D18

UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE
FACULDADE DE VETERINRIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM MEDICINA VETERINRIA
(CLNICA E REPRODUO ANIMAL)
MRCIA DE SOUZA XAVIER
Estudos de Hemoparasitos por evidncias morfolgicas, sorolgicas e moleculares,

com nfase na famlia Anaplasmataceae em Canis familiaris L., na regio litornea
do Estado do Rio de Janeiro.
NITERI - RJ
2011

Tese apresentada ao Programa De PsGraduao

(Clnica
em
e
Medicina
Reproduo
Veterinria
Animal)
Universidade Federal Fluminense, como

requisito parcial para a obteno do
Grau de Doutor. rea de Concentrao:
Clnica Veterinria.
ORIENTADORA:Profa Dra NDIA REGINA PEREIRA ALMOSNY

CO-ORIENTADOR: Prof Dr ALOYSIO MELO DE FIGUEIREDO CERQUEIRA
NITERI - RJ
2011

Tese apresentada ao Programa De Ps-Graduao
em Medicina Veterinria (Clnica e Reproduo
Animal) Universidade Federal Fluminense, como
requisito parcial para a obteno do Grau de
Doutor. rea de Concentrao: Clnica Veterinria.
Aprovada em 12 de julho de 2011.

BANCA EXAMINADORA
___________________________________________
Prof Dr Ndia Regina Pereira Almosny - Orientadora
Universidade Federal Fluminense UFF
___________________________________________
Prof. Dr. Aloysio Melo de Figueiredo Cerqueira
___________________________________________
Prof. Dr. Alexsandra Rodrigues de Mendona Favacho
Fundao Oswaldo Cruz RJ FIOCRUZ RJ
___________________________________________
Prof. Dr. Nayro Xavier de Alencar
___________________________________________
Prof. Dr. Carlos Massard
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro UFRRJ
___________________________________________
Prof. Dr. Eduardo Borges Viana
Universidade Federal do Tocantins UFT
___________________________________________
Prof. Dr. Gil Vicente O. da Silva
Universidade Grande Rio - UNIGRANRIO
DEDICATRIA
minha famlia,
fonte de todo amor e compreenso.
AGRADECIMENTOS
Agradeo a todos que colaboraram e ajudaram na realizao desse trabalho,
principalmente aqueles que o fizeram pelo amor e pela amizade.
Agradeo a DEUS que me deu uma famlia e uma legio de colegas e amigos
maravilhosos que sempre contribuem para o meu desenvolvimento.
Agradeo muito especialmente aos meus professores de Patologia Clnica
Veterinria, professor Marclio Dias do Nascimento e a professora Ndia Regina
Pereira Almosny que levaram a me apaixonar por essa rea da Medicina Veterinria
e, com isso, me sentir muito realizada na profisso. Agradeo mais uma vez a
professora Ndia pelo duplo impulso na minha trajetria profissional desde o
mestrado e agora no doutorado e, mais uma vez ao professor Marclio, por todos os
ensinamentos que voluntaria ou involuntariamente eu recebi durante maravilhosos
anos de convivncia, trabalhando juntos.
Agradeo ao professor Aloysio Mello de Figueiredo Cerqueira pelo acolhimento em
seu laboratrio, pela pacincia em esclarecer minhas dvidas de biologia molecular,
solucionar problemas que aparentemente me pareciam insolveis e pela amizade
que desenvolvemos.
A Universidade Federal Fluminense por ter me ensinado Medicina Veterinria e
ainda por ensinar at hoje, e mais, por trabalhar aqui, me fazendo sentir como fosse
continuidade da minha casa.
Aos programas dos governos estadual e federal, FAPERJ e CNPq, de fomento a
pesquisa universitria que permitiram, atravs da professora Ndia, o financiamento
desse trabalho.
EPGRAFE
Quem no vive para servir no serve para viver.
Quem ama cuida.
Ditados populares
SUMRIO
LISTA DE QUADROS, p. 12
LISTA DE TABELAS, p. 13
LISTA DE FIGURAS, p. 21
LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS, p. 22
RESUMO, p. 24
ABSTRACT, p. 25
1 INTRODUO, p. 26
2 REVISO DE LITERATURA, p.29
2.1 HISTRICO E AGENTES ETIOLGICOS, p. 29
2.1.1 Taxonomia, p. 32
2.2 EHRLICHIOSES NOS ANIMAIS, p. 34
2.2.1 Ehrlichiose Monoctica Canina, p.35
2.2.2 Anaplasmose canina, p. 38
2.3 EPIDEMIOLOGIA, p. 42
2.3.1 Fatores de risco, p. 43
2.3.2 Ocorrncia de co-infeco, p. 44
2.3.3 Ocorrncia no Brasil, p. 46
2.3.4 Ocorrncia em populaes trombocitopnicas, p. 49
2.3.5 Estudos epidemiolgicos de A. platys, p. 49
2.4 FISIOPATOGENIA, p. 50
2.4.1 Estudos biolgicos, p. 50
2.4.2 Alteraes celulares e na imunidade, p. 51
2.4.3 Fisiopatogenia da trombocitopenia, p. 53
2.5 PATOLOGIA CLNICA p. 54
2.5.1 Alteraes Hematolgicas, p. 55
2..5.1.1 Alteraes Plaquetrias, p. 55
2..5.1.2 Alteraes Eritrocitrias, p. 57
2..5.1.3 Alteraes Leucocitrias, p. 58
2.5.2 Alteraes bioqumicas, p. 59
2.6 DIAGNSTICO, p. 60
2.6.1 Pesquisa microscpica direta, p.61
2.6.2 Testes sorolgicos, p. 63

2.6.3 Isolamento microbiano, p. 68
2.6. 4 Reao em Cadeia da Polimerase (PCR), p. 68
2.6. 4.1 O estudo do DNA e diversidade gentica, p. 69
2.6. 4.2 Deteco cruzada e anlise diferencial na PCR, p. 70
2.6. 4.3 Sensibilidade diagnstica, p. 72
2.6. 4.4 Anlise comparativa entre mtodos diagnsticos, p. 74
2.7 TRATAMENTO E PREVENO, p. 76
3 OBJETIVOS, p. 79
3.1 OBJETIVOS GERAIS, p.79
3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS, p. 79
4 MATERIAIS E MTODOS, p. 80
4.1 LOCALIZAO, p. 80
4.2 ANIMAIS, p. 81
4.3 COLETA E PROCESSAMENTO DAS AMOSTRAS DE SANGUE E SORO, p. 82
4.3.1 Realizao do hemograma, p. 82
4.3.2 Pesquisa de hemoparasitas, p. 83
4.3.3 Dosagens bioqumicas, p. 83
4.3.4 Deteco imunolgica, p. 83
4.4 DIAGNSTICO MOLECULAR, p. 84
4.4.1 Extrao de DNA, p. 84
4.4.2 Ensaios de PCR para deteco de Ehrlichia sp., Ehrlichia canis e
Anaplasma platys, p. 85
4.4.2.1 Iniciadores (primers), p. 85
4.4.2.2 Protocolos de PCR, p. 86
4.4.2.3 Anlise dos produtos da PCR, p. 87
4.4.2.4 Sequenciamento de DNA dos produtos amplificados obtidos nos ensaios de
PCR, p. 87
4.4.3 Pesquisa de Babesia sp. nas amostras positivas em protocolos genricos
para Anaplasmataceae, p. 88
4.4.4 Pesquisa de Hepatozoon sp. por PCR e sorologia para Leishmania sp., p.
88
4.5 ANLISE ESTATSTICA, 88
5 RESULTADOS E DISCUSSO, p. 89
5.1 ANLISES MORFOLGICAS DOS ESFREGAOS SANGUNEOS, p. 89

5.2 REAES DE PCR, p. 94
5.2.1 Reaes de PCR espcie especfica, p. 98
5.2.2 Associao dos resultados da PCR com os das amostras positivas na
anlise microscpica direta, p. 102
5.2.3 Associao entre as amostras PCR positivas e parasitas de outros
grupos taxonmicos, p.105
5.3 REAES SOROLGICAS POR MTODO DE ELISA, p. 110
5.3.1 Reaes sorolgicas de E. canis, p. 112
5.3.2 Avaliao sorolgica de A. phagocytophilum, p. 114
5.3.3
Associao
dos
resultados
das
amostras
positivas
na
anlise
microscpica direta com os resultados da sorologia, p. 115

5.3.4 Associao dos resultados da PCR com os da sorologia, p. 117
5.3.5 Associao dos resultados da PCR com os morfolgicos e os da
sorologia, p. 120
5.3.6 Associao entre as amostras com sorologias positivas e parasitas de
outros grupos taxonmicos, p. 122
5.4 AVALIAO DA FREQUNCIA DE ANAPLASMATACEAE CONSIDERANDO
ANIMAIS POSITIVOS EM PELO MENOS UM MTODO DE DIAGNSTICO, p. 128
5.4.1 Frequncia de E. canis, p. 130
5.4.2 Frequncia de A. platys, p. 133
5.5 AVALIAO DOS EXAMES HEMATOLGICOS E BIOQUMICOS, p. 134
5.5.1 Ces com resultados PCR positivos com sorologias negativas, p. 135
5.5.1.1 Sem parasitas co-infectantes, p. 135
5.5.1.1.1 Ces PCR positivos apenas em protocolos genricos, p. 135
5.5.1.1.2 Ces PCR positivos em protocolos especficos, p. 139
5.5.1.2 Ces PCR positivos soronegativos com parasitas co-infectantes, p. 139
5.5.1.2.2 PCR positivos em protocolos especficos, p. 141
5.5.2 Ces com resultados PCR positivos com sorologias positivas, p. 143
5.5.2.1 Ces com resultados PCR positivos com sorologias positivas sem coinfeco, p. 143
10
5.5.2.1.1.1 Ces PCR positivos apenas em protocolos genricos sororreativas

para E. canis, p. 143
para A. phagocytophilum, p. 144
para A.phagocytophilum e E. canis, p. 145
5.5.2.1.2 Ces PCR positivos em protocolos especficos, p. 147
5.5.2.1.2.1 Ces PCR positivos para A. platys sororreativas para A.
phlagocytophilum e/ou E. canis, p. 147
5.5.2.1.2.2 Ces PCR positivos E. canis sororreativos para A. phlagocytophilum
e/ou E. canis, p. 149
5.5.2.2. Ces com resultados PCR positivos com sorologias positivas com coinfeco, p. 152
5.5.2.2.1 Ces PCR positivos apenas em protocolos genricos sororreativas para E.
canis e/ou A. phagocytophilum, p. 152
5.5.2.2.2 Ces PCR positivos em protocolos especficos sororreativas, p. 161
5.5.2.2.2.1 Ces PCR positivos para A. platys sororreativas para E. canis, p. 161
5.5.2.2.2.2 Ces PCR positivos para E. canis sororreativas para E. canis e A.
phagocytophilum, p. 162
5.5.3 Ces PCR negativos soropositivos, p. 163
5.5.3.1 Ces sem parasitas co-infectantes, p. 164
5.5.3.1.1 Ces sororreativas para E. canis, p. 164
5.5.3.1.2 Ces sororreativas para A. phagocytophilum, p. 165
5.5.3.1.3 Ces sororreativos para E. canis e A. phagocytophilum, p. 166
5.5.3.2 Ces PCR negativos soropositivos com parasitas co-infectantes, p.168
5.5.3.2.1 Ces sororreativas para E. canis, p. 168
5.5.3.2.2 Ces soropositivos para A. phagocytophilum, p. 173
5.5.3.2.3 Ces sororreativas para E. canis e A. phagocytophilum, p. 177
5.5.4 Anlise estatstica das Alteraes Hematolgicas e Bioqumicas, p. 183
5.5.5 Comentrios finais sobre Alteraes Hematolgicas e Bioqumicas, p. 191
5.6 ANIMAIS NEGATIVOS, p. 192
6 CONCLUSES, p, 195
7 PERSPECTIVAS, p. 196
8 BIBLIOGRAFIA REFERENCIADA, p. 197
11
9 ANEXOS, p. 220
ANEXO 1, p. 220
ANEXO 2, p. 221
ANEXO 3, p. 222
ANEXO 4, p. 223
LISTA DE QUADROS
Quadro 1. Resumo das mudanas taxonmicas nos gneros Ehrlichia e Anaplasma,

segundo Rymaszewska e Grenda (2008), p. 35
LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Resultados das pesquisas de mrulas de hemoparasitas em esfregaos

sanguneos de ces do municpio de Maric/RJ 2007, com os diferentes
tipos de glbulos sanguneos em que foram observadas, p. 91
Tabela 2: Resultados das pesquisas de hemoparasitas em esfregaos sanguneos,
de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, p. 92
Tabela 3: Resultados das pesquisas de hemoparasitas em esfregaos sanguneos
de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, distribudos pelos bairros
pesquisados, mostrando as clulas em que se encontravam as
incluses, p. 94
Tabela 4: Resultados de PCR para Anaplasmataceae de amostras sanguneas de
ces do municpio de Maric/RJ em 2007, p. 96
Tabela 5: Resultados da frequncia de Anaplasmataceae em ces, de quatro bairros
do municpio de Maric/RJ, em 2007, segundo avaliao de PCR, em
protocolos genricos, p.99
Tabela 6: Resultados de PCR para E. canis e A. platys, em relao s reaes de
protocolo genrico, de amostras sanguneas de ces do municpio de
Maric/RJ em 2007, p.99
Tabela 7: Resultados de PCR para E. canis e A. platys de amostras sanguneas de
ces do municpio de Maric/RJ em 2007, distribudas pelos bairros
estudados, p.101
Tabela 8: Resultados da PCR de amostras sanguneas de ces do municpio de
Maric/RJ, em 2007, associados aos das pesquisas de hemoparasitas
em esfregaos sanguneos, com suas respectivas clulas com incluses.
p.104
Tabela 9: Amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007,
distribudas pelos 4 bairros avaliados, positivas para Anaplasmataceae
em PCR, em que outros parasitas foram detectados, por diferentes
mtodos, p. 107
Tabela 10: Distribuio pelos bairros avaliados, do nmero de amostras sanguneas

de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, positivas para
Anaplasmataceae em PCR e os outros parasitas que foram detectados
por diferentes mtodos, p. 108
Tabela 11: Nmero de amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em
2007, distribudas pelos bairros estudados, positivas em PCR especfico
para Ehrlichia canis/Anaplasma platys, e outros parasitas, que foram
detectados por diferentes mtodos, p. 109
Tabela 11a: Nmero de amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ,
em 2007, distribudas pelos bairros estudados, positivas em PCR para
Anaplasmataceae, e outros parasitas, que foram detectados por
diferentes mtodos, 109
Tabela 12: Resultados com sorologia positiva para E. canis e A. phagocytophilum e
negativas, de amostras de ces do municpio de Maric/RJ em 2007, p.
112
Tabela 13: Resultados com sorologia positiva para E. canis de amostras de ces do
municpio de Maric/RJ em 2007, distribudas pelos bairros, p. 113
Tabela 14: Resultados de amostras de ces do municpio de Maric/RJ em 2007,
com sorologia positiva para A. phagocytophylum, distribudas pelos
bairros, p. 115
Tabela 15: Resultados de amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ,
em 2007, positivos na pesquisas de hemoparasitas em esfregaos
sanguneos, com suas respectivas clulas com incluses associados aos
da sorologia, p. 117
Tabela 16: Resultados da PCR para famlia Anaplasmataceae e espcies E. canis A.
platys, de amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em
2007, associados aos da sorologia, p. 119
Tabela 17: Resultados com sorologia negativa em relao aos protocolos de PCR
para gneros e espcies estudadas da famlia Anaplasmataceae, de
amostras de ces do municpio de Maric/RJ em 2007, p. 121
Tabela 18: Resultados da PCR para famlia Anaplasmataceae e espcies E. canis A.
platys, de amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em
2007, associados aos morfolgicos, com as respectivas clulas com
incluses, e os da sorologia, p. 122
Tabela 18a: Resultados da pesquisa morfolgica, com as respectivas clulas com

incluses, de amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ,
em 2007, associados aos da PCR e aos da sorologia, p. 122
Tabela 19: Amostras de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, com sorologia
positiva para Anaplasmataceae (E. canis e/ou A. phagocytophilum) com
parasitos co-infectantes, e os bairros onde foram coletadas, p. 124
Tabela 20: Amostras de ces do municpio de Maric/RJ e os bairros onde foram
coletadas, em 2007, com sorologia positiva para Anaplasmataceae (E.
canis e/ou A. phagocytophilum) e os parasitos co-infectantes, p. 125
Tabela 21: Grupo de ces com sorologia positiva para E. canis e/ou A.
phagocytophilum, e os parasitos co-infectantes, de amostras de ces do
municpio de Maric/RJ em 2007, e os bairros onde foram coletadas, p.
126
Tabela 22: Resultados de co-infeco da famlia Anaplasmataceae com outros
parasitas, de amostras de ces do municpio de Maric/RJ em 2007,
distribudos pelos 4 bairros avaliados, p.127
distribudos pelos 4 bairros avaliados, com a descrio do nmero de
cada parasito, p. 128
Tabela 24: Resultados das pesquisas de A. phagocytophilum e E. canis por
sorologia, Anaplasmataceae, E. canis e A. platys por PCR e esfregaos
sanguneos, em amostras de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007,
p. 129
Tabela 24a: Resultados da frequncia de Anaplasmataceae em ces do municpio
de Maric/RJ em 2007, segundo avaliao de PCR, sorologia e pesquisa
em lmina, p. 130
Tabela 25: Resultados da frequncia de Anaplasmataceae em ces, de quatro
bairros do municpio de Maric/RJ, em 2007, segundo avaliao de
PCR, sorologia e pesquisa em lmina, p. 130
Tabela 26: Resultados da frequncia de E. canis em ces, de quatro bairros do
municpio de Maric/RJ em 2007, segundo avaliao de PCR e
sorologia, p. 132
Tabela 27: Mdia, desvio padro, valor mnimo e mximo de valores hematolgicos
e bioqumicos de ces, do municpio de Maric/RJ em 2007, PCR
positivos/sorologia negativas para Anaplasmataceae, sem co-infeco,
p. 137
Tabela 28: Valores hematolgicos e bioqumicos de ces, do municpio de Maric/RJ
em 2007, PCR positivos/sorologia negativas para Anaplasmataceae,
com co-infeco, p. 141
em 2007, PCR positivos para E. canis e sorologias negativas, com coinfeco, p.143
positivos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis,
sem co-infeco, p.145
em 2007, PCR positivos para Anaplasmataceae, com sorologia positivas
para A. phagocytophilum, sem co-infeco, p. 146
Tabela 32: Valores hematolgicos e bioqumicos de co, do municpio de Maric/RJ
em 2007, PCR positivo para Anaplasmataceae, com sorologia positiva
para A. phagocytophilum e E. canis, sem co-infeco, p. 147
Tabela 33a: Valores hematolgicos eritrocitrios de ces, do municpio de Maric/RJ
em 2007, PCR positivos para A. platys ou A. platys e E. canis, com
sorologias positivas para A. phagocytophilum ou E. canis, sem coinfeco, p. 149
Tabela 33b: Valores hematolgicos leucocitrios de ces, do municpio de Maric/RJ
em 2007, PCR positivos para A. platys ou A. platys e E. canis, com
sorologia positiva para A. phagocytophilum ou E. canis, sem co-infeco,
p.149
Tabela 33c: Valores bioqumicos de ces, do municpio de Maric/RJ em 2007, PCR
positivos para A. platys ou A. platys e E. canis, com sorologias positivas
para A. phagocytophilum ou E. canis, sem co-infeco, p. 150
em 2007, PCR positivos para E. canis e sorologias positivas para E.
canis e/ou A. phagocytophilum sem co-infeco, p. 151
Tabela 35a: Mdia e desvio padro de valores hematolgicos eritrocitrios de ces,

do
municpio
de
Maric/RJ
em
2007,
PCR
positivos
para
Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis e/ou A.

phagocytophilum, com co-infeco, p. 154
Tabela 35b: Mdia e desvio padro de valores hematolgicos leucocitrios de ces,
do
municpio
de
Maric/RJ
em
2007,
PCR
positivos
para

Tabela 35c: Mdia e desvio padro de valores bioqumicos de ces, do municpio de
Maric/RJ em 2007, PCR positivos para Anaplasmataceae, com
sorologia positiva para E. canis e/ou A. phagocytophilum, com coinfeco, p. 156
em 2007, PCR positivos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva
para E. canis e A. phagocytophilum, com co-infeco, p. 157
em 2007, PCR positivos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva
para E. canis e/ou A. phagocytophilum, com co-infeco, p. 158
Tabela 38: Mdia e desvio padro e valores hematolgicos e bioqumicos de ces,
do
municpio
de
Maric/RJ
em
2007,
PCR
positivos
para

em 2007, PCR positivo para A. platys, com sorologia positiva para E.
canis, com co-infeco, p. 163
em 2007, PCR positivo para E. canis, com sorologia positiva para E.
canis e A. phagocytophilum com co-infeco, p. 164
negativos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis,
sem co-infeco, p. 165
Tabela 44 Mdia e desvio padro, de valores hematolgicos e bioqumicos de ces,
do
municpio
de
Maric/RJ
em
2007,
PCR
negativos
para
Anaplasmataceae, com sorologia positiva para A. phagocytophilum, sem

co-infeco, p. 168
Tabela 45 Valores hematolgicos e bioqumicos de ces, do municpio de Maric/RJ
em 2007, PCR negativos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva
para E. canis e A. phagocytophilum, sem co-infeco, p. 169
Tabela 46 Mdia, desvio padro, valor mnimo e mximo de valores hematolgicos e
bioqumicos de ces, do municpio de Maric/RJ em 2007, PCR
negativos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis,
com co-infeco, p. 170
Tabela 47 Mdia e desvio padro de valores hematolgicos e bioqumicos de ces,
do
municpio
de
Maric/RJ
em
2007,
PCR
negativos
para
Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis, com coinfeco, p. 171

para E. canis, com co-infeco, p. 172
Tabela 49 Valores hematolgicos e bioqumicos de co, do municpio de Maric/RJ
para A. phagocytophilum, com co-infeco, p. 175

do
municpio
de
Maric/RJ
em
2007,
PCR
negativos
para
Anaplasmataceae, com sorologia positiva para A. phagocytophilum, com

co-infeco, p. 177
do
municpio
de
Anaplasmataceae,
Maric/RJ
em
com sorologia
2007,
PCR
positiva
para
negativos
E.
canis
para
e
A.

e bioqumicos de ces PCR positivos/sorologia negativas sem coinfeco do municpio de Maric/RJ em 2007, p. 185
e bioqumicos de ces PCR positivos/sorologia positivas sem coinfeco do municpio de Maric/RJ em 2007, p. 186
e bioqumicos de ces PCR positivos/sorologia positivas com coinfeco com Leishmania sp. do municpio de Maric/RJ em 2007, p. 187
e bioqumicos de ces PCR negativos/sorologia positivas para
Anaplasmataceae, sem co-infeco do municpio de Maric/RJ em 2007,
p. 188
e bioqumicos de ces PCR negativos/sorologia positivas com coinfeco com Leishmania sp.do municpio de Maric/RJ em 2007, p. 189
Tabela 66: Resultados das mdias dos grupos estatsticos para anlise da
plaquetometria de ces de Maric/RJ em 2007, p. 190
Tabela 67: Ces negativos para Ehrlichia/Anaplasma sem e com outros parasitas em
ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, p. 195
e bioqumicos de ces PCR negativos/sorologia negativas para
Anaplasmataceae do municpio de Maric/RJ em 2007, p. 195
Tabela 69: Resultados de ces negativos para Ehrlichia/Anaplasma em ces do
municpio de Maric/RJ, em 2007, p. 196
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Figura 1 : Mapas de localizao do municpio de Maric. A Mapa do

Estado do Rio de Janeiro/BR; B e C Destaques do mapa do
Estado,situando Maric com fronteiras dos municpios de Niteri (N),
So Gonalo (SG), Itabora (I), Tangu (T) e Saquarema (S). Fonte:
Google imagens acesso em: 02 de fevereiro de 2011.
http://www.maricaense.com.br
81
Figura 2 Figura 2: Destaque do mapa do Estado do RJ/BR, situando Maric com
fronteiras de Niteri (N), So Gonalo, Itabora, Tangu e Saquarema
(S). O mapa mostra tambm a localizao aproximada de Bambu (B),
Espraiado (E), Centro de Maric (C) e So Jos do Imbassa (SJ).
Fonte: Google imagens acesso em: 02 de fevereiro de 2011,
82
LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS
Microlitro
Micrometro
AE
Aspirado Esplnico
CCZ
Centro de Controle de Zoonoses
CL
Concentrado Leucocitrio
Comb. nov.
Combinao (ou compilao) de vrias espcies novas
DAI
Dias Aps Inoculao
EGC
Ehrlichiose Granuloctica Canina
EGH
Ehrlichiose Granuloctica Humana
EMC
Ehrlichiose Monoctica Canina
EMH
Ehrlichiose Monoctica Humana
Graus Celsius
g/dL
Gramas por decilitro
IgG
Imunoglobulina G
LG
Leucometria Global
mL
Mililitros
mmol/L
o
Milimol por litro
n. e N
Nmero
p.
Pgina
PCR
Reao em cadeia da polimerase

(do ingls polymerase chain reaction)
PLQT
Plaquetometria
RNA
cido ribonuclico
RNAr
cido ribonuclico ribossomal
SAI
Semanas Aps Infeco
sp. nov
Espcie nova, ainda sem classificao completa
SRD
sem raa definida
ST
Sangue Total
U/L
Unidades por litro
UFF
Universidade Federal Fluminense
v.
Volume
RESUMO
Ehrlichiose um termo genrico para infeces causadas por bactrias
pertencentes famlia Anaplasmataceae principalmente dos gneros Ehrlichia e
Anaplasma. Com objetivo de determinar, em ces do municpio de Maric/RJ, no
litoral do Estado, a ocorrncia da famlia Anaplasmataceae, com nfase nas
espcies Ehrlichia canis e Anaplasma platys e suas alteraes em exames
laboratoriais hematolgicos e bioqumicos, foram obtidas de 155 ces, amostras de
sangue com e sem EDTA e confeccionados esfregaos sanguneos. Foram feitos
hemograma com plaquetometria, bioqumica srica, pesquisa de hemoparasitas por
mtodos diretos em esfregao e pesquisa de DNA por PCR e mtodo indireto por
sorologia. Foram observadas diferenas nos resultados das frequncias, de acordo
com o mtodo diagnstico, sendo que a sorologia foi a que detectou maior
quantidade de ces positivos para Anaplasmataceae (60,1%) e Ehrlichia canis
(48%). A frequncia total da famlia Anaplasmataceae, considerando o somatrio
das amostras positivas em pelo menos um dos mtodos, foi de 72%, a de E. canis
foi 48% e, para Anaplasma platys, de 3,8%. A alterao hematolgica mais
frequente foi a trombocitopenia que mostrou ser mais acentuada em co-infeces e,
a alterao bioqumica srica mais frequente a hiperglobulinemia. Concluiu-se que a
regio estudada tem uma frequncia elevada de Ehrlichia sp. e casos de coinfeces com essa bactria.
Palavras-chave: Ehrlichia; Anaplasma; canino; Patologia Clnica
ABSTRACT
"Ehrlichiosis" is a generic term for infections caused by bacteria belonging to the

family Anaplasmataceae mainly of the genera Ehrlichia and Anaplasma. In order to
determine, in dogs in the city of Marica / RJ, on the coast of the State, the occurrence
of the family Anaplasmataceae, with emphasis on species Ehrlichia canis and
Anaplasma platys and their changes in hematological and biochemical laboratory
tests were obtained 155 dogs, blood samples with and without EDTA, and blood
smears prepared. CBC was made with platelet count, serum biochemistry, research
hemoparasites by direct methods in blood smears and DNA detection by PCR and
serology by the indirect method. There were differences in the results of frequencies
according to the method of diagnosis, and serology was found that the greatest
amount of positive dogs Anaplasmataceae (60.1%) and Ehrlichia canis (48%). The
overall frequency family Anaplasmataceae, considering the sum of the positive
samples in at least one of the methods, was 72%, of E. canis was 48% and for
Anaplasma platys, 3.8%. The most frequent haematological abnormality was
thrombocytopenia which was more pronounced in co-infections and a biochemical
serum hyperglobulinemia more frequent. It was concluded that the studied region has
a high frequency of Ehrlichia sp. and cases of co-infections with this bacteria.
Keywords: Ehrlichia; Anaplasma; dogs; Clinical Pathology
1 INTRODUO
Doenas transmitidas por carrapatos so muito frequentes em todo mundo.

No Brasil, o clima tropical combinado a diversidade biolgica, facilita a ocorrncia e
disseminao dessas doenas, nas populaes animais de diferentes espcies.
Os animais domsticos podem se tornar potenciais reservatrios de diversos
hemoparasitas, facilitando a transmisso e proliferao de zoonoses (MENN, et al.,
2010).
O co pode servir como sentinela em algumas doenas, como reservatrio
em outras ou mesmo como transmissor. O homem acidentalmente pode ser
parasitado por espcies de carrapatos que podem estar contaminados com
microrganismos patognicos, adquiridos nos animais que fazem parte do seu
convvio natural, como os ces. Em 1989, Goddard relatou que, em regies do
Mediterrneo e na Amrica Central ocasionalmente, os carrapatos da espcie
Rhipicephalus sanguineus se alimentavam de sangue humano e que nos EUA isso
ocorre mais raramente. Em 2006 foram descritos os primeiros casos de humanos
parasitados por Rhipicephalus sanguineus no Recife, Brasil (DANTAS-TORRES et
al, 2006). Mais recentemente outros trabalhos tm mostrado que isso pode ocorrer
em todo o mundo (DANTAS-TORRES, 2008).
O estudo da ocorrncia de algumas dessas doenas importante para
avaliao da potencial exposio humana e animal a esses agentes e, se associada
a alteraes em exames laboratoriais, podem auxiliar o diagnstico precoce da
doena, acompanhamento clnico e ajuste do tratamento para recuperao do
paciente. Alm disso, a escolha e interpretao correta dos mtodos diagnsticos,
diretos ou indiretos, contribuem de forma determinante para alcanar xito no
resultado da conduta clnica (HARRUS e WANER, 2011).
A ehrlichiose causada por vrias espcies de bactrias que so capazes de
desenvolver doena clnica em diferentes espcies de hospedeiros, alm do co
27
domstico. Alguns trabalhos demonstram que, alm de animais de companhia, como
ces e gatos, espcies silvestres tambm so suscetveis infeco. Isso
particularmente importante porque alguns desses hospedeiros funcionam como
reservatrios para espcies de Ehrlichia patognicas para o homem, nos EUA
(BARLOUGH et al., 1997, LEVIN, et al., 2002 e YABSLEY et al., 2005) e, no Brasil
(MACHADO et al., 2006).
Considerada como zoonose, o primeiro caso de ehrlichiose humana foi
descrito no Japo em 1954 (JACOBS e SCHUTZE, 1997), causada por Ehrlichia
(Neorickettsia) sennetsu. Nos EUA, o primeiro caso de ehrlichiose humana foi
descrito em 1986, causada por E. chaffeensis (JACOBS e SCHUTZE, 1997;
DUMLER e WALKER, 2001). No Brasil, os primeiros casos suspeitos foram descritos
em 2004 (CALIC et al., 2004) e, em 2005 (COSTA et al., 2005) e 2006 (COSTA et
al., 2006) mais casos, apenas com sorologia positiva, foram descritos no Brasil,
todos causadas por E. chaffeensis. E, na Venezuela, caso de infeco em humano,
por E. canis, foi descrito em 2006 (PEREZ et al., 2006).
A bactria Ehrlichia canis foi descrita em 1935 por Donatien e Lestoquard e
denominada primeiramente como Ricketsia canis e uma das mais patognicas nos
ces. A ehrlichiose canina tem sido reconhecida como uma das mais importantes
doenas infecciosas transmitida por carrapatos, desde a guerra do Vietn e, por
isso, tem sido objeto de estudo por pesquisadores no mundo inteiro. Esta doena j
recebeu vrios nomes, incluindo: febre hemorrgica canina, sndrome hemorrgica
idioptica, doena do co rastejador e pancitopenia tropical canina (HUXSOLL,
1976). E, apesar de ter seu gnero mudado para Ehrlichia, permaneceu at o final
da dcada de 90 na famlia Rickettsiaceae. Em 2001, Dumler e colaboradores
atravs de estudos moleculares, propuseram uma nova classificao com a
transferncia dos gneros pertencentes s tribos Ehrlichieae e Wolbachieae para
famlia Anaplasmataceae. Apesar da aceitao internacional sugesto taxonmica
de Dumler e colaboradores, em 2004, Uilenberg et al., consideraram justificvel que
um novo gnero fosse criado para incluir as espcies E. phagocytophila, E. platys e
E. bovis.
Ehrlichiose tornou-se um termo genrico para infeces de ces causadas
por bactrias pertencentes famlia Anaplasmataceae. Abrange principalmente
espcies nos gneros Ehrlichia e Anaplasma que so parasitos intracitoplasmticos
28
de leuccitos e plaquetas do sangue circulante em vrias espcies de mamferos,
sendo transmitidos biologicamente por vetores artrpodes. Diferentes espcies
podem ser transmitidas aos ces. Outras hemoparasitoses, como hepatozoonose,
babesiose, borreliose entre outras, tambm apresentam carrapatos como vetores, o
que permite a presena de infeces concomitantes. A preciso do diagnstico
dessas doenas vem melhorando juntamente com o avano tecnolgico de
metodologias,
principalmente
aquelas
relacionadas
com
biologia
molecular
(RIKIHISA, 2011).
A
distribuio
geogrfica
dessas
hemoparasitoses
est
intimamente
relacionada presena dos carrapatos. O carrapato relacionado transmisso da E.

canis, o Rhipicephalus sanguineus, e a bactria tem sua distribuio geogrfica
mundialmente descrita (McBRIDE, 2009). No caso da E. canis a transmisso
experimental com carrapatos da espcie Dermacentor variabilis (JOHNSON et al.,
1998) tambm mostrou que pode haver variabilidade nesses vetores. No Estado do
Rio de Janeiro, o vetor R. sanguineus facilmente encontrado, bem como existem
condies naturais para sua proliferao.
Em
diferentes
estados
brasileiros,
vrios
trabalhos
sobre
aspectos
epidemiolgicos, clnicos e laboratoriais como bioqumicos, hematolgicos e

relacionados a hemostasia, tm sido desenvolvidos, mostrando que a ehrlichiose
vem se expandindo, inclusive como zoonose. Sendo assim, pesquisar a frequncia
desses agentes etiolgicos e alteraes hematolgicas e bioqumicas dos animais
positivos importante para auxiliar seu diagnstico, uma vez que estas rickettsioses
podem ter manifestaes fisiopatognicas graves e fatais.
O municpio de Maric/RJ, no litoral do estado foi escolhido para estudo, por
chamar ateno pela expanso da urbanizao, alterao da paisagem natural e
aumento da populao de animais domsticos, principalmente ces, e tambm, a
circulao de alguns desses animais, retornando continuamente a grandes centros
urbanos, possibilitando a permuta de vetores e agentes etiolgicos nessas regies,
transportados por esses animais. Com o objetivo de contribuir ao estudo da
frequncia da famlia Anaplasmataceae no estado do Rio de Janeiro, bem como o
conhecimento das principais alteraes clnico-laboratoriais nos animais positivos,
utilizando-se trs mtodos diagnsticos, foram coletadas amostras sanguneas de
155 ces desse municpio.
2. REVISO DE LITERATURA
2.1 HISTRICO E AGENTES ETIOLGICOS

Erlichioses transmitidas por carrapatos tm sido identificadas em medicina
veterinria desde 1910 com a anaplasmose bovina. Em 1925 foi descrita a
pericardite bovina (cowdriose) e, em 1935, a ehrlichiose canina, todos
originalmente descobertos na frica (DUMLER e WALKER, 2001). No entanto, as
infeces por Ehrlichia foram reconhecidas inicialmente entre os anos de 1920 e
1930, como agentes de importncia veterinria, quando Cowdry em 1925 identificou
Rickettsia ruminantium (hoje conhecida como E. ruminantium) como agente
etiolgico da pericardite bovina, por ser uma doena fatal de ruminantes (McBRIDE,
2009).
Ehrlichia canis foi descoberto por DONATIEN e LESTOQUARD (1935) em
moncitos de ces na Arglia e recebeu o nome de Rickettsia canis. A rickettsia foi
renomeada como Ehrlichia canis, por Moroshkowsky em 1945 (RISTIC e HUXSOLL,
1984) em homenagem ao pesquisador Paul Ehrlich. As doenas causadas por
Ehrlichia sp. permaneceram em relativa obscuridade at os anos 60 quando a E.
canis foi descrita pela primeira vez nos EUA e mais tarde associada a deflagrao
epizotica da pancitopenia tropical canina na sia, pelo patologista David Huxsoll.
Sendo, somente esse agente ehrlichial considerado de distribuio mundial (Mc
BRIDE, 2009).
Ehrlichioses
anaplasmoses
so
doenas
causadas
por
bactrias
pleomrficas cocides Gram negativas e intracelulares obrigatrias, denominadas

corpsculos elementares e transmitidas por carrapatos (INOKUMA et al., 2001).
De acordo com Ristic e Ruxsoll (1984), os agentes etiolgicos da ehrlichiose
canina estavam alocados na tribo Ehrlichiae. Essa classificao foi revista por
Rikihisa (1991), que acrescentou algumas novas espcies, desconhecidas at o final
da dcada de 1980, sem que fossem feitas mudanas no sistema de classificao.
30
A classificao proposta por Ristic e Huxsoll (1984), se baseava na
comparao de caractersticas fenotpicas, envolvendo as interaes da Rickettsia
em questo com o meio ambiente (ecologia, dados epidemiolgicos e padres de
infeces experimentais e em humanos). Ademais, os critrios de classificao
incluam tambm a antigenicidade dos isolados.
No entanto, estudos genmicos, incluindo o sequenciamento de uma poro
do gene codificador da unidade 16S do RNA ribossomal (16S RNAr), estudos
diversos relacionados ao DNA, perfis de restrio e anlises de polimorfismo total do
DNA ou de fragmentos do genoma, somados anlise de plasmdeos, trouxeram
novos horizontes para a taxonomia das Rickettsias. (DRANCOURT e RAOULT,
1994). De acordo com Olsen e Woese (1993), a anlise da sequncia do gene
codificador da unidade 16S RNAr se concretizou como um poderoso mtodo para
estudos de filogenia bacteriana. Olsen et al. (1994), acrescentaram que esta anlise
tambm seria uma poderosa ferramenta nos estudos sobre a evoluo das
bactrias. Outras sequncias genticas tm sido estudadas, como do gene gp36 da
E. canis de diferentes isolados em diferentes regies do mundo e mostram completa
conservao das repeties de sequncias nucleotdicas entre as amostras de
origem geogrficas diferentes (HECHEMY et al., 2005). Estudos filogenticos do 16S
RNAr tem mostrado pouca diversidade gentica indicando provvel evoluo lenta e
homognea nas diferentes amostras de E. canis (SIARKOU, et al. 2007; VINASCO
et al., 2007; PINYOOWONG, et al., 2008) e Anaplasm. platys (PINYOOWONG et al.,
2008). A diversidade gentica e antignica da principal protena imunorreativa de E.
canis mostra diferenas entre amostras do Brasil, EUA e Israel, embora no estejam
associadas s caractersticas clnicas e hematolgicas da doena (ZHANG et al.,
2008). No entanto, apesar dessa homogeneidade gentica do 16S rRNA e de outras
regies genmicas tambm conservadas (groEL, gltA, famlia p28, gp140, e virB9),
diferenas entre as manifestaes clnicas na erlichiose monoctica canina (EMC),
causada por E. canis, levam a hiptese de que polimorfismos em outras sequncias
genticas possam estar associadas (SIARKOU, et al. 2007). A anlise do gene 16S
RNAr de A. platys em ces de Ribeiro Preto, Brasil, mostrou alta similaridade com
outras amostras de regies geogrficas distintas, mas sugere que pelo menos trs
linhagens diferentes circulam na Amrica do Sul (CARDOZO, et al. 2007).
31
Assim, com base no sequenciamento de uma poro do gene codificador da
unidade 16S do RNA ribossomal do parasito, tornou-se possvel o agrupamento das
espcies da tribo Ehrlichieae em 3 genogrupos distintos (ANDERSON et al., 1991).
Esses grupos podiam ser designados levando-se em considerao as primeiras
espcies identificadas de cada grupo e assim tinha-se os genogrupos da E. canis,
da E. phagocytophila, e da E. sennetsu (DUMLER et al., 1995; WALKER &
DUMLER, 1996; POPOV et al., 1998; RIKIHISA, 2000).
O Gnero Ehrlichia compreendia os parasitos intracitoplasmticos de leuccitos
e plaquetas do sangue circulante em vrias espcies de mamferos (HUXSOLL et
al., 1969; WOODY e HOSKINS, 1991). As seguintes espcies do gnero Ehrlichia j
foram descritas causando infeces naturais em ces: Ehrlichia canis (DONATIEN &
LESTOQUARD, 1935); Ehrlichia (Anaplasma) platys1 (HARVEY et al., 1978); E.
(Neorickettsia) risticii2 (KAKOMA et al., 1994); E. ewingii (ANDERSON et al., 1992a;
STOCKHAM
et
al.,
1992);
E.
chaffeensis
(DAWSON
EWING,
1992;
BREITSCHWERDT et al., 1998); E. phagocytophila3 (JOHANSSON et al., 1995;

PUSTERLA et al., 1997); E. equi3 (LEWIS et al., 1975; MADEWELL e GRIBBLE,
1982) e o agente da ehrlichiose granuloctica humana 3 (HGE) (GREIG et al., 1996).
Vrias espcies dos gneros Ehrlichia e Anaplasma j foram consideradas
como sendo apenas patgenos veterinrios, mas tm sido reorganizados
recentemente como emergentes patgenos humanos nos EUA (RIKIHISA, 2003).
A espcie Anaplasma platys at 2001 era considerada como integrante do
gnero Ehrlichia. A partir de anlises moleculares de DNA, a classificao proposta
por Dumler e colaboradores passou a inclu-la no gnero Anaplasma. O mesmo
ocorreu com as espcies: Ehrlichia (Anaplasma) phagocitophila e Ehrlichia
(Anaplasma) bovis (MACIEIRA et al., 2005).
A anaplasmose causada por A. phagocytophilum foi descrita em Minessota,
Wisconsin e Califrnia nos Estados Unidos e na Sucia (JOHANSSON et al., 1995;
PUSTERLA et al., 1997). Essa espcie, anteriormente classificada como E.
phagocitophila, o agente causador da anaplasmose granuloctica humana (PARK
et al., 2003) e anaplasmose granuloctica animal (SCORPIO et al., 2004) . Um dos
1
Reclassificada como Anaplasma platys (DUMLER et al., 2001).

