O aumento mundial da contaminao de sistemas de gua doce com inmeros compostos qumicos industriais e naturais hoje um dos principais

s problemas ambientais (SCHWARZENBACH et al., 2006). Minerao, emisso de esgoto domstico, aplicao de fertilizantes e pesticidas degradam severamente os ecossistemas aquticos com metais pesados. Estas substncias por no serem componentes naturais do organismo so chamadas xenobiticos (LIVINGSTONE, 1993; 1998; ZAGATTO; BERTOLETTI, 2006). O ambiente aqutico est, portanto, exposto a processos de poluio causados pela variedade e quantidade de substncias qumicas que nele ingressam. Via de regra, os estudos realizados para se conhecer o comportamento e os efeitos dos qumicos nos organismos aquticos so baseados na observao dos efeitos dos componentes isolados. Ferreira et al. (2008) acreditam que este modo de abordagem vem sendo modificado com o aumento das pesquisas de exposio a efeitos combinados. As principais fontes de poluio nas guas interiores podem ser atribudas a descargas de guas no tratadas, resduos de efluentes industriais e resduos da agricultura. A aquicultura, caracterizada nas ltimas dcadas como potencial atividade agropecuria (NEWMAN, 1993), no est isenta desta negativa contribuio, uma vez que utiliza, em sua cadeia produtiva, compostos que interferem diretamente na cadeia trfica dos sistemas aqucolas. Muitas vezes, estes compostos se revelam txicos tambm aos organismos em produo e, na verdade, a intensificao da aquicultura teve como consequncia a elevada incidncia e severidade de doenas (PAVANELLI et al., 1998). Alm disso, as altas densidades de cultivo dos organismos aquticos aumentam a concentrao de matria orgnica nos viveiros de produo, dificultando a manuteno da qualidade da gua de cultivo (KUBTIZA, 1998). Dentre os principais produtos utilizados na piscicultura, para contornar as dificuldades no processo produtivo, podemos citar o sulfato de cobre (CuSO4) que, quando utilizado indevidamente, gera efeitos txicos para as espcies aquticas (BEAUMONT et al., 2000; NOVELLI FILHO et al., 2000). Os metais pesados, quando presentes em altas concentraes, esto entre as mais nocivas substncias ativas capazes de causar srios impactos nos sistemas metablicos, fisiolgicos, e at mesmo estruturais, nos organismos a eles expostos. Ao mesmo tempo, alguns metais agem como nutrientes essenciais em concentraes no txicas (TORT, 1987). o caso do cobre, que embora seja elemento essencial para o crescimento saudvel dos organismos (PRASAD, 1984; COUSINS, 1985), mesmo em pequenas concentraes, pode ser perigoso para a biota aqutica (NRIAGU, 1990). O on cobre, elemento trao essencial em biologia, se torna nico quimicamente devido sua propriedade de adotar status redox distinto, apresentando-se nas formas oxidada (Cu2+) e reduzida (Cu+). Consequentemente, ons cobre servem como importantes co-fatores catalticos na qumica redox de protenas que possuem funes biolgicas fundamentais exigidas no crescimento e desenvolvimento. Segundo Pena et al. (1999) estas protenas so representadas, principalmente, pela Cu-Zn superxido dismutase, enzima envolvida no processo de destoxificao de radicais livres, citocromo c oxidase, transportadora de eltrons na mitocndria e pela metalotionina, sequestradora de cobre. Protenas que exigem cobre esto envolvidas em uma srie de processos biolgicos e alteraes em suas atividades sempre causam distrbios nos processos fisiolgicos. Os padres de acumulao dos xenobiticos so diferentes para os distintos organismos e dependem do balano entre a taxa de assimilao e a taxa de metabolizao e eliminao destes compostos. Devido s diferenas nas formas de metabolizar os xenobiticos, necessrio detectar e avaliar o impacto de poluentes nos organismos expostos e no somente considerar a quantidade de poluentes presentes no ambiente e nos animais. As respostas ao estresse so caracterizadas por mudanas fisiolgicas e os efeitos dos poluentes nos peixes so obtidos por testes de toxicidade aguda e crnica (HEATH, 1991). Os processos fisiolgicos normais so afetados bem antes da morte de um organismo, justificando o uso de indicadores fisiolgicos e

bioqumicos para compreendermos as alteraes decorrentes da exposio subletal a txicos (VAN DER MERWE et al., 1992).

