Maria Fernanda Martins Ortiz

INFLUNCIA DOS BISFOSFONATOS NA
MOVIMENTAO DENTRIA INDUZIDA,

NA FREQNCIA E NAS DIMENSES DAS
REABSORES RADICULARES ASSOCIADAS

MARIA FERNANDA MARTINS-ORTIZ

Tese de doutorado apresentada Faculdade
de Odontologia de Bauru da Universidade de
So Paulo, como parte dos requisitos para
obteno do ttulo de Doutor em
Odontologia, rea de concentrao em
Patologia Bucal.

(Edio Revisada)

Bauru
2004
INFLUNCIA DOS BISFOSFONATOS NA
MOVIMENTAO DENTRIA INDUZIDA,
NA FREQNCIA E NAS DIMENSES DAS
REABSORES RADICULARES ASSOCIADAS


Tese de doutorado apresentada Faculdade
de Odontologia de Bauru da Universidade de
So Paulo, como parte dos requisitos para
obteno do ttulo de Doutor em
Odontologia, rea de concentrao em
Patologia Bucal.
Orientador: Prof. Dr. Alberto Consolaro

(Edio Revisada)

Bauru
2004
______________________________________________________________________
Ficha Tcnica:
Maria Fernanda Martins-Ortiz: concepo, execuo, texto, formatao e anlise estatstica.
Alberto Consolaro: concepo, texto, orientao, fotomicrografia e reviso final.
Patrcia Zambonato Freitas e Ana Carolina Cuzzol Fracalossi: processamento
de dados, bibliografia e reviso.
Tnia Regina Gro Velloso e Renata Consolaro: auxlio laboratorial
Tiago Pinheiro, Bethnia Pinheiro e Christian Spagnol: auxlio na parte experimental.
Prof. Dr. Dcio Rodrigues Martins e Valdir Joo Afonso: reviso ortogrfica e vernacular.
Maria Cristina Felipe Carrara e Valdir Joo Afonso: apoio tcnico-administrativo.
Ftima Aparecida Silveira : apoio tcnico-laboratorial.
Marcus e Ana Amlia Thame: servios de cpias e encadernao.

Martins-Ortiz, Maria Fernanda

M366i Influncia dos bisfosfonatos na movimentao dentria induzida,
na freqncia e nas dimenses das reabsores radiculares associadas
/ Maria Fernanda Martins-Ortiz -- Bauru, 2004 187p.

Tese. (Doutorado) - - Faculdade de Odontologia de Bauru. USP.
Orientador: Prof. Dr. Alberto Consolaro

Autorizo, exclusivamente para fins acadmicos e cientficos, a reproduo total
ou parcial desta dissertao/tese, por processos fotocopiadores e outros meios
eletrnicos.

Assinatura:
Bauru, 15 de dezembro de 2004.
ii


17 de abril de 1976

Nascimento em So Paulo SP

Filiao

Fernando Ortiz e Heloisa Martins e Ortiz

1994-1998

Graduao em Odontologia pela Universidade
Metodista de So Paulo UMESP

2000-2001

Curso de Mestrado em Odontologia, rea de
concentrao em Ortodontia, Faculdade de
Odontologia de Bauru, Universidade de So
Paulo
2002-2004 Curso de Doutorado em Odontologia, rea de
concentrao em Patologia Bucal, Faculdade de
Odontologia de Bauru, Universidade de So
Paulo

iii
Uma homenagem do fundo do corao aos
Professores Doutores
Dcio Rodrigues Martins e Sebastio Interlandi:

Si lnci o
Antes que chegue o silncio total,
Quero o silncio de asas abertas
Arqueadas na brisa matutina!
Quero o silncio de proas sonolentas
amparando espumas que vo ficar.
Quero o silncio manchado de branco,
das velas pandas de barcos perdidos,
antes que chegue o silncio total...

Quero o silncio de currais vazios no fim da tarde.
Quero o silncio de nuvens indecisas
sem cor e direo.

Quero o silncio das palmeiras
perfiladas em alamedas de sonhos,
Quero o silncio da neve nos ciprestes
que foram verdes.
Quero o silncio do pr do sol
nos planetas distantes.
Quero o silncio da espera
em portos abandonados,

Quero o silncio dos sorrisos,
do choro que emudeceu,
da revolta,
do perdo,
dos sinos de velhas torres,
dos gestos,
das mos,
Sebastio Interlandi

iv
As palavras so absolutamente i nsufi ci entes para meus
senti mentos de grati do a tantas pessoas que fazem di ferena em
mi nha vi da. No entanto, dei xo regi strado meu reconheci mento e
grati do queles que contri bu ram di reta ou i ndi retamente com este
trabalho:
Ao Prof. Dr. Alberto Consolaro, Coordenador do Curso de Ps-Graduao da
Disciplina de Patologia Bucal e Chefe do Departamento de Estomatologia, pela
oportunidade e pelo privilgio de conviver em to maravilhoso ambiente e
despertar em mim o encanto pela pesquisa experimental em animais.
Diretoria da Faculdade de Odontologia de Bauru da Universidade de So
Paulo e Comisso de Ps-Graduao pelo apoio recebido. Pela ateno e
disponibilidade de seus funcionrios: Giane, Margareth, Renata, Cleusa e Eduardo.
Capes, pelo suporte financeiro.
Aos professores da Disciplina de Patologia Bucal: Profs. Drs. Luis Antnio
de Assis Taveira, Denise Tostes Oliveira e Vanessa Soares Lara pela contribuio
minha formao profissional, pelo constante incentivo, disponibilidade e amizade.
Aos funcionrios da Patologia, Sr. Valdir, Cristina e Fatiminha pelo suporte,
disponibilidade, mas principalmente pela dedicao e amizade sincera, tambm
compartilhada por seus familiares.
Meus singelos agradecimentos a todos os professores do Departamento de
Estomatologia que sempre me consideraram, acolheram e ajudaram,
especialmente os Profs. Drs. Eduardo Santana, Ana Lcia lvares Capelozza, Jlio
Gurgel e Lus Eduardo Montenegro Chinellato.
Aos amigos da Disciplina de Ortodontia que continuam a depositar toda
confiana em mim e em meus projetos os Professores Doutores: Guilherme
Janson, Marcos Roberto de Freitas, Arnaldo Pinzan, Fernando Castanha
Henriques e Renato Rodrigues de Almeida. Por extenso s suas esposas e
familiares, especialmente ao Fabrcio, Karina, Celinha e Rafael pela convivncia e
amizade.
v
Ao Biotrio da FOB-USP, de modo especial aos funcionrios Lus e ao
Erasmo, que com extrema gentileza e disponibilidade ofereceram suporte para a
obteno e manuteno dos animais utilizados neste trabalho.
A todos da Biblioteca que diariamente nos auxiliam na busca constante do
conhecimento, especialmente Cybele, Valria, Rita, Vera Boccato, Csar e
Salvador.
Aos funcionrios da Faculdade de Odontologia de Bauru, nas pessoas da Tia
Maria, Andr da Micro, Vera, Srgio, Cristina e Daniel da Orto e Bernadete pela
amizade e convivncia carinhosa.
Ao Marcus e Ana Amlia Thame pela incrvel amabilidade, presteza e
excelncia na impresso dos exemplares deste trabalho.
Dra. Telma Regina da Cunha Gobbi Francischone pelo fornecimento do
alendronato utilizado neste trabalho.
Ao meu querido av Dcio Rodrigues Martins que com toda dedicao,
carinho e inesgotvel pacincia revisou meus textos interminveis.
Tereza, Laurindo, Bruno e Raquel Furquim pela amizade inconteste e
incentivo. Tambm pela incrvel oportunidade de trabalhar com uma equipe to
competente como a da Dental Press International.
Agradeo a todos os membros da equipe Dental Press, especialmente ao:
Adilson Ramos, Andra e Ronis Siqueira, Carlos Venncio, Jnior Bianchi, Rosely
Suguino, principalmente, recentemente pela pacincia e compreenso nos
momentos de ausncia por motivo desta tese.
Aos amigos Snia, Simone, Luciana, Csar, Walter e Wagner, pela
considerao e amizade demonstradas no dia-a-dia.
Tnia Gro Velloso, nem uma irm seria to dedicada quanto se
demonstrou durante esses anos que convivemos juntas. Tambm tenho muito
orgulho de ter amigos como voc e o Marcelo que deixaram a marca da
vi
incondicionalidade gravada em nossos coraes. A alegria do Henrique e do
Leonardo tambm fazem muita falta.
Patrcia Z. Freitas pela inestimvel ajuda no captulo de referncias, pela
amizade, disponibilidade e cumplicidade constante.
Leda e Letcia Francischone, Erick e Juliana Pedreira pela doce e sincera
amizade.
Ana Carolina, Christian e Tiago Pinheiro por no medirem esforos para
me ajudar na realizao de todas as fases deste trabalho.
Aos colegas de ps-graduao do Doutorado e Mestrado: Joo Adolfo, Aline,
Maria Renata, Rosrio, Marta, Patrcia, Suzana, Leda, Erick, Rosa, Ldia,
Valdomiro, Renata Consolaro, Renata Falchete, Luciana, Renato, Bethnia, Tiago,
Lidiane, Camila, pela convivncia alegre e sempre amistosa.
Aos colegas de ps-graduao das demais Disciplinas e Departamentos de
FOB-USP, pela amizade e incentivo no dia-a-dia. De modo especial Thania
Rodrigues e ao Jos Eduardo Prado e Souza, Kelly Chiqueto, Srgio Stelita e Lvia
Freitas, e pela considerao dos alunos de mestrado da Disciplina de Endodontia.
Renata Consolaro, pela generosa amizade e compreenso. Por extenso,
famlia Consolaro que sempre me acolheram com o maior carinho: Slvio, Sr. Luiz
e Augusta, Tio Z, Helio e Helena, Helen e Helder, Gervsio e Valdira, Etiene e
Gustavo, e Luis Augusto.
Sandra e Lcia, pela sinceridade da amizade, por me fazerem sentir to
valorizada, me fazerem sentir verdadeira como uma irm caula. Por extenso :
Carla, Rosa, Alessandra, Renata, Mariana, Ralph, Rafael, Carol, Sr. Nick e
Mariana, Dna. Orminda e Patrcia, pela acolhida em suas vidas.
Aos meus queridos pacientes, pela oportunidade de servi-los e com eles
aprender.
Aos queridos alunos, que muito me valorizam e incentivam na convivncia e
so verdadeira fonte de inspirao para o meu trabalho como professora.
vii
Ao casal Carlos Eduardo e Maura Bacchi, pela amizade singela e
impressionante disponibilidade dedicadas ao Alberto e a mim.
famlia Esberard, famlia Gro Veloso Damato Oliveira, famlia
Francischone, famlia Furquim, estes nossos amigos do peito que na verdade so
nossa famlia por opo.
Paty, Brasil, Vanessa, Sheila, Cris e Paula pelo carinho mesmo que
distante e pela perseverana no cuidado de nossa amizade.
Sonia, Marina, Deusa e Nen que alm de cuidarem de nossa famlia
tambm nos concedem generosa amizade e uma convivncia alegre.
famlia Noble e Betts, por me adotarem como filha no exterior. Ao Dr.
Sebastio Interlandi, a quem tenho como av e sua delicada esposa Solange.
Pam e Zeev Davidovitch, por acolherem a mim e ao Alberto como irmos.
Liz, Kid, Giuseppe e ao Kevin, animaizinhos que pelo companheirismo,
carinho incondicional e astral enchem os nossos dias de graa e sabor.
Aos animais utilizados neste trabalho, por darem suas vidas em benefcio da
espcie humana. Que estas mortes em holocausto cincia no tenham sido em
vo.

viii
Agradeo a Deus pelo dom da vida, pela sade, pelas oportunidades, pela famlia e
pelos amigos que me concedeu.
Senhor, ajuda-me a ser humilde e a viver de acordo com os ensinamentos cristos.
Ajuda-me a amar o meu prximo, no apenas nos momentos simples, mas principalmente
quando for mais difcil, reconciliando-me diariamente com todas as coisas do universo.
Tudo que sou reflexo de meus pais, ancestrais e familiares...
Jamais sero suficientes meus agradecimentos a Deus por esta fantstica famlia
que me destinou, por isso agradeo- Lhe, profundamente:
Por meus pais, Heloisa, e Fernando, antes de mais nada, meus eternos amigos, que
depositaram em mim seus sonhos e confiana, dando-me exemplos de vida e de carter.
Pelo constante, terno e paciente amor dedicado.
Por meus queridssimos irmos, Lus Eduardo e Maria Carolina, de quem muito me
orgulho ser irm. Somos trs irmos que se amam muito e torcem intensamente pela
felicidade um do outro. Contem sempre comigo!!!
Por cada momento da minha vida na companhia dos avs do corao, a quem amo
de paixo: Dcio, Thereza Maria, Maciel e Isa, cmplices e companheiros; pela alegria e
carinho.
Por minhas carinhosas tias Elaine e Ins, com quem muito conto e por quem tenho
muita admirao.
Por meus Tios, Tias, Primos e demais parentes pela amizade, alegria e torcida. De
modo especial aos queridos (as): Maria Rita, tio Stlvio e tia Micy; tia Clo e tio Didi; tia
Bila e tio Wilson,
Pelo privilgio de conhecer e de mesmo conviver com sete dos meus oito bisavs.
Pelo legado que me deixaram e de modo especial por minha Bisav Dona Netinha, cuja
companhia perdemos recentemente. Por todos os momentos alegres desfrutados e pela
oportunidade de aprender com sua travessa sabedoria!

ix
Dedico este trabalho ao meu querido Alberto
Consolaro, encantador de alunos:

Mestre inspirador dos coraes dos pretensos professores e
pesquisadores. Capaz de arrebanhar centenas de alunos e rend-los por
horas a fio.
Despertando a emoo, a sensibilidade, a reflexo e a paixo pelo
saber. Nutrindo a curiosidade de cada um de seus pequenos alunos com a
dedicao, persistncia e meticulosidade de quem cultiva um jardim de flores
raras.
Um cavaleiro dos tempos modernos com seus ideais nobres. Sem
deixar que o brilho de sua armadura ofusque a personalidade sensvel e
romntica.
Crtico e auto-crtico. Firme e ao mesmo tempo terno e desprendido.
Exigente, mas que sabe oferecer desinteressadamente.
Coerente, intrigante, exigente, inspirador, inquietante, incansvel,
invejvel...
Provavelmente uma aluna como eu jamais mereceria ser sua orientada,
ou permanecer sua orientada, se no fosse por sua generosidade e
capacidade de compreenso para com as limitaes humanas.
Que este trabalho seja uma lembrana no da melhor, nem da pior
ps-graduanda, apenas da teimosa Maria Fernanda que muito o admira,
respeita e ama...
x

sempre bom pisar forte, resoluto, convicto, porque seus
passos estaro orientando algum, encantando algum. Seus passos
o conduzem para onde? Pra direita? Pra esquerda? Voc vai visitar
algum, ajudar ou fazer mal ao prximo? bom que saiba para
onde caminha voc. H sempre algum seguindo seus passos.
A moa bonita, o senhor circunspeto, o jovem, o velhinho, eu
e voc, todos ns, devemos pisar firme, forte e na direo certa,
porque em nossos passos caminha algum. Para onde voc for,
mesmo sem o saber, estar conduzindo muita gente. V em frente,
algum segue seu exemplo.
H muita gente sem amor, sem esperana olhando para voc e
seguindo seus passos.

Hlio de Aguiar, o apstolo do rdio
poeta bauruense

Sumrio

Resumo.......................................................................................................... xii

1 Introduo.................................................................................................. 1
2 Reviso da Literatura................................................................................. 6
3 Proposio................................................................................................. 73
4 Material e Mtodos.................................................................................... 75
5 Resultados.................................................................................................. 103
6 Discusso.................................................................................................. 135
7 Concluses................................................................................................. 176
Referncias Bibliogrficas............................................................................. 178
Abstract.......................................................................................................... 191
Anexos

xii
Resumo

Os bisfosfonatos constituem reconhecidamente potentes inibidores da reabsoro ssea.
O presente estudo objetivou testar a hiptese de que a incorporao dos bisfosfonatos dentina
e ao cemento, durante a odontognese e a rizognese, aumentaria a resistncia s reabsores
dentrias. Administrou-se o alendronato na dosagem de 1mgP/Kg, duas vezes por semana, por
via oral, em 89 ratos da linhagem Wistar (Rattus norvegicus, albinus), divididos em quatro
grupos submetidos movimentao dentria induzida por 0, 3, 5 e 7 dias, previamente morte
dos animais. O aparelho ortodntico consistiu em uma mola fechada ancorada aos incisivos
superiores, movimentando mesialmente o primeiro molar superior esquerdo. Submeteram-se
cada um dos grupos a diferentes protocolos de medicao antes da instalao do dispositivo
ortodntico, que assim constituram-se: Grupo Controle, no recebeu o bisfosfonato; Grupo
Experimental, submetido medicao com alendronato desde a concepo e fase intrauterina
at o final do experimento, aos trs meses de vida; Grupo Ensaio 1, submetido ao alendronato
desde a concepo e fase intrauterina at o segundo ms de vida, quando se interrompeu a
medicao, um ms previamente data da morte dos animais deste grupo e Grupo Ensaio 2,
submetido ao alendronato no quarto ms de vida, j na idade adulta, por um perodo de trs
meses e meio. Realizou-se a anlise microscpica por meio de cortes longitudinais dos
molares destes murinos, sendo que na regio cervical da raiz mesial observa-se os fenmenos
produzidos por uma fora suave ou moderada e na regio cervical da raiz distal, os fenmenos
produzidos por fora intensa. Esta anlise microscpica utilizando escores, os resultados dos
testes estatsticos Quiquadrado, Kruskal-Wallis, Dunn e ndice Kappa nos permitiram as
seguintes constataes: a) os nveis de reabsores radiculares apresentaram-se
significantemente reduzidos; b) no se observaram influncias destes medicamentos no tecido
sseo, nos fenmenos celulares, teciduais ou no ligamento periodontal durante o movimento
ortodntico. Deste modo pudemos concluir que: 1. quando da administrao dos bisfosfonatos,
do tipo alendronato, desde o incio da odontognese, ou mais especificamente durante a
rizognese, a incorporao deste medicamento dentina e ao cemento pode aumentar a
resistncia radicular s reabsores radiculares associadas a movimentao dentria induzida e,
por extenso, s promovidas pelos traumatismos dentrios; 2. a medicao prolongada e
supervisionada com bisfosfonatos, do tipo alendronato, no altera a movimentao dentria
induzida, mesmo quando da sua incorporao no tecido sseo, pois no modifica as
propriedades mecnicas do osso.

INTRODUO

Introduo

2

1 Introduo

A conseqncia mais indesejvel da movimentao dentria induzida a
reabsoro radicular. Na populao ocidental, as reabsores radiculares
apresentam uma prevalncia de cinco a dez por cento em pessoas que nunca se
submeteram a qualquer tratamento ortodntico
122,173
e apresentam uma variada
etiopatogenia. Entre todas as causas de reabsores dentrias a movimentao
induzida representa o fator etiolgico mais freqente.
As reabsores radiculares induzidas na movimentao ortodntica
afetam principalmente a regio apical, diminuindo o comprimento dentrio e
reduzindo o suporte periodontal, especialmente quando afeta mais de 3mm. O
tero apical representa a parte radicular com menor superfcie periodontal, por
isso sua reduo implica em uma pequena perda de insero radicular.
Alm das reabsores radiculares induzidas pela movimentao dentria,
outros tipos de reabsores se destacam, como as associadas aos traumatismos
dentrios, bem como as reabsores internas e cervicais externas. Nos casos das
periapicopatias crnicas, as reabsores apicais promovem anfractuosidades nas
quais se alojam bactrias isoladas, em grupos ou na forma de biofilmes
microbianos, dificultando o reparo completo da regio periapical, mesmo aps
um adequado tratamento endodntico.
Na remodelao ssea, promove-se um a trs milhes de pontos de
reabsoro com unidades osteorremodeladoras (BMUs) ativas. Nestes pontos,
alternam-se estes momentos de reabsoro com outros de neoformao ssea,
promovendo a renovao do esqueleto em um espao de tempo que varia de
dois a dez anos, conforme o local do corpo, faixa etria dos pacientes e outros
Introduo

3
fatores condicionantes como o estilo de vida, gnero e outros. Nos estados
caracterizados pela osteopenia e sua conseqente osteoporose, h uma hiper-
atividade das unidades osteorremodeladoras, em especial dos clastos - que atuam
diretamente sobre a superfcie ssea - retirando os ons minerais pela liberao
de cidos na sua interface, via borda ativa. Ao mesmo tempo em que
desmineralizam, os clastos degradam a parte ssea orgnica, ou matriz ssea,
pela liberao de enzimas proteolticas, especialmente a colagenase. O produto
desta desmontagem ssea, como ons, peptdeos, aminocidos e outros
componentes, so transportados para o tecido perifrico pelos clastos atravs de
vesculas citoplasmticas que se abrem na sua membrana celular voltada para o
oposto de sua interface ssea. Este processo de transporte citoplasmtico dos
componentes sseos nos clastos conhecido como transcitose.
A remodelao ssea no envolve os dentes, apesar de estar ocorrendo a
apenas 250m de distncia da superfcie cementria, aproximadamente. Na
superfcie radicular, os cementoblastos no apresentam receptores para os
mediadores qumicos promotores do turnover sseo como o paratormnio, a
calcitonina e os estrgenos de ao sistmica, ou para as citocinas, fatores de
crescimento e produtos derivados do cido araquidnico de efeito local e que
atuam nas reas sseas associadas ao estresse celular e inflamao
25
. Os ons
minerais e outros componentes dos tecidos dentrios duros, uma vez
incorporados na estrutura dentria no mais so removidos naturalmente; os
dentes, ao contrrio dos ossos, no atuam como reservatrio mineral ou protico
no organismo humano. A remoo dos componentes ocorre apenas em
condies patolgicas, nos dentes permanentes, no processo de reabsoro
dentria. Durante os estados osteopnicos e osteoporticos no h
envolvimento das superfcies radiculares, pois esto protegidas pela camada
cementoblstica.
Introduo

4
Desde os anos 90, os bisfosfonatos so utilizados como medicamentos
controladores da osteopenia, na preveno da osteoporose humana. Os
bisfosfonatos representam uma nova classe de drogas que agem sobre o
metabolismo sseo. Ao serem incorporados na matriz ssea em mineralizao
juntamente com os ons minerais, como por exemplo, o clcio, as molculas de
bisfosfonatos tomam parte na estrutura ssea que ser, em futuro breve,
reabsorvida durante a remodelao natural do esqueleto. Mas, as molculas de
bisfosfonatos ao serem transportadas via transcitose, pelos clastos, induzem
eventos bioqumicos capazes de iniciar a sua apoptose
20,36,57,62,66,96,121,125,131
. Esta
forma de morte natural na qual as clulas so mortas por fragmentao estrutural
sem derramamento enzimtico ou molecular que induza inflamao, reduz o
ndice de reabsoro ssea e sua velocidade de remodelao. Desta forma os
bisfosfonatos contribuem no controle de um turnover sseo acelerado,
prevenindo a osteopenia e a osteoporose. Outros mecanismos de ao dos
bisfosfonatos tambm j foram estudados e comprovados
74,58,107,124,125,127,128,
131,145,154
.
A efetividade e o largo uso dos bisfosfonatos na preveno e tratamento
de estados osteopnicos e na preveno da osteoporose induziram-nos a
formular a seguinte hiptese:
Se os bisfosfonatos controlam a velocidade da remodelao ssea por reduzir o nmero
de clastos induzindo-os apoptose ao reabsorverem o tecido sseo, o mesmo pode acontecer nos
tecidos dentrios se, durante a odontognese e especialmente na rizognese, forem administradas
doses regulares de bisfosfonatos.
A provvel incorporao de molculas de bisfosfonatos na estrutura dentria promoveria
a apoptose dos clastos ante uma causa qualquer de reabsoro radicular que removesse os
cementoblastos protetores da superfcie radicular, de forma destacada, o que pode ocorrer durante
a movimentao dentria induzida e nos traumatismos.
Introduo

5
Dentes com molculas de bisfosfonatos incorporadas em sua estrutura seriam mais
resistentes reabsoro dentria, inclusive durante o tratamento ortodntico. Esta possibilidade
permitiria uma prtica ortodntica mais segura e abriria novas perspectivas na preveno e na
prevalncia das reabsores dentrias de um modo geral.

REVISO DA LITERATURA

Reviso da Literatura

7

2 Reviso e anlise crtica da literatura

A biopatologia da movimentao dentria induzida e das reabsores
dentrias associadas apresentam seus aspectos morfolgicos microscpicos
repetidamente descritos em vrios textos de artigos, teses e livros

24,25,26,27,93,100,108,109,119,120,154,155
. Os fenmenos celulares e teciduais e suas variveis
decorrentes de condicionantes aplicadas clnica e experimentalmente esto
minuciosa e classicamente descritos nestes textos. Como exemplo destas
variveis condicionantes incluem-se o perodo analisado, o grau e a intensidade
de fora, o tipo de movimento, os dentes envolvidos, a morfologia radicular e da
crista ssea, a influncia de medicamentos e a de fatores sistmicos.
O advento dos bisfosfonatos como medicamentos utilizados nos estados
osteopnicos e osteoporticos promoveu uma avalancha de publicaes,
incluindo-se revises extensas e minuciosas. Cada detalhe deste grupo de drogas
foi devidamente explorado como no livro de BIJVOET et al
12
.
Nesta reviso da literatura enfatiza-se as investigaes sobre a influncia
dos bisfosfonatos na movimentao dentria induzida e suas conseqentes
reabsores. Inicialmente, expe-se uma sntese de sua histria, origem e
mecanismo de ao, seguida de uma anlise crtica quando pertinente.

2.1 Apresentao dos bisfosfonatos
Os pirofosfatos (P-O-P)
so reguladores fisiolgicos da calcificao e

pirofosfato: qualquer sal ou ster do cido pirofosfrico, um elemento qumico tambm utilizado na
fabricao de fsforo de segurana, bombas incendirias e pirotecnia. Sua composio bsica apresenta
duas molculas de fsforo e uma de oxignio com ligaes simples entre si.

8
reabsoro ssea, naturalmente presentes no soro e na urina. A precipitao de
fosfato de clcio no plasma e na urina pode ser atribuda em parte atividade
inibidora dos pirofosfatos inorgnicos. Os pirofosfatos impedem a cristalizao
do fosfato de clcio nas solues e sua dissoluo in vitro
38,40,87
. In vivo inibem as
calcificaes ectpicas nas artrias, pele e em outros rgos. Esses efeitos so
observados quando administrados na forma parenteral sem influenciar nas
reabsores sseas imediatas. Desta forma passou a ser empregado como
regulador de calcificaes e de descalcificaes in vivo. Os efeitos teraputicos,
porm, no se mostravam satisfatrios devido sua inatividade quando
administradas via bucal e rpida hidrlise, quando aplicadas via parenteral.
O pirofosfato e os polifosfatos so incapazes de inibir a calcificao
ectpica in vivo quando administrados oralmente, devido hidrlise no trato
gastrintestinal. As propriedades do pirofosfato indicavam que poderia ser
explorado em doenas de calcificao ectpica ou de aumento da reabsoro
ssea. No entanto, a incapacidade de ao do pirofosfato quando administrado
via bucal, inibindo a reabsoro ssea, propiciou o desenvolvimento de anlogos
com aes similares, porm mais resistentes ao enzimtica, como o caso
dos bisfosfonatos. A ao dos bisfosfonatos deve-se sua semelhana estrutural
com este grupo de compostos
21,154
.
Os bisfosfonatos so anlogos no-hidrolisveis de pirofosfato, porque
contm ligaes estveis P-C-P em vez de ligaes lbeis P-O-P e constituem
compostos com as propriedades antidesmineralizantes do pirofosfato, mas
resistentes hidrlise
1,21,36,38,40,47,52,64,87,96,121,141
.
Estes compostos so conhecidos pelos qumicos desde o sculo XIX e sua
sntese pioneira ocorreu em 1865 na Alemanha, por Nenschutkin, como
descreveram RODAN; FLEISH
127
, em 1996 e FLEISH
39
, em 1998. As primeiras
utilizaes dos pirofosfatos e bisfosfonatos foram de natureza industrial como
agentes anticorrosivos, emolientes e preventivos da deposio de carbonato de
clcio em encanamentos
53,92
. Depois comprovou-se que eram efetivos no

9
controle da formao e dissoluo in vitro do fosfato de clcio, bem como na
mineralizao e reabsoro ssea in vivo, iniciando ento sua utilizao
terapeuticamente em inmeras doenas
39,127
.
A constatao de que os bisfosfonatos poderiam inibir a reabsoro ssea
foi evidenciada aps tentativas para identificar agentes que fossem semelhantes
ao pirofosfato resistentes hidrlise enzimtica com preservao de sua
estrutura molecular
38,40,87,127
e que pudessem tambm regular a calcificao ssea,
sendo assim, potencialmente teis para a preveno de calcificao
heterotpica
21
.
Os bisfosfonatos so utilizados como adesivos, antioxidantes,
catalisadores, inibidores de corroso, lubrificantes, aditivos para fluidos
hidrulicos e combustveis e outras finalidades. Nos ltimos 40 anos, os estudos
sobre os pirofosfatos inorgnicos
38,40,87,127
promoveram sua utilizao na rea da
sade humana.
No incio da dcada de 60, o suo FLEISH e seus colegas incrementaram
a utilizao teraputica dos bisfosfonatos
38,40,41,42,43,44,45,131
. Aps mais de trs
dcadas de pesquisas e desenvolvimento, os bisfosfonatos tornaram-se
indispensveis no tratamento de doenas sseas, tanto benignas quanto
malignas
21,154
. Essas drogas so potentes inibidores da reabsoro ssea mediada
por clastos e so efetivas na reduo das concentraes de clcio no soro de
pacientes com hipercalcemia maligna. Alm disso, constituem uma nova
modalidade de tratamento para metstases sseas, reduzindo a quantidade e o
ndice de complicaes esquelticas no mieloma mltiplo e no cncer de mama
avanado, bem como aliviam a dor ssea causada por metstases de vrios
tumores slidos, com conseqente aumento da qualidade de vida do
paciente
21,154
.


10

Os dois grupos fosfonatos, em conjunto com o grupo hidroxila da cadeia
lateral R
1
, conferem uma alta afinidade para o osso e atuam como um gancho
nos ossos, permitindo um direcionamento eficiente e rpido dos bisfosfonatos
para a superfcie do osso. Uma vez incorporado ao osso, a estrutura e a
conformao tridimensional da cadeia lateral R
2
, bem como os grupos
fosfonatos, determinam a atividade biolgica da molcula e influenciam na
capacidade dos frmacos de interagir com alvos especficos
21,69
.
A estrutura bsica P-C-P permite um grande nmero de variaes
moleculares despontando possibilidades para numerosos compostos. Diversos
frmacos da classe dos bisfosfonatos foram sintetizados, nos quais os grupos
substituintes R
1
e R
2
variaram, sistematicamente com propsitos definidos
21,69
:
aumentando a afinidade ssea;
melhorando o perfil teraputico: potncia, seletividade e toxicidade;
adquirindo nova atividade farmacolgica e
alterando a biodisponibilidade da molcula.
O primeiro bisfosfonato utilizado em uma doena humana foi o
etidronato, sintetizado em 1898
39,127
. Cada bisfosfonato apresenta uma estrutura
fisico-qumica peculiar e funo biolgica especfica. Para cada tipo de composto
cido bisfosfnico cido pirofosfrico

11
de bisfosfonato, os resultados de avaliao experimental no podem ser
extrapolados
38,40
. Entre os bisfosfonatos destacam-se os
38,40,87
:
cido etidrnico (HEBP), ou etidronato
cido diclorometilenobisfosfnico (Cl
2
MDP) ou clodronato;
cido Cloro-4-feniltiometilideno bisfosfnico, cido tiludrnico ou
tiludronato;
cido 3-amino-1-hidroxipropano-1,1-bisfosfnico (AHPrBP) ou
pamidronato;
cido 2-(3 piridini)-1-hidroxietilideno bisfosfnico ou risedronato
cido 4-amino-1-hidroxibutilideno-1,1-bisfosfnico (AHBuBP) ou
alendronato;
cido1 -bisfosfnico 2-imidazol-l-yl-hidroxietano- 1 ou zoledronato
cido ibandrnico ou ibandronato;
cido olpadrnico ou olpadronato;
cido 6-amino-1-hidroxihexilideno-1,1-bisfosfnico (AHHexBP)
cido 1-hidroxi-3(metilpentilamino)-propilideno bisfosfnico
(BM21.0955)
E outros de menor importncia.

A pgina a seguir apresenta a configurao bioqumica de alguns dos
bisfosfonatos citados para facilitar a compreenso da variabilidade de
combinaes possveis para o cido bisfosfnico:


12

cido tiludrnico
cido etidrnico
cido clodrnico
cido zolendrnico cido ibandnico
cido olpandrnico
cido alendrnico cido risedrnico cido pamidrnico

13
Os bisfosfonatos exibem uma grande afinidade com ons metlicos como
clcio, magnsio e ferro. Na presena do clcio o hidroxibisfosfonato forma
complexos polinucleares no meio alcalino em pH fisiolgico
38-40
. Os efeitos dos
bisfosfonatos esto relacionados sua grande afinidade com a fase slida do
fosfato de clcio, aos quais se ligam quimicamente
38,40,87
. Os principais efeitos
fsico-qumicos dos bisfosfonatos
35,87,121
so:
inibem a precipitao dos fosfatos de clcio das solues, mesmo quando
em baixas concentraes,
bloqueiam a transformao do fosfato de clcio amorfo em
hidroxiapatita
4,65,121
,
impedem a agregao dos cristais de hidroxiapatita em grandes
ncleos
52,117,164

inibem a formao e agregao dos cristais de oxalato de clcio e so
responsveis pela baixa dissoluo de hidroxiapatita
35,96
.
Os bisfosfonatos se ligam fortemente a hidroxiapatita da superfcie ssea
e atuam preferencialmente em stios de grande formao e reabsoro ssea
154
.
Estes frmacos inibem as reabsores sseas in vitro e in vivo, mesmo quando
decorrentes de causas e agentes diferentes
35,38,40,141
.
Os mecanismos de ao pelos quais impedem as reabsores sseas, ainda
no esto completamente identificados
20,36,66,87,125,126,152
. Alguns de seus efeitos
so controvertidos, pois se revelam antagnicos conforme o composto ou sua
concentrao. Entre os efeitos observados destacam-se a reduo da produo
de cido ltico e a inibio de certas enzimas lisossomais
28,129,166
, da sntese de
prostaglandinas
35
e da multiplicao dos macrfagos
20, 38,40,96,121
e da funo dos
clastos. Algumas evidncias indicam uma ao citotxica direta sobre os
clastos
20,36,57,66,96,121
ou induzindo-os apoptose
62,125,131
.
Apesar do exaustivo estudo nos ltimos 25 anos desta classe de inibidores
de reabsoro ssea, o modo de ao dos bisfosfonatos ainda no parece claro; o

14
que se deve provavelmente diferena entre os diversos compostos de
bisfosfonatos. Muitos agentes teraputicos usados na preveno e tratamento da
osteoporose so referidos como inibidores da reabsoro ssea, mas este termo
muito vago, pois no distingue a ocorrncia de inibio no recrutamento de
novos clastos ou na funo dos clastos pr-existentes. Estudos
histomorfomtricos indicam que por longos perodos a administrao de
bisfosfonatos reduz o ndice de novos ciclos de remodelao ssea, ou da
freqncia da ativao da remodelao ssea, uma expresso da reduo do
recrutamento de clastos por meio de marcaes bioqumicas. Entretanto in vitro
demonstrou-se um poderoso efeito inibidor dos bisfosfonatos na funo dos
clastos
20,39,136
.
Os efeitos dos bisfosfonatos ocorrem em trs nveis: tecidual, celular e
molecular
124,127
. No nvel tecidual promove a reduo do turnover sseo, como
se demonstrou com a utilizao de marcadores bioqumicos. Os bisfosfonatos
reduzem a extenso das regies em reabsoro e a profundidade nas reas
erodidas, conforme demonstraram BOYCE et al.
15
, 1995; OTT et al.
105
, 1993 e
STORM et al.
143
, 1993. No nvel celular os bisfosfonatos reduzem a atividade
osteoclstica, pois: a) inibe o recrutamento destas clulas para a superfcie ssea,
b) inibe a atividade celular, c) reduz o tempo de vida celular pela induo a
apoptose, d) e altera a troca mineral na forma fisico-qumica.
A apoptose, ou morte celular programada, foi descrita nos clastos h
muitos anos e talvez seja a via normal de morte dessas clulas
124,125
. O tempo de
vida dos clastos, estimado a partir de estudos microscpicos, de duas a quatro
semanas in vivo e de no mximo duas semanas in vitro. J foi descrito que os
bisfosfonatos aumentam a apoptose de clastos, tanto in vivo quanto in
vitro
107,124,125,127,154

Durante a reabsoro ssea os bisfosfonatos incorporados ao osso so
liberados na lacuna de Howship e internalizados nos clastos por endocitose

15
afetando-os diretamente. Aps este fenmeno os clastos perdem sua borda ativa
enrugada e inicia-se a quebra do seu citoesqueleto, desmobilizando a atividade
celular reabsortiva
131
.
Em cultura de clulas PLOTKIN et al.
112
, em 1999, constataram que os
bisfosfonatos inibem ou controlam a reabsoro atuando sobre os osteoblastos e
ostecitos, inibindo a apoptose destas clulas (Figura 1). Os clastos derivam-se
de precursores hematopoiticos da linhagem moncito/macrfago e constituem
as clulas primrias da reabsoro ssea, bem como pivs da remodelao ssea
normal e patolgica em ao conjunta com os osteoblastos
58,74,128,145
.