Reclassificada como Neorickettsia risticii (DUMLER et al, 2001).
3
Essas 3 espcies foram agrupadas em uma, que foi denominada Anaplasma phagocytophilum (DUMLER et al.,
2001, corrigido por LIST EDITOR: Notification list: Notification that new names and new combinations have
appeared in volume 51, part 6, of the IJSEM. IJSEM, v. 52. p. 5-6, 2002).
2
32
causadores da ehrlichiose granuloctica canina, a E. ewingii , descrita por Anderson
et al. (1992a) e STOCKHAM et al. (1992) causa uma doena significativa em ces,
experimental e naturalmente infectados. (NEER, 1998). Essas duas espcies ainda
no foram descritas causando doenas no Brasil.
A ehrlichiose monoctica canina causada pela E. canis (HARRUS et al.
1997b) e a de maior ocorrencia em ces (ALMOSNY e MASSARD, 2002). E.
chaffeensis , agente da ehrlichiose monoctica humana (RIKIHISA 2003), tambm
pode
causar
ehrlichiose
monoctica
canina
(BREITSCHWERDT,
2000;
SKOTARCZAK, 2003.
2.1.1 Taxonomia
Anlises genticas recentes dos genes codificadores da unidade 16S RNAr, da
sntese de protenas de superfcie e anlise gentica da protena de choque trmico
groESL indicaram que as designaes taxonmicas apresentavam falhas, dentro
dos gneros Anaplasma, Ehrlichia, Cowdria, Neorickettsia e Wolbachia. Esses
gneros compreendem bactrias intracelulares obrigatrias que residem em
vacolos de clulas eucariticas, e que foram previamente colocados em uma classe
taxonmica
baseando-se
em
caractersticas
morfolgicas,
ecolgicas,
epidemiolgicas e clnicas (DUMLER et al., 2001). Vrios outros organismos tambm

tiveram sua taxonomia revisada por anlise do DNA (UILENBERG et al., 2004)
Analisando as sequncias genticas obtidas a partir do GenBank4, uma nova
classificao foi proposta: todos os membros das tribos Ehrlichieae e Wolbachieae
deveriam ser transferidos para a famlia Anaplasmataceae, e a estrutura tribal da
famlia Rickettsiaceae deveria ser eliminada. O gnero Anaplasma teve de ser
corrigido para incluir a espcie Anaplasma phagocytophilum comb. nov. (englobando
as espcies Ehrlichia phagocytophila, E. equi e o agente da ehrlichiose granuloctica
humana), a espcie Anaplasma platys comb. nov.e a espcie Anaplasma bovis
comb. nov. deveriam ser criadas em substituio s espcies Ehrlichia platys e
Ehrlichia bovis respectivamente. Ademais, o gnero Ehrlichia deveria ser corrigido
para incluir a espcie Ehrlichia ruminantium comb. nov. no lugar de Cowdria
ruminantium, assim como o gnero Neorickettsia, para a incluso das espcies
Neorickettsia risticii comb. nov. no lugar da Ehrlichia risticii; e Neorickettsia sennetsu
4
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide
33
comb. nov. no lugar de Ehrlichia sennetsu (DUMLER et al., 2001). As mudanas
taxonmicas aps 2001 esto sumarizadas no quadro 1, modificado de
Rymaszewska e Grenda (2008).
Taxonomia dos gneros Ehrlichia e Anaplsma antes e depois de 2001

Taxonomia antes de 2001
Taxonomia depois de 2001
Classe -proteobacteria
Classe -proteobacteria
Ordem II Rickettsiales
Familia I Rickettsiaceae
Genero I Rickettsia
Genero II Orientia
Genero III Wolbachia A
Familia II Ehrlichiaceae
Genero I Ehrlichia B Especies
E. canis B2
E. chaffeensis B3
E. equi B4
E. phagocytophila B4
czynnik HGE B4
E. platys B5
E. risticii B6
E. sennetsu B7
Ordem II Rickettsiales
Familia I Rickettsiaceae
Genero I Rickettsia
Genero II Orientia
Famila II. Anaplasmataceae
Genero I Anaplasma Especies
A. marginale
A. centrale
A. phagocytophilum B4
A. platys B5
Genero III Anaplasma Especies A. marginale
Genero V Neorickettsia Especies N. helminthoeca

N. risticii B6
N. sennetsu B7
Genero VI Wolbachia A
A. centrale
Genero IV Cowdria Especie C. ruminantium C
Genero IV Ehrlichia B Especies

E. canis B2
E. chaffeensis B3
E. ruminantium C
Genera V Neorickettsia N. helminthoeca
Quadro 1: Resumo das mudanas taxonmicas nos gneros Ehrlichia e Anaplasma,

segundo Rymaszewska e Grenda (2008).Letras A, B, B2, B3, B4, B5, B6, B7, C,
indicam uma mudana na posio sistemtica.
As alteraes propostas por DUMLER et al. (2001), foram homologadas e corrigidas
em 20025. A espcie A. phagocytophila teve seu nome corrigido para A.
phagocytophilum. Na mesma lista de notificao, o corpo editorial observou que
tanto a espcie A. bovis quanto A. platys, que foram propostas como novas
combinaes, seriam novas espcies, pois seus respectivos basnimos E. bovis e E.
platys no possuam suporte na nomenclatura, sendo ento acrescentado o
complemento sp. nov. O quadro a seguir sumariza a Taxonomia dos gneros
Ehrlichia e Anaplasma antes e depois de 2001. Letras A, B, B2, B3, B4, B5, B6, B7,
C, indicam uma mudana na posio sistemtica, mostrada em tabela nos estudos
de reviso do gnero Anaplasma feito po Rymaszewska e Grenda (2008).
LIST EDITOR: Notification list: Notification that new names and new combinations have appeared in volume
51, part 6, of the IJSEM. IJSEM, v. 52. p. 5-6, 2002.
34
2.2 EHRLICHIOSES NOS ANIMAIS
Erlichioses e anaplasmoses tm sido identificadas em vrias espcies de

animais domsticos, como ces, gatos, equinos e bovinos, alm de algumas
espcies selvagens como cervdeos e coiotes. (DAGNONE, et al., 2001). No Brazil,
Oliveira e t al., (2009b) e Lima et al., (2010) fizeram a caracterizao molecular de E.
canis em gatos domsticos. Em reviso sobre ehrlichioses e anaplasmoses canina e
felina, Little (2010) destacou informaes de vrios trabalhos que mostraram que a
ehrlichiose nos ces pode ser causada por trs espcies do gnero: E. canis, E.
chaffeensis e E. ewingii ou pela coinfeco dessas bactrias. A E. chaffeensis
mais conhecida como ehrlichiose monoctica humana, mas em ces, em infeco
experimental, parece determinar doena branda porm, quando em coinfeco com
outras espcies de Ehrlichia spp., pode se tornar mais grave.
E. ewingii foi descrito primeiramente em um co em 1971 e foi constatado que
produzia doena tanto em ces quanto em seres humanos. No centro sul dos EUA e
em outras reas com elevada populao de carrapatos E. ewingii e E. chaffeensis
parecem ser mais comuns em ces do que E. canis, embora E. canis seja
considerado o agente primrio na ehrlichiose canina. Pesquisas mostraram que a
infeco por Ehrlichia spp. tambm pode ocorrer seguida a inoculao de sangue.
Os organismos sobrevivem e permanecem infecciosos mantidos em sangue total
refrigerado, sugerindo que tanto a exposio a agulhas contaminadas e as
transfuses de sangue, so vias de infeco viveis, embora raras (LITTLE, 2010).
Co-infeces com bactrias do gnero Ehrlichia e Anaplasma platys e ainda
outros organismo, tambm transmitidos por carrapatos, tem sido descritas. No
entanto, as consequncias da co-infeco no esto bem estabelecidas nas
espcies, em comparao com a infeco com um nico organismo. Infeco
simultnea com mltiplos agentes podem ser responsveis por algumas diferenas,
observadas entre os casos clnicos, daquelas quando apenas um patgeno
transmissvel por carrapato considerado (KORDICK et al., 1999). Suksawat et al.,
(2001a), relataram a existncia de trs agentes da ehrlichiose: E. canis, E.equi e A.
platys em ces na Tailndia e Venezuela, afirmando que o estado de co-infeco
potencializa as doenas e dificulta o diagnstico assim como o manejo teraputico
dos pacientes. Alm disso, segundo Little (2010) a clnica da doena pode no se
35
desenvolver at que um co tenha sido infectado por vrios meses ou anos, e os
carrapatos que transmitiram a infeco j h muito podem ter se desprendido do
animal. Por isso, nem a poca do ano, nem a ausncia de carrapatos durante o
exame clnico, devem eliminar a suspeita de ehrlichiose canina em um indivduo
especfico.
2.2.1 Ehrlichiose Monoctica Canina

A ehrlichiose monoctica canina causada pela infeco com um organismo
rickettsial, Ehrlichia canis que se replica somente em moncitos e macrfagos
(RIKIHISA, 2011). E. canis, continua sendo um agente erlichial importante no mundo
inteiro causando doena grave que pode levar o animal ao bito. A variedade de
espcies do gnero Ehrlichia que infectam ces, juntamente com variaes
documentadas na patogenicidade de diferentes cepas de E. canis, resultam em um
amplo espectro de doenas que vo desde clinicamente inaparentes a graves, e que
podem ser intensificadas por variaes na resposta imune especfica de cada co
e/ou raa, diferenas na dose de patgeno transmitido durante a infeco pelos
carrapatos, presena de agentes coinfectando, e a sade geral do co antes da
infeco (LITTLE, 2010).
Vrios fatores se relacionam com a disseminao da doena, principalmente
os que favorecem a proliferao do carrapato transmissor (DUMLER, 1995;
HARRUS et al., 1997b). Pesquisas mostram que os ces funcionam como
hospedeiros reservatrios de E. canis e tambm do vetor primrio o Rhipicephalus
sanguineus, pois os diferentes estdios de desenvolvimento desse carrapato se
alimentam de sangue nos ces, mantendo transmisso transtadial (LITTLE, 2010). O
carrapato adulto descrito como capaz de fazer transmisso intrastadial, uma rota
que pode ser importante em situaes de surto, como dos carrapatos do sexo
masculino que tm demonstrado se mover facilmente entre ces de maneira
intermitente, para se alimentar e acasalar (BREMER et al., 2005).
Stich et al. (2008), enfatizaram a relao parasito hospedeiro, como a
transmisso e biologia dos hospedeiros invertebrados. Os autores relacionaram
trabalhos
que
Rhipicephalus
mostraram que
sanguineus
no
porm,
ocorre
transmisso
chamam ateno
transovariana
em
para publicaes que
investigam a possibilidade de que outras espcies de carrapatos possam transmitir a
36
bactria,
como
Dermacentor
variabilis
que
demonstrou
essa
capacidade
experimentalmente e a possvel relao (no confirmada experimentalmente) de

Otobius megnini com um caso de criana soropositiva para infeco erlichial. Citam,
ainda, estudos com Ixodes scapularis e I. ricinus que podem estar parasitados pela
bactria, mas sem confirmao experimental da capacidade de infeco em ces,
atravs desses carrapatos. Os autores citaram, tambm, artigos de estudos em
outras espcies de hospedeiros mamferos, como candeos e feldeos silvestres,
alm de cervdeos. No Brasil tambm existem estudos sobre a ocorrncia de
ehrlichiose monoctica em outros mamferos (MACHADO et al., 2006; ANDR et al.,
2010).
Estudos feitos no Brasil, em regio rural do Estado de Minas Gerais (COSTA
Jr et al., 2007), foi suspeitado ser possvel que, em reas rurais, outras espcies de
carrapatos alm de R. sanguineus, possam atuar como vetores de E. canis. Com
base nos resultados daquele estudo, os carrapatos da espcie Amblyomma
cajennense deveriam ser includos como um potencial vetor de E. canis em reas
rurais do Brasil.
No estudo de Stich et al., (2008) vrios autores mostraram a ocorrncia
mundial da doena e que a metodologia usada na seleo da populao canina e
para deteco da bactria ou anticorpos, pode influenciar na porcentagem
encontrada. Revelaram, ainda, que a ocorrncia da doena na frica pode variar de
32% a 80%, entre estudos moleculares e sorolgicos e na Europa de 2,2% a 62,5%.
Nas Amricas destacaram a Venezuela com aproximadamente 33% em estudos
moleculares, o Mxico com 44,1% de sororreatividade; 2,2% a 57% nos EUA.
Relataram que existem poucas publicaes sobre a ocorrncia no Canad, mas que
uma pesquisa indicou baixa soroprevalncia, apesar da proximidade com regies
dos EUA que tem maior ocorrncia da doena. No Brasil, destacaram 19,8% a 23%
de soropositivos, porm, em estudo com pesquisa do DNA ehrlichial, a variao foi
de 1,4% a 3,5% em ces com plaquetometria normal, 20 a 26,1% em populao
trombocitopnica e 63,1% em ces cuja plaquetometria se encontrava abaixo de
100mil/L.
As diferentes espcies do gnero Ehrlichia possuem um tropismo por alguns
tecidos (ALMOSNY e MASSARD, 2002) como, por exemplo, E. canis que tem
preferncia por clulas da microvascularizao de alguns rgos parenquimais como
37
pulmes, rins e meninges de ces, causando hemorragias dos pulmes e da
mucosa nasal conhecida como epistaxe (HARRUS et al., 1997a; HARRUS et al.,
1997b). Os sinais clnicos ocorrem aps oito a vinte dias que o perodo de
incubao, e podem ser divididos de acordo com as fases da infeco (MOREIRA et
al., 2003).
A doena dividida na fase aguda, subclnica e crnica. A fase aguda possui
durao de duas a quatro semanas e nesta fase que ocorre a multiplicao do
organismo dentro das clulas mononucleadas infectadas. Atravs dessas clulas, as
bactrias so levadas para fgado, rins e linfonodos, onde se multiplicam em
macrfagos e linfcitos, causando hiperplasia linforreticular. A infeco
disseminada para outros locais, interagindo com clulas endoteliais de vasos de
menor calibre, induzindo vasculite ou resposta inflamatria perivascular, aps a
migrao para o tecido subendotelial (HARRUS et al., 1997a; ALMOSNY, 1998;
ALMOSNY e MASSARD, 2002). Nesta fase, os sinais clnicos incluem febre,
anorexia, perda de peso, edema de membros, vmitos e linfadenopatia. A gravidade
varia entre os animais (ALMOSNY, 1998) e, em alguns casos mais graves pode
ocorrer epistaxe, anemia, edema de membros e saco escrotal, perda de peso
acentuada, equimoses no abdmen, petquias em mucosas, melena e hifema
(NEER e HARRUS, 2006).
Alguns estudos experimentais mostram que a doena pode ser mais severa
com algumas cepas de E. canis e que quando co-infectada com outras doenas
transmitidas por carrapatos, tambm pode exacerbar os sintomas (UNVER et al.,
2009). Castro e colaboradores (2004), mostraram que ces apresentam sinais
clnicos de infeco por E. canis entre 10 e 14 dias aps a inoculao experimental.
Mucosas plidas, linfadenopatia, esplenomegalia, hepatomegalia, emagrecimento e
aumento da perda de pelo foram observados nos animais infectados.
Segundo, Almosny (1998), na fase aguda, pode ocorrer ttulo negativo para a
bactria. Os ces sobrevivem fase aguda permanecendo por longos perodos na
fase crnica (ALMOSNY e MASSARD, 2002). Para alguns ces, no entanto, uma
forma grave e potencialmente fatal de ehrlichiose crnica pode se desenvolver
meses ou anos aps a infeco inicial com E. canis em que a anorexia, febre e
perda de peso acompanhada de mialgia, tendncias a sangramento, leses
oculares e alteraes neurolgicas (STICH et al., 2008; HARRUS e WANNER,
38
2011). Vrias formas hemorrgicas podem ocorrer, como epistaxe, petquias,
equimose, hifema, hemorragia de retina e hematria, uvete anterior com alteraes
na retina tambm descrita. Ataxia, inclinao da cabea, nistagmo e convulses
foram relatados, mas estes sinais esto presentes apenas na minoria de ces com
ehrlichiose clnica. A claudicao pode ser observada em ces infectados somente
com E. canis, mas provvel que seja causado por uma dificuldade em se
movimentar devido a mialgia, em vez de artralgia (LITTLE, 2010).
A fase subclnica est associada com a persistncia do organismo e aumento
do ttulo de anticorpos sricos, que comeam aparecer entre sete e vinte e um dias
aps a infeco inicial (WOODY e HOSKINS, 1991). Algumas alteraes
hematolgicas podem persistir durante esta fase, como anemia arregenerativa,
trombocitopenia e respostas leucocitrias variveis que podem acompanhar
ausncia de sinais clnicos (ALMOSNY e MASSARD, 2002). Alguns animais podem
eliminar a bactria, sendo imunocompetentes e outros, sem resposta imune
adequada, se tornam crnicos (ANDEREG e PASSOS, 1999). Na fase crnica,
intensa estimulao antignica leva a hipergamaglobulinemia, devido resposta
imune celular ineficaz e persistncia da E. canis no interior de clulas hospedeiras
que leva a uma reao de hipersensibilidade ou uma resposta autoimune, levando a
uma pancitopenia (SWANGO et al., 1989). Nesta fase observam-se todos os sinais
clnicos descritos anteriormente, podendo ocorrer infeces secundrias com
pneumonia, glomerulonefrite, insuficincia renal, artrite, polimiosite e ataxia
(ALMOSNY, 1998).
2.2.2 Anaplasmose canina

Os ces podem ser infectados com Anaplasma phagocytophilum e
Anaplasma platys. Os primeiros relatos de infeco por A. phagocytophilum em ces
foram da Califrnia/EUA, no incio dos anos da dcada de 80. O organismo foi
reconhecido como muito semelhante a Ehrlichia equi dos equinos e, posteriormente,
como assemelhando-se ao que era ento chamado de ehrlichiose granuloctica
humana (EGH), um agente descrito pela primeira vez em pessoas de Minnesota e
Wisconsin. Com a mudana taxonmica proposta por Dumler e colaboradores
(2001) E. equi, E. phagocytophila e o agente da EGH passaram a incluirem A.
phagocytophilum.
As
cepas
originais
que
compunham
genogrupo
39
phagocytophilum pareciam permanecer em isolados distintos, tanto em termos de
espcies que causavam a doena, como na distribuio geogrfica. Isto estava
baseado em estudos realizados na Europa que mostraram que isolados de uma
cepa de A. phagocytophilum da Europa no causavam a doena quando inoculado
em cavalos assim como isolados de seres humanos, nos Estados Unidos, no
provocavam a doena em bovinos. Alm disso, tm sido descritas variantes
genticas do A. phagocytophilum no associadas com a doena. Tanto a infeco
como a doena por A phagocytophilum (cepa HGE) so bem notificadas em ces em
reas da Amrica do Norte e Europa, onde ocorre densas populaes de carrapatos
Ixodes spp (LITTLE, 2010).
Anaplasma platys est relacionada ao aparecimento de incluses em
plaquetas, entretanto, esta ocorrncia pode ser inespecfica, por existirem incluses
no parasitrias nestes elementos figurados (FERREIRA, 2006).
Infeces por E. canis, em determinada fase da doena, tambm apresentam
incluses em outros tipos celulares, inclusive plaquetas (ALMOSNY, 1998;
MYLONAKIS et al., 2003; DAGNONE et al., 2009) e, durante a doena, pode ocorrer
ativao plaquetria com granulaes e estas incluses podem ser confundidas com
mrulas (MYLONAKIS et al., 2003).
Agente da trombocitopenia cclica, o microorganismo foi primeiramente
descrito nos EUA, na Florida, observado em esfregao corado por Giemsa como
incluses basoflicas em plaquetas de um animal trombocitopnico (HARVEY et al.,
1978). Ces sadios inoculados com sangue deste animal desenvolveram estruturas
idnticas em plaquetas e uma sndrome hematolgica caracterizada por episdios
de trombocitopenia cclica, sem sinais evidentes de doena clnica (FRENCH e
HARVEY, 1983). A. platys um microorganismo intracelular obrigatrio, que parasita
plaquetas de ces (WOODY e HOSKINS, 1991, HOSKINS, 1991a; ALMOSNY e
MASSARD, 2002), apresentando caractersticas morfolgicas e comportamentais
tpicas. Essas estruturas, ao serem examinadas ao microscpio eletrnico,
revelaram morfologia similar a Ehrlichia canis, apresentando-se singulares, em pares
ou em grupos, dentro de vacolos, formando as conhecidas mrulas (FRENCH e
HARVEY, 1983). So pequenas, pleomrficas (cocides, ou elipsides) e Gramnegativas, apesar de no se corarem bem pelo mtodo de Gram. Dentro de
vacolos vo realizando fisses binrias sucessivas (HIBLER et al., 1986, HARVEY,
40
1990). Medem de 350 a 1250 nm de dimetro e as plaquetas infectadas podem ter
de um a trs vacolos contendo de um a oito microorganismos (HARVEY et al.,
1978). Entretanto, vacolos com at quinze destes j foram observados (ARRAGAALVARADO et al., 2003). O mecanismo de penetrao e sada do parasito ainda
no conhecido, mas provavelmente a entrada na plaqueta ocorre por meio de
endocitose, devido propriedade fagoctica da mesma (HARVEY et al., 1978) e
acredita-se que a membrana do vacolo proveniente da parte externa da
membrana dessa clula (HARVEY, 1990).
Anaplasma platys tem como provvel vetor o carrapato marrom do co o
Rhipicephalus sanguineus, (KORDICK et al., 1999; INOKUMA et al., 2000, COHN,
2003). Carrapatos ingurgitados dessa espcie foram examinados no Japo e o DNA
de Anaplasma platys foi amplificado (INOKUMA et al., 2000). Embora A. platys
venha sendo repetidamente identificada em R. sanguineus pela reao em cadeia
da polimerase (PCR), bem como em carrapatos Dermacentor auratus na Tailndia,
at esta data, no foi confirmada, experimentalmente, a transmisso por estes
artrpodes. Alm disso, infeco com A. platys tem sido comum em ces em reas
com alta presso de R. sanguineus, como o Caribe. Os ces, hospedeiros principais
de R. sanguineus, so considerados os principais reservatrio da A. platys e
infeces com esta bactria em outras espcies, alm dos ces, no foram
confirmados (LITTLE, 2010), porm a caracterizao molecular confirmou a
ocorrncia em gatos (LIMA et al., 2010).
Por esse tipo de transmisso, extremamente provvel a associao com
outros agentes que so transmitidos por este carrapato, como E. canis e Babesia
canis, potencializando as enfermidades (KORDICK et al., 1999; SUKSAWAT et al.,
2001a; INOKUMA et al., 2003). A associao de A. platys com outros
hemoparasitos, como E. canis e/ou B. canis, alm de potencializar a doena clnica,
dificulta o diagnstico e o tratamento dos ces doentes (SUKSAWAT et al., 2001a).
Segundo Harvey (1990) no h transmisso vertical e Hoskins, (1991b) relatou no
haver evidncias de transmisso do co para os humanos diretamente. Estudo de
infeco experimental mostrou que animais infectados somente com A. platys pode
tornar-se PCR negativo antes de serem submetidos a tratamento (GAUNT et al.,
2010).
Embora a trombocitopenia seja um achado comum em infeces por A.
41
platys, este achado no patognomnico desta ou de qualquer outra doena
(COCKBURN e TROY, 1986). O perodo de incubao vai de oito a quinze dias.
Durante a infeco aguda h uma alta porcentagem de plaquetas infectadas
circulando. Ocorre um decrscimo das plaquetas circulantes em alguns dias e esse
nmero pode chegar at 20.000 plaquetas/L ou menos, sendo neste momento
mnima a probabilidade de visualizao do parasita no sangue. Aps o
desaparecimento dos microorganismos, a plaquetometria volta ao normal em trs ou
quatro dias. Em sete a quatorze dias, ocorre outra parasitemia onde, novamente, o
nmero de plaquetas decresce. Esta natureza cclica das trombocitopenias e das
parasitemias diminui com o tempo e com a cronificao da doena, o que resulta em
espordicas aparies do parasito no sangue e trombocitopenias medianas (HIBLER
et al., 1986; SWANGO et al., 1989; HARVEY, 1990; WOODY e HOSKINS, 1991).
Megacaricitos ou qualquer outra clula precursora na medula ssea no
apresentam incluses durante a parasitemia (HIBLER et al., 1986; RIKIHISA, 1991).
Os sintomas clnicos da doena variam dependendo de cada co, mas,
fundamentalmente, A. platys causa o enfraquecimento do animal, letargia, anorexia,
dificuldade respiratria, febre, aumento da secreo de muco, secreo ocular
purulenta, esplenomegalia e hiperceratose do focinho (SAINZ et al., 1999). Ces
infectados naturalmente por A. platys no costumam apresentar doena clnica e a
evidncia de hemorragias rara. No entanto, achados como anorexia, letargia,
depresso, perda de peso, descarga nasal muco purulenta, linfadenomegalia,
mucosas hipocoradas e febre foram descritas (RIKIHISA, 1991; HARRUS et al.,
1997a). Essas bactrias no causam a morte, e o tratamento com antibiticos
adequados geralmente bem sucedido aps quatro semanas (SAINZ et al., 1999).
A infeco tambm relatada em ces de experimento e a infeco isolada parece
causar doena branda. Co-infeces com outros agentes, inclusive E. canis,
resultam em sinais clnicos mais graves. Na ausncia de co-infeces a
trombocitopenia pode involuir espontaneamente. Em ces dos EUA, a bactria
parece no acarretar doena clnica, porm tem sido notificados casos com
tendncias a sangramentos e uvete anterior bilateral, talvez relacionados com cepas
variantes em outras regies geogrficas, como Espanha e Chile (LITTLE, 2010).
Um caso de uvete tambm foi relatado em um animal com alta titulao de
anticorpos anti A. platys e nenhum ttulo para E. canis (GLAZE e GAUNT, 1986).
42
Em estudo de um caso clnico em Israel, o paciente apresentou anorexia,
apatia,
febre
os
achados
laboratoriais,
como
anemia,
leucopenia
trombocitopenia, eram semelhantes ao da infeco por E. canis. O diagnstico foi

definido atravs da pesquisa em esfregao sanguneo, pois foram encontradas
mrulas em plaquetas. O animal apresentava sorologia positiva para A. platys e
negativa para E. canis, mas no se descartou completamente a possibilidade de
coinfeco (WANER, 1993).
Em estudos experimentais, um aumento discreto na temperatura retal foi
notado durante uma parasitemia inicial assim como melenas tambm foram
observados em pacientes trombocitopnicos (HIBLER et al., 1986; HARVEY, 1990;
WOODY e HOSKINS 1991).
Poucos estudos mostraram a ocorrncia especfica de A. platys no mundo. Na
Austrlia, trabalho desenvolvido entre 1998 a 2006, mostrou ocorrncia de 43%
dessa bactria, numa populao canina de 215 animais distribuidos por trs regies
distintas do pas. 24% dessa populao encontrava-se co-infectada e os autores
analisaram o impacto dessas infeces sobre a contagem plaquetria e concluram
que os animais infectados apenas com A. platys ou co-infectados, tem potencial para
desenvolverem trombocitopenia e evoluir com quadro clnico de sangramento,
diferente do descrito em outros pases que sugerem baixa patogenicidade com
sinais clnicos discretos (BROWN et al., 2006).
2.3 EPIDEMIOLOGIA
A ehrlichiose canina ocorre em muitos pases de clima temperado, tropical e
subtropical do mundo, coincidindo com a prevalncia do vetor artrpode. Tem sido
relatada em todos os continentes (HOSKINS, 1991b; HARRUS et al, 1997b). No
entanto, apenas E. canis tem sido isolada no mundo inteiro (McBRIDE, 2009) e,
devido a baixa variabilidade gentica, apenas uma amostra dessa espcie tem o seu
genoma totalmente sequenciado e, nenhum dado de hibridizao genmica
comparativa est disponvel para mostrar outras cepas (RIKIISA, 2010). Ehrlichia
canis tem distribuio mundial, mas as manifestaes clnicas podem variar
geograficamente (DAGNONE et al., 2003).
No continente americano o primeiro caso de ehrlichiose foi descrito em ces
nas Antilhas Holandesas (BOOL e SUTMLLER, 1957 apud EWING, 1969). Nos
43
EUA, a presena da doena foi descrita primeiramente por Ewing, em 1963, que, ao
examinar incluses em leuccitos de ces parasitados por Babesia canis, visualizou
estruturas caractersticas de E. canis. (EWING, 1963 apud EWING, 1969).
Entretanto, a doena comeou a despertar um maior interesse durante a guerra do
Vietn, quando centenas de ces militares norte-americanos morreram devido a
infeces por E. canis (HUXSOLL et al., 1969). RIKIHISA, 1991, afirmou que os
nicos vetores conhecidos das espcies do gnero Ehrlichia so carrapatos
Ixoddeos.
No Brasil, a doena teve seu primeiro relato em Belo Horizonte, MG em 1973
(COSTA et al., 1973) embora os relatos da ocorrncia de doena clnica tenham
acontecido no Rio de Janeiro, em 1976, quando dezenas de ces da Polcia Militar
do Estado foram vitimados e vieram a bito (CARRILLO et al., 1976). No sul do
Brasil foi descrito em 1985 um caso em Santa Maria no estado do Rio Grande do Sul
(SILVA et al., 1985) e em 1988 em Curitiba no Paran (KAVINSKI et al., 1988).
Atualmente a ehrlichiose canina prevalente em todas as regies brasileiras
afetando 20 a 30 % dos ces atendidos em clnicas e hospitais veterinrios no Brasil
(DANTAS-TORRES, 2008).
E. canis foi isolado pela primeira vez no Brasil em 2002 (TORRES et al., 2002).
A doena no parece ter predisposio por sexo (BANETH et al., 1996; SAINZ
et al., 1996; INOKUMA et al., 2000; BORBA et al., 2002; DAGNONE et al., 2003;
COCCO et al., 2003) e afeta animais de qualquer idade, embora autores descrevam
predisposio racial (SAINZ et al., 1996; INOKUMA et al., 2000). Embora a raa
pastor alemo tenha sido descrita como a mais suscetvel, a doena grave pode ser
vista em qualquer co que seja infectado com cepa de patogenicidade branda a
acentuada (LITTLE, 2010).
2.3.1 Fatores de risco

A relao entre infeco e doena frequentemente dinmica na natureza. O
equilbrio dessa relao pode ser atingido entre os mecanismos de resistncia
hospedeira e a infectividade e virulncia do agente. Surtos de doenas so
causados pela introduo de um agente dentro de uma populao hospedeira
suscetvel que no foi exposta previamente a ele e resultam em doena de
patogenicidade elevada com elevado ndice de mortalidade. Tal processo
44
prejudicial sobrevivncia do agente, uma vez que ao matar a populao
hospedeira, afeta negativamente tanto a sua capacidade de se reproduzir como
tambm suas chances de atingir novos hospedeiros suscetveis. Um agente pode,
por conseguinte, melhorar as suas chances de sobrevivncia, aumentando a sua
infecctividade e diminuindo a sua patogenicidade, e alguns patgenos tm uma
tendncia natural de fazer isso em certas circunstncias (FAO, 2010).
Embora no Brasil no existam estudos que mostrem a mobilidade de animais
domsticos, atravs de viagens com seus proprietrios, os dados de Menn, Lorentz
e Naucke (2010), na Alemanha, mostraram que animais importados ou que tenham
viajado por reas endmicas de vrios parasitos, so potencialmente responsveis
por carrearem microrganismos para regies no endmicas nesse pas. Da mesma
forma, HARRUS e WANER, 2011, consideraram que a suspeita clnica da doena
aumenta quando as manifestaes clnicas esto em animais que vivam ou tenham
viajado por regies endmicas.
Em Minas Gerais, estudo feito em Nanuque, Belo Horizonte e em Lavras
sugeriram que os ces que viviam nas zonas rurais estavam mais expostos a
carrapatos do que aqueles que vivem em reas urbanas e poderia estar associada
ao fato de que os ces urbanos eram mais susceptveis de serem pulverizados com
acaricidas, enquanto ces rurais eram catadores e raramente pulverizados (COSTA
Jr et al., 2007). Tambm em Minas Gerais, Soares et al., (2006) estudaram
ectoparasitos em ces vivendo em apartamentos e em casas com quintal,
concluindo que o ambiente gramado de quintais favorece o encontro de carrapatos.
Em estudos feitos no Brasil, em regio rural do Estado de Minas Gerais,
suspeitaram ser possvel que, em reas rurais, outras espcies de carrapatos alm
de R. sanguineus, possam atuar como vetores de E. canis. Com base nos resultados
daquele estudo, os carrapatos da espcie Amblyomma cajennense deveriam ser
includos como um potencial vetor de E. canis em reas rurais do Brasil (COSTA Jr
et al., 2007) e, mostra que em regies semelhantes os animais teriam maior
probabilidade de se infectarem.
2.3.2 Ocorrncia de co-infeco

No
Brasil
vrios
estudos
mostraram
presena
de
co-infeco
entre
Ehrlichia/Anaplasma e/ou outros hemoparasitas. Estudando populao canina do
45
Centro de Controle de Zoonozes Paulo Darcoso Filho no municpio do Rio de
Janeiro/RJ, Santos (2008) avaliou 38 ces escolhidos aleatoriamente e verificou que
36 estavam co-infectados, sendo que 22 eram com E. canis e A. platys.
Na Regio dos Lagos/RJ, em estudo que abrangia vrios municpios, como
Maric, Saquarema, Araruama, So Pedro dAldeia, Iguaba, Cabo Frio, Arraial do
Cabo e outros, de 3019 amostras sanguneas de ces, encaminhadas a laboratrio
particular, 1% estavam co-infectadas com Ehrlichia spp e Babesia spp. (ACCETTA,
2008). Em Ribeiro Preto/SP, de 221 ces, 34 (15,4%) eram co-infectados de E.
canis com A. platys ou Babesia spp ou ambos (SANTOS et al., 2009). Em
Botucatu/SP, anlise de 198 ces mostrou co-infeco em apenas 1% dos animais,
porm, com outros hemoparasitas transmitidos por artrpodes (Bartonella spp e
Leishmania
chagasi),
mas
no
encontraram
outras
espcies
da
famlia
Anaplasmataceae (DINIZ, et al., 2007).