1.1 O uso do sulfato do cobre em ecossistemas aquticos e na aquicultura

Entre os numerosos compostos orgnicos que entram nos ecossistemas aquticos o cobre um dos mais difundidos poluentes e suas concentraes variam com sua forma qumica (ROY, 1997). O cobre um componente natural do ambiente aqutico e pode ser encontrado nas formas particulada, coloidal e dissolvido. Entre as fontes naturais de cobre encontram-se o intemperismo e as atividades vulcnicas. Como fontes antropognicas destacam-se a minerao, atividades de fundio e a incinerao. Alm disso, o cobre amplamente utilizado em formulaes de fungicidas, bactericidas, algicidas e fertilizantes (BURATINI; BRANDELLI, 2006). Desta forma, os organismos aquticos podem ser expostos ao cobre tanto de maneira intencional como acidental. As descargas industriais de compostos de cobre so geralmente adicionadas em guas onde os parmetros variam consideravelmente. Caractersticas como a alcalinidade da gua, dureza e pH influenciam fortemente a ao do cobre na gua e, portanto, sua biodisponibilidade para os peixes (LAURN; MCDONALD, 1986; MAZON; FERNANDEZ, 1999; TAO et al., 1999). O sulfato de cobre (CuSO4) um dos compostos mais utilizados como algicida e herbicida aplicado em reservatrios, lagos, e em viveiros de peixes (EFFLER et al., 1980; CARBONELL; TARANOZA, 1993). amplamente utilizado para controlar a florao de algas e o crescimento de organismos aquticos indesejados em viveiros de aquicultura (THORNTON; RAST, 1997). O CuSO4 , tambm, regularmente utilizado como agente teraputico em peixes (STRAUS, 1993) no controle efetivo de doenas bacterianas branquiais e uma variedade de parasitas, com destaque para infestaes tais como a ictiofitirase (Icthyophitirius multifillis, Piscinoodinium pillulare, REARDON; HARREL, 1990) e monogenea, Anacanthorus penilabiatus. Em pases como o Mxico, ou em continentes como Amrica do Norte (THORBURN; MOCCIA, 1993), sia (TONGUTHAI, 1997) e frica (HECHT; EDDEMANN, 1998), so feitas aplicaes intermitentes de CuSO4 em peixes saudveis como forma de profilaxia para preveno de epidemias (RBAGO-CASTRO et al., 2006). Segundo Zagatto (1995), durante muito tempo foi aplicado quase que diariamente o CuSO4, numa quantidade aproximada de quatro toneladas por dia, no controle de algas cianofcea do reservatrio Guarapiranga, So Paulo, SP, Brasil. Mozeto e Zagatto (2006) descrevem que, embora o cobre aplicado se complexe e acabe sendo carreado para o fundo, depositando-se no sedimento, frequente encontrar residual de cobre dissolvido nas guas do reservatrio, principalmente, nas regies onde a aplicao mais intensa. Em relatos obtidos aps entrevista com tcnicos e/ou piscicultores de agroindstrias no estado de So Paulo, SP, Brasil, o uso de CuSO4 ocorre tanto com o objetivo profiltico no controle de infestaes de parasitas branquiais, como na busca da melhoria das condies da gua dos viveiros que, em decorrncia da intensidade de arraoamento e da elevada densidade de cultivo, podem ficar com excesso de partculas dissolvidas. Os banhos teraputicos, segundo estes relatos, chegam a ser feitos aplicando-se nos viveiros CuSO4 em doses de at 600g.m-2 (150 mg.L-1 Cu2+). Em parte destas constataes consta tambm que a aplicao em viveiros de cimento, nesta mesma concentrao, causou mortalidade em 100% dos animais e que quando aplicados em viveiros de terra os animais chegaram a vir superfcie mostrando dificuldade respiratria. Carvalho e Fernandes (2006) concluram que o uso do CuSO4 no controle de algas e parasitas de peixes deve considerar a sensibilidade da espcie ao cobre e principalmente o pH da gua dos viveiros de aquicultura. Alm disso, os mecanismos bioqumicos em resposta exposio ao cobre buscam restabelecer a homeostase e ocorrem, muitas vezes, no lugar de outras funes fisiolgicas, interferindo no ganho de peso e crescimento, comprometendo a eficincia produtiva.