Figura 1 - Mecanismo pelo qual os bisfosfonatos afetam a capacidade reabsortiva dos clastos,
induzido-os apoptose. (Modificado de RUSSEL; ROGERS, 1999
131
).

A ao sobre os clastos tambm pode advir: da inibio da adeso dos
clastos s superfcies sseas
129
. Alm dos efeitos diretos nos clastos, reporta-se
que os bisfosfonatos inibem a reabsoro ssea indiretamente pelos osteoblastos
alterando a funo dos clastos
132
, j que estas clulas gerenciam as unidades
osteorremodeladoras, comandando o recrutamento de clastos para as superfcies
sseas
39
. Diversos estudos
60,132,178
tm atribudo uma ao especfica dos

Incorporao de bisfosfonatos pelos
clastos durante a reabsoro ssea
Perda da funo reabsortiva
Apoptose
Osso
Osso
Osso

16
bisfosfonatos sobre os osteoblastos, especialmente do clodronato, que em doses
relativamente menores que as redutoras ou preventivas da reabsoro ssea
podem apresentar um efeito na diferenciao de osteoblastos, estimulando a
neoformao ssea
60
.
Os bisfosfonatos promoveriam a secreo de fatores osteoblsticos que
inibiram a formao de clastos e sua atividade
74,112,132,160
.
Entre os possveis mecanismos de ao dos bisfosfonatos na fisiologia
ssea afirma-se que
104
(Figura 2):
Interferem ou alteram o citoesqueleto de clulas clsticas;
Interferem na membrana celular dos clastos, especialmente nas bordas
pregueadas;
Diminuem a protena tirosina fosfatase;
Induzem os clastos apoptose;
Inibem a adeso dos clastos ao osso;
Inibem o bombeamento de prtons dos clastos;
Inibem a formao de clastos;
Atuam nos osteoblastos inibindo o estimulador do recrutamento de
clulas clsticas;
Atuam nos osteoblastos estimulando o inibidor do recrutamento de
clulas clsticas;
Atuam nos osteoblastos inibindo a atividade dos clastos.


17

Figura 2 - Apresentao esquemtica de mecanismos de ao dos bisfosfonatos (Modificado
de RODAN; FLEISH, 1996
127)
.

Os bisfosfonatos dividem-se em dois subgrupos, dependendo da presena
ou no de nitrognio que torna as drogas mais lipoflicas, absorvveis e estveis.
Pesquisas recentes sugerem que os primeiros bisfosfonatos usados clinicamente
e no-aminados (etidronato e clodronato) so metabolizados em anlogos
citotxicos de ATP, sendo estes os responsveis pela inibio da atividade dos
osteoclastos.
Por outro lado, os bisfosfonatos aminados, mais novos e potentes -
pamidronato, ibandronato, alendronato e zoledronato - induzem apoptose nos
osteoclastos
154
. Os frmacos desta classe que contm um tomo de nitrognio
primrio em uma cadeia alqulica (pamidronato e alendronato) podem ser de 10 a
100 vezes mais potentes que o etidronato e o clodronato, enquanto os derivados
destes compostos que contm um nitrognio tercirio (ibandronato e
olpadronato) so, geralmente, mais potentes em inibir a reabsoro ssea
21
.
Precursor do clasto
Clula de linhagem
osteoblstica
Bisfosfonatos
(BP)
Formao/recrutamento
de clastos
(BP)
(BP)
Clasto ativo
Clasto inativo Clasto apopttico
Clula de revestimento
(derivada do osteoblasto)

18
Entre os bisfosfonatos mais potentes esto os que contm o tomo de
nitrognio em um anel heterocclico (risedronato e zoledronato)
21
.
Os primeiros bisfosfonatos aprovados para uso teraputico foram o
clodronato dissdico (doena de Paget), o pamidronato dissdico (doena de
Paget), o alendronato de sdio (osteoporose) e o risedronato de sdio
(osteoporose). O zoledronato encontra-se em fase experimental para tratamento
de cncer de prstata. Alm do emprego nessas disfunes, estes compostos
podem ser utilizados em hipercalcemia maligna e metstase ssea
21
.
Em razo de sua propriedade anti-reabsortiva, os bisfosfonatos tambm
esto sendo investigados como inibidores da destruio das articulaes, com
possvel uso no tratamento da artrite reumatide. Ademais sua capacidade de
inibir a reabsoro ssea, mostraram atividade antiinflamatria em modelos
animais de artrite reumatide, bem como em humanos
21
.
Vrias pesquisas demonstraram que os bisfosfonatos tambm possuem
efeito em outras clulas alm dos osteoclastos, incluindo clulas tumorais. J h
uma quantidade considervel de pesquisas in vitro demonstrando que os
bisfosfonatos apresentam ao citosttica, inibindo a proliferao celular,
induzindo apoptose, inibindo a adeso e a invasividade de clulas tumorais.
Interferem no processo metasttico, demonstrando efeito na secreo de fatores
de crescimento e citocinas e inibindo a angiognese tumoral
154
.
A escala crescente da potncia anti-reabsortiva, em vezes, para cada um
dos diferentes bisfosfonatos pode ser assim representada
104,149
:

Etidronato 1
Clodronato 10
Tiludronato 10
Pamidronato 100
Zoledronato 850
Alendronato 1000
Risedronato 5000

19
Ibandronato 10000
Olpadronato 10000

So tambm promissoras as novas perspectivas de conjugao dos
bisfosfonatos com outros frmacos, como corticosterides, antiinflamatrios e
outros cuja administrao repetitiva inevitvel, muitas vezes lesando o trato
gastrintestinal. A utilizao do sistema bisfosfonato como transportador de
frmacos para os ossos, apresenta vantagens promovendo a liberao lenta de
medicamentos de meia-vida curtos e evitando efeitos txicos gastrintestinais
sucessivos, reduzindo o nmero de administraes
21
.
Os bisfosfonatos exibem baixo ndice de absoro; quando administrados
por via bucal ou parenteral a viabilidade biolgica varia em torno de 0,7% para
os alendronatos, de 0,3% para os pamidronatos, de 3 a 7% para o etidronato e
de 1 a 2% para os clodronatos
40,87
. A pequena taxa de absoro verificada no
trato gastrintestinal atribuda pouca afinidade dos bisfosfonatos com os
lipdios, responsveis pelo transporte celular atravs das barreiras epiteliais. Alm
disso, a presena de ctions bivalentes, como o Ca
2+
no trato gastrintestinal,
favorece a formao de complexos qumicos com os bisfosfonatos, diminuindo
mais ainda a sua absoro
87
. Algumas tentativas para aumentar a absoro dessas
drogas foram realizadas alterando-se a via de administrao e as doses dos
medicamentos. Os resultados demonstraram uma absoro dose-dependente,
bem como uma melhora nas administraes intraperitoniais, intramusculares e
subcutneas, mas as irritaes locais e a destruio tecidual na regio das injees
contra-indicam essas formas de administrao. Para os oncologistas a infuso
endovenosa parece ser a melhor via de administrao, em casos de mieloma
mltiplo e leses metastticas do cncer de mama e prstata
53,87
, embora haja
relatos de osteonecrose quando assim administrados nestes pacientes. Entretanto
deve-se considerar que estes pacientes recebem muitas drogas quimioterpicas
outras e mesmo corticides.


20
Geralmente esses compostos so fracamente absorvidos a partir do trato
gastrointestinal por serem pouco lipoflicos. Os bisfosfonatos circulantes
desaparecem rapidamente do plasma e aproximadamente a metade capturada
pelo osso, sendo o restante excretado sem modificaes pelos rins
154
. Uma vez
absorvidos pelos tecidos sseos, sua eliminao ocorre lentamente e mesmo
assim, somente quando houver um processo de reabsoro desse tecido. Esse
fato explica a longa durabilidade dos bisfosfonatos nos ossos, superior a seis
meses na espcie humana
87
.
A chave da ao farmacolgica clnica dos bisfosfonatos consiste na
inibio da reabsoro ssea. Quando atingem a circulao, os bisfosfonatos so
rapidamente excretados pelo rim
127
. Pela afinidade hidroxiapatita ocorre um
depsito destes compostos onde o osso exposto durante a sua aposio e
reabsoro. Este mecanismo explica a ao farmacolgica destes compostos nos
tecidos mineralizados, especialmente no osso. Portanto, a liberao dos
bisfosfonatos ocorre principalmente quando h a reabsoro do osso onde o
bisfosfonato incorporou-se. Aps dez anos de tratamento ativo pode-se detectar
uma liberao de 25% da dosagem diria absorvida, dependendo do local do
esqueleto
39,127
.
A remodelao ssea otimiza a estrutura e forma do osso adaptando-o s
demandas de foras mecnicas decorrentes da utilizao do esqueleto, tanto em
nvel macro como microscpico. Este equilbrio adaptativo s foras mecnicas
ocorre tanto na cortical quanto no trabeculado sseo, podendo ser denominado
de homeostasia da massa ssea
124,125
.
Pode-se afirmar que os bisfosfonatos promovem a longo prazo um
aumento da massa ssea, tanto em animais quanto em humanos, pois a formao
excede a reabsoro. Este aumento de massa ssea pode ser notado em um
perodo relativamente rpido, aproximadamente de quatro a seis meses. Este

21
decrscimo em seu turnover permite que o osso neoformado tenha mais tempo
para mineralizar-se, aumentando o nvel mineral mdio do osso
38,39,127
.
As reaes adversas mais comumente relatadas em decorrncia da
utilizao dos bisfosfonatos incluem desconfortos gstricos e diarria
14,38,40
. Seu
uso prolongado, segundo alguns relatos antigos utilizando altas dosagens, sugere
a possibilidade de atrofia do timo e dos tecidos linfides perifricos, com
supresso do sistema imune
40
, ao desenvolvimento de potencial nefrotxico
14,40
,
urticrias, dores abdominais, dores de cabea, infeces nas vias areas
superiores
29
, leses pulmonares
87
, tromboflebites e, paradoxalmente, inibio
da mineralizao normal dos ossos, que por sua vez aumenta o risco de
fraturas
40
. A intoxicao aguda pode levar a quadros de hipocalcemia e seus
efeitos variam de acordo com a velocidade da infuso
40
. Altas doses do
medicamento provocaram anemia, trombocitopenia e leucemia em animais de
laboratrio. Essas reaes diversificam-se de acordo com o tipo de bisfosfonato
utilizado, a dose administrada, o tempo de tratamento e a via de administrao
40
.

Milhes de pessoas so tratadas atualmente com bisfosfonatos por uma
grande variedade de doenas sseas
124,125
. Estas drogas so utilizadas como
medicamentos nas calcificaes e ossificaes ectpicas, calcificaes dos tecidos
moles, urolitases, fibrodisplasia ossificante progressiva e nas doenas com
grandes destruies sseas como na Doena de Paget, no hiperparatiroidismo
primrio, na hipercalcemia maligna, na destruio ssea tumoral e a altamente
prevalente osteoporose ps-menopausa
19,20,35,38,40 46,65,66,115,121, 124,125,166
.
H um mercado muito grande aproximadamente sete milhes de
dlares, em todo o mundo, em estimativas de 1998 para os agentes que
possam efetivamente influenciar o processo osteoltico
92
.
Em sntese, entre as indicaes clnicas para a utilizao dos bisfosfonatos
incluem-se o
104,124,125,149,154
:
Tratamento de osteoporose ps-menopausa;

22
Tratamento de mulheres ps-menopausadas com densidade total do osso
do quadril abaixo de 650 mg/cm2;
Tratamento de homens idosos apresentando fraturas sseas no
traumticas;
Pacientes com osteoporose secundria a terapias com corticosterides;
Pacientes com doena de Paget;
Aumento da densidade ssea na fibrodisplasia;
Cncer de mama metasttico;
Hipercalcemia maligna;
Tratamento de dor ssea;
Reduo de complicaes esquelticas em pacientes com metstases
sseas ou mieloma mltiplo;
Alvio dos sintomas da osteognese imperfeita; e
Outras doenas sseas apresentando altos ndices de reabsoro ssea.

Os efeitos dos bisfosfonatos incorporados ao osso
104,149

podem ser assim
relacionados:
Diminuio da reabsoro ssea;
Aumento da densidade de mineralizao;
Aumento do volume e massa ssea
127
;
Aumento da resistncia ssea;
Diminuio do ndice de fraturas sseas;
Efeitos a longo prazo ainda desconhecidos.

2.2 Estudos especficos sobre o mecanismo de ao dos bisfosfonatos
Para verificar as possveis alteraes morfolgicas dos clastos
microscopia de luz e eletrnica, decorrente da ao do Cl
2
MDP (clodronato) e
de seus efeitos finais sobre os mediadores celulares de reabsoro ssea,
MILLER; JEE
96
, em 1979, utilizaram 20 fmeas Sprague-Dawley, divididas em
dois grupos de 10 animais, nos quais administraram, diariamente, uma soluo de

23
cloreto de sdio a 9% ou 20mgP/Kg, durante 10 dias consecutivos. Decorrido o
tempo experimental, sacrificaram os animais, dissecaram suas tbias, preparando-
as para a radiomicrografia, a microscopia eletrnica de varredura e transmisso e
a microscopia de luz. As anlises demonstraram significante aumento de massa
de tecido mineralizado nas regies das metfises em decorrncia da lenta
reabsoro ssea. Em esplendidas figuras de microscopia eletrnica de varredura
observaram um aumento da rea de reabsoro; contudo, nessa regio as lacunas
de Howship apresentavam-se com menores dimenses e menos definidas,
quando comparadas s do grupo controle. A administrao do clodronato
provocou, paradoxalmente, aumento do nmero e do tamanho dos clastos,
porm estes apresentavam suas bordas em escovas e seus vacolos
citoplasmticos menores, sendo freqente a observao de reas claras,
sugestivas de baixa atividade de reabsoro. Na maioria das vezes, apresentavam-
se multinucleados. As observaes ao microscpio de luz revelaram que as reas
em reabsoro, adjacentes aos clastos, se mostravam, geralmente, em menor
tamanho nos animais tratados com a droga.
Os efeitos do clodronato e do pamidronato sobre a sntese de
prostaglandinas em culturas de clulas da calvria foram verificados por FELIX;
BETTER; FLEISCH
35
, em 1981, durante seis dias experimentais. Os resultados
demonstraram uma inibio de prostaglandinas em torno de 90% nos casos
tratados com clodronato, em concentraes de 0,025 a 250M, fato que sugere
uma diminuio das reabsores pelo clodronato associadas, em parte, reduo
da sntese das prostaglandinas. Esse mecanismo, no entanto, no deve ser
considerado como o nico, uma vez que o pamidronato, um potente inibidor de
reabsoro ssea, aumenta a produo de prostaglandinas. Alm disso, a
reabsoro ssea pode ser induzida por mecanismos independentes da produo
de prostaglandinas. Essa ao sobre as prostaglandinas, se presente, no explica
todos os efeitos do clodronato.

24
Para investigar o mecanismo de inibio da reabsoro pelo clodronato e
pelo pamidronato, REITSMA et al.
121
, em 1982, utilizaram um sistema de cultura
de macrfagos que permitiu a avaliao da atividade celular sobre o tecido sseo
tratado com bisfosfonatos. Os resultados indicaram que o pamidronato e o
clodronato no alteraram o mecanismo de adeso da clula ao osso, mas, mesmo
assim, inibiram sua capacidade de reabsoro ssea de maneira dose-dependente.
No caso do clodronato, essa inibio ocorreu subseqentemente absoro
prvia da substncia pelo tecido sseo acumulado nas superfcies dos cristais.
Essa ao sugere um efeito citotxico. No caso do pamidronato, porm, a
citotoxicidade s pde ser observada nos casos de altas dosagens do
bisfosfonato, sugerindo mecanismos diferentes de atuao das duas substncias.
Isto revela que cada droga do grupo dos bisfosfonatos deve ser estudada
especfica e individualmente.
Utilizando ratos Wistar-Furth de trs dias de vida e submetendo-os a uma
dose diria bastante elevada de 10mgP/kg de clodronato durante um ms,
MILHAUD; LABAT; MORICARD
95
em 1983, observaram osteopetrose,
retardo de irrupo dentria, sinais de raquitismo, peso diminudo do timo e
baixa resposta de linfcitos T aos mitgenos. Estas desordens do timo
associadas reabsoro ssea defeituosa reforam a hiptese de uma associao
entre a atuao do timo e a remodelao ssea.
Ao considerarem paradoxal o aumento do nmero de clastos e a reduo
da reabsoro ssea em espcimes tratadas com diversos bisfosfonatos,
MARIANI; ROWE
91
, em 1988, desenvolveram um modelo experimental, no
intuito de averiguarem tal contra-senso. Utilizaram ratos Sprague-Dawley
tratados com F
2
MDP, clodronato e etidronato por perodos de 14 e 30 dias.
Aps os perodos experimentais, sacrificaram os animais e as suas tbias
receberam tratamento para a microscopia de luz. Os resultados encontrados
demonstraram que, apesar de significante aumento de tecido mineralizado aps
14 dias de administrao das drogas, o aumento do nmero de clastos s pde

25
ser notado a partir do 30
o
dia. Nesta fase, a quantidade de tecido mineralizado
apresentava-se menor quando comparada encontrada no 14
o
dia.
Para explicar os resultados obtidos MARIANI; ROWE
91
sugeriram que o
aumento do nmero de clastos representava uma resposta ao aumento de tecido
mineralizado, via algum tipo de mecanismo homeosttico, na tentativa de se
manter constante a quantidade de tecido sseo. Os clastos observados nos
grupos tratados apresentavam-se grandes e com vrios ncleos, porm
mantinham-se afastados das superfcies dos ossos, sugerindo no estarem
envolvidos diretamente na reabsoro ssea. Observaram, ainda, uma correlao
positiva entre a presena de clastos com a morfologia alterada e a diminuio da
quantidade de reabsoro, sugerindo que as alteraes degenerativas se
encontravam envolvidas nos mecanismos pelos quais os bisfosfonatos inibem as
reabsores pelos efeitos diretos sobre o metabolismo das clulas ou como
resultado da inabilidade de reabsoro ou de digesto do osso que contm o
bisfosfonato.
O efeito de cinco tipos de bisfosfonatos sobre a formao dos clastos foi
pesquisado por HUGHES et al.
63
, em 1989. Em meio de cultura de clulas de
medula ssea humana, os autores testaram o pamidronato, o clodronato, o
etidronato, e o cido 6-amino-1-hidroxihexilideno-1,1-bisfosfnico (AHHexBP),
observando seus efeitos sobre as clulas precursoras dos clastos. Dois desses
bisfosfonatos, o pamidronato e o clodronato, no demostraram efeitos
inibitrios sobre a proliferao dos precursores celulares dos clastos; contudo
foram eficientes na diminuio da proporo de clulas mononucleares e
multinucleadas, fato que sugere uma certa especificidade com relao s clulas
de linhagem clstica, o que pode estar relacionado grande capacidade dos
bisfosfonatos para inibir as reabsores sseas.
Para verificar os possveis mecanismos de ao dos bisfosfonatos na
inibio das reabsores sseas, CARANO et al.
20
, em 1990, utilizaram culturas
de clastos, nas quais testaram o etidronato, o clodronato e o pamidronato.

26
Observaram, dessa forma, uma supresso dose-dependente da atividade
osteoclstica em todos os testes, verificando uma reduo de 50% nas variaes
de dosagem compreendidas entre 500nM e 5nM, nos diferentes agentes. A
capacidade de adeso dos clastos ao osso diminuiu em torno de 30 a 40% aps
72 horas de tratamento, apesar da manuteno da viabilidade celular. Uma
inibio significativa da reabsoro ssea s pde ser observada aps 24-72
horas. Ao utilizarem acridina laranja, notaram uma inibio da atividade
osteoclstica decorrente da reduo do transporte de prtons, sugerindo que os
bisfosfonatos atuariam como inibidores metablicos reduzindo a sntese das
protenas clsticas.
Os efeitos do pamidronato sobre os clastos isolados de ossos longos de
ratos neonatais foram pesquisados por FLANAGAN; CHAMBERS
36
, em 1991,
em meios de cultura. Os resultados encontrados no incluem todos os efeitos
dos bisfosfonatos avaliados in vivo. A incubao prvia de amostras de ossos em
bisfosfonatos no demonstrou efeitos na desagregao dos clastos na reabsoro
ssea, bem como, ao microscpio ptico e eletrnico de varredura, no se
observaram alteraes morfolgicas nas clulas da osteoclasia. Esses resultados
indicaram que o tratamento prvio das superfcies sseas no suficiente para
provocar danos s clulas. A inibio das reabsores sseas deve-se,
provavelmente, aos danos provocados aos clastos quando o pamidronato
absorvido pelos ossos liberado para o meio extra-sseo. Assim sendo, afirmam
que no a concentrao dos bisfosfonatos, mas, a sua densidade nas superfcies
sseas que determina os seus efeitos biolgicos. Concluem que se pode
aumentar significativamente a potncia do pamidronato in vivo, se grandes
quantidades da substncia forem absorvidas pelas superfcies sseas.
Em 1993, SAHNI et al.
132
, comprovaram a ao de cinco tipos de
bisfosfonatos na inibio das reabsores sseas, em meios de cultura contendo
osteoblastos e clastos pr-tratados com cido 1-hidroxi-3(metilpentilamino)-
propilideno bisfosfnico (BM 21.0955), pamidronato, clodronato, etidronato e

27
alendronato. Notaram que um maior efeito inibitrio ocorria quando os
osteoblastos haviam sido pr-tratados com bisfosfonatos, o que revelava uma
ao indireta, nos clastos, mediada pelos efeitos sobre os osteoblastos.
Concluram que esses dois mecanismos de atuao - a ao direta sobre os
clastos ou a mediada pelos blastos - ainda devem ser mais esclarecidos para se
determinar a sua real importncia in vivo.
Em um estudo laboratorial, HUGHES et al.
62
, em 1995, testaram os
efeitos do risedronato, do pamidronato e do clodronato sobre a cultura de
clastos. Os resultados mostraram que esses bisfosfonatos induziram
modificaes morfolgicas caractersticas da morte programada das clulas ou
apoptose. Essas observaes laboratoriais foram confirmadas em estudos com
animais, sugerindo que a apoptose pode ser o principal mecanismo pelos quais
os bisfosfonatos reduzem o nmero e a atividade dos clastos.
Partindo da proposio de que os bisfosfonatos induzem os osteoblastos
secreo de um inibidor da reabsoro pelos clastos, VITT et al.
160
, em 1996,
utilizaram culturas clsticas de ratos, sob a influencia de alendronato e
ibandronato, onde tambm aplicavam osteoblastos. Concluram que os
osteoblastos produziam um inibidor da reabsoro clstica induzidos pelos
bisfosfonatos.
Para avaliar as alteraes sseas decorrentes da administrao, a longo
prazo, do clodronato, LEPOLA et al.
84
, em 1996, utilizaram 100 ratas Sprague-
Dawley, nas quais injetaram, via subcutnea, doses de 0, 4, 12 ou 50mg/Kg desse
bisfosfonato, a cada ciclo de quatro semanas, num perodo experimental de 25
semanas. O tratamento iniciou-se aos trs meses de idade das ratas, estendendo-
se at seus seis meses. A dose total do clodronato administrado representou
100mg/Kg nas dosagens baixas e 300mg/Kg nas altas, durante os ciclos
completos. Para a determinao microscpica do grau de crescimento sseo
foram administradas, sistemicamente, duas doses de tetraciclina em intervalos de

28
sete e 14 dias antes dos sacrifcios (sic) dos animais. Testes de resistncia
mecnica foram realizados nas tbias, fmures e vrtebras. Os resultados
indicaram que, em relao ao ganho de massa e resistncia ssea, os efeitos
mais benficos da utilizao, a longo prazo, do clodronato, ocorreram quando da
aplicao de dosagens mais baixas. As altas dosagens diminuram o grau de
crescimento sseo, sem interferir, porm, na qualidade da resistncia mecnica.
Revisando ento a apoptose clstica PARFITT et al.
107
, em 1996
suportam-se em trs elementos: 1) a remodelao ssea organiza-se no tempo e
no espao de forma igual no osso cortical e esponjoso; 2) a remodelao
apresenta como regente principal os osteoblastos, ou seja, os osteoblastos so a
base das BMUs. Este conceito nico para o osso esponjoso e cortical; 3) o
clasto possui um tempo de vida curto em funo da apoptose. O bisfosfonato
aumenta 100 vezes a quantidade de apoptose e inibe a secreo clstica da IL-6,
uma interleucina associada a osteoclastognese, explicando os efeitos destas
drogas nas funes da BMU
107
. Os bisfosfonatos podem ser enquadrados em um
grupo de drogas denominadas clast killer. Uma alterao da rede de mediadores
sseos locais ou sistmicos provocando um descontrole dos clastos pode ser
contida pelos bisfosfonatos.
Os odontoclastos so similares aos osteoclastos, assim objetivando
observar alteraes ao microscpio eletrnico e bioqumicas na apoptose de
odontoclastos induzidas pelos bisfosfonatos, WATANABE et al.
163
, em 2000
utilizaram clulas de coelhos com seis dias de vida, destacando-as da superfcie
dentinria de dentes decduos. microscopia eletrnica, os odontoclastos
revelaram pouco desenvolvimento ou a perda das bordas ativas, uma reduo do
tamanho do complexo golgiense e a presena de vesculas citoplasmticas
numerosas. Encontraram tambm fragmentao apopttica no DNA dos
odontoclastos tratados com bisfosfonatos. As alteraes observadas indicam que
os bisfosfonatos tambm induzem a apoptose nos clastos associados
reabsoro dentria.

29
2.3 O alendronato
O alendronato um aminobisfosfonato desenvolvido recentemente e
apresenta um alto potencial em inibir a reabsoro ssea
2,11
. Este frmaco foi
desenvolvido a partir da necessidade de se obter um bisfosfonato com alta
atividade em inibir a reabsoro ssea com efeitos mnimos sobre a formao e
mineralizao ssea
56
e constituindo atualmente uma das drogas mais eficientes
nos tratamentos de estados osteopnicos e osteoporticos
39,69,74,75106,127

O alendronato foi o primeiro bisfosfonato a demonstrar a reduo da
incidncia de fraturas sseas em pacientes com osteoporose em uma grande
amostra com mais de 60.000 pacientes por um perodo de trs a quatro anos em
um estudo prospectivo e duplo cego
69
. Atualmente o tratamento de escolha na
doena de Paget, na hipercalcemia maligna em pacientes cancerosos terminais,
alm de outras indicaes
124,125
.

A faixa de potncia dos bisfosfonatos vasta. In vivo (ratos), o alendronato
demonstrou uma potncia at 1000 vezes maior que o cido etidrnico
(etidronato) para a inibio da reabsoro ssea
69,39
. Alm disso, com relao
inibio da mineralizao e potencial para a osteomalcia, o alendronato
apresentou uma margem de segurana de pelo menos 1000 vezes maior sobre o
cido etidrnico. Apesar de mensuradas em ratos, as potncias relativas so
relatadas como muito similares em humanos
39,40,69
Alendronato sdico

30
LIN
87
apresentou uma reviso muito interessante afirmando que os
bisfosfonatos representam uma classe nica de drogas capazes de inibir a
reabsoro ssea. A vida mdia dos bisfosfonatos no osso muito longa e varia
em diferentes espcies entre um a dez anos e depende sobremaneira do ndice de
turnover sseo. Em funo de suas propriedades fsico-qumicas nicas, a
atuao do alendronato quanto sua absoro e disponibilidade ssea, pode ser
racionalmente extrapolada para os humanos. A dose ideal em humanos de
10mg/dia. Esta predictibilidade para os bisfosfonatos permite que cientistas
industriais desenvolvam novos compostos de bisfosfonatos.
Assim como outros bisfosfonatos, o alendronato possui um baixo ndice
de absoro. A bioviabilidade deste frmaco aumenta de forma dose-
dependente, quando administrado pela via bucal. Em ratos em jejum, o
alendronato administrado bucalmente apresentou uma maior absoro em
relao queles alimentados; sendo assim, recomenda-se a utilizao do
alendronato 30 minutos antes do desjejum e de preferncia 60 minutos, antes de
qualquer outro medicamento. O paciente deve evitar deitar-se por pelo menos
30 minutos aps ingerir o comprimido, para reduzir o tempo de contato do
alendronato com o trato gastrintestinal superior e para prevenir uma potencial
irritao da mucosa
69
. O alendronato, segundo LANZA et al.
78
, no se associa s
leses microscpicas quaisquer no trato gastrintestinal em trabalhos
comparativos com grupos placebo.
No intuito de aumentar a absoro desta droga, outras vias de
administrao foram utilizadas; a absoro pela via subcutnea foi quase
completa, entretanto, dor e danos teciduais no local da injeo foram relatados.
A absoro do alendronato ocorre predominantemente na regio superior do
intestino delgado
87
.
Apesar da sua baixa biodisponibilidade aps a administrao bucal, o
alendronato altamente eficaz na preveno da perda ssea associada ausncia

31
de estrgeno endgeno induzindo a um aumento mantido na massa ssea
durante a terapia em animais e em humanos
69,127
. A diminuio dos nveis de
reabsoro ssea pode ser determinada por exames como a fosfatase alcalina
srica, osteocalcina srica e outros, aps trs meses de terapia com o
alendronato
69
.
O alendronato distribudo a todos os tecidos calcificados e no
calcificados do organismo, quando administrado intravenosamente. Sua
eliminao realizada pelos rins, sendo assim, anlises desse rgo indicam
grande concentrao do alendronato nos seus tecidos
87
.
Em outro estudo a respeito do mecanismo de ao do alendronato em
cultura de clastos de ratos recm nascidos e galinceos, SATO et al.
136
, em 1991,
sugerem que o alendronato ligado superfcie ssea localmente secretado
durante a acidificao na lacuna de Howship. Com o aumento de sua
concentrao na rea, o alendronato capaz de paralisar a reabsoro. A
membrana clstica ento, no mais se apresenta irregular, ativa ou em forma de
escova, mas sem que haja destruio destas clulas.
O mecanismo de interferncia na via do mevalonato constitui um
mecanismo especifico do alendronato, conforme demonstrado pela primeira vez
em 1992, por AMIN et al
7
. Esta habilidade prpria dos bisfosfonatos
nitrogenados inibindo a FPP (farnesyl diphosphate syntase) que constitui uma
enzima essencial para a organizao do citoesqueleto e para o transporte
vesicular nos clastos. A inativao desta enzima desencadeia a inativao destas
clulas quando da administrao do alendronato. A interferncia na funo desta
enzima pode induzir a apoptose nos clastos.
Como parte de um estudo de carcinogenicidade, GUY et al.
56
, em 1993,
propuseram-se a avaliar os efeitos morfolgicos e bioqumicos da teraputica
prolongada com o alendronato durante o amadurecimento e envelhecimento de
ratos. A administrao de alendronato por longo prazo aumentou

32
significantemente a fora das vrtebras e dos fmures em ratos em crescimento
quando da dosagem bucal diria de 1,0 ou 3,75mg/Kg por um perodo de 105
semanas. Aumentaram-se a mxima carga de compresso nas vrtebras em at
96% e 80% dos valores de controle em ratos machos e fmeas, respectivamente,
sugerindo que o alendronato eficaz na presena ou ausncia de estrgeno.
Anlises morfolgicas da terceira vrtebra lombar revelaram uma acentuada
diferena na frao do osso trabecular presente, com aumentos de at 67% e
53%, respectivamente, sobre os animais de controle, em ratos machos e fmeas.
Observaram uma rigidez compresso vertebral significantemente maior em
ratos tratados com esta mesma dosagem de alendronato, tanto machos quanto
fmeas. Os nveis de fora sobre o fmur tambm se apresentaram aumentados
em um ltimo teste para os machos, denotando a maior resistncia adquirida por
este osso. Esses resultados sugerem que o alendronato aumentou a fora dos
ossos pelo aumento da densidade ssea no nvel das trabculas sem efeitos
colaterais
56
.
Testando a segurana e eficincia da utilizao do alendronato por
perodo prolongado, CHESNUT et al.
22
, em 1995, asseveraram a tolerabilidade
do alendronato nas dosagens teraputicas de 5 a 10mg/dia em 188 pacientes do
gnero feminino ps-menopausadas entre 42 e 75 anos durante 2 anos, com
suplementao de 500mg/dia de clcio. Detectaram tambm que a reduo dos
nveis de reabsoro ssea implica em uma diminuio nos nveis sricos de
clcio e fosfato no tecido sseo, juntamente com um aumento compensatrio na
secreo de hormnio paratireoidiano (PTH) e uma elevao nos nveis de 1,25-
dihidroxivitamina D. As reaes adversas da utilizao desse frmaco
assemelham-se quelas relacionadas a outros bisfosfonatos
69
.
TUCCI et al.
152
em 1996, confirmaram em 478 mulheres ps-
menopausadas osteoporticas ingerindo alendronato por um perodo de 3 anos,
sua excelente tolerabilidade em dosagem adequada. O perfil de aceitabilidade do
alendronato demonstrou-se semelhante ao placebo. As mulheres submetidas

33
dosagem de 10mg/dia com suplementao de 500mg/dia de clcio no
apresentaram maior freqncia de efeitos adversos, exceto por suave dor
abdominal, transitria e suave, facilmente resolvida com medicao.
Demonstraram da mesma forma que CHESNUT et al.
22
aumentos hormonais
compensatrios de paratormnio e dihidroxivitamina D, pela diminuio da
reabsoro ssea e dos nveis de clcio e fosfato.
Investigando os efeitos profilticos do alendronato em mulheres logo
aps a menopausa, EISMANN et al.
31
apud JEAL; BARRADEL; MCTAVISH
69
a Merck Research Labs submeteram em ensaio comparativo duplo-cego, 447
mulheres com massa ssea normal (6 a 36 meses aps a menopausa) receberam
1,5 ou 10mg/dia de alendronato por trs anos, ou 20mg/dia por dois anos,
seguido por placebo diariamente por um ano. Dados preliminares mostram que,
em comparao com o placebo, o alendronato, dependendo da dose preveniu a
perda de densidade mineral ssea. 10mg/dia de alendronato previniram
significantemente a perda ssea na coluna e no colo femural. Alm de aumentar
significantemente a densidade mineral ssea dos pacientes com osteoporose,
houve tambm uma reduo significante da dor, conforme medida por uma
escala analgica visual e sem suplementao de clcio
69
.
Em clastos de coelhos in vitro e in vivo ITO et al.
68
, em 1998, estudaram os
efeitos citotxicos do alendronato e do incadronato, utilizando vrios testes
enzimticos. Em suas concluses afirmaram-se que o alendronato, ao contrrio
do incadronato, no exerce nenhum efeito citotxico nos clastos, seja in vivo ou
in vitro.
Na azfama de estudar o mecanismo de ao do alendronato e a elevada
especificidade do mesmo inibio da reabsoro ssea, os resultados de
BERGSTROM et al.
11
, em 2000 revelaram que o alendronato atua seletivamente
na farnesyl diphosphate syntase na via metablica do mevalonato. Isto, porm
no ocorreu quando testaram o mecanismo de ao de outros bisfosfonatos.

