aos meses de
Dezembro de 2001 e Maio de 2002, so mostradas nas tabelas S e 9.
H
TABELA 8 - CONCENTRAES DE ARSENICO E METAIS PESADOS NO
SANGUE DE Hvdrol11edusa leclilera, DEZEMBRO DE 2001.
. .
GRUPOS ELEMENTOS ANALISADOS (J.lg/I)
Arsnico Cdmio Chumbo Cobre Mercrio
Acidente 092 109.48 5,05 33,10 541 122,64
181 132,92 0,69 36,80 466 107,40
169 157,54 4,53 37,30 824 85,91
Mdia 133,31 3,42 35,73 610,33 105,32
24,03 2,38 2,29 188,80 18,45
Referncia R15 12,47 0)7 83,60 576 30,63
R16 51,41 1,60 27,10 878 35,24
RI7 11,08 0,57 202,30 686 73,94
Mdia 24,98 0,98 104,33 713,33 46,60
22,89 0,55 89,42 152,84 23,79
Montante [vIl O 107,47
') ')-
-,-) 41,30 750 46,62
MIl 44,94 2,38 37 972 34,76
MI2 49,29 1,34 22,70 918 71,89
Mdia 67,23 1,99 33,67 880 51,09
34,91 0,57 9,74 115,76 18,96
TABELA 9 - CONCENTRAES DE ARSENICO E METAIS PESADOS NO
SANGUE DE Hydrul11edusa leCl?lera, [vIAIO DE 2002.
GRUPOS ANIMAL ELEMENTOS ANALISADOS
{gg/l)
Arsnico Cdmio Chumbo Cobre Mercrio
Acidente 092 141,51 5,20 27,02 345,88 84
181 37,47 0,60 37,06 393,77 77,98
169 87,98 2,29 30,65 464,76 46,11
Mdia 88,99 2,69 31,58 401,47 69,36
52,0273 2,32 5,08 59,81 20,36
Referncia R08 162,17 1,35 43,98 457,37 68,32
R09 283,02 0,78 89,72 272,32 '38,58
RIO 162,93 0,86 60,24 255,62 62,88
Mdia 202,71 0,99 64,65 328,44 56,59
69,55 0,49 23,19 111,97 15,84 .
Montante MOI 13,78 3,92 33,15 249,98 21,82
M03 483,59 1,33 10 1,38 462,25 47,93
M08 51,28 2,66 74,24 454,32 43,71
Mdia 182,88 2,64 69,59 388,85 37,82
261,09 1,29 34,35 120,33 14,02
42
As concentraes de arsnico e metais pesados, medidos no msculo de
Hydromedusa tectifera (trs animais de cada grupo), referentes a alguns animais que
vieram a bito at o ms de Setembro de 2001, so mostradas na tabela 10.
TABELA 10 - CONCENTRAES DE ARSNI CO E METAI S PESADOS NO
MSCUL O DE Hydromedusa teciifercL SETEMBRO DE 2001.
GRUPOS ANI MAL ELEMENTOS ANALI SADOS
(W/g)
Arsnico Cdmi o Chumbo Cobre Mercrio
Aci dente 065 0.47 56,53 13382.15 316,63 1760.38
076 2.56 19.50 4351,80 506,54 1611,24
252 1,97 18.68 4779.41 680,25 2384,15
Mdia 1,67 31,57 7504, 45 501, 14 1918,59
Desvi o-padro 1,07 21,62 5094, 72 181,87 410,02
Referncia R01 2,19 7.34 225.99 378,50 1988,68
RO 3 0,5.0 23,17 153,80 260.71 646,36
R04 3,93 11,59 353,32 504,66 3175,43
Mdia 2,20 14,03 244, 37 381, 29 1936,82
Desvi o-padro 1,72 8,19 101,02 121,99 1265,33
Montante M02 0,59 4,22 252,55 380,17 363,82
M04 2,34 14,87 648,94 294,61 535,22
M07 2,72 8,15 1462,48 391,02 266,02
Mdia 1,88 9,08 1388,00 355, 27 388,35
Desvi o-padro 1,14 5,38 704, 74 52,81 136,27
Na pri mei ra colheita de sangue realizada para dosagem de metais pesados e
arsnico (em Dezembro de 2001), observou-se mdias superiores para o grupo
acidente, de arsnico, cdmio e mercrio. Pode-se observar que a concentrao desses
elementos di mi nui u significativamente na segunda colheita de sangue (Maio de 2002).
