REITORIA DE GRADUAO ENFERMAGEM

ELIZABETH DE ARAJO PRAXEDES HELOSA HELENA DE MEDEIROS SILVA JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE

CARACTERIZAO DE PROTENAS Prtica 1 - Caracterizao de ovo albumina Prtica 2- Precipitao salina do ovo-albumina Prtica3- Precipitao por cido

NATAL 2010

ELIZABETH DE ARAJO PRAXEDES HELOSA HELENA DE MEDEIROS SILVA JACIARA MELO DO NASCIMENTO NUNES ZORILDE ADRIANA RODRIGUES ALBUQUERQUE

CARACTERIZAO DE PROTENAS Prtica 1 - Caracterizao de ovo albumina Prtica 2- Precipitao salina do ovo-albumina Prtica3- Precipitao por cido

Relatrio solicitado pelo curso de enfermagem da .......................sobre a caracterizao de

protenas, para nota na disciplina de processos biolgicos.

ORIENTADOR:

NATAL 2010

OBJETIVOS

Esse relatrio tem como finalidade a caracterizao de protenas, atravs de diferentes mtodos, como caracterizao do ovo albumina, caracterizao por precipitao salina e por fim, a precipitao por cido. Analisando assim, as cores resultantes de cada procedimento.

SUMRIO

INTRODUO...........................................................................................05

2 CARACTERIZAO DE PROTENAS......................................................06 2.1 PRTICA 1 - CARACTERIZAO DA OVOALBUMINA..........................06. 2.1.1 Procedimento experimental.................................................................06 2.1.2 Resultados e discusses.....................................................................07 2.2 PRTICA 2 - PRECIPITAO SALINA DA OVOALBUMINA...................08 2.2.1 Procedimento experimental..................................................................08 2.2.2 Resultados e discusses......................................................................09 2.3 PRTICAS 3- PRECIPITAO POR CIDO.............................................09 2.3.1 Procedimento experimental...................................................................09 2.3.2 Resultados e discusses.......................................................................10 3 CORES DOS EXPERIMENTOS....................................................................11 4 QUETIONAMENTOS.....................................................................................12 5 CONCLUSO.................................................................................................13 6 REFERNCIAS..............................................................................................14

INTRODUO

A deteco de protenas em materiais biolgicos envolve reaes especificas com determinados reativos, os quais originam substncias coloridas que absorvem luz na regio visvel, permitindo a sua quantificao. Dentre os mtodos utilizados, situa-se o mtodo do biureto, que baseado na reao do sulfato de cobre em meio alcalino (reativo do biureto), com protenas e peptdeos (no mnimo tripeptdeos). O nome do mtodo provm do fato de que a uria aquecida dar reao positiva, com desprendimento de amnia. O mtodo da precipitao protica que envolve supresso de cargas sobre a superfcie protica pelos ons do sal de carga oposta, a eliminao do invlucro de gua em torno da molcula protica. Os ons do sal altamente hidroflicos passam a competir com as cargas proticas pelas molculas da gua, resultando na desidratao das molculas proticas causando a precipitao. E por fim, a precipitao por cido, onde ocorre a desnaturao e precipitao de protenas positivamente carregadas. Alterando assim a estrutura das protenas.

CARACTERIZAO DE PROTENAS

PRTICA 1-CARACTERIZAO DA OVOALBUMINA

Essa prtica tem como objetivo identificar ligaes peptdicas atravs de testes colorimtricos.

1-Procedimento experimental

a) Materiais utilizados: Tubos de ensaio; gua destilada; Uria; Ovoalbumina; Hidrxido de sdio (NaOH); Sulfato de cobre (CuSo4); Pipetas graduadas; Aquecedor eltrico.

b) Procedimentos Numeramos os trs tubos de ensaio de 1 a 3. No tubo 1,colocamos 2 ml de gua destilada; No tubo 2,colocamos uma pequena quantidade de uria (com a ponta da esptula), aquecemos brandamente e adicionamos 2ml de gua destilada; No tubo 3, colocamos 2ml de soluo de ovoalbumina, e por fim, adicionamos o reativo de biureto em cada tubo (5 gotas de hidrxido de sdio e 5 gotas de sulfato de cobre), aguardamos alguns segundos e agitamos.vale a pena salientar que quando colocamos as primeiras gotas de hidrxido de sdio

no observamos nenhuma cor, porm quando adicionamos 5 gotas de sulfato de cobre, foi essencial para que as cores surgissem, identificando assim as cores.

Observamos os seguintes resultados:

2 - Resultados e discusses

Nesse experimento podemos observar que o primeiro tubo ficou azul pelo fato da mistura de gua destilada com o reativo de biureto,como o cobre em suas reaes desenvolve uma cor azul, aqui no seria diferente, a gua com o cobre ficaria azul. O segundo tubo ficou rosa, pois dependendo da complexidade da protena ou dos peptdeos em questo, a cor do produto da reao na presena do biureto varia substancialmente, sendo assim, protenas do colocarao violeta como no tubo 3, e os peptdeos do colorao rosa, como tubo 2. A intensidade da cor depende exclusivamente da concentrao de protenas. Para que a reao de biureto seja positiva, h necessidade da
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presena de pelo menos duas ligaes peptdicas na molcula. Como por exemplo, o tubo de ensaio 3.