A toxicidade do cobre tem sido estudada em muitas espcies de peixe, sendo influenciada no s pela concentrao do metal na gua, mas tambm, por vrios fatores que interferem na sua biodisponibilidade ao organismo exposto. As concentraes letais (CL50) de cobre para peixes de gua doce variam intra e inter espcie. Na variao inter espcie, para o CuSO4, verificam-se valores de poucos g.L-1 a alguns mg.L-1. Os dados apresentados na publicao do EPA (ESTADOS UNIDOS, 2007) mostram a amplitude de variao com valores de 18 g.L-1 para northern squawfish, Ptychocheilus oreg, (ANDROS; GARTON, 1980) a 84600 g.L-1 para golden shiner, Notemigonus crysoleucas (HARTWELL et al., 1989). Muitas vezes a CL50 varia para uma mesma espcie, como no caso do fathead minnow, Pimephales promela, sendo que foram citadas CL50 de 15 g.L-1 (SCHUBAUER-BERIGAN et al., 1993) a 1485,90 g.L-1 (ERICKSON et al., 1996). Estudos como o de DeBoeck et al. (2004) mostraram que a exposio ao cobre foi altamente txica truta arco-ris, Oncorhynchus mykiss, com CL50 (96 h) de 210 g.L-1. Por outro lado, a exposio crnica desta mesma espcie em fase juvenil, a 1000 g.L-1 por 28 dias, no teve efeito no crescimento ou no consumo alimentar dos indivduos expostos. Variaes na toxicidade crnica de cobre entre as espcies de peixes, estgios de vida e qualidade da gua foram verificados por Brix et al. (2001). Estas grandes variaes so decorrentes da fase de vida, do tamanho do indivduo exposto e das caractersticas fsicoqumicas da gua. As concentraes usuais, segundo Boyd e Massaut (1999), variam de 0,5 a 2,0 mg.L-1 de cobre. As recomendaes prticas do uso de CuSO4 em piscicultura so baseados somente na alcalinidade da gua. De acordo com Wurts e Durborow (1992), o cobre no deve ser aplicado em guas com alcalinidade menor que 20 mg.L -1, preservando assim a vida dos peixes no viveiro. Concentraes excessivas podem resultar em acmulo do excesso do on cobre e subsequente toxicidade, o que pode indiretamente reduzir o crescimento, a reproduo e a alimentao dos organismos expostos (BOYD, 1990). As variaes nas recomendaes tcnicas baseadas na alcalinidade e na diversidade de dados resultantes dos testes de toxicidade, incoerentes com as aplicaes praticadas na aquicultura mundial, demonstram que a utilizao do CuSO4 vem sendo feita de forma irregular, pois muitas vezes no so observados os parmetros fsicoqumicos da gua de uso. A qualidade da gua nos viveiros de cultivo de organismos aquticos, principalmente de piscicultura, afetada por interaes dos diversos componentes qumicos presentes neste ambiente. O pH dos viveiros varia diariamente devido respirao e fotossntese e quanto maior a concentrao de organismos que liberam CO2 na gua, maior a oscilao deste parmetro (WURTS; DURBOROW, 1992). Alguns autores descrevem a importncia de se verificar as condies da gua dos viveiros antes da aplicao do CuSO4. Muitos destes alertas esto relacionados s caractersticas de diminuio do oxignio dissolvido (OD) em consequncia da presena e da mortalidade das algas, demonstrando ento a possibilidade de, no momento da aplicao destes compostos, o OD e o pH estarem diminudos.

Ministrio do Meio Ambiente

O Mercrio um metal naturalmente encontrado na crosta terrestre, ocorrendo no ar, no solo e na gua. Este metal assume diversas formas qumicas, que podem ser divididas nas seguintes categorias: mercrio metlico ou elementar (Hg), mercrio inorgnico, principalmente na forma de sais mercricos (HgCl2, HgS) e mercurosos (Hg2Cl2), e mercrio orgnico, ligado a radicais de carbono, por exemplo metilmercrio e etilmercrio.