A anlise de arsnico e metais pesados no msculo (Setembro de 2001) mostrou altos
nveis de cdmi o, chumbo e cobre no grupo acidente. A mais alta concentrao de
mercrio foi observada em fragmento de msculo de um animal do grupo referncia.
O nvel de arsnico muscular foi similar para os trs grupos estudados.
0
4 DISCUSSO
Os rpteis so denominados de ectotrmicos devido a sua dependncia de
fontes externas de aquecimento, que so mais importantes do que a produo de calor
pelo seu prprio organismo, para elevar sua temperatura corprea. Diferentemente de
mamferos e aves, a produo de calor pelo metabolismo orgamco em rpteis
insuficiente para elevar a temperatura corporea de maneira significativa
(LILL YWHITE e GATTEN 1r, 1995, p.6).
Dada a importncia que a temperatura ambiente tem. para rpteis, os cgados
do presente estudo permaneceram em biotrio com temperatura controlada, que variou
de 21,17 a 22,84 C. Segundo BOYER e SOYER (1996, p.76), a temperatura
ambiente adequada para cgados de 24 a 29 C, embora possa ser admitida
temperatura mnima de 21
0
C. Segundo FR YE (1990, p.211) a faixa de temperatura
ideal para cgados mantidos em cativeiro deve estar entre 22 e 31
0
C. Os animais do
presente estudo foram mantidos em uma faixa de temperatura menor, pois a maioria
dos cgados eram provenientes da regio do Rio Iguau; logo j estavam acostumados
. a temperaturas menores, tpicas dessa regio.
Os animais dos grupos acidente e montante, alm de apresentarem as
menores amplitudes de variao no peso, tambm tiveram os maiores. ndices de bito
em cativeiro (90 e 67%, respectivamente). Esses fatos refletem a no adaptao desses
animais ao biotrio, ou esses cgados j apresentavam-se debilitados devido s
condies em que se encontravam no Rio Iguau.
A anlise dos parmetros sangneos em anImaIS silvestres pode ser um
indicador das condies de sade e de seu habitat, alm de fornecer informaes
necessrias para avaliao de impacto ambiental sobre esses animais. A realizao de
hemograma em rpteis pode indicar anormalidades patolgicas antes mesmo da
manifestao de alteraes clnicas. Os vrios componentes do hemograma podem
fornecer informaes importantes sobre as condies do animal, como bacteremias,
parasitemias ou vlremlas, processos anemicos severos e presena de hemoparasitas
(MADER, 2000, p.1127).
Na anlise hematolgica dos trs grupos de cgados do presente estudo, foi
observada diferena entre a mdia geral de leuccitos do grupo acidente
(31.862,5IS.513,S9 e a mdia geral do grupo referencia
Dentre as trs mdias do grupo acidente possvel notar que o nmero de leuccitos
mais pronunciado na primeira mdia (Abril a Julho1200 1) com 43.050
Isso indica que a heterofilia pode ter ocorrido em conseqncia ao estresse do acidente
ambiental e captura; A diminuio do nmero total de leuccitos durante a
permanncia em cativeiro confirma esses fatos.
Os leuccitos so as clulas responsveis pela defesa do organIsmo e um
aumento na contagem total dessas clulas na circulao pode indicar, principalmente,
processos inflamatrios ou estresse (JALN, 1993, p.297).
JACOBSON (1992, p.53) cita como intervalo normal de leuccitos, para
quelnios saudveis, de 6.000 a No presente estudo, difcil avaliar que
condio levou ao aumento do nmero de leuccitos. Apesar dos cgados terem sido
mantidos em biotrio com condies estveis, esses animais podem ter sofrido com o
estresse de captura e de cativeiro e, no caso dos animais do grupo acidente, ainda
houve o estresse do acidente ambiental.
No diferencial de leuccitos observou-se alta contagem de heterfilos e
basfilos no grupo acidente, em relao ao grupo referncia.