Dantas-Torres (2011) relatou em vrios estudos sobre a possiblidade da
transmisso de Leishmania atravs da picada ou ingesto de carrapatos, inclusive
com o Rhipicephalus sanguineus.
Em Belo Horizonte/MG entre 194 animais suspeitos de hemoparasitoses, 145
foram positivos para algum tipo de parasito, sendo 52 (35,9%) para Ehrlichia sp. (E.
canis e/ou A. platys) e 10% desses positivos com co-infeco com Haemobartonella
canis (atualmente denominado Mycoplasma haemocanis) e Babesia canis
(MOREIRA et al., 2003).
Em Cuiab/MT, Sousa e colaboradores (2009) descreveram dois casos de coinfeco entre E. canis e A. platys. No nordeste do Brasil, em Teresina/PI, Pires e
colaboradores (2008) analisando aspirado de medula ssea, encontraram 1 co
entre 65 (1,5%) co-infectado com Ehrlichia sp. e Leishmania sp., mostrando
coexistncia dos vetores tambm nessa regio ou a possibilidade de transmisso
pelo mesmo vetor (DANTAS-TORRES et al., 2010 apud DANTAS-TORRES, 2011).
No entanto, no estudo em Teresina/PI, no foram encontrardas incluses em
plaquetas, para diagnosticarem A. platys. Ainda no nordeste, Souza e colaboradores
(2010) investigaram trs espcies de Ehrlichia (no incluram pesquisa de A. platys)
em 472 animais e 32 carrapatos na capital da Bahia, Salvador, e encontraram
apenas E. canis. Porm, Freire e colaboradores (2009) estudando no mesmo
municpio mas em regies diferentes, analisaram 100 casos suspeitos encontrando
46
24% de co-infeco entre E. canis e A. platys. Em Recife/PE, em 100 ces
suspeitos, 32% estavam com A. platys e E. canis (RAMOS et al. 2009). E, tambm
em Recife, entre 205 ces pesquisados para ocorrncia de vrios hemoparasitas,
23,9% estavam co-infectados (RAMOS et al., 2010).
2.3.3 Ocorrncia no Brasil

De acordo com ALMOSNY (1998) e ALMOSNY e MASSARD (2002), a doena
vem sendo descrita com frequncia em vrios locais do territrio brasileiro.
Labarthe et al., (2003) avaliaram, em teste Elisa, 2553 ces em 12 estados
brasileiros e encontraram 19,8% com anticorpos para E. canis, separados pelas
regies nordestes com 43%, sudeste com 20,9%, centro-oeste com 30,4% e sul com
1,7%. Ao analisarem apenas os dados referentes ao Estado do Rio de Janeiro, foi
encontrada uma prevalncia sorolgica de 29,6%. Foi sugerido que a baixa
ocorrncia encontrada na regio sul poderia estar associada com a diferena do
clima entre as regies, fator importante na proliferao do vetor (LABRUNA e
PEREIRA, 2001; LABARTHE et al., 2003). No entanto foram encontradas incidncia
de 23% (TRAPP et al., 2006) e de 21% (DAGNONE et al., 2003) de E. canis em
ces no Paran, tambm regio sul. Embora Labarthe e colaboradores (2003)
tenham encontrado 15,5% de frequncia de soro positividade para este parasito em
So Paulo, SANTOS et al., (2009) encontraram 25,4% utilizando anlise molecular
para o DNA de E. canis, na regio de Ribeiro Preto/SP enquanto em estudos
moleculares em Botucatu/SP
30,9% (BULLA et al., 2004). Em Campinas/SP, a
anlise para pesquisa de erlichiose em 1654 pronturios, do Hospital Veterinrio da

Universidade Paulista de Campinas, revelou 87 (5,25%) animais positivos, sendo 54
(3,3%) E. canis e 33 (2%) A.platys (CONDE et al., 2007).
Em estudo realizado em rea rural do Rio de Janeiro (regio do mdio Paraba)
com 250 ces utilizando esfregao sanguneo identificou-se uma ocorrncia de 4,8%
de infeco por E. canis (ODWYER et al., 2001). Santos (2008), estudando
populao canina do Centro de Controle de Zoonozes Paulo Darcoso Filho no
municpio do Rio de Janeiro/RJ avaliou 38 ces escolhidos aleatoriamente e
verificou soropositividade para E. canis em 31 (88,6%) e 23 (60, 5%) com mrulas
intraplaquetrias, sugestivas de A. platys.
47
Na regio metropolitana do Rio de janeiro foi encontrada prevalncia de 15%
em deteco molecular de E. canis (MACIEIRA et al., 2005). No Municpio de
Campos dos Goytacazes/RJ, de 1.576 lminas avaliadas em pesquisa de
hemocitoparasitas, foram evidenciados corpsculos iniciais, elementares ou mrulas
em 219 (13,89%), de Ehrlichia spp (ALBERNAZ et al., 2007). Tambm no Rio de
Janeiro, estudo de Accetta (2008) de 3019 esfregaos da Regio dos Lagos, 84
(2,8%) foram positivos, sendo 55 (1,8%) para Ehrlichia sp. e 29 (1%) para A. platys.
Outro estudo sobre ocorrncia de E. canis feito com 253 amostras de dois
laboratrios particulares no Rio de Janeiro, de clnicas provenientes dos municpios
de Niteri, So Gonalo, Maric, So Pedro DAldeia, Iguaba, Araruama e
Saquarema, mostrou positividade de 120 amostras (47,4%) atravs de teste
sorolgico (PIMENTEL Jr, 2007).
Em Minas Gerais, de um total de 226 ces, 101 (44,7%) foram diagnosticados
como soropositivos para E. canis. Sendo 65,6% de ces positivos em Nanuque,
37,8% em Belo Horizonte, e 24,7% em Lavras (COSTA Jr et al., 2007). Tambm em
Belo Horizonte, em estudo da prevalencia de ces soropositivos feito por laboratrio
particular, foram analisadas 1640 amostras sendo 901 (54,93%) soropositivas para
E. canis (RISTOW et al., 2009).
No Nordeste, em estudo realizado em 472 ces da cidade de Salvador/BA,
focando os distritos de Itapu e Cajazeiras, observou-se a prevalncia de anticorpos
anti-E. canis, pela imunofluorescncia indireta (ttulo 1:80) em ces, de 35,6%
(168/472). Amostras de sangue dos animais soropositivos foram submetidos a
pesquisa do DNA por uma nested-PCR para identificao da espcie de Ehrlichia
responsvel pela infeco. Dentre os positivos, 58 (34,5%) ces foram PCRpositivos para E. canis (SOUZA et al., 2010). Freire e colaboradores (2009) em
estudos realizados no municpio de Lauro Freitas e entorno, na regio metropolitana
de Salvador, avaliaram 100 ces e encontraram 51% de soropositivos, em teste
ELISA, para E. canis e em anlise dos esfregaos sanguneos, 60% apresentavam
incluses em plaquetas. Ainda em Salvador, Meneses e colaboradores (2008),
estudaram grupo de 75 ces doentes e 98,7% (74/75) foram soropositivos, 33,3%
(25/75) tiveram DNA de E. canis detectados e 5,33% (4/75) tiveram mrulas
observadas em esfregao.
48
Em estudo realizado no Sul da Bahia, na, Microrregio Ilhus-Itabuna, a
positividade de anticorpos anti-E. canis encontrada, em teste ELISA, foi de 43% (43)
em Ilhus e de 29% (29) em Itabuna, perfazendo um total de 36% (72) dos 200 ces
avaliados nos dois municpios (CARLOS et al., 2007). No ano seguinte, em estudos
realizados na mesma regio por meio de pesquisa do DNA especfico para E. canis,
foi encontrado, de total de 153 ces, sendo 84 de Ilhus e 69 de Itabuna, 12 animais
(7,8%) positivos. Destes, 9 animais (10,7%) em Ilhus e trs (4,3%) em Itabuna
(CARVALHO et al , 2008).
Ainda no nordeste brasileiro, em Mossor/RN 198 animais foram pesquisados
por diagnstico morfolgico, sendo encontrados 13 (6,6%) positivos (MEDEIROS e
LIMA, 2004). Em Aracaj/SE a anlise de 1565 pronturios do Hospital Veterinrio
Dr Vicente Borelli de Aracaju, revelou que 119 (7,6%) indicavam diagnstico positivo
de ehrlichiose canina (FAIERSTEIN et al., 2008). Em Recife/PE, estudo molecular
com 205 amostras 48,78% estavam positivas para A. platys e 38,08% para E. canis
(RAMOS et al., 2010).
Na regio centro-oeste, no municpio de Dourados/MT o levantamento
retrospectivo de casos de hemoparasitoses no Hospital Veterinrio da Faculdade
Anhanguera, 3,8% tinham diagnstico de E. canis e 2,4% de A. platys (RODRIGUES
et al., 2008). Em Braslia/DF, foram avaliados 2952 histricos de pacientes caninos
do Hospital Veterinrio da Universidade de Braslia e 0,81% tinham diagnstico de
Ehrlichia sp. e 0,69% de A. platys (VASCONCELOS et al., 2008). Em Anpolis/GO
53 animais do Centro de Controle de Zoonoses foram avaliados morfologicamente e
1 (1,9%) foi positivo para Ehrlichia sp. e 9 (17%) positivos para Anaplasma sp.
(MUNDIM, et al., 2008). Na cidade de Cuiab/MT, 195 ces atendidos no Hospital
Veterinrio da UFMT foram avaliados atravs do esfregao sanguneo e 48 (24,6%)
apresentaram mrulas. Uma amostragem de 60 desses 195 ces foi escolhida
aleatoriamente para serem avaliados por PCR e revelaram que 9 (15%) eram
positivos para E. canis e 3 (5%) para Ehrlichia sp. (SOUSA et al., 2010). Tambm
em
Cuiab/MT,
254
ces
domiciliados
foram
selecionados
testados
sorologicamente e foram detectados 108 (42,5%) positivos (SILVA et al., 2010).

Na Regio Norte, estudo realizado pesquisando DNA erlichial em carrapatos,
humanos e ces de Rondnia, foram detectados apenas nos ces, sendo esta a
notificao dos primeiros casos de E. canis na Regio Amaznica. Nas outras
49
espcies no foram amplificados DNA erlichial. No mesmo estudo foram analisadas
amostras sanguneas de capivaras, tambm todas negativas na pesquisa molecular
(LABRUNA et al., 2007).
2.3.4 Ocorrncia em populaes trombocitopnicas
Diferenas na prevalncia pode refletir a diversidade na patogenicidade do
isolado ou ser um vis de seleo porque ces trombocitopnicos so mais
propensos a serem testados para ehrlichiose (DAGNONE et al., 2003). Em estudo
feito com animais clinicamente suspeitos, na Bahia/BR, foram encontardos
anticorpos anti-Ehrlichia canis em 98,66% (74/75) dos animais. A PCR foi positiva
em 33,3% (25/75) dos ces, enquanto a presena de mrulas foi positiva em 5,33%
(4/75) dos suspeitos. Nesse grupo, contagens de plaquetas com valores inferiores a
200.000/L foram encontradas em 15 animais (MENESES et al., 2008). Em So
Paulo, na regio de Botucatu, estudos moleculares mostraram prevalncia de 10,5%
em ces com trombocitopenia, sendo que em animais com trombocitopenia menor
do que 100000/L essa incidncia aumenta para 63,1% (BULLA et al., 2004). No
Rio de Janeiro/RJ estudo molecular com populao trombocitopnica determinou
prevalncia de E. canis de 32,1%, enquanto em no trombocitopnicos foi de 3,5%
(MACIEIRA et al., 2005). Na Regio dos Lagos/RJ entre 1127 trombocitopnicos 84
(7,45%) apresentaram mrulas e, desses, 55 (65,5%) foram classificadas como
Ehrlichia spp. e 29 (34,5%) como A. platys, resultando 1043 trombocitopnicos
negativos para diagnstico morfolgico (ACCETTA, 2008). Em Jaboticabal/SP foi
encontrada incidncia de 43% de Ehrlichia spp. em ces trombocitopnicos (UENO
et al., 2009)
2.3.5 Estudos epidemiolgicos de A. platys
Estudos epidemiolgicos em relao a A. platys so ainda escassos, mas
presume-se que sua distribuio geogrfica seja semelhante a outras espcies de
rickettsias (BRADFIELD et al., 1996). Esta bactria j foi descrita nos EUA, na
Grcia, Frana, Itlia, Israel, China, Japo, Tailndia, Venezuela e Austrlia
(BROWN et al., 2001) e tem sido encontrada em todas as regies brasileiras,
embora poucos casos tenham sido publicados formalmente na literatura (DANTASTORRES, 2008). E provvel que duas cepas diferentes circulem no Brasil
50
(CARDOZO et al., 2007; CARDOZO et al., 2009) e a incidncia pode variar de
10,3%, encontrada em Cuiab/MS (SALES et al., 2007) a 18,8%, no Rio de
Janeiro/RJ (FERREIRA et al., 2007). A infeco por E. (Anaplasma) platys parece ter
como vetor R. Sanguineus (KORDICK et al., 1999). A maioria dos trabalhos
relacionaram a ocorrncia em estudos que avaliaram, tambm, a ocorrncia em
infeco associada com outros hemoparasitas, principalmente os de E. canis. No Rio
de Janeiro (SANTOS, 2008; ACCETTA, 2008), em Minas Gerais (MOREIRA et al.,
2003) em So Paulo (DAGNONE et al., 2003; DINIZ et al., 2007; SANTOS et
al.,2009) na Bahia (FREIRE et al., 2009 ), Pernambuco (RAMOS et al., 2009;
RAMOS et al., 2010), Mato Grosso (RODRIGUES et al., 2008; SOUSA et al., 2009),
Gois (VASCONCELOS et al., 2008, MUNDIM, et al., 2008).
2.4 FISIOPATOGENIA
Em estudo molecular, caracterizando cepas de E. canis com a gravidade da
doena, foi mostrado que h baixa variabilidade gentica. O estudo tambm
forneceu uma evidncia mais adicional de que, apesar da distribuio mundial de E.
canis, a parte do perfil gentico j investigado conservado e nenhum isolado
fator preditivo de caractersticas clnicas particulares. Apesar disso, foi sugerido que
novos estudos sobre o polimorfismo gentico de regies genmicas no associadas
com caractersticas clnicas, fossem feitos para determinar se essas afetam
substancialmente a virulncia e o desfecho clnico da doena (SIARKOU et al.,
2007).
2.4.1 Estudos biolgicos

Dependendo da espcie, os membros do gnero Ehrlichia / Anaplasma
infectam mononucleares, granulcitos ou plaquetas. (RIKIHISA, 1991).
Algumas caractersticas dos gneros Anaplasma e Ehrlichia que contribuem
para o entendimento do mecanismo de adeso e sobrevivncia na clula hospedeira
tem sido descritos. Quando a bactria interage com a clula alvo, sinais so
transmitidos entre ambas. Dessa forma, cria-se um ambiente propcio replicao
bacteriana. A entrada nos fagcitos independente de microfilamentos , indicando
no ocorrer por fagocitose, no entanto depende da atividade da transglutaminase,
pois a endocitose mediada por receptor (RIKIHISA, 2003).
52
51
2.4.2 Alteraes celulares e na imunidade

A compreenso da doena, sua patofisiologia, patognese e controle so
cruciais, pois dados sugeriram que ocorrem alteraes na funo de neutrfilos dos
hospedeiros e proteo da imunidade inata e adaptativa e, contribuem para as
manifestaes da doena (HECHEMY, et al., 2005). Na erlichiose monoctica do co
a severidade da doena pode estar relacionada com a natureza da resposta imune
do paciente e o perfil de citocinas induzido aps inoculao, onde nveis elevados de
interferon gama (IFN ) tem sido associados a doena mais branda enquanto
elevados nveis de interleucinas (IL) IL - 1 e IL 8 esto relacionados a doena
mais grave. (SIARKOU et al., 2007).
Embora a resposta imune celular seja considerada a mais importante para E.
canis,
bactria intracelular, a resposta humoral teve correlao positiva com a
diminuio da quantidade de DNA bacteriano detectado no sangue e bao de

animais
infectados
experimentalmente
por
via
hematognica.
infeco
experimental, por ter sido diretamente no sangue, pode ter levado ao aumento da
quantidade de DNA presente no hospedeiro muito mais rpido do que quando
inoculado por via subcutnea, como ocorre naturalmente atravs da picada do
carrapato. No entando, o acompanhamento de animais infectados naturalmente em
diferentes fases da doena necessrio para confirmar essa comparao (BANETH
et al., 2009). Apesar de poder ocorrer uma gamopatia policlonal ou monoclonal, altos
ttulos de anticorpos no protegem contra infeces futuras ou eliminam infeces
existentes. Ao contrrio, algumas leses observadas na erlichiose parecem ser
mediada por complexos imunes, e ces com gamopatia monoclonal podem
desenvolver sequelas tais como glomerulopatia ou hemorragia retiniana (LITTLE,
2010).
Em infeco experimental com E. canis por via subcutnea, a manifestao
clnica da doena variou com a quantidade do inculo. Quanto menor, mais tardia foi
a manifestao clnica, sendo que com doses muito baixas alguns animais no
apresentaram sintomas, embora tivessem desenvolvido resposta sorolgica. A
concentrao de imunoglobulina do tipo IgG foi maior em animais cujo inculo foi
elevado. Nesse estudo a diminuio da contagem plaquetria e a soroconverso
ocorreram mais tardiamente do que em infeco experimental por via hematognica,
52
mostrando que a via de administrao e o tamanho do inculo podem influenciar no
curso e manifestao clnica da ehrlichiose monocca canina (GAUNT et al., 1996).
Em linhas gerais, o estudo realizado por Castro e colaboradores em 2004,
com infeco experimental, mostrou um envolvimento intenso de clulas imunes na
ehrlichiose monoctica canina (EMC), especialmente nos linfonodos e no bao.
Mostrou que a vasculite imunomediada pode desempenhar um papel central na
patognese da EMC e poderia explicar a maior parte das leses observadas em
importantes rgos e tecidos de ces infectados. A gravidade de leses em animais
infectados e a presena de uma intensa atividade imunolgica sugere mecanismos
imunomediados na gnese das leses. Imunohistoqumica de rgos linfides
evidenciou aumento do nmero de IgM e IgG em clulas imunologicamente
marcadas em ces com EMC. Linfcitos TCD3+ estavam presentes em maior
nmero nos sinusides esplnicos e na regio medular dos linfonodos, e em menor
nmero na regio folicular dos linfonodos de todos os ces infectados quando
comparados aos animais controle. O menor nmero de clulas T CD3+ na regio
folicular dos gnglios linfticos foi considerado um achado importante pelos
pesquisadores para confirmar participao do sistema imune na formao
histopatolgica. Populaes de clulas T CD8 + estavam aumentadas nas regies
folicular e medular dos linfonodos de animais infectados com E. canis. Essa
descoberta demonstra que as respostas mediadas por clulas foram pronunciadas
em ces inoculados. Por outro lado, as clulas CD8+ estavam diminudas no bao
de ces infectados que poderiam ter ocorrido como um desequilbrio da resposta
imune neste rgo na EMC. Os pesquisadores sugeriram que as clulas TCD8+
poderiam representar uma resposta imune protetora contra E. canis persistente, e
que resistiriam a erradicao pelos fagcitos e anticorpos, enquanto elas tambm
poderiam mediar a leso tecidual pela eliminao citoltica das clulas do hospedeiro
parasitado e, assim, contribuiriam para a patognese da EMC (CASTRO et al.,
2004).
Incluses em clulas precursoras na medula ssea sugerem que ocorre
agresso direta no tecido medular para evoluo de mielossupresso (MOREIRA et
al., 2005). Porm, segundo Mylonakis et al., (2010) no foi observado mielofibrose
em animais com depresso medular desenvolvida pela infeco por E. canis.
53
O estresse oxidativo parece no ocorrer em infeces isoladas por E. canis,
mas sim com associao a hemlise por babesiose. Estudo avaliando a
concentrao de perxido lipdico eritrocitrio (LPO) em ces infectados com E.
canis e coinfectado com Babesia sp. mostrou diferena significativamente maior nos
coinfectados, e assim, danos oxidativos no foram evidenciados pelo aumento de
LPO nos eritrcitos. No h informao sobre peroxidao de lipdio na erlichiose
monoctica do co, como na Rickettsia rickettsii, e a E. canis no produz exotoxina e,
seu contedo limitado de lipopolissacardeos, considerado baixo para o processo
patognico. Mesmo a morte da bactria pela clula hospedeira no parece envolver
produo de oxignio reativo (KUMAR et al., 2006).
2.4.3 Fisiopatogenia da trombocitopenia
A trombocitopenia uma das caractersticas fisiopatognicas mais comuns na
ehrlichiose canina. Estudo com infeco experimental para avaliar os mecanismos
que levam a reduo do nmero de plaquetas nessa doena mostrou a possvel
associao do aumento da destruio pela maior ligao com cromato de sdio, com
a diminuio da vida mdia plaquetria, atravs da menor incorporao de
selenomethionina, ambos pelas plaquetas recm formadas liberadas na circulao.
O estudo mostrou, atravs da avaliao radioativa, que a destruio ocorria
primariamente no bao. Alm disso, foi observado atravs da quantificao de
megacaricitos no sangue e de megatrombcitos (megaloplaquetas), avaliados pelo
dimetro plaquetrio, que existia acelerao da trombopoiese e da liberao de
plaquetas em resposta reduo do nmero circulante. Foi mostrado que, em
pacientes cuja plaquetometria fosse igual ou inferior a 105/L, a mdia do dimetro
plaquetrio tendia ser cada vez maior, bem como a quantidade de megacaricitos
(SMITH et al., 1975). Outro estudo com infeco experimental, conduzido em 1995,
avaliando a presena de anticorpos antiplaquetrios na ehrlichiose, mostrou que a
destruio imunomediada era um dos mecanismos que contribuia para a
plaquetopenia e que esta diminuio estava inversamente proporcional ao volume
plaquetrio mdio (VPM) e que esse comeava a se elevar logo na primeira semana
aps infeco. A deteco de anticorpos antiplaquetrios ocorreu 24 dias aps
infeco (DAI) enquanto anticorpos para E. canis (IgG) foram detectados no 15DAI.
(WANER et al., 1995). Tambm em infeco experimental, estudo que acompanhou
54
ces durante 15 semanas aps infeco, mostrou que no 3DAI apareciam
megaloplaquetas e plaquetas ativadas (ALMOSNY, 1998).
A trombocitopenia pode ser causada pela hipoplasia de medula ssea e
tambm o sequestro e aumento de consumo, assim como pode contribuir para
ocorrncia de distrbios hemorrgicos, principalmente se associada diminuio da
funo plaquetria e secreo de fator de inibio da migrao plaquetria por
linfcitos expostos s clulas infectadas por E. canis. A associao com inibio da
agregao plaquetria pode contribuir para manifetao de diteses hemorrgicas
(LITTLE, 2010).
Na
anaplasmose
canina
acredita-se
que
mecanismo
inicial
da
trombocitopenia esteja relacionado proliferao do parasito e, as trombocitopenias

subsequentes, so marcadas por mecanismos de remoo imunomediados
(WOODY e HOSKINS, 1991). O mecanismo da trombocitopenia por A. platys,
entretanto, ainda no est perfeitamente conhecido (RUSSEL e GRIDEM, 2000). H
um decrscimo da agregao plaquetria, e sua relevncia clnica ainda no est
completamente esclarecida. Isso pode estar relacionado ativao plaquetria
durante a infeco aguda e posterior liberao do parasito, pois estas plaquetas
continuam circulantes, porm hipofuncionais, o que pode justificar o decrscimo
discreto da agregao (GAUNT et al., 1990).
2.5 - PATOLOGIA CLNICA

Nas ehrliquioses vrios sinais clnicos so inespecficos (WOODY e
HOSKINS, 1991), pois h muitas outras doenas que apresentam os mesmos sinais
e sintomas que podem estar acometendo os ces infectados por E. canis de forma
isolada, ou em co-infeco (NEITZ e THOMAS, 1938; BREITSCHWERDT et al.,
1998) como com A. platys (BREITSCHWERDT et al., 1998) ou com Babesia
sp.(KUMAR et al., 2006). Por isso o estudo das alteraes hematolgicas,
bioqumica sangunea e outros exames laboratoriais podem auxiliar no diagnstico,
acompanhamento clnico e recuperao do paciente.
Vrios estudos tm mostrado que essas bactrias causam alteraes em
exames laboratoriais de rotina, como hemograma e bioqumicas sricas (ALMOSNY,
1998).
55
2.5.1 Alteraes Hematolgicas
Vrios trabalhos descrevem alteraes hematolgicas nas infeces por
Ehrlichia/Anaplasma em ces em infeco natural (ALMOSNY, 1998) ou
experimental (ALMOSNY, 1998; CASTRO et al., 2004; UNVER et al., 2009; GAUNT
et al., 2010;). Ces infectados com E. canis apresentaram ligeira a moderada
alteraes hematolgicas na infeco experimental aguda por apenas algumas
semanas (30 dias) e houve tendncia evidente para os parmetros hematolgicos
voltarem ao normal no final do experimento (CASTRO et al., 2004).
2.5.1.1 Alteraes Plaquetrias

Como um dos principais achados de patologia clnica na ehrlichiose canina a
trombocitopenia (LITTLE, 2010), muitos clnicos tendem a us-la como uma
indicao para usar o tratamento antimicrobiano (OLIVEIRA et al., 2009a). A
contagem do nmero de plaquetas tem sido um dos principais parmetros
laboratoriais, de diagnstico e acompanhamento clnico, de animais suspeitos ou
confirmadamente positivos para ehrlichiose/anaplasmose em ces (BULLA et al.,
2004; MACIEIRA et al., 2005). Apesar disso, em estudo feito no Rio de Janeiro/BR,
avaliando a correlao da plaquetopenia com a positividade de DNA ehrlichial no
sangue de ces, apenas 32,1% foram positivos, sendo a maioria E. canis (26,8%).
No grupo no trombocitopnico a positividade para DNA ehrlichial foi de 3,5% e
todos E. canis (MACIEIRA et al., 2005). Em Botucatu, estado de So Paulo/BR,
numa populao de 146 ces trombocitopnicos, 66 (45,2%) foram positivos para
pesquisa de DNA de E. canis e de 71 ces com plaquetometria normal, apenas 1
(1,4%) foi positivo (BULLA et al., 2004). No entanto, em Ribeiro Preto/SP, estudo
com 107 animais trombocitopnicos 85 (79,4%) foram positivos para E. canis e, no
mesmo estudo, outro grupo de 114 ces no trombocitopnicos, teve incidncia
menor, porm significativa, pois 29,8% dos animais foram positivos para DNA de E.
canis. (SANTOS et al., 2009).
A
coinfeco
parece
ser
um fator
importante
na
determinao
de
trombocitopenia e vrios estudos tm mostrado essa ocorrncia (MOREIRA et al.,

2003; SANTOS et al., 2009; LITTLE, 2010; GAUNT et al., 2010). No estudo de
Santos e colaboradores (2009), pesquisando DNA de vrios hemoparasitas em
Ribeiro Preto/SP, foi encontrado numa populao canina de 107 animais
56
trombocitopnicos, 85 positivos para E. canis, e desses, 28 (26,1%) eram coinfectados com A. platys e/ou Babesia sp. No grupo de 114 animais no
trombocitopnicos, dos 34 positivos para E. canis, 5 estavam co-infectados com um
ou ambos desses hemoparasitas. Segundo reviso conduzida por Little (2010), na
infeco por A. platys a trombocitopenia a alterao mais frequente, no entanto
aumenta e diminui em um ciclo de 10 a 14 dias, durante a fase aguda. Porm, com
co-infeco com E. canis, a trombocitopenia pode ser mais severa. E, isso tem se
confirmado em infeco experimental (GAUNT et al., 2010).
A plaquetometria tem seus valores apresentando flutuaes dia aps dia
(TROY e FORRESTER, 1990; XAVIER et al., 2009) e, a resposta medular, como
estmulo positivo a trombocitopenia, justifica essas variaes (SMITH et al, 1975). O
Tempo de sangramento prolongado e a fraca retrao do cogulo so evidncias da
trombocitopenia ou disfuno plaquetria (HIBLER et al, 1986; TROY
FORRESTER, 1990; HARRUS, et al, 1996). Atualmente a plaquetometria tem sido

considerado um teste sensvel, embora pouco especfico, na triagem de ces
clinicamente suspeitos de ehrlichiose (BULLA et al, 2004; MACIEIRA et al, 2005) e a
magnitude da trombocitopenia pode aumentar a fidedignidade do diagnstico
(BULLA et al, 2004).
Na anaplasmose canina, a trombocitopenia um dos principais achados
laboratoriais (DAGNONE et al., 2003), associado presena frequente de
macroplaquetas (HARRUS et al., 1997a; ALMOSNY, 1998; KAKOMA et al., 2000).
Ces infectados podem apresentar plaquetometrias prximas ao valor mnimo de
referncia ou valores extremamente baixos (WOODY e HOSKINS, 1991; HOSKINS,
1991a; XAVIER et al., 2009).
A trombocitopenia associada a A. platys classificada como regenerativa,
pois uma hiperplasia megacarioctica observada na medula ssea de ces
infectados (BAKER et al., 1987). Mudanas cclicas no nmero de megacaricitos ou
incluses citoplasmticas no foram observadas (GAUNT et al., 1990).
Em estudo com animais infectados naturalmente e diagnosticados pela
pesquisa de DNA bacteriano no sangue, a contagem plaquetria variou de 25 a 222
mil/L em quatro ces com ehrlichiose e em torno de 150mil/L em um co com
anaplasmose (BREITSCHWERDT et al., 1998). Em outro estudo, tambm com
animais infectados naturalmente, 27 ces foram diagnosticado por sorologia e
57
pesquisa do DNA e a maioria foi positivo para E. canis sendo 11 coinfectados com
outra Ehrlichia ou A. platys e nesses a plaquetometria mdia foi de 118 x103/L
(KORDICK et al., 1999).
No Municpio de Campos dos Goytacazes/RJ, no Brasil, analisando-se 1576
animais suspeitos com 219 confirmados para E. canis pela deteco de mrulas, a
trombocitopenia foi uma das alteraes mais frequentes (ALBERNAZ et al., 2007).
Trabalhos com infeco experimental mostraram que ocorre trombocitopenia na
fase aguda da infeco por E. canis (CASTRO et al., 2004; GAUNT et al., 2010;
UNVER et al., 2009; XAVIER et al., 2009) e A.platys (GAUNT et al., 2010). Estudo
feito no EUA mostrou que a diminuio da plaquetometria ocorreu em torno do 28
DAI e que foi mais tardia do que aquela cuja infeco tenha sido feita por via
intravenosa (GAUNT et al., 1996). Em estudo no Rio de Janeiro/Brasil, aps infeco
experimental por via intravenosa, observou-se diminuio na plaquetometria a partir
da primeira semana aps infeco tendo sido a menor contagem na sexta semana,
aproximadamente 48 DAI (XAVIER et al., 2009). Estudo realizado anteriormente j
relatava que a contagem de plaquetas diminuiu significativamente em ces
infectados a partir da terceira semana at o final do estudo (30 dias aps infeco)
(CASTRO et al., 2004). No estudo de Unver e colaboradores (2009), houve
diminuio significativa nos trombcitos com valor de 780/L, considerando a
inoculao com uma nova cepa de E. canis.
2.5.1.2 Alteraes Eritrocitrias

No eritrograma comum anemia arregenerativa, porm pode ser regenerativa
quando associada a hemlise por infeco concomitante por Babesia canis ou em
decorrncia de hemorragia (HOSKINS, 1991a; HOSKINS, 1991b e TROY &
FORRESTER, 1990). Estudos experimentais mostraram o aparecimento de discreta
anemia arregenerativa na fase aguda da ehrlichiose canina, acompanhada at
45DAI (WANER et al., 1995). Em infeco experimental acompanhada durante
quinze semanas, a anemia foi mais intensa entre as quinta e stima semanas aps
infeco e morfologicamente normoctica e normocrmica (ALMOSNY, 1998). Houve
decrscimo significativo nos valores mdios da hematimetria (H), hemoglobina (Hb)
e volume globular (VG) dos animais infectados, detectados nas semanas 2 e 3 aps
infeco. O CHCM (Concentrao de Hb Corpuscular Mdio) foi significativamente
58
maior nas semanas 3 e 4 (CASTRO et al., 2004). Hematimetria (3,2 x 106/L) e VG
(25%) foram diminuidos e Hb (9 g/dL) prximo ao mnimo normal no experimento de
Unver et al (2009).
Estudo com animais infectados naturalmente, no Municpio de Campos dos
Goytacazes/RJ, mostrou que, dos 219 confirmados para E. canis pela presena de
mrulas, a anemia normoctica normocrmica foi alterao eritrocitria mais
frequente (ALBERNAZ et al., 2007).
Na
anaplasmose
canina
pode
ser
observada
anemia
associada,
principalmente, a trombocitopenia (DAGNONE et al., 2003) ou ento leve diminuio

do hematcrito, que pode ser raramente inferior o valor de referncia (WOODY e
HOSKINS, 1991; HOSKINS, 1991a). A anemia que ocorre durante a doena clnica
classificada como normoctica/normocrmica e as mudanas no eritrcito e na
concentrao de ferro srico so semelhantes descrita na anemia da doena
inflamatria. A relao mielide/eritride apresentou discreta diminuio (BAKER et
al., 1988). Segundo relatos de Little (2010) na infeco por A. platys pode ocorrer
anemia no regenerativa e, em associao com E. canis, a anemia pode ser mais
acentuada.
Outras doenas tambm podem causar anemia e trombocitopenia, no sendo
esses achados suficientes para um diagnstico conclusivo, mas deve-se pensar em
Ehrlichia sp ou A. platys como diagnstico diferencial para outras doenas
(DAGNONE et al., 2003).
2.5.1.3 Alteraes Leucocitrias

O nmero de leuccitos varia durante a fase aguda da ehrlichiose canina,
porm com a induo do sequestro por mecanismos imunolgicos ou utilizao
inflamatria, seu nmero pode ser diminudo, havendo ento, um comportamento
cclico com evoluo variada que tende a leucopenia na fase crnica. (CODNER et
al 1985; HARRUS et al, 1997a e ALMOSNY, 1998). Em infeco experimental,
acompanhada durante quinze semanas, a leucometria global (LG) mdia dos
animais se manteve dentro dos limites normais e apenas um co, dos nove
inoculados, apresentou leucopenia entre a terceira e sexta semanas aps infeco
(ALMOSNY, 1998). Outro estudo com infeco experimental com E. canis mostrou o
aparecimento de discreta leucopenia na fase aguda da ehrlichiose canina,
59
acompanhada at 45DAI (WANER et al., 1995). Os valores de leuccitos foram
significativamente menores nas semanas 2 e 3 aps infeco e a contagem de
eosinfilos caiu a partir da segunda semana. Os animais infectados mostraram
aumento significativo nos valores mdios de neutrfilos e moncitos na terceira
semana, enquanto o nmero de linfcitos diminuiu significativamente (CASTRO et
al., 2004). No experimento de Unver e colaboradores (2009) houve diminuio
moderada na contagem de leuccitos (3,1 x 103/L), neutrfilos (2,4 x 103/L) e
linfcitos (400/L).
No estudo de BREITSCHWERDT et al., (1998), feito com ces naturalmente
infectados, a LG variou de 2,9 x103 a 50,9 x103/ L em ces com ehrlichiose,
enquanto no animal com anaplasmose essa contagem foi de aproximadamente
7x103/L. No estudo de KORDICK et al., (1999) tambm com animais naturalmente
infectados, a maioria era coinfectado, e a mdia da LG foi de 20x103/L. No estudo
feito em Campos dos Goytacazes/RJ, entre os 219 confirmados para E. canis pela
presena de mrulas em esfregao sanguneo, o desvio nuclear de neutrfilos
esquerda (DNNE) leve, linfocitopenia e eosinopenia absolutas foram as alteraes
mais frequentes (ALBERNAZ et al., 2007). Segundo Little (2010) pode ocorrer
linfocitose granular grosseira.
Na anaplasmose canina pode ocorrer monocitose associada a achados
laboratoriais como macroplaquetas (HARRUS et al., 1997a, KAKOMA et al., 2000).
Em alguns casos, uma diminuio transitria da leucometria global tambm pode ser
encontrada (WOODY e HOSKINS, 1991; HOSKINS, 1991a). Segundo reviso
conduzida por Little (2010) na infeco por A. platys pode ocorrer leucopenia.
2.5.2 Alteraes bioqumicas
Vrios trabalhos tm descrito alteraes bioqumicas em decorrncia de
leses desencadeadas pela infeco por Ehrlichia sp. Esses estudos mostram a
importncia de se avaliar rgos vitais como fgado, atravs da avaliao dos
valores sricos de proteinas, bilirrubinas e atividades de transaminases e fosfatase
alcalina, assim como as provas de funo renal atravs das dosagens de uria e
creatinina sricas (CODNER et al, 1985; KUEHN & GAUNT, 1985; CODNER e
FARRIS-SMITH, 1986; KANEKO et al, 1997; TROY & FORRETER, 1990; HOSKINS,
1991a; CODNER et al., 1992; VARELA et al, 1997 e ALMOSNY, 1998).
60
Em trabalho conduzido na cidade de Salvador e regio metropolitana,
Bahia/BR, avaliando 75 ces clinicamente suspeitos, no foram observadas
alteraes nos animais positivos pela PCR, diferentemente dos relatos na literatura,
que
enfatizam
presena
de
hiperproteinemia
em
funo
de
uma
hipergamaglobulinemia, alterao comum na fase subclnica da ehrlichiose, quando

a titulao se encontra elevada (MENESES et al., 2008). Em estudo com infeco
experimental a protena plasmtica total (PPT) diminuiu significativamente na
terceira semana (CASTRO et al., 2004). No entanto, no experimento de Unver e
colaboradores (2009), o valor das protenas do plasma foi de 5,0 g / dL, prximo ao
mnimo normal. Segundo Little (2010) na ehrlichiose canina podem ser achados
hiperglobulinemia, hipoalbuminemia, e aumento de alanina amino transferase (ALT).
Na anaplasmose canina pode ocorrer hipoalbuminemia (HARRUS et al.,
1997a; KAKOMA et al., 2000). H uma hipoalbuminemia e hipocalcemia que
acontecem em resposta inflamao e resposta imune ao microorganismo (BAKER
et al., 1988, LITTLE, 2010). Hipergamaglobulinemia tambm relatada com
elevaes dos valores de IgM e IgA (HIBLER et al., 1986; ALMOSNY e MASSARD,
2002; LITTLE, 2010).
Oliveira e colaboradores (2008) analisaram alteraes bioqumicas em ces
de populao hospitalar, positivos para hemoparasitas em diagnstico morfolgico, e
verificaram que aumento de atividade srica de fosfatase alcalina (FA) e de ALT
foram as alteraes mais frequentes naqueles positivos para Ehrlichia sp. enquanto
que, para positivos para A. platys aumento de ALT e protenas, com aumento de
globulinas, foram mais frequentes.
2.6 DIAGNSTICO
A erlichiose canina (EMC) uma doena potencialmente fatal e o diagnstico
no pode ser feito baseado em sinais clnicos ou resultados sorolgicos sozinhos
(VINASCO et al., 2007).
As ehrlichioses apresentam dificuldades para o diagnstico, pois os vrios
sinais clnicos da doena so muito inespecficos. (WOODY e HOSKINS, 1991). O
diagnstico clnico difcil, pois muitas outras doenas apresentam os mesmos
sinais e sintomas que podem estar acometendo os ces infectados por E. canis de
forma isolada, ou em co-infeco (NEITZ e THOMAS, 1938).
61
Harrus e Waner (2011) sumarizaram, em reviso sobre o diagnstico da
ehrlichiose canina, que este deve ser feito de acordo com a fase da doena ou suas
manifestaes clnicas, alm de histrico de viver ou ter viajado por regies
endmicas ou ter sido exposto a carrapato. Alm disso, destacam a importncia de
se associar alteraes hematolgicas e clnicas com caractersticas da doena.
Mostraram que a hematologia, sorologia, citologia e isolamento so ferramentas
diagnsticas valiosas, mas que tcnicas moleculares so necessrias para o
diagnstico definitivo. Similarmente, Little (2010) descreveu que os diagnsticos da
ehrlichiose e da anaplasmose caninas geralmente comeam com a avaliao clnica,
onde o doente se apresenta febril, com mialgia, histrico de contato com carrapatos
e
hemograma
completo
com
trombocitopenia
outras
anormalidades
caractersticas, podem aumentar a suspeita. afirmou, ainda, que a confirmao

laboratorial do diagnstico pode ser feito por sorologia ou pesquisa do DNA pela
Reao em Cadeia da Polimerase (PCR), embora outros mtodos, como os exames
de
esfregaos sanguneos corados para
pesquisar
mrulas,
possam ser
compensadores para alguns agentes, durante a infeco aguda. Conclui que, para
maximizar a probabilidade de se chegar a um diagnstico, PCR e testes sorolgicos
devem ser realizados em conjunto com um exame cuidadoso de esfregaos
sanguneos em qualquer paciente, na qual ehrlichiose ou anaplasmose seja a
suspeita.
O autor complementa, ainda, que o cultivo celular um auxlio
metodolgico diagnstico dos laboratrios de pesquisa especializada.