O mercrio metlico (Hg) um metal prateado e brilhante, que ocorre em estado lquido na temperatura ambiente, e volatiliza facilmente para a atmosfera formando vapores de mercrio. Os vapores de mercrio so incolores e inodoros, e se formam em maior quantidade com o aumento da temperatura. As emisses atmosfricas so a principal fonte de contaminao ambiental, seguida da contaminao da gua, e da contaminao do solo, quando ocorre disposio inadequada de efluentes e resduos. Uma vez liberado, o mercrio permanece no meio ambiente, circulando entre o ar, a gua, o sedimento, o solo, e a biota, onde assume diversas formas qumicas. A maioria das emisses para o ar ocorre na forma do mercrio elementar, que muito estvel podendo permanecer na atmosfera por meses ou at anos, possibilitando seu transporte por longas distncias ao redor do globo. O vapor de mercrio presente na atmosfera pode se depositar ou convertido na forma solvel retornando superfcie terrestre nas guas da chuva. A partir dai duas importantes alteraes qumicas podem ocorrer. O metal pode ser convertido novamente em vapor de mercrio e retornar atmosfera, ou pode ser "metilado" pelos micro-organismos presentes nos sedimentos da gua, se transformando em metilmercrio. Por que devemos nos preocupar com o mercrio?

O mercrio tem efeitos adversos importantes sobre a sade humana e o meio ambiente. Exposio a nveis elevados de mercrio pode afetar o crebro, o corao, os rins e pulmes e o sistema imune dos seres humanos. A toxicidade do mercrio varia de acordo com a sua forma qumica, a concentrao, a via de exposio e a vulnerabilidade do individuo exposto (Unep, 2002). Os seres humanos podem estar expostos ao mercrio por diversas fontes, incluindo o consumo de pescado, a exposio ocupacional e o uso de amlgamas dentais. Dentre as formas de mercrio, o metilmercrio a forma mais preocupante, pois possui a capacidade de atravessar as barreiras placentria e hematoenceflica, representando uma neurotoxina poderosa que pode afetar negativamente o crebro em desenvolvimento. Pesquisas revelam que a exposio de mulheres grvidas a altos e constantes nveis de metilmercrio pode ameaar o sistema nervoso dos bebs, afetando a sua capacidade de aprendizado e cognio na infncia (UNEP, 2002).

Principais

vias

de

exposio

humana

A principal forma de exposio da populao humana a dieta, em particular o consumo de pescados contaminados por metilmercrio. Tambm podem ser observados nveis elevados de mercrio em atividades econmicas, como fbricas de cloro-soda, minerao de ouro, minas de mercrio, fbricas e recicladoras de lmpadas fluorescentes, fbricas de termmetros, refinarias, clnicas dentais e fbricas de pilhas, sendo estas as principais vias de exposio ocupacional. O mercrio pode ser ainda usado como conservante de vacinas, em cosmticos e sabes clareadores, e na forma de agrotxicos. Estes usos esto proibidos no Brasil, sendo apenas permitido o uso de mercrio como antissptico, na forma de timerosal (etilmercrio tiossalicilato de sdio) para conservao de algumas vacinas.

Um dos possveis motivos para a falta de tratamento de temas ambientais nas aulas de qumica pode estar atrelado ao escasso material nessa rea para o desenvolvimento de atividades relevantes e criativas. Muitas vezes, as discusses em qumica ambiental resumem-se leitura de textos sobre o assunto que, embora sejam importantes, podem levar o estudante a achar o assunto maante e desestimulante.

O objetivo principal propor a discusso da interferncia de metais potencialmente txicos sobre determinados organismos, quando estes esto presentes em solues aquosas. A utilizao da cebola como organismo-teste no recente, esta vem sendo estudada e utilizada desde 1938, quando Levan introduziu o uso da espcie Allium cepa (cebola comum) como sistema de bioensaio para avaliar os efeitos citogenticos da colchicina em clulas vivas (Fiskesj, 1985). Desde ento, a cebola tornou-se um material de larga utilizao em testes de laboratrio, devido ao rpido crescimento de suas razes e facilidade com que so observados seus cromossomas em fases de diviso celular.Organismos testes so empregados em metodologias de laboratrio altamente padronizadas, cujos resultados so tambm altamente reprodutveis. Neste grupo so includos, entre outras metodologias, os testes com algas, daphnia, peixes, etc. Estas metodologias tm sido amplamente utilizadas no monitoramento da qualidade da gua.

