Um catalisador uma substncia que aumenta a taxa de reaco, sem ser em si consumidos pelo processo.

. Uma reaco na qual um catalisador est envolvida denominado catalisada reaco, e o processo chamado de catlise. Ao estudar a catlise, tenha em mente as seguintes caractersticas Um catalisador diminui a energia de Gibbs de ativao, proporcionando um di erent mecanismo para a reaco (Figura 10.1). Este mecanismo aumenta o taxa e aplica-se tanto a frente e as direes inversas da reaco Figura 10.1 Variao de energia de Gibbs para (a) uma reao no catalisada e (b) a reao catalisada. A reaco catalisada deve envolver a formao de, pelo menos, uma intermdia (entre o reagente e o catalisador). O DrG? o mesmo em ambos os casos. Um catalisador forma um intermedirio com o reagente (s) na etapa inicial da mecanismo e liberado na etapa de formao de produto. O catalisador faz no aparecem na reao global. Independentemente do mecanismo e as energias de uma reao, um catalisador No pode um ect a entalpia ou Gibbs energias dos reagentes e produtos. Assim, os catalisadores de aumentar a velocidade de aproximao ao equilbrio, mas no pode alterar a constante de equilbrio termodinmico. Os seres humanos tm usado catalisadores por milhares de anos na preparao de alimentos e vinho fazer. Industrialmente, centenas de bilhes de dlares de produtos qumicos so produzidos anualmente, com o auxlio de catalisadores. Existem trs tipos de catlise: heterogneos, homognea, e enzimtica. Numa reaco catalisada heterogeneamente, os reagentes e o catalisador esto em fases di erent (normalmente gs / slido ou lquido / slido). Exemplos bem conhecidos so a sntese de amnia Haber e Ostwald a fabricao de cido ntrico. A bromao de acetona, catalisada por cidos, um exemplo de catlise homognea, porque os reagentes e o catalisador Hare todos presentes no meio aquoso. Catlise enzima tambm principalmente de natureza homognea. No entanto, uma vez que de origem biolgica, e o mais complexo dos trs tipos de catlise, catlise enzimtica tratada como uma categoria distinta. Seja ou no os seus mecanismos so bem compreendidos, as enzimas tm sido amplamente utilizados na produo de alimentos e bebidas, bem como no fabrico de medicamentos e de outros produtos qumicos Catlise enzimtica Desde 1926, quando o bioqumico norte-americano James Sumner (1887-1955) cristalizou urease (uma enzima que catalisa a clivagem da ureia em amnia e carbono dixido), ele passou a ser conhecido que a maioria das enzimas so protenas. * Uma enzima geralmente contm um ou mais locais activos, em que as reaces ocorrem com substratos. Um stio activo pode compreender apenas alguns resduos de aminocidos, o resto da protena necessria para manter a integridade tridimensional da rede. A especificidade para substratos de enzimas varia de molcula para molcula. Muitas enzimas exibem