Portanto, o diagnstico laboratorial da infeco muito importante e alm de
ser feito diretamente pela visualizao de mrulas, tambm pode ser feito atravs da
amplificao de uma poro do genoma do parasito atravs da PCR, ou
indiretamente pela deteco de anticorpos. (BREITSCHWERDT, 2000).
2.6.1 Pesquisa microscpica direta

A observao morfolgica de hemoparasitos nas formas de mrulas ou de
corpsculos elementares isolados, nos preparados corados por mtodos de
Romanowsky vem sendo usada para diagnosticar hemoparasitoses, entretanto,
somente um pequeno nmero de animais infectados apresentam parasitos
circulantes. O achado em sangue perifrico ocorre somente na fase aguda e requer
muito tempo e pacincia do profissional que estiver avaliando o esfregao
62
sanguneo, e por isso apresenta baixa sensibilidade e frequentes falsos negativos.
(RIKIHISA, 1991; NEER, 1998).
Estudo experimental mostrou que mrulas intracitoplasmticas de E. canis
foram detectados em moncitos dos esfregaos de sangue em todos os animais
infectados aos 12 dias aps a infeco (CASTRO et al., 2004).
Apenas 4% dos casos so diagnosticados com um gasto mdio de tempo de 40
a 60 minutos, dependendo da experincia do patologista (HARRUS e WANER,
2011). Um dos mtodos muito utilizados na rotina clnico-laboratorial o do
esfregao de concentrado leucocitrio (BULLA et al., 2004). A otimizao aumenta
em torno de 66% observando-se vrios esfregaos de concentrado leucocitrio e,
em aproximadamente 34%, se for esfregao de medula ssea. (HARRUS e WANER,
2011).
A probabilidade de obterem-se resultados positivos aumenta quando esse
preparado um esfregao de sangue capilar, feito com a primeira gota liberada aps
inciso drmica superficial (OLSEN et al., 1994). Segundo MILONAKIS et al. (2003),
o uso do diagnstico citolgico, atravs da anlise da capa leucocitria e linfonodos,
pode levar a um diagnstico definitivo na fase aguda da doena e, em ces com
linfadenopatia perifrica, a sensibilidade relativamente alta, sendo que as mrulas
de E. canis, que devem ser diferenciadas das outras estruturas intra-citoplasmticas,
so mais encontradas dentro de linfcitos do que moncitos.Tambm Jain (1993)
descreve que esses organismos so achados como incluses primariamente em
moncitos e linfcitos. Portanto, um dos obstculos do diagnstico microscpico
saber diferenciar as estruturas observadas de outros possveis parasitos,
precipitados de corantes e artefatos sobre os leuccitos (NEITZ e THOMAS, 1938).
Resultados falsamente positivos no diagnstico de mrulas no esfregao sanguneo
podem ocorrer com plaquetas, linfcitos com grnulos azurfilos, material nuclear
fagocitado, alm de outros anaplasmataceos (E. chaffeensis, N. riisticii, E.
ruminantium), que tambm esto em moncitos da, a importncia de se saber a
ocorrncia geogrfica dessas espcies e seus vetores, para indicar a necessidade
de PCR (Reao em Cadeia da Polimerase) para diferenci-las (HARRUS e
WANER, 2011). O mesmo pode ocorrer no diagnstico de A platys, onde a pesquisa
do DNA, mostrou maior sensibilidade e especificidade do que a pesquisa
morfolgica intraplaquetria em esfregao sanguneo (FERREIRA et al., 2007). A
63
anlise do esfregao tambm importante para avaliar a ocorrncia de co-infeco
com outros patgenos transmitidos por carrapatos e ainda, alteraes celulares
como moncitos ativados, eritrofagocitose, trombofagocitose, fagocitose de material
nuclear e megaloplaquetas (HARRUS e WANER, 2011).
2.6.2 Testes sorolgicos

Mtodos sorolgicos so, h muito tempo, os principais apoios no diagnstico
de ehrlichioses e anaplasmoses, e ainda permanecem teis na avaliao de
pacientes para esclarecer evidncias de infeces com esses agentes (LITTLE,
2010). RIKIHISA (1991) afirmou que todos os agentes do gnero Ehrlichia induzem
uma resposta humoral intensa e esta a base para o diagnstico sorolgico.
Imunoglobulinas M (IgM) no so consideradas indicadoras fidedignas de
exposio a E. canis devido a inconsistncia do desenvolvimento de anticorpos
dessa classe durante o curso da doena. No entanto, ttulos de IgG maiores ou igual
a 40 so considerados positivos (HARRUS e WANER, 2011).
A tcnica sorolgica mais utilizada para o diagnstico da E. canis a
imunofluorescncia indireta (IFA), onde os anticorpos do tipo IgG so detectados e
indica exposio a bactria (RISTIC et al., 1972). uma ferramenta valiosa para o
diagnstico e triagem, sendo que a IFA considerada padro ouro sorolgico,
indicando exposio a E. canis (HARRUS e WANER, 2011). No entanto, um ttulo
positivo para anticorpos contra E. canis indica apenas que o animal foi exposto ao
agente, podendo no apresentar infeco, por isso deve-se associar a outros
resultados e aos sinais clnicos do paciente. (RIKIHISA, 1991; WOODY e HOSKINS,
1991; HARRUS et al., 1998b; WANER et al., 2001).
Segundo Preziosi e Cohn (2002) em rea endmica, o resultado sorolgico
positivo, no confirma que a doena exista e sim que o animal foi exposto e pode
estar curado ou no . Alm desses problemas, ocorrem tambm reaes cruzadas
que, no caso dos testes sorolgicos para E. canis, tambm so detectados
anticorpos para E. ewingii, E. chaffeensis, Neorickettsia helminthoeca e Ehrlichia
(Cowdria) ruminantium (NEER et al., 2002) e ainda N. risticii. Por causa dessa
complicao com reaes cruzadas, para o diagnstico sorolgico tambm deve ser
considerarado a ocorrncia geogrfica das espcies ou viagem do paciente rea
endmica de alguma delas e ainda, que a IFA no pode diferenciar entre E. canis, E.
64
ewingii, E. chaffeensis, e Ehrlichia (Cowdria) ruminantium. No existe reao
cruzada entre E. canis e A. platys e pouca ou nenhuma entre E. canis e R. rickettsii
(HARRUS e WANER, 2011).
As tcnicas de IFA para E. canis e A. phagocytophilum
so amplamente
disponveis no diagnstico laboratorial e, reaes cruzadas entre espcies dentro

desses gneros e, at certo ponto entre essas duas espcies, comumente ocorrem,
embora infeces com agentes relacionados possam gerar ttulos de anticorpos
menores do que com o agente isolado (LITTLE, 2010). Reao cruzada entre
anticorpos para E. canis com antgenos de A. phagocytophilum foram bem descritos
por Waner e colaboradores em 1998, onde, em infeco experimental de seis ces,
na fase aguda no houve reao cruzada, mas 55 dias aps infeco (DAI) ocorreu
em dois animais, aps mais 22 dias em outros dois e, no 150 DAI nos ltimos dois
ces, atingindo 100% de ocorrncia no experimento.
Na infeco aguda so recomendados dois testes consecutivos de IFA para
diagnstico e o aumento no ttulo de anticorpos em torno de 2 a 4 vezes, indica
infeco ativa. Anticorpos do tipo IgG, persistem por vrios meses a anos aps
tratamento e eliminao da rickettsia (HARRUS e WANER, 2011). Na fase crnica,
terminal da doena, os ces podem apresentar diminuio acentuada no ttulo de
anticorpos para E. canis, talvez por causa da resposta imunolgica reduzida,
aparentemente causada pela pancitopenia tpica da fase final da doena. (RISTIC et
al., 1972; HARRUS et al., 1996).
Na anaplasmose canina esse teste utilizado para deteco de anticorpos no
soro e muito usado quando a parasitemia ausente ou muito baixa (FRENCH e
HARVEY, 1983; ARRAGA-ALVARADO et al., 2003) ou na avaliao ps-tratamento
(WEN et al., 1997). No h reao cruzada entre A. platys e E. canis e, embora a
imunofluorescncia indireta seja altamente especfica (FRENCH e HARVEY, 1983;
WANER et al., 2001), no pode ser descartada a possibilidade de uma co-infeco.
Deve-se, ainda, levar em considerao que a presena de anticorpos contra A.
platys no significa infeco clnica e sim exposio ao agente (RIKIHISA, 1991;
WOODY e HOSKINS 1991; WANER et al., 2001; HARRUS e WANER, 2011),
semelhantemente s outras infeces.
A soroconverso (ttulos acima de 100) ocorre em ces experimentalmente
infectados no pico da primeira parasitemia, em torno do dcimo terceiro ao dcimo
65
nono dia ps-inoculao. Os ttulos persistem durante quatro meses (FRENCH e
HARVEY, 1983).
Em 2000 Moody e Chiodini em uma reviso dos mtodos para deteco de
parasitos sanguneos em humanos no Reino Unido, apesar do pouco destaque a
erlichiose (EGH e EMH), indicaram a IFA como mtodo preferencial para seu
diagnstico. Da mesma forma, Dumler e Walker em 2001, afirmaram que, testes
sorolgicos eram mtodos mais sensveis para o diagnstico da erlichiose
granuloctica em humanos, apesar de terem afirmado que at 67% dos pacientes
poderiam apresentar PCR positiva na fase aguda. No entanto, para a erlichiose
monoctica humana esses autores afirmaram que a minoria dos pacientes (em torno
de 29%) desenvolvia anticorpos detectveis por IFA mesmo assim, concluram que o
diagnstico geralmente era confirmado por um aumento de quatro vezes ou mais na
IFA que precisava ser repetida de duas a trs semanas. No entanto, com o
conhecimento de que E. canis tambm pode infectar seres humanos (PEREZ et al.,
1996) maior importncia tem sido dada a mtodos mais especficos e, isso
particularmente importante, porque o homem se desloca pelo mundo todo podendo
aumentar a disperso desse tipo de infeco.
provvel que testes sorolgicos no consigam detectar a existncia de vrias
espcies de Ehrlichia em casos de co-infeco e, por isso, a determinao do DNA
bacteriano importante, no s pelo tratamento que pode ter especificidade como
tambm pelo potencial zoontico (BREITSCHWERDT et al., 1998)
Alm da IFA, mtodos imunolgicos associados a enzimas (ELISA) tm sido
desenvolvidos e considerados teis no diagnstico dessas doenas. Kits DotELISA para deteco de IgG para E. canis so disponveis comercialmente e so
considerados como testes de ponto para o tratamento (point-of-care tests)
(HARRUS e WANER, 2011).
Em comparao ao IFA, trs diferentes testes ELISA mostraram concordncia
qualitativa, ou seja, resultado positivo ou negativo, em 74,6% (50 de 67 amostras).
Dezesseis das 17 amostras em desacordo (com resultados falso negativos), tinham
ttulos na IFA menores ou igual a 1: 320. A especificidade de dois deles foi
considerada alta e foi concludo que o dot-ELISA era especfico e sensvel para
ttulos maiores ou iguais a 320. Portanto, foi recomendado repeti-lo duas a trs
semanas aps o primeiro resultado positivo (HARRUS et al., 2002). Um dos testes
66
ELISA comercial, o SNAP3Dx da IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA, foi
recomendado para ser usado como teste de triagem anual de relevncia clnica mas
no foi considerado adequado para ser interpretado com relevncia clnica sozinho e
sim associado aos resultados de plaquetometria e de anlise molecular (HEGARTY
et al., 2009). Esses mtodos de point-of-care como os SNAPs 3Dx/4Dx da IDEXX
Laboratories desenvolvidos para detectar anticorpos para peptdeos especficos da
E. canis e A. phagocytophilum so muito utilizados. Esse teste para E. canis detecta
anticorpos gerados contra algumas cepas de E. chaffeensis e o de A.
phagocytophilum reage com anticorpos gerados contra A. platys. Embora
desenvolvidos para uso em ces, no so espcie especficos. Os testes podem ser
usados para identificar anticorpos para Ehrlichia spp, Anaplasma spp e Borrelia
burgdorferi em outras espcies, como gatos e cavalos (LITTLE, 2010).
Em trabalho, cujo objetivo foi a comparao de dois imunoensaios enzimticos,
um de base clnica (imunoenzimtico IMUNOCOMB ELISA) e outro de campo
(ELISA DBELIA) com o teste de imunofluorescncia direta (IFAT), para o
diagnstico da ehrlichiose monoctica canina, foram utilizadas 60 amostras de soro
de ces, sendo 52 de infeces naturais e 8 experimentais, de cepa de E. canis
cultivada em clulas DH82. Um dos ELISA foi positivo em 56 ces (86,7%) e
negativo em 13,3% e o outro detectou 91,7% de positividade enquanto o IFAT
detectou 90%. Os autores concluiram que apesar da correlao positiva entre os trs
testes e de no ter havido diferena estatstica significativa
entre eles, os ELISA
foram mais sensveis e especficos para o diagnstico da ehrlichiose monoctica

canina, sendo que o
IMUNOCOMB-ELISA seria mais sensvel e especfico
enquanto o DBELLA indicado por economizar tempo, no requerer equipamento e

pessoal especiais e ter maior prazo de validade, mostrando que na rotina clnica
diria, isso deve ser considerado (OKEWOLE e ADEJINMI, 2009).
Outra tcnica sorolgica mais especfica o Western Immunoblot que capaz
de caracterizar o agente infeccioso por dar as impresses digitais de seus perfis de
protenas imunognicas. Normalmente se busca um padro homogneo entre
diferentes linhagens de E. canis, embora se suponha existir diversidade antignica
entre diferentes amostras, em vrias regies do mundo. Essa tcnica tem sido usada
para caracterizar e distinguir infeces entre diferentes microrganismos causadores
70
67
de ehrlichioses e anaplasmoses ou ainda neorickettsioses, alm de esclarecer
problemas de reaes cruzadas (HARRUS e WANER, 2011).
No entanto, estudo conduzido nos EUA em 1998, a partir de avaliao
sequencial de ces naturalmente infectados por vrias espcies de Ehrlichia e
Bartonella vinsonii, mostrou que teste sorolgico por ensaio de IFA no era capaz de
distinguir, consistentemente, entre a infeco com E. canis e daquela com E.
chaffeensis. Da mesma forma, quando o antgeno E. canis foi utilizado, a anlise por
Western Imunoblot de soros dos ces, no resultou no reconhecimento de protenas
antignicas que facilitariam diagnsticos diferenciais das espcies infectantes. Pelo
fato de que, naquela poca E. ewingii no havia sido cultivada em sistema de cultivo
in vitro, o antgeno deste organismo no estava disponvel para testes sorolgicos
comparativos. Apesar da co-infeco no ter sido examinada naquele estudo, j era
descrito que a provvel co-infeco, com mais de uma espcie de Ehrlichia limitava
ainda mais a utilidade do teste sorolgico para a diferenciao das espcies de
Ehrlichia infectantes. Os autores ainda relataram que tinham observado numerosos
exemplos de co-infeco com E. canis, E. chaffeensis, e / ou E. ewingii em um canil
de ces altamente infestados por carrapatos cujos dados no haviam sido
publicados. Como IFA ou Western-immunoblot no pareciam diferenciar facilmente
padres de soropositividade entre antgenos de E. canis de outras espcies
infectantes, a deteco molecular e especificao do DNA erlichial se faziam
necessrias para determinar se as diferenas previsveis nos resultados teraputicos
poderiam estar mais correlacionadas com uma espcie de Ehrlichia infectante (ou
atualmente incluindo Anaplasma). Vrios fatores, incluindo a previso da durao da
infeco, respostas teraputicas (especialmente aos derivados de tetraciclina) e o
potencial zoontico, enfatizaram a importncia de se determinar quais espcies de
Ehrlichia (ou atualmente incluindo Anaplasma) estavam causando a infeco e se
havia reatividade de anticorpos para antgeno de E. canis (BREITSCHWERDT et al.,
1998).
A fisiopatogenia da doena, reaes cruzadas com outras espcies do gnero
Ehrlichia, co-infeces transmitidas por carrapatos e ttulos de anticorpos
persistentes nos testes sorolgicos aps o tratamento, devem ser consideradas
quando se interpreta o resultado de um teste sorolgico. Por isso importante na
71
68
identificao do agente etiolgico, o uso de outros mtodos, principalmente os
moleculares (WANER et al., 2001).
2.6.3 Isolamento microbiano
O isolamento do agente a partir de cultura de clulas (NYINDO et al., 1971)
tambm pode ser realizado para diagnstico, com o parasito podendo ser isolado do
sangue de ces infectados experimentalmente, a partir de amostras sanguneas dois
dias aps a infeco. Entretanto, o procedimento de cultivo microbiano em clulas
pouco prtico para uso em laboratrios clnicos, pois o objetivo final o diagnstico
da doena e este pode demorar de 14 a 34 dias para ser obtido. Alm disso, a
estrutura fsica para a manuteno da cultura de clulas, eleva os custos do seu uso
na rotina clnico laboratorial (IQBAL e RIKIHISA 1994a). Assim, este um
procedimento mais utilizado como uma ferramenta de pesquisa. (NEER et al., 2002;
LITLLE, 2010; HARRUS e WANER, 2011), embora venha sendo utilizado como base
para o desenvolvimento de mtodos mais rpidos e simples, principalmente no
diagnstico da E. canis (TORRES et al. 2002; HARRUS e WANER, 2011).
Macrfagos caninos, derivados de histiocitose maligna, denominada DH82 so
as clulas mais utilizadas para o crescimento desse microrganismo (HARRUS e
WANER,
2011).
Outras
linhagens
celulares
tm
sido
utilizadas
para
desenvolvimento de culturas celulares para Ehrlichia, como macrfagos peritoneais

caninos (STEPHENSON e OSTERMAN, 1977, apud KEYSARY et al., 2001), clulas
hibridas humanas com caninas (STEPHENSON e OSTERMAN, 1980, apud
KEYSARY et al., 2001), endoteliais humanas (DAWSON et al., 1993) e uma
linhagem celular contnua de macrfago de rato (KEYSARY et al., 2001).
2.6.4 Reao em Cadeia da Polimerase (PCR)
Em pacientes com ricketsemia o diagnsticio pode ser realizado atravs da
Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) e, o resultado positivo confirma a evidncia
da infeco (LITTLE, 2010). Segundo Iqbal e colaboradores (1994) e Iqbal e Rikihisa
(1994b) , a PCR eficaz na deteco de nveis baixos de parasitemia em tecidos de
ces. A PCR e o sequenciamento so mtodos sensveis para deteco e
caracterizao de DNA de E. canis. No entanto, falso positivo pode ocorrer com
baixas temperaturas de anelamento, quando h contaminantes ou quando ocorre
69
amplificao inespecfica. A PCR negativa indica que o DNA no foi detectado, mas
no prova que no esteja presente (HARRUS e WANNER, 2011).
Vrios protocolos existem para E. canis e so baseados em diferentes alvos do
genoma, como 16S RNAr, p28, p30, dsb, virB9, mas o 16S RNAr e o p30 so os
mais comumente usados (HARRUS e WANNER, 2011). Para A platys tambm so
usados gltA (AGUIRRE, et al., 2006), groESL (ABARCA et al., 2007; BEALL et
al.,2008) alm do 16S rRNA (AGUIRRE, et al., 2006; ABARCA et al., 2007; BEALL
et al.,2008). Logo, para a realizao da PCR, sequncias iniciadoras ou primers
devem ser desenhadas para que amplifiquem qualquer espcie do gnero Ehrlichia
cuja poro codificadora da unidade 16S do RNA ribossomal, j tenha sido
sequenciada (NEER et al., 2002), no entanto, a maioria dos estudos mostrou que
primers a partir do 16S rRNA precisam ser capazes de detectar no somente vrias
espcies do gnero Ehrlichia (DAWSON et al., 1994) como tambm da famlia
Anaplasmataceae (INOKUMA, et al., 2000; UNVER et al., 2003, MARTIN et al.,
2005). Segundo Little (2010), como em qualquer mtodo de diagnstico, tambm
necessria validao externa e, a sensibilidade nem sempre a mesma observada
em controles clonados em plasmdeos quando comparados a amostras clnicas.
Alm disso, amplificaes cruzadas inesperadas podem ocorrer, como por exemplo,
com primers baseados na sequencia do 16S RNAr para Ehrlichia sp. e Anaplasma
sp. (famlia Anaplasmataceae) que nesses casos, tambm amplifica DNA de
Wolbachia e podem ter resultados positivos em ces microfilarmicos. Esses no
seriam identificados sem o sequenciamento. No entanto, o autor reforou que
ensaios de PCR melhoraram muito a capacidade para identificar infeces por
Ehrlichia sp e Anaplasma sp. INOKUMA e colaboradores em 2003 tambm
afirmaram que o sequenciamento parcial do gene 16S rRNA no pode ser suficiente
para identificar o agente at o nvel de espcie, mas que comparado a registros no
GenBank pode auxiliar indentificao de espcie intimamente correlacionada.
2.6.4.1 O estudo do DNA e diversidade gentica

O estudo do DNA tem auxiliado no somente o diagnstico como tambm o
estudo da diversidade gentica das espcies. A anlise do gene 16S rRNA de E.
canis e A. platys tem mostrado, em vrios estudos, a baixa diversidade de cepas
dessas espcies no mundo todo (UNVER et al., 2001, AGUIRRE et al., 2006;;
70
SIARKOU et al., 2007; VINASCO et al., 2007; PINYOOWONG et al., 2008) ainda
que a caracterizao gentica de alguns desses estudos defina existncia de cepas
diferentes para essas espcies, como no Japo (INOKUMA et al., 2000; INOKUMA
et al., 2001), na Amrica do Sul (UNVER et al., 2001; VINASCO et al., 2007), Grcia
(SIARKOU, et al., 2007),Tailndia (PINYOOWONG et al., 2008), Brasil (DINIZ et al.,
2007; CARDOZO et al.,2007; CARDOZO et al., 2009; OLIVEIRA, et al., 2009a) e
outras regies. Estudos com outros genes tambm tem contribuido para mostrar a
variedade dentro dessas espcies, caracterizando quatro novos genotipos para E.
canis (HSIEH, et al., 2010) e variedade gentica em cepas diferentes para A. platys
baseados no gene groESL (ABARCA et al., 2007) e no gene gltA (AGUIRRE et al.,
2006). Em 2008, um estudo que objetivava avaliar a diversidade gentica e
antignica das principais protenas imunorreativas (gp19, gp36, gp140 e gp200) de
algumas cepas de E. canis distribuidas pelo mundo, como dos EUA, Brasil e Israel,
tambm confirmou pouca variabilidade, mas detectou diferenas genticas
significativas, embora no tenham sido avaliadas quanto a associao com
diferenas em manifestaes clnicas, como severidade ou no da doena (ZHANG
et al., 2008).
Apesar da pouca variabilidade gentica relatada, outros estudos so sugeridos
para avaliar a real uniformidade dessas cepas em relao a importncia da
influncia da diversidade de hospedeiros vertebrados e invertebrados, capazes de
influenciar na biologia dessas bactrias (PINYOOWONG et al., 2008) alm de
estudos que mostrem a associao com outros fatores que possam interferir nas
manifestaes clnicas da infeco (SIARKOU et al., 2007).
2.6.4.2 Deteco cruzada e anlise diferencial na PCR

A anlise do gene 16S rRNA de E. canis, A. platys e Wolbachia isolados de
sangues de ces do Japo confirmou a baixa diversidade entre cepas de E. canis e
A. platys de vrias regies geogrficas diferentes e essa pesquisa tambm permitiu
caracterizar pela primeira vez Wolbachia, bactria endosimbionte de insetos,
aracndeos, crustceos e nematdeos, em sangue de co em que a microfilaremia
no foi confirmada. Pesquisadores sugeriram envolvimento dessa bactria em
sindromes febris em ces (UNVER et al., 2003). Apesar de Wolbachia no ser to
conhecido por infectar clulas de vertebrados, ela pode ser encontrada na corrente
71
sangunea de vertebrados quando liberadas de vermes filardeos infestando esses
animais (RIKIHISA, 2003). Wolbachia importante para a biologia de hospedeiro
filarideo, sendo envolvido na imunopatognese de infeces de mamferos por
filardeos e os efeitos colaterais de terapia adulticida (SIMONCINI et al., 2001 apud
ROSSI et al., 2010). Em estudo para deteco do DNA de Wolbachia em sangues
de ces infectados pelo filardeo Dirofilaria immitis, a PCR foi desenvolvida a partir
de gene que no o 16S rRNA, a fim de que no houvesse amplificao de outros
membros
da
famlia
Anaplasmataceae.
Com esses
primers
os
autores
conseguiram uma sensibilidade de reao para um limite de 80pg de DNA dessa

bactria. Nesse estudo, em ces com microfilaremia, a menor concentrao
observada foi de 150 microfilrias por mililitro de sangue e o DNA de Wolbachia foi
detectado nesses animais com primers no associado ao 16S rRNA (ROSSI et al.,
2010).
A pesquisa do DNA atravs de PCR usando primers baseados nesse gene,
permite a deteco de vrias espcies da famlia Anaplasmataceae, inclusive
Wolbachia e tem sido usados em pesquisas em diferentes materiais biolgicos,
como sangue de animais, humanos e invertebrados (DAWSON, et al., 1994;
INOKUMA et al., 2000; UNVER et al., 2001; HARTELT, et al., 2004, MARTIN et al.,
2005). Em pesquisa para deteco de Anaplasma phagocytophilum (Ehrlichia sp.),
Wolbachia sp., Rickettsia sp. e Babesia sp. em carrapatos, Hartelt e colaboradores
(2004) usaram primers baseados no gene 16S rRNA (ECC e ECB) para deteco de
A. phagocytophilum e depois associaram os positivos a uma tcnica com sondas
espcies especficas, verificando que um pouco menos da metade desses positivos
no eram A. phagocytophilum e sim Wolbachia.
Em diagnstico laboratorial por PCR em ces na Venezuela, Hancock et al.
(2001) usaram primers baseados na sequncia de DNA do 16S rRNA bacteriano,
considerados especficos para E. equi (A. phagocytophilum) e encontraram falso
positivo para esta bactria e, atravs da realizao de clonagem e criao de novos
primers, concluram tratar-se de infeco por A. platys e ainda, que a semelhana
entre essas espcies poderia interferir no diagnstico molecular, principalmente pela
concentrao do nmero de organismos na amostra clnica sangunea. De forma
semelhante, em estudo sobre a coinfeco com trs espcies de Ehrlichia em ces
da Tailndia e Venezuela, com nfase sobre a considerao da estrutura secundria
72
do gene 16S rRNA, os autores identificaram problemas com primers para gerar
sequncia parcial desse gene de E. equi (A. phagocytophilum) em amostras com
elevada concentrao de DNA de E. platys (A. platys). Afirmaram eles que, se a
concentrao de E. platys (A. platys) for baixa ou, se a amostra s tiver E. equi (A.
phagocytophilum), os primers preconizados, baseados no 16S rRNA, detectam esta
bactria. No entanto, essas concluses foram publicadas em correes dos autores,
mais de um ano aps a publicao original, e os levaram a concluir que a evidncia
molecular de E. equi (A. phagocytophilum) em ces nesses pases no havia sido
confirmada no estudo, como publicado originalmente (SUKSAWAT, et al., 2001b,
correo dos autores 2002). Da mesma forma, em 2006, estudo da caracterizao
molecular de A. platys na Espanha foi realizado com sequenciamento de fragmento
de DNA do gene glt A, alm do 16S rRNA, de modo certificar diferena na
amplificao para A. phagocytophilum ( AGUIRRE et al., 2006).
Hechemy et al., (2006), indicaram que a PCR (RT-PCR) foi til para
diagnosticar rapidamente infeces humanas simples ou em co-infeces atravs de
multiplex para patgenos dos gneros Ehrlichia/Anaplasma.
2.6.4.3 Sensibilidade diagnstica

O resultado positivo da PCR costuma ser obtido a partir do 4 ao 10 dia psinfeco (DAI) (IQBAL et al., 1994; NEER et al., 2002) confirmados em experimento
de Gaunt e colaboradores (2010), onde 3 a 5 DAI com A. platys j detectaram DNA
e, no caso de E. canis de 7 a 14 DAI. Tambm em infeco experimental foi
observado DNA em sangue e bao de ces a partir do 7 DAI alm da PCR ter sido
utilizada em estudos de quantificao do DNA extrado de vrios tecidos e em
comparao com infeces naturais (BANETH et al., 2009). E, segundo Harrus et
al., (1998a) o DNA ehrlichial pode ser detectado ainda aps 34 meses da infeco. E
Iqbal e Rikihisa (1994a) mostraram ser possvel reisolamento de E. canis mesmo
aps tratamento com doxiciclina.
A pesquisa por PCR com amostras esplnicas mais sensvel para avaliar a
eliminao da bactria, quando comparada ao sangue ou medula ssea. No soro
pode ser feito quando no se tem o sangue, mas estima-se eficincia menor que
63,1% (HARRUS e WANER, 2011). Em 2009, BANETH e colaboradores sugeriram a
extrao de DNA a partir de swab conjuntival como mtodo adicional, pois
73
acompanharam a quantidade de DNA em diferentes intervalos de tempo aps
infeco experimental, comparada com alguns animais infectados naturalmente.
Apesar de a conjuntivite ser um sinal clnico comum e do teste ter sido menos
sensvel que no sangue e bao, e ainda, o DNA ter sido detectado mais tardiamente
aps a infeco, os autores sugerem esse material para obteno de DNA para PCR
por ser menos invasivo. Destacaram, entretanto, que nos animais infectados
naturalmente a quantidade de DNA no sangue deve ser bem alta para que o teste
seja positivo nas duas conjuntivas.
O real time PCR (PCR em tempo real) mais sensvel e menos suscetvel a
contaminao e, quando esta ocorre, mais fcil de ser detectada do que na PCR
convencional, devido ao sistema fechado da reao e quantificao de amplificao
positiva. O desenvolvimento de mtodos de deteco simultnea de vrios
anaplasmataceos (reao multiplex para E. canis, E. chaffeensis, E. ewingii, e A.
phagocytophilum) pode diminuir a sensibilidade. Alm dessas, uma nova tcnica de
real time PCR de alta resoluo (High resolution Melt ou HRM real time PCR)
usada para genotipagem e capaz de detectar polimorfismo em um nico
nucleotdeo (HARRUS e WANER, 2011).
Como todos os outros mtodos diagnsticos, a PCR tambm possu suas
limitaes, como um controle de qualidade efetivo e o fato de no existir um padro
das sequncias iniciadoras utilizadas que dificultam a comparao de resultados
entre os laboratrios (KAKOMA et al., 2000; NEER et al., 2002)
No entanto, todas as tcnicas de PCR tm vrias vantagens sobre a sorologia:
deteco precoce do DNA, antes da soroconverso; maior sensibilidade e deteco
do DNA, ao invs do anticorpo. Isso provavelmente indica infeco ativa e no
apenas exposio ao microrganismo. Essa ltima caracterstica pode permitir melhor
monitoramento do tratamento pelos clnicos (HARRUS e WANER, 2011).
Tambm, segundo NEER et al. (2002), o resultado positivo da PCR indica infeco,
ao contrrio do mesmo resultado em testes sorolgicos, que indica exposio prvia.
Entretanto, segundo os autores, a PCR deve ser utilizada em conjunto com o
mtodo de imunofluorescncia indireta para o diagnstico inicial da doena em
animais no tratados. De acordo com Breitschwerdt et al. (1998), o diagnstico da
ehrlichiose canina atravs da deteco do DNA est ganhando aceitao como um
importante adjuvante aos testes sorolgicos.
74
Segundo IQBAL et al., 1994, pelo fato dos iniciadores ou primers poderem ser
usados para amplificar diretamente uma poro do DNA alvo, e, comparado com
outras tcnicas de diagnstico, ter se mostrado amplamente vantajoso para o
diagnstico da infeco causada por E. canis, concluram que a PCR um teste
altamente sensvel e especfico para a deteco de nveis muito baixos de E. canis.
Ademais, os resultados obtidos a partir da PCR de tecidos, inclusive o sangue
(IQBAL e RIKIHISA, 1994a), foram consistentes com os achados em isolados de
culturas celulares, o que comprovou a sensibilidade e especificidade do mtodo. A
PCR requer menos tempo, sendo menos dispendiosa quando comparada com o
mtodo de cultura de clulas, que alm de tudo, pode requerer at 60 dias para a
obteno de um resultado.
De acordo com McBride e colaboradores (1996), a PCR pode ser uma
alternativa rpida aos outros mtodos de diagnstico existentes. Isto porque os
problemas
apresentados
nos
mtodos
convencionais,
como
sensibilidade
inadequada e dificuldade com o diagnstico diferencial, so superadas pela

tecnologia da PCR. Somado a isso, a extrao de cido nuclico a partir do sangue
total mais rpida e menos laboriosa do que o isolamento de leuccitos antes da
extrao. Ainda segundo esses autores, esse mtodo pode ser mais vantajoso em
atividades de pesquisa e diagnstico clnico.
2.6.4.4 Anlise comparativa entre mtodos diagnsticos

Vrios trabalhos tm mostrado que existem diferenas na deteco de
ehrlichiose de acordo com a amostra populacional, usando animais suspeitos ou
aleatoriamente selecionados e tambm pela metodologia usada no diagnostico.
Analisando 75 ces suspeitos em Salvador/BA, a PCR foi mais sensvel no
diagnstico de do que a pesquisa direta em esfregao. No entanto, anticorpos antiEhrlichia canis foram encontrados em 98,66% (74/75) dos animais. A PCR foi
positiva em 33,3% (25/75) dos ces, enquanto a presena de mrulas foi positiva em
5,33% (4/75) dos suspeitos (MENESES et al., 2008).
Em outro estudo (FARIA et al., 2010), com populao de 40 animais suspeitos
de hemoparasitoses, em Jaboticabal/SP, foram utilizados diferentes materiais
biolgicos e mtodos diagnsticos. Na sorologia a porcentagem foi a mais elevada,
82,5%.
Alm de sorologia, foram feitas anlises diretas em esfregaos de
75
concentrado leucocitrio (CL) e em esfregaos de aspirado esplnico (AE) com
agulha fina, e ainda, PCR de DNA extrado de sangue total (ST) e do aspirado
esplnico (AE). Nesse estudo, nas nlises morfolgicas diretas, 5,7 % foram
positivas no CL enquanto 48,6% no AE. Na PCR 72,5% positivas no AE e 75% no
ST, diferente do citado por HARRUS e WANER, (2011) que afirmaram haver maior
sensibilidade em amostras esplnicas. Tambm em Jaboticabal/SP (NAKAGHI et al.,
2008), avaliao feita em 30 animais suspeitos apenas um (3,3%) apresentou
mrula em esfregao sanguneo, 21 (70%) soropositivos pelo Dot-ELISA, 19 (63,3%)
soropositivos pelo IFA e 16 (53,3%) positivos na PCR (nested-PCR). Neste trabalho,
os autores discutiram a importncia do teste utilizado estar em acordo com a fase
clnica de maior probabilidade de deteco da doena. Afirmaram que a sorologia
seria mais importante nas fases subclnica e crnica e a PCR na fase aguda, sendo
esta a ferramenta essencial para definir a espcie. Em Botucatu/SP (UENO et al.,
2009), a anlise em 70 ces suspeitos clnicamente de EMC, cinco (7,1%)
apresentaram mrula em esfregao sanguneo, sendo um PCR negativo. A PCR
mostrou que 28 (40%) tinham DNA de Ehrlichia canis. Em Recife/PE (RAMOS et al.,
2009), no nordeste brasileiro, trabalho comparando nested-PCR com diagnstico
morfolgico para detectar E. canis e A. platys em 100 ces, nove apresentaram
mrulas sugestivas de E. canis e 21 sugestivas de A. platys, enquanto a PCR
revelou 57 e 55 positivos, respectivamente para cada bactria.
Em Belo Horizonte/MG (RISTOW et al., 2009), um laboratrio particular utilizou
dois mtodos sorolgicos para deteco de anticorpos anti-Ehrlichia canis e
encontraram uma correlao positiva elevada entre eles. Os autores concluram que
os mtodos sorolgicos ainda so os mais prticos e com melhor relao custobenefcio para o clnico, enquanto os testes moleculares (PCR) so indicados em
casos de controle de tratamento, porque o animal infectado poder ser soro positivo
por um perodo indeterminado aps o tratamento. Esse trabalho cita ainda estudos
de Andereg e Passos (1999), que apontam fatores que contribuem para a variao
nos resultados de IFA, como: contaminao de amostras, a experincia do
profissional que executa a tcnica, a qualidade dos antgenos e o estgio da
parasitemia. Em relao ao Western immunoblotting, esses autores citaram que,
apesar do custo elevado, uma tcnica que mostra sensibilidade semelhante a IFA,
com a vantagem de no estar exposto a influncia de quem a realiza, resultando em
76
leitura muita objetiva, alm de ser capaz de detectar anticorpos anti-Ehrlichia bem
precocimente. No caso do Dot-Blot-ELISA e outros kits comerciais baseados nos
mesmos princpios, alm de ter sensibilidade e especificidade semelhante a IFA, tem
a vantagem de ter execuo rpida e fcil, observando-se o resultado
imediatamente, pela cor indicada.
2.7 TRATAMENTO E PREVENO