Segundo MADER (2000, p.1129), a leucocitose em rpteis indicativa de
um processo inflamatrio, sendo heterfilos e basfilos as clulas mais responsivas s
condies inflamatrias. Em um processo inflamatrio agudo, os heterfilos
aUIlentam em nmero por primeiro, quando a condio toma-se crnica, h urna
elevao considervel no nmero de basfilos circulantes (ROSSKOPF, 1982, p.86).
A basofilia um achado comum no sangue de quelnios saudveis, embora,
em alguns casos, possa estar associada com a presena de parasitas sangneos.
No diferencial das clulas sangneas, observou-se uma alta contagem de
eosinfilos para os trs grupos estudados, quando comparados com valores citados por
MARKS e CITINO (1990, p.343); ROSSKOPF (1982, p.87) e TAYLOR e
JACOBSON (1982, p.426) para quelnios teITestres. Segundo ROSSKOPF (1982,
p.86), a eosinofilia em quelnios comum em casos de parasitismo intestinal e a
contagem de eosinfilos tende a diminuir aps a desvenninao. Segundo FRYE
(1991, p.261), a eosillofilia pode OCOITer em rpteis sob condies de estmulo
antignico constante.
Nas necrpsias (realizadas no laboratrio de Anatomia Patolgica do
Hospital Veterinrio da UFPR) foram encontrados parasitas hematfagos classificados
como Pentastomdeos; a fOlma adulta do parasita foi encontrada nos pulmes e a
forma larvar no trato intestinal dos cgados (LANGE et aI, 2002, p.70). Esses parasitas
foram encontrados nos trs grupos de cgados estudados, podendo estar relacionado
com a eosinofilia.
Para as demais clulas verificadas no diferencial de leuccitos (moncitos e
azurfilos) os valores encontrados para os trs grupos de Hydromedusa tectifera esto
muito acima dos citados por MADER (2000, p.1131), ROSSKOPF (1982, p.87) e
CAMPBELL (1996, p.25I) para quelnios. Segundo MADER (2000, p.II3l) e
CAMPBELL (1996, p.25I) uma alta contagem de moncitos e azurfilos est
relacionada com estmulo antignico e doenas infecciosas.
Os valores encontrados para linfcitos. variaram de 620,6339,1 a
1. I 98643,61J.lI entre os trs grupos de cgados estudados; esses valores esto muito
abaixo dos citados por MADER (2000, p.II3I), TAYLOR e JACOBSON (1982,
p.426), e CAMPBELL (1996, p.252) para rpteis saudveis. A linfopenia pode ser
observada em rpteis subnutridos e doentes ou pode estar vinculada ao sexo (machos
de algumas espcies tm menos linfcitos circulantes); o estresse tambm um dos
responsveis por linfopenia (CAMPBELL, 1996, p.25I).
A linfopenia observada nos trs grupos de cgados ocorreu em conseqncia
ao estresse de captura e de cativeiro, afinal os animais foram mantidos por mais de
dois anos no biotrio instalado na UFPR.
A contagem total de eritrcitos mostrou-se mais elevada na mdia geral do
grupo montante Segundo rvlARKS e ClTINO (\990. p.343)
o nmero de eritrcitos considerado normal para o jabuti TeSfllc!O /'CIdiara pertence ao
. intervalo de 350.000 a 670.000/,Lll. Para o jabuti C;uphems agassi::i. ROSSKOPF
(1982, p.85) considera n011l1al o intervalo de 1.2 a 3 milheshll.
Segundo FR YE (199\, p.276) Chelyclru serpel1lina (tartaruga-de-carapaa-
mole), que classificada taxonomicamente na mesma ordem que H. lectifera, possui
como parmetro normal o nmero de eritrcitos compreendidos entre 154.000 e
530.000 hll.Pode-se observar que existe um grande intervalo para uma mesma
espcie, tomando difcil concluir se os resultados obtidos para H. leuilera diferem
mesmo entre si ou se esto dentro de um intervalo considerado nOlmal, pois no
existem valores de referencia citados para a espcie estudada.
