48 z MAIO DE 2014

Nova metodologia diferencia as estruturas

das heparinas de baixo e ultrabaixo peso molecular
e elucida sua ao como anticoagulante
S
empre foi difcil separar os diver-
sos tipos de heparina, substncia
produzida pela maioria dos or-
ganismos e usada como anticoa-
gulante. Cada tipo, com peso molecular
prprio, pode ter funes diferentes, at
mesmo opostas. Comparando as caracte-
rsticas estruturais de uma heparina de
baixo peso molecular, usada h dcadas,
com as de ultrabaixo peso molecular,
produzidas h apenas alguns anos, pes-
quisadores da Universidade Federal de
So Paulo (Unifesp) vericaram que as
propriedades anticoagulantes das hepa-
rinas de ultrabaixo peso molecular po-
dem variar de acordo com a composio
das cadeias de acar que as compem
e com o prprio peso molecular, apesar
de serem estruturalmente semelhantes
s de baixo peso molecular.
Quanto menor o peso molecular, mais
especca ser a ao da heparina sobre
determinadas enzimas fundamentais pa-
ra a coagulao do sangue, diz Helena
Nader, professora da Unifesp e uma das
principais especialistas em heparina no
mundo. Nos anos de 1970, seu orienta-
dor de doutorado e futuro marido, Carl
Peter Dietrich, falecido em 2005, isolou
a heparina de baixo peso molecular, o
BIOQUMICA y
Identidade
esclarecida
que possibilitou sua produo em am-
pla escala como anticoagulante. Agora
a equipe da Unifesp desenvolveu uma
metodologia de identicao das estru-
turas qumicas das heparinas de baixo
e ultrabaixo peso molecular, mostrando
como usar melhor cada grupo e abrindo
novas possibilidades de uso.
Podemos agora entender os meca-
nismos de ao das heparinas de baixo
e ultrabaixo peso molecular mais usadas
atualmente, arma Marcelo Andrade de
Lima, pesquisador do Departamento de
Bioqumica da Unifesp e primeiro autor
de um artigo publicado na Thrombosis
and Haemostasis em maro de 2013 e
destacado pelos editores em maro de
2014 como um dos mais importantes
trabalhos publicados na prpria revista
no ano anterior.
Tornou-se possvel identicar as rea-
es qumicas usadas para produzir cada
tipo de heparina, desse modo evitando
equvocos e falsicaes. A partir da,
os especialistas poderiam desenvolver
reaes qumicas especcas para obter
heparinas de ultrabaixo peso molecular
com aes novas ou mais especficas.
Poderamos determinar por qual cami-
nho queremos que esses novos compos-
Rodrigo de Oliveira Andrade
tos atuem no organismo e, assim, criar
novos agentes teraputicos, diz Lima.
Produzidas por clulas chamadas mas-
tcitos, encontradas em diferentes teci-
dos, as heparinas em geral se ligam a um
inibidor natural da coagulao chamado
antitrombina, aumentando em at 2 mil
vezes a velocidade com que a antitrom-
bina inibe as enzimas responsveis pela
coagulao. Por isso so bastante usadas
para evitar a formao de cogulos, que
podem ser fatais. O processo de coagula-
o constitui uma sequncia de reaes
enzimticas. Como em uma cascata, elas
se ligam uma a outra, convertendo pr-
-enzimas em enzimas ativas, que por m
transformam uma protena solvel, o -
brinognio, em outra, insolvel, denomi-
nada brina, que corresponde ao produto
nal da coagulao.
Todas as heparinas agem da mesma
forma sobre a antitrombina, diz Helena.
Quanto menor o peso molecular, porm,
mais seletiva ser a ao. As heparinas
convencionais, chamadas de no fracio-
nadas, constitudas por molculas com
pesos moleculares diferentes, depois de
se ligarem antitrombina, inibem a ao
de pelo menos cinco enzimas desde o in-
cio do processo de coagulao do sangue.
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PESQUISA FAPESP 219 z 49
As de baixo peso molecular agem prin-
cipalmente em duas enzimas chave do
processo, o Fator Xa e a trombina, ou Fa-
tor IIa. As de ultrabaixo peso molecular
so ainda mais seletivas e agem apenas
sobre a Xa, inibindo sua ao. Ao sepa-
rar as heparinas de acordo com o peso
molecular e caractersticas estruturais
peculiares, restringimos sua ao, cada
vez mais especca, arma Lima.