Doxiciclina considerado o medicamento de escolha para ehrlichiose e
anaplasmose em ces e tambm tem sido usado com eficincia em gatos. Para o
tratamento da ehrlichiose consenso seu uso na dose de 10mg/kg oralmente a cada
24horas, durante 28 dias. Apesar disso, existem casos de infeco persistente aps
o tratamento, mostrados atravs de xenodiagnstico, PCR em aspirados esplnicos
ou cultura e isolamento. Quando h falha no tratamento ou reincidncia da doena,
deve ser feita nova administrao de antibiticos juntamente com a avaliao para
verificar a presena de doenas concomitantes. Embora menos comum, o imidocarb
tem sido eficiente contra E. canis e, por ser seu uso intramuscular, tem a vantagem
de permanecer ativo no organismo por mais tempo, porm com a necessidade de
pr-medicao com atropina, para diminuir os efeitos adversos da droga. A rifampina
tem sido usada com eficincia em pessoas para eliminar infeco por A.
phagocytophilum e tambm em ces com E. canis. Em pacientes que se apresentam
com doena clnica mais grave ou erlichiose crnica, podem levar mais tempo para
responder ao tratamento. Nestes casos, a terapia adjuvante com um pequeno curso
(7 dias ou menos) de prednisona podem ser usado para estimular a melhoria clnica
no incio do tratamento, abordando a inflamao diretamente. Essa conduta tambm
tem utilidade clnica no incio do tratamento, quando a confirmao laboratorial da
erlichiose est pendente, e a trombocitopenia imunomediada permanece um
diagnstico clnico potencial. Outro aspecto importante o tratamento suporte,
incluindo transfuso, fluidoterapia parenteral e controle de possvel quadro de
glomerulonefrite (LITTLE, 2010).
Na Tailndia, um surto de ehrlichiose canina foi controlado com o uso profiltico
e teraputico de tetraciclina e pelo controle de carrapatos (DAVIDSON et al., 1978).
O uso prolongado de doxiciclina, em um modelo experimental com ratos, tem
mostrado ser eficiente na preveno da transmisso de A. phagocytophilum por
77
picada de carrapatos (HECHEMY et al., 2005). Por isso seu uso tambm tem sido
indicado como administrao profiltica para previnir ehrlichiose canina em casos de
surtos. Ateno rigorosa para controle de carrapatos o nico meio disponvel de
prevenir a infeco com Ehrlichia sp. ou Anaplasma sp. A aplicao mensal de
acaricidas de uso tpico, incluindo imidacloprida /permetrina e fipronil, deve ser
rotina constante, pois mostraram ser eficintes em impedir a infeco com estes
organismos, como evidenciado pela diminuio da soroconverso em ces assim
protegidos, em estudos de transmisso experimental e natural. A rotina deve ser
mais intensa em reas com presso populacional maior, pois os diferentes estgios
de desenvolvimento dos carrapatos, alm de diferentes espcies desses, so hbeis
em transmitir doenas durante o ano todo. Alm disso, animais de companhia
podem viajar, facilitando a transmisso em outros locais. A remoo imediata de
carrapatos, j fixados no animal, com pinas ou dedos enluvados, incluem
recomendaes para prevenir a infeco. O uso de acaricidas no ambiente tambm
indicado para diminuir a probabilidade de infestao, alm de reduzir o acesso dos
animais em locais potencialmente com carrapatos. No entanto, nenhum acaricida
totalmente eficaz e ocorrem casos de infeco em ces que usam profilaticamente
esses produtos (LITTLE, 2010).
Tal como acontece com animais, a infeco transmitida s pessoas atravs
da picada de carrapatos, e no parece que animais aumentem o risco destas
infeces nas pessoas. Os ces teriam, logicamente, maior risco de doenas com
co-infeco transmitidas por carrapatos que os humanos, por causa da maior
probabilidade de serem, simultaneamente, infestados com numerosos carrapatos, e
ainda, de diferentes espcies, tornando os ces potenciais sentinelas para doenas
transmitidas por carrapatos em humanos (KORDICK, et al., 1999).
No entanto, subinoculao de sangue, pode resultar na transmisso de
infeces e, portanto, cuidados devem ser tomados ao manusear sangue ou tecidos
de animais potencialmente infectados, incluindo ces e gatos. As recomendaes
para a preveno da infeco nas pessoas so semelhantes s dos animais de
estimao, com foco no controle do carrapato, e deve incluir esforos para controlar
ectoparasitas nos animais e no ambiente (LITTLE, 2010).
O aparecimento da erlichiose humana na ltima dcada e o risco para sade
pblica tem estimulado o interesse no desenvolvimento de uma vacina para a EMH.
78
O uso dessa vacina para preveno dessa doena pode ser til principalmente para
militares e profissionais de campo que tem maior risco de contrarem a doena.
Outras erlichioses como a peritonite de ruminantes e a monoctica canina, tambm
apresentam grande interesse veterinrio de desenvolver uma vacina para prevenlas. Na dcada de 40, Neitz e Alexander introduziram uma estratgia de infeco e
tratamento em ruminantes, baseada nos casos de animais que sobreviviam
infeco, desenvolvendo imunidade contra a ehrlichia. O mtodo incmodo, pois
requer um sistema de entrega refrigerado (em nitrognio lquido ou gelo seco) que o
torna pouco prtico para fazendeiros e mdicos. Alm disso, alguns animais morrem
devido ao tratamento ou so expostos ao risco de contrarem outras doenas
transmitidas pelo sangue. Tambm no h normatizao e proteo heterloga,
alm de ter custo elevado e ser demorada. Devido a grandes perdas na
agropecuria de alguns pases do terceiro mundo, tem-se focado e testado vacinas
para a peritonite de ruminantes, como vacinas vivas, atenuadas ou mortas, de
cidos nuclicos ou recombinantes. (McBRIDE, 2009). A conservao de
sequncias de nucleotdeos entre amostras de E. canis
de diferentes regies
geogrficas, tem uma implicao positiva para o desenvolvimento de vacinas

(HECHEMY et al., 2005).
O desenvolvimento de vacinas recombinantes de cidos nuclicos ou de
subunidade protica, tem sido restrita ao uso de uma protena maior ortloga de
superfcie em Ehrlichia spp. (designada MAP 1 em E. ruminantium, p28 em E.
chaffeensis e p28/p30 em E. canis) que um membro da famlia multignica
parloga no idntica, de genes de protenas de membrana externa, em cada
respectiva Ehrlichia spp. Vacinas vivas, atenuadas ou mortas, de cidos nuclicos
ou recombinantes tem sido desenvolvidas contra Ehrlichia sp. No entanto, para o
desenvolvimento de uma nova gerao de vacinas que sejam eficazes e prticas,
tanto para ehrlichioses humanas emergentes, como para as de animais j
conhecidas, so necessrios: avaliao do genoma (sequenciamento) de vrias
espcies, a caracterizao de protenas imunorreativas e maior entendimento dos
mecanismos patognicos e imunes nas doenas ehrlichiais (McBRIDE, 2009;
McBRIDE e WALKER, 2010).
79
3. OBJETIVOS
3.1 OBJETIVOS GERAIS

Determinar a frequncia de Anaplasmataceae na populao canina em quatro
diferentes bairros do municpio de Maric, em infeces isoladas e associadas.
3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

1 - Analisar resultados de frequncia por diferentes mtodos diagnsticos:
morfolgico, moleculares e imunolgicos para Ehrlichia sp., Ehrlichia canis e
Anaplasma platys na populao canina em quatro bairros diferentes do municpio de
Maric.
2- Analisar a frequncia e a distribuio de Ehrlichia sp.,Ehrlichia canis e Anaplasma
platys em ces da cidade de Maric em infeces isoladas e associadas.
3- Comparar padres hematolgicos e bioqumicos dos animais infectados com os
de animais saudveis, considerando os valores de referncia da literatura e definir
alteraes mais frequentes.
4- Correlacionar a positividade para Anaplasmataceae em infeces isoladas e
associadas com a presena ou no de trombocitopenia.
80
4 MATERIAIS E MTODOS
4.1 LOCALIZAO
Maric um municpio brasileiro, situado no litoral do Estado do Rio de

Janeiro. Localiza-se a 2255'10" de latitude sul, 4249'07" de longitude oeste, a 5
metros de altitude. O territrio municipal estende-se por 362,480 km e dividido em
quatro distritos: Maric (sede), Ponta Negra, Ino e Itaipuau. As figuras a seguir
mostram o mapa do Estado do Rio de Janeiro com suas sub-regies, destacando o
municpio de Maric e os bairros onde foram coletadas as amostras.
Figura 1: Mapas de localizao do municpio de Maric (seta). Mapa do Estado do Rio de

Janeiro/BR; Google acesso em: 05 de abril de 2011. www.macamp.com.br/_CidadesC/_esrj.htm
81
SJ
B
Figura 2: Destaque do mapa do Estado do RJ/BR, situando Maric com fronteiras de Niteri
(N), So Gonalo, Itabora, Tangu e Saquarema (S). O mapa mostra tambm a localizao
aproximada de Bambu (B), Espraiado (E), Centro de Maric (C) e So Jos do Imbassa
(SJ). Fonte: Google imagens acesso em: 02 de fevereiro de 2011,
4.2 ANIMAIS
Foram estudadas, no presente trabalho, 155 amostras, colhidas de ces da
campanha de vacinao, realizada no municpio de Maric, do Estado do Rio de
Janeiro/BR, em Setembro de 2007. Desses, 67 animais foram do Bairro de Bambu,
50 do Espraiado, 24 de So Jos do Imbassa e 14 do Centro. Os animais foram
escolhidos por convenincia, no sendo estabelecidos critrios para escolha dos
mesmos como: raa, idade, sexo, condio de higiene, tipo de comportamento ou
moradia. A pesquisa foi autorizada pelo Comit de tica em Pesquisa com animais
da UFF (anexo 4). E aprovado sob o nmero 00164/09.
Foram preenchidas as fichas dos animais e os proprietrios foram
esclarecidos sobre o trabalho de pesquisa, assinando um termo de consentimento
autorizando a coleta de material biolgico (anexos 2 e 3) e posterior manipulao e
estocagem das amostras de sangue e seus derivados, no laboratrio de Patologia
Clnica do Hospital Veterinrio Universitrio Professor Firmino Mrsico Filho, da
Universidade Federal Fluminense UFF, em Niter/RJ. O projeto
82
4.3 COLETA E PROCESSAMENTO DAS AMOSTRAS DE SANGUE E SORO

As amostras de sangue venoso perifrico foram coletadas com auxilio de
seringas de 5 mL e agulhas 25 x 7mm (BD, So Paulo, Brasil) estreis, atravs de
puno da veia ceflica ou da jugular e foram acondicionados em tubos com
anticoagulante EDTA 10% e tubos para bioqumica srica, sem anticoagulante. Em
seguida foram confeccionados esfregao de sangue total circulante, para leitura da
leucometria especfica do hemograma e outro, de sangue capilar, (ponta-de-orelha)
para pesquisa de hemoparasitas. As amostras de sangue sem anticoagulante foram
mantidas em temperatura ambiente durante alguns minutos para retrao do
cogulo. Os tubos de sangue com EDTA e os sem anticoagulante, aps retrao do
cogulo, foram armazenados em caixa trmica na temperatura de aproximadamente
4 a 8C, at chegar ao laboratrio para serem processadas. Os esfregaos foram
imediatamente identificados aps a confeco e colocados em caixas prprias para
serem corados e analisados posteriormente.
No laboratrio, alquotas das amostras de sangue com EDTA foram
transferidas para microtubos de 1,5 mL para serem utilizadas posteriormente em
diagnstico molecular.
As amostras de sangue sem anticoagulante foram centrifugadas a 2500rpm
por 10minutos (Centribio, So Paulo, Brasil) para recuperao do soro. O soro foi
acondicionado em microtubos de 1,5 mL e mantidos a (-20C) at sua utilizao.
4.3.1 Realizao do hemograma

As amostras de sangue total com EDTA foram utilizadas para realizar o
hemograma atravs do contador automtico de clulas T-890 (Coulter Corp, Hialeah,
Flrida, EUA). Este contador permite a contagem de hemcias, leuccitos e
plaquetas, alm de determinar a concentrao de hemoglobina e o clculo dos
ndices
Hematimtricos:
volume
globular
mdio
(VGM),
concentrao
de
hemoglobina globular mdia (CHGM) e hemoglobina globular mdia (HGM). Foi

realizada a tcnica de microhematcrito para confirmao do volume globular e
determinao da concentrao de protenas plasmticas totais atravs de
refratometria.
Os esfregaos foram corados com corante (Merck, Darmstadf, Alemanha)
May Grunwald e Giemsa (MGG) modificado (ROSENFELD, 1947) e, a leucometria
83
especfica relativa foi realizada, atravs da identificao de 100 leuccitos em

esfregao, analisado em microscpio ptico (Nikon, Tquio, Japo) com objetivas de
40X, e 100X (aumento de 400 e 1000 vezes) e os devidos clculos realizados para
obteno da leucometria especfica absoluta.
4.3.2 Pesquisa de hemoparasitas
Todos os esfregaos corados, principalmente todos confeccionados de
sangue capilar, foram observados em aumento de 100 vezes para pesquisa de
microfilrias de Dirofilaria sp. (leitura de toda a lmina) e 400 vezes para
confirmao da presena do parasita. Todos tambm foram analisados em objetiva
de imerso (aumento de 1000 vezes) para pesquisa de hemoparasitas como
mrulas de Ehrlichia sp., Anaplasma platys, Babesia sp. e Hepatozoon. Alguns
foram selecionados para fotomicrografia, realizada no Centro de Primatologia, em
Mag/RJ, em microscpio acoplado a um microcomputador, Microscpio NIKON Eclipse E200, conjugado com Camera Moticam 2300 - 3,0MegaPixel, USB 2.0 Motic
Images Plus 2.0ML. Seu uso foi gentilmente cedido pelo Mdico Veterinrio
responsvel pelo Centro de primatologia, Dr. Alcides Pissinatti.
4.3.3 Dosagens bioqumicas

As amostras de soro foram utilizadas para a realizao de pesquisa
imunolgica e dosagens bioqumicas como concentraes de uria, creatinina,
atividades de alanina aminotrasferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST),
fosfatase alcalina (FA), gama-glutamiltransferase (GGT), creatina quinase (CK),
concentrao total de protena e fraes (albumina e globulina) com kits de
dosagem da Labtest, Minas Gerais, Brasil. Essas dosagens foram realizadas atravs
do aparelho Ciba Corning 550 Express, EUA, no Laboratrio Prolab Diagnsticos
(Rio de Janeiro/RJ, Brasil).
4.3.4 Deteco imunolgica
A deteco imunolgica foi feita utilizando-se o kit comercial Canine SNAP
4Dx (IDEXX, Westbrook, maine USA) para deteco de anticorpos contra Ehrlichia
canis, Anaplasma phagocytophilum, e que tambm detecta anticorpos contra
Borrelia burgdorferi e o antgeno de Dirofilaria immitis. A tcnica foi realizada de
84
acordo com as especificaes do fabricante. O principio do teste baseia-se na

formao de imunocomplexos entre antgeno-anticorpos. A superfcie de adsoro
do antgeno ou anticorpo geralmente utilizada a nitrocelulose. Quando presentes
na amostra de soro os anticorpos ou antgenos especficos, os mesmos so
reconhecidos pelo conjugado e precipitados sobre a superfcie de nitrocelulose onde
as ligaes especficas permitem o desencadeamento da reao enzima substrato
na presena de um cromgeno precipitante, o que permite a formao de cor e,
consequente, visualizao. Em um microtubo a parte foi adicionado trs gotas de
amostra de soro e quatro gotas de soluo de conjugado. Aps homogeneizao de
3 a 4 vezes, o contedo do tubo da amostra foi colocado no orifcio de amostra do
dispositivo SNAP. Ao aparecimento da cor no crculo de ativao o mesmo foi
acionado ficando nivelado com o corpo do dispositivo. O tempo de revelao para
obteno dos resultados foi de 8 minutos. O resultado fornecido foi de acordo com o
surgimento de cor nos poos de amostra indicando a presena do antgeno da D.
immitis, ou dos anticorpos de E. canis, A. phagocytophilum e B. burgdoferi alm do
controle positivo.
4.4 DIAGNSTICO MOLECULAR

4.4.1 Extrao de DNA
As alquotas de 1,5mL de sangue total, em microtubos tipo eppendorfs, foram
usadas para a anlise molecular no Laboratrio de Bactrias Enteropatognicas e
Microbiologia de Alimentos, no Instituto Biomdico da Universidade Federal
Fluminense, e foram conservadas em freezer (-20C) at o momento da extrao do
DNA.
As amostras foram utilizadas para extrao de DNA utilizando-se o kit
comercial da GE Genomic Blood Purifcation Kit (Amersham Biosciences,
Piscataway, EUA), de acordo com as instrues do fabricante.
As amostras de sangue total foram descongeladas e homogeneizadas e
depois, mantidas em cabine de biosegurana classe II tipo A (cmara de fluxo
laminar vertical) VLFS-9 (VECO, Campinas, SP, Brasil) durante o processo de
extrao. As amostras de DNA extrado foram armazenadas a -20C, aguardando
utilizao nos ensaios de PCR.
85
Para controle interno da reao, aps cada bateria de amostras extradas foi
realizada extrao de cido nuclico em amostra de gua UltraPure TM
DNase/RNase-Free Distilled Water (Gibco/Invitrogen, Carlsbad, EUA) com objetivo
de observar eventual contaminao durante a extrao do DNA genmico.
4.4.2 Ensaios de PCR para deteco de Anaplasmataceae, Ehrlichia canis e
Anaplasma platys
4.4.2.1 Iniciadores (primers)
Foram utilizados dois pares de iniciadores ou primers para a deteco dos
gneros de Ehrlichia/Anaplasma. Os pares: ECC (forward) (5 AGA ACG AAC
GCT GGC GGC AAG C-3) e ECB (reverse) (5 CGT ATT ACC GCG GCT GCT
GGC A-3) (DAWSON et al.,1994; DAWSON et al., 1996) e os pares EHR16SD
forward (5' - GGT ACC YAC AGA AGA AGT CC - 3') e EHR16SR reverse (5' TAG CAC TCA TCG TTT ACA GC - 3') (INOKUMA et al., 2000). Ambos os pares
servem para amplificao de um determinado fragmento em regio conservada do
gene 16S do RNA ribossomal das espcies da famlia Anaplasmataceae (INOKUMA
et al., 2000). O tamanho do fragmento amplificado varia de acordo com a espcie
existente na amostra, podendo variar de 345 a 480 pares de bases.
As amostras positivas, para as reaes de amplificaes com os iniciadores
citados, foram testadas com sequncias iniciadoras especficas para E. canis e A.
platys. Para E. canis foram usados os iniciadores: ECAN5 (forward) (5
CAATTATTTATAGCCTCTGGCTATAGGA-3) (DAWSON et al.,1996; MURPHY et
al., 1998) e HE3 (reverse) (5 TATAGGTACCGTCATTATCTTCCCTAT-3)
(ANDERSON et al., 1992b) para um produto de 389 pares de bases do gene 16S
rRNA (Gen Bank M73221 acesso on line http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
Para A. platys foram usados dois pares de iniciadores. Primeiro os pares:
PLATYS forward (5' - GAT TTT TGT CGT AGC TTG CTA TG - 3') combinado com
EHR16SR reverse (5' - TAG CAC TCA TCG TTT ACA GC - 3') que amplificam um
fragmento de 678 pb da regio 16S do RNA ribossomal. ( BROWN et al. 2001;
MOTOI et al., 2001; MARTIN et al., 2005) (Gen Bank GQ395385.1). As amostras
positivas nessa reao foram testadas com os iniciadores:
GroAplatys-35s
(forward): 5_-AGC GTA GTC CGA TTC TCC AGT TTT-3_ e GroAplatys-550as
(reverse): 5_-TCG CCG TTA GCA GAG ATG GTAG-3_ (BEALL et al., 2008), para
amplificao de um fragmento de 469 pares de bases do gene groEL. (Gen Bank
86
AY077621).
4.4.2.2 Protocolos de PCR

As reaes, em um volume final de 25L, consistiam de 2,5L de DNA alvo,
25pmol de cada sequncia iniciadora (EHR16SD e EHR16SR ou PLATYS e
EHR16SR), 1,25 U de Taq DNA polimerase, 0,2 mM de cada dNTP (Amersham
Biosciences, Piscataway, EUA) 20mM de Tris-HCl com pH 9, 100 mM KCl e 1,6mM
MgCl2 e o volume de gua ultra pura (Mili-Q) a ser acrescentado variava de acordo
com o que faltava para completar o volume final da reao, preparada em cmara
especial para evitar os riscos de contaminao (PCR Chamber, Plas Labs, Lansing,
EUA). Para o protocolo com os iniciadores ECC e ECB tambm com volume final de
reao de 25L, consistiam de 5L de DNA alvo, demais reagentes semelhantes ao
mix para EHR 16SR e o volume de gua ultra pura (Mili-Q) a ser acrescentado de
acordo com o que faltava para completar o volume de 25L.
Para cada bateria de reaes foi utilizado como controle negativo uma
amostra sem DNA (gua) e um controle positivo. Para E. canis o controle positivo foi
gentilmente fornecido pelos mdicos veterinrios Msc Alexandre Garcia de S do
Laboratrio Vet anlises Rio de Janeiro/RJ e Msc.Renata Fernandes Ferreira de
sua coleo. O controle de A. platys tambm foi cedido pela mdica veterinria Msc
Renata Fernandes Ferreira. O controle negativo foi usado, tambm, para verificar
possveis contaminaes durante a manipulao dos reagentes, sendo usado o mix
sem amostra, acrescido do mesmo volume de gua mili-Q.
Para os pares de primers ECC e ECB o programa de amplificao consistiu
em um passo inicial para uma desnaturao a 94C por 3 minutos, seguido de 30
ciclos de desnaturao a 94C por 60 segundos, anelamento a 65C por 30
segundos e extenso a 72C por 30 segundos. Um ltimo passo foi realizado a 72C
por 5 minutos para uma extenso final.
Para os primers EHR 16S D e EHR 16S R o programa de amplificao
consistiu de desnaturao a 95C por 2 minutos, seguido de 40 ciclos de
desnaturao a 94C por 60 segundos, anelamento a 54C por 30 segundos e
extenso a 72C por 30 segundos. Uma ltima etapa foi realizada a 72C por 5
minutos para extenso final. Para os primers PLATYS e EHR 16S R o programa foi
idntico a esse.
87
Para os primers GroAplatys-35s e GroAplatys-550as o programa de

amplificao consistiu em um passo inicial para desnaturao a 95C por 1 minuto,
seguido de 55 ciclos de desnaturao a 94C por 15 segundos, anelamento a 62C
por 15 segundos e extenso a 72C por 15 segundos. Com o ltimo passo a 72C
por 5 minutos para extenso final.
4.4.2.3 Anlise dos produtos da PCR

Foi adicionado aos produtos da PCR 5l de azul de bromofenol a 0,25% +
glicerol a 60% e colocados em gel de agarose a 1% (Amersham Biosciences,
Piscataway, EUA), por aproximadamente 115 V por 1h em fonte EPS-250 (CBS
Scientific Company Inc. Del Mar, EUA) em cuba horizontal especial CBS MGV 502
T (CBS Scientific Company Inc. Del Mar, EUA). O tampo de corrida utilizado era
composto de soluo de Tris a 0,5M - Borato a 0,045M - EDTA a 1mM e pH 8,2
(TBE 1x). A revelao foi realizada atravs da colorao do gel com soluo de
brometo de etdeo 0,01% (Invitrogen, Carlsbad, EUA) por aproximadamente 10
minutos. O gel foi posteriormente visualizado em transluminador ultra-violeta TCX26M (Vilber Lourmat, Marne-La-Valle, Frana). Para determinao dos produtos
amplificados foi utilizado um marcador de peso molecular (1Kb plus DNA Ladder,
Invitrogen, Carlsbad, EUA).
4.4.2.4 Sequenciamento de DNA dos produtos amplificados obtidos nos ensaios de

PCR
As amostras que revelaram resultados positivos aos ensaios de PCR foram
submetidas a novas amplificaes com volume final de 100 L. Os amplificons
obtidos foram purificados atravs do kit PureLink TM Nucleic Acid Purification Rack
(Invitrogen, So Paulo, Brasil). A quantificao do DNA purificado foi feita com
eletroforese em gel de agarose, por comparao com bandas do Low Mass DNA
Ladder (Invitrogen, So Paulo, Brasil), utilizando-se, para o sequenciamento, uma
quantidade mnima aproximada de 40ng. O sequenciamento foi realizado no Instituto
Biomdico da Universidade Federal Fluminense, usando o protocolo Big Dye
Terminator Cycle Sequencing Standart Version 3.1 com polmero POP7, seguindo as
especificaes do fabricante, no sequenciador 3130/3130X/Genetic Analyzer Applied
Biosystems Hitachi USA 850 Lincoln Drive Foster City CA94404USA.
88
As sequncias obtidas foram submetidas a alinhamento com aquelas

depositadas no GenBank utilizando-se o programa Blast.
4.4.3 Pesquisa de Babesia sp. nas amostras positivas em protocolos genricos
para Anaplasmataceae
As amostras que tiveram reao de amplificao nos protocolos de reao
para pesquisa de membros da famlia Anaplasmataceae foram aliquotadas e
enviadas ao laboratrio particular Vet anlises em Laranjeiras no municpio do Rio
de Janeiro/RJ, para que fosse feito PCR para o gnero Babesia sp., usando o
protocolo com os iniciadores foward piro A e reverse piro B.
4.4.4 Pesquisa de Hepatozoon sp. por PCR e sorologia para Leishmania sp.
Todas as amostras foram testadas por PCR para pesquisa de Hepatozoon sp.
e atravs de teste sorolgico, para pesquisa de anticorpos contra Leishmania sp.
Essas pesquisas foram realizadas pela Mdica Veterinria Camila Nunes Fonseca e
representou sua dissertao de mestrado (FONSECA, 2008).
4.5 ANLISE ESTATSTICA

Os resultados foram submetidos anlise estatstica pelo teste de KruskalWalllis X2, realizados pelo professor Dr. Rodolpho Rodrigues Filho do departamento
de Zootecnia da Faculdade de Veterinria da UFF.
5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 ANLISES MORFOLGICAS DOS ESFREGAOS SANGUNEOS

Na avaliao morfolgica, feita pela pesquisa microscpica direta, 35
amostras dos ces de Maric foram positivas, com incluses em diferentes tipos de
glbulos sanguneos, como sumarizados nos grficos um, dois e trs e na tabela um.
Grfico 1: Resultados das pesquisas de mrulas de hemoparasitas em

esfregaos sanguneos de ces do municpio de Maric/RJ 2007.
Grfico 2: Resultados das pesquisas de mrulas de hemoparasitas em

esfregaos sanguneos de ces do municpio de Maric/RJ 2007 e os
diferentes tipos de glbulos sanguneos em que foram observadas.
90
Grfico 3: Porcentagens dos diferentes tipos de glbulos sanguneos em que

foram observadas mrulas de hemoparasitas em esfregaos sanguneos de
ces do municpio de Maric/RJ 2007.
Tabela 1: Resultados das pesquisas de mrulas de hemoparasitas em

esfregaos sanguneos de ces do municpio de Maric/RJ 2007, com os
diferentes tipos de glbulos sanguneos em que foram observadas.
Clulas com
N +
%
% total
incluses
nas +
18,7
Mononucleados
29
83
Plaquetas
3
8,6
1,9
Mononucleados e
2
5,7
1,3
segmentados
Mononucleados e
1
2,9
0,65
plaquetas
TOTAL
35
100
22,6
Legenda: N = Numero de amostras; + = positivas
Pelo tipo de glbulo sanguneo onde se encontra a incluso, a mrula pode

ser associada possvel espcie de Ehrlichia/Anaplasma. Assim, as amostras que
foram observadas incluses apenas em mononucleados, foram sugestivas de
Ehrlicha canis; as com incluses em plaquetas, sugestivas de Anaplasma platys; as
com incluses tanto em segmentados como em mononucleados, foram sugestivas
de Ehrlichia sp. (granuloctica) e de Ehrlicha canis respectivamente, e aquela com
incluses em mononucleados e plaquetas, sugestivos de E. canis e A. platys,
respectivamente (JAIN, 1993). No entanto Almosny (1998), em estudo com infeco
experimental, sugeriu tambm a presena de mrulas de E. canis em plaquetas. E
ainda, os estudos de Mylonakis et al., (2003) e Dagnone et al., (2009) mostraram
91
que essa bactria pode estar presente em outros tipos globulares. Os resultados dos
hemoparasitas esto sumarizados no grfico quatro e na tabela dois.
Grfico 4: Porcentagens dos diferentes tipos de hemoparasitas que foram

observados como mrulas em esfregaos sanguneos de ces do municpio de
Maric/RJ 2007.
Tabela 2: Resultados das pesquisas de hemoparasitas em esfregaos

sanguneos, de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007.
Espcie sugestiva
N0 de amostras
% nas +
% total
Ehrlicha canis
Anaplasma platys
Ehrlichia sp. granuloctica
35
4
2
100
11,4
5,7
22,6
2,6
1,3
Como algumas amostras tiveram incluses em mais de um glbulo

sanguneo, essas porcentagens na tabela dois so diferentes daquelas da tabela
um, porm mostraram melhor a frequncia de cada espcie, definida pelo critrio da
pesquisa microscpica direta (JAIN, 1993; ALMOSNY, 1998; MYLONAKIS et al.,
2003; DAGNONE et al., 2009).
O achado em esfregao sanguneo est relacionado fase aguda da infeco
(ou recidiva), embora no se possa ter certeza da espcie em questo (RIKIHISA,
1991;
NEER,
1998;
HARRUS,
WANER,
2010).
E,
esse
achado,
de
aproximadamente 4% da populao infectada (HARRUS, WANER, 2010). Portanto,

pode ser que pela avaliao morfolgica o nmero de amostras possa ter sido
subestimado. Alm disso, em algumas dessas amostras apenas uma clula com
incluso foi observada, o que pode sugerir baixa bacteremia (HARRUS et al., 1998;
HARRUS et al., 2004).
92
Comparado a outros resultados de trabalhos em diferentes regies no Estado

do Rio de Janeiro, usando anlise em esfregaos, as porcentagens encontradas em
Maric so maiores. Na regio do mdio Paraba foram encontrados 4,8% de
infeco por E. canis (ODWYER et al., 2001), em Campos dos Goytacazes/RJ
13,9%, de Ehrlichia sp. (ALBERNAZ et al., 2007) e na Regio dos Lagos, 1,8% para
Ehrlichia sp. e 1% para A. platys (ACCETTA 2008). Isso pode ser justificado, entre
outros fatores, pelo fato de se ter analisado ao menos dois esfregaos de cada
amostra, um de esfregao do sangue com EDTA para o hemograma e outro, feito
com sangue capilar que aumenta a probabilidade de serem encontradas as mrulas
(OLSEN et al., 1994) ou mesmo, diferenas regionais da frequncia desses
parasitas, uma vez que esses estudos tambm escolheram aleatoriamente a
populao estudada.
Porm, a porcentagem para A. platys encontrada em Maric, foi menor do que
a observada por Santos (2008) de 60,5%, usando a mesma metodologia, justificado,
talvez, pelo tipo de populao estudada pelo autor que foram ces no domiciliados,
recolhidos pelo CCZ de Santa Cruz, no municpio do Rio de Janeiro.
A distribuio dos resultados da avaliao morfolgica pelos bairros onde
foram coletadas as amostras e, os respectivos glbulos sanguneos onde foram
observadas as mrulas, foram sumarizados na tabela trs e nos grficos cinco, seis
e sete.
Grfico 5: Resultados das pesquisas de hemoparasitas em esfregaos

sanguneos de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, distribudos pelos
bairros pesquisados.
93
Tabela 3: Resultados das pesquisas de hemoparasitas em esfregaos

bairros pesquisados, mostrando as clulas em que se encontravam as
incluses.
Bairro
N0 coletado
Bambu
67
Espraiado
Anlise morfolgica
Positivos
clulas com incluses /
N0 amostras
Mononucleados /12
13 (19,4%)
14 (28%)
50
So Jos
24
7 (29,2%)
Centro
14
1 (7,1%)
Total
155
35 (22,6%)
Legenda: Mono. = mononucleados; seg.= segmentados;
Mono. e Segmentados/1
Mononucleados /9
Mono. e Seg. /1
Plaquetas /3
Monon. e Plaquetas /1
Mononucleados /7
Mononucleados /1

bairros pesquisados.
Analisando os resultados morfolgicos na tabela 3, observa-se que as

incluses em mononucleados, sugestivas de E. canis, foram encontradas em todos
os bairros, sugerindo que esta espcie pode circular em toda a regio, enquanto as
incluses intraplaquetrias, sugestivas de A. platys (JAIN, 1993) ou mesmo de E.
canis (ALMOSNY, 1998) foram observadas somente em amostras do Espraiado.
Observa-se tambm que a frequncia variou de 7,1 a 29,2 com mdia de 20,9%, e
94
que a maior foi em So Jos e a menor no Centro. Porm, essas diferenas podem
ser por causa do nmero de amostras coletadas em cada bairro.

sanguneos de ces d
o municpio de Maric/RJ, em 2007, distribudos
pelos bairros pesquisados.
5.2 REAES DE PCR
Na avaliao molecular, feita pelos dois protocolos com pares de iniciadores

genricos (ECC/ECB e EHR) para deteco de DNA de Anaplasmataceae, 62/155
(40%) amostras dos ces de Maric, foram positivas, sendo que algumas s em um
dos protocolos, como sumarizados na tabela quatro e nos grficos oito e nove.
95
Grfico 8: Resultados PCR negativas e positivas em protocolos genricos

para Anaplasmataceae, avaliados em sangue de ces do municpio de
Maric/RJ, em 2007
Tabela 4: Resultados de PCR para Anaplasmataceae de amostras sanguneas

de ces do municpio de Maric/RJ em 2007.
Protocolo de PCR genrico
N0 de amostras
PCR sp
PCR sp
positivas
negativas
positivas
ECC/ECB e EHR
37(23,9%)
26
11
EHR
ECC/ECB
TOTAL
12 (8,4%)
13 (7,7%)
62 (40%)
12
13
51 (32,9%)
0
0
11 (7,1%)
Legenda: ECC/ECB, EHR = iniciadores dos protocolos de PCR genricos para

Anaplasmataceae; PCR sp = PCR de protocolo espcie especfico
Poucos estudos tm sido feitos considerando a frequncia total de bactrias

da famlia Anaplasmatacea no Brasil. Comparado a outros resultados de trabalhos
no Estado do Rio de Janeiro, usando anlise molecular, as porcentagens
encontradas em Maric so maiores. Macieira et al., (2005) avaliaram 226 ces da
regio metropolitana do Rio de Janeiro atravs de protocolo de PCR genrico
(ECC/ECB), e detectaram 17,7% de Anaplasmataceae. Ferreira et al., (2008a)
analisaram 101 amostras de ces, tambm da cidade do Rio de Janeiro, com
protocolo de PCR semelhante para Anaplasmataceae, (EHR), detectando frequncia
de 18,8%. Essas diferenas podem ser justificadas pelo tipo de populao que em
Maric foi composta de animais domiciliados em zona rural ou, ainda que urbana,
peri rural, o que pode facilitar o contato com o carrapato vetor, explicando a maior
frequncia em Maric.
96
Grfico 9: Porcentagens do resultados de PCR em protocolos genricos para

Anaplasmataceae, avaliados em sangue de ces do municpio de Maric/RJ, em
2007.
Nessas amostras, quando testadas em protocolos espcie especficos, foi
encontrada uma porcentagem de 32,9% (51/155) de positivas apenas nos protocolos
genricos e, cinco foram selecionadas para sequenciamento, por causa da presena
de fortes bandas na eletroforese, depois da amplificao do DNA. Aps
sequenciamento e comparao com outras sequencias depositadas no GENBANK,
atravs o programa BLAST, essas amostras mostraram similaridade entre 88% a
100% com Wolbachia sp., tambm da famlia Anaplasmataceae. Esses cinco ces
eram
microfilarmicos
e,
segundo
Unver
et
al.,
(2003)
pesquisando
Anaplasmataceae atravs de PCR em ces no Japo, foi detectada Wolbachia sp.

atravs de metodologia semelhante, sendo que no houve evidncia de
microfilaremia e os autores discutiram, a possibilidade de que esta bactria estivesse
associada a quadro fisiopatognico. Isso tambm pode explicar a possvel presena
de ces da populao testada de Maric, com bactrias dessa famlia taxonmica,
sem possvel microfilaremia ou de outras espcies de Anaplasmataceae. Entre as 51
amostras positivas, apenas em protocolos genrico para Anaplasmataceae, 38 no
eram de ces microfilarmicos e tambm foram negativas nas pesquisas de
antgeno de Dirofilaria immitis, diminuindo nessas, a probabilidade de terem
Wolbachia. Sendo que, uma dessas amostras, foi sequenciada indicando
similaridade de 94% com Ehrlichia sp., no programa BLAST.
Esse sequenciamento foi feito a partir do produto amplificado com iniciadores
genricos que podem amplificar DNA de todos os membros da famlia
Anaplasmataceae (INOKUMA et al., 2001), o que pode ter contribudo para que o
97
sequenciamento no ficasse suficientemente claro, para definir similaridade

especfica, principalmente, se na amostra, existissem mais de uma espcie. Estudos
mostraram que mesmo quando existiam mais de uma bactria Anaplasmataceae na
amostra clnica, a concentrao de DNA que predominava poderia interferir na
positividade, quando utilizados iniciadores baseados no gene 16S rRNA (HANCOCK
et al. 2001; SUKSAWAT, et al., 2001, correo dos autores 2002; HARTELT et al.,
2004). Alm disso, no foram testadas, nas amostras positivas nesses protocolos
genricos, outras espcies alm de E. canis e A. platys.
As amostras positivas em apenas um dos protocolos podem ser resultados de
pequenas variaes ou interferncias no mtodo de cada protocolo ou mesmo
reaes inespecficas, por causa de caractersticas intrnsecas dessas amostras,
que podero ser esclarecidas pelo sequenciamento (LITTLE 2010) j que a
metodologia de PCR usada nesse estudo se assemelhou a de vrias publicaes
que usaram iniciadores e protocolos idnticos (MACIEIRA et al., 2005; FERREIRA et
al., 2007).
Distribuindo esses resultados positivos para Anaplasmataceae, pelos bairros
onde foram coletadas as amostras, foi confeccionada a Tabela cinco e o grfico 10.
Grfico 10: Resultados da frequncia de Anaplasmataceae em ces, de quatro

bairros do municpio de Maric/RJ, em 2007, segundo avaliao de PCR, em
protocolos genricos.
98

bairros do municpio de Maric/RJ, em 2007, segundo avaliao de PCR, em
protocolos genricos.
N0 amostras coletadas N0 amostras PCR positivas (%)
BAIRRO
BAMBU
67
30 (44,8%)
ESPRAIADO
50
11 (22%)
SO JOS
24
12 (50%)
CENTRO
14
9 (64,3%)
TOTAL
155
62/155 (40%)
A anlise da frequncia distribuda pelos bairros mostra que esta variou de 22

a 64,3%, tendo 45,3% de mdia. Por essa anlise, o bairro de Espraiado teria a
menor frequncia e o Centro a maior, diferente do observado na anlise morfolgica,
em que o Centro teve a menor frequncia. No entanto, essas diferenas podem ser
um reflexo da diferena do nmero de amostras coletadas em cada bairro.
5.2.1 Reaes de PCR espcie especfica

