Danyelle C.

Ricardo A.





PRTICA DE LABORATRIO:
MICROBIOLOGIA
COLORAO DE GRAM

Experimento I. Cultura bacteriana meio slido e cultura meio liquida.

Introduo:

A tcnica de colorao de Gram possibilita a separao de acordo com
a estrutura da parede celular, sendo denominadas: Gram-positivas ou Gram-
negativas. A colorao de Gram recebeu este nome em homenagem a seu
descobridor, o mdico dinamarqus Hans Cristian Joaquim Gram. O mtodo
baseado na capacidade das paredes celulares de bactrias Gram-positivas de
reterem o corante cristal violeta apresentam colorao roxa, no citoplasma
durante um tratamento com etanol-acetona enquanto as paredes celulares de
bactrias Gram-negativas no retm apresentam (cor rosa).
A parede celular est presente em praticamente todas as bactrias e
possuem caractersticas diferentes que podem ser diferenciadas nesse grupo:
As Gram-positivas possuem uma parede celular espessa. J as Gram-
negativas possuem uma parede celular de superfcie mais complexa e
espessura mais fina, por isso ocorre essa diferena de colorao de uma para
a outra.















Objetivo.

Esta tcnica teve por objetivos determinar e interpretar o mecanismo
de reao de Gram, como um mtodo de colorao diferencial a fim de
distinguir o tipo de bactria.




























Materiais:

-Alas e agulhas
-Cultura bacteriana meio slido e liquido
-Lminas de vidro para microscopia;
-bateria de colorao de gram (soluo de cristal violeta, soluo de
lugol, soluo de fucsina).
-lcool 95;
-Frasco com gua;
-Bico de Bunsen;
-Papel toalha;
-Microscpio ptico;
-leo mineral.















Procedimento metodolgico.
Colorao de gram bactria gram positiva. O mtodo em questo usado
para identificao das caractersticas morfolgica de bactrias que as subdividem em
gram positiva e gram negativa.
Utilizar uma lmina de vidro e limp-la com lcool. Depositar uma gota de
H2O na lmina. Com a ala de platina aps ser flambada no bico de bunsen foi
coletado uma pequena poro do inculo bacteriano do meio de cultura slido e
realizado o esfregao na lamina. Realizado a fixao do material flambando na
lmina.
Com a lmina inclinada. Colorido o esfregao com cristal violeta e aguardado
um minuto. Utilizado a soluo de lugol para cobrir a lamina e aguardamos mais um
minuto. Gotejado o lcool etlico 95% para o desprendimento de corante. Em seguida,
lavado a lmina com gua e gotejado soluo de fucsina e aguardado trinta segundos.
Aps analisado em microscpio, realizado a lavagem e secagem da lamina.
Resultado e discusso.
Aps gotejar uma gota de leo mineral (imerso) sobre a lmina o mesmo foi
posicionado nas lentes do microscpio. Utilizando a mesma sequencia de materiais
foi realizado o experimento II. Cultura meio liquida, inoculando a bactria gram positiva
Lactobacillus casei Shirota do Yakult apresentou as seguintes caracterstica;
morfologia de bacilos e colorao roxa.
Com a anlise da lamina 4x10 foi identificado quem ambas a bactria gram
positiva apresentou morfologia bacilos e colorao roxa em razo grande quantidade
de peptidoglicano (protenas + carboidratos) na sua parede celular capaz de reter o
corante violeta durante o tratamento com lugol.
Microbiota do solo.

Morfologia bacilos
MICRORGANISMO DO AMBINTE
Microbiota do solo

Introduo.
Os microrganismos esto presentes em todos os ambientes que contenha
vida, do local mais simples para o mais complexo, No solo os microrganismos
predominantes so bactrias, fungos, protozorios e actinomicetos.
Os microrganismos formam as microbiotas que no solo que influencia o
desenvolvimento de plantas (pela matria orgnica) e torna os nutrientes necessrios
para a raiz. Na gua o microrganismo presente geralmente indica os nveis de
nutrientes na gua, sendo afetada pelo oxignio e luz, mas muito necessrios. Sem
um organismo vivo os microrganismos no tem a capacidade de crescer, mas
permanecem no ar por segundos, horas, dias, meses e ate anos.
Diante disso, nesse trabalho utilizaremos o solo como fonte de microbiota em
para nosso experimento. E os procedimentos metodolgicos de nossa amostra sero
baseados no preparo da diluio seriada que consiste no sequenciamento de uma
soluo adicionado repetidas vezes ao mesmo solvente e medida que a diluio
seriada ocorre a soluo diminui a sua concentrao da mesma possibilitando
obtermos resultado de uma soluo homognea.









