ESTUDO COMPARATIVO DE MTODOS COPROLGICOS: TF TESTE,

KATO-KATZ, HPJ, WILLIS E BAERMANN-MORAES.

Luciano Evangelista Moreira
1
*, Daniel de Azevedo Teixeira
1
,

RESUMO
O diagnstico laboratorial uma das alternativas mais eficazes na determinao clnica de uma patologia. As
parasitoses so amplamente distribudas em pases subdesenvolvidos e o exame coproparasitolgico a forma
mais indicada para os diagnsticos destas enfermidades. A realizao dos exames coproparasitolgicos podem
se apresentam por diversas tcnicas como: de Baermann Moraes, Willis, Kato-Katz, HPJ. A tcnica TF-Test
procura agregar alta eficincia, simplicidade e praticidade no manuseio e baixo custo aliada a estes exames.
Realizou-se ento anlise de fezes por diferentes tcnicas Baermann Moraes, Willis, Kato-Katz, HPJ e TF-
Test, as fezes foram coletadas na comunidade Quilombola Santa Cruz. Os resultados apresentados
demonstraram maior eficincia tcnica TF-Test. A alta eficincia da tcnica est associado ao fato desta
tcnica utilizar um nmero maior de amostras, limpeza do sedimento, sedimentao forada por centrifugao
e, principalmente por abranger diagnstico de protozorios to bem quanto os de helmintos.

Palavras-chave: Diagnstico laboratorial, TF-Test, Parasitologia


ABSTRACT
The laboratorial diagnosis is one of the alternatives most efficient in the clinical determination of a pathology.
The parasatisms widely are distributed in underdeveloped countries and the coproparasitolgico examination
is the indicated form more for the disgnostic of these diseases. The accomplishment of the
coproparasitolgicos examinations can if they present for diverse techniques as: of Baermann Moraes, Willis,
Kato-Katz, HPJ. The TF-Test technique looks for to add high efficiency, simplicity and praticidade in the
manuscript and low allied cost to these examinations. Excrement analysis was become fullfilled then for
different techniques Baermann Moraes, Willis, Kato-Katz, HPJ and TF-Test, the excrements had been
collected in the community Quilombola Santa Cruz. The presented results had demonstrated to greater
efficiency to the TF-Test technique. The high efficiency of the technique is associated with the fact of this
technique to use a bigger number of samples, cleanness of the sediment, sedimentation forced for
centrifugalization and, mainly for enclosing diagnosis of protozorios so well how much of helmintos

Keywords: laboratorial diagnosis, TF-Test, Parasitology


INTRODUO

Mesmo diante da existncia de inmeros mtodos quantitativos e qualitativos de
diagnstico coproparasitolgico, muitos ainda recebem crticas por suas limitaes,
complexidade de tcnica, baixa sensibilidade e alto custo de realizao, restringindo sua
utilizao na rotina de laboratrios particulares, pblicos e at em trabalhos de pesquisa
acadmica. Um diagnstico parasitolgico deve buscar de maneira apropriado uma alta

1
Professor Adjunto da UNIPAC-TO
sensibilidade e especificidade na visualizao de estruturas parasitrias intestinais, uma vez
que o tratamento especfico do paciente fica dependente dessas condies.
De acordo com Mendes et al. (2005), em laboratrios de rotina seria importante realizar
mais de um mtodo de diagnstico para detectar as formas parasitrias de protozorios e
helmintos, principalmente quando h baixa carga parasitria.
Neste contexto fica explicito a necessidade de escolha de mais de um mtodo em funo de
suspeitas clnicas especficas como, por exemplo, o de Baermann Moraes para larvas de
Ancilostomdeos e Strongyloides e Willis para Ancilostomdeos, cistos e oocistos de
protozorios (CERQUEIERA et al., 2009).
Diante dessa demanda de uma melhor tcnica de diagnstico parasitolgico, que possa
atender tanto as necessidades dos laboratrios quanto das pesquisas acadmicas, surgiu no
mercado uma tcnica de concentrao por centrifugao chamada de TF-Test que procura
agregar alta eficincia, simplicidade e praticidade no manuseio e baixo custo.
Como o TF-teste anunciado pelo fabricante (empresa Immunoassay Ind. Com. Ltda.,
So Paulo, Brasil) como uma tcnica inovadora que utiliza a concentrao e limpeza do
material fecal atravs da centrifugao e dupla filtragem, far-se- necessrio qualific-la
frente a um estudo comparativo com as outras tcnicas de diagnstico parasitolgico
tradicionais.
Assim sendo, a proposta deste trabalho realizar a comparao da sensibilidade das
tcnicas tradicionais de diagnstico parasitolgico, Kato-Katz, HPJ, Willis e Baermann-
Moraes, com a tcnica de TF-Test.