Das 37 amostras positivas, nos dois protocolos genricos, 11 amplificaram em
reaes espcie especficas, sumarizadas na tabela seis e nos grficos 11 e 12.
Entre as amostras positivas em apenas um dos protocolos genricos, nenhuma foi
positiva para E. canis ou A. platys.
Tabela 6: Resultados de PCR para E. canis e A. platys, em relao s reaes
de protocolo genrico, de amostras sanguneas de ces do municpio de
Maric/RJ em 2007.
Protocolo
Genrico
PCR E. canis A. platys E. canis e A.
sp (+)
platys
0
N de amostras
1/62 (1,6)
62 (40)
11/62
5/62
5/62
positivas (%)
(17,7)
(8,1)
(8,1)
Total amostras
155/62
155/11
155/5
155/5
155/1 (0,6)
coletadas/positivas
(40)
(7,1)
(3,2)
(3,2)
(%)
Legenda: sp (+) = positivas em reaes de protocolo espcie especficas
99
Grfico 11: Resultados da frequncia de amostras de sangue de ces do

municpio de Maric/RJ, em 2007, positivas em PCR usando protocolos
especficos e as respectivas espcies.
Embora 40% das amostras estivessem positivas para Anaplasmataceae,

apenas 17,8% dessas amostras foram definidas em nvel de espcie, mostrando que
provavelmente outras, no analisadas nesse estudo, pudessem estar presentes
nessa populao.
Grfico 12: Resultados do nmero de amostras de sangue de ces do

municpio de Maric/RJ, em 2007, coletadas e positivas em PCR usando
protocolos genricos e especficos e as respectivas espcies.
Poucos estudos, usando deteco molecular, tm sido feitos em reas
semelhantes, porm, no municpio do Rio de Janeiro/RJ, Macieira et al., (2005)
evidenciaram frequncia para E. canis de 15% e, Ferreira et al., (2008a), de 15,8%
100
para A. platys e, esses trabalhos, foram feitos utilizando metodologia de PCR,

semelhante ao do presente trabalho em Maric.
Essas diferenas podem estar relacionadas com o tipo de populao
selecionada. No caso do estudo de Macieira et al., (2005), foram 226 animais onde
112 desses foram selecionados por serem trombocitopnicos. No estudo de Ferreira
et al., (2008a) a populao, de 101 ces, foi selecionada pela presena de incluses
intraplaquetrias, o que pode ter contribudo para maior frequncia do que as
observadas tanto para E. canis quanto para A. platys em Maric (3,8%), cujos 155
ces foram selecionados aleatoriamente, na populao encaminhada para
vacinao anti-rbica. Alm disso, diferenas regionais posem ter influenciado, uma
vez que a frequncia de Anaplasmataceae foi maior nos ces de Maric, sugerindo
que outras espcies dessa famlia taxonmica possam estar presentes.
Tabela 7: Resultados de PCR para E. canis e A. platys de amostras sanguneas

de ces do municpio de Maric/RJ em 2007, distribudas pelos bairros
estudados.
BAIRRO
BAMBU
ESPRAIADO
CENTRO
SO JOS
TOTAL
N0 amostras
testadas
67
50
14
24
155
PCR
sp (+)(%)
6 (9)
3 (6)
1 (7,1)
1 (4,2)
11 (7,1)
E. canis
(%)
3 (4,5)
0
1 (7,1)
1 (4,2)
5 (3,2)
A.
platys(%)
3 (4,5)
2 (4)
0
0
5 (3,2)
E. canis e
A. platys(%)
0
1 (2)
0
0
1 (0,6)
Legenda: sp (+) = positivas em reaes de PCR espcie especficas

A porcentagem de A. platys encontrada em Maric (3,8%) est abaixo
daquela descrita por Dantas-Torres (2008) para a variao da frequncia no Brasil,
de 10,3 a 18,8%, embora o autor se refira a populaes hospitalares, diferentes da
analisada no presente estudo. Essa variao da frequncia apresentada, inclui o
estudo de Ferreira et al., (2008a) de 15,8% na cidade do Rio de Janeiro e que
avaliaram por PCR, ces com incluses intraplaquetrias.
A tabela sete e os grficos 13 e 14 mostram a distribuio desses resultados
pelos bairros, associada ao nmero de amostras colhidas em cada um. Observa-se
que E. canis foi encontrada em todos os bairros e, talvez, esteja presente em toda a
regio, confirmando os achados na pesquisa microscpica direta.
101
A maior frequncia de A. platys no bairro do Espraiado tambm foi mostrada

na anlise microscpica direta e confirmada na pesquisa por PCR. Os resultados da
PCR tambm sugerem menor frequncia dessa bactria nos bairros do Centro e So
Jos embora isso possa ser um reflexo da diferena do nmero de amostras
coletadas em cada bairro.
Grfico 13: Resultados de amostras de sangue de ces do municpio de

Maric/RJ, em 2007, positivas em PCR usando protocolos genricos e
especficos e as respectivas espcies, comparados ao total de amostras
coletadas.
Grfico 14: Resultados percentuais de amostras de sangue de ces do

municpio de Maric/RJ, em 2007, positivas em PCR usando protocolos
genricos e especficos e as respectivas espcies.
Como a reao de PCR detecta a presena da bactria no sangue (LITTLE,
2010; HARRUS E WANER 2010), o resultado positivo est associado mais fase
aguda da infeco e pode, consequentemente, no detectar outros ces em fase
crnica ou que estavam no incio da fase subclnica, quando E. canis se encontra
102
em menor nmero na circulao sangunea, e pelo fato da replicao ocorrer no

bao (HARRUS et al., 1998; 2004) ou na medula ssea (SWANGO et al., 1989;
MOREIRA et al., 2005; MYLONAKIS et al., 2010). Alm disso, esta bactria pode se
albergar em outros sistemas que no o sanguneo (GAUNT et al., 1996; HARRUS et
al., 1998; HARRUS et al., 2004).
Em relao a A. platys que um microorganismo intracelular obrigatrio, que
parasita plaquetas de ces (WOODY e HOSKINS, 1991, HOSKINS, 1991a;
ALMOSNY; MASSARD, 2002) e apresenta parasitemia cclica, estudo de infeco
experimental mostrou que animais infectados somente com A. platys podem tornarse PCR negativos, antes de serem submetidos a tratamento (GAUNT et al., 2010),
mostrando a capacidade do organismo eliminar essa bactria, mesmo sem o uso de
antimicrobianos. Esses fatores podem contribuir para diminuir o tempo, a partir da
infeco primria, para sua deteco atravs da PCR, feita no sangue. Assim, o
estudo populacional pode no detectar o nmero real de ces expostos a A. platys,
quando pesquisados apenas pela pesquisa direta, quer seja pela PCR ou
microscopia.
Comparando as frequncias pelos bairros, Bambu (9%) foi o que teve a
maior em relao s amostras identificadas em espcies, indicando talvez, maior
porcentagem de ces em fase aguda da infeco, quando h maior bacteremia
(HOSKINS, 1991; GAUNT et al., 2010), enquanto em So Jos (4,2%) foi observado
a menor frequncia. No entanto, considerando infeco apenas por E. canis ou A.
platys, o Centro (7,1%) foi o com maior frequncia da primeira enquanto o Espraiado
(6%) da segunda. No foi detectada A. platys nas amostras coletadas de ces de
So Jos e Centro, como sugerido pelos resultados da pesquisa microscpica direta.
5.2.2 Associao dos resultados da PCR com os das amostras positivas na

anlise microscpica direta
Os resultados observados na anlise microscpica direta foram comparados
com os da PCR, por serem evidncias diretas da bacteremia e, tambm, porque
outros estudos mostraram que nem sempre as incluses observadas nos glbulos
sanguneos so mrulas de Ehrlichia/Anaplasma, havendo necessidade da
103
realizao da PCR para diferenciar as espcies de Anaplasmataceae (HARRUS e

WANER, 2010).
Cada amostra positiva na pesquisa microscpica direta, com o glbulo
sanguneo onde foi observada a mrula, foi associada ao seu resultado de PCR em
protocolo genrico e em protocolo espcie especfico e foram distribudas na tabela
8.
Tabela 8: Resultados da PCR de amostras sanguneas de ces do municpio de
Maric/RJ, em 2007, associados aos das pesquisas de hemoparasitas em
esfregaos sanguneos, com suas respectivas clulas com incluses,.
PCR
MORFOLGICO
N
PROTOCOLOS
+
Clulas com incluses
genricos
especficos
seg/mono mono plqt plqt/mono
37
EHR
ECCECB
+
5c
1cp
5p
0
0
0
11
1
4
1
3
0
0
0
1
0
1
0
0
5
0
0
0
0
0
26
20
6
0
6
0
0
12 EHR
12
8
4
0
2
2
0
13 ECCECB
13
10
3
0
3
0
0
Total 62
51
44 18
1
15
2
0
PCR (-) 93
76 17
1
14
1
1
Total amostras analisadas
120 35
2
29
3
1
155
155
Total positivos Morfolgico 35
Legenda: N = nmero de amostras; ECCECB, EHR = iniciadores dos protocolos de
PCR genricos para Anaplasmataceae; - = negativo; + = positivo; c = E. canis; p =
A. platys; seg = neutrfilo segmentado; mono = mononucleado; plqt = plaqueta
Entre as 35 amostras positivas em anlise microscpica direta 17 (48,6%) no
foram positivas em nenhuma reao de PCR, podendo representar falso positivo
para Anaplasmataceae, talvez porque no apresentassem concentrao de DNA
bacteriano suficiente para amplificao. Entre as 18/35 (51,4%) amostras que
amplificaram em protocolo genrico, 5/18 (27,8%) tiveram a espcie definida nas
reaes de PCR espcie especficas, usadas no presente estudo. As outras 13/18
(72,2%) amostras podem ser outras espcies de Anaplasmataceae, no includas
nesse trabalho. Entre as cinco amostras positivas para E. canis em PCR, quatro
apresentaram incluses intraglobulares, sendo que uma delas, com incluses em
segmentados alm de mononucleados, o que pode sugerir que essa espcie
tambm possa fazer incluses em granulcitos.
104
Na literatura so descritos vrios trabalhos em que o resultado da anlise da

pesquisa microscpica direta, foi comparado com os resultados de PCR, e as
diferenas so muito variveis, de 20% (FERREIRA et al., 2007) a 75% (SOUSA et
al., 2010).
Para A. platys, Ferreira et al., (2007) mostraram que, em comparao com a
anlise microscpica direta, de amostras de 101 animais, todos com incluses
intraplaquetrias, caractersticas ou no de mrulas, a PCR amplificou DNA em 16
delas. Nesse estudo, trs das 15 consideradas como incluses caractersticas, foram
PCR negativos para A. platys, correspondendo a 20%, consideradas falso positivas.
Porm, um deles foi positivo em PCR genrico (protocolo EHR), indicando a
possibilidade de ser outra espcie de Anaplasmataceae. Ainda nesse estudo, outras
duas amostras foram PCR positivas em protocolo genrico, mostrando que as
incluses consideradas como no caractersticas para A. platys, tambm podem ser
outra espcie de Anaplasmataceae.
No estudo de MENESES et al., (2008), em que foram analisados 75 ces
suspeitos de ehrlichiose, 4/75 (5,33%) amostras tiveram mrulas observadas em
esfregao, sendo que dessas quatro amostras, uma no foi PCR positiva para E.
canis, correspondendo a 25% das amostras positivas no esfregao, como falso
positivos. No total desse estudo, 25/75 (33,3%) amostras tiveram DNA de E. canis
detectados, mostrando que para anlise direta, para pesquisar a presena da
bactria, a PCR foi mais sensvel e especfica.
Em estudo feito por Ueno et al., (2009) com 70 ces suspeitos de ehrlichiose
canina, cinco apresentaram incluses caractersticas de Ehrlichia sp., sendo apenas
um negativo na PCR que mostrou positividade para E. canis nos outros quatro,
representando 25% de falso positivos pelo diagnstico morfolgico.
Outro estudo, o de Sousa et al., (2010), avaliou sessenta amostras de ces
suspeitos de ehrlichiose e, entre essas, 12 tinham mrulas sugestivas de Ehrlichia
sp., mas apenas trs foram PCR positivas (25%) e nove PCR negativas (75%),
representando falso positivos.
Essas diferenas encontradas em todos esses estudos e, tambm, com os
resultados de Maric, podem ser justificadas por diferentes fatores, como
caractersticas intrnsecas dessas amostras ou pequenas variaes ou interferncias
no mtodo de cada protocolo e mesmo a experincia de cada patologista ao analisar
as incluses (LITTLE 2010; HARRUS e WANER, 2010).
105
5.2.3 Associao entre as amostras PCR positivas e parasitas de outros

grupos taxonmicos
Embora no houvesse o objetivo de detectar co-infeces nas amostras
coletadas em Maric, vrios outros hemoparasitas foram observados nos esfregaos
sanguneos, durante a leitura das lminas, para pesquisa microscpica direta e para
a realizao da leucometria especfica relativa. Isso fez com que outras anlises
fossem feitas nas mesmas amostras.
Considerando a co-infeco entre E. canis e A. platys, apenas um caso foi
detectado pela PCR, entre todas as amostras testadas, muito abaixo da observada
por Ramos et al., (2009) em Recife/PE que tambm fizeram avaliao molecular
para diagnstico desses parasitas e encontraram 32%, mas em populao
hospitalar, de ces suspeitos de infeco por hemoparasitas, o que pode justificar
essa diferena. Estudos com diagnstico molecular para essas espcies no tem
sido desenvolvidos com populaes de animais cuja origem no tenha sido o
encaminhamento hospitalar.
Outros casos de co-infeces foram encontrados, com parasitas de diferentes
grupos taxonmicos. Hemoparasitas foram observados durante a pesquisa
microscpica como: Babesia sp., Hepatozoon e microfilrias. Alm disso, foi
realizado PCR para Babesia sp. nas amostras cujos protocolos de PCR para
Anaplasmataceae foram positivos e, a metodologia usada para sorologia, tambm
pode identificar Dirofilaria immitis na populao estudada. Todas as amostras foram
testadas em outro trabalho, cujo objetivo foi determinar a frequncia de Hepatozoon
sp. atravs de PCR, e tambm de Leishmania sp. por sorologia (FONSECA, 2007).
Associando
Ehrlichia/Anaplasma,
os
resultados
com
esses
da
outros
PCR,
para
Anaplasmataceae
hemoparasitas,
principalmente
e
os
observados na anlise microscpica direta, mas tambm os da sorologia para D.

immitis, os das amostras positivas em PCR para Babesia sp. e os resultados obtidos
por Fonseca (2007), foram detectados 32/155 (20,6%) casos de co-infeco,
sumarizados nas tabelas 9, 10 e 11 e grficos 15, 16 e 17.
106
Tabela 9: Amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007,

distribudas pelos 4 bairros avaliados, positivas para Anaplasmataceae em
PCR, em que outros parasitas foram detectados, por diferentes mtodos.
BAIRRO
BAMBU
ESPRAIADO
S. JOS
CENTRO
TOTAL
TOTAL
N AMOSTRAS COLETADAS
17
4
5
6
32
67
50
24
14
155
%
20,4
8
20,8
42,9
20,6
Grfico 15: Amostras sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007,

distribudas pelos 4 bairros avaliados, positivas para Anaplasmataceae em
PCR, em que outros parasitas foram detectados, por diferentes mtodos.
Analisando a tabela 9, observa-se que o Centro foi o bairro com maior

frequncia de amostras co-infectadas entre ces, com evidncia direta de
Anaplasmataceae, enquanto o Espraiado foi o com a menor frequncia. Como nesta
avaliao no esto computados os ces que tiveram apenas evidncia sorolgica
de exposio Ehrlichia/Anaplasma, esses valores podem ser diferentes, como
discutidos em tpico mais adiante.
107
Tabela 10: Distribuio pelos bairros avaliados, do nmero de amostras

sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, positivas para
Anaplasmataceae em PCR e os outros parasitas que foram detectados por
diferentes mtodos.
BAIRRO
Parasito n0 de amostras
BAMBU
D. immitis 16
Babesia sp. 1
Hepatozoon sp. 3
Leishmania sp. 5
ESPRAIADO
Leishmania sp. 4
S. JOS
Hepatozoon sp. 1
Leishmania sp. 4
CENTRO
Hepatozoon sp. 1
Leishmania sp. 4
Babesia sp. 1
Grfico 16: Distribuio pelos bairros avaliados, do nmero de amostras

sanguneas de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, positivas para
Anaplasmataceae em PCR e os outros parasitas que foram detectados por
diferentes mtodos.
Como em cada amostra pode ter aparecido mais de um parasita coinfectante, como ocorrido em Bambu, os nmeros totais, por bairros da tabela 9, so
diferentes da tabela 10 e, cada combinao, est descrita na tabela 11 para
amostras positivas em protocolo de PCR especfico e tabela 11a para amostras
positivas em PCR com protocolo genrico.
108
Tabela 11: Nmero de amostras sanguneas de ces do municpio de

Maric/RJ, em 2007, distribudas pelos bairros estudados, positivas em PCR
especfico para Ehrlichia canis/Anaplasma platys, e outros parasitas, que
foram detectados por diferentes mtodos.
Tipo de protocolo
PCR
Especfico
Anaplasmataceae e Parasito co-infectante (n0

de amostras)
A. platys + D. immtis (1)
E. canis + Hepatozoon sp. e D. immtis (1)
E. canis + Babesia sp.(1)
E. canis + D. immtis (1)
E. canis + Leishmania sp.(1)
Bairro
Bambu
So
Jos
Tabela 11a: Nmero de amostras sanguneas de ces do municpio de

Maric/RJ, em 2007, distribudas pelos bairros estudados, positivas em PCR
para Anaplasmataceae, e outros parasitas, que foram detectados por
diferentes mtodos.
BAIRRO
Anaplasmataceae +
Nmero de amostras
PARASITO
Bambu
Hepatozoon sp. e D.
3
immtis (3)
D. immtis (5)
5
D. immtis e Leishmania 4
sp.(4)
D. immtis , Leishmania
1
sp. e Hepatozoon sp.(1)
Espraiado
Leishmania sp.(4)
4
S Jos
Hepatozoon sp.(1)
1
Leishmania sp.(3)
3
Centro
Babesia sp. (1)
1
Leishmania sp.(4)
4
Hepatozoon sp.(1)
1
Os casos de co-infeco com Ehrlichia/Anaplasma e D. immitis, foram

observados somente no bairro de Bambu, o que pode estar indicando maior
incidncia do vetor desse parasita neste bairro. A ausncia de D. immitis nos outros
bairros no significa que no esteja presente, porm pode indicar menor circulao
do vetor ou maior controle de preveno pelos proprietrios nesses bairros, porm,
nas fichas dos animais no h esclarecimento sobre esse procedimento.
Da mesma forma que discutido anteriormente, como nesta avaliao no
esto computados os ces que tiveram apenas evidncia sorolgica de exposio
109
Ehrlichia/Anaplasma, os outros casos de co-infeco mostrados nas tabelas 10 e 11,

podem no refletir a circulao desses parasitas co-infectantes nos bairros
avaliados, como discutido mais adiante. No entanto, para os ces que tiveram
evidncia direta dessas bactrias no sangue, a associao com Leishmania sp. foi a
observada em todos os bairros. A associao de E. canis com Leishmania sp. vista
em Maric, pode reforar o estudo de Dantas-Torres (2011) em que descreve a
transmisso desses dois parasitas pelo mesmo vetor. Outros estudos mostram que a
co-infeco entre esses parasitas tem ocorrido no Brasil. Em 2008 Sousa e Almeida
descreveram em Cuiab/MT, cinco casos de ces positivos em teste sorolgico para
Leishmania sp. possivelmente co-infectados com Ehrlichia sp., identificadas pela
presena de mrulas intraleucocitrias. Em Teresina/PI, Pires et al.,(2008)
descreveram um caso de co-infeco entre esses parasitas, observados em
aspirados de medula ssea.
Esse tipo de associao foi a nica que ocorreu no bairro do Espraiado, onde
no foram encontrados ces com Ehrlichia/Anaplasma associados a Babesia sp.,
Hepatozoon sp. e D. immitis. Embora, como ser descrito em tpico mais adiante,
com exceo de D. immitis, essas associaes foram observadas nos ces com
evidncia apenas sorolgica de Ehrlichia/ Anaplasma.
Em So Jos no foi encontrada associao de amostra positiva em PCR
com Babesia sp. No entanto, aqui tambm no foram consideradas ainda, as
amostras com evidncia somente sorolgica de E. canis, para verificar todas
associaes com esses co-infectantes, observados no presente estudo, como
mostrado em tpico mais adiante. Por isso esses resultados podem no
corresponder indicao de que a co-infeco entre esses parasitos seja muito
provvel (KORDICK et al., 1999; SUKSAWAT et al., 2001a; INOKUMA et al., 2003).
Avaliando as amostras separadamente, pelos quadros de co-infeco,
descritos na tabela 11, observa-se que E. canis se associou a todos os tipos de
parasitos co-infectantes detectados nesse estudo, confirmando o descrito na
literatura de que comum a associao de co-infeces em doenas transmitidas
por artrpodes (DINIZ, et al., 2007; MOREIRA et al., 2007; ACCETTA, 2008;
DANTAS- TORRES, 2008; SANTOS 2008; SANTOS et al., 2009).
110
Grfico 17: Nmero de amostras sanguneas de ces do municpio de

Maric/RJ, em 2007, positivas em PCR para Ehrlichia/Anaplasma, e outros
parasitas, que foram detectados por diferentes mtodos, nos bairros onde
foram encontradas.
Nos ces de Bambu observou-se que D. immitis esteve associado com todos
os outros tipos de parasitas encontrados no estudo, sendo, portanto, o bairro com
maior variedade de parasitas co-infectantes, sugerindo que esses animais estejam
expostos, simultaneamente, a grande variedade de vetores de diferentes grupos
taxonmicos, proliferando na regio. Isso pode ser decorrente de falta de atitudes
que levem ao controle desses vetores e de preveno da transmisso.
Todos os outros parasitas, encontrados nos quatro bairros avaliados,
mostram a livre circulao dos vetores e podem indicar que possivelmente sejam
encontrados em toda regio de Maric. A maior freqncia da associao de
Ehrlichia/Anaplasma ou Anaplasmataceae com Leishmania sp. pode ser vista como
uma consequncia da possvel transmisso, deste ltimo, tambm por carrapatos
(DANTAS-TORRES 2011).
5.3 REAES SOROLGICAS POR MTODO DE ELISA
Das 155 amostras coletadas, 7 no foram testadas por causa da qualidade do
soro, 2 de Bambu, 2 do Espraiado, 2 de So Jos e 1 do Centro. Entre as 148 que
foram testadas os resultados esto sumarizados nas tabelas 12 e 13 e nos grficos
18, 18a e 19. Entre todas as amostras analisadas 89/148 (60,1%) foram positivas
para Anaplasmataceae e, mais da metade dessas amostras (71/89, 80%), tiveram
reao sorolgica para E. canis.
111
Essas amostras representam ces que foram expostos s bactrias e

desenvolveram resposta imune humoral e podem ou no ter desenvolvido doena
(GAUNT et al, 1996). Para um estudo de frequncia na populao isso mostra que a
pesquisa de anticorpos capaz de detectar maior parte de indivduos positivos por
se tratar de um teste capaz de selecionar todos aqueles que tiveram exposio
bactria (RISTIC et al., 1972), podendo ou no ter desenvolvido a doena ou terem
sido curados, como tambm, os indivduos que esto simultaneamente com a
bactria e fazendo resposta humoral (ALMOSNY e MASSARD, 2002). Apesar da
alta sensibilidade do teste sorolgico, a reao encontrada, no distingue uma
infeco presente da exposio prvia ao agente, portanto, superestima o nmero
de ces doentes (WEN et al., 1997; WANER et al., 1995).
Tabela 12: Resultados com sorologia positiva para E. canis e A.
phagocytophilum e negativas, de amostras de ces do municpio de Maric/RJ
em 2007.
Positivas
NT
Espcie
E. canis A.
E. canis e A.
avaliada
phagocytophilum phagocytophilum
7
59 (39,9)
N (%)
48(32,4)
18 (12,2)
23 (15,5)
(4,7)
Total (%)
71 (48)
41 (27,7)
Legenda: N = nmero de amostras; - = negativas; NT = no testadas.
Grfico 18: Resultados de amostras com sorologia positiva para E. canis e/ou
A. phagocytophilum de ces do municpio de Maric/RJ em 2007 comparados
ao nmero de amostras testadas.
112
Grfico 18a: Resultados de amostras com sorologia positiva para E. canis e A.

phagocytophilum de ces do municpio de Maric/RJ em 2007.
5.3.1 Reaes sorolgicas de E. canis

A tabela 13 mostra a distribuio das amostras soropositivas para E. canis
pelos bairros onde foram coletadas. Observa-se nessa tabela que no Centro foi
encontrada maior frequncia, semelhantemente s reaes de PCR. Enquanto na
avaliao microscpica direta este bairro teve a menor frequncia. Na sorologia as
frequncias variaram de 61,5 a 40% com 52% de mdia, embora isso possa ser
apenas resultante da diferena do nmero de amostras coletadas.
Tabela 13: Resultados com sorologia positiva para E. canis de amostras de
ces do municpio de Maric/RJ em 2007, distribudas pelos bairros.
N0 (%) AMOSTRAS COM SOROLOGIA POSITIVA NOS BAIRROS
BAIRRO
N0 amostras testadas
E. canis
BAMBU
ESPRAIADO
CENTRO
65
48
13
26 (40)
25 (52,1)
8 (61,5)
SO JOS
TOTAL (%)
22
148
12 (54,5)
71 (48)
113
Os estudos de Labarthe et al., (2003) e Pimentel Jr (2007) feitos no estado

do Rio de Janeiro e que se basearam em deteco sorolgica de E. canis, tambm
usando teste ELISA da Idexx, obtiveram frequncias de 29,6 e 47,4%
respectivamente. Comparadas a frequncia encontrada em Maric de 48%,esta foi
maior que a de Labarthe et al., (2003) e muito idntica a de Pimentel Jr (2007).
Nesses dois estudos tambm foram usadas populaes diferentes, no de Labarthe
et al., (2003) foi uma populao selecionada de forma semelhante de Maric, entre
animais de campanha de vacinao, enquanto Pimentel Jr selecionou amostras
encaminhadas a laboratrio clnico particular e, portanto, de origem hospitalar, que
no entanto, teve um valor bem semelhante ao encontrado, sugerindo que em Maric
tenha
maior
circulao
dessa
bactria.
Santos
(2008)
tambm
avaliou
sorologicamente uma populao de ces no domiciliados, recolhidos pelo CCZ de

Santa Cruz na cidade do Rio de Janeiro, encontrando 88,6% de positivos,
mostrando que o tipo de populao pode influenciar na frequncia do parasita. E,
considerando o estudo de Labarthe et al., (2003), com populao semelhante no
estado do Rio de Janeiro, verifica-se que Maric tem uma frequncia maior de E.
canis talvez por um aumento na disseminao dessa bactria nesse estado, nesse
intervalo de tempo. No entanto, para essa hiptese ser confirmada, estudo mais
amplo no estado deve ser realizado. Em Maric essa frequncia tambm pode ser
mais elevada pela maior proliferao de vetores, embora isso no tenha sido
avaliado.
114
Grfico 19: Resultados de amostras de ces do municpio de Maric/RJ em

2007, com sorologia positiva para A. phagocytophylum e E. canis, distribudas
pelos bairros estudados.
5.3.2 Avaliao sorolgica de A. phagocytophilum
A tabela 14 e o grfico 19 mostram a distribuio das amostras soropositivas
para A. phagocytophilum pelos bairros onde foram coletadas. Observa-se nessa
tabela que no Centro foi encontrada menor frequncia, que variou de 23,1 a 31,8
com 27,5% de mdia e, a maior, em So Jos, embora isso possa ser apenas
resultante da diferena do nmero de amostras coletadas.
Tabela 14: Resultados de amostras de ces do municpio de Maric/RJ em

2007, com sorologia positiva para A. phagocytophylum, distribudas pelos
bairros.
N0 (%) AMOSTRAS COM SOROLOGIA POSITIVA NOS BAIRROS
A. phagocytophilum
BAIRRO
N0 amostras testadas
BAMBU
ESPRAIADO
CENTRO
SO JOS
TOTAL (%)
65
48
13
22
148
17 (26,1)
14 (29,2)
3 (23,1)
7 (31,8)
41 (27,7)
Embora o fabricante do kit sorolgico Canine SNAP 4Dx (IDEXX,

Westbrook, Maine USA) que detecta anticorpos contra A. phagocytophilum,
descreva a possibilidade de reao cruzada com anticorpos para A. platys, no se
115
considerou as amostras com reaes positivas, para clculo da freqncia de A.

platys, na populao de ces de Maric. Ferreira et al., (2008b) avaliaram amostras
com PCR positivo para A. platys com esse mesmo kit sorolgico e no detectou
nenhuma reao. No entanto esses animais poderiam estar em fase aguda do
contato com a bactria e ainda no terem anticorpos e, nenhum teste para deteco
de anticorpos especficos para A. platys, foi utilizado naquele estudo.
Outra observao feita foi que no Centro no houve deteco, pela PCR, de
ces com A. platys. Porm houve reao sorolgica para alguns indivduos desse
bairro, para A. phagocytophilum, o que no descarta a possibilidade de serem
reaes cruzadas entre essas bactrias. E, uma vez que so potencialmente
transmitidos pelo mesmo carrapato transmissor da E. canis (KORDICK et al., 1999;
INOKUMA et al., 2000, COHN, 2003) e esta foi detectada em todos bairros
estudados, provvel que A. platys tambm esteja igualmente disseminada.
Em 2011, foi descrito pela primeira vez a evidncia molecular a A.
phagocytophilum no Brasil, no municpio de Seropdica, estado do Rio de Janeiro
(SANTOS et al., 2011), o que pode indicar a possibilidade de que essa bactria
esteja presente tambm no municpio de Maric. As amostras coletadas nesse
municpio no foram testadas para essa espcie, embora entre as seis amostras
positivas em PCR para A. platys, quatro (66,7%) tenham apresentado reao
sorolgica para A. phagocytophilum.
5.3.3
Associao
dos
resultados
das
amostras
positivas
na
anlise
microscpica direta com os resultados da sorologia

As amostras positivas na anlise morfolgica foram comparadas com seus
respectivos resultados de sorologia. Entre as 35 positivas com incluses globulares,
25 tiveram resultado sorolgico positivo para E. canis ou A. phagocytophilum ou para
ambas, como descrito na tabela 15 e no grfico 20.
116
Tabela 15: Resultados de amostras sanguneas de ces do municpio de

Maric/RJ, em 2007, positivos na pesquisas de hemoparasitas em esfregaos
sanguneos, com suas respectivas clulas com incluses associados aos da
sorologia.
sorologia
N0
espcies
Clulas com incluses
E
A E/A
29
9
mononucleados
10 3
7
2
1
Mononucleados/Segmentados
0
1
0
1
0
Mononucleados/plaquetas
0
1
0
3
0
plaquetas
2
0
1
Total 35
12 5
8
10
0
Legenda: N = Amostras positivas na anlise morfolgica; E = E. canis; A = A.
phagocytophilum; E/A = E. canis e A. phagocytophilum; - = negativo
Apenas o estudo de Meneses et al., (2008) associou a sorologia com
diagnstico morfolgico e a PCR, no entanto, no esclareceu as clulas em que
foram observadas as incluses e se as amostras positivas no esfregao foram ou
no soropositivas. Porm, como dos 75 ces estudados por esses autores, 74
(98,7%) foram soropositivos, pelo menos trs entre os quatro positivos pelo achado
em esfregaos, foram positivos na sorologia. Desses quatro, trs tambm foram
PCR positivos, embora os autores no esclaream se eram os mesmos trs animais.
117
Grfico 20: Resultados de amostras sanguneas de ces do municpio de

Maric/RJ, em 2007, positivos na pesquisas de hemoparasitas em esfregaos
sanguneos, com suas respectivas clulas com incluses associados aos da
sorologia.
5.3.4 Associao dos resultados da PCR com os da sorologia
Entre as 62 amostras PCR positivas, em protocolo genrico para
Anaplasmataceae, 42 tiveram reaes sorolgicas positivas, e, das 93 PCR
negativas 47 foram positivas na sorologia, descritas na tabela 16 e no grfico 21. E,
das 59 negativas em reaes sorolgicas, 19 foram PCR positivas, sendo que duas
destas em protocolo espcie especfico, mostrados na tabela 17.
Entre as seis amostras PCR positivas para E. canis, duas (33,3%) mostraram
presena de anticorpos, indicando infeco com resposta humoral, enquanto as
outras quatro (66,7%), sem reao sorolgica, indicaram infeco aguda, onde ainda
podem no ter anticorpos (ALMOSNY, 1998).
Naquelas em que a PCR foi positiva apenas em protocolos genricos, 33/51
(64,7%) tiveram sorologia positiva, sendo 19/33 (57,6%) s para E. canis, 4/33
(12,1%) s para A. phagocytophilum e 10/33 (30,3%) para as duas bactrias.
118
Tabela 16: Resultados da PCR, de amostras sanguneas de ces do municpio

de Maric/RJ, em 2007, associados aos da sorologia.
PCR
SOROLGICO
N
PROTOCOLOS
espcies
Genricos especficos
E
A
E/A
37
EHR
ECCECB
12
13
EHR
ECCECB
26
12*
13
51*
+
5c
1cp
5p
0
0
0
11
62*
TOTAL
PCR (-) 93**
TOTAL**
Total amostras analisadas
TOTAL 155
1
0
2
6
5
8
22
0
2
1
0
3
0
3
6
0
2
1
2
8
12
42
26
10
11
47
48
18
23
TOTAL 148
2
0
0
11
4
2
19
40
59
Legenda: N = nmero de amostras; EHR, ECCECB = iniciadores dos protocolos de PCR genricos
para Anaplasmataceae; - = negativo; + = positivo; * = uma amostra sem sorologia; ** = seis amostras
sem sorologia; c = E. canis; p = A. platys; E = E. canis; A = A. phagocytophilum
As 29/51 (56,9%) amostras com anticorpos para E. canis tem DNA bacteriano
de Anaplasmataceae, embora no tenham amplificado em reaes especficas para
essa bactria, o que significa que esses ces tiveram contato prvio com essa
espcie, mas ainda tm DNA de outro membro da famlia taxonmica (MACIEIRA et
al., 2005). No entanto, embora 20/51 (39,2%) amostras tenham anticorpos contra A.
phagocytophilum, no se pode definir que esses animais tenham sido infectados por
essa espcie, uma vez que no foram testadas por PCR especfico para esta e
tambm, o fabricante do kit sorolgico afirmar que possa ocorrer reao cruzada
com anticorpos para A. platys.
119
Grfico 21: Resultados da PCR, de amostras sanguneas de ces do municpio

de Maric/RJ, em 2007, associados aos da sorologia.
Analisando as amostras que foram sorologicamente negativas, verifica-se que
duas dessas foram PCR positivas para E. canis, evidenciando que esses animais
ainda no tem resposta humoral, uma vez que a concentrao de DNA pode ser
inversamente proporcional de anticorpos (BANETH et al., 2009), ou por estarem
em fase aguda (ALMOSNY, 1998) ou por no serem imunocompetentes (ANDEREG
e PASSOS, 1999). As outras 17 amostras soronegativas que foram PCR positivas
apenas em protocolos genricos, no foram testadas para pesquisa de anticorpos
contra outras espcies de Anaplasmataceae. No entanto indicam que tem DNA
ehrlichial, uma vez que amplificaram DNA com iniciadores baseados no gene
16SrRNA dessa famlia taxonmica (MACIEIRA et al., 2005).
No estudo de MENESES et al., (2008), foram feitas anlises dos ttulos de
anticorpos nos ces positivos na PCR e no houve relao entre aqueles com ttulos
elevados e a PCR, uma vez que os ttulos mais baixos foram os mais frequentes.
Segundo Harrus et al., (1998; 2004), isso pode ser explicado pelo nmero de ces
na fase aguda que ainda no produziram altos ttulos de anticorpos especficos ou
que estavam no incio da fase subclnica, quando E. canis se encontra em menor
nmero na circulao sangunea, e pelo fato de o bao ser o local de replicao.
120
Tabela 17: Resultados com sorologia negativa em relao aos protocolos de

PCR para gneros e espcies estudadas da famlia Anaplasmataceae, de
amostras de ces do municpio de Maric/RJ em 2007.
AMOSTRAS COM
Tipo de PCR
SOROLOGIA NEGATIVA
TOTAL
EHR
ECCECB EHR
ECCECB
Espcie
PCR(+)
19
2
4
13
2 (E.
canis)
PCR (-)
40
0
0
0
0
TOTAL
59
2
4
13
2
Amostras no testadas
7
TOTAL
66
-
5.3.5 Associao dos resultados da PCR com os morfolgicos e os da

sorologia
As tabelas 18 e 18a mostram as relaes entre as amostras analisadas na
PCR com os seus resultados na pesquisa morfolgica e no teste sorolgico. As
diferenas observadas se referem principalmente a apresentao da fisiopatogenia
da infeco ehrlichial, onde o achado morfolgico e a PCR foram evidncias diretas
da bactria no sangue, enquanto o teste sorolgico mostrou a resposta imune
presena desta no organismo (LITTLE, 2010; HARRUS e WANNER, 2010) que
ainda poderia, ou no, albergar o microrganismo (GAUNT et al., 1996; HARRUS et
al., 1998; HARRUS et al., 2004).
Na tabela 18 so detalhados os comportamentos das amostras PCR positivas
e negativas com relao aos resultados da pesquisa morfolgica e sorolgica. Entre
as 62 positivas 18 tambm o foram na pesquisa morfolgica e 42 na pesquisa
sorolgica.
121
Tabela 18: Resultados da PCR, de amostras sanguneas de ces do municpio

de Maric/RJ, em 2007, associados aos morfolgicos, com as respectivas
clulas com incluses, e os da sorologia.
PCR
PROTOCOLOS
Genricos
especficos
MORFOLGICO
Clulas com incluses
seg/mono mono plaqt Mono/plaqt
SOROLGICO
espcies
A
E/A
E
37
EHR
ECCECB
12
13
EHR
ECCECB
26
12*
13
51*
5c
1cp
5p
0
0
0
11
PCR Negativos 93**

Total
Total amostras analisadas 155
1
0
5
20
8
10
44
4
1
0
6
4
3
18
1
0
0
0
0
0
1
3
1
0
6
2
3
15
0
0
0
0
2
0
2
0
0
0
0
0
0
0
1
0
2
6
5
8
22
0
1
3
3
0
1
8
2
0
0
6
2
2
12
2
0
0
11
4
2
19
76 17
120 35
155
1
2
14
29
1
3
1
1
26
48
10
18
11
23
148
40
59
35
Legenda: N = nmero de amostras; EHR, ECCECB = iniciadores dos protocolos de