Alteraes no nmero de eritrcitos circulantes, em rpteis, podem ocorrer
em funo de diversos fatores, tais como: idade do animal, sexo, sazonalidade,
temperatura ambiente, alm de fatores patolgicos e nutricionais. Geralmente h um
aumento no nmero de eritrcitoscirculantes em rpteis que se encontram no perodo
de . pr-hibernao (MADER, 2000, p. 1131). Na presente pesquisa, os cgados
pertencentes aos trs grupos foram mantidos sob as mesmas condies de temperatura
e alimentao; no entanto eram provenientes de lugares distintos. Logo, as diferenas
observadas podem estar ligadas ao sexo. e idade dos animais ou ao local de
procedncia.
Para os demais parmetros hematolgicos (hematcrito e hemoglobina), os
valores encontrados para os trs grupos de cgados pescoo-de-cobra esto dentro dos
intervalos descritos por MADER (2000, p.1131), ROSSKOPF' (1982, p.87) e
CAMPBELL (1996, p.250).
Dentre os parmetros bioqumicas avaliados, no foi observada diferena
p
significativa entre os trs gmpos de cgados. Os valores encontrados para uria e
creatinina so similares aos encontrados por ROSSKOPF (1982, p.86) para jabutis
Gopherus agassizi; no entanto, os valores encontrados para fosfatase alcalina so
muito inferiores dos encontTados para o jabuti Testudo radiclfa (92, 7 14,3 7 UI/I), por
MARKS e CITINO (1990, p.344). A enzima fosfatase alcalina produzida pelo tecido
hepatobiliar e tambm pelo tecido sseo. Aumentos na concentrao da enzima
revelam distrbios hepticos ou sseos, com exceo de animais em crescimento, que
apresentam metabolismo sseo elevado (TENNANT, 1997, p.339).
STEIN (1996, p.479) encontrou como intervalo normal de creatinina de 0,1 a
0,3 mg/dl para o jabuti Malacoehersus rornieri; esses valores so muito prximos aos
encontrados para os trs gmpos de Hydrumedusa reerifera.
No presente estudo. devido s condies de estresse de captura, manejO
nutricional e ambiente artificial, e devido ausncia de pleno conhecimento da origem
dos animais referncia, no se pode afirmar que os resultados obtidos sejam efetivos
como valores basais para Hydromedusa teelifera.
A concentrao do cido rico plasmtico variou de 1,490,48a 1,760,75
mmoIll entre os trs grupos de cgados estudados. MARKS e CITINO (1990, p.343)
encontraram O,00730,005 mmol/l para o cgado Testudo radiata. JACOBSON (1992,
p.59) considera como intervalo normal, para quelnios, 0,134 a 1,075 mmol de cido
rico/l. CAMPBELL (1996, p.253) considera hiperuricmicos rpteis com
concentrao de cido rico acima de 0,4 mmol/!.
. Comparando-se os valores obtidos para H. teetijera com os citados na
literatura para' outros rpteis, observa-se que o cido rico plasmtco maior na
espcie alvo desse estudo. A hiperuricemia pode ocorrer conseqente a uma doena
renal severa; no entanto, rpteis carnvoros ( o caso de H. iectifera) tendem a ter
valores mais elevados de cido rico sangneo do que rpteis herbvoros
(JACOBSON, 1992, p.59).
A concentrao de uria plasmtica variou de 27,7217, 49 a 31,3014,51
mg/dI entre os trs grupos de cgados estudados. JACOBSON (1992. p.55) coloca o
intervalo de 7,7 a 615,4 mg/dl como ndice nonnal de uria plasmtica para quelnios.
ROSSKOPF (1982. p.87) encontrou o intervalo de I a 30 mg/dl de uria plasmtica
para o cgado Gupherlls
A concentrao da uria plasmtica influenciada pela ingesto de protenas,
pela taxa de excreo renal e pelo estado do fgado, que o rgo responsvel pela sua
sntese (que pode diminuir a quantidade de uria circulante) atravs do ciclo da uria
(TENNANT, 1997, p.340).
Segundo MARKS e CITINO (1990, p.344), as concentrnes de muitos
constituintes sangneos de rpteis variam em maior grau do que o esperado,
baseando-se em conhecimentos gerais sobre a fisiologia de mamferos. Importantes
alteraes nos nveis de enzimas e metablitos podem ocon"er devido a alimentao,
mudanas na temperatura, disponibilidade de gua, ciclo reprodutivo e condies
patolgicas.