MATERIAIS E MTODOS

O estudo compreendeu a comunidade Quilombola Santa Cruz, localizada na zona rural do
municpio de Ouro Verde de Minas, nordeste de Minas Gerais, 480 km de Belo
Horizonte, cuja populao constituda por 308 indivduos.
Essa populao foi selecionada para participar deste estudo comparativo por estar
localizada numa regio de alta prevalncia de enteroparasitoses, principalmente a
esquistossomose, e estar inserida no Programa de Controle de Esquistossomose PCE da
FUNASA. Este estudo foi submetido ao Comit de tica em Pesquisa da Universidade
Federal de Ouro Preto- CEP- UFOP (Parecer n 2005/58), ao Comit Nacional de tica em
Pesquisa (CONEP), (Parecer n 902/2006, Registro: 12827) como uma forma de
qualificao da tcnica TF-Test que seria usada pelo autor em sua dissertao de
mestrado na Terra Indgena KRENAK. FUNAI (parecer n 73/CGEP/06)
Em Abril de 2007 foram distribudos a todos moradores da comunidade em questo um
frasco coletor universal e um kit TF-Test para a coleta de material fecal. As pessoas
foram orientadas a coletar as fezes em trs dias alternados para o kit TF-Test, sendo que,
no ltimo dia, a amostra das fezes tambm era acondicionada no coletor universal. Os
recipientes foram devidamente lacrados, rotulados e recolhidos no stimo dia aps a sua
distribuio. Posteriormente, as amostras foram transportadas em isopor para o Laboratrio
de Parasitologia da Faculdade Presidente Antnio Carlos de Tefilo Otoni, para realizao
do exame microscpico das amostras.
O material fecal dos coletores universal foi utilizado para a realizao das tcnicas de Kato-
Katz (n=270), HPJ (n=270), Willis (n=292) e Baermann-Moraes (n=271) de cada morador.
Vale observar que o kit TF-Test contou com a adeso de 100% da populao (n=308) do
Quilombola Santa Cruz enquanto que 94,8% dos indivduos (n=292) deste Quilombola
acondicionaram as fezes no coletor universal (n=292). Entrementes, o material fecal
coletado nos coletores universal no foi suficiente para anlise de 292 amostras para todas
as tcnicas.
Como os frascos que compem o kit TF-Test so dotados de meio conservante que
protege o material fecal para a anlise at 30 dias, eles foram analisados aps a realizao
do processamento das outras tcnicas.
Destaca-se que os laudos diagnsticos foram encaminhados para a Secretaria de Sade de
Ouro Verde de Minas a fim de ser providenciado o tratamento dos indivduos que
apresentaram resultado positivo neste estudo comparativo.
A seguir so descritos os mtodos operacionais seguidos para cada uma das tcnicas
utilizadas nesse estudo.
Mtodo de TF-Test
Cada morador da comunidade Quilombola Santa Cruz (n=308) participou desta tcnica
com trs amostras separadas e rotuladas que foram processadas conforme os procedimentos
operacionais indicados pelo fabricante do Kit TF-Test:
- Agitar o tubo coletor para homogeneizao do material fecal coletado;
- Abrir o tubo coletor cuidadosamente, simulando o movimento de rosca, para no derramar
o lquido;
- Encaixar os tubos coletores na estante;
- Acrescentar uma gota de detergente neutro e incolor em cada tubo coletor;
- Acrescentar 3 ml de acetato de etila p. a. por tubo;
- Vedar os tubos coletores inseridos na estante, agitando-os para homogeneizar o material,
com o auxlio da rgua homogeneizadora;
- Encaixar os 3 tubos coletores no conjunto de filtros e centrifugao;
- Colocar o conjunto processador na caapa da centrfuga (100 ml - universal),com os tubos
coletores virados para cima.
- Centrifugar o sistema a 1500 rpm por 1 minuto;
- Desencaixar cuidadosamente o tubo de centrifugao do conjunto processador, simulando
rosca;
- Descartar o sobrenadante em recipiente apropriado, segundo normas de biossegurana,