especificidade estereoqumica em que catalisam as reaes de uma conformao mas no a outros (Figura 10.2). Por exemplo, as enzimas proteolticas apenas catalisar Figura 10.2 4 4 O diagrama mostra como dois enantimeros ligam di cial a uma enzima. Porque a geometria de um ativo da enzima site est normalmente fixo (isto , pode ter apenas um dos dois arranjos acima), a reaco ocorre apenas para uma dos dois enantimeros. A especificidade necessita de um mnimo de trs pontos de contacto entre o substrato e a enzima a hidrlise de pptidos constitudos por L-aminocidos . Alguns enzimas so cataliticamente inactiva na ausncia de certos ies metlicos . Na dcada de 1890 o qumico alemo Emil Fischer ( 1852-1919 ) props um lock- andkey teoria da especificidade da enzima . De acordo com Fischer , o local activo pode ser assumida ter uma estrutura rgida , semelhante a um bloqueio. Uma molcula de substrato , ento, tem uma estrutura e funciona como uma chave complementar . Embora atraente , em alguns aspectos , thistheory foi modificado para ter em conta a flexibilidade de protenas em soluo . Sabemos agora que a ligao do substrato para o enzima resulta numa distoro do substrato para a conformao do estado de transio . Ao mesmo tempo , a prpria enzima tambm sofre uma mudana de conformao para encaixar o substrato ( Figure10.3 ) . A flexibilidade da protena tambm explica o fenmeno da cooperatividade . Cooperatividade significa a ligao de um substrato a uma enzima com ligao mltipla sites podem alterar o substrato um nidade para a ligao da enzima em seus outros sites. Enzimas , como outros catalisadores , aumentar a taxa de reaco . um entendimento do e cia de enzimas pode ser adquirida atravs da anlise Equao 9.41 : H duas contribuies para a constante de velocidade:? DH e DS z z. A entalpia ativao aproximadamente igual energia de ativao de morte no Arrhenius equao (ver Equao 9.28). Certamente, uma reduo em Ea pela aco de um catalisador iria aumentar a taxa constante. Na verdade, esta geralmente a explicao de como um catalisador funciona, mas nem sempre verdade para a catlise da enzima. Entropia de ativao, DS? Z, tambm pode ser um fator importante na determinao do e cia de enzima catlise. Considerar a reaco bimolecula em que A e B so ambos molculas no lineares. Antes da formao da activada complexo , cada molcula de A ou B possui trs translacional, trs de rotao , e trs graus de liberdade vibracionais . Esses movimentos , tudo contribui para a entropia do molcula. A 25 C, a maior contribuio vem do movimento de translao (cerca de 120 JK ? 1 mole ? 1) , seguido de movimento de rotao (cerca de 80 JK ? 1 mole ? 1). vibracional movimento faz com que a menor contribuio (cerca de 15 JK ? 1 mol ? 1). a translao e entropias de rotao do complexo activado so apenas ligeiramente maiores do que as de um indivduo ou de uma molcula (estes entropias aumentar lentamente com o tamanho )B;

por conseguinte , no uma perda lquida de entropia de cerca de 200 JK ? 1 mole ? 1 quando a activada complexo formado. Esta perda de entropia compensada a uma pequena extenso de novo modos de rotao interna e vibrao no complexo ativado . para unimolecular As reaces , tais como a isomerizao cis -trans de um alceno , no entanto , h muito pouca variao de entropia , pois o complexo activado formado a partir de uma nica espcie molecular. A comparao terica de uma reaco com um unimolecular bimolecular mostra um di cia de tanto quanto 3 ? 1010 na EDS ? Z = R termo , favorecendo a reao unimolecular . Considere-se uma reaco enzimtica catalisada simples, em que um substrato (S ), transformado em um produto ( P ) . A reaco processa-se da seguinte forma: em que A e B so ambos molculas no lineares. Antes da formao da activada complexo , cada molcula de A ou B possui trs translacional, trs de rotao , e trs graus de liberdade vibracionais . Esses movimentos , tudo contribui para a entropia do molcula. A 25 C, a maior contribuio vem do movimento de translao (cerca de 120 JK ? 1 mole ? 1) , seguido de movimento de rotao (cerca de 80 JK ? 1 mole ? 1). vibracional movimento faz com que a menor contribuio (cerca de 15 JK ? 1 mol ? 1). a translao e entropias de rotao do complexo activado so apenas ligeiramente maiores do que as de um indivduo ou de uma molcula (estes entropias aumentar lentamente com o tamanho )B; por conseguinte , no uma perda lquida de entropia de cerca de 200 JK ? 1 mole ? 1 quando a activada complexo formado. Esta perda de entropia compensada a uma pequena extenso de novo modos de rotao interna e vibrao no complexo ativado . para unimolecular As reaces , tais como a isomerizao cis -trans de um alceno , no entanto , h muito pouca variao de entropia , pois o complexo activado formado a partir de uma nica espcie molecular. A comparao terica de uma reaco com um unimolecular bimolecular mostra um di cia de tanto quanto 3 ? 1010 na EDS ? Z = R termo , favorecendo a reao unimolecular . Considere-se uma reaco enzimtica catalisada simples, em que um substrato (S ), transformado em um produto ( P ) . A reaco processa-se da seguinte forma: Neste esquema , a enzima e o substrato tem de primeiro encontro uns aos outros em soluo , para formar o intermedirio enzima -substrato , ES . Esta uma reao reversvel mas quando o [ S] elevado , a formao de ES favorecida . Quando o substrato ligado , foras dentro do stio ativo pode alinhar o substrato e grupos reativos da enzima em orientao adequada , levando ao complexo activado . A reaco tem lugar no entidade nica enzima - substrato intermdio para formar o substrato da enzima activada ESz complexo , tal como numa reaco unimolecular , portanto, a perda de entropia ser muito menor . Em outras palavras, a perda das entropias de translao e rotao ocorreu durante a formao de ES , e no durante a ES ! Passo ESZ . (Isto a perda de entropia largamente compensada pela energia de ligao do substrato . ) Uma vez formado , prossegue Esz energicamente para baixo para o sub-produto intermedirio e enzima , finalmente, para o produto com a regenerao da enzima. Figura 10.4 resume as etapas em um diagrama de coordenadas de energia contra reao Gibbs . 10.2 As equaes da cintica enzimtica