34
Aps sua ingesto ou administrao parenteral, o alendronato desaparece
rapidamente da circulao, pois em humanos 50% incorporam-se no osso ou so
excretados na urina. Aps a obteno da zona de selamento na superfcie ssea,
os clastos secretam cidos e dissolvem o contedo mineral. Durante este
processo os bisfosfonatos so liberados do osso e podem atingir altas
concentraes em nvel micromolar. Recentemente, demonstrou-se que desta
forma os clastos internalizam os produtos minerais e ao mesmo tempo os
bisfosfonatos.
A Osteognese Imperfecta (OI) um distrbio hereditrio do tecido
conjuntivo caracterizado por osteopenia, fraturas recorrentes e deformidades
sseas. Os bisfosfonatos parecem constituir teraputica eficiente em crianas
18
,
mas h poucos dados sobre o uso dessas drogas em adultos com OI. Em 2001,
DONANGELO; COELHO; FARIA
30
descreveram o caso de uma paciente de
trinta anos com OI e mltiplas fraturas at a puberdade. Durante a primeira
gestao as dores sseas retornaram, agravando aps o parto. Como os
marcadores bioqumicos sugeriam altas taxas de remodelao ssea, foi
administrado alendronato sdico 10mg ao dia. Em poucos meses houve melhora
das dores sseas. Aps o primeiro ano, a densidade mineral ssea aumentou em
10,8% na coluna lombar (CL) e 2,3% no colo femural (CF). Ao final do terceiro
ano, o ganho total foi de 21,7% em CL e 10,9% em CF, sugerindo que o
alendronato seja boa opo teraputica em adultos com Osteognese Imperfeita.
Estudando comparativamente os efeitos da calcitonina, fluorfosfato e
alendronato em ratas ovarectomizadas GIAVARESE et al.
51
, em 2001 concluiu
que h uma preveno da reabsoro pelo alendronato, mas o osso mantinha
suas caractersticas estruturais e mecnicas normais.
Mais recentemente atribui-se ao alendronato a inibio da osteoclasia por
meio da interferncia nas vias metablicas do mevalonato, que ativa enzimas
intracelulares associadas ao transporte de material reabsorvido em forma de

35
vesculas intracelulares. ALAKANGAS et al.
2
, em 2002, no af demonstrar esta
via de atuao do alendronato utilizou-se de culturas de clastos nas quais fatias
de osso eram inseridas em um primeiro grupo controle. Nos dois demais grupos
experimentais embebiam-se as fatias sseas em solues de alendronato e de
clodronato, respectivamente. Verificaram que a inibio da reabsoro ssea
pelo alendronato coincide com o acmulo de fosfatase cida e de material
eletrodenso no interior das vesculas clsticas. O alendronato induz ainda,
alteraes nas zonas de selamento alargando-as e tornando incompleta a unio
das bordas ativas com o osso. Os clastos pareciam apresentar-se soltos do osso,
embora prximos superfcie. A inibio da reabsoro no experimento no se
relacionou com a diminuio do nmero de clastos, mas sim com a sua
atividade. Nas fatias de osso embebidas em clodronato havia menos clastos. Para
os autores os resultados sugerem que o alendronato inativa os clastos por
interferir nos mecanismos vesiculares de transporte intracelular e consideram a
apoptose apenas um fenmeno secundrio na diminuio da reabsoro ssea
(Figura 3).
Em 2003, avaliando a formao ou a reabsoro ssea sob ao do
alendronato sistemica ou localmente administrado em condies similares s
tcnicas de enxerto como as de medula ssea, de materiais aloplsticos e de
matriz ssea extracelular, YAFFE et al.
174,177
, conduziram uma investigao
envolvendo 64 ratos. Em um dos dois grupos principais colocaram medula ssea
em cilindros de fmur de rato desmineralizado implantando-os subcutaneamente
com o objetivo de formar novo osso. No outro grupo, adotaram-se os mesmos
procedimentos, mas os animais recebiam endovenosamente o alendronato na
forma de 100l de soluo com 1,5mg/ml de alendronato, correspondente a
0,5mgP/Kg, pelo perodo de uma a cinco semanas, por via bucal. Quando da
injeo do alendronato por at cinco semanas constataram um aumento da
formao ssea ectpica de 60

a 166%, quando comparado ao com o grupo
controle. Os resultados da microscopia ptica sugerem que o alendronato

36
efetivo na inibio da perda ssea e deve ser administrado para casos em que
haja a expectativa de reabsoro ssea.

2.4 Efeitos dos bisfosfonatos nos tecidos dentrios e circunjacentes
Os estudos dos diversos tipos de bisfosfonatos na regio bucal
demonstraram a sua influncia no controle da perda ssea causada por doena
periodontal
19,56,83,102,115,131,138,166,172
, na formao de clculos dentrios, na
ancoragem e na recidiva de movimentos ortodnticos
1,66,162
, nas alteraes do
Figura 3 - Imagens do artigo de ALAKANGAS et al.
2
, de 2002
apresentando lacunas de Howship de reabsores sseas normais
(A); reabsores de osso incorporado com alendronato (B) e com
clodronato (C). As reabsores sseas sob condies normais
apresentam uma configurao tipicamente complexa (A). Quando
da incorporao dos bisfosfonatos observam-se reabsores
simples e arredondadas (B e C). Observa-se o clasto com suas
bordas ativas e vesculas repletas de mediadores, aderido
superfcie ssea (D). O segundo clasto (E) apresenta-se
despregado do osso, com bordas inativas.
A
B
C
D
E

37
desenvolvimento do cemento do esmalte e da dentina
3,4,5,9,19,46,47,48,65,99,117,141,164
e
nas alteraes do periodonto com induo a anquiloses dentoalveolares
transitrias
56,167,169,172
.
Vrios modelos de estudos de interesse odontolgico foram realizados
utilizando os bisfosfonatos focalizando o desenvolvimento dentrio, observando
a influncia destas drogas, na liberao de flor
90
, na erupo dentria
54
, no
esmalte, na dentina e na crie dentria
9,16,34,46,47,48,79,101,133,146,164,165
; na cirurgias e na
doena periodontal
13,19,71,72,83,115,138,166,176
, nos traumatismos e em procedimentos
cirrgicos em geral
6,71,72,117
; comprovando tambm o efeito antimicrobiano dos
bisfosfonatos
55,88,172
. Os principais trabalhos a respeito dos efeitos dos
bisfosfonatos nos tecidos dentrios e circunjacentes apresentam-se descritos a
seguir:

Os efeitos do etidronato nos processos de remineralizao do esmalte dos
dentes foram avaliados experimentalmente por MHLEMANN;
AESCHBACHER
99
em 1970. Um total de 20 pr-molares extrados e
submetidos a uma pr-avaliao comparativa da microdureza das reas com
leses tipo manchas brancas e normais foram divididos em dois grupos. No
grupo experimental 1 (n = 10) os dentes foram tratados com soluo de
etidronato, numa concentrao de 0,5% P e pH 5,2, durante 10 minutos, e
lavados em gua destilada por 5 minutos. O grupo 2 (n = 10) serviu como
controle permanecendo em gua destilada durante os mesmos tempos
experimentais. Aps esses procedimentos, os dentes dos dois grupos foram
colocados em soluo remineralizadora por um perodo de 24 horas, a 37
o
C e
em pH 7. Subseqentemente, os pesquisadores remensuraram a microdureza das
reas selecionadas e notaram a completa inibio dos processos de
remineralizao dos dentes do grupo tratado com etidronato, mesmo tendo sido
lavados durante cinco minutos.
Para verificar, in vitro , a influncia dos pirofosfatos e dos bisfosfonatos na
absoro do flor pela hidroxiapatita, REGOLATI; HOTZ
116
, ainda em 1970,

38
prepararam suspenses de 100mg de hidroxiapatita, pr-tratadas, ou no, com
etidronato, dissolvido em 5ml de gua destilada, durante 24 horas, e
acondicionadas em tubos plsticos para centrfugas. Decorrido o tempo inicial,
adicionaram 5ml de uma das seguintes solues testes: soluo de fluoreto de
sdio, soluo de fluoreto de sdio e etidronato, soluo de fluoreto de sdio e
pirofosfato ou gua destilada adicionada s suspenses previamente preparadas.
Os pesquisadores, ento, incubaram novamente as amostras durante duas horas
em banho de gua a 37
o
C, em constante agitao, centrifugaram e retiraram os
sobrenadantes. Os sedimentos foram colocados, outra vez, em suspenso de
20ml de gua destilada e, de novo, centrifugados. Aps quatro banhos, os
sedimentos foram secos e os autores pesaram 20mg deles para serem
dissolvidos em 2ml de cido perclrico 2N. A partir da, foi determinado, nas
amostras a quantidade de flor, de fsforo e de clcio. Os resultados
demonstraram que a absoro do flor pela hidroxiapatita diminuiu
significativamente quando exposta, simultaneamente, ao fluoreto de sdio
associado ao pirofosfato e ao etidronato. Verificaram-se, ainda, menor absoro
do flor quando a hidroxiapatita era pr-tratada com etidronato e,
posteriormente, exposta ao flor, sugerindo que o mecanismo de ao mais
provvel dos pirofosfatos e do etidronato na absoro do flor se encontra no
bloqueio dos centros de reao da hidroxiapatita.
Investigando os efeitos do etidronato na incidncia de cries, na absoro
do flor e no grau de dissoluo das superfcies dos molares de ratos,
REGOLATI; MHLEMANN
117
, tambm em 1970, aplicaram topicamente
solues de flor e de etidronato, isolados ou associados, em 22 ratos,
diariamente, durante um perodo experimental de 42 dias. Nesse perodo, os
animais recebiam gua e dieta cariognica ad libitum, sendo avaliados clinicamente
nos 10
o
e 20
o
dias experimentais. Os resultados demonstraram uma grande
inibio da formao de clculo gengival no grupo tratado com etidronato
isolado ou associado ao flor. A solubilidade da superfcie dos molares diminuiu

39
nos grupos tratados com o etidronato e o flor. Alm disso, ambos os grupos
demonstraram efetividade na reduo das cries de fissura e de superfcie de
esmalte, bem como um aumento dessa efetividade quando administrados
simultaneamente. Em relao reteno do flor, notaram um aumento da
liberao desse on do esmalte quando foi administrado concomitantemente ao
bisfosfonato, e uma grande diminuio dessa liberao aps a administrao de
etidronato isoladamente.
Mesmo sabendo que os suplementos alimentares adicionados gua
podem modificar os hbitos de alimentao e bebida de animais de laboratrio, o
que acaba influenciando os resultados de pesquisas sobre cries dentrias,
REGOLATI; SCHMID; MHLEMANN
118
, em 1970, decidiram estudar a
influncia da adio de bisfosfonatos e de pirofosfatos na gua, isolados ou
associados ao flor. Um total de 12 ratos, com idade entre 19 a 22 dias de vida,
foi avaliado durante 20 dias, perodo em que se controlou, diariamente, a
quantidade de ingesto de gua dos animais. No final do perodo experimental,
os pesquisadores realizaram uma avaliao comparativa dos pesos inicial e final.
Os resultados encontrados demonstraram que a adio do etidronato na gua
no alterou os hbitos de bebida dos animais, tanto na concentrao de 100
quanto na de 500ppmP. Porm, na concentrao de 500ppmP observaram
alteraes nos pesos dos animais. Alm disso, notaram uma grande diminuio
na quantidade de formao de clculo gengival. Apesar de no representar o
objetivo inicial da pesquisa, a grande diferena encontrada no grau de formao
de trtaro sugeriu novas investigaes a respeito da influncia dos bisfosfonatos
nos processos de crie, eroso, mineralizao de clculos e inflamao gengival.
Neste mesmo ano, MHLEMANN et al.
98
testaram a influncia do
etidronato na formao do clculo gengival. Forneceram a substncia, numa
concentrao de 0,125% P incorporada a uma pasta de dente, a 24 indivduos na
faixa etria compreendida entre 22 e 30 anos. Outras trs pastas de dentes foram
igualmente fornecidas, sem, contudo, adio do bisfosfonato. Para se evitarem

40
resultados cruzados, cada grupo recebeu um tipo de pasta para ser utilizada
durante uma semana. Ao final de quatro semanas, todas as pastas haviam sido
testadas por todos os grupos. A cada perodo experimental de uma semana,
foram avaliados a formao de clculo, o peso seco dos cristais e seu grau de
mineralizao. Como resultado, observaram a inibio pelo etidronato da
formao de clculo nos pacientes susceptveis sua rpida formao,
aparentemente sem interferir no seu grau de mineralizao. Nos pacientes em
que essa formao se processava mais lentamente, o etidronato demonstrou
pouco efeito no peso do clculo, mas notou-se menor grau de mineralizao. Os
autores sugeriram maiores pesquisas no sentido de diferenciar os efeitos do
etidronato no crescimento de vrios cristais de fosfato de clcio e sua influncia
nos processos de cries dentrias e eroses, antes da sua utilizao rotineira
como agente antitrtaro.
Numa avaliao da sua ao sobre as culturas de estreptococos bucais,
sobretudo da sua influncia no crescimento total das culturas, o pH terminal e a
quantidade total de cido produzido por S. mutans, S. sanguis, S. salivaris e S. mitis
foram avaliadas em culturas que continham diferentes concentraes de
etidronato - 625, 125, 25, 5 e 0 g/ml - por GUGGENHEIM
55
, tambm em
1970. Os resultados encontrados mostraram que as reaes observadas se
apresentavam bastante discretas, no afetando decisivamente a populao de
estreptococos bucais. Somente a cultura de S. salivaris demonstrou diminuio
de suas atividades metablicas nas concentraes de 125 g/ml. O crescimento e
a produo de cido nessa cultura foram completamente inibidos quando a
concentrao foi de 625 microgramas/ml.
Com o intuito de verificar os efeitos dos bisfosfonatos na formao dos
clculos dentrios de 64 indivduos caracterizados como susceptveis formao
de trtaro, STURZENBERGER; SWANCAR; REITER
144
, em 1971,
incorporaram 3% de etidronato dissdico em dentifrcios, fornecendo-as a esses
indivduos, para utilizao sem restries. Aps seis meses de investigao, o

41
estudo duplo-cego demonstrou que o produto testado promoveu significante
proteo contra o desenvolvimento de novos clculos. Alm disso, aps oito
semanas de uso das referidas pastas, comprovou-se a eficcia do bisfosfonato na
remoo de significantes quantidades de clculos pr-formados. Nenhum efeito
adverso aos tecidos bucais foi notado.
Verificando a efetividade do clodronato na preveno das reabsores dos
implantes sseos, ROSENQUIST; BAYLINK
130
, em 1978, utilizaram 344 ratos,
divididos em trs grupos, que receberam uma dose de 0,035 partes/10
6
de flor
por peso seco, adicionados alimentao. O grupo 1 serviu como controle; o 2
recebeu diariamente a administrao subcutnea de clodronato, na concentrao
de 0,5mgP/Kg; e o 3 uma complementao de flor adicionado gua, na
concentrao de 100 partes/10
6
. Aps uma semana os trs grupos receberam a
administrao, via intraperitnio, de istopos radioativos sendo uma de
1 Ci/Kg de
3
H-prolina, dividido em trs doses durante trs dias consecutivos, e
uma de 40 Ci/Kg de
45
Ca, usada no ltimo dia. Decorridas quatro semanas
aps a injeo dos marcadores sseos sacrificaram (sic) os animais e suas
escpulas foram retiradas sendo que, uma foi preparada para anlise da atividade
atmica e a outra, implantada via subcutnea nas costas de ratos receptores, da
mesma linhagem dos doadores. Depois de permanecerem quatro semanas em
posio, esses implantes foram retirados e, neles analisadas, por espectrometria, a
concentrao e a atividade do clcio radioativo presente, tendo como parmetro
as demais escpulas armazenadas. Os resultados indicaram uma perda de
aproximadamente 30 a 40% da atividade, o que reflete uma considervel perda
de osso. Contudo essa perda apresentou-se, estatisticamente, menor no grupo
tratado com o clodronato, enquanto o aumento do flor no afetou as
reabsores.
Em 33 ratos divididos em trs grupos experimentais, LEONARD;
REESE; MANDEL
83
, em 1979, compararam os efeitos de dois tipos de
bisfosfonatos sobre a perda ssea alveolar. Aps 35 dias de alimentao com

42
dieta pastosa, 0,1ml de solues de etidronato e de clodronato, numa
concentrao de 4mg/Kg de peso, dissolvida em cloreto de sdio a 0,9%, foram
administradas via subcutnea durante 10 dias consecutivos. Decorridos 15 dias
da ltima injeo, os animais foram sacrificados e suas mandbulas preparadas
para a avaliao microscpica. Os resultados confirmaram que o clodronato
apresentou maior eficincia na preveno da perda ssea alveolar de ratos
susceptveis doena periodontal. No entanto, os autores recomendaram
estudos mais aprofundados dos efeitos e da segurana do uso dessas drogas,
antes da sua utilizao rotineira em humanos.
Os efeitos do clodronato no controle das doenas periodontais avanadas
e a sua ao nos processos inflamatrios associados s doenas periodontais
foram testados em um modelo experimental com ratos por GOTCHER
52
, em
1981. Um total de 76 ratos jovens (Oryzomys palustris), de ambos os gneros e
com 21 dias de vida, foi tratado durante seis, 12 e 18 semanas com injees
dirias, subcutneas, nas dosagens de 0 (controle); 0,1; 1,0; e 10mg/kg/dia de
clodronato. Decorrido o perodo experimental, os animais foram sacrificados e
suas mandbulas e tbias preparadas para a microscopia ptica e
radiomicrografias. Os resultados comprovaram que nas mandbulas dos animais
com pouca ou nenhuma doena periodontal no ocorreram diferenas em
relao ao grupo controle. Quando, porm, j existiam grandes destruies
teciduais, os grupos tratados com 1,0 e 10mg/Kg/dia de clodronato
manifestaram menores perdas sseas e maior quantidade de osso remanescente.
Nas metfises das tbias, observou-se o aumento da massa ssea, notadamente
nas concentraes de 1,0 e 10mg/Kg/dia e, aps 12 e 18 semanas, esse aumento
tambm pde ser verificado nas concentraes de 0,1mg/Kg/dia. Os animais
tratados com clodronato demonstraram, alm disso, menores espaos vasculares,
menor nmero de fibroblastos no perodo inicial, menor nmero de blastos em
todas as dosagens nos perodos de 12 e 18 semanas e uma diminuio das

43
atividades proliferativas dos fibroblastos, em todos os perodos experimentais,
nas dosagens dirias de 10mg/Kg.
No intuito de verificar a efetividade do clodronato na inibio da
reabsoro das paredes dos alvolos ps-extrao e de determinar o intervalo de
administrao mais efetivo, OLSON; HAGEN
102
, em 1982 utilizaram 40 ratos
Sprague-Dawley, divididos em quatro grupos, aos quais administraram a droga,
via subcutnea, numa concentrao de 10mg/Kg/dia, em intervalos que
variaram de sete dias pr-extrao at 27 dias ps-extrao. Ao grupo controle,
administraram uma soluo salina. Os resultados microscpicos denotaram que
o clodronato se mostrou efetivo na inibio da rpida perda do osso alveolar
aps a extrao. Alm disso, esse efeito revelou-se especfico nas reas cirrgicas,
uma vez que, nas reas intactas, no se observaram diferenas em relao ao
grupo controle. A efetividade apresentada pelos grupos tratados somente antes
das extraes demonstrou que os efeitos da terapia no so imediatamente
reversveis aps a sua descontinuidade.
Considerando a hiptese de que um importante fator na iniciao da
reabsoro dentria pode ser a presena de material mineralizado na superfcie
radicular e a sua fagocitose aps um traumatismo, WESSELINK;
BEERTSEN
167
, em 1983, testaram a utilizao de bisfosfonatos em incisivos de
ratos congelados como modelo experimental. Procedeu-se administrando a dose
de 10mgP/Kg/dia e com o congelamento do periodonto dos incisivos dos
animais acreditando prevenir depsitos de minerais na superfcie do dente
reimplantado. O bisfosfonato etidronato foi utilizado em perodo de dois a 31
dias. Aps 24 horas e um ms da ltima injeo da droga, os animais foram
mortos e os tecidos processados para anlise microscopia tica no
evidenciando depsito de material mineralizado na superfcie radicular e
detectando-se muito pouca reabsoro. Grandes quantidades de matriz ssea
estavam depositadas nos espaos interperiodontais e promovendo posterior
anquilose alveolodentria. Um ms depois, nenhuma camada de tecido

44
mineralizado estava presente na superfcie radicular, mas as reabsores
ocupavam 40% da superfcie cementria. Nos animais tratados com soluo
salina este ndice de 60%. A interpretao dos resultados pelos autores em
questo concluiu que o tratamento com o etidronato diminuiu a reabsoro, mas
no a preveniu.
Verificando a disponibilidade e a liberao do flor quando da influncia
dos bisfosfonatos, MAHESHWARI et al.
90
, em 1983, observaram que alm de
no interferir na liberao de flor os bisfosfonatos diminuram a excreo de
fluoreto aumentando o tempo de flor disponvel no sangue e tornando a
excreo mais lenta.
A ao dos bisfosfonatos sobre a dentina em formao e a sua relao
estrutural com o desenvolvimento das inseres das fibras periodontais
tornaram-se objeto de um estudo de BEERTSEN; NIEHOF; EVERTS
9
,
realizado em 1985, em incisivos em contnuo desenvolvimento. Os 32 ratos com
idade de um ms foram divididos em oito grupos de quatro animais cada um, aos
quais os pesquisadores, administraram, diariamente, uma soluo de etidronato
nas doses de 2, 4, 6, 8, 10, 14 e 18mgP/Kg, durante 10 dias. Os animais do
grupo controle receberam a administrao de soluo de Ringer, diariamente,
durante todo o perodo experimental. Decorridas 24 horas aps a ltima injeo
todos os animais foram mortos e suas mandbulas dissecadas para posterior
preparo das peas. Nesse momento, dividiram o material em dois subgrupos (A
e B) que continham as mandbulas de dois animais tratados com todas as
dosagens da droga. O subgrupo A serviu para a determinao, microscopia
eletrnica, dos efeitos do etidronato na mineralizao dos tecidos o subgrupo B
foi utilizado para avaliaes histomorfomtricas, sendo os cortes microscpicos
corados com azul de metileno e observados microscopia de luz. Paralelamente
a esse experimento principal, os pesquisadores desenvolveram mais dois
trabalhos para investigaes mais acuradas sobre o efeito do etidronato no
desenvolvimento do periodonto e da dentina. No segundo experimento, os

45
autores
9
utilizaram mais 30 animais, divididos em dois grupos, e metade deles
administraram diariamente e por via subcutnea, 10mgP/Kg, durante 13 dias.
Aps o sacrifcio das cobaias, prepararam as pores basais das suas mandbulas
para a microscopia eletrnica. No terceiro experimento, observaram os efeitos
do etidronato sobre a absoro e a deposio de
3
H-serina na dentina. Utilizando
10 animais divididos em dois grupos, injetaram, ento, em todos eles, por via
subcutnea, 10mgP/Kg, durante sete dias. Decorridas 12 horas da ltima injeo
administraram-lhes uma substncia radioativa sendo mortos 24 horas depois. A
poro basal das suas mandbulas, contendo 4mm da regio apical dos incisivos
foi preparada e radioautografada, durante um ms, temperatura de 4
o
C. Os
resultados evidenciaram que, em doses inferiores 8mgP/Kg, ocorreram no
apenas a inibio da deposio dos cristais de minerais na dentina recentemente
formada, como tambm uma completa paralisao da formao da camada de
cemento acelular. Notaram que a droga interferiu na deposio de
3
H-serina na
regio de interface pr-dentina-dentina, mas sem alterar a mineralizao da
dentina, fato sugestivo de que as protenas que contm essa substncia -
presumivelmente as fosfoprotenas - no desempenham um papel crtico na
deposio de camadas minerais sobre aquelas previamente formadas. A ausncia
da camada de cemento no alterou o desenvolvimento do ligamento periodontal,
que estabeleceu conexo com as camadas de anlogos de dentina nas razes.
Finalmente, os autores
9
observaram que a droga apresentou efeitos distintos na
formao dos anlogos da dentina nas regies da coroa e da raiz. Enquanto os
odontoblastos encontrados nas regies da dentina das coroas continuaram a
produzir matriz dentinria ao redor da polpa, os situados na regio das razes s
produziram matriz nas reas onde a camada de dentina superficial havia sido
mineralizada antes da administrao do etidronato, o que indica a existncia de
uma diferena na formao da dentina da coroa e da raiz.
A fim de investigar os efeitos do clodronato sobre a concentrao de
minerais do esmalte e dos ossos de cobaias e de determinar os padres de

46
normalidade desses minerais, HYVNEN; HANHIJRVI; AHOSILTA
65
, em
1986, utilizaram 32 animais, divididos em quatro grupos, aos quais
administraram, por via bucal, respectivamente, 0, 100, 300 e 1000mgP/kg
diariamente, em dose nica, durante um perodo experimental de seis meses. As
concentraes do flor e do magnsio do esmalte foram obtidas pela tcnica da
bipsia de esmalte por ataque cido, segundo mtodo descrito por Hotz, em
1972. Determinaram as concentraes sseas de clcio, fsforo, flor, magnsio,
carbonatos e citratos por meio de anlises de bipsias excisionais de cristas do
ilaco, sendo os valores calculados para o osso seco. As propores entre
clcio/fsforo e clcio/magnsio, por sua vez, foram determinadas para o
esmalte e os ossos. No esmalte, a diminuio da concentrao do magnsio
mostrou-se dose-dependente, bem como a proporo clcio/magnsio. Por
outro lado, notou-se o aumento da proporo clcio/fsforo. Nos ossos, o
aumento da concentrao do flor revelou-se significante e o aumento da
proporo clcio/magnsio, dose-dependente. Esses resultados sugeriram uma
interferncia do clodronato nos ciclos de desmineralizao e mineralizao do
esmalte, por influncia sobre o magnsio, diminuindo sua concentrao no
mineral. Concluiram que o clodronato no influencia na cintica do fluoreto.
Para verificar o efeito de diversos tipos de bisfosfonatos sobre o esmalte
em formao, SIMMELINK
141
, em 1987, utilizou ratos Sprague-Dawley, com
cinco dias de vida, nos quais injetou, via subcutnea, o etidronato, o
pamidronato, o clodronato ou uma soluo salina. A concentrao das drogas
variava de 2,5; 5,0; 10,0 e 20,0mgP/Kg. Um total de 48 animais, divididos em
quatro grupos, recebeu uma nica dose das drogas e foi sacrificado 24 horas
aps a sua administrao. Suas maxilas dissecadas receberam tratamento para a
microscopia de luz e eletrnica de transmisso. Como um suplemento, mais
quatro animais receberam durante 14 dias a administrao diria do etidronato,
na concentrao de 5mgP/Kg. Aps 24 horas da ltima injeo, o autor
sacrificou os animais e preparou o tero apical dos seus incisivos superiores para

47
a microscopia eletrnica de transmisso. Os resultados da microscopia ptica
revelaram, como j esperado, a formao de cistos subameloblsticos, indicativos
de severas alteraes celulares. No entanto, verificaram maiores danos nos
animais tratados com o etidronato e o pamidronato, na concentrao de
2,5mgP/Kg, se comparados aos tratados com clodronato. Alm disso, quando
observados ao microscpio eletrnico, notaram distrbios na formao dos
cristais, na sua maioria similares aos originados por excesso de flor, o que
sugere uma toxicidade celular no-especfica. Porm alguns efeitos sobre o
crescimento dos cristais parecem ser especficos dos bisfosfonatos. Nos incisivos
foram observados vrios anis indicativos de inibio e retorno normalidade
dos processos de formao e maturao do esmalte. Cada anel apresentou,
aproximadamente, 2-3m de espessura.
Conhecendo a propriedade dos bisfosfonatos de inibir as reabsores
sseas, SCHMIDT; HOWE
138
, em 1987, procuraram verificar a influncia da
administrao do F
2
MDP no controle da perda do osso alveolar nas doenas
periodontais induzidas em ratos com 21 dias de vida. Um total de 12 machos e
seis fmeas, divididos em trs grupos, foram submetidos a uma dieta considerada
patognica para o periodonto e receberam durante 12 semanas a administrao
subcutnea de uma das seguintes solues: soluo salina a 0,9%; soluo de
10mg/Kg de clodronato ou soluo de 10mg de F
2
MDP/Kg. Decorrido o
tempo experimental, os pesquisadores sacrificaram os animais, dissecaram suas
mandbulas, dividindo-as na linha mediana, e prepararam-nas para a anlise
macroscpica e microscpica de luz. Os resultados macroscpicos indicaram que
no grupo controle ocorria doena periodontal e perda de osso em maiores
propores que nos grupos controlados pelas drogas. Nos grupos tratados,
notaram que a crista alveolar se apresentava mais prxima da juno
amelocementria, e que o grupo medicado com clodronato demonstrou maior
efetividade. Os cortes microscpicos das regies interproximais revelaram
grande destruio tecidual no grupo no-tratado, que contrastou com os demais,

48
em que se observaram as fibras colgenas do tecido conjuntivo proeminentes e
um contorno do osso alveolar regular, com a margem da crista alveolar
localizando-se prxima juno amelocementria.
Os efeitos do clodronato nos processos de remodelao ssea durante a
migrao fisiolgica dos molares de ratos e no crescimento da maxila, tornaram-
se objetivo de estudos de HARDT
57
, em 1988. Um total de 30 ratas recm-
nascidas foi dividido em cinco grupos, trs controles e dois experimentais. Em
um grupo controle, sacrificaram-se os animais quando estes completaram 10
semanas de vida. Nos demais grupos controle administraram-se solues salinas,
via subcutnea, a partir da 10
a
semana de vida e at a 12
a
e 20
a
, quando, ento,
foram tambm sacrificados. Nesses grupos, injetaram marcadores sseos
fluorescentes nos intervalos de, respectivamente, oito e dois dias antes dos
sacrifcios. Nos grupos experimentais, alm da administrao dos mesmos
marcadores fluorescentes, injetaram diariamente e por via subcutnea, 10mg/Kg
de peso de clodronato, durante o mesmo perodo experimental Em seguida,
seces verticais sobre as razes linguais dos molares superiores mineralizados e
desmineralizados foram preparadas para a histomorfometria. Os graus de
aposio ssea, a atividade remodeladora e a populao de clulas sseas foram
quantificados pela anlise das regies de reabsoro e pela aposio ssea no
osso alveolar e nas corticais. O grau de inclinao dos primeiros molares foi
igualmente calculado. Os resultados encontrados pelo autor HARDT
57
demonstraram maior movimentao espontneo dos primeiros molares, o que
sugere um estreitamento do osso na poro interdentria relacionada idade. O
bisfosfonato diminuiu a atividade de remodelao nas superfcies de reabsoro
do osso alveolar, independentemente do aumento transitrio de clastos, assim
como reduziu o nmero de osteoblastos e o grau de aposio ssea nas
superfcies de deposio do osso alveolar. Contudo no se observaram efeitos no
nmero de blastos e de aposio ssea nas reas corticais. Esses resultados
reforam os conceitos de que o clodronato influencia a formao ssea

49
indiretamente, por meio de um mecanismo de ligao entre formao e
reabsoro ssea.
Objetivando avaliar o distrbio do desenvolvimento do molar do rato
induzido pelo etidronato e o clodronato, FOUDA, CARACATSANIS e
HAMMASTROM
47
realizaram em 1989 experimentos em ratos Sprague-Dawley
de ambos os gneros. Em um primeiro experimento, 55 ratos receberam pela via
subcutnea doses nicas de 10 mg P/Kg do etidronato ou clodronato, e em
cinco ratos controles no foi administrado nenhuma substncia. Todos os ratos
foram mortos aps seis horas, 24 horas, dois dias, quatro dias, ou sete dias. No
segundo experimento, foi administrada dose nica de 10mgP/Kg do etidronato
ou clodronato em grupos de trs ratos com trs, quatro, cinco, seis ou sete dias
de idade. Em dois animais controles no foi administrada nenhuma substncia.
Na tentativa de demonstrar os efeitos de injees mltiplas desses bisfosfonatos
sobre os molares do rato, foi realizado um terceiro experimento em 50 ratos com
cinco dias de idade. Esses ratos receberam as mesmas doses utilizadas nos
experimentos anteriores, porm, administradas por trs dias consecutivos e
foram mortos 24 horas aps a ltima administrao da droga. Aps a
decapitao, todos os espcimes foram preparados para posteriores anlises.Um
experimento adicional foi realizado para estudar os efeitos nas superfcies do
esmalte da administrao mltipla ou nica do clodronato ou etidronato. Neste
experimento foram administradas subcutaneamente 10 mg P/Kg em ratos com
15 dias de idade. Aps 15 dias, os ratos foram mortos e seus primeiros molares
superiores foram removidos da maxila, preparados e analisados em microscopia
eletrnica. As administraes mltiplas e nicas dos bisfosfonatos causaram
alteraes no desenvolvimento do esmalte e da dentina. No esmalte foram
observados a formao de cistos subameloblsticos, depsitos calcificados e
hipoplasias nas reas csticas. Os efeitos mais profundos provocados na dentina
parecem estar mais associados ao etidronato. Segundo os autores notou-se na
pr-dentina uma zona escura a qual necessita ser elucidada. A anlise em

50
microscopia eletrnica das superfcies de esmalte dos molares irrompidos
revelou a formao de leses hipoplsicas localizadas preferencialmente no lado
mesial das cspides. A diversidade dos efeitos dos bisfosfonatos pode indicar
que sua ao no desenvolvimento do esmalte originada da toxicidade celular
no especfica; e nos outros tecidos dentrios duros parece ser um mecanismo
mais especfico.
No mesmo ano, OGAWA et al.
101
avaliaram os efeitos da administrao
do etidronato no processo de formao e mineralizao da matriz dentinria.
Foram utilizados ratos Sprague-Dawley distribudos em grupos experimentais e
controle. Nos animais dos grupos experimentais doses de 0.5, 1, 2, 5, 10, 15 ou
30 mg P/Kg do etidronato foram administradas subcutaneamente. Nos animais
do grupo controle foi administrado soluo fisiolgica. Os animais foram
imolados em intervalos de 1, 2, 4, 8, 16, 24, 48 e 96 horas aps a ultima
administrao da dose de 10 mgP/Kg do etidronato. Todos os outros animais
foram mortos 96 horas aps a ltima administrao do frmaco. Aps a
decapitao, os incisivos superiores e o osso alveolar adjacente foram removidos,
preparados e analisados radiograficamente e em microscopia tica e eletrnica.
Anlises microrradiogrficas demonstraram reas no uniformes de
hipomineralizao e hipoplasias na dentina nos animais tratados com doses
iguais ou superiores a 1mgP/Kg do etidronato. Na microscopia tica todos os
animais tratados com etidronato apresentaram alteraes na formao do
esmalte; na pr-dentina foi observada uma rea pigmentada desconhecida, e na
dentina um aumento de espessura. Na microscopia eletrnica as principais
alteraes observadas representavam distrbios na fibrinognese. Segundo os
autores, esses distrbios parecem ser atribudos aos efeitos do etidronato na
ativao de enzimas.
Conhecendo a afinidade da tetraciclina em associar-se aos tecidos duros,
FOUDA, KUT, HAMMARSTROM
48
em 1992, a utilizaram como um marcador
para estudar os efeitos das mudanas patolgicas induzidas pelo etidronato e o

51
cido fosfonofrmico sobre os padres de mineralizao do desenvolvimento do
esmalte e da dentina. Para tanto, foram utilizados 35 ratos Sprague-Dawley com
cinco dias de idade, distribudos em grupo controle e experimental. Em um
grupo experimental foram injetadas simultaneamente doses de 10 mg/Kg do
etidronato e 50mg/Kg de tetraciclina pela via subcutnea. Em outro grupo
experimental administraram as mesmas doses desses frmacos, porm, a
tetraciclina foi administrada em intervalos de 1, 2 e 4 dias. Os animais controles
receberam soluo fisiolgica pela mesma via. Aps o perodo de observao de
1, 2 e 4 dias os ratos daqueles grupos experimentais foram mortos, e os
espcimes preparados e analisados em microscopia eletrnica. A tetraciclina
fluorescente foi observada em toda espessura da matriz de esmalte, nos
depsitos calcificados e nos cistos subameloblsticos quando administrada
simultaneamente com o etidronato. Na dentina, a tetraciclina acumulou-se na
frente de mineralizao sem interferir neste processo. A administrao da
tetraciclina em intervalos com a do etidronato, produziu no esmalte uma rea
fluorescente bem observada sobre os cistos subameloblsticos, e na dentina
produziu defeitos semelhantes a nichos, interferindo na mineralizao.
Os resultados da administrao de uma nica dose de etidronato sobre o
esmalte dos incisivos em formao constituram o objetivo do trabalho de
WEILE; JOSEPHSEN; FEJERSKOV
164,165
, em 1990
164
e em 1993
165
publicado
em duas revistas distintas. Contando com 42 ratas Wistar divididas em seis
grupos, sendo um controle e os demais experimentais, os autores administraram
via subcutnea uma nica dose de etidronato em concentrao de 0,5; 1,0; 2,5;
5,0 e 10mgP/Kg. O grupo controle recebeu a administrao de uma soluo
salina. Os animais foram sacrificados em intervalos de dois e nove dias aps a
administrao do etidronato. Como complementao, outros dois animais
receberam duas injees de etidronato, na concentrao de 5mgP/Kg, em
intervalos de trs dias, sendo sacrificados nove dias aps a ltima aplicao.
Depois do sacrifcio, os seus incisivos superiores receberam o preparo adequado

52
para a avaliao radiomicrogrfica e os inferiores, para a microscopia eletrnica
de varredura. Os resultados das radiomicrografias demonstraram reas
incrementais hipomineralizadas, independentemente da concentrao da droga.
A avaliao microscpica revelou trs diferentes leses do esmalte
correspondentes aos estdios de sua formao e maturao, fato indicador de
que uma nica dose de etidronato pode interferir na formao do esmalte tanto
pelos efeitos fsico-qumicos quanto pela ao sobre os ameloblastos.
A perda do osso alveolar se relaciona s alteraes no equilbrio normal
entre a reabsoro e a formao ssea e supondo que os agentes teraputicos
capazes de impedir as reabsores e de acelerar as aposies funcionam como
protetores de perda de osso nas doenas periodontais, BRUNSVOLD et al.
19
,
em 1992, propuseram-se a determinar os efeitos dos bisfosfonatos no
desenvolvimento das periodontites em macacos Cynomolgus. Um total de 27
animais adultos foram avaliados clinicamente. Os animais foram divididos em
trs grupos. Dois receberam o alendronato (AHBuBP), na concentrao de
0,05mg/kg ou de 0,25mg/kg, e o restante uma soluo salina. Essas solues
foram administradas sistemicamente, por infuso endovenosa, a cada duas
semanas, por um perodo de 16 semanas. Decorridos sete dias da primeira
administrao posicionaram uma ligadura de fio de sutura no nvel da juno
amelocementria dos primeiros molares e pr-molares. Aps 14 e 28 dias,
inocularam essas ligaduras com culturas de Porphyromonas gingivales. A coleta dos
dados clnicos e radiogrficos foi realizada oito e 16 semanas aps a instalao
das ligaduras. Para cada animal, duas regies interproximais e a rea de furca
foram avaliadas por meio de radiografias, verificando-se as alteraes da
densidade ssea. Os resultados dos autores
19
demonstraram que o bisfosfonato a
0,05mg/Kg apresentou efetividade na inibio da perda ssea alveolar, enquanto
as doses mais elevadas no alteraram, significativamente, esta perda ssea. Em
relao aos ndices clnicos avaliados, no observaram nenhuma alterao
significativa.