Foi possvel perceber que H. lecrijera apresenta baixa atividade
colinestersica (6,644,04 nrnol.min-1.mg-1.protena, para o grupo referncia) no
plasma quando comparada com outros grupos animais como peixes e mamferos.
Sabe-se que a diminuio da atividade da colinesterase est correlacionada 'a
exposio a compostos organofosforados e carbamatos; mas tambm j foram
observadas alteraes nesta enzima causados por outros compostos como metaIs
pesados e organoclorados (NAQVI e VAISHNA VI, 1993, p.348).
A atividade da colinesterase plasmtica dos cgados similar a de moluscos,
provavelmente devido ao fato desses animais terem baixo metabolismo. Normalmente
a atividade da colinesterase plasmtica mais alta em espcies de vertebrados do que
em invertebrados (BOCQUEN, GALGANI e TRUQUET, 1990, p.86).
Segundo KOZLOVSKA Y A et aI. (1993, p.140), a atividade colinestersica
medida no crebro dos peixes-sseos Rutilus rutilus e Acerina cernua so
respectivamente 49,333,67 e 14, 171, 17 nrnol.min-1.mg-1.protena.
49
Para a espcie de peIxe marinho SC()l1lher scml/ber, a atividade da
colinesterase plasmtica encontrada foi de 93. 95 1,29 nmol.nlin- ' . mg-
I
.protena
(BOCQUEN, GALGANI e TRUQUET, 1990, p.87). No lagar10 (Jallofia galloli,
SANCHEZ-HERl'\!AN DEZ e WALKER (2000. p.3) encontraram para atividade da
colinesterase plasmtica sangnea 4,3 1,1 I1mol. min -I. mg-
I
. protena: isso comprova
que rpteis tm menor atividade da colinesterase plasmtica quando comparado com
mamferos e peixes.
Observando os valores da atividade da colinesterase em outras espcies
aquticas pode-se perceber que a colinesterase dos cgados pescoo-de-cobra possui
baixa atividade, o que provavelmente prprio dessa espcie, j que a atividade da
enzima mostrou-se baixa nos trs grupos de cgados que fizeram parte do
experimento.
Para a quantificao de metais pesados e arsnico no sangue dos cgados
foram realizadas duas colheitas de sangue (Dezembro de 200 I e Maio de 2002) de trs
animais de cada grupo, totalizando nove animais; tambm foi feita a quantificao de
arsnico e metais pesados em amostras de msculo de H. em Setembro de
2001. Entretanto, o tamanho das amostras foi pequeno para concluir se realmente h
diferena estatstica entre os grupos de cgados. Apenas os animais do grupo acidente
foram reamostrados nas duas colheitas de sangue.
Segundo AGUIRRE et aI. (1994, p.1I2), os efeitos dos metais pesados no
organismo de tartarugas-marinhas so desconhecidos devido a ausncia de pesquisa
desses elementos em rpteis aquticos. Torna-se, ento, difcil de interpretar a
significncia dos valores encontrados para H. /ec/ifera devido falta de pesquisas em
relao aos nveis de arsnico e metais pesados nesses animais e tambm devido
ausncia de informaes sobre a procedncia dos animais do grupo referncia.
AGUIRRE et aI. (1994, p.II3) encontraram para tartarugas marinhas
Chelonia mydas 36,50 de arsnico e 86,58 de cdmio por grama de tecido
heptico; no entanto, em H. leclijera as anlises foram feitas no sangue e em
50
fragmentos de msculo, tomando difcil a comparaelo.
Segundo DA VEN PORT e \VRENCH (1990, p.40) a concentrao de
arsenico em rpteis aquticos mostrou-se superior no tecido adiposo em comparao
com sua concentrao no sangue e tecidos heptico e renal. Isso ocolTe porque o
arsenico tende a associar-se com lipdios polares em organismos de nveis trficos
inferiores (como o fitoplncton, por exemplo), e sero subseqentemente transferidos
para organismo de nveis trficos superiores na forma de complexos arsenolipdicos.