inclinando cuidadosamente o tubo na horizontal;
- Encaixar o tubo de centrifugao na estante;
- Acrescentar ao sedimento cerca de 10 gotas de soluo fisiolgica;
- Homogeneizar delicadamente;
- Transportar de uma a trs gotas do material homogeneizado para a lmina de microscopia,
utilizando canudo, pipeta Pasteur ou plstica descartvel;
- Acrescentar uma gota de lugol 2%;
- Cobrir o material com lamnula;
- Examinar o material preparado em microscpio com aumentos de 100 X e 400 X
(empresa Immunoassay Ind. Com. Ltda., So Paulo, Brasil)
Mtodo de Kato-Katz
O material fecal encaminhado nos coletores universal possibilitou a realizao de 270
anlises por meio da tcnica de Kato-Katz que consiste em uma simplificao do mtodo de
Kato, introduzida por Katz e Col., e cuja padronizao descrita a seguir:
Sobre uma pequena amostra de fezes colocada sobre papel absorvente deposita-se uma tela
de nylon que comprimida com auxlio da esptula far com que parte das fezes passe
atravs de suas malhas. Estas so recolhidas com a esptula e comprimidas no orifcio de
uma placa perfurada, que j dever estar sobre uma lmina, at que este se encontre cheio.
Retirar o excesso de fezes com a lateral da esptula. Levantar a placa perfurada, inclinando,
inicialmente, uma das extremidades e retir-la de modo a permanecer sobre a lmina de
vidro um cilindro de amostra fecal. Sobre este cilindro colocada uma lmina de celofane,
previamente embebida e soluo de DIAFIX.
A lmina em seguida invertida sobre uma superfcie lisa e pressionada de modo a
espalhar uniformemente o material entre a lmina e a lamnula evitando o extravasamento
das fezes. Aguarda-se 30 minutos para clarificao do esfregao fecal e examina-se ao
microscpio em objetivas de 10 X e 40 X (KATZ,1972).
Mtodo de HPJ (HOFFMAN; PONS; JANER)
Foram realizados 270 exames parasitolgicos por meio da tcnica de Hoffman, Pons e
Janer (HPJ) que conhecida no Brasil como Lutz. Foi seguido o seguinte procedimento:
Foi retirado do material fecal de 2 a 4 g, homogeneizadas com gua e passadas para um
clice de sedimentao de 100 ml, atravs de uma gaze dobrada em quatro partes, e seu
volume completado com gua de torneira. Esta suspenso foi deixada em repouso para que
ocorresse uma sedimentao espontnea das estruturas parasitrias e s ento, depois de
passado 4 a 6 horas, foi examinada ao microscpio em objetivas de 10 X e 40 X (REY,
2002).
Mtodo de Willis
Todos os moradores que entregaram seu material fecal nos coletores universal (n=292)
foram contemplados com a realizao do exame parasitolgico por meio da tcnica de
flutuao de Willis que segue a seguinte padronizao:
Colocar 10g de fezes num frasco de borrel, diluir as mesmas em soluo saturada de cloreto
de sdio completar o volume at a borda do frasco, colocar na boca do frasco uma lmina,
que dever estar em contato com o lquido, deixar em repouso por 5 minutos, retirar
rapidamente a lmina voltando para cima a parte molhada, cobrir com lamnula, levar ao
microscpio e examinar com objetiva de 10 X e/ou 40 X (pode-se corar pelo lugol) (REY,
2002).
Mtodo de Baermann-Moraes
O procedimento operacional descrito abaixo foi realizado para 271 amostras.
Colocar 8 a 10 g de fezes em um parasitofiltro sobre um funil de vidro, contendo um tubo
de borracha conectado extremidade inferior de sua harte, obliterar o tubo de borracha com
uma pina de Hoffmann e adicionar ao funil, gua aquecida (45C) em quantidade
suficiente para entrar em contato com as fezes. Deixar 1 hora em repouso, findo esse
tempo, colher 5 a 7 ml da gua, em um tubo de centrfuga, abrindo-se a pina, centrifugar a
1.000 rpm por 1 minuto, coletar o sedimento e examinar ao microscpio em objetivas de
10 X e 40 X (REY,2002).