OS RASTROS DA HEPARINA
Essas reaes so conhecidas h dca-
das, mas poucos pesquisadores haviam se
preocupado em identicar as estruturas
qumicas responsveis por sua ao an-
ticoagulante. Em colaborao com pes-
quisadores do Paran, Estados Unidos e
Frana, Lima e Helena desenvolveram
uma metodologia para determinar as dife-
renas entre dois frmacos do grupo das
heparinas de ultrabaixo peso molecular:
a semuloparina, com peso molecular de
2,9 mil daltons (a unidade de medida da
massa molecular), produzida na Frana;
e a bemiparina, com 3,8 mil daltons, fa-
bricada na Espanha. As duas foram com-
paradas com a enoxaparina, a heparina
de baixo peso molecular mais usada no
mundo, tambm produzida na Frana,
com peso molecular de 4,1 mil daltons.
Todas foram produzidas a partir da he-
parina no fracionada de mucosa intesti-
nal de porcos, uma das principais fontes
da heparina usada como medicamento.
Por meio de espectroscopia de resso-
nncia magntica nuclear (RMN) e outras
tcnicas, o grupo da Unifesp avaliou as
caractersticas estruturais de cada subs-
tncia e as relacionou com seu peso mo-
lecular. Desenvolvemos um mtodo que
combina diferentes tcnicas e anlises
matemticas para avaliar essas estrutu-
ras, diz Helena. Em seguida tentamos
entender como poderamos usar esses
dados para a concepo de novas drogas.
Denidas as estruturas qumicas dessas
heparinas no Laboratrio Institucional
de RMN da Universidade Estadual de
Campinas (Unicamp) e outros centros de
anlise, os pesquisadores identicaram a
reao qumica usada para obter as hepa-
rinas de baixo e ultrabaixo peso molecu-
lar. Cada heparina, de baixo e ultrabaixo
peso, foi obtida por meio de um processo
especco. A reao qumica usada para
despolimerizar a heparina deixa rastros.
Nosso mtodo identica esses rastros e a
reao usada na produo de cada subs-
tncia, arma Lima.
Um dos rastros a composio das
cadeias de acares da heparina, que au-
mentam a anidade pela antitrombina.
No caso da semuloparina, uma reao
qumica especca usada pela empresa
Sano, da Frana, capaz de despoli-
merizar a heparina preservando uma
sequncia de cinco acares, que se li-
gam fortemente antitrombina. Assim,
a semuloparina foi obtida por uma rea-
o qumica especca em que os pen-
tassacardeos so preservados na maioria
das molculas, levando a um composto
com atividade anticoagulante dirigida
contra o Fator Xa e sem ao contra a
trombina, diz Helena. Essas informa-
es ajudaram a explicar resultados cl-
nicos recentes. H trs anos, a empresa
francesa relatou que a administrao de
semuloparina teria reduzido em 64% o
risco de trombose venosa profunda, em-
bolia pulmonar e mortes relacionadas a
tromboembolismo venoso em pessoas
com cncer no incio da quimioterapia.
O Brasil produz apenas a heparina no
fracionada, retirada da mucosa de bois e
porcos. Em 2012, o pas exportou o equi-
valente a R$ 24 milhes de heparina no
fracionada e importou as formas mais
puricadas, de maior valor agregado. n
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Projetos
1. Espectrometria de massas e de ressonncia magntica
nuclear na caracterizao estrutural de glicosaminogli-
canos e polissacardeos complexos de invertebrados e
algas (n 2010/52426-3); Modalidade Auxlio Pesquisa
Regular; Pesquisadora responsvel Helena Bonciani
Nader (Unifesp); Investimento R$ 819.080,01 (FAPESP).
2. Compostos bioativos obtidos a partir de resduos de carcini-
cultura e modicaes qumicas de heparina (n 2012/00850-
1); Modalidade Bolsa no pas Regular Ps-doutorado;
Pesquisadora responsvel Helena Bonciani Nader (Unifesp);
Bolsista Marcelo Andrade de Lima (Unifesp); Investimento
R$ 152.469,11 (FAPESP).
Artigos cientcos
LIMA, M. A. et al. Ultra-low-molecular-weight heparins:
precise structural features impacting specic anticoa-
gulant activities. Thrombosis and Haemostasis. v. 109,
n. 3, p. 471-8. mar. 2013.
CHRISTIAN W. e GREGORY Y. H. L.. Editors Choice pa-
pers in Thrombosis and Haemostasis. Thrombosis and
Haemostasis. v. 111, n. 1, p. 185-8. jan. 2014.
Alerta vermelho:
o ncleo oval de
mastcito preenchido
e cercado por grnulos
(em vermelho) que
contm heparina,
liberada em resposta
a bactrias e vrus
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