Metodologia Materiais utilizados: sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) obtido em lojas de produtos para tratamento de piscinas; cinco litros de gua mineral; bulbos de cebola com dimetro de 3,5 a 4,0 cm, secos e sem formao de folhas e/ou razes; 16 copos plsticos descartveis de 80 mL (reutilizar material) ou 16 copos de requeijo com tampa; palitos de dente; 1 recipiente de medida com volume de 1 L; balana com uma casa decimal; colheres plsticas (caf) descartveis; seringa de 10 mL sem agulha; uma rgua escolar. Montagem do experimento: prepara-se uma soluo de aproximadamente 100 mg L-1 de Cu pesando 0,4 g de CuSO4.5H2O e a dissolve em 1 L de gua mineral. A partir dessa soluo, preparar oito solues com concentraes de aproximadamente 0,04; 0,06; 0,08; 0,10; 0,20; 0,40; 1,00 mg L-1 e uma soluo de controle negativo constituda de gua mineral pura. Para medir os volumes necessrios para o preparo dessas solues, sugere-se seguir o esquema apresentado na Tabela 1. Com o auxlio de uma seringa, transferir o volume indicado para um copo medidor e completar o volume at 100 mL com a gua mineral. Misturar bem com o auxlio de uma colher de plstico descartvel. Numerar oito copos plsticos descartveis ou reutilizar recipientes de alimentos (tipo copos de requeijo ou similares) de 1 a 8. Encher os copos at a borda com as solues 1 a 8, respectivamente. Colocar em cada copo uma cebola, de modo que somente a regio radicular fique em contato com as solues. Usando copos descartveis, utilizar palitos de dentes como suporte para os bulbos da cebola (Figuras 1a e 1b) e, em caso de copos de requeijo, colocar o bulbo da cebola sobre um orifcio feito na tampa (Figura 1c). Esse bioensaio realizado geralmente com cinco dias de exposio dos bulbos soluo contaminada, mas para adapt-lo ao calendrio escolar, sugere-se que os bulbos sejam deixados em contato por sete dias para aguardar o crescimento das razes. O local onde os bulbos fiquem deve ter luz natural e no pode ter calor excessivo, se preciso utilizar gua mineral para repor o volume perdido por evaporao ou absoro de gua pela cebola. Aps os sete dias, tira-se as cebolas das solues e, com uma rgua, medir o comprimento mdio das razes. A inibio do crescimento da raiz mostra o efeito da toxicidade do metal. A partir dos valores, montar uma