RESULTADOS E DISCUSSO

A adeso da comunidade Quilombola ao experimento pela tcnica de TF-Test chegou
totalidade (n=308) por si tratar de uma novidade para a comunidade que estava acostumada
a fazer a coleta de material fecal em um recipiente pequeno distribudo pela FUNASA em
seu Programa de Controle da Esquistossomose (PCE). Inclusive esse recipiente fora
utilizado na pesquisa para coleta do material para as demais tcnicas por 292 indivduos
sendo que somente em 270 frascos o material fecal era suficiente para fazer todas as
tcnicas.
Os resultados do estudo comparativo da taxa de positividade de acordo com o mtodo
parasitolgico, realizado no Quilombola Santa Cruz, localizado no municpio de Ouro
Verde de Minas, so apresentados na Tabela 1.

Tabela 1- Estudo comparativo da taxa de positividade de acordo com o mtodo
parasitolgico, Quilombola Santa Cruz, Ouro Verde de Minas, (Minas Gerais,
2007).
Teste parasitolgico TF-
Test
Kato-
Katz
HPJ Willis Baermann-
Moraes
Tamanho da amostra 30
8
% 27
0
% 27
0
% 29
2
% 271 %
Entamoeba
histoliticadispar
19 6,2 - - 5 1,9 2 0,
7
3 1,1
Entamoeba coli 57 18, - - 40 14, 4 1, 25 9,2
5 8 4
Iodamoeba buschlii - - - - - - - - - -
Endolimax nana
59 19,
2
- - 26 9,6 3 1,
0
11 4,1
Giardia lamblia
29 9,4 - - 10 3,7 2 0,
7
4 1,5
Taenia sp 1 0,3 - - - - - - - -
Hymenolepis nana - - - - - - - - - -
Schistosoma mansoni
71 23,
1
72 26,
7
31 11,
5
1 0,
3
10 3,7
Ascaris lumbricoides
22 7,1 18 6,7 18 6,7 6 2,
1
15 5,5
Ancilostomdeos
21 6,8 3 1,1 13 4,8 8 2,
7
5 1,9
Strongyloides stercoralis
14 4,6 - - 13 4,8 1 0,
3
14 5,2
Trichuris trichiura 1 0,3 - - - - - - - -
Enterobius vermicularis
2 0,7 1 0,4 1 0,4 3 1,
0
- -
Total 19
0
61,
7
92 34,
1
11
1
41,
1
25 8,
6
79 29,2