Na cintica de enzimas , habitual para medir a taxa inicial v0 de uma reao minimizar as reaces reversveis e para a inibio de enzimas de produtos. alm disso , ES EP coordenada de reao Gibbs energia ES ES EP Figura 10.4 Lote de energia de Gibbs de reao contra coordenar para uma enzima catalisada reaco. 366 Captulo 10: Cintica da enzima mais , a taxa inicial corresponde a uma concentrao fixa de substrato conhecido . Como o tempo prossegue, a concentrao do substrato vai cair. Figura 10.5 mostra a variao da taxa inicial v0 de uma enzima catalisada reaco com a concentrao de substrato [S ], em que o zero indica o ndice inicial valor. A taxa aumenta rapidamente e de forma linear com [ S] em baixas concentraes de substrato , mas os nveis gradualmente o para um valor limite , em altas concentraes do substrato . Nesta regio, as molculas de enzima so ligados s molculas de substrato , e torna-se a taxa de ordem zero em concentrao do substrato . anlise Matemtica mostra que a relao entre v0 e [S ] pode ser representada por uma equao de uma hiprbole retangular :

370 Captulo 10: Cintica da enzima tante do complexo enzima-substrato , ES ( quanto maior o KM , mais fraca a ligao ) . Como pode ser visto a partir da equao 10,9, no entanto, isto s verdade quando k2fk ? Um modo que KM k ? 1 = K1. Em geral, KM deve ser expressa em termos de trs constantes de velocidade . No entanto , a GC (em unidades de molar idade ) so habitualmente indicados juntamente com outras Parmetros cinticos para reaces catalisadas por enzimas . Para comear , uma quantidade que pode ser medido de forma fcil e direta . Alm disso , a GC depende da temperatura, o natureza do substrato , pH, fora inica , e outras condies de reaco e, portanto, seu valor serve para caracterizar um sistema enzima-substrato especial no mbito especfico condies. Qualquer variao no KM (para a mesma enzima e substrato) muitas vezes uma indicao

da presena de um inibidor ou activador . Informaes teis sobre a evoluo tambm pode ser obtido por comparao dos valores de Km de uma enzima semelhante a partir de di espcies erent . Para a maioria das enzimas, KM situa-se entre 10 ? 1 M e 10 ? 7 M. A taxa mxima , Vmax , tem um significado bem definido, tanto terica como empiricamente. Ela representa a taxa mxima possvel , isto , a taxa qual a concentrao total de enzima est presente na forma de complexo enzima -substrato . segundo a Equao 10.6 , se E? 0 conhecido , o valor de K2 pode ser determinada a partir da valor de Vmax medido por uma das parcelas mencionado anteriormente . Note-se que K2 uma primeira ordem constante de velocidade e possui a unidade de tempo por unidade (s ? min ou 1 ? 1). o chamado nmero de turnover (tambm referida como kcat a constante cataltica) . O nmero de turnover de uma enzima o nmero de molculas de substrato ( ou mole de substrato ), que so convertido no produto por unidade de tempo , quando a enzima est totalmente saturado com o substrato . Para a maioria das enzimas , o nmero de turnover varia entre 1 e 105 s ? Um abrigo condies fisiolgicas . A anidrase carbnica , uma enzima que catalisa a hidratao de dixido de carbono ea desidratao do cido carbnico , Sem a enzima, a constante de velocidade de pseudo-primeira ordem apenas de cerca de 0,03 s? 1. [Note-se que a pureza da enzima ou o nmero de stios activos por molcula desconhecido, no possvel calcular o nmero de turnover. Nesse caso, a actividade do enzima pode ser expressa em unidades de actividade por miligrama de protena (chamada especfico atividade). Uma unidade internacional a quantidade de enzima que produz uma micromole (1 mmol) de produto por minuto.] Como foi dito, pode-se determinar o nmero de turnover, medindo a taxa de abrigo condies de substrato saturao, isto , quando S GKM (ver Equao 10.8)?. em condies fisiolgicas, a proporo S = KM pouco maior do que um;? na verdade, frequentemente muito menor do que um. Quando S? FKM, Equao 10.8 torna-se