No peixe BarhllS c()nclwnills, submetido a intoxicao experimental por
cdmio, observou-se diminuio da atividade da acetilcolinesterase nas brnquias e um
aumento de sua atividade nos msculos e crebro, tn vivo. O cdmio tambm inibiu a
atividade das enzimas aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase
(AL T) no tecido heptico 111 vivo. A lactata desidrogenase (LDH) foi
significativamente estimulada no msculo cardaco dos peixes (GILL, TEWARI e
PANDE, 1991, p.SOS).
RIE, LENDAS e CALLARD (2001, p.28) observaram, aps intoxicao
. experimental com cdmio em Chrysemys picla (trtaruga-pintada), que o local de
maior concentrao do metal foi o figado, seguido de rins, pncreas e intestinos. Os
autores tambm comprovaram que h eliminao de cdmio via bile,urina e trato
gastrointestinal devido presena do metal na gua do tanque onde estavam as
tartarugas; clculos baseados no acmulo de cdmio na gua do tanque permitiram
concluir que a meia vida desse metal no organismo das tartarugas era de
aproximadamente 8,5 dias.
Na presente pesquisa, o malOr e o menor valor encontrados para o cobre
foram, respectivamente: 880IIS,78 ~ l g l de sangue (grupo montante) e.
610,33188,80 ~ l g l de sangue (grupo acidente). Esses valores so muito prximos dos
encontrados por AGUIRRE et aI. (1994, p.114) para tartarugas-marinhas Chelonia
mydas: 876,08 ~ l g de cobre por grama de tecido heptico. Isso indica que os
organismos aquticos possuem concentraes significativas desse metal, no s pelo
51
contato direto com resduos industriais liberados em rios e mares, mas tambm pela
transferncia do metal pela cadeia alimentar (DA VENPORT e \VRENCH, 1990,
P.40). No entanto, no se sabe qual o nvel n0ll11al de cobre existente no organismo
desses animais, afinal esse metal pesado um dos nicos que existe 1100malmente no
organismo, fazendo paI1e de alguns sistemas enzimticos (S 1\1 lTH, 1997. p.227).
A mais alta concentrao de mercrio, 110 sangue, foi observada no grupo
acidente (105,31 em Dezembro de 2001) e a maior concentrao de mercrio no
msculo foi observada no gl1lpO referncia (3.175A3 em Setembro de 2001).
BAA TRUP (1991, p.254), pesquisando por microscopia o efeito do mercrio no
organismo de peixes, percebeu que ocone intensa deposio desse metal no axnio
dos nervos olfatrios, o que resulta em uma depresso dos receptOI'es olfatrios. Na
tilpia (Tilapia I1wssambica) observou-se dficit visual aps intoxicao experimental
com mercrio.
Para os cgados pescoo-de-cobra, a maIS alta concentrao mdia de
chumbo no sangue foi observada no grupo referncia em Dezembro de
2001) e a menor concentrao oconeu no grupo acidente (3 1,5 8 em Maio de
2002). Na anlise de chumbo no msculo de H. tec/ifera observou-se uma maior
concentrao em um animal do grupo acidente (13.382, 15 de chumbo por grama de
tecido muscular), sendo esse valor muito superior ao encontrado por DA VENPORT e
WRENCH (1990, pAI) na taIiaruga-marinha Dermochelys coriacea: 0,310,03 de
chumbo por grama de tecido muscular peitoral
Segundo CLARKE e CLARKE (1978, p. 71) aps absoro o chumbo
transportado via sangnea para os ossos, msculos e outros tecidos. Isso pode explicar
. a alta concentrao desse metal no tecido muscular dos animais do presente estudo.
Segundo TURK eCASTEEL (1997, p.829) a intoxicao por chumbo
intenompe a sntese do grupamento heme da hemoglobina; clinicamente isto seria
demonstrado por anemIa microctica hipocrmica. Na maioria dos esfegaos
sangneos corados dos animais dos trs grupos de cgados observou-se
52
policromatofilia, anisocitose e hipocromia. A menor contagem de eritrcitos totais foi
observada no grupo referncia que foi o que teve a maior
dosagem de metal pesado no sangue.
SCHPERCLAUS (1992, p.l 067), investigando a ao do chumbo em trutas
Oncurhyncus mykiss, percebeu que o metal acumula-se nas costelas, vrtebras,
brnquias, fgado, bao e rins. Observou-se tambm anemia nos animais que tinham
altas concentraes do metal.