Objetivo.
Observar a presena de diferentes microrganismos de um mesmo local
do ambiente.























Materiais e reagentes:

-Microbiota do solo
-Placa de petri contendo meio de cultivo
-Preparao salina 0,9
-Tubos de ensaio
-Bico de Bussen
-Pipeta volumtrica
-Cotonete para swab


























Procedimento metodolgico.
1 Pesar 1gr de solo
2 Colocar em tubo de ensaio (10
-1
) contendo 9 ml de soluo salina 0,9%
3 Transferir 1ml para outro tubo (10
-2
) contendo 9ml da soluo salina;
4 A parir do tubo (10
-3
) transferir 1ml para quarto tubo (diluio 10
-4
) e assim
sucessivamente at a diluio desejada; comumente, utilizado 10 tubos de ensaio;
porem, nesse experimento utilizaremos amostra com 6 tubos de diluio.
Selecionado 06 tubos de ensaio e identificado (t1; t2; t3; t4; t5; t6) com a
pipeta volumtrica, adicionamos 1ml da substncia diluda ao tudo de ensaio
subsequente.



Posteriormente constamos que o (t4; t5; t6) apresentaram maior diluio. Em
seguida flambaram-se as trs amostras (t4; t5; t6) e utilizado o swab com tcnica do
esfregao o microrganismo foi inoculado em trs meio de cultura: gar sabouraud
(t4; t6) e gar nutriente (t5). Aps esse procedimento, a placa levada a estufa a
temperatura de 37C e aps 48 horas acondicionado na geladeira a 4C.
Resultado e discusso.
Com mtodo da diluio seriada seguida foi possvel realizarmos a
quantificao e isolamento de numero limitado de uma nica espcie de
microrganismo utilizando meio de cultura sabourabd inoculado pela amostra (t-6)
apresentou uma nica forma de colnia de microrganismo e a quantificao. O ideal
que cada placa escolhida para contagem contenha um nmero considerado
significativo no mtodo em questo, o que para bactrias em geral seria de 30 a 300
colnias.
(t1) 1gr da
substncia 9 ml
solvente :
soluo salina
e levemente
agitamos
(t2) 1g da
substncia 9 ml
soluo salina
e levemente
agitamos
(t3) 1gr da
substncia 9 ml
soluo salina
e levemente
agitamos
(t4) 1gr da
substncia 9 ml
soluo salina
e levemente
agitamos
(t5) 1gr da
substancia 9 ml
soluo salina
e levemente
agitamos
(t6)1gr da
substancia 9 ml
soluo salina
e levemente
agitamos

TESTE DE SENSIBILIDADE A ANTIMICROBIANO -ANTIBIOGRAMA.

Introduo
Antibiograma ou Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos uma prova
utilizada para alguns grupos de bactrias, principalmente as que adquirem resistncia
facilmente, entre elas as Enterobactrias. Os testes para a deteco de resistncia
so realizados em bactrias isoladas de amostras representativas de um processo
infeccioso, no qual a sensibilidade aos antimicrobianos no previsvel ou quando
existem problemas de resistncia a antibiticos.
















Objetivo
Avaliar a sensibilidade a antimicrobianos por bactrias.






















Material
-Cultivo de microrganismo do ambiente
-Meio de cultivo: saborau e nutriente
-Disco de papel impregnados com antibiticos
-Cotonete para swab
-Bico de bussen
-Pina

















Procedimento metodolgico.
Utilzado o cotonete umedecido para fazer o swab de amostras do ambientes:
bebedouro, oculos, capacete de motociclista.
Realizado a inoculao de microrganismos na placa de petri em meio
nutriente e sabourau por meio da tecnica esfregao.
Utilizando um pina foram incubados e dispotos os antibioticos nas placas
para teste: eritromicina e gentamicina (gar nutriente) e vancomicina e tetraciclina em
(agr saborau). Armazenado na estufa a 36C.
Aps o tempo decorrido de 18 a 24 horas, foram obervados que o
experimento no apresentou o resultado eficiente, isto halo de inibio
bacteriologica; pois, o crescimento do microrganismo foi de fungos.
Resultado e discusso.
O teste de senbilidade a antimicroniano no apresentou resultado positivo
frente a reposta dos microrganismo observado; no caso, fungos. Em consequncia a
necessidade de se repetir o experimento utilizando antifungicos para avaliar a
sensibilidade do microrganismo.











Referncias:
Sites.
Tcnica de colorao de Gram_____________________________________
http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/115_03gram.pdf Acessado em 07/08/2014;
Manual para Antibiograma_________________________________________
http://www.interlabdist.com.br/dados/noticias/pdf_190.pdf Acessado em 07/08/2014