Tendo desenvolvido as equaes bsicas da cintica enzimtica, vamos agora considerar algumas reaces catalisadas pela quimiotripsina, uma enzima digestiva. Alm do seu papel importante na digesto, quimotripsina catlise significativo por ser o sistema cujo estudo forneceu a primeira evidncia para a existncia geral de complexos enzima-substrato covalentes. A quimotripsina uma das proteases de serina, uma famlia de enzimas protena de corte

que inclui a tripsina, a elastase, e subtilisina. Tem uma massa molar de 24.800 daltons, 246 resduos de aminocidos, e um stio activo (que contm o resduo de serina) por molcula. A quimotripsina produzido no pncreas dos mamferos, em que assume a forma de um precursor inactivo, quimotripsinognio. Uma vez que este precursor ter entrado no intestino delgado, que activado por uma outra enzima, a tripsina, a quimotripsina para se tornar. Desta forma, evita-se a auto-destruio antes que ele possa digerir os alimentos. A enzima pode ser preparada em forma altamente purificada atravs de cristalizao.

Esta reaco pode ser monitorizada por espectrofotometria de acetato de p-nitrofenilo incolor , enquanto que p- nitrofenolato amarelo brilhante , com uma absoro mxima a 400 nm . Kilby Hartley e descobriram que, em presena de um grande excesso de acetato de pnitrophenyl *, a libertao de p - nitrofenolato foi linear com o tempo. quando eles extrapolada a absorvncia a 400 nm volta para o tempo zero , no entanto , eles descobriram que no converge para zero de absorvncia ( figura 10.10) . medies cinticas mostrou que a reaco prossegue com uma exploso inicial de libertao de p- nitrofenolato , seguido pelo lanamento habitual de ordem zero de p- nitrofenolato do volume de negcios da enzima , quando se atinge o limite de estado estacionrio . A sequncia corresponde a um mol de p - nitrofenolato para cada mole de enzima , sugerindo que a ruptura o resultado de um reaco qumica entre o acetato de p-nitrofenilo e quimotripsina . O estudo demonstrou claramente que a quimotripsina a reaco bifsica ( rendimentos em duas fases ) : a reaco rpida do substrato com a enzima , o que produz uma quantidade estequiomtrica de cido p- nitrofenolato seguido por uma reaco mais lenta , em estado estacionrio que produz o io acetato . O esquema cintico seguinte consistente com Hartley e observaes de Kilby em que X representa um grupo nucleoflico na enzima (Pt) , que o hidroxilo grupo do resduo de serina no stio ativo . O primeiro passo a acilao do rpido X de p -nitrofenol actetate , com o lanamento de um mol equivalente a p- nitrofenolato na exploso . * Em seguida a hidrlise lenta deste intermedirio acil- enzima ES0 , seguido da reacilao rpida da enzima livre por actetate p -nitrofenol , o qual contas para o volume de negcios lento da produo de p- nitrofenolato . A hidrlise catalisada por quimotripsina de acetato de p -nitrofenol e afins compostos um exemplo de hidrlise covalente , um percurso em que parte do substrato, forma uma ligao covalente com a enzima para dar um intermedirio qumico espcies . Num segundo passo , o intermedirio submetido a uma outra reaco para formar o produto e regenerar a enzima livre . A fase inicial da reaco catalisada com acetato de p - nitrofenol, to rpida que um aparelho de fluxo parado deve ser empregue para medir o progresso da reaco . No entanto, a quimotripsina catalisada hidrlise de p-nitrofenilo em p- trimethylacetate nitrofenolato e trimethylacetate tem as mesmas caractersticas como a hidrlise de acetato de p-nitrofenilo , mas muito procede