tabela relacionando a concentrao da soluo com o crescimento da raiz, a exemplo da demonstrada. O no crescimento das razes aumenta conforme aumenta a concentrao de cobre na soluo. Variando de 36% com a menor concentrao (0,04 mg L-1) a 94% com a maior concentrao (1,00 mg L-1). O efeito das baixas concentraes demonstra a alta sensibilidade do organismoteste (cebola) frente ao efeito txico desse elemento. A partir da observao da inibio do crescimento das razes da cebola, sugerimos que o professor conduza discusses com os estudantes relativas aos fatores que influenciam na concentrao de substncias em soluo. A proposta envolve questionar os estudantes sobre o efeito da concentrao em determinados sistemas, como o caso do observado no experimento, enfatizando a importncia da relao dose/resposta, pois mesmo o cobre sendo um elemento essencial, o aumento da dose provoca efeitos deletrios no organismo-teste. Neste exemplo, as concentraes totais de metais podem ser diretamente correlacionadas com os efeitos txicos obtidos, porm em outros ambientes, como rios e lagos, a toxicidade dos metais depende da forma qumica que assumem. Podendo por complexao haver reduo da toxicidade. Podendo formar substncias hmicas que representam 80% da matria orgnica dissolvida nas guas naturais e influenciam numerosos processos biogeoqumicos (Corami et al., 2007; Lamelas e Slaveykova, 2007). Esse fato pode gerar desdobramentos no experimento sugerido, no qual o professor pode adicionar metais gua de rio com diversas concentraes de matria orgnica como, por exemplo, guas coletadas em nascentes e pontos onde haja despejos de esgoto, dejetos de animais ou despejos de indstrias alimentcias como frigorficos e laticnios. Dessa forma, pode-se observar a diminuio da toxicidade quando comparada soluo preparada com gua mineral e discutir as reaes qumicas que podem levar a essa diminuio. Podendo debater os valores que so considerados limites para a concentrao de metais na gua para consumo humano. Entretanto, como a cebola no a melhor espcie para toxicidade por ser sensvel demais a metais, os nveis que mostraram toxicidade no so considerados. Para isso, avaliao do efeito txico, segundo Gherardi-Goldstein et al.,(1990 apud Costa et al., 2008), recomendvel mais de uma espcie representativa da biota aqutica, de preferncia pertencentes a diferentes nveis trficos da cadeia alimentar (produtores, consumidores primrios e secundrios) como, por exemplo, algas, crustceos, peixes e bactrias, isso devido s diferenas de sensibilidade apresentadas por organismos de diferentes espcies frente s substncias qumicas (Costa et al., 2008). A cebola no ideal para avaliar a toxidade de metais em gua, mas fatores como custo, simplicidade e facilidade com materiais torna o experimento satisfatrio didaticamente, mostrando os danos dos ons metlicos, quando em altas concentraes, ao organismo teste estudado, e o efeito txico do cobre tem alta importncia quando se encontra contaminando o solo ou a gua. Tambm seria bom repetir o experimento substituindo o cobre por outro metal como chumbo ou zinco e comparar os resultados, sugerir pesquisa bibliogrfica para conhecer os efeitos desses elementos nos seres humanos, quando ingeridos diretamente ou por meio da cadeia alimentar. O resduo gerado no experimento a prpria soluo de sulfato de cobre utilizada que foi preparada em diferentes concentraes. Depois de usadas, devem-se filtrar as solues geradas para retirar possveis resduos que surgiram durante a formao das razes da cebola para que possam ser utilizadas novamente. Uma alternativa a realizao do processo evaporando a soluo para recuperao do sulfato de cobre que, recuperado, poder ser utilizado posteriormente em outras atividades. As cebolas, aps o experimento, no devem ser utilizadas para fins alimentcios. Entretanto, a concentrao de cobre presente na cebola baixa e sendo este um micronutriente para plantas, estas podem ser cortadas e enterradas no jardim.

Este experimento timo para ajudar o desenvolvimento da conscincia dos alunos com o meio ambiente em relao ao cuidado e preservao dos ambientes aquticos e dos riscos da contaminao ambiental sade humana. Alm disso, o experimento proposto adequado ao tratamento de propostas interdisciplinares e no desenvolvimento de projetos com cunho ambiental que sejam desenvolvidos na escola. Quanto ao tempo de realizao do experimento, importante ressaltar que o bioensaio um experimento de observao que demanda dispor de um tempo para o preparo de solues e montagem do experimento, em geral dois perodos de aula. Posteriormente, o experimento fica em repouso durante sete dias, sendo relevante nesse perodo que o professor organize visitas com os estudantes no laboratrio ou local onde se encontra o experimento para que estes possam observar as etapas do processo, fazer anotaes, fotografar etc. Lembramos que essas observaes devem ser feitas mantendo o experimento em repouso, evitando interferncias, a fim de obter um melhor resultado final. Todas as etapas de registro dos dados podem ser exploradas pelo professor como elementos para formao de habilidades dos estudantes. Intemperismo: tambm conhecido como meteorizao, consiste na alterao fsica e qumica das rochas e de seus minerais. um importante agente no processo de formao de solos e modelador do relevo. Existem dois tipos de intemperismo: Intemperismo qumico: Quebra da estrutura qumica dos minerais que compe a rocha ou sedimento (material de origem). As rochas, ento, sofrem um processo de decomposio. A intensidade deste intemperismo relacionada com a temperatura, pluviosidade e vegetao, ocorrendo principalmente nas regies intertropicais. Intemperismo fsico: Desagregao ou desintegrao do material de origem (rocha ou sedimento) sem que haja alterao qumica dos minerais constituintes. Ele, portanto, causa uma desagregao de fragmentos cada vez menores, conservando as caractersticas de seus minerais, aumentando a superfcie de contato dos fragmentos, o que colabora com o intemperismo qumico. Em regies desrticas e de clima semirido esse processo mais intenso. Um controle negativo em geral todo o protocolo como se voc usou o exemplo, mas em vez de usar gua bidestilada. Um controle negativo PCR leva gua bidestilada em vez de DNA, por exemplo. Ento voc se certificar de que os itens que voc est usando no esto contaminados e no obter falsos positivos.