A tcnica TF-Test foi o mtodo que apresentou o maior percentual de positividade para
todos os parasitos, com exceo para o Schistosoma mansoni que foi superado pelo teste
Kato-Katz, com uma diferena de 3,6%. Porm, os pacientes que apresentaram resultados
positivos no TF-Test para o Schistosoma mansoni (n=71) estavam inseridos nos
resultados positivos para o mesmo parasito pela tcnica de Kato-Katz (n=72). A diferena
de positividade observada para o Strongyloides stercoralis pelo mtodo HPJ (0,2%) e
Baermann-Moraes (0,6%) no significativa.
O Kato-Katz, tcnica muito utilizada pela Fundao Nacional de Sade - FUNASA no
Programa de Controle de Esquistossomose, apesar de mais sensvel, no indicada para a
deteco de larvas de helmintos e protozorios intestinais (REY, 2002). Chaves (1979), em
um estudo comparativo de mtodos coprolgicos, observou que o Kato-Katz apresentou
sensibilidade (positividade) 2 a 4 vezes superior aos mtodos de Lutz e Faust modificado
para diagnstico de ancilostomdeo, Trichuris trichiura e Schistosoma mansoni, sendo
equivalente ao Lutz no diagnstico de Ascaris lumbricoides.
O TF-Test, alm de detectar os protozorios, apresentou neste estudo uma positividade
para outros parasitos muito superior do que aqueles identificados pelo mtodo Kato-Katz.
Por sua vez, o HPJ, que uma tcnica muito utilizada em laboratrios de anlises clnicas
por abranger o diagnstico de protozorios e helmintos, apresentou resultados de
positividade inferior para todos os parasitos quando comparado com o mtodo TF-Test.
Vale destacar que o HPJ tem a desvantagem de apresentar grande quantidade de detritos
fecais no sedimento final a ser analisado. Estes detritos decorrem do procedimento tcnico
de filtragem, o que dificulta com frequncia a visualizao de parasitos na lmina, podendo
fornecer resultados falso-negativos para o diagnstico de protozorios intestinais (DE
CARLI, 2001; GARCIA, 2001).
A tcnica de Willis a mais indicada para diagnstico de estruturas leves, como cistos de
protozorios e ovos de ancilostomdeos (REY, 2002). Entretanto, no estudo comparativo
entre as tcnicas, os casos positivos apresentados pelo mtodo TF-Test foram superiores
aos da tcnica de Willis em relao a todos os protozorios e helmintos que foram
diagnosticados.
Cerqueira (2009), em um estudo comparativo no encontrou diferena significativa de
positividade entres as tcnicas HPJ (59,28%) e Willis (51,55%).
Por ltimo, a tcnica Baermann-Moraes, que a mais indicada no diagnstico de larvas de
Strongyloides stercoralis em funo do tropismo das larvas por gua tpida (REY, 2002),
apresentou uma sensibilidade um pouco maior que a do TF-Test, porm esta diferena
no foi significativa, no justificando o seu uso em funo da sua baixa positividade em
relao aos demais parasitos.

CONCLUSO

Os dados obtidos demonstram que a tcnica de TF-Test de fato melhor que as tcnicas
convencionais utilizadas (Kato-Katz, HPJ, Willis e Baermann-Moraes), por apresentar
positividades de diagnstico maiores que as tcnicas convencionais. Esta supremacia est
relacionada ao fato desta tcnica utilizar um nmero maior de amostras, limpeza do
sedimento, sedimentao forada por centrifugao e, principalmente por abranger
diagnstico de protozorios to bem quanto os de helmintos.
A alta sensibilidade e os aspectos prticos demonstram que a tcnica de TF-Test
apropriada para diagnstico individual e inquritos populacionais.

REFERNCIAS

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DIALOGO E CINCIA, DISPONVEL
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KATO, K. & MIURA, M. Comparative examinations. Jap. J. Parasit., 3:35, 1954.

KATZ, N. et al. A simple device for quantitative stool thick-smear technique in
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REY, L. - Bases da Parasitologia Mdica. Editora Guanabara Koogan, Rio de Janeiro (RJ),
2002.