mais lentamente, porque os grupos metilo constituem uma barreira estrica . Consequentemente, esta reaco pode ser convenientemente estudados por meio de um espectrmetro convencional. Figura 10.11 mostra uma representao grfica da absorvncia do p- nitrofenolato versus tempo com pnitrophenyl trimethylacetate como substrato. Os inibidores so compostos que reduzem a taxa de uma reaco catalisada por enzima. O estudo da inibio da enzima aumentou o nosso conhecimento da especificidade e da natureza dos grupos funcionais do local activo. A actividade de certas enzimas regulada por um mecanismo de retorno de tal modo que um produto final inibe a funo da enzima, numa primeira fase de uma sequncia de reaces (figura 10.12). A via glicoltica um exemplo deste mecanismo de feedback. Em e ect, inibio da enzima controla a quantidade de produto formado. A aco de um inibidor de uma enzima podem ser descritos como reversvel ou irreversvel. Na inibio reversvel, existe um equilbrio entre a enzima eo inibidor. Na inibio irreversvel, a inibio aumenta progressivamente com o tempo. Conclua resultados de inibio, se a concentrao do inibidor irreversvel excede o da enzima. A inibio reversvel Existem trs tipos importantes de inibio reversvel: inibio competitiva, inibio no competitiva e inibio competitiva. Vamos discutir cada tipo por sua vez. Cintica de Michaelis- Menten no pode ser aplicada para a inibio irreversvel. O inibidor forma uma ligao covalente com a molcula de enzima e no pode ser removido. O e ectiveness de um inibidor irreversvel no determinada pelo equilbrio constante mas a taxa na qual a ligao ocorre. Iodoacetamides e maleimidas actuar como inibidores irreversveis de grupos sulfidrilo : Outro exemplo a ao de diisoprop phosphofluoridate ( um gs de nervos ) no da enzima acetilcolinesterase . Quando um nervo faz um contrato clula muscular , d clula um pequeno esguicho de molculas de acetilcolina . A acetilcolina um neurotransmissor chamado porque actua como um mensageiro entre o nervo e o destino final (neste caso , a clula do msculo) . Depois de terem realizado o funcionamento adequado , as molculas de acetilcolina deve ser destrudo , caso contrrio, o excesso resultante desta substncia hyperstimulate glndulas e msculos , produzindo convulses , asfixia e outros sintomas angustiantes. Muitas vtimas de exposio a este gs nervo su er paralisia ou mesmo a morte. O e remoo ective do excesso de acetilcolina por meio de uma reao de hidrlise ( ver Seco 7.5) : molcula de mioglobina menos complexo possui apenas um polipptido de 153 aminocidos. Ele contm um grupo heme e estruturalmente semelhante cadeia b da hemoglobina. Como podemos ver na Figura 10.17, a curva para a mioglobina hiperblica, indicando que se liga no cooperativamente com oxignio. Esta observao consistente com o facto que existe apenas um grupo heme e, portanto, apenas um local de ligao. Por outro lado, a curva para a hemoglobina sigmoidal, indicando que um nidade para oxignio