53
Com o objetivo de determinar a prevalncia e a distribuio dos restos de
Malassez no ligamento periodontal, em condies normais e aps a
administrao do etidronato, WESSELINK; BEERTSEN
167
, em 1993,
utilizaram 72 ratos com quatro meses de vida, distribudos em seis grupos de
oito animais. Administraram, sistemicamente, 10mgP/Kg de bisfosfonato em
trs desses grupos, durante perodos experimentais de 10, 30 e 50 dias. Os outros
trs grupos receberam a administrao de soluo de Ringer pelos mesmos
perodos experimentais. Todos os animais foram sacrificados 24 horas aps a
ltima injeo. Os 24 animais restantes receberam o etidronato durante 50 dias,
sendo sacrificados, em grupos de seis animais, nos intervalos de 14, 28, 56 e 112
dias aps a descontinuidade do tratamento. Um outro grupo, contendo 12
animais, no recebeu a administrao da droga nem da soluo de Ringer, sendo
sacrificados aos sete e nove meses de vida. Subseqentemente aos sacrifcios, as
regies dos molares inferiores foram preparadas para a microscopia ptica e
eletrnica. Seus resultados
167
demonstraram, no grupo controle, a presena dos
restos de Malassez distribudos ao redor das razes, exceto na poro mesial das
razes dos primeiros molares, bem como uma diminuio do seu nmero com o
avanar da idade dos animais. Nos ratos tratados, observaram uma distribuio
bastante similar do grupo controle, apesar de se notar, nelas, a diminuio do
espao do ligamento periodontal e reas de anquilose. Aps a descontinuidade
da administrao do etidronato pde-se observar a normalizao da largura do
espao periodontal, decorrente do processo de reparao que se caracterizava
por apresentar reabsores radiculares, eliminao das reas de anquilose, nova
formao de cemento e regenerao do ligamento.
Estudando a eficincia do alendronato na reduo da perda ssea causada
por doena periodontal em macacos Cynomolgus, WEINREB et al.
166
, em 1994,
utilizaram 27 animais distribudos em trs grupos experimentais, de acordo com
a dosagem da droga. Induziram a doena periodontal, passando uma ligadura ao
redor do primeiro molar inferior, na regio da juno amelocementria e,

54
subseqentemente, inoculando-a com culturas de Porphiromonas gingivalis. Os
molares homlogos, sem ligaduras, serviram como controle. Os animais
receberam, ento, por via intravenosa, a administrao de uma soluo salina
(placebo) e do alendronato, nas concentraes de 0,05 e 0,25mg/Kg, duas vezes
por semana, durante 16 semanas. Aps o sacrifcio e o preparo histotcnico das
peas, os cortes coronais dos molares foram submetidos avaliao
histomorfomtrica. Os resultados indicaram que, nos animais placebo, a ligadura
e a inoculao resultaram em significativa destruio de osso na regio da juno
amelocementria e na rea de furca. Para os autores
166
, a administrao
endovenosa do alendronato na concentrao de 0,05mg/Kg, demonstrou
significante reduo da perda ssea associada periodontite experimental, porm
na concentrao de 0,25mg/kg demonstrou ser ineficiente na preveno de
perda ssea na regio da furca e apenas levemente eficiente na regio da juno
amelocementria. Esses achados indicaram que o alendronato pode reduzir a
perda ssea alveolar decorrente da doena periodontal e os autores sugeriram a
sua utilizao como uma nova modalidade nos tratamentos das periodontites.
A homeostase proposta entre os fibroblastos, no ligamento periodontal, e
as clulas sseas que recobrem a poro interna da parede alveolar so
consideradas responsveis pela manuteno da largura do espao do ligamento
periodontal. Tentando interferir neste equilbrio, WESSELINK; BEERTSEN
168
,
ainda em 1994, administraram sistemicamente o etidronato em ratos. Para tanto,
extraram os primeiros molares superiores esquerdos dos ratos de um primeiro
grupo, que passaram a receber doses dirias de 10mgP/Kg, via subcutnea, por
perodos de 10, 30 e 50 dias. A um segundo grupo de animais, preservando-lhes
os dentes, administraram as mesmas quantidades da droga. O grupo controle
recebeu, via subcutnea, soluo de Ringer. Aps a ltima administrao das
drogas, sacrificaram os animais, e prepararam suas mandbulas para a observao
em microscpios de luz e eletrnico. As anlises demonstraram que a
administrao do etidronato, proporcionalmente ao tempo de sua utilizao,

55
causou uma significativa diminuio do espao do ligamento periodontal. Os
autores
168
observaram anquilose dentria aps o 30
o
dia, predominantemente nas
reas inter-radiculares e ao redor dos dentes sem antagonistas. Em torno do 50
o

dia, notaram sinais de reabsoro ao longo da camada de cemento acelular.
Durante a administrao do etidronato, notaram tambm, a deposio de
extensa matriz cementide ao longo da camada de cemento celular, mas esta
atividade no foi observada na rea do cemento acelular. Estes resultados
permitiram concluir que o etidronato interfere no mecanismo mediador da
preservao do espao do ligamento periodontal.
Num trabalho subseqente, WESSELING; BEERSEN
167
, tambm em
1994, investigaram a seqncia de eventos que ocorrem aps a interrupo da
administrao do etidronato e os efeitos da funo oclusal no reparo do
ligamento periodontal. Com esse objetivo, extraram os primeiros molares
superiores de 28 fmeas de ratos, que passaram a receber uma dose de
10mgP/kg, via subcutnea, por um perodo de 50 dias. Aps esse tempo
experimental, sacrificaram os animais, em intervalos de 24 horas, 14, 28, 56 e 112
dias aps aplicao da ltima dose da droga. Dissecaram e prepararam as
mandbulas para a observao no microscpio de luz. Nos cortes microscpicos,
os autores

notaram a presena de reas de anquilose, com a diminuio da
largura dos espaos periodontais. Depois da interrupo da administrao da
droga, o novo tecido sseo formado foi, primeiramente, mineralizado e,
posteriormente, reabsorvido, resultando no desaparecimento das reas de
anquilose. Alm disso, regies de reabsoro radicular puderam tambm ser
notadas. Finalmente, o ligamento periodontal retomou sua arquitetura e sua
dimenso normais, com depsito de nova camada de cemento. Os dentes que
permaneceram em funo apresentaram maior reabsoro quando comparados
queles em hipofuno, alm de um reparo periodontal mais rpido. Esses
resultados permitiram concluir que, no perodo aps a administrao do
etidronato, o ligamento periodontal restabeleceu suas dimenses normais por

56
meio de processos reparadores, que incluem extensa reabsoro radicular,
considerada um acelerador do processo.
Buscando avaliar clnica, microscpica e radiograficamente, os efeitos do
alendronato na progresso da doena periodontal em modelo experimental de
ces da raa Beagle, REDDY et al.
115
, em 1995, utilizaram 16 animais que
apresentavam perda ssea alveolar classificada de moderada a severa, por um
perodo de seis meses. De cada animal, verificaram os ndices gengival e de placa,
a mobilidade dentria e o nvel da juno do epitlio gengival em intervalos
mensais. As radiografias intrabucais foram obtidas em intervalos trimestrais e
analisadas em imagens digitalizadas. A fim de acelerar o processo patolgico, os
autores posicionaram ligaduras ao redor dos pr-molares inferiores, durante trs
meses. Decorrido esse perodo, retiraram-nas para que se estabelecesse um
processo crnico. O bisfosfonato, administrado, semanalmente, por via bucal, na
dosagem de 3,0mg/kg, antes das refeies matinais foi avaliado em um estudo
duplo-cego em que uma soluo placebo serviu como controle. Aps os seis
meses, mataram os animais, preparando suas mandbulas para a anlise
microscpica. Os resultados radiogrficos revelaram uma diferena
estatisticamente significante na quantidade de massa ssea entre os grupos. Os
bisfosfonatos no apresentaram resultados clnicos satisfatrios em relao aos
ndices de placa e gengival, mas mostraram-se capazes de restringir a perda de
insero gengival e a mobilidade dentria. Os resultados histomorfomtricos, por
sua vez, apresentaram diferenas significativas na densidade ssea, sugerindo
uma utilizao benfica dos bisfosfonatos nos tratamentos da perda ssea
alveolar decorrente das doenas periodontais.
Pela inexistncia de um tratamento efetivo para a reabsoro dentria por
substituio LIEWEHR et al.
86
, em 1995, propuseram-se a estudar o efeito dos
bisfosfonatos e do nitrato de glio nas redues da reabsoro ssea e dentinria,
nesta situao biolgica in vitro. As clulas osteoclastos-like obtidas da tbia de
frangos no perodo pr-natal foram imersas, juntamente com fatias de dentina,

57
em uma soluo salina ou em solues de bisfosfonatos do tipo etidronato,
clodronato e nitrato de glio. As reabsores mensuradas nestas fatias e os
resultados observados indicaram que os grupos experimentais no diferiram
muito entre si. Entretanto, quando comparada ao controle de soluo salina, a
reabsoro apresentou-se significantemente menor.
Para verificar as alteraes do cemento provocadas pela administrao de
10mgP/Kg de peso do bisfosfonato (etidronato) nos primeiros molares
superiores de ratos Sprague-Dawley, com 10 a 12 dias de vida, ALATLI-KUT;
HAMMARSTRM
4
, em 1996, aplicaram, via subcutnea, esse bisfosfonato em
dois grupos experimentais. No primeiro grupo, injetaram uma nica dose no 12
o

dia de vida, enquanto, no segundo grupo administraram a mesma dose,
diariamente, durante trs dias consecutivos. Outros dois grupos serviram como
controle e receberam uma de soluo salina, de acordo com os mesmos critrios
dos grupos experimentais. A morte dos animais ocorreu aps 9, 25, 35, 45 e 90
dias da administrao da droga. O preparo dos dentes obedeceu aos critrios
para a observao ao microscpio eletrnico de varredura. Os resultados
indicaram que o etidronato administrado em dose nica ou tripla inibiu a
formao do cemento acelular e alterou a formao celular na superfcie dos
molares superiores analisados. Os mecanismos que envolvem o desenvolvimento
desses cementos atpicos no foram desvendados, mas podem estar relacionados
aos efeitos seletivos do etidronato sobre uma populao especfica de clulas no
periodonto.
Durante o reparo as populaes celulares aumentam a sua proliferao
para repovoar os tecidos extirpados, o que ocorre com as clulas sseas,
cementoblsticas e do ligamento periodontal. LEKIC et al.
82
, em 1997
observaram o efeito do etidronato na diferenciao celular em reas de reparo
em quatro grupos de ratos. Administraram bisfosfonato durante uma semana,
na dosagem de 15mgP/Kg subcutaneamente, diariamente iniciando-se logo aps
a cirurgia, observando uma reduo de 40% do espao do ligamento periodontal.

58
A droga modulou as clulas do ligamento periodontal, o recrutamento de clulas
contribuintes na formao do osso alveolar e provocou uma perda de largura do
ligamento periodontal. Assim, concluram que os bisfosfonatos podem ser
utilizados terapeuticamente para alterar seletivamente a diferenciao de clulas
do ligamento periodontal e promover a formao de osso alveolar e cemento.
Estudos em roedores osteopetrticos sugerem que quando da irrupo
dentria deve ocorrer reabsoro ssea localizada. Considerando esta hiptese
GRIER; WISE
54
, em 1997 injetaram pamidronato 1,25g/gP por dia, durante 15
dias, no perodo ps-natal de ratos, com o intuito de testar uma possvel
reduo da reabsoro ssea, comparando o grupo experimental com o de
controle, recebendo soluo salina a 0,9%. A anlise em microscopia eletrnica,
microscopia tica e PCR dos resultados demonstrou que os bisfosfonatos
inibiram a erupo dos molares e incisivos aumentando o seu tempo de erupo.
O pamidronato no inibiu a expresso gnica dos mediadores da erupo
dentria como o fator estimulador de colnia- 1 e o c-fos, encontrados e
expressos no folculo dentrio. O pamidronato aumentou o tamanho dos clastos,
inclusive o nmero de ncleos, sugerindo que os precursores mononucleares se
fusionam ao formar os clastos. Constataram tambm a diminuio da habilidade
clstica ao reabsorver osso, confirmando que a erupo dentria requer
reabsoro ssea. Na concluso do trabalho os autores asseveraram que o
pamidronato reduziu a atividade osteoclstica atrasando parcialmente a erupo
sem, entretanto, inibir os mediadores da erupo.
Ao estudar o processo de mineralizao dentinria, TAKANO et al.
146
,
em 1998, verificaram o efeito inibitrio do etidronato injetado subcutaneamente
na dosagem de 8mgP/Kg, por sete a 14 dias, em ratos pesando 100g. Aps o
processamento e anlise em microscopia eletrnica no observaram alterao do
manto dentinrio sob a utilizao deste bisfosfonato.

59
Em 1999, PLATLAS et al
111
propuseram-se a estudar os efeitos
transplacentrios de dois bisfosfonatos no esqueleto fetal de ratos. Trataram
ratas prenhes do 11
o
ao 21
o
dias de gravidez com injees cutneas de
0,1mgP/Kg de alendronato ou de VSb6. Os exames microscpicos dos fetos
com 21 dias revelaram um aumento do trabeculado sseo das difises com uma
discreta diminuio das difises nos fetos experimentais em comparao aos
controles. A histomorfometria computadorizada confirmou estes resultados e
detectou ainda uma diminuio no volume da medula ssea, mas sem alterao
no volume cartilaginoso. A anlise qumica dos ossos revelou um aumento no
contedo clcico nos fetos tratados. Demonstraram que o alendronato atravessa
a barreira transplacentria e acumula-se nos ossos fetais, presumindo-se que
estes bisfosfonatos acumulam-se nos ossos por longos perodos. Estes dados
devem ser considerados durante a gravidez e a amamentao quando da
necessidade de administrao dos bisfosfonatos em mulheres grvidas.
Ao investigar a utilizao do alendronato e seus efeitos na formao de
dentina in vitro, SOMMERCORN et al.
142
, em 2000, analisaram molares e pr-
molares humanos com rizognese incompleta e os mantiveram em meio de
cultura por 60 dias. Seis espcimes desenvolveram-se em meio de cultura sem a
influncia de qualquer bisfosfonato e 22 espcimes, denominados experimentais,
desenvolveram-se sob a utilizao de alendronato. A dentina foi corada e
marcada para a avaliao de sua formao entre 1 a 3, 30 a 33 e 60 dias. No
grupo sob a influncia do alendronato o desenvolvimento apical apresentou-se
maior, com um aumento de 57,15% em relao ao grupo controle. Para estes
autores os resultados indicam que o alendronato capaz de acelerar a produo
de dentina in vitro.
Estudando os efeitos do alendronato em dentes gravemente
traumatizados, LEVIN et al.
85
, em 2001 e acreditando que esta terceira gerao
de bisfosfonatos pudesse inibir a atividade osteoclstica, trataram

60
endodonticamente e restauraram 82 razes de pr-molares de cinco ces. Aps a
extrao destas razes, 70 foram desidratadas por 40 ou 60 minutos.
Armazenaram-se 38 razes durante cinco minutos em uma soluo de 1M de
alendronato em soluo balanceada de Hanks e em seguida reimplantadas. As 32
outras razes foram embebidas tambm durante cinco minutos na mesma
soluo, mas sem o alendronato e ento reimplantadas. Nas demais 12 razes no
expostas ao ressecamento realizaram-se defeitos de 0,5mm na poro radicular
mdia lingual. Seis destas razes foram armazenadas na soluo com alendronato
durante cinco minutos e reimplantadas. As outras seis, em soluo de Hanks,
sem alendronato durante cinco minutos e ento reimplantadas. Quatro meses
aps os reimplantes efetuou-se a morte dos animais prepararam as razes para a
avaliao microscpica. Avaliaram cortes transversais considerando o estado da
raiz e dos tecidos circunjacentes. Nas 12 razes com defeitos observaram reparo
com cemento e avaliaram as superfcies danificadas. A massa radicular residual
determinou a extenso da estrutura radicular perdida em cada mtodo. O reparo
das 12 razes com defeitos cementrios artificialmente danificadas indicaram que
o meio de armazenamento no inibiu a cementognese. As razes armazenadas
na soluo com alendronato revelaram estatisticamente um reparo maior do que
as razes armazenadas na soluo sem o alendronato. O armazenamento em
alendronato resultou em uma menor perda radicular durante a reabsoro das
razes ressecadas, quando comparadas ao armazenamento das razes nas mesmas
condies, em soluo sem alendronato.
Em testes para verificar os efeitos dos bisfosfonatos em reaes
periimplantares dentrias em tbias de ratos ovarectomizados, TOKUGAWA et
al.
150
, em 2003, observaram que os bisfosfonatos facilitavam a osteointegrao
dos implantes de titnio.
Objetivando observar o efeito preventivo do alendronato na reabsoro
ssea alveolar aps cirurgia com retalho mucoperiosteal KAYNAK et al.
72
, em

61
2003, utilizaram um modelo experimental em ratos. A amostra consistiu de
animais operados recebendo injees subcutneas de soluo salina (grupo
controle) e soluo de alendronato de 0,5mgP/Kg (grupo experimental). A
administrao do medicamento realizou-se durante o perodo entre uma semana
previamente ao experimento at uma semana aps. Analisaram a intensidade do
infiltrado inflamatrio, o grau de fibrose e de colagenizao, o nmero e a
morfologia dos clastos na regio do osso alveolar e do septo interdentrio, as
lacunas de reabsoro e a atividade osteoblstica. Na microscopia ptica os
resultados revelaram diferenas estatisticamente significantes a favor do grupo
submetido ao alendronato na formao de colgeno e de fibrose, na morfologia
dos clastos e na formao de lacunas de reabsoro. Para os autores os dados
demonstraram que o alendronato, na dosagem utilizada seria eficaz na preveno
da perda ssea alveolar e na modulao dos fatores teciduais. Consideraram,
portanto, a utilizao do alendronato como uma interessante opo teraputica,
especialmente associado a outros componentes e procedimentos como: drogas
antiinflamatrias, enxertos sseos, tcnicas de regenerao tecidual guiada e at
mesmo com implantes dentrios.
Considerando a sugesto de que os bisfosfonatos seriam elementos de
preveno da reabsoro ssea associada periodontite, inibindo a atividade
clstica, TANI-ISHII et al.
148
, em 2003, observaram o efeito do incadronato na
preveno da destruio periodontal em ratos com periodontite induzida pela
Porphyromonas gingivalis. Utilizaram 35 ratos administrando-se incadronato ou
placebo por via bucal, dois dias por semanas durante dois, quatro e oito semanas.
A periodontite induzida pela Porphyromonas gingivalis promoveu uma ampla
destruio do ligamento periodontal, uma reduo da densidade ssea e a
migrao de clulas inflamatrias. Os resultados obtidos radiogrfica,
morfomtrica e microscopicamente revelaram que o incadronato aumentou a
densidade ssea mineral e preveniu a destruio do ligamento periodontal, aps
oito semanas de administrao, ocorrendo tambm uma significante reduo da

62
infiltrao de leuccitos polimorfonucleares em casos de periodontite, induzida
pela Porphyromonas gingivalis.
Os bisfosfonatos so capazes de unir-se a outros medicamentos como a
tetraciclina atuando sinergicamente na supresso da perda ssea periodontal.
Este efeito sinrgico decorre da incorporao de ambos na estrutura ssea
durante a mineralizao. Com o intuito de estudar este sinergismo YAFFE et al.

174
, em 2003, injetaram alendronato endovenosamente em grupos de ratos assim
constitudos: grupo 1, alendronato; grupo 2, doxiciclina; grupo 3, tetraciclina;
grupo 4, alendronato + doxiciclina; e grupo 5, alendronato + tetraciclina.
Realizaram nos animais cirurgias com retalho, rebatendo o peristeo da
mandbula e colocando abaixo dele bolinhas de gelfoan para atuarem como
carreadores dos medicamentos. As drogas foram aplicadas topicamente no
momento da cirurgia e a anlise das peas foram realizadas aps 21 dias, por
meio de radiomicrografias. A doxiciclina revelou-se mais eficaz na reduo da
perda ssea, mas o alendronato tambm demonstrou uma ao efetiva. Por
outro lado a tetraciclina no reduziu a perda ssea, entretanto quando associada
ao alendronato produziu um efeito sinrgico, o que no ocorreu entre
alendronato e doxiciclina. Na discusso do trabalho os autores enfatizaram seus
resultados, pois ao carregar molculas de antibiticos, os bisfosfonatos podem
otimizar seus efeitos sobre as endotoxinas ou LPS, que so muito importantes na
patogenia da doena periodontal, diminuindo a destruio dos tecidos na
evoluo e no tratamento da doena periodontal, especialmente a perda ssea
alveolar. Ressaltaram tambm seus resultados, pois ao carregar molculas de
antibiticos, os bisfosfonatos podem otimizar seus efeitos sobre as endotoxinas
ou LPS, que so fundamentais na patogenia da doena periodontal, diminuindo a
destruio dos tecidos na evoluo e no tratamento da doena periodontal,
especialmente quanto perda ssea alveolar.

63
A manuteno da espessura e altura do osso alveolar aps a perda dentria
essencial na restaurao dos dentes ausentes, com implantes osteointegrveis e
posteriores a procedimentos protticos. Ocorre um nvel variado de reabsoro
na crista ssea alveolar aps a extrao dentria principalmente nas corticais
vestibular e lingual. Considerando que o alendronato consiste em um potente
inibidor da reabsoro ssea ALTUNDAL; GUVENER
6
, em 2004, examinaram
o efeito inibitrio do alendronato na reabsoro ssea alveolar aps a exodontia,
em ratos. Para alcanar seus objetivos, estabeleceram grupos tratados com
soluo salina e com alendronato, administrado subcutaneamente, diariamente
por duas e quatro semanas em dosagens de 0,25mgP/Kg. Foram executadas
marcaes da fosfatase alcalina srica e cortes de quatro micrometros de
espessura da regio do primeiro molar inferior direito no sentido
vestibulolingual. No grupo tratado com alendronato a reduo do volume sseo
alveolar foi significantemente menor do que no grupo tratado com soluo
salina. Este resultado foi atribudo a uma pronunciada supresso da reabsoro
ssea promovida pelo alendronato.

2.5 Influncia dos bisfosfonatos no movimento dentrio induzido
Em 1988, ENGSTROM
32
estudou as reabsores radiculares em gatos
com hipocalcemia e submetidos ao tratamento com bisfosfonatos durante o
movimento dentrio induzido. Cada grupo continha oito animais. Injetaram
clodronato subcutaneamente, diariamente, duas semanas antes da instalao do
aparelho at a morte dos animais, na dosagem de 0,5mgP/Kg e aplicando uma
fora de 50g durante seis semanas. Analisaram os resultados por meio de
microscopia tica e de fosfatase alcalina. Os gatos apresentam uma conhecida
predisposio s reabsores radiculares e quando submetidos movimentao
dentria induzida apresentam nveis significantemente maiores de reabsores.
No grupo recebendo bisfosfonatos as reabsores induzidas pela movimentao

64
dentria foram significantemente menores. O movimento dentrio apresentou-se
diminudo nos grupos tratados com bisfosfonatos, mas as reabsores foram
menos freqentes.
Em 1988, COLLINS; SINCLAIR
23
demonstraram que a administrao
tpica de 1,25-diidroxicolecalciferol aumenta o grau do movimento, sem efeito
colateral bioqumico, microscpico ou clnico aparente. Aps 21 dias de
administrao de uma injeo de 1,25D no espao do ligamento periodontal de
gatos, observaram o aumento de 60% no grau de movimento. Os resultados
microscpicos revelaram reabsoro frontal dos ossos alveolares, com a
presena de numerosos clastos mononucleados e clulas precursoras clsticas.
Para verificar a influncia de dois monofosfonatos e dois bisfosfonatos na
formao dentria, FOUDA et al.
46
, 1991 injetaram subcutaneamente uma nica
aplicao de 10-30mgP/Kg de etidronato e de clodronato, em ratos de cinco,
dez e 15 dias. A anlise microscpica revelou: 1) a separao dos ameloblastos da
superfcie da matriz do esmalte e tambm observada sob a injeo de outros
monofosfonatos injetados experimentalmente, portanto no especfica dos
bisfosfonatos. Em algumas reas a superfcie do esmalte parecia
hipermineralizadas e em outras, hipoplsica; 2) os efeitos na dentina e no osso
alveolar apresentaram-se muito variados, mas em geral ocorria uma linha
hipomineralizada seguida por uma zona de dentina hipermineralizada; 3) os
odontoblastos apresentaram-se normais, com calcosferitas menores, mas sem
justificativa apresentada.
Estudando os efeitos da administrao local de etidronato sobre os
movimentos dentrios induzidos, WARITA et al.
162
, em 1992, utilizaram ratos,
com 10 semanas de vida, em que injetaram o bisfosfonato quatro vezes durante
o perodo experimental na dosagem de 1,6mgP/Kg na submucosa da regio do
septo inter-radicular dos primeiros molares superiores do grupo experimental.
No grupo controle, aplicaram uma soluo salina. Dois dias aps a primeira

65
injeo, posicionaram uma mola fechada de niquel-titnio superelstica, que
exercia 9g de fora, dos primeiros molares superiores esquerdo aos incisivos,
durante 10 dias. Aferiram a distncia entre os primeiros e segundos molares
superiores em intervalos de 0, 1, 4, 7 e 10 dias aps o incio das movimentaes
dentrias. Imolados os animais, suas maxilas receberam tratamento para a
microscopia ptica, quando foram avaliados os tecidos periodontais do septo
inter-radicular dos primeiros molares. Observaram uma diferena significativa na
quantidade de movimentao dentria entre os grupos, em todos os perodos
avaliados. As lacunas de Howship apresentaram-se escassas nas superfcies do
osso alveolar, nas regies de presso do grupo experimental, alm de se
comprovar uma diminuio do nmero de clulas gigantes multinucleadas. Esses
resultados sugeriram que a administrao local do etidronato inibiu
significativamente o grau de movimentao dentria decorrente dos efeitos
inibitrios sobre a reabsoro ssea.
Estudando a movimentao ortodntica em um modelo utilizando
coelhos com osteoporose induzida por corticosterides ASHCRAFT et al.
8
, em
1992, observaram que o movimento ortodntico ocorria mais rapidamente.
Considerando seus resultados, estes autores no recomendam que os corticides
sejam utilizados como coadjuvantes em Ortodontia. A utilizao dos
bisfosfonatos de maneira adequada poderia regularizar esta osteoporose,
propiciando o movimento dentrio induzido.
No intuito de estudar os efeitos do alendronato, um potente bloqueador
de reabsores sseas na movimentao dentria induzida em ratos, IGARASHI
et al.
35
, em 1994, desenvolveram em experimento em trs fases. Na etapa inicial,
os primeiros molares superiores dos animais foram vestibularizados, durante trs
semanas, por meio de uma mola de expanso padronizada, em concomitncia
com a administrao sistmica diria do alendronato. A movimentao dentria
total, com a aplicao de uma dose de 0,5mgP/Kg, quando comparada do
grupo controle, representou apenas 40%. Na segunda fase, os primeiros molares

66
superiores tambm foram vestibularizados durante trs semanas. Aps esse
perodo, retiraram-se as molas e iniciou-se a administrao sistmica do
bisfosfonato. A recidiva observada representou 50% da ocorrida no grupo
controle. O resultado microscpico dessas duas fases demonstrou que, nos
animais experimentais, havia menor nmero de clastos na superfcie do osso
alveolar e que foram inibidas tanto a reabsoro ssea quanto a radicular. Na
ltima etapa do experimento, os pesquisadores administraram, topicamente, o
alendronato na regio subperistea adjacente ao primeiro molar superior
esquerdo e, como resultado, notaram a inibio da movimentao dentria,
sugerindo que esse bisfosfonato pode ser til no aumento da ancoragem ou na
conteno dos dentes movimentados ortodonticamente.
Valorizando a ancoragem no sucesso do tratamento ortodntico
ADACHI et al.
1
, em 1994, propuseram-se a examinar o efeito tpico de
risedronato no movimento dentrio em 126 ratos, considerando que esta droga
constitui um potente bloqueador da reabsoro ssea. Moveram os primeiros
molares superiores para vestibular por meio de uma mola por trs semanas com
a fora de 165mN. Aps a remoo da mola iniciaram a injeo do risedronato
subperiostealmente, na rea adjacente ao primeiro molar esquerdo na dosagem
de 50l de soluo de risedronato em uma concentrao de 0, 125, 250, ou
500mol/L a cada trs dias durante as trs semanas do experimento. A mola
movendo ambos os primeiros molares produziu uma expanso e a aplicao
tpica do risedronato inibiu a recidiva. No primeiro molar direito injetaram
soluo salina a 0,9% como controle. A administrao tpica do risedronato
provocou uma significante reduo do movimento dentrio induzido pela fora
aplicada. Em sua concluso os autores sugerem que a aplicao tpica do
risedronato pode auxiliar na ancoragem dos dentes, durante tratamento
ortodntico.
Dois anos mais tarde, ALATLI; HELLSING; HAMMARSTRM
3
,
investigaram a resistncia do cemento acelular hiperplsico, resultante da

67
administrao do etidronato, reabsoro radicular, comparando sua efetividade
protetora do cemento normal, quando submetido s foras ortodnticas. Um
total de 30 ratos Sprague-Dawley recm-nascidos foram divididos em cinco
subgrupos de seis animais. Os pesquisadores administraram, em metade desses
animais uma nica injeo de etidronato, via subcutnea, na concentrao de
10mgP/Kg de peso, aos 12 dias de vida. Os demais ratos dos grupos receberam
a administrao de soluo salina, servindo como controle. Decorridos 15 dias
da administrao do frmaco, os seis animais do grupo 1 foram mortos. Nos
animais restantes foram instalados dispositivos ortodnticos colados aos
primeiros molares superiores, contornando a abbada palatina. A fora
imprimida pelos aparelhos provocou a vestibularizao dos dentes de
ancoragem. Os aparelhos permaneceram em posio por um perodo de sete
dias, nos grupos 2, 4 e 5, e 14 dias, no grupo 3. Os animais dos grupos 2 e 3
foram sacrificados imediatamente aps a remoo dos aparelhos. No grupo 4, o
sacrifcio ocorreu sete dias aps a remoo dos dispositivos, permitindo uma
recidiva das movimentaes. Antes de serem sacrificados, os animais do grupo 5
permaneceram 28 dias sem os aparelhos. As regies dos primeiros molares
superiores, preparadas pelos procedimentos histotcnicos rotineiros, foram
observadas ao microscpio ptico. Seus resultados
3
demonstraram maiores e
mais severas reabsores radiculares nos animais tratados com o etidronato,
quando comparados aos controles. Alm disso, constataram uma eliminao
mais rpida das reas hialinas nos animais tratados, possivelmente em
decorrncia de uma menor densidade dessas regies, resultante do efeito do
bisfosfonato. Nos animais controle, no foram observaradas reabsores
radiculares nas regies imediatamente abaixo das reas hialinas, diferindo dos
animais tratados em que se notaram reas de reabsoro nessas regies, que se
estendiam profundamente pela dentina.
Para examinar os efeitos da administrao do risedronato IGARASHI et
al.
67
, em 1996, analisaram a reabsoro radicular em dentes de ratos

68
movimentados bem como o reparo das superfcies radiculares aps o
movimento dentrio induzido. Em um primeiro experimento movimentaram
ambos os primeiros molares superiores para vestibular com uma mola de
expanso, sob a administrao de risedronato. Aps sete dias ocorreu uma
extensa reabsoro radicular no lado controle com um tamanho mximo da rea
afetada aos 14 dias. A administrao tpica de risedronato provocou uma
significante inibio da reabsoro dentria aps a aplicao da fora
ortodntica. Em um segundo experimento, vestibularizaram os primeiros
molares superiores por trs semanas. Aplicaram topicamente o risedronato e no
dia em que a mola foi removida, por via subperiostal na regio adjacente ao
primeiro molar na dosagem de 500mol/L a cada trs dias durante as 3 semanas
do experimento. Aps a remoo da fora as reas de reabsores foram
restauradas com o depsito de cemento reparatrio ou cementide. Avaliaram-se
os animais aos 0, 3, 7, 14 e 21 dias. A anlise microscpica revelou que a
administrao tpica de risedronato no inibiu o processo de reparo das
reabsores radiculares. Para estes autores, os resultados sugerem que a
administrao tpica de risedronato pode prevenir a reabsoro radicular durante
o tratamento ortodntico. Ao final do trabalho os autores afirmam que
possvel inibir a reabsoro radicular sem afetar significantemente o movimento
ortodntico. Sugerem tambm que futuros trabalhos determinem: a distribuio
do bisfosfonato na superfcie radicular; a concentrao necessria para inibir a
funo clstica sobre os dentes e por quanto tempo o bisfosfonato permanece na
superfcie radicular.
Com o fim precpuo de avaliar o potencial de inibio da recidiva pela
utilizaram de bisfosfonatos, KIM et al.
75
, em 1999,

avaliaram 42 ratos com 67
dias de vida submetidos movimentao dentria induzida por meio da insero
de um elastmero entre o primeiro e segundo molares. Os elsticos foram
mantidos em posio por 21 dias. Um dia antes da remoo da liga elstica os
ratos receberam uma dose intravenosa de 1,5mg/1,0mL/Kg/dia do bisfosfonato

69
pamidronato dissdico e mantidos por zero, cinco e dez dias antes da anlise
microscpica de luz e eletrnica de transmisso. De acordo com a anlise
realizada a recidiva foi menor estatisticamente aos cinco e dez dias comparados
com os controles, sendo menos proeminente aos dez dias. Apesar da dose
sistmica nica administrada os autores relatam que a diminuio da recidiva foi
evidente, observando-se alterao dos clastos com menos acmulos vacuolares,
irregularidade das bordas pregueadas, ausncia de clastos aderidos superfcie
ssea e apoptoses clsticas.
Confirmando o efeito imediato da administrao de bisfosfonato na
movimentao dentria induzida, MAZZIEIRO
93
, em 1999, avaliou
microscopicamente, a influncia do clodronato sobre a morfologia do osso
alveolar, do ligamento periodontal e do cemento dos primeiros molares
superiores de 45 ratas com 90 dias de vida, nos tempos experimentais de 24
horas, 3, 5, 7, 10 e 21 dias de movimento. Os resultados microscpicos
revelaram que a administrao do clodronato no interferiu em nenhuma das
situaes referidas, inclusive durante o movimento dentrio induzido, nas
diversas fases analisadas.
Na fase inicial da reabsoro ssea os cristais de hidroxiapatita so
desmineralizados pela acidificao subclstica em microambientes pelo tipo-
vacuolar H
+
-ATPase localizadas nas membranas das bordas pregueadas dos
clastos. As lacunas de reabsoro so formadas pela degradao do osso
colgeno tipo-I mediada pela catepsina K, uma proteinase lisossomal alta e
seletivamente expressas pelos clastos. Por meio de exames imunocitoqumicos
possvel quantificar a expresso do tipo-vacuolar H
+
-ATPase e catepsina K nos
clastos durante a movimentao dentria experimental em ratos. Desta forma,
avaliando imunocitoquimicamente a influncia do bisfosfanato pamidronato na
atuao dos clastos durante a movimentao dentria induzida
experimentalmente em ratos Wistar, SATO et al.
137
em 2000 realizaram a
insero de um elastmero entre o primeiro e o segundo molares superiores por

70
quatro dias. Administraram de uma nica dose intraperitonial de
1,5mg/1,0ml/Kg de pamidronato um dia antes da instalao do elastmero
intermolares. Os resultados sugerem que o pamidronato inibiu-se a atuao dos
clastos que exibiram bordas pregueadas irregulares, zonas claras de diferentes
extenses, decrscimo da expresso de H
+
-ATPase e catepsina K nos clastos
durante a movimentao dentria induzida.
Em uma reviso sobre os efeitos de drogas e fatores sistmicos no
movimento ortodntico TYROVOLA; SPYROPOULOS
153
, em 2001 atribuem
aos bisfosfonatos a capacidade de inibio da movimentao ortodntica, sem
apresentar qualquer metodologia experimental, citando apenas como referncia o
trabalho de MIYAJIMA; NAGAHARA; IIZUKA
97
que refere-se ao tratamento
ortodntico de apenas uma paciente ps-menopausada sem estado
osteoportico demonstrado ou relatado. Tratava-se, portanto de uma paciente
normal, apresentando apenas doena periodontal e posicionamentos dentrios
inadequados. Neste mesmo trabalho, TYROVOLA; SPYROPOULOS
153
sem
mencionar qualquer fundamentao metodolgica sugere a inibio do
movimento ortodntico quando da aplicao tpica de bisfosfonatos e o
aumento da ancoragem para o movimento ortodntico de outros dentes, sem
qualquer citao que suporte esta assertiva.
Com a finalidade de investigar os efeitos dos bisfosfonatos na
remodelao da sutura palatina de ratos aps a expanso rpida (ERM), LEE et
al.
80
em 2001, utilizaram de quatro grupos de animais submetendo-os expanso
mecnica com fora de 60g por trs dias, em 44 ratos, sendo que cada grupo
continha 11. Imediatamente aps a expanso removeram os aparelhos dos
animais de dois grupos. Em um dos grupos injetaram diariamente, durante trs
dias soluo salina; em um outro, por sete dias antes da morte dos animais. Nos
dois outros grupos injetaram subcutaneamente, diariamente, etidronato por trs
e sete dias antes de serem imolados. Ao analisarem os resultados em microscopia
tica e imunoistoqumica, avaliaram-se a quantidade de recidiva e a remodelao

71
ssea utilizando um ndice de recidiva e por meio do nmero de clastos. No
grupo controle e submetido aos bisfosfonatos por sete dias o ndice de recidiva
foi respectivamente de 54,11 e 32,53%. O nmero de clastos trs dias ps-
injeo de soluo salina foi de 15,47 enquanto que no grupo de bisfosfonato foi
5,26. Esses resultados demonstraram que o bisfosfonato aps ERM quando
combinada a uma conteno mecnica pode inibir a reabsoro ssea e garantir
uma maior estabilidade movimento. Os autores
80
indicam, portanto, a
possibilidade farmacolgica de reduzir as recidivas esquelticas aps a
mecanoterapia ortodntica.
Para estudar o movimento dentrio induzido sob condies sseas
metablicas alteradas VERNA; DALSTRA; MELSEN
157
, em 2000 utilizaram
ratos com alto e baixo turnover sseos farmacologicamente induzidos, e
compararam com um grupo de animais normais. O alto e baixo turnover foram
obtidos injetando-se hormnio T4 e dieta com restrio de iodo,
respectivamente. Aplicaram foras no primeiro molar inferior por um perodo de
trs semanas por meio de molas fechadas, estiradas do molar ao incisivo
superior. Mensuraram o deslocamento dentrio por meio de uma sonda
eletrnica e pela inclinao dentria por meio de um tomgrafo especfico para
avaliao dentria. Nos animais com alto turnover sseo, o movimento dentrio
apresentou-se maior e no de baixo turnover, menor. Concluram que os desvios
metablicos do turnover sseo influenciam na remodelao durante o
movimento ortodntico, sugerindo que esta condio seja considerada no
planejamento ortodntico em pacientes com doenas sseas metablicas ou que
tomem medicamentos de forma crnica para regular o metabolismo sseo. Em
um segundo trabalho de 2003, estas mesmas autoras
157
utilizando o mesmo
modelo experimental e uma anlise histomorfomtrica, observaram que apesar
das condies metablicas afetarem a qualidade do movimento dentrio
induzido, no ocorreram diferenas significantes em termos de reabsores
dentrias, quando de turnover sseo alterado. Entretanto, mesmo assim sugerem

72
que em pacientes com turnover sseo diminudo pode-se esperar nveis mais
elevados de reabsoro dentria.