Em peixes expostos a baixos teores de chumbo na gua, observou-se efeitos
. subletais a 7 e inibio da atividade de enzimas hematopoiticas a 1 O (PAIN,
1995, p.382).
Segundo COSTA (2001, p.119), aps intoxicao experimental com chumbo
em duas concentraes (100 e 300 em peixes de gua doce (Oreochromis
niloticus), observou-se que o metal acumulou-se no sangue apos 96 horas de
exposio, no entanto no houve diferena significativa na concentrao de
hemoglobina nos peixes submetidos intoxicao.
Segundo SCHPERCLAUS (1992, p.1070) as mmores concentraes de
metais pesados que podem ser encontradas na gua, para trutas (Oncorhynchus mykiss)
e carpas (Cyprinus carpio), so: 0,29 II (mercrio), 15 a 25 (cobre), 1 a 2
(cdmio), 140 (zinco) e 4 a 18 (chumbo).
Na literatura no foram encontrados nveis permissveis de metais pesados e
arsnico para quelnios. Comparando com as concentraes mximas permitidas para
trutas e carpas, podemos perceber que os cgados do presente estudo encontravam-se
em habitat com altos teores de metais pesados e arsnico. Esses elementos podem ter
sido absorvidos pelo organismo dos cgados pelo contato direto com o petrleo (grupo
acidente) e por meio da cadeia trfica (grupos acidente, montante e referncia).
Os valores encontrados para hemograma, bioqumica plasmtica e anlise
dos nveis de arsnico e metais pesados no sangue e msculo de Hydromedusa
tectifera podem servir de referncia, contribuindo para uma avaliao clnica segura
53
desses animais. necessrio ressaltar que no se sabe a real procedencia dos animais
do grupo referncia do presente estudo, tomando difcil estabelecer valores basais para
Hydromedusa teclifera.
Os animais dos grupos montante e acidente j se encontravam em condies
bastante precrias no seu habitat natural (Rio Iguau), devido a acentuada poluio
decorrente de resduos industriais liberados no rio. Todos esses fatores permitem
concluir que a espcie alvo desse estudo resistente a condies ambientais
impactantes, mas pouco resistente s condies de cativeiro.
Ento, para a interpretao coneta desses valores, faz-se necessano o
conhecimento das condies de seu habitat natural, condies de cativeiro e impacto
ambiental sobre os animais; s assim esses valores podero contribuir para o
conhecimento e conservao da espcie.
54
5 CONCLUSES
Dentre os parmetros hematolgicos, observou-se diferena para o grupo
acidente na contagem de leuccitos totais e na contagem diferencial de heterfilos e
basfilos.
Dentre os parmetros bioqumicos no se observou diferena entre os trs
grupos de cgados, e a maioria dos valores encontrados para Hydrol11edusa tectifera
so condizentes aos valores encontrados para outras espcies de cgados e tartarugas.
A atividade da colinesterase plasmtica de Hydron:dusa {eClifera mostrou-
se baixa quando comparada a espcies de peixes e mamferos.
Observou-se elevao da concentrao de . metais pesados no sangue e
msculo dos diferentes grupos, sendo o arsnico, o cdmio e o mercrio mais elevados
no sangue do grupo acidente e cdmio, chumbo e cobre mais elevados no msculo dos
animais do grupo acidente.
Hydromedusa tectifera mostrou-se um importante bioindicador de poluio
ambiental, principalmente para o monitoramento do Rio Iguau, afinal foi a nica
espcie. sobrevivente ao acidente. No entanto, apesar da resistncia s condies
adversas do Rio Iguau, mostrou-se uma espcie pouco adaptvel ao cativeiro. Isto
pde ser observado pela alta mortalidade que ocorreu nos trs grupos de cgados
estudados.
As alteraes observadas no grupo acidente (leucocitose e altas
concentraes de arsnico e alguns metais pesados no sangue e msculo) podem estar
relacionadas ao acidente ambiental; j as alteraes que ocorreram nos grupos
referncia e montante podem indicar que esses animais j estavam em ambiente
alterado pela presena de poluentes e/ou resduos industriais, ou tratam-se de valores
normais para a espcie, pois no foram encontrados valores de referncia para
Hydromedusa tectifera.
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