aumenta com a ligao do oxignio. Devido grande importncia fisiolgica da ligao de oxignio para hemoglobina, precisamos olhar para o processo com mais detalhes. O oxignio um nidade para hemoglobina depende da concentrao das vrias espcies do glbulo vermelho: prtons, dixido de carbono, ons cloreto e 2,3-bisfosfoglicerato (BPG) [uma vez conhecido como 2,3-difosfoglicerato (DPG)] Um aumento da concentrao de qualquer destas espcies desloca a ligao de oxignio curva ( ver figura 10.17 ) para a direita , o que indica uma diminuio do oxignio um nidade . Assim, todos estes ligandos actuar como heterotpica negativo electrnicos ectors . Nos tecidos , onde a presso parcial de dixido de carbono e a concentrao de ies de hth so elevados, o molculas de oxihemoglobina tm uma maior tendncia a dissociar-se em hemoglobina e oxignio, e este ltimo feita por mioglobina para processos metablicos. cerca de dois protes so absorvidos pela molcula de hemoglobina para cada quatro molculas de oxignio liberado. O reverso e ect ocorre no alvolo capilares dos pulmes. A alta concentrao de oxignio nos pulmes leva prtons e dixido de carbono vinculados a deoxihemoglobina . Esta ao recproca , conhecido como Bohr e ect , foi relatada pela primeira vez pelo fisiologista dinamarqus Christian Bohr (1855-1911) em 1904. Figura 10.18a mostra o e ect do pH sobre o oxignio um nidade da hemoglobina. O e ect do BPG na oxignio um nidade para a hemoglobina foi descoberto por os bioqumicos americano Reinhold Benesch (1919-1986) e Ruth Benesch (1925 - ) em 1967. Eles descobriram que BPG liga-se apenas a desoxihemoglobina e no para oxihemoglobina , e que reduz o oxignio BPG um nidade por um factor de cerca de 25 (figura 10.18b ) . O nmero de BPG molculas em clulas vermelhas do sangue aproximadamente o mesmo como o nmero de molculas de hemoglobina (280 milhes), mas a falta de oxignio desencadeia um aumento em BPG , que promove a libertao de oxignio. Curiosamente, quando uma pessoa viaja rapidamente a partir do nvel do mar at uma regio de alta altitude , onde o parcial a presso de oxignio menor , o nvel de BPG em suas clulas vermelhas do sangue aumenta . Esse aumento diminui o oxignio um nidade de hemoglobina e ajuda a manter uma concentrao mais elevada de oxignio livre . O feto humano tem o seu prprio tipo de hemoglobina, chamada hemoglobina F, que consiste de duas cadeias a e duas cadeias g . Esta hemoglobina di ers de hemoglobina adulta A, que consiste de duas cadeias a e duas cadeias de b . Sob condies fisiolgicas normais , a hemoglobina tem um F de oxignio maior do que um nidade hemoglobina A. Esta diferena de um nidade promove a transferncia de oxignio da circulao materna para o feto . Quanto mais elevado de oxignio de um nidade para a hemoglobina F devido ao facto de que esta molcula se liga BPG menos fortemente do que a hemoglobina A. A comparao destes sistemas tambm mostra que BPG se liga

apenas s cadeias b em hemoglobina A , e apenas para as correntes de g em hemoglobina F. Finalmente , a ligao do oxignio para a mioglobina no afetado por qualquer um desses fatores . Ela varia, no entanto, com a temperatura. O oxignio um nidade tanto mioglobina hemoglobina e diminui com o aumento da temperatura . Em 1965, Monod, Wyman e Changeux props uma teoria, chamada de concertada modelo, para explicar cooperatividade * Sua teoria faz as seguintes premissas: (1). As protenas so oligmeros, isto , eles contm duas ou mais subunidades. (2) Cada protena molcula pode existir em qualquer dos dois estados, chamado T (tempo) e R (relaxado), que so em equilbrio. (3) Na ausncia de molculas de substrato, o estado T favorecida. Quando as molculas de substrato so ligados enzima, o equilbrio desloca progressivamente ao estado R, o qual tem uma maior um nidade para o ligando. (4) Todos os locais de ligao em cada estado so equivalentes e que tm uma constante de dissociao idnticos para a ligao de ligandos (KT para o estado T e KR para o estado R). Figura 10.20 mostra o modelo concertada para a ligao do oxignio com a hemoglobina. A constante de equilbrio, L0, para os dois estados na ausncia de oxignio (denotado pelo ndice 0) dado pela Porque o estado T favorecida na ausncia de O2, L0 grande, e s insignificante valores do Estado R esto presentes. Quando o oxignio est presente, o equilbrio desloca gradualmente ao estado R, o qual tem uma afinidade maior para o oxignio. Quando quatro molculas do ligando esto ligados, praticamente todas as molculas de hemoglobina estar no estado R, , que corresponde conformao da oxi-hemoglobina. Ns definimos c como a proporo de as constantes de dissociao; Porque o estado R tem o maior a nidade para O2, c deve ser menor que 1. o dade de um uma subunidade para o ligando depende unicamente se est no estado T ou R e no sobre se os sites em unidades vizinhas so ocupados, assim, KR e KT so o mesmo para todas as fases da saturao. Quando um ligante obrigado, o [T] / [R] Relao mudanas pelo fator c; quando dois ligantes so obrigados, a [T] / [R] mudanas de relao de c2, e assim por diante. Podemos representar a ligao do ligando sucessiva ilustrado na Figura 10.20 com as seguintes equaes (veja o Problema 10.28): O modelo seqencial Um modelo alternativo de cooperatividade sugerido por Koshland , Nemethy , e Filmer * assume que a uma nidade de sites de vagas para um determinado mudanas ligante progressivamente como locais esto ocupados . Referindo-se ligao do oxignio pela hemoglobina , isto significa que, quando uma molcula de oxignio se liga a um local vago em um dos quatro subunidades , a interaco faz com que o local para alterar a sua conformao , que por sua vez um ects as constantes de ligao dos trs locais que ainda esto vagos (Figura 10.22 ) . para esta razo , este modelo chamado de modelo sequencial. Ao contrrio do modelo