PROPOSIO

Proposio

74

3 PROPOSIO

As premissas para a proposio deste trabalho foram as informaes e
questionamentos resgatados da literatura e a experincia adquirida com o modelo
experimental de movimentao dentria induzida em ratos, que permitem avaliar:
as alteraes na morfologia ssea dos maxilares, inclusive as
decorrentes da ao de medicamentos utilizados no tratamento de
vrias doenas e com uso simultneo no tratamento ortodntico;
os fenmenos biolgicos relacionados movimentao dentria
induzida e suas variveis, incluindo-se a ao dos medicamentos que
possam influenciar a sua qualidade e velocidade;
a freqncia, intensidade e morfologia das reabsores dentrias e os
efeitos de variveis fsicas, biolgicas e qumicas como a possibilidade
dos medicamentos aumentarem a resistncia reabsoro radicular;
Conseqentemente, no presente experimento propusemo-nos a:
avaliar os efeitos dos bisfosfonatos, especificamente do alendronato,
sobre os fenmenos celulares e teciduais prprios da movimentao
dentria induzida;
avaliar a influncia dos bisfosfonatos, especialmente do alendronato,
na freqncia e morfologia da reabsoro nos dentes movimentados;
comparar os resultados e avaliar os fundamentos biolgicos da
hiptese na qual a incorporao dos bisfosfonatos durante a
odontognese e rizognese aumentaria a resistncia s reabsores.

MATERIAL E MTODOS

Material e Mtodos

76

4 Material e Mtodos

4.1 Amostragem
Os animais envolvidos neste projeto constituram um total de 86, cujos
molares foram seccionados longitudinal e transversalmente para a avaliao
microscpica. Entretanto, os 30 animais cujos molares foram cortados
transversalmente sero analisados em outro trabalho. Os molares dos 56 animais,
27 machos e 29 fmeas, participantes da amostra avaliada neste trabalho foram
seccionados no sentido longitudinal.
Portanto a amostra deste trabalho constituiu-se de 56 ratos da linhagem
Wistar (Rattus norvegicus, albinus), 47 com mdia de 120 dias de vida e os 9
restantes com mdia de 216 dias, provenientes do Biotrio Central da Faculdade
de Odontologia de Bauru, da Universidade de So Paulo. Durante todo o
perodo experimental, os animais permaneceram acondicionados em gaiolas,
contendo cada uma, de 3 a 6 animais. Manteve-se o ambiente com iluminao
natural e temperatura ambiente, apresentando-se constantemente limpo e
arejado. A alimentao dos animais constituiu-se de rao de nome comercial
Labina, da marca Purina fornecida ad libitum, assim como o provimento de gua.
Mantiveram-se os animais durante a administrao do bisfosfonato e
acasalamento no Biotrio Central da Faculdade de Odontologia de Bauru at os
90 dias e posteriormente no biotrio da Disciplina de Patologia Bucal da
FOB/USP, durante a fase de instalao dos aparelhos at o final do
experimento. Durante o perodo em que os animais permaneceram com o
aparelho em posio a alimentao constituiu-se da mesma rao, triturada em

O protocolo sugere que os nmeros ordinais de 0 a 10 sejam escritos por extenso. Entretanto, para a maior
facilidade de compreenso dos dados a respeito do nmero de animais por grupo e dos dias de movimentao,
optou-se pela forma numrica de apresentao.

Material e Mtodos

77
um pequeno pilo e depositada em um recipiente de vidro em cada gaiola, da
mesma forma sem restrio quanto quantidade. A triturao da rao objetivou
reduzir o esforo durante a mastigao, evitando a danificao e a remoo dos
dispositivos ortodnticos pelos animais, durante a alimentao.

4.1.1 Distribuio dos animais e qualificao da amostra
Dividimos a amostragem em 4 grupos distintos, sendo que cada um destes
subdivide-se em grupos submetidos ou no movimentao dentria induzida
(c/MDI e s/MDI) sob diferentes protocolos de medicao com o bisfosfonato
alendronato. Os grupos sem medicao ou controle foram institudos com o
intuito de observar as caractersticas advindas apenas do medicamento
empregado nas estruturas sseas e dentrias, sem interferncia da movimentao
dentria.
Procedemos instalao dos aparelhos ortodnticos movimentando
mesialmente o primeiro molar superior esquerdo, ancorando-o nos incisivos
superiores.

Grupo Controle: constitudo por 27 animais no submetidos medicao
com o bisfosfonato.
Controle s/MDI: constitudo por 10 animais, sem qualquer
medicao e no submetidos movimentao dentria induzida:
4 machos e 6 fmeas sem movimentao e sem medicao;
Controle c/MDI: constitudo por 17 animais no submetidos
medicao com o bisfosfonato e com movimentao dentria
induzida durante 3, 5 e 7 dias:
Material e Mtodos

78
6 fmeas submetidas a 3 dias de movimentao;
4 machos e 2 fmeas submetidos a 5 dias de movimentao;
e 5 fmeas submetidas a 7 dias de movimentao dentria
induzida.

Grupo Experimental: constitudo por 31 animais submetidos medicao
com o bisfosfonato desde a vida intrauterina at o momento de imolao dos
animais. Este o grupo principal do estudo e foi institudo no af de
constatar os efeitos da incorporao do alendronato tanto nos dentes como
no osso.
Grupo Experimental s/MDI: constitudo por 9 animais medicados
com o bisfosfonato, desde a vida intrauterina e no submetidos
movimentao dentria induzida:
6 machos e 3 fmeas medicados desde a vida intrauterina e sem
movimentao.
Grupo Experimental c/MDI: constitudo por 22 animais
submetidos medicao com o bisfosfonato desde a vida intrauterina
at final do experimento e com movimentao dentria induzida
durante 3, 5 e 7 dias, antes de efetuada a imolao dos animais:
6 machos e 3 fmeas submetidos a 3 dias de movimentao;
6 machos e 1 fmea submetidos a 5 dias de movimentao;
3 machos e 3 fmeas submetidos a 7 dias de movimentao.

Material e Mtodos

79
Grupo Ensaio 1: constitudo por 14 animais submetidos medicao com o
bisfosfonato desde a vida intrauterina at os 74 dias de vida, quando se
interrompeu o fornecimento de alendronato at a imolao dos animais, 41,
43 e 45 dias depois. Este grupo foi institudo secundariamente com o
objetivo de avaliar a incorporao dos bisfosfonatos nos dentes e permitir a
eliminao deste do osso. Desta forma interrompeu-se a medicao,
permitindo o turnover do osso murino que se renova a cada ms
87
.
Grupo Ensaio 1 s/MDI: constitudo por 6 animais no submetidos
movimentao ortodntica e medicados com o bisfosfonato desde a
vida intrauterina at os 74 dias de vida, quando se interrompeu o
fornecimento de alendronato, at a imolao dos espcimes:
4 machos e 2 fmeas sem movimentao, medicados at os 74
dias de vida e imolados aos 117 (machos) e 119 dias (fmeas).
Grupo Ensaio 1 c/MDI: constitudo por 8 animais submetidos
medicao com o bisfosfonato desde a vida intrauterina at os 74 dias
de vida, quando se interrompeu o fornecimento de alendronato, at a
imolao dos animais aos 115, 117 e 119 dias. A movimentao
dentria induzida destes espcimes procedeu-se por 3, 5 e 7 dias antes
de efetuada a imolao dos animais e 41, 43 e 45 dias aps a
interrupo da terapia com o bisfosfonato:
2 fmeas com 3 dias de movimentao, imoladas aos 115 dias;
4 machos com 5 dias de movimentao, imolados aos 117 dias;
2 fmeas submetidas a 7 dias de movimentao, imoladas aos 119
dias.

Material e Mtodos

80
Grupo Ensaio 2
*
: constitudo por 9 animais submetidos medicao com o
bisfosfonato a partir do 118 dia de vida at a data da imolao destes; 96, 98
e 100 dias depois. Inmeros pacientes adultos recebem rotineiramente
medicao com bisfosfonatos, aps o trmino da rizognese e so
submetidos a tratamento ortodntico. Este grupo foi institudo
secundariamente com a finalidade de observar o que ocorre na
movimentao de dentes deste tipo de pacientes, com bisfosfonatos
incorporados apenas estrutura ssea e no aos dentes.
Grupo Ensaio 2 s/MDI: constitudo por 8 animais no submetidos
movimentao ortodntica e medicados com o bisfosfonato a partir
do 118 dia de vida at a data da imolao dos espcimes:
4 machos e 4 fmeas sem movimentao, medicados a partir do
118 dia de vida at a data da imolao; aos 96 e 98 dias.
Grupo Ensaio 2 c/MDI : constitudo por 9 animais submetidos
medicao com o bisfosfonato a partir do 118 dia de vida at o final
do experimento. A movimentao dentria induzida destes espcimes
procedeu-se por 3, 5 e 7 dias antes de imolados.
3 fmeas com 3 dias de movimentao, imolados aos 214 dias;
3 machos com 5 dias de movimentao, imolados aos 216 dias;
2 fmeas e 1 macho submetidos a 7 dias de movimentao,
imolados aos 218 dias.

*
O Ensaio 2 foi institudo como forma de eticamente aproveitar todos os espcimes envolvidos para a obteno
dos animais com bisfosfonatos incorporados s estruturas dentrias. Este grupo foi constitudo pelos
progenitores dos animais submetidos medicao com bisfosfonatos desde a vida intrauterina.
Material e Mtodos

81

s/MDI 3 dias 5 dias 7 dias Total
4 0 4 0 4
Controle
10
6
6
6

6
2
5
5
27
13
6 6 6 3 15
Experimental
9
3
9
3

7
1
6
3
31
7
4 0 4 0 4
Ensaio 1
6
2
2
2

4
0
2
2
14
4
4 0 3 1 4
Ensaio 2
8
4
3
3

3
0
3
2
17
5
18 6 17 4 27
Total 33
15
20
14
20
3
16
12
89
29
Tabela 4.1 - Desenho experimental deste trabalho, relacionando-se o gnero e nmero de
animais por grupo e subgrupo.

4.2 Administrao e preparo do medicamento
Os ratos receberam o medicamento, por via bucal, sempre no mesmo
perodo do dia, por meio de uma cnula introduzindo o medicamento
diretamente no trato gastrintestinal.
A dosagem do bisfosfonato utilizado, alendronato sdico, da marca
comercial Alendil (Farmoqumica) foi calculada de acordo com a equivalncia do
peso dos animais dose recomendada a um humano adulto que consiste em um
comprimido semanal de alendronato sdico de 70mg
69,139
, ou seja, 1mgP/Kg.
Considerando que o ndice metablico de murinos apresenta-se duas vezes
maior que o de humanos
10,73
, as doses administradas em todo o experimento
foram de duas doses semanais de 1mgP/Kg.
Calculou-se a quantidade de medicamento em cada comprimido pesando
350mg. Posteriormente, calculava-se o peso de comprimido fragmentado para a
Material e Mtodos

82
quantidade de ratos a receber o medicamento adicionado a uma dose a mais,
descontando uma pequena perda de material durante a manipulao, evidenciada
em procedimento piloto.
Para a manuteno da regularidade da dosagem de acordo com o peso dos
animais, foram necessrias repesagens semanais de 1 macho e de 1 fmea de
cada grupo para a realizao de um novo clculo. Realizou-se este procedimento
de redosagem mesmo para os ratos j adultos, apresentando perceptivelmente
um aumento de tamanho e peso dos animais aps o incio da administrao do
alendronato sdico.
Aps a dosagem do medicamento e pesagem do fragmento do
comprimido, este era triturado com um grau e pistilo e dissolvido em gua
destilada, permanecendo esta soluo em um Becker sobre o agitador durante
10 minutos. Devido ao pouco potencial de dissoluo dos componentes do
comprimido e evitando a decantao do material, a soluo era aspirada por
seringas na dosagem individual por rato, ainda com o Becker sobre o agitador,
quando as partculas ainda estavam suspensas. Conforme o previsto ocorria
sempre uma pequena perda de material, que como descrito, j havia sido
descontada.
As seringas eram tampadas com as agulhas encapadas e voltadas para
baixo, permanecendo em um vidro na posio vertical, de forma que o material
decantado permanecia na ponta da seringa e era o primeiro elemento ingerido
pelos animais.
Realizava-se a administrao acoplando-se as seringas a uma sonda uretral
cortada com o comprimento de 7cm, imediatamente antes da introduo da
cnula da sonda no trato gastrintestinal, que facilmente introduzida pela
garganta do animal em qualquer idade, sem risco de regurgitao do
medicamento.
Material e Mtodos

83
O primeiro grupo a receber o medicamento foi o Ensaio 2, no 118 dia de
vida. Tratava-se inicialmente de um grupo de 12 ratos, 6 machos e 6 fmeas, ou
seja 6 casais. Estes animais foram postos para o acasalamento duas semanas aps
o incio da administrao do alendronato sdico. Os animais dos Grupos
Experimentais 1 e 2 receberam, portanto desde a vida intrauterina o
medicamento, pois este capaz de ultrapassar a barreira transplacentria.
Os progenitores adultos, tanto os machos quanto as fmeas, continuaram
a receber o alendronato sdico at a data de imolao, aos 96, 98 e 100 dias
depois. Estes casais deram origem a 54 animais que aps o desmame receberam
o medicamento via bucal, da mesma forma j descrita. Dos animais obtidos
destes acasalamentos, 36 participam deste trabalho onde se realizaram cortes
longitudinais das peas de anlise. Os 18 demais foram designados para os cortes
transversais, para outro trabalho.
O Grupo Experimental recebeu o medicamento inclusive durante o
perodo em que permaneceram com o aparelho ortodntico at a data de
imolao aos 98, 100 e 102 dias.
O Grupo Ensaio 1 recebeu medicamento at o 74 dia de vida quando se
interrompeu a sua administrao. Instalou-se o aparelho nos animais deste grupo
7 dias antes de imolados os espcimes; 41, 43 e 45 dias aps a interrupo da
medicao.

4.3 Anestesia dos animais
Para os procedimentos de instalao dos aparelhos ortodnticos os
animais foram anestesiados com uma nica dose contendo a mistura de
1mlP/Kg de cloridrato de xilazina (nome comercial Anasedan da marca Purina),
um sedativo relaxante muscular analgsico, e cloridrato de ketamina (nome
Material e Mtodos

84
comercial Dopalen tambm da marca Purina), anestsico geral injetvel, ambos os
medicamentos de uso veterinrio. Injetou-se a mistura anestsica por via
intraperitoneal, obtendo-se um perodo de duas a quatro horas de anestesia.

4.4 Instalao e ativao dos aparelhos para movimentao dentria
Aps a perda de sentidos dos animais em decorrncia da anestesia
realizava-se o posicionamento em uma mesa operatria, modificada por
SALES
134
, a partir de HOUSTON
61
. Instalaram-se os dispositivos para a
movimentao dentria induzida, construdos de acordo com HELLER;
NANDA
59
, com alguns aprimoramentos desenvolvidos a partir de um projeto
piloto.
Para a instalao do dispositivo ortodntico foram essenciais os seguintes
componentes e materiais:
uma mesa operatria modificada por SALES
134
, partir de
HOUSTON
61
(Figura 4);
uma mola de ao espiralada fechada de 4mm de comprimento com
fio de .006 x .022 polegadas, da marca comercial Morelli;
fio de amarrilho 0,12 milmetros, fornecidos pela empresa Morelli de
materiais ortodnticos;
fio de ao inox com 0,25 milmetros, tambm Morelli;
um compasso de pontas secas;
um compasso de Willis;
um alicate de corte de amarrilho;
um porta agulha Mathieu, 11cm;
uma pina clnica;
Material e Mtodos

85
um dobrador de amarrilho;
uma broca diamantada fina 2200F da KG Sorensen;
resina composta da marca comercial 3M, Concise Ortodntico;
microbrush, da marca KG brush;
um compressor e uma seringa trplice;
uma caneta de alta rotao Kavo;
e um refletor odontolgico.

Figura 4 - Posicionamento do animal na mesa cirrgica especfica para trabalhos
intrabucais em ratos anestesiados e acesso cavidade bucal por meio de
instrumentos.

A
B
Material e Mtodos

87
Cada aparelho instalado nos animais (Figuras 5, 6 e 7) foi confeccionado
metodicamente seguindo os seguintes passos, sempre sob a luz do refletor
odontolgico:
1. Preparo das molas utilizadas:
Realizamos trs marcas consecutivas no rolo de mola fechada
previamente ao corte, utilizando para esta marcao o alicate de
corte de amarrilho. A primeira marca aproximadamente 2 a 3
helicoides frente da segunda, h exatos 4mm da marca anterior,
aferida com o compasso de pontas secas previamente calibrado
pelo compasso de Willis.
Uma ltima marca 2 a 3 helicides aps a segunda marca. E assim
sucessivamente. Cada mola ento era composta dos 4mm efetivos
para a ativao e 2 a 3 helicides em cada extremidade para a
unio dos amarrilhos aos dentes.
Dois segmentos de fio de amarrilho de 0,25mm de
aproximadamente 7cm de comprimento eram amarrados a uma
nica extremidade da mola e cada segmento era unido em suas
pontas para no se soltarem da mola. Uma vez prontas as molas
iniciava-se a instalao propriamente dita.
2. Unio da mola ao primeiro molar superior esquerdo:
Utilizando um porta agulha Mathieu e afastando-se a mucosa
jugal do rato com uma pina clnica, inseria-se inicialmente por
lingual e pelo espao interproximal entre o primeiro e segundo
molares superiores esquerdos, a ponta de um segmento de fio de
aproximadamente 7cm de amarrilho 0,12mm. Esta ponta de 5mm
era previamente manipulada tomando a forma de anzol. Esta
Material e Mtodos

88
passagem requer treinamento para ser realizado com sucesso e
com um mnimo de dano aos tecidos periodontais circundantes.
Uma vez apreendida a ponta deste anzol por vestibular do
espao interproximal com o porta agulha Mathieu, puxava-se o
fio at a metade de seu comprimento.
Inserimos a ponta da poro lingual deste segmento de amarrilho
extremidade livre da mola, amarrando-o de forma que a mola
se posicionasse por mesial e o mais prximo possvel da coroa do
primeiro molar superior esquerdo. O fio de amarrilho 0,12mm
seria anlogo a uma banda, abraando o primeiro molar superior
esquerdo e ao mesmo tempo fixando uma das extremidades da
mola.
Normalmente, os trabalhos realizam a unio da mola ao incisivo superior
esquerdo apenas, no mximo fixando esta unio com resina composta.
Entretanto, no trabalho piloto ocorreram dificuldades como quebras dos
aparelhos pela interferncia dos incisivos inferiores durante a alimentao e/ou
quebra do incisivo superior esquerdo, mesmo triturando a rao ingerida pelos
animais. Portanto, no af de garantir a integridade dos aparelhos e a fidelidade
metodologia empregada, implementamos ainda uma amarrao sobressalente,
tambm com fio 0.25mm no incisivo superior direito, conforme descrio a
seguir:
3. Unio da mola aos incisivos superiores:
Utilizando uma broca tronco cnica diamantada fina em alta
rotao, devidamente refrigerada, realizaram-se nas faces distais e
mesiais de ambos os incisivos superiores, sulcos de reteno o
mais cervical possvel. As bordas das retenes apresentavam um
Material e Mtodos

89
ngulo vivo, nunca arredondado, possibilitando uma maior
apreenso do fio.
Cada segmento de fio 0,25mm previamente unidos extremidade
da mola eram ento amarrados aos incisivos. Cada segmento de
fio para cada incisivo separadamente, distendendo a mola 2mm.
Realizamos a aferio do comprimento da mola em 6mm com o
compasso de pontas secas, calibrado pelo compasso de Willis, a
cada amarrao sistematicamente, garantindo assim o
comprimento exato da mola, ao final do procedimento.
A fora despendida por esta distenso da mola sobre o primeiro molar
superior esquerdo foi de 75cN
70
medida e padronizada previamente com um
dinammetro da marca Morelli de 25 a 250g, devidamente calibrado e aferido.
Devido s propriedades do ao, esta fora dissipava-se gradualmente ao longo
dos dias em que o aparelho permanecia na cavidade bucal.
Finalmente, aps o condicionamento cido, depositava-se uma
camada de resina composta Concise Ortodntico recobrindo os
fios de amarrilho ao redor dos incisivos. Realizava-se tambm o
recobrimento dos fios de amarrilho 0,25mm por lingual at a
extremidade da mola, protegendo-a da interferncia dos incisivos
inferiores durante a alimentao.
A resina depositada sobre os fios de amarrilho 0,25mm, por lingual dos
incisivos at a extremidade da mola, serviu-nos de alarme quanto a uma quebra
dos aparelhos. Todos os dias os ratos eram examinados quanto ao correto
posicionamento do dispositivo ortodntico(Figuras 5, 6 e 7). Os espcimes que
no mais apresentassem a resina em posio eram ento anestesiados novamente
para um novo recobrimento de resina nesta posio, evitando o contato direto
dos incisivos inferiores sobre o aparelho.
Material e Mtodos

90
Desta forma (Figuras 5, 6 e 7), no ocorreu nenhuma quebra de aparelho
durante o perodo experimental e nem tampouco se realizou qualquer ativao
adicional. O correto posicionamento dos aparelhos foi conferido diariamente,
no ocorreu nenhuma fratura e seu correto posicionamento era conferido
diariamente.
Os incisivos superiores serviram desta forma como ancoragem para o
movimento mesial do primeiro molar superior esquerdo, no sendo avaliados
neste estudo.
Conforme mencionado, alguns segmentos de molares superiores do lado
direito foram preparados para a observao microscpica objetivando verificar
as caractersticas advindas apenas do medicamento empregado nas estruturas
sseas e dentrias sem a interferncia da movimentao dentria induzida.

Figura 5 - Aspectos intrabucais do rato e passos da instalao do aparelho especfico para
movimentao dentria induzida do primeiro molar superior esquerdo.

Figura 6 - Desenho do aparelho para movimentao dentria induzida do primeiro molar superior
esquerdo de ratos e seu posicionamento demonstrado em peas cirrgicas do
experimento. Em D, a pea cirrgica foi desmineralizada e seccionada para incluso e
obteno de cortes teciduais para exame microscpico.
A
B
C
D
A B C

Figura 7 Aspectos estereomicroscpicos dos aparelhos de movimentao dentria induzida instalados
nos primeiros molares de ratos e seu efeito aos 7 dias imediatamente aps a sua remoo.

E
F
G
H
A
B
C
D
Material e Mtodos

93
4.5 Imolao dos animais, obteno e preparo histotcnico das peas
cirrgicas
Ao trmino dos perodos experimentais os animais foram imolados por
meio de dose excessiva da mistura anestsica ketamina e xilazina. Em seguida,
utilizando tesouras ris e Metzembaum, os animais foram decapitados
procedendo com a dessecao, removendo-se os componentes epiteliais e
musculares circundantes maxila. Padronizou-se o modus operandi e a quantidade
de dessecao evitando que uma quantidade excessiva de tecido remanescente
interferisse na velocidade de desmineralizao intergrupos ou interespcimes.
As maxilas foram colocadas em uma soluo tamponada de formol a 10%,
para fixao, permanecendo nesta soluo at a obteno de todos os espcimes
do experimento para a realizao simultnea da desmineralizao das peas.
Realizamos a desmineralizao em soluo de Morse, por um perodo de
uma semana, sendo a soluo trocada a cada 2 dias e o ponto de
desmineralizao verificado todos os dias. Como o processo de desmineralizao
nesta soluo extremamente rpido foi necessrio por vezes sua verificao do
processo em algumas peas a cada 6 ou 12 horas, para a obteno do ponto
perfeito de corte. O julgamento do ponto de corte utilizando a soluo
desmineralizadora de Morse demandou treinamento prvio e controle minucioso
para evitar a perda de peas.
Para observao imediata utilizamos uma lupa. Os remanescentes do
aparelho foram removidos apenas aps a desmineralizao das peas com alicate
de corte de amarilho.
Utilizando uma lmina de barbear para cada pea, realizou-se o preparo
macroscpico das maxilas desmineralizadas, que se constituiu da seguinte
seqncia:
Material e Mtodos

94
1. Um corte inicial frontal 4mm frente dos primeiros molares
superiores ( frente da segunda prega palatina anterior aos molares
superiores) com uma inclinao de aproximadamente 45, dividindo
a maxila em 2 segmentos, anterior e posterior.
2. Um corte no sentido ntero-posterior, perpendicular ao plano
oclusal no centro do palato eqidistante dos molares superiores
esquerdos e direitos, separando as hemimaxilas. Em seguida,
procedia-se com a toilette das peas.
3. Um corte vertical bastante conservador, paralelamente ao longo
eixo do primeiro molar, determinando o plano de corte por
vestibular de cada segmento de molares superiores, no sentido
mesiodistal (Figuras 8, 9 e 10).
No estudo piloto, verificamos que extremamente arriscado realizar este
corte dividindo os molares ao meio no sentido mesiodistal (Figuras 8, 9 e 10).
Esta manobra pode comprometer a visualizao da rea adequada para a anlise
microscpica, quando do posicionamento do bloco no micrtomo.
4. Complementamos o acabamento das peas com um ajuste do plano
de corte com delicado refinamento. Este ajuste envolveu no mesmo
plano pelo menos as razes mesial e distal do primeiro molar
superior.
Foi possvel observar macroscopicamente e sem lupa o aumento do
espao interproximal entre o primeiro e segundo molar superior esquerdo, nos
espcimes submetidos movimentao dentria induzida por mais de 5 dias
(Figura 7).
Material e Mtodos

95
Em seguida aos cortes macroscpicos, as peas foram armazenadas
individualmente, juntamente com as respectivas identificaes, em formol a
10% e desidratadas em banhos sucessivos de lcool e parafina.
Incluram-se os segmentos de molares superiores parafinizados no sentido
mesiodistal, paralelamente ao longo eixo dos primeiros molares (Figuras 8, 9 e
10). As peas foram ajustadas utilizando uma pina clnica e realizando uma
suave presso do plano de corte de encontro no fundo da caixa.
Realizou-se o posicionamento dos blocos no micrtomo de forma que a
primeira parte desgastada fosse a menos importante, envolvendo o terceiro e o
segundo molar at que o corte englobasse toda a pea e atingisse a regio do
primeiro molar superior. Controlaram-se os cortes passo a passo, observando a
seqncia no microscpio tico, mesmo sem colorao e orientando o
aprimoramento do posicionamento do bloco. Desta forma, possibilitou-se a
obteno das razes mesial e distal do primeiro molar superior em um mesmo
corte.
Em cada lmina visualizamos cinco cortes em mdia. Estas lminas
receberam colorao pelo mtodo hematoxilina-eosina de Harris e Lison. Aps a
montagem das lamnulas de vidro em resina e secagem, acondicionamos as
lminas identificadas e os respectivos cortes corados, em caixas apropriadas,
armazenadas em ambiente seco e fresco.

4.6 Anlise microscpica
Examinaram-se os cortes teciduais provenientes do processamento
histotcnico em com microscpio binocular Olympus CH-2.

A
B
C D

Figura 8 Aspectos anatmicos do crnio e da mandbula de ratos adultos jovens com trs meses de
idade.

Figura 9 Aspectos anatmicos dos dentes murinos no contexto do crnio e em corte longitudinal para
demonstrar suas relaes com o tecido sseo alveolar e com os incisivos.
A
B
A
Material e Mtodos

98
4.6.1 Critrios de anlise dos fenmenos microscpicos relacionados
movimentao dentria induzida (Figuras 10 26)
Os primeiros molares superiores esquerdos dos animais foram observados
tanto nas regies apicais quanto cervicais. Observa-se um padro de distribuio
de foras caracterstico deste modelo experimental, portanto, nas regies
cervicais pode-se observar com maior exuberncia os fenmenos da
movimentao dentria induzida. No tero cervical da raiz mesial do primeiro
molar murino podem-se analisar os fenmenos microscpicos produzidos pela
aplicao de uma fora suave ou moderada. J no tero cervical da raiz distal,
podem-se observar os fenmenos produzidos por uma fora intensa (Figura
10), sendo esta regio a de maior interesse para o estudo das reabsores
dentrias.
Aos fenmenos teciduais e celulares passveis de serem observados
durante a movimentao dentria induzida foram determinados escores de 0 a
20, de acordo com a sua intensidade. Para cada perodo avaliado no experimento
este mesmo critrio foi adotado. Estes fenmenos esto classicamente
demonstrados na literatura pertinente
24,25,108,119,120,155,156
. Os registros dos escores
foram realizados em quadros especificamente idealizados para esta finalidade
como se demonstra no captulo de resultados e no apndice. Para cada grupo e
subgrupo se estabeleceu a mdia dos escores que permitiu abordagens
comparativas de cada condicionante varivel do experimento. Os escores
correspondiam aos seguintes fenmenos:

0 = normal;
1 = reas hialinas focais;
2 = reabsoro ssea frontal;
3 = reas hialinas segmentares em at da extenso do ligamento periodontal;
4 = reas hialinas segmentares em a da extenso do ligamento periodontal;
5 = reas hialinas segmentares em a da extenso do ligamento periodontal;
6 = reas hialinas segmentares em mais da extenso do ligamento periodontal;

Figura 10 Morfologia e relaes dos tecidos dentrios murinos com o tecido sseo
alveolar e gengival. O esmalte apresenta-se preenchido, a dentina branca e o
cemento pontilhado. Destaca-se a forma de clava das razes dos molares em
funo da espessura do cemento apical. Na regio cervical da raiz mesial
do primeiro molar superior esquerdo (seta fina) observam-se os
fenmenos microscpicos produzidos por uma fora suave ou moderada
e na regio cervical da raiz distal, os fenmenos produzidos por uma
fora intensa (seta cheia).
A
A
B
Material e Mtodos

100
7 = reabsoro ssea distncia focal discreta;
8 = reabsoro ssea distncia focal moderada;
9 = reabsoro ssea distncia focal intensa;
10 = reabsoro ssea distncia generalizada discreta;
11 = reabsoro ssea distncia generalizada moderada;
12 = reabsoro ssea distncia generalizada intensa;
13 = reabsoro dentria superficial (cementria) de at da extenso da raiz;
14 = reabsoro dentria profunda (dentinria) de at da extenso da raiz;
15 = reabsoro dentria superficial (cementria) de a da extenso da
raiz;
16 = reabsoro dentria profunda (dentinria) de a da extenso da raiz;
raiz;
19 = reabsoro dentria superficial (cementria) de mais da extenso da
raiz;
20 = reabsoro dentria profunda (dentinria) de mais da extenso da raiz.

Realizou-se de forma metodizada o registro do escore mais grave
observado para cada animal, em quadros como o exemplificado na pgina
seguinte:

Material e Mtodos

101

Escores de Fenmenos Teciduais e Celulares
Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
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B
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
A
B
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c
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
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c
a
l

F
Material e Mtodos

102
4.7 Anlise estatstica
Aos resultados referentes s regies de presso cervical moderada e
intensa aplicaram-se os testes Quiquadrado, Kruskal-Wallis e Dunn para a
verificao das diferenas intergrupos.
Decorridos 30 dias da primeira anlise microscpica selecionaram-se
aleatoriamente 30 casos e compararam-se os resultados da primeira e da segunda
anlise da regio de presso cervical intensa, obtendo-se o ndice Kappa da
avaliao intra-examinador (de um nico examinador). Os dados para a
interpretao qualitativa do resultado deste teste apresentam-se a seguir:

Coeficiente Kappa Nvel de concordncia
< 0,00 -
0,00 0,20 Baixo
0,21 0,40 Mdio
0,41 0,60 Moderado
0,61 0,80 Substancial
0,81 1,00 Quase perfeito

Quadro 4.1 Quadro de transformao e interpretao do ndice Kappa dos resultados
quantitativos em variveis qualitativas de acordo com LANDIS; KOCH
77
.
Material e Mtodos

100
7 = reabsoro ssea distncia focal discreta;
8 = reabsoro ssea distncia focal moderada;
9 = reabsoro ssea distncia focal intensa;
10 = reabsoro ssea distncia generalizada discreta;
11 = reabsoro ssea distncia generalizada moderada;
12 = reabsoro ssea distncia generalizada intensa;
13 = reabsoro dentria superficial (cementria) de at da extenso da raiz;
14 = reabsoro dentria profunda (dentinria) de at da extenso da raiz;
raiz;
raiz;
19 = reabsoro dentria superficial (cementria) de mais da extenso da
raiz;
20 = reabsoro dentria profunda (dentinria) de mais da extenso da raiz.

Realizou-se de forma metodizada o registro do escore mais grave
observado para cada animal, em quadros como o exemplificado na pgina
seguinte:

Material e Mtodos

101

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
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c
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l

F

RESULTADOS

Resultados

104

5 Resultados

Os resultados sero apresentados considerando-se dois tpicos principais:
a anlise microscpica semiquantitativa, a partir dos escores estabelecidos, e a
anlise microscpica descritiva a partir de observaes morfolgicas
comparativas entre os grupos experimentais e seus respectivos subgrupos
determinados pelo tempo transcorrido.