PRTICA 2 - PRECIPITAO SALINA DA OVOALBUMINA

Essa pratica tem como objetivo caracterizar a protena por saturao salina.

1 - Procedimento experimental

a) Materiais utilizados: Ovoalbumina; Sulfato de amnia (75%); Hidrxido de sdio (2,5N); Sulfato de cobre; Tubos de ensaio; Pipetas graduadas; Funil; Papel filtro; Garra de madeira.

b) Procedimentos: Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5ml de soluo de ovoalbumina lentamente.Adicionamos 10 ml de soluo de sulfato de amnia a 75%, tambm de forma lenta, at que todo o contedo estivesse no tubo. Misturamos por inverso suavemente. Aguardamos 10 minutos, e filtramos para um novo tubo de ensaio. Com o filtrado obtido, fizemos a reao de biureto: Pipetamos 2 ml do filtrado para um outro tudo de ensaio e adicionamos o reativo de biureto (5 gotas de hidrxido de sdio e 5 gotas de sulfato de cobre).

2-Resultados e discusses:

Na precipitao salina, o tubo ficou azul negativa: Azul por causa do sulfato de cobre e negativa por no conter duas ligaes peptdicas, pois houve o filtramento da protena.

PRTICA 3 - PRECIPITAO POR CIDO

Essa pratica, tem como objetivo caracterizar a protena por desnaturao.

1- Procedimento experimental a) Materiais utilizados: Ovoalbumina; Soluo cida (HCl)

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Tubos de ensaio; Pipetas graduadas.

b) Procedimentos: Utilizamos um tubo de ensaio e colocamos 5 ml de soluo ovoalbumina lentamente. Adicionamos 3 gotas de cido lentamente e j pudermos observar a mudana na estrutura da protena.

2- Resultados e discusses:

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As protenas so compostas por 4 estruturas especificas:Estrutura primria, secundaria terciria e quartenria. A desnaturao da protena ocorre quando se rompe sua estrutura terciria. Quando a protena foi submetida ao cido clordrico, ocorreu o rompimento das ligaes peptdicas e ou a perda da estruturas terciria. Dessa maneira ocorreu uma alterao na estrutura, tornando sua funo praticamente inerte. Ficando assim, com esse aspecto branco.

CORES DOS EXPERIMENTOS

Prtica 1: Tudo 1:Azul Tubo 2: Rosa Tubo 3:Violeta

Prtica 2:Tubo 4: Azul

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Prtica 3: Tubo 5:Branco

QUESTIONAMENTOS

1) Qual o objetivo de realizar a reao do biureto com a uria aquecida e com a ovoalbumina?

Resposta: O objetivo de realizarmos a reao de biureto com a uria aquecida o fato de o biureto ser um composto que se forma pela condensao de molculas de uria com liberao de uma molcula de amnia. Esta condensao ocorre pelo aquecimento. Esse composto em contato com o sulfato de cobre em meio alcalino desenvolve uma colorao violeta. Sendo fundamental para a visualizao das protenas. Usamos o ovoalbumina para identificarmos as protenas presentes, atravs da sua colorao, pois este alimento rico em protenas, sendo fcil a visualizao.

2) Explique o que voc observou na experincia 2. O que ficou retido no papel filtro?

Resposta: Observamos que ao filtrar o ovoalbumina com o sulfato de amnia a 75%, o experimento ficou uma cor clara opaca, porm ao adicionarmos a reao de biureto, ele mudou de cor, para um azul negativo. O componente retido no papel foi o ovoalbumina.

3) Por que a reao de biureto foi negativa para o filtrado obtido?

Resposta: Porque ao filtrar a substncia, a ovoalbumina ficou retida no papel filtro, sendo assim o lquido resultante do filtrado ficou negativo, pelo fato de no conter as duas ligaes peptdicas.

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CONCLUSO

Com esse relatrio conclumos que existem diferentes mtodos para identificar as protenas como pela saturao salina, reao de biureto e at pela precipitao por cido, atravs da desnaturao, podemos fazer esse ltimo mtodo em casa de forma simples e prtica, atravs da clara do ovo e algum tipo de cido.

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REFERNCIAS

Reao de caracterizao de protenas. Disponvel em http://www2.ucg.br/cbb/professores/19/Nutricao/Bioquimica/Reacao%20de%20 Biureto.pdf, acesso em 3 de setembro de 2010.

Experimentos de qumica. Disponvel em http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/reacoes_cor adasdois.htm acesso em 3 de setembro de 2010.

WILSON, Roberto. Biologia atual. 13 Ed.1995

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