PCR genricos para Anaplasmataceae; - = negativo; + = positivo; * = uma amostra
sem sorologia; ** = seis amostras sem sorologia; c = E. canis; p = A. platys;seg =
neutrfilo segmentado; mono = mononucleado; plqt = plaqueta; E = E. canis; A = A.
phagocytophilum;
Na tabela 18a so detalhados os comportamentos das amostras positivas em

pesquisa morfolgica, com as respectivas clulas em que foram achadas as
mrulas, com relao aos resultados da PCR e dos testes sorolgicos. As 35
amostras, positivas com mrulas, tiveram 18 positivas em PCR e 25 na sorologia,
sendo que apenas trs foram simultaneamente negativas em PCR e sorologia.
Tabela 18a: Resultados da pesquisa morfolgica, com as respectivas
clulas com incluses, de amostras sanguneas de ces do municpio de
Maric/RJ, em 2007, associados aos da PCR e aos da sorologia.
0
Morfologia
Clulas com incluses
29
mononucleados
2
Mononucleados/Segmentados
1
Mononucleados/plaquetas
3
Plaquetas
Total 35
Resultado morfolgico positivo
Total PCR-/Soro+
Total PCR-/Soro-
E = E. canis; A = A. phagocytophilum;
PCR
PROTOCOLOS
genricos
especficos
+
+
14
15
11
4
1
1
0
1
1
0
0
0
1
2
2
0
17
18
14
3
sorologia
espcies
E
A E/A
10
0
0
2
12
3
1
1
0
5
7
0
0
1
8
9
1
0
0
10
0
3
122
5.3.6 Associao entre as amostras com sorologias positivas e parasitas de

outros grupos taxonmicos
Associando os resultados positivos dos testes sorolgicos, tanto para E. canis
como para A. phagocytophylum, com os outros parasitas detectados durante esse
estudo, ou seja: Hepatozoon sp., Babesia sp., D. immitis e Leishmania sp.,
observou-se que a porcentagem total de co-infeces, de (29/148) 19,6%, foi menor
do
que
aquela
observada
entre
as
amostras
positivas
na
PCR
para
Anaplasmataceae e esses outros parasitas, de (32/155) 20,6%, como mostrado na

tabela 19 e no grfico 22. No h uma justificativa evidente para essa diferena. O
nmero de animais com resposta sorolgica para Anaplasmatacea (E. canis e A.
phagocytophilum) foi maior (89) do que o total de animais positivos na PCR (62),
porm, o nmero de casos combinados com outros parasitas foi maior naqueles com
evidncia da bacteremia do que naqueles em que havia somente a resposta imune
humoral evidente. Talvez essa diferena fisiopatognica estivesse envolvida na
explicao para essa diferena. Uma vez que a transmisso pelo mesmo carrapato
pode ocorrer com alguns desses parasitas, como Babesia sp., Hepatozoon sp.
(UNVER et al., 2009) e Leishmania sp. (DANTAS-TORRES, 2010), o estado de
bacteremia evidente e algum(uns) dos co-infectante(s), pode ter sido detectada,
ainda que j existisse resposta sorolgica, como detalhado na tabela 22, onde foi
separada a quantidade de amostras com positividade em ambas condies. E, com
o desenvolvimento de resposta imune e provvel eliminao da bacteremia
(HARRUS et al., 2004; GAUNT et al., 2010) pode ser sugerido que talvez o
organismo tambm tenha eliminado o(s) co-infectante(s) do sangue.
Observando a distribuio nos bairros, diferentemente da relao com as
amostras positivas na PCR, o Centro foi o que teve menor porcentagem de coinfeco e o Espraiado o que teve maior.
123
Tabela 19: Amostras de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007, com

sorologia positiva para Anaplasmataceae (E. canis e/ou A. phagocytophilum)
com parasitos co-infectantes, e os bairros onde foram coletadas.
Sorologia positiva (PCR -)
com co-infeco
BAIRRO
BAMBU
ESPRAIADO
S. JOS
CENTRO
TOTAL
NO AMOSTRAS POSITIVAS
10
13
5
1
29
NO AMOSTRAS COLETADAS
65
48
22
13
148
%
15,4
27
22,7
7,7
19,6
Um achado comum s duas relaes de co-infeces, foi que tanto nas

amostras positivas na PCR como nas com sorologia positiva, a co-infeco com
Leishmania sp. foi a mais frequente, como mostrado no grfico 24.
Grfico 22: Amostras de ces com sorologia positiva para Anaplasmataceae

(E. canis e/ou A. phagocytophilum) e os parasitos co-infectantes, de amostras
de ces do municpio de Maric/RJ em 2007, e os bairros onde foram
coletadas.
124
A tabela 20 mostra os diferentes parasitas co-infectantes e o nmero de

amostras por bairro em que esses parasitas foram encontrado. Semelhantemente s
amostras co-infectadas positivas na PCR, D. immitis s foi detectada no bairro de
Bambu, reforando a indicao de maior incidncia do vetor nessa regio do
municpio.
No bairro do Espraiado foi evidenciado outros casos de co-infeces, alm da
associao com Leishmania sp., que j havia sido observado com mostras positivas
na
PCR.
Neste
bairro
foram
evidenciadas
tambm
co-infeces
de
Anaplasmataceae, E. canis/A. phagocytophilum (sorologia) com Babesia sp. e

Hepatozoon sp.
Tabela 20: Amostras de ces do municpio de Maric/RJ e os bairros onde
foram coletadas, em 2007, com sorologia positiva para Anaplasmataceae (E.
canis e/ou A. phagocytophilum) e os parasitos co-infectantes.
Resultados Sorologia positiva para Anaplasmataceae e Parasito co-infectante
BAIRRO (NO AMOSTRAS)
sorologia
S+ (P-) Parasito n0
BAMBU (12)
ESPRAIADO (15)
S. JOS (5)
CENTRO (1)
E
4
A
1
EA
3
1
1
1
1
1
6
0
2
0
1
0
0
0
1
2
1
0
1
0
1
1
0
1
2
1
1
0
D. immtis 8
Babesia sp. 2
Hepatozoon sp.2
Leishmania sp.2
Babesia sp. 1
Hepatozoon sp.3
Leishmania sp. 10
Babesia sp. 2
Leishmania sp. 3
Leishmania sp. 1
Na tabela 21 e no grfico 23 so mostradas as combinaes entre os

diferentes parasitas co-infectantes, seus resultados nas reaes sorolgicas e os
bairros onde foram detectadas. Tambm se observa que a associao com
Leishmania sp. foi a mais frequente, reforando a idia de que o vetor pode ser o
mesmo (DANTAS-TORRES, 2010). E, embora a co-infeco com Babesia sp. seja
indicada como muito provvel com Ehrlichia sp. (KORDICK et al., 1999; SUKSAWAT
et al., 2001a; INOKUMA et al., 2003) esta correspondeu a 17% ( 5/29) dos casos de
co-infeco, semelhante aqueles com Hepatozoon sp. No entanto, associado aos
resultados de co-infeco das amostras positivas na PCR, observa-se que a co-
125
infeco entre esses parasitas foi observada em todos os bairros avaliados,

indicando provvel circulao em todo municpio.
Analisando a frequncia geral de co-infeces, mostradas na tabela 23, o
bairro do Centro foi o que apresentou maior porcentagem de casos e o Espraiado a
menor, como j se observara na relao de amostras positivas na PCR.
No entanto, o Bairro do Espraiado foi o que apresentou maior nmero de
casos de co-infeco com Leishmania sp., o que refora a idia de que nesta regio
a populao animal e humana esteja mais exposta a vetores infectados com esse
parasita que foi detectado em todos os bairros estudados.
Tabela 21: Grupo de ces com sorologia positiva para E. canis e/ou A.
phagocytophilum, e os parasitos co-infectantes, de amostras de ces do
municpio de Maric/RJ em 2007, e os bairros onde foram coletadas.
Parasitas co-infectantes (N Amostras)

D. immtis (5)
D. immtis e Babesia sp.(1)
D. immtis e Leishmania sp.(1)
D. immtis , Babesia sp. e Leishmania sp.(1)
Hepatozoon sp.(2)
Babesia sp., Leishmania sp.e Hepatozoon sp.(1)
Hepatozoon sp.(3)
Leishmania sp.(9)
Babesia sp.(2)
Leishmania sp.(3)
Leishmania sp.(1)
Sorologia positiva
E. canis
A. p
E.c e A.
p
3
1
1
1
0
0
0
0
1
0
0
1
1
0
1
1
0
0
1
1
1
5
2
2
0
1
1
2
0
1
7
3
3
BAIRRO
Bambu
Espraiado
S Jos
Centro
Legenda: A. p = A. phagocytophilum; E.c = E. canis;
Embora nas amostras positivas em PCR e co-infectadas no tenha sido

evidenciada relao de E. canis com Leishmania sp., maior do que aquela
observada com os outros parasitas, nas amostras com sorologia positiva, foi
observado que a relao entre esses parasitas foi a mais frequente, em 13 (44,8%)
das 29 amostras co-infectadas.
A existncia dessas relaes de co-infeces com Anaplasmataceae com diferentes
estados fisiopatognicos, ou seja, PCR positivo e/ou sorologicamente positivo,
126
refora a hiptese de que neste municpio os ces estejam sendo constantemente

reinfectados e por diferentes vetores artrpodes hematfagos.
distribudos pelos 4 bairros avaliados,
Amostras com co-infeco nos bairros avaliados
BAIRRO
Resultados* Sorologia PCR
BAMBU
ESPRAIADO
S. JOS
CENTRO
TOTAL
Proporo
O
S+P-
S-P+
S+P+
TOTAL
N AMOSTRAS COLETADAS
10
13
5
1
29
7
0
0
1
8
10
4
5
5
24
27
17
10
7
61
67
50
24
14
155
%
40,3
34
41,7
50
39,3
Legenda: * = para Anaplasmataceae; S+ = sorologia positiva; S - = sorologia

negativa; P+ = PCR positiva; P- = PCR negativa.
Grfico 23: Amostras de ces com sorologia positiva para Anaplasmataceae

(E. canis e/ou A. phagocytophilum) e os parasitos co-infectantes, de amostras
de ces do municpio de Maric/RJ em 2007, e os bairros onde foram
coletadas. E.c = E. canis; A. p = A. phagocytophilum
O parasita co-infectante mais frequente entre todas as 62 amostras positivas

em PCR e nas 89 positivas em sorologia, foi Leishmania sp, com 53,2% das
amostras, como mostrado no grfico 24. No entanto, alm deste, sabidamente um
127
agente de doena humana, outros tambm podem ser transmitidos aos seres
humanos (ALMOSNY e MASSARD, 2002), o que faz com que se alerte para o fato
da necessidade de se controlar esses vetores nesse municpio.
distribudos pelos 4 bairros avaliados, com a descrio do nmero de cada
parasito.
Amostras com co-infeco nos bairros avaliados
BAIRRO
BAMBU
ESPRAIADO
S. JOS
CENTRO
Resultados PCR Sorologia para Anaplasmataceae e Parasito co-infectante

0
0
S+P- Parasito n0
S-P+Parasito n
S+P+Parasito n
D. immtis 8
Babesia sp. 2
Hepatozoon sp.1
Leishmania sp.1
Babesia sp. 1
Hepatozoon sp.4
Leishmania sp. 10
Babesia sp. 2
Leishmania sp. 3
D. immtis 6
Babesia sp. 1
Hepatozoon sp. 1
Leishmania sp. 1
Babesia sp. 1
D. immtis 10
Hepatozoon sp. 2
Leishmania sp. 5
Leishmania sp. 4
Hepatozoon sp. 1
Leishmania sp. 4
Hepatozoon sp. 1
Leishmania sp. 4
Legenda: S+ = sorologia positiva; S - = sorologia negativa; P+ = PCR positiva; P- =

PCR negativa.
Grfico 24: Porcentagens de amostras positivas para Anaplasmataceae

(positivas em PCR e/ou sorologia) com cada parasito co-infectante, em ces do
municpio de Maric/RJ, em 2007.
128
5.4 AVALIAO DA FREQUNCIA DE ANAPLASMATACEAE CONSIDERANDO

ANIMAIS POSITIVOS EM PELO MENOS UM MTODO DE DIAGNSTICO
Vrios autores tm mostrado a ocorrncia mundial de erlichiose monoctica
canina e que a metodologia usada na seleo da populao e para deteco da
bactria ou anticorpos, pode influenciar na porcentagem encontrada (STICH et al.,
2008), por isso, no presente estudo, foram usadas metodologias que se
complementam no diagnstico da doena. No entanto, para o diagnstico da
anaplasmose canina, poucos estudos sobre a frequncia na populao tm sido
feitos, tanto no Brasil, quanto no mundo. Talvez por ser considerada menos
patognica tanto com infeco natural (RIKIHISA, 1991; HARRUS et al., 1997a)
como em infeces experimentais (FRENCH e HARVEY, 1983; GAUNT et al., 2010).
A Tabela 24 mostra a comparao entre a frequncia observada entre os
mtodos usados nesse estudo, para Anaplasmataceae, E. canis e A. platys. Sendo
que, para esse ltimo, apenas um mtodo foi considerado.
Tabela 24: Resultados das pesquisas de A. phagocytophilum e E. canis por

sorologia, Anaplasmataceae, E. canis e A. platys por PCR e esfregaos
sanguneos, em amostras de ces do municpio de Maric/RJ, em 2007.
METODOLOGIA
SOROLOGIA
PCR
PM
ESPCIES PESQUISADAS
TOTAL AMOSTRAS
A
A. p E.canis A E.canis A. platys
N0
89
41
71
62
6
6
35
%
60,1 27,7
48
40
3,9
3,9
22,6%
Legenda: A = Anaplasmataceae; A. p = A. phagocytophilum; P M = Pesquisa
(morfolgica) em Lmina
Para obteno do valor de frequncia total de Anaplasmataceae na populao
avaliada, foram consideradas todas as amostras que indicaram exposio (contato
com a bactria) ou evidncia direta da bactria. Portanto, todas as amostras
positivas nas reaes de PCR, todas as amostras positivas nas reaes sorolgicas
para E. canis e A. phagocytophilum e todas as amostras positivas na pesquisa
morfolgica
em
lmina,
porm,
descontadas
as
amostras
que
foram
simultaneamente positivas em mais de um teste. Esses resultados esto

sumarizados na tabela 24a e, na tabela 25, distribudos pelos bairros.
129
Tabela 24a: Resultados da frequncia de Anaplasmataceae em ces do

municpio de Maric/RJ em 2007, segundo avaliao de PCR, sorologia e
pesquisa em lmina.
Frequncia total
Total de P(+) S(+) PS(+) L(+) LP(+) LS(+) LPS(+)
de
amostras
Anaplasmataceae
155
62
89
42
35
18
25
11
112
40
60,1
27,1
22,6
11,6
16,1
7,1
72
Legenda: P= PCR; S = Sorologia; L = Pesquisa em lmina; (+) = reao ou pesquisa

positiva.

bairros do municpio de Maric/RJ, em 2007, segundo avaliao de PCR,
sorologia e pesquisa em lmina.
TESTES REALIZADOS
N0 amostras
BAIRRO
TOTAL
coletadas
LMINAS*
PCR (+) SOROLOGIA PCR (+)
(+)
(+)
Sorologia
Total/sorologia
(+)
BAMBU
67/65
13 (19,4%)
30
(44,8%)
33 (50,8%)
19/65
(29,2%)
44/67
(65,7%)
ESPRAIADO
50/48
14 (28%)
33 (68,7%)
SO JOS
24/22
7 (29,2%)
CENTRO
14/13
1 (7,1%)
11
(22%)
12
(50%))
9
(64,3%)
8/48
(16,7%)
8/22
(36,4%)
7/13
(53,8%)
38**/50
(76%)
19**/24
(79%)
11/14
(78,6%)
TOTAL
155/148
35/155
(22,6%)
62/155
(40%)
89/148
(60,1%)
42/148
(28,4%)
112*/155
(72%)
14 (63,6%)
9 (69,3%)
* Descontados do total pois foram PCR ou sorologia positivas.

**Acrescidas das 3 amostras com incluses que tiveram amostras negativas em
PCR e sorologia.
Essas diferenas no refletem maior ou menor eficincia, e sim, a fase em
que se encontra a infeco dos animais testados. No caso da avaliao morfolgica,
entretanto, a baixa especificidade pode levar a falso positivo, uma vez que outras
estruturas podem ser confundidas com mrulas, mesmo pelos patologistas mais
experientes (HARRUS e WANER, 2011; LITLLE, 2010). Alm de no ser possvel
diferenciar a espcie pela morfologia ou mesmo pela clula com incluso
(ALMOSNY, 1998).
A anlise da frequncia distribuda pelos bairros mostra que esta variou de
65,7 a 79%, tendo 74,8% de mdia. Por essa anlise, o bairro de Bambu teria a
130
menor freqncia e So Jos a maior. No entanto, isso pode ser um reflexo da

diferena de amostras coletadas em cada bairro.
O objetivo de somar os valores, obtidos na anlise de PCR com a sorolgica,
foi ampliar a possibilidade de deteco de todos os ces que possam ter sido
apenas expostos bactria, produzindo anticorpos, e tambm aqueles que tm o
microrganismo no sangue, sem ter ainda, desenvolvido anticorpos, e tambm
aqueles com as duas situaes: com a bactria e com anticorpos.
Esses resultados mostram que 112/155 (72%) da populao de ces
analisada tiveram contato ou ainda tem uma bactria da famlia Anaplasmataceae
no sangue. Poucos estudos tm sido feitos considerando a freqncia total de
bactrias da famlia Anaplasmataceae no Brasil.
Macieira et al., (2005) e Ferreira et al., (2008a) avaliaram ces da regio
metropolitana do Rio de Janeiro atravs de protocolo de PCR e encontraram assim
uma frequncia entre 18 e 19%, menor do que a observada no estudo em Maric.
A anlise sorolgica detectou a maior porcentagem de indivduos positivos
para Anaplasmataceae. No entanto, isso no quer dizer que estes animais
estivessem doentes, como demonstrado em estudo experimental (GAUNT et al,
1996). Para um estudo de freqncia na populao isso mostra que a pesquisa de
anticorpos capaz de detectar maior parte de indivduos positivos por se tratar de
um teste capaz de detectar todos os indivduos que tiveram exposio bactria
(RISTIC et al., 1972). J a PCR detectou apenas aqueles ces que ainda estavam
com a bacteremia (LITTLE, 2010; HARRUS e WANNER, 2010). Sendo que esses
animais poderiam ou no ter produzido anticorpos. Como descrito por Almosny
(1998), na fase aguda pode ocorrer ttulo negativo para a bactria.
Por isso, para o estudo da freqncia, a soma da populao soropositiva com
a positiva em pesquisa de DNA bacteriano, mostra mais precisamente quanto da
populao est exposta bactria (MENESES et al., 2008).
5.4.1 Frequncia de E. canis
Para obteno do valor de frequncia de E. canis na populao avaliada,
foram consideradas todas as amostras positivas nas reaes de PCR com
iniciadores espcie especficos ECAN5 e HE3, confirmadas por sequenciamento e,
tambm todas as amostras positivas nas reaes sorolgicas para essa espcie,
131
determinando uma frequncia de 47,7% na populao avaliada. No foram

consideradas as amostras com incluses de mrulas observadas em esfregao, por
essas no poderem definir a espcie, apenas por caractersticas morfolgicas
(HARRUS e WANNER, 2010). Esses resultados esto sumarizados na Tabela 26.
O objetivo de somar os valores obtidos na anlise de PCR com a sorolgica,
tambm foi ampliar a possibilidade de deteco de todos os ces, como explicado
para a frequncia geral de Anaplasmataceae.
Apesar da frequncia encontrada para Anaplasmataceae ser muito superior a
dos estudos de Macieira et al., 2005 e de Ferreira et al., 2008a,
na regio
metropolitana do Rio de Janeiro, a frequncia de deteco das bactrias E. canis e

A. platys foi menor, considerando que usaram a mesma metodologia de PCR. Essas
diferenas podem estar relacionadas com o tipo de populao selecionada. No
entanto, para E. canis o somatrio da populao com bacteremia, detectada por
PCR, com aquela somente com reao sorolgica, mostra uma porcentagem maior,
de positivos, no municpio de Maric.
A anlise da frequncia distribuda pelos bairros mostra uma variao de 41,8
a 57,1%, tendo 50,2% de mdia. Por essa anlise, o bairro de Bambu teria a menor
freqncia e o Centro a maior. No entanto, isso tambm pode ser um reflexo da
diferena de amostras coletadas em cada bairro.
Tabela 26: Resultados da frequncia de E. canis em ces, de quatro bairros do
municpio de Maric/RJ em 2007, segundo avaliao de PCR e sorologia.
TESTES REALIZADOS
BAIRRO
N0 amostras
coletadas
total/sorologia
PCR
(+) E.
canis
PCR (+) E.
canis e A.
platys
SOROLOGIA
(+) E. canis
PCR (+)
Sorologia (+)
E. canis
BAMBU
67/65
26
ESPRAIADO
50/48
25
SO JOS
24/22
12
CENTRO
14/13
TOTAL
155/148
71
Total
E. canis
(%)
28/67
(41,8%)
26/50
(52%)
12/24
(50%)
8/14
(57,1%)
74/155
(47,7%)
Na frequncia de E. canis a anlise sorolgica tambm detectou a maior

porcentagem de indivduos positivos (71/155). No entanto, como discutido
132
anteriormente, isso no quer dizer que estes animais estivessem doentes (GAUNT
et al, 1996). Apesar da alta sensibilidade do teste sorolgico, a reao encontrada,
no distingue uma infeco presente da exposio prvia ao agente, portanto,
superestima o nmero de ces doentes (WANER et al., 1995; WEN et al., 1997).
Portanto, para o estudo da freqncia, a soma da populao soropositiva com a
positiva em pesquisa de DNA bacteriano, mostra, de forma mais precisa, quanto
essa populao est exposta bactria, como o trabalho de Meneses et al., (2008),
em que foram analisados 75 ces suspeitos e 98,7% (74/75) foram soropositivos,
33,3% (25/75) tiveram DNA de E. canis detectados e 5,33% (4/75) tiveram mrulas
observadas em esfregao. Sendo que os da identificao morfolgica poderiam no
ser dessa espcie de Anaplasmataceae. No trabalho desses autores dois animais
diagnosticados morfologicamente no foram PCR positivo.
Ainda no estudo de Meneses et al., (2008), foram feitas anlises dos ttulos de
anticorpos nos ces positivos na PCR e no houve relao entre aqueles com ttulos
elevados e a PCR, uma vez que os ttulos mais baixos foram os mais frequentes.
Segundo Harrus et al., (1998; 2004), isso pode ser explicado pelo nmero de ces
na fase aguda que ainda no produziram altos ttulos de anticorpos especficos ou
que estavam no incio da fase subclnica, quando E. canis se encontra em menor
nmero na circulao sangunea, e pelo fato de o bao ser o local de replicao.
Portanto, essa variao de freqncia no se relaciona com a eficincia do
mtodo diagnstico e sim com a fisiopatogenia da doena, onde aqueles animais
que j no apresentavam a bactria no sangue, no foram identificados pela PCR
(LITTLE, 2010; HARRUS e WANNER, 2010), mas poderiam ou no ter desenvolvido
anticorpos se tivessem contato com a bactria (GAUNT et al, 1996). O fato de terem
sido PCR negativo, tambm no elimina a possibilidade de que tivessem a bactria
no organismo, j que esta pode se albergar em outros sistemas que no o
sanguneo (GAUNT et al., 1996; HARRUS et al., 1998; HARRUS et al., 2004).
Tambm os estudos de Carlos et al., (2007) e Carvalho et al., (2008), feitos
na mesma regio do sul da Bahia/BR, pesquisando E. canis, chegaram a
freqncias muito diferentes (36 e 7,8%, respectivamente) pelo fato de terem usado
testes sorolgicos e moleculares respectivamente, mostrando a importncia de se
usar os dois mtodos para abranger animais nos dois estados fisiopatognicos da
infeco: com anticorpos e com a bactria.
133
A maioria dos estudos conduzidos em regies semelhantes, no Estado do Rio

de Janeiro, baseou-se apenas no diagnstico morfolgico, justificando as diferenas,
como OOdwyer et al., (2001) que encontraram 4,8%; Albernaz et al., (2007) 13,9% e
Accetta (2008) 1,8%. O diagnstico morfolgico no permite identificar a espcie da
bactria, alm de que apenas uma pequena porcentagem dos ces infectados pode
ser diagnosticada por esse mtodo, ainda que o animal tenha a bactria no sangue
(HARRUS e WANNER, 2010).
Os estudos de Labarthe et al., (2003) e Pimentel Jr (2007) que se basearam
em deteco sorolgica de E. canis, obtiveram frequncias de 29,6 e 47,4%
respectivamente, se aproximando da freqncia encontrada nesse estudo, em
Maric de 47,7%. Nesses dois estudos tambm foram usadas populaes
diferentes, no de Labarthe et al., (2003) foi uma populao selecionada de forma
semelhante, entre animais de campanha de vacinao, enquanto Pimentel Jr
selecionou amostras encaminhadas a laboratrio clnico particular e, no entanto,
com um valor bem semelhante ao encontrado. Santos (2008) tambm avaliou
sorologicamente uma populao de ces recolhidos pelo CCZ de Santa Cruz na
cidade do Rio de Janeiro, encontrando 88,6% de positivos, mostrando mais uma vez
que o tipo de populao pode ter maior ou menor frequncia da bactria. Da mesma
forma Macieira et al., (2005), comparou, atravs da PCR, a frequncia de E. canis
entre populaes caninas trombocitopnicas e no trombocitopnicas, evidenciando
26,8% e 3,5% respectivamente, confirmando o discutido por Dagnone et al., (2003)
que essas diferenas podem refletir um vis de seleo, porque ces
trombocitopnicos so mais propensos a serem testados para ehrlichiose.
5.4.2 Frequncia de A. platys
Para obteno do valor de frequncia de A. platys na populao avaliada,
foram consideradas todas as amostras positivas nas reaes de PCR com
iniciadores espcie especficos, com os pares PLATYS/EHR16SR e com os pares
GroAplatys-35s/GroAplatys-550as. Embora o fabricante do kit sorolgico Canine
SNAP 4Dx (IDEXX, Westbrook, maine USA) que detecta anticorpos contra
A.phagocytophilum, descreva a possibilidade de reao cruzada com anticorpos
para A. platys no se considerou as amostras com reaes positivas, para clculo da
freqncia de A.platys, na populao de ces de Maric.
134
Como j descrito no tpico de resultados da PCR, seis amostras (6/155;

3,9%) foram positivas para as reaes de PCR especficas para A.platys e
confirmadas por sequenciamento. No entanto, esse resultado, no reflete a real
quantidade de ces que poderiam estar em contato com a bactria, uma vez que
testes sorolgicos especfico, para detectar aqueles que tinham anticorpos como
resultado de uma exposio prvia, com ou sem a permanncia da bactria no
organismo, no foram avaliados. Essa porcentagem est abaixo daquela descrita
por Datnta-Torres (2008) para a variao da freqncia no Brasil, de 10,3 a 18,8%
embora o autor se refira a populaes hospitalares, diferentes da analisada no
presente estudo. Essa variao da freqncia apresentada, inclui o estudo de
Ferreira e tal., (2008a) de 15,8% na cidade do Rio de Janeiro e que avaliaram por
PCR, ces com incluses intraplaquetrias.
Os resultados obtidos com a anlise morfolgica dos esfregaos, no foram
includos nessa frequncia pelo fato de no poder se definir a espcie apenas pelas
caractersticas morfolgicas, ainda que as incluses estejam em plaquetas, uma vez
que estudos comprovam que outras espcies tambm podem parasitar esse glbulo,
como o experimento conduzido por Almosny (1998) e os estudos de (MYLONAKIS et
al., 2003; DAGNONE et al., 2009). Mesmo no estudo de Ferreira et al., (2007),
algumas das incluses consideradas pelos autores como caractersticas para A.
platys, foram PCR negativas.
No entanto, se considerarmos que os animais soropositivos para A.
phagocytophilum podem ser resultado de uma reao cruzada com A. platys, pode
ser observado um aumento de 41 amostras na populao positiva, totalizando
47/155 (30,3%).
5.5 AVALIAO DOS EXAMES HEMATOLGICOS E BIOQUMICOS

Na descrio desses resultados os animais foram agrupados de acordo com a
condio diagnstica, primeiro da PCR, genrico ou especfico, depois a sorologia,
de E. canis e/ou A . phagocytophilum. Alm desse primeiro critrio, foram separados
de acordo com a condio co-infectado ou no. Nesses resultados foram destacadas
e discutidas as alteraes mais comuns, sendo que, no caso da CK (Creatino
quinase), devido a variaes nos valores de referncia, a discusso no foi
considerada.
135
5.5.1 Ces com resultados PCR positivos com sorologias negativas

5.5.1.1 Sem parasitas co-infectantes
5.5.1.1.1 Ces PCR positivos apenas em protocolos genricos
Foram observados 12 ces positivos apenas em protocolos de PCR para
Anaplasmataceae (genricos), sem co-infeces e, os resultados desse grupo, esto
descritos na tabela 27.
A tabela 27 mostra que nos resultados hematolgicos, em relao mdia, a
maioria dos 20 parmetros analisados ficou nos intervalos de referncia. Apenas os
valores de plaquetometria (plaquetas), eosinfilo absoluto (EOS2) e neutrfilo
segmentado
relativo
(Se1)
foram
alterados,
definindo
respectivamente:
plaquetopenia (trombocitopenia), eosinofilia absoluta e neutropenia relativa,

associados a diferentes fases de ehrlichiose nos ces (ALMOSNY e MASSARD,
2002). Esses parmetros tiveram seus valores mnimos abaixo do normal e, com
exceo da plaquetometria, os valores mximos a cima do normal, possveis de
serem encontrados nas infeces ehrlichiais em ces, principalmente por A. platys
(ALMOSNY e MASSARD, 2002; GAUNT et al., 2010).
136
Tabela 27: Mdia, desvio padro, valor mnimo e mximo de valores

hematolgicos e bioqumicos de ces, do municpio de Maric/RJ em 2007,
PCR positivos/sorologia negativas para Anaplasmataceae, sem co-infeco.
(PCR positivos/sorologia negativas sem co-infeco)
VALORES HEMATOLGICOS
Variavel
Hemacias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
plaquetas
LG
BAS1
BAS2
EOS1
EOS2
Ba1
Ba2
Se1
Se2
Li1
Li2
MO1
MO2
N
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
Variavel
PPT
ALT
AST
CREATININA
UREIA
PT
ALBUMINA
GLOBULINA
GGT
FA
CK
N
12
11
11
11
11
12
11
11
11
11
09
Mdia
5.7683333
13.9666667
40.2833333
69.4416667
23.6250000
33.8250000
184333.33
14916.67
0.9166667
156.5000000
9.9166667
1420.50
0.5000000
65.3333333
58.4166667
8950.58
21.1666667
3005.25
9.0833333
1318.50
Desv Pad
1.0567603
4.3920038
8.9030979
4.5265798
4.4290621
5.0436504
162502.21
4710.88
1.2401124
218.1882007
6.4731380
965.4916317
0.7977240
131.1171117
11.9427295
4274.42
12.7052840
2091.26
5.4348762
807.7061234
Minimum
3.4600000
6.9000000
22.8000000
58.7000000
12.1000000
18.9000000
21000.00
7400.00
0
0
1.0000000
74.0000000
0
0
39.0000000
3774.00
3.0000000
672.0000000
3.0000000
447.0000000
Maximum Unidade
7.09000 x103/L
19.70000 /g/dL
50.60000 %
73.50000 fL
26.90000 pg
36.80000 %
493000. /L
22400. /L
3.00000 %
516.00000/L
22.00000 %
3784. /L
2.00000 %
448.00000/L
78.00000 %
16926. /L
45.00000 %
6795. /L
23.00000 %
3038. /L
VALORES BIOQUMICOS
Mdia
6.8666667
46.8181818
35.8181818
0.8272727
32.8181818
6.6
2.8272727
3.7909091
3.090909
75.000000
149.66677
Desv Pad
0.9354953
19.4875251
12.0980840
0.2866737
10.2549323
0.920637
0.5217105
1.0024515
2.151
74.69404
96.25097
Minimum
5.2000000
21.0000000
25.0000000
0.4000000
17.0000000
5.2000000
1.9000000
2.4000000
0.0000
13.00000
41.00000
Maximum
8.40000 g/dL
81.00000 U/L
60.00000 U/L
1.30000 mg/dL
54.00000 mg/dL
7.90000 g/dL
3.60000 g/dL
5.30000 g/dL
8.00000 U/L
262.00000 U/L
312.00000 U/L
Legenda: N = nmero de ces; Desv Pad = Desvio Padro; Hemcia x103/L VG = Volume Globular %; VCM =
Volume Globular Mdio fL; HCM = Hemoglobina Globular Mdia pg; CHCM = Concentrao de Hemoglobina
Globular Mdia %; plaquetas = plaquetometria/L; LG = Leucometria Global/L; BAS = Basfilo; EOS =
Eosinfilo; Ba = Basto; Se = Segmantado; Li= Linfcito; Mo= moncito; 1 = valores relativos %; 2 = Valores
absolutos /L; PPT = Protenas Plasmticas Totais; ALT = Alaninaminotransferase; AST =
Aspartatoaminotransferase; PT = Protenas Sricas Totais; GGT = Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase
Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST, GGT, FA, CK em U/L; Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina
em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL
Analisando os valores mnimos e mximos dos outros parmetros cujas

mdias foram normais, verifica-se que hematimetria (hemcias), hemoglobinometria
(hemoglobina), volume globular (VG), ndices hematimtricos (VGM, CHGM e HGM)
eosinfilos e linfcitos tiveram seus valores mnimos abaixo do normal, definindo
anemia, microctica/hipocrmica, associada a deficincia de sntese de hemoglobina,
eosinopenia e linfopenia, associadas a imunossupresso, enquanto os valores
mximos apresentaram acima do normal para hemoglobinometria, HGM, CHGM,
sugerindo provvel processo hemoltico (JAIN, 1993; THRALL, 2003), leucocitose,
DNNE, eosinofilia, basocitofilia, linfocitose e monocitose, compatveis com processo
137
inflamatrio e/ou infeccioso crnico (JAIN, 1993) que na ehrlichiose canina pode ser
frequente (THRALL, 2004) ou estar associada fase subclnica que pode ter
respostas leucocitrias variveis e sem sintomas clnicos. Os valores mdios dos
ndices hematimtricos dentro do intervalo de normalidade, sugeriram que os
quadros de anemia, em sua maioria, eram normocticos e normocrmicos, portanto,
de anemias arregenerativas, tambm comum na fase subclnica (ALMOSNY e
MASSARD, 2002) ou mesmo aguda (WANER et al., 1995) provavelmente
associadas a inflamao.
Nos resultados bioqumicos observou-se que quanto aos valores mdios, dos
11 parmetros analisados, apenas o da uria ficou acima do mximo normal para
espcie, indicando diminuio da filtrao glomerular que pode ser de origem prrenal ou possvel leso renal que pode ocorrer nas infeces ehrlichiais, uma vez
que essas bactrias so levadas para vrios rgos como rins, fgado e linfonodos,
onde se multiplicam em macrfagos e so disseminadas para outros locais,
interagindo com clulas endoteliais de vasos de menor calibre induzindo vasculite ou
resposta inflamatria perivascular (HARRUS et al., 1997a; ALMOSNY, 1998;
ALMOSNY
MASSARD,
2002)
podendo
desenvolver
glomerulonefrite
insuficincia renal na fase crnica (ALMOSNY, 1998). Embora tenha havido

elevao nos valores sricos mdios de uria, os valores da creatinina foram todos
normais nos indivduos desse grupo, indicando que, ainda que alguns indivduos
pudessem apresentar leso renal, esta pode no ser acentuada (KANEKO, et al.,
1997; LATIMER et al., 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011). Estes dois, ndices,
entretanto,so considerados de baixa sensibilidade e especificidade diagnsticas
para disfuno renal (STOCKHAM e SCOTT, 2011).
Analisando os intervalos mnimos e mximos dos outros parmetros
bioqumicos cujas mdias ficaram dentro dos valores de referncia, observou-se que
apenas o perfil protico apresentou valores mnimos abaixo no normal, indicando
que possivelmente existam casos de hipoproteinemia associados a causas variadas,
como perda protica, decorrente de vasculite sistmica (HARRUS et al., 1997a;
ALMOSNY, 1998; ALMOSNY e MASSARD, 2002), ou deficincia de sntese,
decorrente de leso heptica (CASTRO et al., 2004), responsveis por sintomas nas
infeces ehrlichiais como edema de membros (ALMOSNY, 1998; NEER e
HARRUS, 2006), edema de saco escrotal e perda de peso acentuada (NEER e
HARRUS, 2006). Em estudo com infeco experimental, foi verificado que a protena
138
plasmtica total (PPT) diminuiu significativamente na terceira semana (CASTRO et

al., 2004).
E, segundo Little (2010) na ehrlichiose canina pode ser achado
hipoalbuminemia. Na anaplasmose canina pode ocorrer hipoalbuminemia (HARRUS

et al., 1997a; BAKER et al., 1988; KAKOMA et al., 2000; LITTLE, 2010), em resposta
inflamao e resposta imune ao microorganismo (BAKER et al., 1988, LITTLE,
2010).
Com relao aos valores mximos, alm da uria, em que j foi observado a
mdia acima dos valores de referncia, o perfil protico, GGT e FA tambm
apresentaram valores mximos acima dos normais para espcie. Segundo Little
(2010) na ehrlichiose canina pode ser achado hiperglobulinemia com gamopatia
policlonal ou monoclonal. Uma expanso monoclonal de linfcitos T foi encontrada
em ces infectados por E. canis que tinham uma gamopatia concomitante com picos
eletroforticos estreitos (STOCKHAM e SCOTT, 2011). Na anaplasmose canina
pode
ocorrer
aumento
de
protenas,
com
aumento
de
globulinas,
hipergamaglobulinemia, associada com elevaes dos valores de IgM e IgA

(HIBLER et al., 1986; ALMOSNY; MASSARD, 2002; OLIVEIRA et al., 2008; LITTLE,
2010).
Embora
no
se
tenha
definido
a(s)
espcie(s)
nesse
grupo
de
Anaplasmataceae, pode ser afirmado que embora os valores mdios proticos

encontrados neste grupo, estejam dentro do normal, a presena de animais com
hiperglobulinemia foi de 36%, mostrando que existem ces com resposta imune que
levou ao aumento do ttulo de anticorpos sricos (SWANGO et al., 1989; HOSKINS,
1991), podendo caracterizar intensa estimulao antignica, levando a uma reao
de hipersensibilidade ou resposta autoimune que pode aparecer na fase crnica de
infeces por essas bactrias (SWANGO et al., 1989) e, esse aumento de globulinas
tambm pode ser uma das causas para a diminuio de albumina (STOCKHAM e
SCOTT, 2011). Alguns animais tiveram alterao da funo heptica, que tambm
pode ser uma das causas de hipoalbuminemia (KANEKO, et al., 1997; LATIMER et
al., 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011), porm, como foi indicada pela associao
com o aumento da atividade srica de FA, achado frequente em ces positivos para
Ehrlichia sp. em populao hospitalar
(OLIVEIRA et al., 2008) e de GGT,
provavelmente no interferiu na sntese de albumina. O aumento de ambas sugeriu

colestase ou hiperplasia biliar (KANEKO, et al., 1997; LATIMER et al., 2003;
STOCKHAM e SCOTT, 2011) mas a sensibilidade destas enzimas ao cortisol
139
(STOCKHAM e SCOTT, 2011)tambm podero relacionar esta elevao ao estresse

sistmico causado por doenas..
Embora estudos tenham revelado que a atividade srica de ALT pode estar
elevada em infeces por Ehrlichia sp. em ces (OLIVEIRA et al., 2008; LITTLE,
2010), nesse grupo, todos animais tiveram valores dentro da normalidade. Mas, as
elevaes das atividades sricas de FA e GGT, sugeriram colestase ou estresse
sistmico. (STOCKHAM e SCOTT, 2011).
5.5.1.1.2 Ces PCR positivos em protocolos especficos