5.1 Anlise microscpica semiquantitativa
Aplicou-se o ndice Kappa para a anlise da calibrao intra-
examinador, sobre uma nova leitura de 30 dos cortes microscpicos,
exaustivamente conferidos na checagem dos critrios de observao e
determinao do escores. O coeficiente de concordncia apresentou o valor de
0,85, que de acordo com o quadro (Quadro 4.1) de transformao
77
corresponde qualitativamente a um nvel quase perfeito.

O protocolo sugere que os nmeros ordinais de 0 a 10 sejam escritos por extenso. Entretanto, para a maior
facilidade de compreenso dos dados a respeito do nmero de animais por grupo e dos dias de
movimentao, optou-se pela forma numrica de apresentao.

Resultados

105
5.1.1 Mdia dos escores progressivos e resultados estatsticos quanto
comparao intergrupos dos fenmenos teciduais

Foras Moderadas Foras Intensas
Tero cervical Tero apical Tero cervical Tero apical
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
Grupos
Controle 0 1,83 2,00 1,60 0 2,16 4,00 6,20 0 7,50 13,8 16,2 0 1,16 2,50 1,40
Experimental 0 1,66 1,28 1,50 0 0,33 0,71 3,00 0,11 6,00 6,42* 8,16* 0 0,22 0,28 0
Ensaio 1 0,16 2,00 1,75 1,00 0 1,50 0,75 0 0 5,50 5,75* 10,5** 0 0 0 0
Ensaio 2 0,25 2,00 2,00 1,66 0 0,25 3,00 0 0 7,00 7,00** 9,00** 0 1,00 0 0
* Significante para nvel de 5% em relao ao Grupo Controle
** Significante para nvel de 10% em relao ao Grupo Controle

Tabela 5.1 - Mdias dos escores e resultados da comparao estatstica intergrupos.

Na Tabela 5.1 e nos Anexos destaca-se a reduo significante dos valores
mdios dos escores do Grupo Controle para o Grupo Experimental e os
Ensaios 1 e 2 em todos os tempos de observao. A reduo foi maior na regio
do tero cervical voltado para o septo inter-radicular na raiz distal do primeiro
molar murino, local onde as foras de presso so mais intensas
155,156
.
Destaca-se que a reduo dos escores mdios do Grupo Controle para o
Grupo Experimental foi observada nos perodos de 3, 5 e 7 dias, mas para o
Grupo Ensaio 1 foi maior ainda no perodo de 5 dias. Tambm houve diferenas
entre o Grupo Controle e os Grupos Ensaio 1 e 2 (Tabela 5.1 e Anexos).
Um ponto interessante e notvel corresponde exuberncia dos
fenmenos observados especialmente nos teros cervicais; nos teros apicais eles
so mais discretos. Estes resultados tm relao com a morfologia radicular.
O objetivo principal do trabalho est relacionado com a ocorrncia ou no
de reabsores dentrias e neste modelo experimental o local onde
potencialmente ocorrem a regio cervical submetida a foras intensas. Os
escores determinados para esta regio mostraram significncia estatstica na
aplicao dos testes Quiquadrado, Kruskal-Wallis e Dunn ao nvel de 5% entre
Resultados

106
os Grupo Experimental e o Grupo Controle nos subgrupos de 5 e 7 dias de
movimentao dentria induzida. Aos 3 dias de movimentao no h tempo
hbil biologicamente para a ocorrncia de reabsores dentrias e em
decorrncia no se observou significncia estatstica (Tabela 5.1 e Anexos).
Nos Grupos Ensaio 1 e 2, com menor nmero de animais, a significncia
nos mesmos perodos de observao foi detectada ao nvel de 10%. Nas demais
regies de anlise microscpica, como o esperado, os resultados dos Grupos
Experimental e Ensaio 1 e 2 eram estatisticamente semelhantes em nvel de
significncia de 5 e 10% quando comparados ao Grupo Controle (Tabela 5.1 e
Anexos).
Quando do agrupamento dos escores por grupo, independentemente dos
tempos de observao, revelou-se que estatisticamente tambm os grupos eram
significantemente diferentes em relao ao Grupo Controle quanto reabsoro
radicular.
Nas demais regies observadas durante o experimento no se observou
diferena estatstica intergrupos (Anexos).

5.1.2 Dados proporcionais dos dentes com reabsoro ssea frontal

Para comparar a freqncia da reabsoro ssea frontal nos vrios grupos,
elaborou-se a Tabela 5.2. Nela esto registrados os nmeros de dentes que
apresentaram este fenmeno proporcionalmente ao nmero de ratos de seu
subgrupo. Isto permitir a comparao entre os vrios grupos para ajudar na
anlise da reao ssea na movimentao dentria induzida em ratos normais e
aos submetidos ao do alendronato, permitindo na discusso analisar se os
ossos com bisfosfonatos tm mais ou menos deflexo ssea, ou mesmo, se
reagem diferentemente quando submetidos a estmulos mecnicos.
Resultados

107
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
Grupos
Controle 0:10 5:6 6:6 3:5 0:10 4:6 3:6 3:5 0:10 0:6 0:6 0:5 0:10 2:6 3:6 3:5
Experimental 0:9 6:9 3:7 3:6 0:9 1:9 2:7 2:6 0:9 0:9 0:7 0:6 0:9 1:9 1:7 0:6
Ensaio 1 0:6 2:2 3:4 0:2 0:6 0:2 1:4 0:2 0:6 0:2 1:4 0:2 0:6 0:2 0:4 0:2
Ensaio 2 0:8 4:4 3:3 2:3 0:8 0:4 1:3 0:3 0:8 0:2 0:3 0:3 0:8 2:4 0:4 0:3
Negrito = Presena

Tabela 5.2 - Nmero de molares com reabsoro ssea frontal por grupo e subgrupo de
acordo com os dias de movimentao dentria induzida.

Na Tabela 5.2, percebe-se que os fenmenos da reabsoro ssea frontal
so mais exuberantes no tero cervical por ao de foras moderadas do que no
tero cervical com ao de foras intensas, pois neste ltimo local ocorre
reabsoro ssea distncia considerando-se que a hialinizao segmentar do
ligamento periodontal nesta rea esteve presente em todos os dentes
movimentados como est representado na Tabela 5.3.
Outro fator que contribuiu para os eventos se apresentarem mais
exuberantes nos teros cervicais a morfologia radicular, que no rato tem a
forma invertida em relao ao do homem, ou seja, tem a forma de clava e seu
trmino arredondado contribui para uma melhor distribuio de foras.

5.1.3 Dados proporcionais dos dentes com reabsoro ssea distncia
Na Tabela 5.3, esto apresentados os nmeros de primeiros molares de
ratos com reabsoro ssea distncia durante a movimentao dentria
induzida nos vrios grupos e subgrupos para se obter um efeito comparativo das
reaes sseas sem e com a ao do alendronato.
Resultados

108
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
Grupos
Controle 0:10 0:6 0:6 0:5 0:10 0:6 1:6 1:5 0:10 6:6 6:6 5:5 0:10 0:6 0:6 0:5
Experimental 0:9 0:9 0:7 0:6 0:9 0:9 0:7 2:6 0:9 6:9 6:7 6:6 0:9 0:9 0:7 0:6
Ensaio 1 0:6 0:2 0:4 0:2 0:6 0:2 0:4 0:2 0:6 1:2 3:4 2:2 0:6 0:2 0:4 0:2
Ensaio 2 0:8 0:3 0:3 0:3 0:8 0:3 1:3 0:3 0:8 4:4 3:3 3:3 0:8 0:3 0:3 0:3
Negrito = Presena

Tabela 5.3 - Nmero de molares com reabsoro ssea distncia por grupo e subgrupo de
acordo com os dias de movimentao dentria induzida.

O tero cervical da raiz distal na face voltada para o septo inter-radicular
foi o mais exuberantemente envolvido pela reabsoro ssea distncia durante
a movimentao dentria induzida nos primeiros molares dos ratos. Nos vrios
grupos e subgrupos neste local, o fenmeno no se mostrou diferente e isto
pode indicar que o alendronato no afeta as propriedades mecnicas do osso
alveolar, especialmente do septo inter-radicular, pois estes dados sugerem que o
seu grau de deformao e absoro de foras nas condies diferenciadas do
experimento foi mantido.

5.1.4 Dentes com reabsoro radicular
Na Tabela 5.4, esto apresentados os nmeros de primeiros molares de
ratos com reabsoro radicular durante a movimentao dentria induzida nos
vrios grupos e subgrupos para se obter um efeito comparativo da ao do
alendronato.

Resultados

109

s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7
dias
s/
MDI
3
dias
5
dias
7 dias
Grupos
Controle 0:10 0:6 0:6 0:5 0:10 0:6 1:6 2:5 0:10 0:6 5:6 5:5 0:10 0:6 0:6 0:5
Experimental 0:9 0:9 0:7 0:6 0:9 0:9 0:7 0:6 0:9 0:9 0:7 1:6 0:9 0:9 0:7 0:6
Ensaio 1 0:6 0:2 0:4 0:2 0:6 0:2 0:4 0:2 0:6 0:2 0:4 1:2 0:6 0:2 0:4 0:2
Ensaio 2 0:8 0:3 0:3 0:3 0:8 0:3 0:3 03 0:8 0:3 0:3 1:3 0:8 0:3 0:3 0:3
Negrito = Presena

Tabela 5.4 - Nmero de molares com reabsoro radicular por grupo e subgrupo de acordo
com os dias de movimentao dentria induzida.

Nesta Tabela 5.4, destaca-se a menor freqncia da reabsoro
radicular no Grupo Experimental no qual a reduo foi evidente em relao ao
Grupo Controle. Nos Grupos Ensaio 1 e 2 os dentes afetados pela reabsoro
tambm foram poucos, mas o nmero de animais do subgrupo muito pequeno
para uma anlise segura e conclusiva, muito embora as reabsores detectadas
nestes dois grupos sejam pequenas, pontuais e superficiais.

5.2 Anlise microscpica descritiva

5.2.1 Grupo Controle (Figuras 11 16)

5.2.1.1 reas de foras moderadas
Na rea cervical submetida a foras moderadas a superfcie ssea
periodontal do osso alveolar fasciculado, aos 3 e 5 dias de observao, revelaram
lacunas de Howship com clastos no contexto de unidades osteorremodeladoras.
Os clastos, osteoblastos e macrfagos das unidades osteorremodeladoras
apresentavam aspecto de normalidade; o nmero mdio de unidades variava
entre 7 a 10 por cada corte examinado da regio. A reabsoro ssea frontal
Resultados

110
estava presente em todos os espcimes aos 3 e 5 dias de observao. No
ligamento periodontal correspondente havia, na maioria dos espcimes
examinados deste perodo de 3 e 5 dias, reas hialinas focais que tambm
serviam para indicar se as foras aplicadas foram atuantes nos tecidos. Nesta
regio cervical submetida a foras moderadas, no perodo de 7 dias, a maior
parte das superfcies sseas periodontais estavam com as lacunas sem clastos ou
j regularizadas por neoformao ssea, ou seja, a reabsoro ssea estava
paralisada ou reparada; em 3 espcimes poderia ainda ser caracteriza a
reabsoro ssea frontal.
Na regio apical, as foras moderadas induziram discretas alteraes
morfolgicas geralmente representadas por reas hialinas focais em alguns
poucos espcimes. Eventualmente, alguns dentes revelavam nesta rea pequenos
segmentos de ligamento periodontal hialinizado (em 7 de 17 espcimes).

5.2.1.2 reas de foras intensas
A rea cervical submetida a foras intensas em quase todos os espcimes
apresentava segmentos de hialinizao nos 3 perodos de observao; estes
segmentos variavam, em mdia, de a na extenso do comprometimento da
superfcie radicular no sentido longitudinal. Nesta regio, as clulas desapareciam
por migrao ou morte, incluindo-se os osteoblastos e cementoblastos. As reas
hialinas apresentavam eventualmente aspectos residuais de trombose na sua
poro mais central. Nos cortes longitudinais das razes, acima ou abaixo das
reas hialinizadas segmentares, havia reabsoro ssea, bem como nos canais
vasculares e espaos medulares do osso alveolar. As unidades
osteorremodeladoras em geral eram abundantes e caracterizavam a reabsoro
ssea distncia, no conjunto dos aspectos morfolgicos da rea examinada. No
Grupo Controle, especialmente aos 7 dias, muitos espcimes (5 entre 10
espcimes) apresentavam reabsores radiculares na periferia das reas
Resultados

111
hialinizadas do ligamento periodontal, ora eram superficiais por se limitarem ao
cemento, ora eram profundas por afetarem a dentina subjacente, como pode se
confirmar no apndice em tabela correspondente (Tabela 5.4). A atividade
clstica nas superfcies sseas e radiculares era intensa no Grupo Controle,
especialmente no tero cervical da raiz distal submetida a foras intensas.
As reabsores radiculares estiveram presentes em 10 espcimes, sendo 5
aos 5 dias e outros 5 aos 7 dias de observao. As reas hialinas durante a sua
fagocitose por parte de macrfagos e clastos em sua periferia nas partes voltadas
para a regio apical e cervical apresentavam-se em fagocitose ou reabsoro por
clulas clsticas. Ao mesmo tempo nas superfcies cementrias diretamente
expostas ao ligamento periodontal inflamado pela morte dos cementoblastos que
a protegia havia intensa atividade dos clastos e unidades osteorremodeladoras
morfologicamente detectveis. A maior parte dos clastos na superfcie estava
associados a lacunas de Howship.
Na regio apical as foras intensas foram devidamente dissipadas ou
distribudas de forma uniforme, pois induziram discretas alteraes morfolgicas
geralmente representadas por reas hialinas focais em alguns espcimes (8
espcimes em 17). Em 7 espcimes observou-se segmentos de reas hialinas e
reabsoro ssea frontal em 8 dos 17 espcimes do grupo.

Figura 11 Aspectos microscpicos normais do Grupo Controle, sem movimentao, das regies
cervical e apical da raiz mesial do molar do rato, que independentemente da incorporao
do bisfosfonato, apresenta as mesmas caractersticas. Quando da movimentao dentria
induzida, estas regies (cervical e apical da raiz mesial) foram submetidas ao de foras
moderadas (H.E. - aumentos originais = 40X).

A B

Figura 12 Aspectos microscpicos normais do Grupo Controle, sem movimentao da regio
cervical, na face mesial da raiz distal do primeiro molar do rato, sem movimentao, que
independentemente da incorporao do bisfosfonato, apresenta as mesmas caractersticas.
Quando da movimentao dentria induzida, esta regio foi submetida ao de foras
intensas (H.E. - aumentos originais = 40X).

A B

Figura 13 Alteraes morfolgicas induzidas na regio cervical da raiz mesial (A e
B), submetida a foras moderadas com reabsoro ssea frontal; e na
regio cervical da raiz distal, submetida a foras intensas (C e D); no
Grupo Controle, aps 3 dias de movimentao dentria induzida (H.E.
- aumentos originais A e C = 40X, B e D = 100X).
A
B
C D

Figura 14 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados na rea cervical, submetida a foras
intensas na face mesial da raiz distal do primeiro molar murino, aps 5 dias de
movimentao dentria induzida, no Grupo Controle. Observa-se a hialinizao segmentar
do ligamento periodontal e a reabsoro ssea distncia, caracterizada pela grande
quantidade de unidades osteorremodeladoras nos espaos medulares e na face periodontal
do osso alveolar (H.E. aumentos originais: A, D = 20X, B, E, F = 40X, C = 100X).

A B C
D
E F

Figura 15 Reabsoro radicular no Grupo Controle, na rea cervical da raiz distal do
primeiro molar murino, submetida a foras intensas, aps 5 dias de
movimentao dentria induzida. (H.E. aumentos originais: A, = 40X, B =
100X).

A B

Figura 16 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados no Grupo Controle, na rea
cervical, submetida a foras intensas, na face mesial da raiz distal do primeiro molar
murino, aps 7 dias de movimentao dentria induzida. Observa-se a fagocitose da
hialinizao segmentar do ligamento e exuberante reabsoro radicular, com diversas
unidades osteorremodeladoras (H.E. aumentos originais: A, D = 20X, B, E = 40X, C,
F = 100X).

B A C
E D F
Resultados

118
5.2.2 Grupo Experimental (Figuras 17 20)

Nos primeiros molares dos ratos submetidos ao do alendronato
desde a vida intrauterina, a rea cervical quando submetida a foras moderadas a
superfcie ssea periodontal do osso alveolar fasciculado, aos 3 e 5 dias de
observao, tambm se revelaram lacunas de Howship com clastos no contexto
de unidades osteorremodeladoras. Os clastos, osteoblastos e macrfagos das
unidades osteorremodeladoras apresentavam aspecto de normalidade. No
ligamento periodontal correspondente, havia, na quase totalidade dos espcimes
examinados deste perodo de 3 e 5 dias, reas hialinas focais que indicavam
efeito das foras aplicadas nos tecidos, mas no se caracterizou reabsoro ssea
frontal em todos os espcimes como no Grupo Controle. Nesta regio cervical
submetida a foras moderadas, no perodo de 7 dias, a maior parte das
superfcies sseas periodontais estavam com as lacunas sem clastos ou j
regularizadas por neoformao ssea, ou seja, a reabsoro ssea estava
paralisada ou reparada. Houve reabsoro ssea frontal neste perodo em 3 de 7
animais, uma proporo semelhante do Grupo Controle.
Na regio apical, as foras moderadas, induziram discretas alteraes
morfolgicas geralmente representadas por esparsas reas hialinas focais em
alguns poucos espcimes (2 em 22). Eventualmente alguns dentes (3 espcimes
em 22) revelavam nesta rea pequenos segmentos de ligamento periodontal
hialinizado. Em 5 de 22 espcimes houve reabsoro ssea frontal nesta regio
apical submetida a foras moderadas, um nmero menor do que no Grupo
Controle.

Resultados

119
A rea cervical submetida a foras intensas em todos os espcimes
apresentava segmentos de hialinizao nos 3 perodos de observao. Estes
segmentos variavam, em mdia, de a na extenso do comprometimento da
superfcie radicular no sentido longitudinal. No entanto, em alguns espcimes (4
em 22) a rea hialinizada chegava a acometer da extenso radicular. Nesta
regio, os aspectos morfolgicos tambm sugeriam que as clulas desapareciam
por migrao ou morte, incluindo-se os osteoblastos e cementoblastos. As reas
hialinas apresentavam eventualmente aspectos residuais de trombose na sua
poro mais central. Nos cortes longitudinais das razes, acima ou abaixo das
reas hialinizadas segmentares, havia reabsoro ssea, bem como nos canais
vasculares e espaos medulares do osso alveolar. As unidades
osteorremodeladoras em geral eram abundantes e caracterizavam a reabsoro
ssea distncia, no conjunto dos aspectos morfolgicos da rea examinada. No
Grupo Experimental, especialmente aos 7 dias, 1 entre 6 espcimes (Tabela 5.4)
apresentou reabsores radiculares na periferia das reas hialinizadas do
ligamento periodontal, mas era focal, pois se limitava a uma ou duas unidades
osteorremodeladoras conforme o corte examinado. A atividade clstica nas
superfcies sseas apresentava morfologicamente uma magnitude parecida ao do
Grupo Controle, especialmente no tero cervical da raiz distal submetida a foras
intensas, mas tambm assim foi na regio cervical submetida a foras moderadas,
sugerindo que no Grupo Experimental este fenmeno no foi afetado pelo
alendronato.
Um achado morfolgico interessante e intrigante neste Grupo
Experimental, sob a ao do alendronato, foi uma considervel reduo do
nmero de dentes e de extenso de rea das reabsores radiculares. As reas
hialinas durante a sua fagocitose por parte de macrfagos e clastos em sua
periferia nas partes voltadas para a regio apical e cervical apresentavam-se da
mesma forma que no Grupo Controle, mas nas superfcies cementrias
Resultados

120
diretamente expostas ao ligamento periodontal inflamado e envolvido pelo
processo no havia acoplamento de clastos e atividade de unidades
osteorremodeladoras. Alguns clastos praticamente apresentavam-se justapostos,
sem bordas ativas, na superfcie, mas sem atividade representada por lacunas de
Howship. Isto no foi observado no Grupo Controle no qual quando a
superfcie cementria estava exposta, tambm havia presena de clastos ativos.
Em um espcime, porm, a reabsoro radicular esteve presente com 3 lacunas
de Howship detectveis morfologicamente.
Na regio apical, as foras intensas no atuaram significante do ponto
de vista morfolgico, pois no houve alteraes morfolgicas, nem mesmo
discretas. Isto est coerente com os achados na rea cervical submetida a foras
intensas. A hialinizao segmentar do ligamento periodontal impede a
movimentao dentria induzida no alvolo, pois no haver de imediato
reabsoro ssea frontal, logo foras no atuaram diretamente no ligamento
periodontal apical de forma significante.

Figura 17 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados no Grupo
Experimental, com administrao do alendronato, na rea
cervical, submetida a foras intensas na face mesial da raiz
distal do primeiro molar murino, aps 3 dias de movimentao
dentria induzida. Os clastos associados reabsoro radicular
apresentam-se com ncleos picnticos, desorganizados e com
aparente fragmentao eventual (H.E. aumentos originais: A, B
= 20X, C, D = 40X).
A B
C D
B C A
D E F

Figura 18 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados no Grupo Experimental com
administrao do alendronato, na rea cervical submetida a foras intensas, na face
mesial da raiz distal do primeiro molar murino (A, B, C); e rea cervical na fase
mesial da raiz mesial, submetida a foras moderadas (D, E, F), aps 5 dias de
movimentao dentria induzida. (H.E. aumentos originais: A, D = 20X, B, D =
40X, C, F = 100X).

B
A
C

Figura 19 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados no Grupo Experimental com
administrao do alendronato, na rea cervical submetida a foras intensas, na face
mesial da raiz distal do primeiro molar murino, aps 5 dias de movimentao dentria
induzida. Destaca-se a ausncia de interao entre os clastos e a superfcie radicular
(H.E. aumentos originais: A = 20X, B = 40X, C = 100X).

Figura 20 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados no Grupo
Experimental, com administrao do alendronato, na rea
cervical, submetida a foras intensas, na face mesial da raiz
distal do primeiro molar murino, aps 7 dias de movimentao
dentria induzida. Quando as reabsores radiculares ocorreram,
foram pontuais ou focais. Outras reas de cemento desnudo de
cementoblastos no interagiam com os clastos da regio.(H.E.
aumentos originais: A = 20X, B = 40X, C, D = 100X).
B A
C D
Resultados

125
5.2.3 Grupo Ensaio 1 (Figuras 21, 22 e 23)

Na rea cervical, quando submetida s foras moderadas a superfcie ssea
periodontal do osso alveolar fasciculado, aos 3 e 5 dias de observao - nos
primeiros molares dos ratos submetidos ao do alendronato desde a
concepo, durante a fase intrauterina at o 74
o
dia de vida e movimentados
ortodonticamente 41 dias aps a interrupo da medicao - tambm se
revelaram lacunas de Howship com clastos no contexto de unidades
osteorremodeladoras. Os clastos, osteoblastos e macrfagos das unidades
osteorremodeladoras apresentavam aspecto morfolgico de normalidade. No
ligamento periodontal correspondente, havia, na quase totalidade dos espcimes
examinados deste perodo de 3 e 5 dias, reas hialinas focais que indicavam
efeito das foras aplicadas nos tecidos, com reabsoro ssea frontal em 5 de 8
espcimes. Nesta regio cervical submetida a foras moderadas, no perodo de 7
dias, a superfcie ssea periodontal estava sem clastos e as irregularidades
provocadas pelas lacunas de Howship anteriormente instalada estavam
regularizadas por neoformao ssea.
A caracterstica marcante do Grupo Ensaio 1 foi a sua maior velocidade
de reparao ssea aps a movimentao dentria induzida. Apesar dos
fenmenos prprios da movimentao dentria induzida terem ocorrido de
forma semelhante nos perodos experimentais de 3 e 5 dias, aos 7 dias a crista
ssea alveolar j estava reorganizada.
Na regio apical, as foras moderadas induziram discretas alteraes
morfolgicas de magnitude semelhante ao Grupo Experimental aos 5 dias de
movimentao. Aos 7 dias praticamente no foram detectadas alteraes
morfolgicas nesta regio do Grupo Ensaio 1 sugerindo mais uma vez que a
reparao periodontal e ssea estavam aceleradas.
Resultados

126

Assim como nos Grupos anteriores a rea cervical submetida a foras
intensas em todos os espcimes do Grupo Ensaio 1 apresentavam segmentos de
hialinizao nos 3 perodos de observao. Estes segmentos variavam, em mdia,
de a na extenso do comprometimento da superfcie radicular no sentido
longitudinal. A reabsoro ssea distncia neste Grupo Ensaio 1 mostrou-se
muito semelhante morfologicamente ao Grupo Controle, mas com uma
importante diferena na freqncia e na morfologia das reabsores radiculares
associadas. Da mesma forma que no Grupo Experimental, neste Grupo Ensaio
1 as superfcies cementrias expostas pela morte dos cementoblastos em sua
maior extenso no apresentavam clastos e lacunas de Howship, muito embora
os clastos estivessem na sua proximidade imediata. Isto est relacionado baixa
freqncia de reabsores nos Grupos Experimental e Ensaio1 quando
comparada com a do Grupo Controle. Em um dos espcimes deste grupo o
clasto mostrava evidncias morfolgicas de apoptose.
Na regio apical, as foras intensas no atuaram significante do ponto
de vista morfolgico, pois no houve alteraes morfolgicas, nem mesmo
discretas. Mais uma vez isto est coerente com os achados na rea cervical
submetida a foras intensas. A hialinizao segmentar do ligamento periodontal
impede a movimentao dentria induzida no alvolo, pois no haver de
imediato reabsoro ssea frontal, logo foras no atuaram diretamente no
ligamento periodontal apical de forma significante.

Figura 21 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados no Grupo Ensaio 1, com
administrao do alendronato, na rea cervical submetida a foras intensas, na
face mesial da raiz distal do primeiro molar murino, aps 3 dias de movimentao
dentria induzida. As reas de cemento desnudo de cementoblastos no interagiam
com os clastos da regio. (H.E. aumentos originais: A = 20X, B = 100X).

A B

dentria induzida. As reas de cemento desnudo de cementoblastos no interagiam
com os clastos apesar de sua proximidade. (H.E. aumentos originais: A, B =
40X).

A
B
Resultados

130
5.2.4 Grupo Ensaio 2 (Figuras 24, 25 e 26)

Na rea cervical, quando submetida s foras moderadas a superfcie
ssea periodontal do osso alveolar fasciculado, aos 3 e 5 dias de observao -
nos primeiros molares dos ratos submetidos ao do alendronato j em idade
adulta, a partir 118
o
dia de vida, por trs meses at o final do experimento e
submetidos movimentao dentria induzida uma semana antes da imolao
destes animais - tambm se revelaram lacunas de Howship com clastos no
contexto de unidades osteorremodeladoras. Os clastos, osteoblastos e
macrfagos das unidades osteorremodeladoras apresentavam aspecto
morfolgico de normalidade. No ligamento periodontal correspondente havia,
na quase totalidade dos espcimes examinados deste perodo de 3 e 5 dias, reas
hialinas focais que indicavam efeito das foras aplicadas nos tecidos, com
reabsoro ssea frontal em 9 de 10 espcimes. Neste grupo morfologicamente
no houve diferenas com o grupo controle.
Por outro lado, na regio apical as foras moderadas induziram
discretas alteraes morfolgicas de magnitude semelhante ao Grupo Ensaio 1.
Aos 7 dias ainda foram detectadas alteraes morfolgicas nesta regio.

Da mesma forma que nos Grupos anteriores a rea cervical submetida a
foras intensas em todos os espcimes do Grupo Ensaio 2 apresentavam
segmentos de hialinizao nos 3 perodos de observao. Estes segmentos
variavam, em mdia, de a na extenso do comprometimento da superfcie
radicular no sentido longitudinal. A reabsoro ssea distncia neste Grupo
Ensaio 2 mostrou-se muito semelhante, quanto freqncia e morfologia, aos
demais grupos sob utilizao do alendronato. Assim como no Grupo
Resultados

131
Experimental e Ensaio 1, neste Grupo Ensaio 2 as superfcies cementrias
expostas pela morte dos cementoblastos em sua maior extenso no
apresentavam clastos e lacunas de Howship, muito embora os clastos estivessem
na sua proximidade imediata.
Na regio apical, as foras intensas no atuaram significantemente do
ponto de vista morfolgico, pois no houve alteraes morfolgicas, nem
mesmo discretas, exceto no perodo de 3 dias.

dentria induzida. No se observa reabsoro radicular. (H.E. aumentos originais:
A = 20X, B = 40X).

A B

Figura 25 Aspectos microscpicos dos fenmenos observados no Grupo Ensaio 2, na rea
cervical submetida a foras intensas, na face mesial da raiz distal do primeiro
molar murino, aps 5 dias de movimentao dentria induzida com administrao
do alendronato. No se observa reabsoro radicular, apesar de reas radiculares
sem revestimento de cementoblastos. (H.E. aumentos originais: A = 20X, B =
40X).

A B

dentria induzida. Nota-se um clasto aderido superfcie do cemento apresentando
fragmentao nuclear, irregularidade em seu contorno e superfcie, sem conseguir
estabelecer uma lacuna de Howship. (H.E. aumentos originais: A = 20X, B =
100X).
A B

DISCUSSO

Discusso

136

6 Discusso

6.1 Da concepo do trabalho
O modelo experimental em molares de ratos permite avaliar: 1) os
fenmenos biolgicos relacionados movimentao dentria induzida e suas
variveis, incluindo-se a ao de medicamentos que possam influenciar a sua
qualidade e a velocidade; 2) a freqncia, intensidade e morfologia das
reabsores dentrias e os efeitos de variveis fsicas, biolgicas e qumicas como
a possibilidade de medicamentos aumentarem a resistncia reabsoro
radicular; mas tambm 3) as alteraes na morfologia ssea dos maxilares,
inclusive as decorrentes da ao medicamentos utilizados no tratamento de
vrias doenas e com uso simultneo no tratamento ortodntico.
A promissora e atual perspectiva teraputica dos bisfosfonato torna
premente a necessidade de estudos avaliando a influncia destas drogas nas
estruturas dentrias e circunjacentes. Por hiptese e em perspectiva, os
bisfosfonatos podem aumentar a resistncia dentria reabsoro radicular e
por isso propusemo-nos a determinar a influncia da incorporao do
alendronato na movimentao dentria induzida, na freqncia e nas dimenses
das reabsores dentrias.
Desde os trabalhos pioneiros da primeira metade do sculo passado
sedimentou-se o conhecimento de que os dentes no atuam como reservatrio
de ons minerais que poderiam ser mobilizados assim que se fizesse necessrio
em funo dos ndices sricos de clcio baixos.
Recentemente, o trabalho de FRANCISCHONE
49
demonstrou em
pacientes endocrinopatas que os dentes no participam do turnover sseo e no
Discusso

137
constituem reservas de clcio para o organismo, mesmo em situaes hormonais
extremamente crticas, como no hiperparatireoidismo, os dentes permanecem
preservados. O contedo mineral contido nos dentes perene, a menos que
removido por meio da reabsoro dentria proveniente da morte local de
cementoblastos, desprovidos de receptores para os mediadores da remodelao
ssea.
Por analogia quase que perfeita, o flor tambm se incorpora nas
estruturas mineralizadas por afinidade com os cristais de apatita
116-118
. Uma vez
incorporado nos tecidos dentrios permitem uma proteo crie. Diante destas
evidncias providencia-se a fluoretao das guas de abastecimento.
A concepo do presente trabalho adotou a hiptese de que presena dos
bisfosfonatos na estrutura cementria e dentinria poderia inibir ou reduzir
consideravelmente a reabsoro radicular durante a movimentao dentria
induzida. Por extrapolao, pode-se aplicar o mesmo raciocnio hipottico para a
movimentao ortodntica, para os dentes traumatizados, clareados
internamente ou submetidos a cirurgias paraendodnticas. Estas situaes
mencionadas so algumas das mais associadas s reabsores radiculares
indesejveis.
Em trabalho anterior da mesma linha de pesquisa MAZZIEIRO
93
em
1999, administrou um tipo de bisfosfonato, do tipo clodronato, durante o
experimento avaliando a movimentao dentaria experimentalmente em ratos,
porm realizou-se a medicao apenas concomitantemente ao perodo de
utilizao dos dispositivos ortodnticos, no havendo, portanto tempo para a
incorporao do bisfosfonatos ao osso. O referido trabalho revelou, de forma
esperada, que a administrao por curtos perodos de bisfosfonato no influencia
na qualidade ou quantidade de movimento dentrio induzido. Estes resultados
so de extrema importncia, pois a literatura menciona diversos trabalhos com
Discusso

138
metodologia semelhante e concluses duvidosas, afirmando exatamente o
inverso.
Cientes ento, das propriedades farmacocinticas dos bisfosfonatos e de
seus mecanismos de ao, projetou-se este trabalho avaliando a utilizao a
longo prazo dos bisfosfonatos, do tipo alendronato pela comprovada efetividade
e por utilizao clnica mais difundida, avaliando a sua incorporao aos tecidos
dentrios e a possibilidade de uma inibio das reabsores dentrias.
Durante o perodo experimental questionou-se ainda mais alm, a respeito
da necessidade da administrao dos bisfosfonatos alm do perodo da
rizognese. Uma vez que os objetivos teraputicos de interesse constituem a
incorporao destas drogas dentina e ao cemento, j no seria necessrio o
prolongamento desta teraputica e a manuteno dos nveis sseos de
alendronato.
Este insight deu origem ao Grupo Ensaio 1, separando-se alguns animais e
interrompendo a medicao com os bisfosfonatos a partir do segundo ms de
vida, uma vez findada a rizognese. Considerando que o turnover sseo do
murino de um ms
87
, realizou-se o movimento dentrio induzido 41 dias
depois. Presumindo-se a remoo do alendronato da superfcie ssea alveolar
neste perodo e a permanncia do medicamento no dente, de forma ousada
poderia-se imaginar que este seria o grupo com os resultados mais favorveis. O
nmero de animais designado para este grupo s no foi maior porque se optou
por no interferir no nmero de animais constituintes do grupo principal, o
Grupo Experimental e mantendo-se fiel ao objetivo e metodologia inicial da
pesquisa para o qual idealizou-se o trabalho.
A constituio do Grupo Ensaio 2 estabeleceu-se como uma forma tica
de aproveitamento dos animais progenitores do Grupo Experimental e Ensaio 1.
A premissa do trabalho propunha uma avaliao da incorporao dos
Discusso

139
bisfosfonatos aos tecidos dentrios desde o incio da odontognese, certificando
a incorporao ininterrupta de alendronato ao dente. Com este intuito seria
necessria a medicao prvia de animais matrizes e durante a gestao. Na
verdade, no haveria necessidade da administrao da droga aos machos,
entretanto, j com o objetivo de aproveitar estes animais, optou-se pela
medicao tambm dos machos e a observao dos efeitos do alendronato a
longo prazo em adultos.
Os resultados do Grupo Ensaio 2 so de grande valia, considerando que a
teraputica mais difundida desta classe de drogas indicada a adultos e estes cada
vez mais procuram o tratamento ortodntico. Qual seria a influencia da
utilizao prolongada em adultos? Os animais deste grupo, inicialmente
destinados ao descarte, tornaram-se tambm importantes, afinal, um grupo de
nove animais, quando analisado de forma agrupada, no necessariamente
pequeno, considerando que diversos trabalhos analisam grupos de trs a seis
animais
93,108,109,155
, mas poderia ser ampliado para a maior consistncia dos
resultados.

6.2 Da metodologia empregada:
6.2.1 Sobre o modelo experimental: o animal
A interpretao das mudanas nos dentes e em seus tecidos de suporte,
durante o movimento dentrio induzido, baseiam-se em simulaes e nos
estudos de modelos experimentais desde SANDSTEDT
135
(1901) em ces,
OPPENHEIM
103
(1911), em coelhos
8
, gatos
32
, posteriormente em macacos
26,
e,
mais freqente e atualmente, em ratos
1,5,17,66,76,81,89,93,108,136,137,151,155,161
.

Nos ratos o
primeiro molar o dente movimentado pela ativao de uma mola ancorada nos
incisivos (Figuras 5, 6 e 7). Os molares murinos so bem menos volumosos
que os incisivos e apresentam 5 a 6 razes cuja formao se completa
Discusso

140
aproximadamente aos 70 dias
33
(Figuras 8, 9 e 27). Os incisivos so
monorradiculados e apresentam rizognese contnua durante toda a vida para
compensar o constante desgaste promovido pela sua funo de roer; sua raiz
longa e curva para trs e o pice fica
localizado logo abaixo da regio periapical dos primeiro e segundo
molares. Sua exuberante base de implantao ssea permite a sua utilizao
como ancoragem para a movimentao do primeiro molar (Figuras 8 e 9).