concentrado , o modelo seqencial podem ter parmetros , que consiste de dois - e R subunidades T -estatais tais como R2T2 ou R3T . Esta abordagem tambm prev uma curva sigmoidal . A um nidade para Molculas de O2 aumenta da esquerda para a direita na Figura 10.22 . Actualmente, os modelos concertadas e seqenciais so ambos empregados por bioqumicos no estudo de enzimas . Para hemoglobina, o verdadeiro mecanismo parece mais complexo , e ambos os modelos provavelmente devem ser tratados como casos limites . Em alguns casos, o modelo sequencial tem uma vantagem sobre o modelo concertada em que ele pode tambm so responsveis por cooperatividade homotrpica negativo. Em geral, estes dois modelos tm 10,7 Efeitos do pH na cintica enzimtica Uma maneira til de entender o mecanismo da enzima estudar a taxa de catlise enzimtica, reaco como uma funo do pH. As actividades de vrias enzimas variar com o pH de uma maneira que muitas vezes pode ser explicada em termos de dissociao dos cidos e bases. Isto no muito surpreendente porque os stios mais activos funcionar como cidos gerais e bases gerais em catlise . Figura 10.24 mostra um grfico da taxa inicial contra pH para a reaco catalisada pela enzima fumarasa . Como pode ser visto , o grfico apresenta um curva em forma de sino . O valor do pH no mximo da curva chamado o pH ptimo , que corresponde actividade mxima da enzima , acima ou abaixo deste pH as quedas de atividade. A maioria das enzimas que atuam dentro das clulas tm um pH timo bastante prximo da faixa de pH em que as clulas funcionar normalmente. Por exemplo , a pH ptimo de duas enzimas digestivas, e de pepsina, tripsina , ocorre a cerca de pH 2 e pH 8 , respectivamente. As razes no so difceis de entender . A pepsina segregada para o lmen do estmago , onde o pH de cerca de 2. Por outro lado, a tripsina segregada para e funes no ambiente alcalino do intestino delgado , onde o pH de cerca de 8. Para os ensaios gerais da actividade da enzima, ento, a soluo deve ser tamponado o pH ptimo para a catlise. Finalmente, quando se estuda a influncia do pH na atividade da enzima, devemos ter cuidado para evitar mudanas estruturais brutas trazidas sobre pelas grandes alteraes do pH, tais como a desnaturao de protenas. A taxa inicial contra enredo pH mostrado na Figura 10.24 rendimentos cintica muito til e informaes mecanicista sobre catlise enzimtica. No caso mais simples, vamos supor que uma enzima tem dois prtons dissociveis (digamos, desde o cozinheiro e aNH 3 grupos) com o zwitterion como a forma ativa: A concentrao da forma ENH passa por um mximo, como o pH variada, de modo que a taxa tambm passa atravs de um mximo. O complexo enzima-substrato tambm podem existir em trs estados de dissociao (como no caso da enzima livre), com apenas a forma intermediria capaz de dar origem a produtos. A Figura mostra a 10.25a

esquema cintica para essa reao. Em baixas concentraes de substrato, a enzima existe Porque o termo direita uma constante, log v0 independente do pH. O enredo Figura 10.25b mostra essas trs situaes ea determinao de pKa1 e pKa2. Dois pontos so dignos de nota. Em primeiro lugar, o tratamento baseia-se em cima de MichaelisMenten. Na realidade, pode haver mais intermedirios com dissociao adicional constantes, mesmo para uma reao de um substrato. Em segundo lugar, como a Tabela 10.3 mostra, a Os valores de pKa para os resduos de aminocidos no local activo pode ser bastante di erent de os dos correspondentes aminocidos livres em soluo (ver Tabela 8.6). Este desvio em valores de pKa o resultado da ligao de hidrognio, electrosttico, e outros tipos de interaes no stio ativo. Assim, como regra, no depender exclusivamente dos valores de pKa para identificar os aminocidos na catlise enzimtica; frequentemente medies de dependncia do pH so usado em conjunto com di raction estudos espectroscpicos e de raios-X para a construo de um imagem tridimensional do local activo.