Figura 27 Cronologia da odontognese e rizognese murina de acordo com FARRIS
33

A remodelao ssea objetiva adaptar a forma do osso s demandas
funcionais e mecnicas sobre ele exercidas, este processo caracteriza a
homeostasia ssea
124,125
. Os bisfosfonatos atuam na regularizao desta
homeostasia. A movimentao dentria induzida compartilha deste mesmo
princpio, pois representa uma resposta adaptativa modificando a posio do
dente sob a ao de foras.
nascimento 14 dias 28 dias 56 dias 100 dias 500 dias
Discusso

141
A colocao de fios e molas nos molares exige habilidade para no lesar as
papilas gengivais e sua permanncia pelo tempo necessrio no devem promover
a instalao de doena periodontal (Figuras 5, 6 e 7). Ambas situaes
comprometem direta ou indiretamente a anlise dos efeitos da movimentao
dentria induzida na crista ssea e regio cervical das razes, a ponto de afirmar-
se que se houver sangramento durante a colocao dos aparelhos, algo deve ter
acontecido de errado e o espcime deve ser descartado da amostra. Muitos
trabalhos publicados apresentam resultados comprometidos por inflamao
extensa da papila gengival e do ligamento periodontal com perda ssea distal ao
primeiro molar, pela utilizao de fios grossos, elsticos grandes, traumatismos
na instalao do aparelho, por contaminao bacteriana, dieta inapropriadamente
slida e outros fatores.
A figura geomtrica formada por planos tangenciais s faces mesial,
vestibular, distal e lingual dos primeiros molares murinos mais os planos
tangenciais dos seus pices radiculares e de suas cspides est representada por
um trapzio (Figuras 9 e 10). A ativao da mola com ancoragem no incisivo
promovem foras biologicamente aceitveis na raiz mesial em suas reas de
presso e tenso. Nas regies cervicais e apicais da raiz mesial do primeiro molar
murino ocorrem os fenmenos celulares e teciduais em nveis desejveis para
que ocorra a movimentao dentria induzida com o mnimo dano estrutural e
compatvel com a normalidade das estruturas periodontais. Estas alteraes
podem assim ser estudadas em modelos experimentais para anlises
comparativas de variveis propostas que possam interferir na movimentao
dentria induzida.
Na raiz distal do primeiro molar murino, em funo da forma trapezoidal
deste dente (Figuras 14, 15, 16, 18, 19 e 28), alm das foras geradas pela mola,
h uma rotao potencial do dente no alvolo, mas principalmente da raiz distal,
aumentando o efeito das foras nos tecidos periodontais. Desta forma, na raiz
Discusso

142
distal de um mesmo molar tem-se a oportunidade de estudar comparativamente
os efeitos de variveis sob condies de foras intensas biologicamente mais
lesivas aos tecidos periodontais. Em suma, em um mesmo dente possvel
estudar o efeito da mesma varivel experimental aplicada sob condies de
foras biologicamente aceitveis e lesivas ao mesmo tempo. Estes aspectos
morfolgicos foram demonstrados em trabalhos anteriores realizados
155,156
.
Os molares murinos no apresentam rizognese contnua e esta
caracterstica, associada morfologia radicular favorvel, permitem a
extrapolao para humanos de resultados obtidos neste modelo experimental de
movimentao dentria induzida (Figuras 9 e 10), considerando-se as limitaes
inerentes qualquer metodologia e animal experimental. Apesar de sua dentio
diferir da humana, por serem monofiodontes e seus incisivos apresentarem
crescimento contnuo, os molares assemelham-se aos dos humanos, guardando
as mesmas propores de tamanho e outras peculiaridades anatmicas, que
permitem assim seu uso nesses tipos de experimentos
113,140
.
O primeiro molar superior do rato apresenta cinco a seis razes, sendo a
mesiovestibular e a distovestibular
64
as maiores e mais utilizadas nas anlises
microscpicas, devido localizao das razes em planos diferentes,
impossibilitando a obteno de todas em um mesmo corte longitudinal. (Figura
28). Os trabalhos utilizando cortes transversais das razes do molar superior do
rato ainda so escassos (Figura 29), talvez porque os critrios de anlise deste
modelo transversal ainda no estejam muito bem estabelecidos e necessitam de
aprimoramentos como prope-se em um dos trabalhos desta mesma linha, ainda
em fase de realizao (
FRACALOSSI, A. C. C. - Dissertao de mestrado intitulada: Anlise da movimentao dentria induzida e

reabsores radiculares em ratos normais e sob administrao de bisfosfonatos: estudo comparativo em cortes longitudinais e
transversais; em fase de desenvolvimento para o Programa de Ps-Graduao em Patologia Bucal da FOB-USP,
sob orientao do Prof. Dr. Alberto Consolaro.

Discusso

143

Figura 28 Observa-se claramente a forma trapezoidal do primeiro molar murino em
microscopia eletrnica de varredura, com (B) e sem reabsores dentrias (A).
(Modificado de ALATLI-KUT; HULTENBY; HAMMARSTRM
5
, de 1994).

Figura 29 Imagens de TANAKA et al.
147
e VERNA; ZAFFE; SICILIANI
159
, demonstrando
a dificuldade da obteno de mais de duas razes do primeiro molar murino, em
um mesmo corte longitudinal. Por isto, a necessidade de estabelecer melhores
critrios para a anlise longitudinal.
B A
Discusso

144
O rato apresenta-se como um animal experimental acessvel e de fcil
manuseio e sua manuteno mais barata quando comparada com s dos
primatas, gatos e ces. A utilizao de ratos em experimentos com
movimentao dentria induzida oferece algumas vantagens, como a facilidade
de obteno dos animais, devido ao curto tempo de procriao e s ninhadas
com muitos filhotes, o que permite, tambm, um melhor controle gentico,
padronizao do experimento, facilidade de repeties e amostras com grande
nmero de animais com padronizao da alimentao e a docilidade dos animais.
O modelo utilizando ratos, apesar do tamanho reduzido, possibilita condies
adequadas para a instalao e manuteno do aparelho e a obteno de
quantidades representativas de tecidos para a incluso e anlise
microscpica
113,140
.
Os molares dos ratos apresentam as maiores semelhanas com os dentes
humanos. O ciclo completo de seu desenvolvimento processa-se aos 100 - 120
dias iniciais de vida dos animais. Esses dentes sofrem desgaste muito lentamente,
o que permite observaes, mesmo na idade adulta, de alteraes nos processos
de desenvolvimento dentrio
33
(Figura 27) das

fases. A formao do cemento
secundrio inicia-se em torno do 35
o
dia, concomitantemente ao estresse
funcional imposto aos dentes e, a partir da, sua deposio torna-se constante
durante toda a vida do rato, de modo que, na idade adulta, 1/3, ou mais, da raiz
do dente formada por cemento.
O primeiro molar superior apresenta cinco a seis razes, sendo a
mesiovestibular e a distovestibular as maiores e mais utilizadas nas anlises
microscpicas, devido localizao das razes em planos diferentes,
impossibilitando a obteno de todas em um mesmo corte longitudinal. A regio
inter-radicular ampla, havendo pouca deposio de cemento acelular no tero
cervical. Os molares inferiores so pouco utilizados em pesquisas devido ao seu
tamanho e s dificuldades que a mandbula oferece para a instalao de
Discusso

145
dispositivos ortodnticos. Alm disso, as razes dos incisivos inferiores passam
abaixo das razes dos molares, podendo-se especular que a utilizao destes
incisivos como ancoragem poderia provocar uma deformao ssea na regio
dos molares e interferir na interpretao dos eventos da movimentao dentria
induzida
140
.
O osso alveolar murino apresenta poucos espaos medulares e maior
densidade em relao ao osso alveolar humano (Figura 8). O tecido osteide
abundante, com linhas de reverso relacionadas periodicidade dos processos de
remodelao ssea. As fibras de Sharpey esto presentes, com inclinao
peculiar, nas regies cervical e supra-alveolar, diferindo, apenas moderadamente,
das observadas em dentes humanos.
No ligamento periodontal, os vasos sangneos, os fibroblastos e as
clulas mesenquimais encontram-se proporcionalmente distribudos, lembrando
o periodonto humano, inclusive na largura entre o osso e o dente. Os restos
epiteliais de Malassez encontram-se presentes em nmero reduzido e
caracteristicamente em forma de ilhotas.
No presente trabalho, utilizaram-se ratos da linhagem, Wistar (Rattus
norvergicus). Um rato de 90 dias correspondente a um adulto jovem, j no existe
mais crescimento e os animais encontram-se sexualmente maduros. A
maturidade sexual destes animais ocorre em torno do 50
o
e 60
o
dia de vida.
Recentes trabalhos indicam que 60% dos animais desta linhagem atingem a
maturidade sexual em torno do 30
o
ao 50
o
dia, no gnero feminino e entre o 18
o

e o 31
o
para 85% dos animais do gnero masculino. A menopausa acontece por
volta do 450
o
dia de vida
113,140
.
Para se estudar a movimentao dentria induzida experimentalmente em
ratos deve-se considerar a idade dos animais durante o experimento. A idade e
peso corporal mais utilizados na literatura correspondem a animais de 90 a 120
Discusso

146
dias pesando em mdia 350g
93, 108, 155, 156
. Caractersticas que equivalem fase
adulta jovem do homem, pois os ratos apresentam um perodo de vida mdio de
um ano e meio
33
. Neste perodo ocorre a completa formao das razes dos
molares.
O ideal seria a aplicao das drogas xilazina e ketamina em doses
separadas para a anestesia, pois estas substncias competem pelos mesmos
receptores. Alm disso, h risco de bradicardia pela administrao do cloridrato
de xilazina. Infelizmente o nvel de estresse dos ratos seria de difcil controle
aps uma primeira injeo sem efeito anestsico, sendo necessria uma dose
ainda maior para moderar a adrenalina endgena liberada pelos animais.
importante que a administrao da soluo anestsica no seja apenas
subcutnea, pois se pode observar a necrose dos tecidos circundantes em cerca
de 24 horas quando deste tipo de abordagem.

6.2.2 Sobre o modelo experimental: o aparelho
O tipo de aparelho utilizado para a movimentao dentria induzida em
ratos pode variar em alguns trabalhos, mas nos dias atuais predominam designs
semelhantes aos utilizados neste trabalho. As variaes principais esto
relacionadas com o tipo de fio, a extenso da mola, a forma de fixao no molar
e no incisivo. A padronizao deve ser promovida em todos os trabalhos para
evitar-se que influncias decorrentes das variveis estudadas sofram
modificaes conseqentes de componentes no padronizados dos aparelhos.
Alguns trabalhos,
93,108,109,155,157,158
utilizaram o mesmo aparelho, mas com
fios mais espessos que promovem leses na papila interdentria e favorecem a
instalao de doena periodontal. As leses na papila dentria e a doena
periodontal concomitante interferem significantemente nos resultados dos
trabalhos de movimentao dentria induzida em ratos. Como sugesto, na
Discusso

147
anlise crtica de trabalhos sobre o assunto e na elaborao de trabalhos sobre o
tema sempre importante a apresentao de fotomicrografias em aumento
menor que permitam a observao das estruturas periodontais vizinhas.
Outros modelos de aparelhos experimentais para a movimentao
dentria induzida em ratos so parafusos expansores entre os primeiros molares
superiores, molas promovendo a vestibularizao dos primeiros molares
superiores
1,66,67
ou ainda a introduo de elastmeros entre o primeiro e o
segundo molar superior
74,75,161,178
.
O modelo de aparelho utilizando mola transversal
1,74,75
, atua tanto nos
dentes quanto da sutura palatina sem uma determinao segura da proporo em
que isso ocorre. No possvel uma aferio da padronizao destas molas. A
tabua ssea do rato muito fina e limita o grau de observao microscpica,
alm de provocar deiscncias.
Muitos trabalhos apresentam metodologias mal padronizadas, os
aparelhos so instalados de forma muito aleatria. O modelo mais crtico o de
WALDO
161
, que preconiza a insero de um elastmero entre o primeiro e o
segundo molares superiores para induzir movimentao dentria. Esta forma de
aplicao de fora no permite a sua padronizao ou quantificao exata,
exercendo uma fora no to eficiente e nem to continua, mas rapidamente
dissipante, pois atua sobre dois dentes, em vez de apenas um. Alm disso, a
fora ainda absorvida por uma considervel deflexo das cristas e septos sseos
de dois dentes, e no apenas de um.
O modelo utilizando as molas transversais de vestibularizao dos molares
e a insero de um elastmero entre os molares do rato no permitem uma
quantificao exata das foras empregas e, portanto, impedem uma padronizao
do modelo.
Discusso

148
Em trabalhos anteriores, realizados na Disciplina de Patologia Bucal,
utilizou-se uma mola de 6mm distendendo-a 2mm quando da ativao. No
trabalho piloto desta tese, percebeu-se que a mola distendida em um
comprimento total de 8mm, juntamente com as alas de dois a trs helicides
nas extremidades, tornava-se um pouco grande para o espao entre o primeiro
molar superior esquerdo e o incisivo, dificultando a ativao em animais
menores como nas fmeas, por exemplo. Por isso optou-se por uma nova
medida da mola de 4mm, ativando-se 2mm na instalao do aparelho e
despendendo uma fora de aproximadamente 75cN
70
, no momento da ativao.
A utilizao deste modelo utilizando uma mola fechada permite a
quantificao e padronizao das foras utilizadas neste modelo experimental e
conferindo maior credibilidade aos resultados obtidos.
Os trabalhos VERNA; DALSTRA; MELSEN
157,158
utilizaram o mesmo
modelo de aparelho deste trabalho, ancorando-se no incisivos superior. A forma
do incisivo do rato apresenta-se curvada para o palato, a sua erupo contnua
desloca a mola para a incisal e lingual, reduzindo significantemente a efetividade
da fora ao longo de trs semanas. Contrastando com a nossa experincia com
este mesmo modelo experimental, aps trs semanas ou bem menos do que isso,
a ancoragem se elimina pelo desgaste natural da borda incisal do incisivo devido
funo mastigatria de alimentao do animal. Observa-se tambm que a
movimentao dentria em ratos atinge seu pico mximo entre sete a dez dias,
quando novas ativaes dos aparelhos e nova fixao da ancoragem deve ser
providenciada quando da necessidade de novos ciclos de movimentos dentrios.
Considerando as figuras apresentadas e a espessura dos fios utilizados na
movimentao dentria no experimento de VERNA, ZAFFE, SICILIANI
159
,
associado ao longo tempo de utilizao do aparelho, trs semanas, bem
provvel que a perda ssea observada com a movimentao esteja mais
associada instalao de doena de periodontal do que ao movimento dentrio
Discusso

149
ou ao turnover sseo alterado. Finalmente, no se realizaram anlises
microscpicas dos tecidos, utilizando-se apenas de mensuraes da distncia
entre os dentes as imagens tomogrficas.

6.2.3 Sobre o modelo experimental: o tempo de observao e critrios de
anlise
O tempo de observao dos efeitos periodontais das foras aplicadas na
movimentao dentria induzida fundamental para a consistncia dos
resultados obtidos. No estudo piloto deste trabalho, realizado para confirmar os
melhores perodos de observao utilizados em outros trabalhos realizados da
mesma equipe
26,49,50,93,108,109,134,155,156
pudemos verificar que antes dos 3 dias, os
efeitos periodontais so ainda iniciais e de difcil avaliao morfolgica
microscpica, provavelmente porque ainda esto ocorrendo ao nvel molecular e
bioqumico, predominando ainda a ativao metablica celular e a mobilizao
celular.
Aos 3 dias pode-se observar as reas hialinas, as primeiras BMUs a partir
da observao dos clastos multinucleados e as primeiras lacunas de Howship.
Aos 5 dias as reas hialinas chegam a sua expresso morfolgica mxima, as
BMUs so numerosas e se houver leso da camada cementoblstica
morfologicamente, ela pode ser detectada. Nas reas com hialinizao segmentar
do ligamento periodontal detecta-se a reabsoro ssea distncia. Em alguns
espcimes pode ser detectada rea de reabsoro dentria, ainda focal e inicial.
Aos 7 dias, os fenmenos j esto em resoluo; as reas hialinas encontram-se
em fagocitose com muitos macrfagos presentes permeados a fibroblastos e
outras clulas mesenquimais participantes do reparo periodontal. Os
cementoblastos ainda esto ausentes e reas mais extensas de reabsoro
radicular podem ser detectadas. Na periferia desta rea periodontal as BMUs so
Discusso

150
numerosas e presentes caracterizando classicamente a reabsoro ssea
distncia.
Estes perodos de tempos experimentais permitem avaliar o amplo
espectro de fenmenos periodontais da movimentao dentria induzida que se
estende do primeiro aos 7-10 dias quando os tecidos periodontais tendem
normalidade. Aps este perodo a mola perde sua ativao, no exercendo mais
foras em decorrncia da movimentao dentria obtida, mas tambm em
decorrncia da erupo contnua do incisivo que ao elevar a ancoragem para a
margem incisal diminui a fora exercida.
A anlise dos efeitos de foras antes dos 3 dias ou aps 7 dias, do ponto
de vista microscpico ptico, no trs resultados comparativamente
significantes entre as variveis propostas a serem estudadas, pois no abrangem
os principais fenmenos teciduais e celulares da movimentao dentria
induzida.
Estas observaes confirmam as de YOKOYA
178
, que ao analisar a
movimentao dentria em ratos em microscopia eletrnica e tica observou da
mesma forma que o nmero de clastos aumenta at o stimo dia de
movimentao e depois diminui at o 14
o
dia. Os clastos formam-se e so
observados primeiramente nos canais vasculares da crista ssea alveolar no lado
de presso para depois atingirem superfcie ssea periodontal.
Entretanto, no trabalho de YOKOYA
178
observaram-se clastos um dia
aps o incio do movimento, diferindo das observaes deste trabalho utilizando
aparelhos instalados e acionados com molas de ao. No modelo utilizado molas,
os clastos aumentam significantemente at o terceiro dia, pois a fora exercida
eficiente e bastante contnua. YOKOYA
178
utiliza o modelo de Waldo
interpondo um elastmero entre o primeiro e o segundo molares superiores
exercendo uma fora no to eficiente e nem to continua, mas rapidamente
Discusso

151
dissipante, pois atua sobre dois dentes, em vez de apenas um. Alm disso, a
fora ainda absorvida por uma considervel deflexo das cristas e septos sseos
de ambos os molares.
Em trabalhos anteriores a anlise microscpica registrava cada fenmeno
e caracterstica celular dos componentes envolvidos na movimentao dentria
induzida. Esta forma extremamente detalhada permite um registro preciso e
minucioso, mas no determinava e permitia mensuraes diagnsticas como:
reabsoro ssea a distncia, reabsoro ssea frontal, reabsoro dentria,
hialinizao segmentar do ligamento periodontal em seus vrios graus de
severidade. Em termos de avaliao de efeitos e variaes da movimentao
dentria induzida e da reabsoro dentria a determinao e mensurao
diagnsticas facilitam a comparao e compreenso prtica dos resultados
obtidos. Se aplicssemos os critrios agora adotados nos trabalhos de
PEREIRA
108,109
e de VASCONCELOS
155
com certeza os resultados teriam sido
melhor compreendidos e difundidos.

6.2.4 Sobre o modelo experimental: o tempo de administrao do
bisfosfonato
Entre as variveis estudadas experimentalmente na movimentao
dentria induzida est a influncia de certas drogas na velocidade de
deslocamento dentrio e na freqncia de reabsores radiculares
32,75,93,137,157,158
.
Um cuidado muito importante, mas nem sempre relevado nas metodologias se
refere dosagem, geralmente muito alta
95
. Para uma extrapolao exeqvel deve
se utilizar uma dosagem comparvel humana. Ainda em relao dosagem
deve se considerar o ndice metablico do animal experimental. Este ndice
metablico determina a velocidade e tempo em que a droga permanecer em
nveis terapeuticamente ativos na circulao sangunea e nos tecidos. Para a
Discusso

152
determinao deste ndice metablico o peso no a principal varivel, mas
tambm a superfcie corporal. O ndice metablico de cada animal muito
varivel de espcie para espcie; os ratos tm um ndice metablico prximo a 2
vezes mais veloz que a do homem
10,73
. Na dosagem das drogas empregadas em
experimentos em ratos a quantidade deve ser a correlata ao do homem, mas em
freqncia de administrao deve ser dobrada. Por exemplo, se a dosagem
humana corresponde a uma dose a cada 24 horas, no rato dever ser a cada 12
horas.
Conforme o esperado a meia vida do bisfosfonato em humanos muito
maior do que nos ratos. Em estudos em murinos com 80 dias, o alendronato
incorporado ao osso parece declinar aps doses intravenosas com uma meia vida
de 30 dias
87
. O comportamento dos bisfosfonatos dose e tempo dependente.
Considerando a farmacocintica e o mecanismo de ao dos bisfosfonatos,
como j mencionado no tpico a respeito dos efeitos e influncia destas drogas
nos tecidos dentrios e circunjacentes, no de deve projetar trabalhos em ratos
administrando os bisfosfonatos por perodos curtos inferiores a um ms no
modelo experimental utilizando ratos. Sabe-se
37,38,39,40,41,42,127
que os efeitos
sistmicos dos bisfosfonatos no so imediatos, que apesar das propriedades dos
bisfosfonatos de inibir calcificaes in vitro, percebeu-se que para que houvesse
inibio eficaz da reabsoro ssea a administrao dos bisfosfonatos deveria ser
prolongada e os seus efeitos observados tardiamente de forma eficiente,
constatando-se assim que a sua incorporao no osso essencial
124,125,126,127
.
No trabalho de MAZZIEIRO
93
, realizado nesta linha de pesquisa de
movimentao dentria induzida em ratos, constatou-se que a administrao
simultnea a movimentao ortodntica de clodronato durante um perodo de
at 21 dias no influenciou as estruturas sseas alveolares e periodontais que
permaneceram inalteradas quando comparadas aos grupos controle, nem
tampouco quando da movimentao dentria induzida.
Discusso

153
Por este motivo, alm do intuito de permitir a incorporao do
bisfosfonato s estruturas dentrias e, portanto em fase precoce desde a vida
intrauterina, conscientemente administrou-se o alendronato por perodo
suficiente para a avaliao dos seus efeitos enquanto droga do grupo dos
bisfosfonatos.
No entanto, muitos autores
1,66,67,75,80,82,137,153
,talvez, por superficialidade de
conhecimento, efetuaram trabalhos com metodologia inadequada administrando
os bisfosfonatos por perodos demasiadamente curtos, at mesmo insistindo em
apresentar resultados favorveis quanto hiptese testada, expondo observaes
improvveis e resultados estatsticos altamente questionveis. Alguns dentes
trabalhos apresentam-se discutidos a seguir:
Os resultados do trabalho de ENGSTROM
32
avaliando a reabsoro
dentria em gatos hipocalcmicos submetidos a movimentao dentria induzida
e a bisfosfonatos, so questionveis quanto: 1) os gatos apresentam
predisposio reabsores dentrias cervicais e no nas pores laterais ou
apicais de razes e menos ainda quando submetidos tratamento ortodntico. O
gato como modelo animal interessante para o estudo da reabsoro cervical
externa, relacionada a traumatismos e a clareao dentria; 2) o perodo de
administrao do bisfosfonato foi demasiadamente curto e insuficiente para a
incorporao de suas molculas no osso ou nos dentes; 3) na metodologia do
trabalho no h descrio explicita da mensurao do movimento dentrio in
vivo. A pressuposio do trabalho interessante, mas a metodologia, a forma de
apresentao dos resultados no permite utilizar os dados como parmetro ou
modelo de fundamento para explicar os efeitos dos bisfosfonatos no movimento
dentrio induzido e reabsores radiculares associadas.
O trabalho de LEKIC et al.
82
avaliando o reparo ps-cirrgico do
ligamento periodontal sob a administrao de etidronato relatou uma diminuio
de 40% do espao do ligamento periodontal. Os autores atriburam estes
Discusso

154
resultados a um favorecimento da instalao da anquilose alveolodentria pela
administrao do bisfosfonato. Entretanto, em nenhum momento o trabalho
descreve ou discute a respeito da presena dos restos epiteliais de Malassez como
protetor do espao periodontal, mesmo em regime de administrao de
bisfosfonatos. A dose de bisfosfonato administrada foi altssima em um curto
perodo. No seria talvez a toxicidade do bisfosfonato excessivo que mataria as
clulas dos restos epiteliais de Malassez?
No trabalho de KIM et al.
75
, por exemplo, alm da utilizao de
elastmeros para a movimentao em ratos, os molares foram observados
apenas aps 21 dias de movimentao, quando j no possvel observar os
fenmenos principais da movimentao dentria. A premissa do trabalho
constitui na avaliao do potencial de inibio de recidiva da movimentao
dentria pelo pamidronato e, portanto advoga que a permanncia do elstico por
21 dias objetivando uma estabilizao da movimentao realizada. A remoo do
elstico por si s j traumtica ao periodonto podendo gerar novas
mobilizaes celulares interferindo nos resultados. Alm disso, foi realizada uma
nica administrao endovenosa de bisfosfonato apenas um dia antes da
remoo do elstico intermolares, no sendo possvel a incorporao do
bisfosfonato ao osso. Esta metodologia no permite uma extrapolao adequada
dos efeitos do bisfosfonato uma vez que sua atuao mais efetiva ocorre da sua
incorporao ao osso e posterior liberao por meio da atividade clstica, Estes
autores sugerem a atuao dos bisfosfonatos apenas sobre os clastos, com uma
nica administrao de bisfosfonato. To poucos dias no seriam suficientes
para a incorporao do bisfosfonatos no osso.
Da mesma forma, o trabalho de SATO et al.
137
relata a diminuio da
expresso de H
+
-ATPase e catepsina K e a alterao da morfologia clstica
durante a movimentao dentria induzida sob a administrao de pamidronato
dissdico. Estes resultados parecem tambm questionveis, pois foi realizada
Discusso

155
uma nica administrao via intraperitonial de 1,5mg/1,0ml/Kg de bisfosfonato
apenas um dia antes do incio da movimentao dentria utilizando o elastmero
intermolares. Seria improvvel, portanto, observar quaisquer alteraes sem a
incorporao do bisfosfonato no osso e a sua posterior liberao quando da
reabsoro.
A reviso de TYROVOLA; SPYROPOULOS
153
afiana a inibio do
movimento dentrio induzido ortodonticamente suportando-se no relato de um
caso clnico
97
bastante questionvel, de uma paciente submetida teraputica
com bisfosfonatos. No mesmo trabalho, sem nenhuma citao adicional estes
mesmos autores afirmam de forma irresponsvel que a aplicao tpica de
bisfosfonatos pode aumentar a ancoragem para o movimento ortodntico de
outros dentes. Esta declarao alm de no metodologicamente e
adequadamente testada pode acarretar efeitos deletrios quando aplicados
clnica ortodntica diria.
A anlise do turnover sseo e a movimentao ortodntica devem
considerar que na maxila e mandbula o turnover naturalmente lento e a
renovao ssea ocorre por perodos mais longos do que em outras partes do
esqueleto. Outro fator que refora essa condio o carter compensatrio que
o sistema endcrino apresenta. No trabalho de VERNA; DALSTRA;
MELSEN
157
quando da injeo de hormnios em ratos, a tireide reduziu a
secreo endcrina e o nvel sanguneo aproximou-se ao normal. Ressalta-se
ainda que o ndice metablico do animal duas vezes mais alto que o do
homem. As doses medicamentosas e hormonais devem ser diariamente
duplicadas, ou seja, o tempo de administrao deve ser reduzido metade e as
doses humanas mantidas. Nestes referidos trabalhos de VERNA; DALSTRA;
MELSEN
157,158
no se mencionou nenhum cuidado quanto dosagem hormonal
administrada.

Discusso

156
6.2.5 Sobre o modelo experimental: a influncia e efeito dos bisfosfonatos
nas estruturas dentrias e circunjacentes
Os efeitos da utilizao do alendronato na formao dentinria de razes
dentrias humanas imaturas foram avaliados em um modelo de estudo in vitro,
por LIEWEHR, F.R. et al.
86
. Os resultados demonstraram uma ao do
alendronato sobre os odontoblastos, acelerando esta formao dentinria

Esta
seria mais uma perspectiva de utilizao destes agentes na preveno e controle
da reabsoro por substituio em dentes avulsionados.
No presente estudo microscopia tica de luz no se observaram
alteraes discrepantes no esmalte e na dentina dos ratos sob a utilizao do
alendronato, na baixa dosagem recomendada para humanos, desde o perodo
pr-natal. Entretanto, no se utilizou uma metodologia especfica ou um
marcador para a observao da incorporao do alendronato na dentina e no
esmalte, portanto seria necessrio um estudo complementar que confirmasse
estes dados no esmalte e na dentina.
Os trabalhos em tecidos dentrios geralmente utilizam doses nicas de
bisfosfonatos
9,16,34,46,47,48,79,101,133,146,164,165
. O trabalho de FOUDA et al
46
apresenta
dados e concluses bastante imprecisos a respeito da interferncia dos
bisfosfonatos na dentina. O trabalho menciona a presena de hipoplasia de
esmalte e reduo na mineralizao da dentina, mas muito varivel e com uma
nica administrao de bisfosfonatos. Outros trabalhos da mesma equipe
Dinamarquesa e outros utilizam a mesma metodologia com doses nicas de
bisfosfonatos apresentando resultados semelhantes, desta forma os efeitos dos
bisfosfonatos na dentina e no esmalte so bastante questionveis. Os dados
destes trabalhos asseveram a incorporao dos bisfosfonatos ao dente, mesmo
com doses nicas elevadas
9,16,34,46,47,48,79,101,133,146,164,165
.
Discusso

157
Em trabalhos sem a utilizao da dosagem teraputica recomendada para
humanos torna-se difcil a extrapolao dos resultados para humanos. J um
trabalho mais recente, de TAKANO et al.
146
, utilizando uma dosagem mais baixa
de bisfosfonato, mas ainda elevada, no observou alterao do manto dentinrio
e sob a utilizao de etidronato, quando da observao em microscopia
eletrnica.
Os resultados do trabalho de WESSELINK; BEERTSEN
170
atribuem aos
bisfosfonatos uma capacidade de reduo da reabsoro dentria em casos de
traumatismo radicular. O curto perodo de administrao do bisfosfonato no
permite a sua incorporao no dente nem no osso a ponto de atuar
terapeuticamente. A clula chave da reabsoro dentria o cementoblasto que
precisa ser localmente destrudo para expor a raiz a uma reabsoro dentria. No
trabalho de WESSELINK; BEERTSEN
170
os incisivos reimplantados foram
congelados e quando reimplantados j no mais apresentavam cementoblastos.
Os bisfosfonatos no foram capazes de prevenir reabsores totalmente uma
vez que toda a superfcie radicular cementria apresentava-se diretamente
exposta. Entretanto, os efeitos observados no grupo aps um ms de medicao
justificam-se em decorrncia de um efeito inicial dos bisfosfonatos j
incorporados no osso, visto que um ms corresponde a 1/18 avos do tempo de
vida do rato.
Em alguns trabalhos como os de YAFFE et al.
174,177
e de WESSELINK;
BEERTSEN
170
, onde se aplica topicamente bisfosfonatos deve-se considerar
que uma nica aplicao tpica ou a administrao intravenosa por curtos
perodos, foram provavelmente institudas considerando-se os efeitos destas
drogas in vitro e em superfcies em que os bisfosfonatos atuam impedindo
calcificaes, mineralizaes de matria orgnica e evitando a calcificao da
placa dentobacteriana. Os pirofosfatos so industrialmente utilizados em
produtos de limpeza com finalidade de impedir calcificaes e usualmente so
Discusso

158
componentes dos dentifrcios antitrtaro, amplamente disponveis no mercado.
Este efeito direto representa uma das aplicaes dos bisfosfonatos, mas no o
mecanismo de ao no tratamento dos quadros clnicos da osteoporose e de
outras doenas sseas sistmicas. Nestes casos o mecanismo de ao associa-se
incorporao das molculas de bisfosfonatos na estrutura ssea mineralizada. Os
estudos sobre o efeito tpico dos bisfosfonatos em dentes avulsionados ou
transplantados devem ser realizados e avaliados criteriosamente com
metodologias refinadas para esclarecer definitivamente o assunto.
A presena de bisfosfonatos na estrutura radicular de dentes com
periapicopatias crnicas poderia hipoteticamente apresentar efeito sobre os
clastos, mas tambm sobre as bactrias e seus produtos na regio apical,
melhorando o prognstico destes casos. Esta extrapolao de raciocnio da
regio periodontal para apical parece ser muito interessante e importante e
requer estudos para se estabelecer alguma evidncia de aplicabilidade clnica.
A utilizao dos bisfosfonatos como elementos preventivos de perda
ssea periodontal em cirurgias com retalhos mucoperiosteais, aps exodontias,
doena periodontal, deve se basear em morfologias mais refinadas do que a
aplicada por KAYANAC et al.
72
, ALTUNDAL; GVENER
6
; ROCHA et al.
123

e outros
13,19,71,72,83,115,138,166,176
. As metodologias utilizadas muitas vezes apresentam
administraes nicas ou curtas de bisfosfonatos e revelam dados
estatisticamente frgeis, com elevado desvio padro, denotando diferenas
questionveis entre os grupos em que se utilizaram soluo salina e alendronato.
De forma intrigante estes autores
13,19,71,72,83,115,138,166,176
utilizaram em seus
trabalhos alendronato por perodos de uma semana antes e at por quatro
semanas aps a exodontia ou a cirurgia periodontal. sabido que o efeito dos
bisfosfonatos depende da sua incorporao prvia matriz ssea e para isso
requerem-se meses ou at um ano de teraputica sistemtica com os
bisfosfonatos. Em pequenos perodos, de uma a quatro semanas, provavelmente
Discusso

159
no houve tempo suficiente para a ao eficaz da droga, principalmente
considerando a fragilidade estatstica dos dados apresentados nos trabalhos
mencionados.
Os resultados de TANI-ISHII
148
procedem com o mecanismo
farmacocintico dos bisfosfonatos, considerando que um perodo de oito
semanas de administrao do incadronato constitui um perodo considervel da
vida de um rato, havendo assim tempo para a incorporao do medicamento ao
osso e sua posterior liberao por meio da remodelao ssea.
O mesmo raciocnio quanto liberao primria dos bisfosfonatos por
meio da remodelao ssea
39,127
deve ser aplicado para a anlise da real influencia
dos bisfosfonatos sobre a movimentao dentria induzida e as reabsores
radiculares a ela associadas. Os trabalhos propondo-se a estud-las devem ter
como base a farmacocintica da droga e a rigidez da anlise morfolgica e
estatstica dos dados obtidos.
O trabalho de GRIER; WISE
54
, 1997, sobre a influncia dos bisfosfonatos
na erupo dentria sugere que a deteco de molculas que de forma localizada
promovam a reabsoro ssea podendo prover no futuro mtodos de induo
da erupo de dentes impactados, bem como promover a acelerao de
movimentos ortodnticos. O efeito colateral de retardo de erupo advindo da
teraputica com os bisfosfonatos poderia ser favorvel para um desejvel
prolongamento do perodo de dentadura mista, quando ainda se podem realizar
procedimentos ortodnticos preventivos ou interceptores.
Segundo LEVIN et al.
85
a vida mdia do alendronato em humanos,
quando incorporado a hidroxiapatita de dez anos. A aplicao tpica do
alendronato promoveria a sua ligao dentina, assim explicando uma inibio
ou retardo na reabsoro ssea de dentes desidratados de ces, mesmo na
presena de anquilose. Para estes autores a soluo empregada apresentava-se
Discusso

160
relativamente concentrada e saturou a superfcie das razes com a droga e assim
justificando os resultados na reduo da reabsoro, quando da embebio no
alendronato em comparao com o resultado obtido em solues fluoretadas ou
ao Emdogain. Apesar de meritria, a proposio destes autores e as explicaes
oferecidas para os efeitos benficos obtidos so de difcil compreenso, pois
consideram uma possibilidade de incorporao das molculas de bisfosfonatos
no cemento e na dentina quando embebidas em bisfosfonatos durante apenas
cinco minutos. Os efeitos observados no poderiam ser decorrentes do pH da
soluo? Ou ainda, de provveis efeitos antimicrobianos comprovados dos
bisfosfonatos
55,88,172
? Ou mesmo da prpria soluo de Hanks, utilizada como
veculo? Alguns questionamentos a respeito da utilizao tpica de bisfosfonato
e seu efeito imediato requerem maiores esclarecidos, especialmente nos
traumatismos dentrios.
No trabalho de LIEWEHR et al.
86
, ao estudar o efeito dos bisfosfonatos e
do nitrato de glio na reduo da reabsoro ssea e dentinria em situao de
reabsoro por substituio in vitro, mais uma vez os resultados sugerem que a
superfcie de dentes traumatizados ou de fatias de dentina com qualquer uma das
solues empregadas, inclusive bisfosfonatos reduzem a reabsoro radicular
quando comparadas com as solues controle, em geral salinas. Isto mostra que
os efeitos das drogas no so especficos, mas provavelmente estejam
relacionados ao pH, ao microbiana, estimulao celular inica e no a um
especial e especfico efeito anti-reabsortivo.

6.3 Dos resultados
6.3.1 Da anlise microscpica
A tese de FURQUIM
50
, de 2002, demonstrou que razes de forma
rombides e retangulares favorecem uma melhor distribuio da fora
Discusso

161
ortodntica, quando comparadas a razes de forma triangular. Da mesma forma,
demonstrou que as cristas sseas mais retangulares absorvem menos foras do
que as mais triangulares, que por sua configurao mais delicada cedem mais
quando submetidas fora. Cristas mais rgidas e retangulares concentram mais
foras no ligamento periodontal, ocasionando a morte de cementoblastos e a
instalao de reabsores dentrias.
O primeiro molar superior do rato apresenta as razes com a forma de
uma clava, uma forma invertida em relao ao molar humano. A parte mais
estreita e de maior concentrao de fora a regio cervical. Portanto, o
movimento dentrio tende a concentrar-se na regio cervical e distribui-se
melhor na regio apical, cujo formato favorece a distribuio de foras, explicada
por FURQUIM
50
. Nas reas apicais de presso intensa, os fenmenos da
movimentao dentria apresentaram-se inexpressivos, pois ocorrendo a
hialinizao segmentar e a reabsoro cervical a distancia a regio apical
permanece livre de fenmenos (Figuras 11 e 27).
Na raiz mesial, a crista ssea alveolar do primeiro molar do rato constitui
uma face livre, uma vez que o rato no apresenta pr-molares ou caninos e,
portanto nesta regio as foras so bem absorvidas pela deflexo desta crista.
Neste modelo, utilizando molas ancorando-se no incisivo para a mesializao do
molar os resultados so mais significantes nas reas cervicais da raiz distal
devido forma trapezoidal do molar, (Figura 9 e 28) que gira no alvolo para
mesial, concentrando as foras na raiz distal, comprimida contra a crista o septo
interdentrio e contra o volumoso septo inter-radicular.
Os resultados observados neste trabalho permitem afirmar que os
bisfosfonatos incorporados estrutura dentria e ssea no interferiram
marcantemente na remodelao ssea e nos fenmenos tpicos da
movimentao dentria como mostram a Tabelas 5.1 e 5.4, inclusive nas
reabsores sseas frontais e distncia e nas reabsores dentrias.
Discusso

162
A rea de hialinizao e as reabsores sseas distancia apresentaram se
iguais entre os grupos controle e bisfosfonatos. Microscopicamente, a nica
alterao marcante observada foi a reabsoro dentria. A morfologia do osso da
distribuio dos clastos e BMUs apresentou-se normal no osso alveolar.
As reabsores sseas frontais e distncia apresentaram-se praticamente
normais nos grupos experimentais, quando comparados ao controle, em termos
estruturais e mecnicos. A utilizao de altas dosagens de bisfosfonatos
diminuram o grau de crescimento sseo, sem, porm interferir na qualidade de
resistncia mecnica do osso
84
, ou seja h uma preveno da reabsoro pelo
alendronato, mas o osso mantm suas caractersticas estruturais e mecnicas
normais
51
. De acordo com RODAN
126
o bisfosfonato torna o turnover sseo
mais lento e proporciona mais tempo para a sua organizao estrutural, sem
prejudicar ou alterar a organizao estrutural do osso ou suas propriedades
mecnicas. Estes dados explicam porque o bisfosfonato no altera as
propriedades mecnicas do osso frente ao movimento dentrio.
Os efeitos teraputicos dramticos dos bisfosfonatos no dependem da
inibio da remodelao ssea normal, mas sim da reabsoro ssea
patolgica
107
. Por este motivo no observam alteraes na qualidade da
movimentao ortodntica, pois esta possui um carter fisiolgico (mesmo que
com finalidade teraputicas).
Morfologicamente o osso apresenta-se comparativamente igual ao do
grupo controle quanto a distribuio e quantidade de linhas de reverso,
proporo espaos medulares e trabculas, espessuras das corticais e altura ssea
periodontal. Outra observao corresponde ao nmero de clastos e unidades
osteorremodeladoras e sua distribuio na estrutura ssea analisada,
comparativamente igual nos grupos controle e experimentais com bisfosfonatos
aplicados de formas diferentes. Estas observaes corroboram com as
concluses de MAZZIEIRO
93
que tambm no observou diferena na
Discusso

163
movimentao dentria induzida entre animais normais e os submetidos
administrao de bisfosfonatos.
Provavelmente a incorporao dos bisfosfonatos desde o incio da
formao embrionria incluindo-se as fases de diferenciao, migrao e
maturao tecidual permitam uma estabilizao bioqumica na atividade celular
perante os bisfosfonatos com um aumento compensatrio na secreo de
hormnio paratireoidiano (PTH) e uma elevao nos nveis de 1,25-
dihidroxivitamina D. TUCCI et al.
152
e CHESNUT et al.
22
relataram este
fenmeno compensatrio de regulao em pacientes osteoporticas tratadas
com alendronato por um perodo de trs e dois anos, respectivamente.
A diferena microscpica observada entre os Grupo Controle
Experimental realmente muito discrepante e s pode ser atribuda presena
de bisfosfonato no osso. Nos Grupos Ensaio 1 e 2, a diferena s no se
apresentou mais significante porque o nmero de animais por grupo foi
realmente muito pequeno, pois se tratavam apenas de um grupo de
aproveitamento dos animais progenitores dos demais grupos sob a utilizao do
alendronato.
De acordo com BERGSTROM et al.
11
o alendronato incorpora-se ao osso
preferencialmente nas superfcies sseas de reabsoro por ligar-se aos minerais
dos fosfatos de clcio expostos. A inibio da reabsoro propiciada pelo o
alendronato em nosso trabalho corrobora com os resultados de ALAKANGAS
et al.
2,
pois nos Grupos Experimental, Ensaio 1 e 2, submetidos ao alendronato,
os clastos pareciam soltos, despregados do osso, embora prximos
superfcie
2
. microscopia de luz, observou-se a presena clstica, mas em maior
nmero por rea de reabsoro quando na superfcie radicular. As BMUs
presentes nas razes do grupos experimentais estavam em pequeno nmero, em
mdia com um a trs clastos. Nos grupos experimentais alguns clastos
apresentavam nitidamente morfologia de clulas em apoptose. Estes clastos,
Discusso

164
mesmo que justapostos superfcie cementria sem cementoblastos, no
reabsorviam dente, pois no havia lacunas de Howship.
A apoptose observada morfologicamente em nosso trabalho concorde
com a literatura a respeito do mecanismo de ao dos bisfosfonatos
11,15,62,6374,75,105,124,125,131,143,154,163
. Os bisfosfonatos inibem a FPP (farnesyl
diphosphate syntase) que constitui uma enzima essencial para a organizao do
citoesqueleto e para o transporte vesicular nos clastos. A inativao desta enzima
desencadeia a inativao destas clulas quando da administrao do alendronato.
A interferncia na funo desta enzima pode induzir a apoptose nos clastos. Este
mecanismo de interferncia na via do mevalonato constitui um mecanismo
especifico do alendronato
7
. Alm disso, confirmou-se
136,137
que o alendronato
ligado superfcie ssea secretado durante a acidificao da lacuna de Howship
e paralisa a reabsoro por meio da atuao nas bordas clsticas ativas.
As reabsores sseas e dentrias observadas indicam que os grupos
experimentais no diferiram muito entre si. Entretanto, quando comparados
com o controle no medicado com o alendronato a quantidade e o padro de
reabsoro dentria foi significantemente diferente, principalmente quando
comparado ao Grupo Experimental.
No homem, determinados locais como o fmur e o externo sofrem
remodelao da superfcie ssea trabecular aproximadamente a cada dois anos e
o processo de remodelao de uma nova unidade estrutural aproximadamente a
cada seis meses. Esta informao explica porque a meia vida do bisfosfonato no
osso varia de espcie para espcie
87
. A afinidade do alendronato para com o
fosfato de clcio e sua persistente ligao com a hidroxiapatita promove a sua
rpida incorporao no esqueleto
37
. Uma vez incorporado no esqueleto a vida
mdia de atividade do alendronato alta, ao redor de 1000 dias em ces ou 3
anos
87
e dez anos para humanos.
Discusso

165
No Grupo Ensaio 1, com bisfosfonatos incorporados desde a formao
intrauterina e aps a suspenso da medicao por um ms, provvel que tenha
havido uma re-acomodao dos nveis metablicos sem bisfosfonatos e a
eliminao dos bisfosfonatos anteriormente incorporados pela remodelao
ssea continuamente atuante. Considerando que o processo da remodelao
ssea no rato ocorre ao redor de um ms
87
e que um rato vive em mdia um ano
e meio e atinge a idade adulta aos 50 dias. Um ms de remodelao ssea
bastante significativo para a renovao de grande parte do seu esqueleto, mas os
dentes formados permanecem com o bisfosfonatos incorporados. Depois de um
ms da suspenso da administrao dos bisfosfonatos movimentaram-se os
dentes do Grupo Ensaio 1.
RODAN
revelou que o alendronato atua na superfcie. Em profundidade

este bisfosfonato no atua na reabsoro, ou seja, no adianta a presena grandes
massas sseas profundas incorporadas com alendronato. Para a inibio da
reabsoro ssea necessrio que o alendronato apresente-se na superfcie. Uma
vez incorporado o bisfosfonato liberado novamente apenas quando o osso for
reabsorvido. A meia vida do bisfosfonato depende praticamente em sua
totalidade do ndice do turnover sseo
87
.
Na movimentao dentria induzida em ratos, os fenmenos reabsortivos
so iniciais nos primeiros trs dias, exuberantes aos cinco dias e suas
conseqncias marcantemente presentes aos sete dias
178
, perodo em que as reas
hialinizadas esto em franca reabsoro, a reabsoro ssea distncia presentes
e os macrfagos e clastos presentes nas superfcies radicular promovendo a
reabsoro superficial da raiz, preparando-a para uma nova fase de re-insero
das fibras colgenas e recoberto por parte dos novos cementoblastos.
Aos trs dias de observao no houve diferena quanto freqncia de

Em comunicao pessoal
87
.
Discusso

166
reabsoro, pois neste estdio de evoluo do movimento dentrio induzido em
ratos ainda no h a instalao de reabsores ssea ou dentria (Figuras 13, 17,
21e 24).
Quanto s reas apicais de presso intensa os fenmenos da
movimentao dentria apresentaram-se tambm inexpressivos, pois ocorrendo
a hialinizao segmentar e a reabsoro cervical distancia a regio apical
permanece livre de fenmenos. A anlise das reabsores dentrias neste
modelo deve valorizar, portanto as regies cervicais, especialmente na regio
cervical da raiz distal, onde h maior concentrao de foras e a maior
exuberncia dos fenmenos reabsortivos.
A aplicao da fora nos dentes do Grupo Ensaio 1 promoveu os mesmos
fenmenos teciduais e celulares observados no Grupo Controle e tpicos de uma
rea submetida movimentao dentria com foras de intensidade aceitveis
biologicamente como s submetidas a foras intensas e lesivas para os tecidos.
Dentre os fenmenos teciduais e celulares da movimentao dentria induzida o
mais indesejvel de suas conseqncias so as reabsores radiculares e esta no
estava presente nos dentes movimentados neste grupo de animais em que houve
a suspenso da droga e cujos dentes foram movimentados depois de um ms da
interrupo da administrao do bisfosfonato. Com exceo de um espcime
com reabsoro dentria, nos demais, mesmo com extensa hialinizao
segmentar do ligamento periodontal, ausncia de cementoblastos e exposio da
raiz, no houve reabsoro radicular.

6.3.2 Dos resultados estatsticos (Tabela 5.1 e Anexos)
Os testes no paramtricos utilizados com a finalidade de diferenciar
estatisticamente os grupos quanto aos eventos microscpicos categorizados em
forma de escores, demonstraram matematicamente que realmente os grupos
Discusso

167
experimentais comportaram-se significantemente diferente do Grupo Controle,
quanto reabsoro radicular. Confirmando portanto, que a administrao
prolongada do alendronato e a sua incorporao ao osso e estruturas dentrias
pode reduzir os nveis de reabsores radiculares provocadas por movimentao
dentria induzida.
No tero cervical, onde ocorre a maior concentrao da fora ortodntica
e local apropriado para a avaliao da reabsoro radicular neste modelo
experimental, o Grupo Experimental apresentou nveis de reabsoro
estatisticamente reduzidos ou ausentes, para um nvel de significncia de 5%.
Os grupos Ensaio 1 e 2 no se apresentaram diferentes do Grupo
Controle para um nvel de significncia menor que 5%, apenas para um nvel de
significncia menos exigente de 10%, ou seja com 10% de chance de erro.
Devemos considerar entretanto, que estes grupos secundrios, no eram o foco
principal do trabalho e foram ento constitudos de poucos animais. Em um
novo experimento aumentando estas amostras, provavelmente esta diferena
quanto reabsoro dentria torne-se estatisticamente significante para um nvel
de exigncia de 5%, ou seja com apenas 5% de chance de equvoco.
Nas demais regies observadas durante o trabalho no se observou
diferenas estaticamente significantes. Esta ausncia de diferena estatstica
corresponde com o esperado, dada a morfologia do molar murino e a
experincia prvia de movimentao dentria induzida utilizando este modelo.
Os resultados estatsticos deste trabalho correspondem com fidedignidade
as observaes microscpicas realizadas, afianando o mtodo de avaliao e a
calibrao do examinador.

Discusso

168
6.3.3 Quanto tolerabilidade aos bisfosfonatos
No se observou qualquer alterao macroscpica nos animais recebendo
alendronato desde durante o perodo pr-natal neste trabalho. O trabalho de
PATLAS et al.
111
relata algumas alteraes sseas nos fetos por dois
bisfosfonatos administrados durante a vida intrauterina como diminuio do
peso e do volume de medula ssea, mas sem interferncia no volume
cartilaginoso. Estes dados so justificados pela intensa remodelao ssea
durante a vida intrauterina explicando a diminuio de peso nestes fetos e
merecem confirmao antes da instituio da teraputica com bisfosfonatos na
gravidez.
No presente estudo, no se constataram efeitos colaterais ou alteraes
observveis nas estruturas examinadas, seja ssea ou dentria, mesmo quando da
administrao desde a vida intrauterina. Estes resultados corroboram com o
obtido por GUY et al.
56
e LEPOLA et al
84
,

quando da administrao de
alendronato e de clodronato por longo prazo em ratos em crescimento. Estes
trabalhos so concordes ao relatar um aumento de massa e resistncia ssea nos
animais sem efeitos adversos da utilizao de bisfosfonatos em baixas dosagens.
Ensaios clnicos
69,87,139
estabeleceram que a dosagem ideal de alendronato
de 10mg/dia administrados oralmente. Apesar de sua fraca biodisponibilidade
aps a administrao oral, o alendronato altamente eficaz na preveno da
perda ssea associada ausncia de estrgeno endgeno e demais quadros
osteoporticos com excesso de reabsoro ssea. Convencionou-se que a
melhor dose de administrao seria 10mg/dia por via bucal ou 0,25mg por via
endovenosa
69, 139
.
A convenincia na dosagem elemento chave no tratamento de uma
doena crnica e principalmente no tratamento a longo prazo da osteoporose,
portanto as marcas comerciais mais comuns e ensaios clnicos
139
preconizam
Discusso

169
um comprimido de 70mg por semana para um adulto de 70Kg, ou seja,
10mg/dia via bucal, ou 1mgP/Kg semanalmente. Deste modo, administrou-se
para os animais deste trabalho a mesma dose de 1mgP/kg em dose dobrada,
duas vezes por semana.
Os relatos de efeitos colaterais dos bisfosfonatos e exacerbaes de
processos de mineralizao ocorreram em organismos que receberam dosagens
exageradas em trabalhos experimentais
57, 95, 169, 170
.
Grande parte destes trabalhos em ratos
57, 95, 169, 170,
utilizou dosagens de
bisfosfonatos de 10mgP/Kg em vez de 1mgP/Kg, ou seja, dosagens dez vezes
maiores que o correlato para humanos. Talvez tenha ocorrido algum engano
quando da compreenso da dose ideal de administrao. A dose ideal de
10mg/dia para um indivduo de 70Kg, ou seja, um valor de aproximadamente
0,14mgP/Kg por dia e no 10mgP/Kg por dia.
As reaes adversas advindas da terapia com alendronato sdico so
transitrias e normalmente associadas ao trato gastrintestinal superior como:
nuseas, dispepsia e diarria
69
.

Estes efeitos adversos demonstraram-se dose-
dependentes, relatadas em 3 a 7% dos pacientes e no relacionada dose de 5 a
20mg/dia. No houve diferenas estatisticamente significantes entre a freqncia
de reaes adversas relatadas por pacientes do grupo placebo ou alendronato
69, 78
.
Observou-se que nos dias seguintes primeira administrao do
medicamento aos animais adultos, as fezes apresentaram-se com consistncia
alterada e mais amolecida, mas no caracterizando diarria tpica. Ocorreu uma
breve regulao intestinal nos animais normalizando esta condio. A diarria
constitui um dos efeitos colaterais transitrios comum aos bisfosfonatos
envolvendo o trato gastrintestinal
69,78
.
Mesmo para a administrao do medicamento aos ratos adultos foi
necessrio redosar regularmente a diluio do medicamento, pois se alterou
Discusso

170
significantemente o peso tanto dos machos quanto das fmeas aps o incio da
administrao do alendronato sdico. A redosagem foi ento necessria para a
manuteno da administrao de 1mgP/Kg duas vezes por semana.
O aumento de peso nestes animais apresenta-se concorde com a literatura,
que relata de forma unnime o aumento de volume e peso quando do
tratamento com bisfosfonatos
69
.
Em trabalhos com uso prolongado (um, trs a sete anos) com
bisfosfonatos (pamidronato, etidronato ou olpadronado) ocorre, na grande
maioria dos casos, melhora expressiva das dores sseas, da incidncia de novas
fraturas, do grau de atividade fsica, da densidade ssea e dos marcadores de
remodelao. O benefcio mostrou-se mais acentuado em crianas (esqueleto em
crescimento - alta remodelao) com ntida melhora da estatura final (em
pacientes sem epfeses fechadas) e no grau de atividade fsica dos pacientes.
Observou-se inclusive um catch-up growth. Como o esqueleto das crianas (em alta
remodelao) particularmente sensvel a fatores que interferem adversamente
com o metabolismo sseo, um eventual efeito deletrio da administrao de
bisfosfonatos por longos perodos a estas crianas seria prontamente
identificado; entretanto, a literatura demonstra segurana no uso dessas
drogas
18,84
.
Alguns trabalhos em humanos
22,152
confirmaram segurana da utilizao
do alendronato por perodo prolongado demonstrando-se semelhante ao
placebo e sem detectar maior freqncia de efeitos adversos, exceto por suave
dor abdominal, transitria e suave, facilmente resolvida com medicao.
A segurana do uso prolongada de bisfosfonatos precisa ser
detalhadamente confirmada antes da utilizao em humanos, com a finalidade
de incorporao aos dentes como agentes protetores de reabsores radiculares.
Discusso

171
Entretanto, comprovado que o alendronato no citotxico
68
como outros
bisfosfonatos, o clodronato, por exemplo.
O alendronato geralmente bem tolerado, quando tomado conforme
recomendado, a curto e longo prazo, com as reaes adversas mais comumente
relatadas associadas ao trato gastrintestinal superior
69
. Pela resistncia hidrlise
e degradao enzimtica
1,14,35,47,56,65,96
, os bisfosfonatos no so metabolizados
pelo fgado no organismo, diminuindo o potencial txico dessas drogas
87
.
Nota-se pouca preocupao na literatura com toxicidade ou efeitos
adversos do uso prolongado do alendronato j que se realizou at a sua utilizao
profilaticamente por um perodo de trs anos, com benefcios confirmados de
preveno de perda ssea sem maiores problemas. Deve-se considerar que esta
pesquisa foi realizada pelo Merck Research Labs, que apesar da credibilidade
internacional conferida Merck Sharp and Dohme, trata-se de um laboratrio
com seus interesses comerciais
69
.
So realmente promissoras e encorajadoras as perspectivas de utilizao
dos bisfosfonatos que em pouco mais de 40 anos de pesquisas demonstraram
benefcios inestimveis da sua utilizao, em doenas sseas, processos tumorais
e em breve no de transporte sseo de outros frmacos j existentes,
aprimorando, a qualidade de diversas teraputicas e melhorando a qualidade de
vida dos pacientes em tratamentos espordicos ou contnuos
21, 22, 40, 104, 154
.
Os bisfosfonatos so atualmente largamente utilizados para fins industriais
e comerciais, alm da sua aplicao teraputica. Relatou-se osteomalcia pelo uso
de outros bisfosfonatos como o cido etidrnico, nenhum problema desse tipo
foi encontrado pela utilizao do alendronato em ensaios clnicos durante dois a
trs anos
69
. Portanto, uso do alendronato restringe a aplicao e extrapolao dos
resultados apenas a este tipo de bisfosfonatos, visto que uma das caractersticas
Discusso

172
deste grupo de drogas, a sua independncia e perfil definido de efeitos,
aplicaes e manifestaes colaterais.

6.3.4 Perspectivas teraputicas clnicas odontolgicas
Considerando a ausncia de efeitos colaterais como foi observada nos
animais, a no ser o aumento da massa corporal, possvel propor, tal como
acontece com o flor, a ingesto de bisfosfonatos durante a fase de vida da
odontognese, pois isto pode ser um fator protetor da raiz frente a reabsores
dentrias. As reabsores dentrias esto presentes entre 6 a 10% das pessoas na
populao ocidental que nunca se submeteu a qualquer tratamento ortodntico.
A principal causa de reabsoro dentria no mundo ocidental est representada
pela movimentao ortodntica.
As implicaes clnicas previsveis desta maior resistncia dos dentes
reabsoro radicular incluem movimentos dentrios mais seguros, menor perda
dentria por traumatismos dentrios, melhora do prognstico de reimplantes e
transplantes dentrios e ampliao das possibilidades de reimplantes intencionais
e teraputicos, entre outras.
Na odontognese, a formao das razes da dentadura permanente,
inclusive dos terceiros molares inicia-se aos trs anos e meio com o a rizognese
dos incisivos centrais e primeiros molares e termina aos 22 anos
114
.
A formao radicular do primeiro pr-molar termina aos 13 anos e meio e
a do segundo pr-molar aos os 15 anos
110,114
. Os pr-molares so dentes menos
susceptveis a traumatismos pelo seu posicionamento menos exposto e so
menos exigidos nas movimentaes dentrias induzidas. As reabsores
dentrias induzidas por movimentao ortodntica, quando presentes, so
menos graves que em outros grupos dentrios como os incisivos
110,114
. Grande
Discusso

173
parte dos tratamentos ortodnticos inicia-se aos 12 anos quando j se observa na
grande maioria dos pacientes a dentadura permanente excetos os segundos
molares que irrompem a partir dos 12 anos e meio e dos terceiros molares, em
mdia irrompendo aos 20 anos.
Os traumatismos tambm acometem principalmente os dentes anteriores,
mais expostos quando de quedas ou batidas. Poderia-se considerar ento, a
administrao de bisfosfonatos para a incorporao na estrutura dentria
definitiva compreendendo as idades entre trs anos e meio aos 12 anos, quando
se completa a rizognese dos caninos
114
.
A dose de eleio seria tambm de 10mg/dia ou 1mgP/Kg, j que a
literatura no preconiza ajustes na dosagem de alendronato e no observou
grandes variaes nos resultados quando das entre as dosagens de 5 e
20mg/dia
69
.
Seria desnecessria a administrao do bisfosfonato alm do perodo de
formao radicular dos dentes permanentes, considerando que os dentes no
participam do turnover sseo, conclui-se que uma vez finalizada a rizognese a
incorporao do bisfosfonato ser permanente. A interrupo da teraputica
com o bisfosfonato deve possibilitar a regularizao do metabolismo sseo e das
compensaes ocorridas durante o perodo da medicao
22,152
.
A partir dos resultados obtidos e com confirmao a respeito de efeitos
adversos, seria lcito propor uma teraputica com bisfosfonatos em crianas,
iniciando-se aos trs anos de idade, evitando interferir na constituio dos dentes
temporrios e sua esfoliao. Alm disso, no existem dados que suportem a
segurana da utilizao destas drogas durante o perodo pr-natal.
No se observou diferena significante dos fenmenos biolgicos quando
da movimentao dentria nos animais mais idosos, no osteoporticos
recebendo o alendronato por um perodo de trs meses antes da instalao do
Discusso

174
aparelho (Grupo Ensaio 2). Estes dados demonstram que movimentar os dentes
de pacientes adultos, com estruturas periodontais saudveis, sem quadros
estabelecidos de osteoporose, mas sob medicao com alendronato sdico
perfeitamente seguro. Estes dados revelam que o alendronato no interfere na
qualidade da movimentao dentria, corroborando com o observado por
MAZZIERIO
93
, em 1999.
Os bisfosfonatos ligam-se ao osso preferencialmente nos lugares de alto
turnover e sua distribuio no osso no homognea
87
, portanto pode-se esperar
que nos bisfosfonatos no interfiram na movimentao ortodntica de pacientes
sob a medicao, representados neste estudo pelo Grupo Ensaio 2, pois o
turnover sseo dos maxilares baixo.
A administrao sistmica de uma droga, como ocorreu e ainda ocorre
com o flor, suscita muita discusso sobre os benefcios e os efeitos colaterais
advindos. A relao custo-benefcio deve ser muito bem estabelecida e o
protocolo deve ser minuciosamente pesquisado em cada detalhe; consideramos
estes resultados apenas um ponto de partida importante para algo que possa
trazer significantes avanos na prtica odontolgica.
O objetivo da administrao do alendronato encerra-se em permitir a
incorporao do bisfosfonato durante a formao radicular e assim proteg-la da
reabsoro quando da morte de cementoblastos. Como os dentes permanentes
no participam do turnover sseo e, portanto no sofrem reabsoro fisiolgica,
no h necessidade de prolongar-se o perodo de medicao alm do termino da
rizognese. Assim sendo, os prximos trabalhos devem concentrar-se em testar a
movimentao aps o trmino da formao dentria sob a incorporao de
bisfosfonatos apenas confirmar os resultados do Grupo Ensaio 2.
A efetividade e largo uso do bifosfanato na preveno e tratamento de
estados osteopnicos e na preveno da osteoporose induziu-nos a formular a
Discusso

175
hiptese de que dentes com molculas de bisfosfonatos incorporadas em sua
estrutura seriam mais resistentes reabsoro dentria, inclusive durante o
tratamento ortodntico abrindo-se novas perspectivas de uma prtica
ortodntica mais segura ao mesmo tempo em que contribuindo para a
preveno e reduo da prevalncia das reabsores dentrias de um modo geral.
Ao final da anlise de nossos resultados podemos afirmar que encontramos
dados que podem ser os primeiros sinais para que a hiptese formulada seja
extensivamente estudada e se confirme a partir de outros trabalhos.

CONCLUSES

Concluses

177
7 Concluses

Em sntese, os resultados deste trabalho a respeito da movimentao
dentria induzida, em molares de ratos, submetidos administrao por longo
prazo de bisfosfonatos, do tipo alendronato, nos permitem as seguintes
constataes:
a os nveis de reabsores radiculares apresentaram-se significantemente
reduzidos;
b no se observaram influncias destes medicamentos no tecido sseo, nos
fenmenos celulares, teciduais ou no ligamento periodontal durante o
movimento ortodntico.
A partir da hiptese formulada, da reviso da literatura realizada e dos
resultados obtidos, considerando ainda as limitaes inerentes metodologia,
pudemos concluir que:
7.1 quando da administrao dos bisfosfonatos, do tipo alendronato, desde o
incio da odontognese, ou mais especificamente durante a rizognese, a
incorporao deste medicamento dentina e ao cemento pode aumentar a
resistncia radicular s reabsores dentrias associadas a movimentao
dentria induzida e, por extenso, s promovidas pelos traumatismos
dentrios;
7.2 a medicao prolongada e supervisionada com bisfosfonatos, do tipo
alendronato, no altera a movimentao dentria induzida nos ratos,
mesmo quando da sua incorporao no tecido sseo, pois no modifica as
propriedades mecnicas do osso.

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190
173. WOODS, M.A.; ROBINSON, Q.C.; HARRIS, E.F. The population distribution of
cases with root resorption. J. Dent. Res., v. 71, p. 214, 1992. Special issue.
Abstract n
o
. 870.
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phase of alveolar bone following mucoperiosteal flap surgery in rats. J.
Periodontol., v. 68, p. 884-89, 1997.
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reducing alveolar bone loss in the rat model. J. Periodontol., v. 71, n. 10, p.1607-
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rat ectopic bone development model. J. Periodontol., v. 74, p. 44-50, 2003.
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and pre-osteoclastic cells in periodontal tissues during experimental tooth
movement as revealed by quantitative immunohistochemistry of H
+
-ATPase. J.
Dent. Res., v. 76, n. 1, p. 580-87, 1997.

ABSTRACT

Abstract

192
Abstract

The influence of bisphosphonates on induced tooth movement
and root resorption

Bisphosphonates are a class of drugs acknowledged for their ability to
prevent bone resorption. The presented study tested the following hypothesis:
Could bisphosphonates prevent root resorption once incorporated into dentin or
cementum? 89 Wistar rats (Rattus norvegicus, albinus) with and without
bisphosphonate medication, alendronate, at a dosage of 1mgP/Kg twice-weekly,
were submitted to induced tooth movement for 0, 3, 5 and 7 days. The
orthodontic appliance consisted of a coil spring moving the fist left molar
foreword supported by the incisor. The rats were divided into 4 groups and
submitted to different protocols of medication. The Control Group received no
medication whatsoever; Experimental Group 1 was submitted to alendronate
intake since intrauterine life until the end of the experiment; Experimental Group
2 received alendronate during intrauterine life until the 60
th
day of life. A month
after medication interruption the molars were moved prior to rats sacrifice.
Experimental Group 3, consisted of a group of adult rats alendronate treated after
the third month of life until the seventh, when dental movement took place.
Microscopic and statistical analysis revealed that animals submitted to alendronate
therapy presented significantly reduced amounts of root resorption. There was no
further influence of alendronato on bone structure during induced tooth
movement. These results allow us to conclude that the use of bisphosphonates,
alendronate, to be more specific, may increase the resistance to root resorption
during induced tooth movement or even due to traumatisms.

ANEXOS

Quadros utilizados para o registro dos escores da anlise
microscpica

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X 0
T
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c
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l

F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X 0
F
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M
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T
e
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o

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l

F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X 0
T
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l

F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X 0
F
o
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s

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T
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F X 0
QUADRO 1 Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Controle Negativo (CA),
4 e 6 sem movimentaodentria induzida.

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X X 2
C X X 2
D X X 2
E X X 2
T
e
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c
e
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v
i
c
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l

F X X 2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 3
C X 2
D X X 3
E X X 2
F
o
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M
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T
e
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a
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l

F X X 3
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C X X 7
D X X 7
E X X 7
T
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c
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l

F X X 10
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X 0
C X 1
D X 1
E X X 2
F
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F X X 2
QUADRO 2 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Controle Positivo (CB),
6 com movimentao dentria induzida durante 3 dias.

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C X X 2
D X X 2
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C
D
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c
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X 3
C X X 2
D X X X 13
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X X 3
C
D
E
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T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X X 15
B X X X 13
C X X X 15
D X X 10
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X X 17
B X X X 13
C
D
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X 1
C X 1
D X X 2
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 2
C
D
E
F
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QUADRO 3 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Controle Positivo (CB), 4
e 2 com movimentao dentria induzida durante 5 dias.

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X 2
C X 1
D X 2
E X X 2
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X X X 13
C X X X 13
D X X 2
E X X 2
F
o
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X X 16
B X X X 17
C X X X 13
D X X X 18
E X X X 17
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 M
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X X 2
C X 0
D X X 2
E X X 2
F
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F

QUADRO 4 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Controle Positivo (CB),

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X 0
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D
E
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l

F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X 0
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D
E
F
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 1
D X 0
E X 0
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D
E
T
e
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X 0
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D
E
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F

QUADRO 5 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Experimental A, 6 e 3
sem movimentao dentria induzida.

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C X 1
D X X 2
E X 1
F X X 2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C X 1
D
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X X 3
D X 0
E X 0
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C X 4
D X X 7
E X X 7
F X X 7
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 4
B X X 7
C X 4
D
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E X X 2
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D
E
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QUADRO 6 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Experimental B, 6 e

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X X 2
C X 1
D X 0
E X X 2
F X 1
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B
C
D
E
T
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l

F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 2
C X 0
D X 1
E X 0
F X 2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B
C
D
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C X X 7
D X 3
E X X 7
F X X 7
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B
C
D
E
T
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l

F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 2
C X 0
D X 0
E X 0
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B
C
D
E
F
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QUADRO 7 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Experimental B, 6 e

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B X X 2
C X 1
D
E
F X X 2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X X 2
C X 1
D
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B X 2
C X 0
D
E
F X X 2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X 0
C X X 7
D
E
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B X X 7
C X X 7
D
E
F X X X 14
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C X X 7
D
E
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B X 0
C X 0
D
E
F X 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D
E
F
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QUADRO 8 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Experimental B, 3 e 3
com movimentao dentria induzida durante 7 dias.

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 1
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
F
o
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T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
F
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QUADRO 9 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Ensaio 1A, 4 e 2 sem
movimentao dentria induzida.

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C
D
E
T
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l

F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 3
B X 0
C
D
E
F
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 8
B X 3
C
D
E
T
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l

F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
F
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QUADRO 10 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Ensaio 1B, 2 com
movimentao dentria induzida durante 3 dias.

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X X 2
C X X 2
D X X 2
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X X 3
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
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T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C X X 2
D X X 7
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
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Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X 1
C
D
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
F
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s

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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X X 14
C
D
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
F
o
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T
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Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B X 0
C X 1
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
T
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l

F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 0
D X 0
E
F
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QUADRO 13 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Ensaio 2A, 4 e 4 sem

Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C X X 2
D X X 2
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 1
D X 0
E
F
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C X X 7
D X X 7
E
T
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C X 2
D X 2
E
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Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C
D X X 2
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
T
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 2
C
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C
D X X 7
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D X 0
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A
B
C
D
E
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Espcimes 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 1
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 2
B X X 2
C
D
E
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X X 13
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X X 7
B X X 7
C
D
E
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F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B
C
D
E
F
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 T
A X 0
B X 0
C
D
E
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QUADRO 16 - Registro dos escores da anlise microscpica do Grupo Ensaio 2B, 1 e 2 com

Tabelas referentes s informaes intermedirias das
anlises estatsticas, para a regio de foras intensas

Grupo Mediana Soma de postos Posto mdio N. de valores

Experimental 7.00000000 81.0000000 9.00000000 9
Ensaio 1 5.50000000 21.0000000 10.5000000 2
Ensaio 2 7.00000000 48.0000000 12.0000000 4
Controle 7.00000000 81.0000000 13.5000000 6

Probabilidade = 0.362277

Tabela 1 Resultados estatsticos do teste no paramtrico de Kruskal Wallis e de Quiquadrado
com trs graus de liberdade, para a regio de foras intensas, quando da
movimentao dentria durante 3 dias.

Comparao Diferena Valor crtico Interpretao

Experimental X Ensaio 1 5000000 12.7969588 No signific.
Experimental X Ensaio 2 -3.0000000 9.83710051 No signific.
Experimental X Controle -4.5000000 8.62770789 No signific.
Ensaio 1 X Ensaio 2 -1.5000000 14.1767707 No signific.
Ensaio 1 X Controle -3.0000000 13.3659875 No signific.
Tabela 2 Resultados estatsticos do teste de Dunn para comparaes individuais ao nvel de
significncia de 0.05, para a regio de foras intensas, quando da movimentao
dentria durante 3 dias.


Experimental 7.00000000 53.0000000 7.57142857 7
Ensaio 1 7.00000000 26.5000000 6.62500000 4
Ensaio 2 7.00000000 25.5000000 8.50000000 3
Controle 14.0000000 105.000000 17.5000000 6




Experimental X Ensaio 1 0.94642857 8.87700943 No signific.
Experimental X Controle -9.9285714 7.87945873 Significante
Ensaio 1 X Controle -10.875000 9.14205297 Significante



Experimental X Ensaio 1 0.94642857 9.78290120 No signific.



Experimental 7.00000000 34.0000000 5.66666667 6
Ensaio 1 10.5000000 16.0000000 8.00000000 2
Ensaio 2 7.00000000 18.5000000 6.16666667 3
Controle 17.0000000 67.5000000 13.5000000 5



Ensaio 1 X Ensaio 2 1.83333333 11.4662003 No signific.


Experimental 7.00000000 358.000000 19.8888888 18
Ensaio 1 7.00000000 173.000000 21.6250000 8
Ensaio 2 7.00000000 236.000000 23.6000000 10
Controle 13.0000000 664.000000 39.0588235 17


comparao dos quatro grupos entre si, independentemente do dia de observao
da movimentao dentria induzida.



significncia de 0.10, para a regio de foras intensas, quando da comparao dos
quatro grupos entre si, independentemente do dia de observao da



significncia de 0.05, para a regio de foras intensas, quando da comparao dos
quatro grupos entre si, independentemente do dia de observao da

Maria Fernanda Martins Ortiz

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INFLUNCIA DOS BISFOSFONATOS NA

MOVIMENTAO DENTRIA INDUZIDA,

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