No tiveram amostras positivas para E. canis ou A. platys em PCR com
sorologias negativas e sem co-infeco.
5.5.1.2 Ces PCR positivos soronegativos com parasitas co-infectantes
As
amostras
que
foram
positivas
em
protocolos
de
PCR
para
Anaplasmataceae (genricos), com sorologias negativas, mas tiveram co-infeco

com os outros parasitas que foram detectados, de diferentes grupos taxonmicos,
totalizaram apenas seis, cujos resultados hematolgicos e bioqumicos esto
descritos na tabela 28.
A alterao comum a todo grupo foi a trombocitopenia. Vrios so os fatores
desencadeantes de consumo plaquetrio em doenas infecciosas, principalmente
aquelas que afetam diretamente a circulao sangunea (JAIN, 19973; KANEKO,
1997; THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011). No sendo, portanto,
patognomnico de nenhuma doena especfica (COCKBURN e TROY, 1986; JAIN,
1993; STOCKHAM e SCOTT, 2011). Porm, no caso de co-infeces entre
hemoparasitas essa trombocitopenia pode ser mais acentuada (GAUNT et al., 2010),
como observada nos animais desse grupo e, em pelo menos um que teve a
plaquetometria abaixo de 100000/L, limite considerado clinicamente mais grave
(JAIN, 1993).
140
Tabela 28: Valores hematolgicos e bioqumicos de ces, do municpio de

Maric/RJ em 2007, PCR positivos/sorologia negativas para Anaplasmataceae,
com co-infeco.
Parmetro
N=1
Parmetro
N=3
mdia
Parmetro
N=2
mdia
Parmetro
N=1
Parmetro
N=3
mdia
Parmetro
N=2
mdia
Parmetro
LG
17300
LG
23400
9200
14100
15566
LG
14300
39100
26700
ERITROGRAMA E PLAQUETOMETRIA
Co-infectado com Babesia sp.
plaquetas Hemciasx103 Hemoglobina VG VCM
128.000
5,97
14,9
42 69,9
Co-infectados com D. immitis
plaquetas
Hemcias
Hemoglobina VG VCM
x103
168.000
6,45
16,9
48 74,5
82.000
5,42
13,9
39 71,9
190.000
7,20
17,3
48 66,1
146.667
6,36
16,0
45 70,8
Co-infectados com Hepatozoon sp. e D. immitis
plaquetas
Hemcias
Hemoglobina VG VCM
x103
146.000
6,11
17,1
46 76,0
188.000
4,25
11,0
32 75,6
167.000
5,18
14,1
39 75,8
BAS
BAS
1211
BAS
0
1
4
2
BAS
LEUCOGRAMA
EOS EOS Ba Ba
Se
10
1730 0
0
55
EOS
EOS
Ba
Ba
Se
HCM
24,9
CHCM
35,7
HCM
CHCM
26,2
25,6
24,1
25,3
35,1
35,6
36,4
35,7
HCM
CHCM
27,9
26,0
27,0
36,7
34,4
35,6
Se
Li
9515
19
Se
Li
0
12
2808
0
0
51
11934
92
4
368
0
0
76
6992
564
34
4794
0
0
36
5076
219
17
2657
54
8001
32
13
19
21
BAS
BAS
EOS
EOS
Ba
Ba
Se
Se
Li
1
2
1
143
782
462
8
2
5
1144
782
963
0
1
0,5
0
391
195
71
84
77
10153
32844
21498
8
3
5
N=1
PPT
6,8
ALT
38
AST
74
Parmetro N
PPT
ALT
AST
6,8
8,4
7,6
7,6
40
348
63
150
31
42
36
36
PPT
ALT
BIOQUMICA SRICA
Creatinina
Uria
PT
Albumina
0,9
43
7,6
3,7
Creatinina
Uria
PT
Albumina
Li
3287
Li
7488
1196
2679
3788
MO
9
MO
5
6
7
6
Li
1144
1173
1158
MO
1557
MO
1170
552
987
903
MO
12
8
10
MO
1716
3128
2422
Globulina
3,9
GGT
11
FA
97
CK
309
Globulina
GGT
FA
CK
4,1
5,2
5,2
4,8
1
5
2
2,7
95
1136
41
424
69
53
62
61
Globulina
GGT
FA
CK
=3
mdia
Parmetro N
1,3
36
7,2
3,1
1
39
8,7
3,5
1,6
21
7,8
2,6
1,3
32
7,9
3,1
AST
Creatinina
Uria
PT
Albumina
=2
8,2
27
9
1
72
7,7
3,1
4,6
23
39
8,8
8
20
0,5
13
4,9
0,9
4
1
44
mdia
8,5
17,5
14,5
0,75
42,5
6,3
2
4,3
12
41,5
Legenda: Hemcias= hematimetria/L; VG = Volume Globular %; VCM = Volume Globular Mdio fl; HCM = Hemoglobina Globular
Mdia pg; CHCM = Concentrao de Hemoglobina Globular Mdia %; plaquetas = plaquetometria /L; LG = Leucometria Global /L; B AS
= Basfilo; EOS = Eosinfilo; Ba = Basto; Se = Segmantado; Li= Linfcito; Mo= moncito; 1 0 = valores relativos %; 20 = Valores
absolutos /L; PPT = Protenas Plasmticas Totais; ALT = Alaninaminotransferase; AST = Aspartatoaminotransferase; PT = Prote nas
Sricas Totais; GGT = Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST, GGT, FA, CK em
U/L; Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL
93
141
Entre esses animais, apenas um apresentou anemia discreta e estava

indicando co-infeco com dois outros parasitas alm de Anaplasmataceae.
Provavelmente anemia da inflamao (JAIN, 1993; THRALL, 2003; STOCKHAM e
SCOTT, 2011), uma vez que esse animal tambm foi o que apresentou leucocitose
mais acentuada, acompanhado de alteraes especficas de processo inflamatrio
crnico.
Outro co tambm apresentou leucocitose, embora pouco menos intensa.
Neste animal, indicando co-infeco com D. immitis, destaca-se a eosinofilia com
linfocitose, tpicas de processos parasitrios intensos por nematdeos, com contato
ntimo no tecido (JAIN, 1993: THRALL, 2003). A eosinofilia tambm foi observada
em outros ces com D. immitis, embora no tenha sido um achado comum, bem
como a monocitose, porm, foram os mais frequentes, alterando os valores mdios
de eosinfilos em um grupo e de moncitos no outro grupo, com D. immitis. Esses
dois achados tambm foram observados no animal com babesiose, associado a
basocitofilia, e comum a processos inflamatrios crnicos onde h intensa
liberao de histamina e resposta imune celular (JAIN, 1993).
Em relao s alteraes bioqumicas a mais frequente foi no proteinograma,
indicando hiperproteinemia por aumento de globulinas, embora em alguns animais
tenha sido observado hipoalbuminemia. Essas alteraes so compatveis a
resposta inflamatria intensa, com produo no s de imunoglobulinas como de
outras globulinas da inflamao como alfa e betas globulinas (JAIN, 1993; KANEKO,
1997). Alguns animais apresentaram a uria aumentada, porm com ceatinina
dentro da normalidade, indicando leso renal menos evidencivel ou de causa prrenal (KANEKO, et al., 1997; LATIMER et al., 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011).
5.5.1.2.2 PCR positivos em protocolos especficos
Duas amostras foram positivas para E. canis em PCR e soronegativas,
porm, com co-infeco: uma com Babesia sp. e outra simultaneamente com
Hepatozoon sp. e D. immitis. Os resultados hematolgicos e bioqumicos esto
descritos na tabela 29. Nenhuma amostra foi encontrada com A. platys positiva em
PCR e soronegativa.
142

Maric/RJ em 2007, PCR positivos para E. canis e sorologias negativas, com
co-infeco.
Parmetro
N=1
Parmetro
N=1
Parmetro
N=1
Parmetro
N=1
Parmetro
N=1
Parmetro
N=1
Co-infectado E. canis e Babesia sp.
plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG VCM HCM
27000
1,69
4,0
13 75,0 23,9
Co-infectados com E. canis, Hepatozoon sp. e D. immitis
plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG VCM HCM
244.000
6,80
16,0
45 65,9 23,5
LG
8600
LG
26900
PPT
8,2
PPT
9,0
LEUCOGRAMA
Ba
Ba
Se
Se
Li
Li
1
86
89
7654
4
344
Co-infectados E. canis, Hepatozoon sp. e D. immitis
BAS BAS EOS
EOS
Se
Se
Li
5
1345
9
2421
48
12912
35
CHCM
31,8
CHCM
35,6
MO
6
Li
9415
MO
516
MO
3
BIOQUMICA SRICA
ALT AST Creatinina Uria
PT
Albumina Globulina
3
92
0,8
66
3,7
1,1
2,6
Co-infectados E. canis, Hepatozoon sp. e D. immitis
PT
Albumina Globulina
38
74
1,6
21
10,5
2,9
7,6
MO
807
GGT
5
FA
284
CK
580
GGT
3
FA
105
CK
120
Legenda:
Hemcias= hematimetria/L; VG = Volume Globular %; VCM = Volume Globular Mdio fl; HCM =
Hemoglobina Globular Mdia pg; CHCM = Concentrao de Hemoglobina Globular Mdia %; plaquetas =
plaquetometria /L; LG = Leucometria Global /L; BAS = Basfilo; EOS = Eosinfilo; Ba = Basto; Se =
Segmantado; Li= Linfcito; Mo= moncito; 10 = valores relativos %; 20 = Valores absolutos /L; PPT =
Protenas Plasmticas Totais; ALT = Alaninaminotransferase; AST = Aspartatoaminotransferase; PT = Protenas
Sricas Totais; GGT = Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST,
GGT, FA, CK em U/L; Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL
Embora o grupo seja estatisticamente no representativo, as alteraes

observadas foram expressivas das infeces presentes nesses dois animais. Na coinfeco com Babesia sp. a anemia e trombocitopenia intensas so consequncias
da hemlise (JAIN, 1993, THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011), como
tambm o aumento da AST, FA e CK (KANEKO, 1997). Embora a hiperproteinemia
seja esperada nesse quadro, a hemlise tambm pode ser responsvel pelo
aumento da PT, concomitante a diminuio de outras fraes proticas, refletidas na
diminuio da PT, por causa da diminuio de Albunima e Globulina (KANEKO,
1997; KUMAR et al., 2006). No outro animal no foi observado anemia nem
143
trombocitopenia e, o leucograma, associado ao perfil protico de hiperglobulinemia

compatvel de processo inflamatrio/infeccioso intenso (JAIN, 1993).
5.5.2 Ces com resultados PCR positivos com sorologias positivas
5.5.2.1 Ces com resultados PCR positivos com sorologias positivas sem coinfeco
O conjunto de amostras positivas simultaneamente na PCR e nas sorologias,
foi dividido entre aquelas que foram positivas nos protocolos genricos sem
definio da(s) espcie(s) e aquelas que foram E. canis ou A. platys. Cada um
desses grupos tambm foi dividido de acordo com o tipo de reao sorolgica
positiva: E. canis ou A. phagocytophilum. E, alm disso, tambm foram divididos de
acordo com a condio de co-infeco com os outros grupos taxonmicos. Assim, o
primeiro grupo, semelhantemente a diviso anterior foi daqueles ces positivos em
PCR genrico para Anaplasmataceae, a seguir.
Os ces desse grupo foram divididos de acordo com a sorologia para E. canis
ou A. phagocytophilum. E, esses subgrupos esto descritos a seguir.
para E. canis
Nove ces foram sororreativos para E. canis nessas condies de
positividade em PCR e sem co-infeces com os outros grupos taxonmicos
encontrados e, suas alteraes hematolgicas e bioqumicas, esto descritas na
tabela 30.
144

PCR positivos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis,
sem co-infeco.
Parmetro
PCR genrico positivos e sororreativos E. canis
plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG
VCM
HCM
CHCM
25,5
2
22,4
28,6
35,6
1
33,9
36,8
N=9
mdia
Desv Pad
MIN
MAX
Parmetro N
LG
169.778
69763
93.000
325.000
5,52
1,3
2,87
6,86
14,2
3,8
6,6
17,8
40
10
19
49
71,4
3,7
64,8
77,8
LEUCOGRAMA
BAS BAS EOS EOS Ba Ba Se
Se
Li
Li
MO
MO
=9
Mdia
Desv Pad
MIN
MAX
Parmetro
17211
6676
9200
32200
PPT
1
1,3
1
4
ALT
119
183
125
548
8
6
0
18
1222
863
0
2466
97
0,7 123
0
2
0
322
59
10511
24
3807
1648
11
6154
12 2224
1427
41
80
5612
25760
4
47
2
16
254
4830
GGT
FA
CK
1288
8366
BIOQUMICA SRICA
AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina
N=9
Mdia
Desv Pad
MIN
MAX
7,6
29
34
37
7,2
2,7
4,6
16,5
79
102
0,7
18,6
12
0,3
11
1,2
0,7
1,2
1,8
28
27
6,4
9,0
12
74
20
57
0,5
1,6
21
59
5,8
10
0,9
3,5
3
7,1
1
5
35
128
46
114
Legenda: Desv Pad = Desvio Padro; Hemcias= hematimetria/L; VG = Volume Globular %; VGM = Volume
Clobular Mdio fl; HCM = Hemoglobina Globular Mdia pg; CHCM = Concentrao de Hemoglobina Globular
Mdia %; plaquetas = plaquetometria /L; LG = Leucometria Global /L; BAS = Basfilo; EOS = Eosinfilo;
Ba = Basto; Se = Segmantado; Li= Linfcito; Mo= moncito; 10 = valores relativos %; 20 = Valores absolutos
/L; PPT = Protenas Plasmticas Totais; ALT = Alaninaminotransferase; AST = Aspartatoaminotransferase; PT
= Protenas Sricas Totais; GGT = Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase.
ALT, AST, GGT, FA, CK em U/L; Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL

para A. phagocytophilum
Apenas duas amostras foram encontradas nessa descrio, e suas alteraes
hematolgicas e bioqumicas esto na tabela 31.
145

Maric/RJ em 2007, PCR positivos para Anaplasmataceae, com sorologia
positivas para A. phagocytophilum, sem co-infeco.
PCR genrico positivos e sororreativos A. phagocytophilum
VCM
HCM
Parmetro
CHCM
N=2
72.000
117.000
Parmetro N = 2
5,50
5,11
38
35
69,1
68,8
24,7
24,6
LEUCOGRAMA
LG
BAS BAS EOS EOS Se
Se
Li
Li
20200
20200
Parmetro N
13,6
12,6
6
2
1212
404
20
26
4040
5252
45
47
9090
9494
21
22
4242
4444
BIOQUMICA SRICA
PPT ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina
35,7
35,8
MO
MO
8
3
1616
606
GGT
FA
CK
2
3
87
41
117
52
=2
8,0
8,4
36
60
35
24
1,2
0,8
45
31
7,7
6,8
2,4
1,4
5,3
5,4
Legenda:
Hemcias= hematimetria/L; VG = Volume Globular %; VGM = Volume Clobular Mdio fl; HCM =

para A.phagocytophilum e E. canis
Apenas uma amostra sem co-infeco foi PCR positiva em protocolo genrico
para
Anaplasmataceae
com
sorologia
positiva
simultaneamente
para
A.
phagocytophilum e E. canis, e suas alteraes hematolgicas e bioqumicas esto

descritas na tabela 32. Nesse animal no foram obtidos o eritrograma, a PPT e a
plaquetometria.
146
Tabela 32: Valores hematolgicos e bioqumicos de co, do municpio de

Maric/RJ em 2007, PCR positivo para Anaplasmataceae, com sorologia
positiva para A. phagocytophilum e E. canis, sem co-infeco.
LEUCOGRAMA
PCR genrico positivos e sororreativos A. phagocytophilum e E. canis
Parmetro
LG
BAS
BAS
EOS
EOS
Se
N=1
7000
13
910
67
Parmetro
N=1
Se
Li
Li
4690 13 910
MO
MO
490
BIOQUMICA SRICA
PCR genrico positivos e sororreativos A. phagocytophilum e E. canis
ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina GGT
41
47
1,4
31
7,7
2,9
4,8
FA
CK
39
74
Legenda: LG = Leucometria Global /L; BAS = Basfilo; EOS = Eosinfilo; Ba = Basto; Se = Segmantado;
Li= Linfcito; Mo= moncito; 10 = valores relativos %; 20 = Valores absolutos /L; ALT =
Alaninaminotransferase; AST = Aspartatoaminotransferase; PT = Protenas Sricas Totais; GGT =
Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST, GGT, FA, CK em U/L;
Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL
A anlise das tabelas 30, 31 e 32 foi feita em conjunto, embora

apresentassem algumas diferenas e o animal da tabela 32 no tivesse alguns
resultados hematolgicos. Nesse grupo de animais a trombocitopenia foi a alterao
mais frequente, embora no grupo sororreativo para E. canis o valor mximo tenha
mostrado que existiram amostras cujas contagens plaquetrias foram normais.
Esses achados foram compatveis com quase todos trabalhos que estudaram a
infeco por E. canis, onde a resposta imune humoral poderia ser um dos fatores
que contribuiriam para diminuio do nmero de plaquetas (CASTRO et al., 2004),
mas que essa caracterstica poderia ou no estar presente, principalmente em
animais sem evidncia de bacteremia (LITTLE, 2010).
A anemia no foi um resultado frequente, embora valores mnimos na srie
eritroctica do grupo positivo para E. canis tenha mostradso que alguns ces
desenvolveram essa alterao. No observou-se, no presente estudo, alteraes
nos valores da leucometria global na maioria desses ces, embora no grupo com
sorologia positiva para A. phagocytophilum a leucocitose tenha sido comum aos dois
animais, por causa de basocitofilia e eosinofilia, provveis de inflamao persistente
(JAIN, 1993), embora apenas um deles tivesse outras alteraes hematolgicas
concordantes, como monocitose.
As alteraes bioqumicas mais frequentes foram as do proteinograma,
compatveis com processo inflamatrio intenso, com resposta imune humoral, com
aumento de globulinas, justificando soro positividade desses animais para
147
Anaplasmataceae, como descrito em estudos anteriores que descrevem esse tipo de

infeco como causa de alteraes no perfil protico (JAIN, 1993; KANEKO, 1997;
THRALL, 2003), inclusive na eletroforese, com picos monoclonais (STOCKHAM e
SCOTT, 2011) e Hipergamaglobulinemia relatada com elevaes dos valores de IgM
e IgA (HIBLER et al., 1986; ALMOSNY; MASSARD, 2002; OLIVEIRA et al., 2008;
LITTLE, 2010).
Alguns animais apresentaram alteraes na uria, com elevao desta,
indicando possvel alterao pr-renal ou renal (KANEKO, 1997), como discutido
anteriormente.
5.5.2.1.2 Ces PCR positivos em protocolos especficos
5.5.2.1.2.1 Ces PCR positivos para A. platys sororreativas para A.
phlagocytophilum e/ou E. canis
As amostras PCR positivos para A. platys ou simultaneamente para A. platys
e E. canis com sorologia positiva para A. phagocytophilum ou E. canis e suas
alteraes hematolgicas e bioqumicas, totalizaram cinco amostras que esto
descritas na tabela 33a, 33b e 33c.
Tabela 33a: Valores hematolgicos eritrocitrios de ces, do municpio de
Maric/RJ em 2007, PCR positivos para A. platys ou A. platys e E. canis, com
sorologias positivas para A. phagocytophilum ou E. canis, sem co-infeco.
Parmetro N = 3
mdia
Parmetro N = 1
mdia G
N=1
mdia Gg
Desv Pad
Legenda:
PCR A. platys e sororreativos A. phagocytophilum
plaquetas Hemcias x103
Hemoglobina
VG
VCM
63.000
3,96
9,7
28
70,3
20.000
4,99
12,8
36
71,3
114.000
4,96
12,8
35
70,7
65.667
4,64
11,8
33
70,8
PCR A. platys e sororreativos E. canis
plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina
VG
VCM
27.000
6,80
16,1
45
66,9
Mdia considerando todos como um grupo
56.000
5,18
12,9
36
69,8
PCR A. platys e E. canis e sororreativo A. phagocytophilum
34.000
51.600
38527
HCM
24,4
25,6
25,8
25,3
CHCM
34,7
35,9
36,5
35,7
HCM
23,7
CHCM
35,4
24,9
35,6
4,28
10,3
30
68,5
24,1
35,2
5
1,1
12,3
2,5
35
6,9
69,5
1,8
24,7
1
35,5
0,7
Hemcias= hematimetria/L; VG = Volume Globular %; VGM = Volume Clobular Mdio fl; HCM =
plaquetometria /L.
148
Tabela 33b: Valores hematolgicos leucocitrios de ces, do municpio de

Maric/RJ em 2007, PCR positivos para A. platys ou A. platys e E. canis, com
sorologia positiva para A. phagocytophilum ou E. canis, sem co-infeco.
Parmetro
LEUCOGRAMA
BAS BAS EOS EOS
Se
Se
Li
LG
Li
MO
MO
0
9
882
64
6272
18
1764
9
882
0
5
580
50
5800
34
3944
11
1276
316
22
3476
51
8058
24
3792
1
158
Mdia
105
12
1646
55
6710
25
3167
7
772
Parmetro
LG
BAS BAS EOS EOS
Se
Se
Li
Li
MO
MO
N=1
17500
0
0
14
2450
36
6300
39
6825
11
1925
Mdia Geral considerando todos como um grupo
Parmetro
LG
BAS
BAS EOS EOS Ba
Se
Li
Li
MO MO
Ba Se
Mdia G 13675
0,5
79
12,5 1847
0
0
50 6607 29
4081
8
1060
N=1
14400
0
0
4
576
2
288
47
6768
31
4464
16
2304
Mdia Geral de todos acima: PCR A. platys ou A. platys e E. canis; sororreativo A. phagocytophilum ou E. canis
mdia Gg
13820
0,4
63
10
1592
0,4
58
50 6640 29 4158
10
1309
Desv
Pad
3118
1
141
7
1308
0
129
10
864
8
1811
5
848
N=3
9800
11600
15800
12400
0
0
2
1
Li= Linfcito; Mo= moncito; 10 = valores relativos %; 20 = Valores absolutos /L;
Tabela 33c: Valores bioqumicos de ces, do municpio de Maric/RJ em 2007,

PCR positivos para A. platys ou A. platys e E. canis, com sorologias positivas
para A. phagocytophilum ou E. canis, sem co-infeco.
Parmetro
N=3
Mdia
BIOQUMICA SRICA
AST
Creatinina
Uria PT
Albumina
Globulina
PPT
ALT
7,0
8,0
20
52
44
68
7,4
7,5
57
43
50
54
Parmetro
PPT
ALT
AST
N=1
7,0
38
48
1,7
1,5
39
42
6,2
6,7
GGT
FA
CK
3,2
3,6
3
3,1
6
1
255
180
187
61
0,9
31
7,9
3
1,4
37
6,9
3,3
Creatinina
Uria
PT
Albumina
4,9
3,7
6
4
67
167
169
139
Globulina
GGT
FA
CK
3,7
104
160
1
18
6,9
3,2
Parmetro
PPT
ALT
AST
Creatinina
Uria
PT
Albumina
Globulina
GGT
FA
CK
mdia geral
7,4
48
52
1,3
32
6,9
3,2
3,7
4,25
151
144
N = 1347
5,8
34
48
0,6
18
5,7
2,9
2,8
5
211 308
Mdia Geral de todos acima PCR A. platys e/ou E. canis sororreativo A. phagocytophilum ou E. canis
mdia Gg
7,0
40
51
1
29
6,7
3,2
3,5
4,4
163 177
Desv Pad
0,8
15
9
0,4
11
1
0,3
1
2
77
88
Legenda: PPT = Protenas Plasmticas Totais; ALT = Alaninaminotransferase; AST = Aspartatoaminotransferase; PT = Protenas Sricas
Totais; GGT = Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST, GGT, FA, CK em U/L;
Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL
149
5.5.2.1.2.2 Ces PCR positivos E. canis sororreativos para A. phlagocytophilum

e/ou E. canis
Trs amostras foram observadas com essas caractersticas, sendo que um
desses tambm foi colocado na tabela 33 para que fosse feita comparao, uma vez
que foi PCR positivo tanto para E. canis como para A. platys. Todos esses
resultados hematolgicos e bioqumicos esto na tabela 34.
Maric/RJ em 2007, PCR positivos para E. canis e sorologias positivas para E.
canis e/ou A. phagocytophilum sem co-infeco.
PCR E. canis e sororreativo E. canis

Parmetro plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG VCM HCM
N=1
82.000
3,44
8,8
25 72,6 25,5
PCR E. canis e sororreativo A. phagocytophilum e E. canis
N=1
36.000
4,78
11,4
32 67,6 23,7
N=1
34.000
mdia Gg
Desv Pad
50.667
27154
4,28
10,3
29
Mdia Geral de todos acima
4,17
10,2
29
0,7
1,3
3,7
CHCM
35,1
35,1
68,5
24,1
35,2
69,6
2,7
24,4
0,9
35,1
0,1
LEUCOGRAMA
mdia Gg
Desv Pad
PCR E. canis e sororreativo E. canis

LG
BAS BAS EOS EOS Ba Ba
Se
Se
Li
Li
11000
2
220
10
1100 0
0
77
8470
3
330
8300 2 166
8
664
2
166
65
5395 17
1411
PCR A. platys e E. canis e SORORREATIVO A. phagocytophilum
14400
0
0
4
576
2 288
47
6768 31 4464
11233
1
129
7
780
1
151 63 6878 17
2068
3057
1
115
3
281
1
144 15 1540 14
2144
Parmetro
BIOQUMICA SRICA
PCR E. canis e SORORREATIVO E. canis
AST
Creatinina
Uria PT
Albumina
Parmetro
N=1
N=1
N=1
PPT
N=1
7,0
N=1
8,8
ALT
Globulina
19
20
1,6
87
5,9
1,8
4,1
MO
8
MO
880
498
16
2304
10
5
1227
952
GGT
FA
CK
30
58
18
18
0,9
20
7,8
1,4
6,4
1
39
71
PCR A. platys e E. canis e SORORREATIVO A. phagocytophilum
N=1
5,8
34
48
0,6
18
5,7
2,9
2,8
5
211
308
mdia Gg
7,2
24
29
1
42
6,5
2
4,4
2,3
93,3 146
Desv Pad
1
9
17
0,5
39
1,2
0,8
1,8
2,3
102
141
Legenda: Hemcias= hematimetria/L; VG = Volume Globular %; VCM = Volume Globular Mdio fl; HCM =
Hemoglobina Globular Mdia pg; CHCM = Concentrao de Hemoglobina Globular Mdia %; plaquetas = plaquetometria
/L; LG = Leucometria Global /L; BAS = Basfilo; EOS = Eosinfilo; Ba = Basto; Se = Segmantado; Li= Linfcito; Mo=
moncito; 1 0 = valores relativos %; 20 = Valores absolutos /L; PPT = Protenas Plasmticas Totais; ALT =
Alaninaminotransferase; AST = Aspartatoaminotransferase; PT = Protenas Sricas Totais; GGT = Gamaglutamil transferase;
FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST, GGT, FA, CK em U/L; Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e
Globulina em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL
150
Os animais das tabelas 33 e 34 tiveram seus resultados discutidos juntos,

pelas semelhanas observadas. A trombocitopenia foi a alterao mais frequente e,
com exceo de um co positivo para A. platys com 114000/L, todos os animais
apresentaram trombocitopenia inferior a 100000/L, considerado de importncia
clnica, pelo fato de estarem mais vulnerveis a distrbios hemostticos (JAIN,
1993). considerada por todos os estudos de infeces por Ehrlichia sp. e A. platys
como a alterao mais comum, embora estudos recentes reforcem que no seja um
achado patognomnico (BULLA et al., 2004; MACIEIRA et al., 2005; LITTLE, 2010;
GAUNT et al., 2010). Como no foram encontrados ces PCR positivos para essas
espcies com sorologia negativa para ambas as bactrias desse grupo taxonmico e
sem co-infeco, no foi possvel discutir se a condio sorologia positiva, que indica
resposta imune humoral, se relaciona com maior ou menor trombocitopenia.
Com relao a outras alteraes hematolgicas a anemia tambm foi
frequente, embora nem todos animais a tivessem apresentado. Porm, todos os que
foram PCR positivos para E. canis desses grupos, inclusive o que foi
simultaneamente positivo para A. platys e E. canis, foram anmicos, normocticos e
normocrmicos arregenerativos, mostrando que essa infeco pode comprometer os
eritrcitos na produo ou na sobrevida (JAIN, 1993), embora estudos experimentais
no esclaream o mecanismo (KUMAR et al., 2006). A leucometria global foi normal
em todos esses animais, mostrando que pode no ter caractersticas tpicas de
infeco bacteriana ou de depresso medular, embora essas sejam descritas, mas
podem estar mais associadas a fase subclnica (ALMOSNY, 1998; CASTRO et al.,
2004). Dois ces positivos para A. platys na PCR apresentaram eosinofilia e, embora
apenas um desses tenha apresentado monocitose concomitante, essa alterao
pode estar relacionada cronicidade do processo patognico (JAIN, 1993). Apenas
um co com E. canis na PCR e, tambm soro positivo para esta bactria, apresentou
linfopenia mas, simultaneamente, esse animal teve aumento de uria, mais de trs
vezes maior o valor de referncia, o que pode comprometer a sobrevida desses
leuccitos na circulao (JAIN, 1993; THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011).
Esse animal tambm foi o nico com hipoalbuminemia que pode ser decorrente de
alteraes na filtrao glomerular (KANEKO, 1997). A elevao da uria tambm foi
comum nos ces positivos para A. platys e soropositivos para A.phagocytophilum
indicando alteraes pr-renais ou renais, sem cronicidade, combinadas com
151
creatinina normal nesses animais (KANEKO, 1997; THRALL, 2003; STOCKHAM e

SCOTT, 2011).
Outras alteraes no perfil bioqumico foram mais relacionadas ao
proteinograma.
Apenas
dois
tiveram
PT
elevadas
em
consequncia
de
hiperglobulinemia. Um dos animais positivos para A. platys e tambm apenas um

dos positivos para E. canis, o que poderia estar correlacionada a resposta imune
humoral indicada pela sorologia positiva (ALMOSNY, 1998; CASTRO et al., 2004;
HARRUS e WANER, 2010) e, outro co com discreta hiperalbuminemia. Neste
ltimo, tambm foi observado aumento discreto da uria, sugerindo alteraes prrenais com desidratao (JAIN, 1993; KANEKO, 1997; THRALL, 2003; STOCKHAM
e SCOTT, 2011). Nos demais animais o proteinograma foi normal.
O co positivo em PCR para A. platys e E. canis, alm de intensamente
trombocitopnico, anmico e com monocitose, caractersticos de infeces por
essas bactrias (JAIN, 1993; ALMOSNY, 1998; CASTRO et al., 2004; LITTLE, 2010)
foi o nico deste grupo com aumento de FA, sugestivo de colestase (KANEKO,
1997; THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011).
5.5.2.2 Ces com resultados PCR positivos com sorologias positivas com coinfeco
5.5.2.2.1 Ces PCR positivos apenas em protocolos genricos sororreativas
para E. canis e/ou A. phagocytophilum
Esse grupo de amostras foi dividido de acordo com o tipo(s) de parasita(s) coinfectantes e associados aos resultados da sorologia.
Entre as amostras analisadas, 11 tinham co-infeco com Leishmania sp. e
foram encontradas com essas caractersticas, PCR positivos, apenas em protocolos
genricos e soropositivas, mostradas nas tabelas 35a, 35b e 35c e assim divididas
em trs subgrupos: sete com sorologia positiva apenas para E. canis, uma para A.
phagocytophilum e trs com sorologias positivas para ambas espcies.
152
Tabela 35a: Mdia e desvio padro de valores hematolgicos eritrocitrios de

ces, do municpio de Maric/RJ em 2007, PCR positivos para
phagocytophilum, com co-infeco.
Parmetro
N=7
PCR genrico e sororreativos E.canis co-infectado Leishmania sp.
plaquetas Hemcias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
3
CHCM
x10
mdia
46.571
4,92
12,1
34
69,2
24,7
35,6
Desv Pad
21854
0,9
2,4
6
3
1,3
0,9
PCR genrico e sororreativos A. phagocytophilum co-infectado Leishmania sp.
Parmetro
plaquetas Hemcias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
3
x10
N= 1
19.000
5,42
14,5
40
73,5
26,8
36,5
PCR genrico e sororreativos E.canis e A. phagocytophilum co-infectado Leishmania sp.
N=3 mdia
52.333
5,07
12,4
35
68,7
24,5
35,7
Desv Pad
25968
1
3
8
3
1
1
mdia Gg
45.637
5,01
12,4
35
69,4
24,8
35,7
Desv Pad
22504
1
2
6
3
1
1
Legenda:
plaquetometria /L; Hemoglobina g/dL.
A trombocitopenia foi o resultado mais homogneo desses animais, refletido

na mdia geral, considerada entre todos trs subgrupos: com soropositividade s
para E. canis, s para A. phagocytophilum ou soropositivo para ambos.
Caracterstica descrita em todos os estudos com infeces por Ehrlichia sp. e que
pode ser mais intensificada com co-infeco (MOREIRA et al., 2003; SANTOS et al.,
2009; LITTLE, 2010; GAUNT et al., 2010).
Embora alguns animais tenham apresentado anemia, essa foi discreta, mas
arregenerativa, indicando diminuio na produo (JAIN, 1993; THRALL, 2003;
STOCKHAM e SCOTT, 2011), provavelmente associada inflamao.
153
Tabela 35b: Mdia e desvio padro de valores hematolgicos leucocitrios de

LEUCOGRAMA
Parmetro
BAS
LG
BAS
EOS
EOS
Ba
Se
Ba
Se
Li
Li
N=7
Mdia
MO
MO
12686
0,6
63
1011
188
55
6589
27
3868
966
6498
0,8
85
789
268
16
2858
18
5000
566
MO
MO
852
Desv Pad

Parmetro
N=1
LG
BAS
BAS
EOS
EOS
Ba
Ba
Se
Se
Li
14200
1278
142
65
9230
19
Li
2698

Parmetro
N=3 mdia
Desv Pad
mdia Gg
Desv Pad
LG
BAS
10000
5671
Se
Se
Li
49
4976
216
7
1170
8 3204
2
1
BAS
224
EOS
22
EOS
2052
Ba
Ba
Li
MO
MO
21
2316
432
1538
125
12091
101
13
1319
132
55
6390
24
3338
810
5811
142
936
225
14
2897
14
4002
506
Li= Linfcito; Mo= moncito; 10 = valores relativos %; 20 = Valores absolutos /L;
A LG foi normal sem alteraes especficas, o que pode caracterizar fase

subclnica de infeco (ALMOSNY, 1998; ALMOSNY e MASSARD, 2002; CASTRO
et al., 2004). Alguns apresentaram eosinofilia, mas estas no alteraram o valor
mdio para todo grupo. Essa caracterstica pode estar associada a possveis leses
teciduais profundas, causadas por parasitas (JAIN, 1993), como pode ocorrer na
leishmaniose.
Com relao s alteraes bioqumicas a hiperglobulinemia foi a mais
frequente, porm no foi refletida na mdia geral dos grupos, que ficou dentro do
intervalo
de
normalidade
para
espcie.
Alguns
hipoalbuminemia que se refletiu na mdia geral dos grupos.
animais
apresentaram
154
Tabela 35c: Mdia e desvio padro de valores bioqumicos de ces, do

municpio de Maric/RJ em 2007, PCR positivos para Anaplasmataceae, com
sorologia positiva para E. canis e/ou A. phagocytophilum, com co-infeco.
Parmetro
PPT
BIOQUMICA SRICA
ALT AST
Creatinina Uria PT
Albumina
Globulina
GGT
FA
CK
4,7
3,0
84
45
92
42
FA
CK
87
81
N=7
mdia
Desv Pad
7,8
1
110
126
41
14
1,1
0,2
33
16
8,4
1,2
2,6
0,4
5,8
1,2

PPT ALT AST Creatinina
Uria
PT Albumina
Globulina
GGT
Parmetro
N=1
8,0
39
36
1,2
37
6,6
3,6

Parmetro
mdia
PPT
ALT
AST
Creatinina
Uria
PT
Albumina
Globulina
GGT
FA
CK
8,4
21
25
50
7,7
2,1
5,7
1,3
46
44
Desv Pad
10
23
0,5
1,1
1,5
5,7
mdia Gg
Desv Pad
8,0
80

36
1
38
8
2,5
5,5
3,4
74
82
1,6
106
14
1,2
2,9
39
39
0,2
18
0,5
Legenda:
PPT = Protenas Plasmticas Totais; ALT = Alaninaminotransferase; AST =

Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST, GGT, FA, CK em U/L; Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina
em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL
As alteraes observadas no proteinograma so compatveis com processos

infecciosos, com intensa produo de anticorpos, o que pode levar a diminuio de
albumina (STOCKHAM e SCOTT, 2011).
Alguns animais tambm apresentaram elevao da uria, indicada na mdia
geral dos grupos e em cada subgrupo. Como esse aumento no foi acompanhado
de elevao da creatinina, pode estar associado alteraes pr-renais ou renais sem
cronicidade (KANEKO, 1997; THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011).
No grupo com soro positividade apenas para E. canis houve aumento de ALT,
sugestivo de colestase com ou sem leso de hepatcitos (KANEKO, 1997).
Duas amostras foram detectadas com co-infeco com D immitis e tambm
tinham, PCR positivos, apenas em protocolos genricos e soropositivas, mostradas
nas tabelas 36.
155

positiva para E. canis e A. phagocytophilum, com co-infeco.
PCR genrico e sororreativo E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis
Parmetro N = 2 plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
213
19.000
4,82
12,1
34 70,9 25,0
35,3
235
103.000
3,17
7,6
22 69,0 23,9
34,6
LEUCOGRAMA
PCR genrico e sororreativo E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis
Parmetro N = 2
LG
Se
Li
Li
MO
213
2500
1
25
7
175
66 1650 14 350
12
235
10100
0
0
8
808
69 6969 15 1515
8
Parmetro
BIOQUMICA SRICA
PCR genrico e sororreativo E. canis e A. phagocytophilum
PPT
ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina
GGT
FA
MO
300
808
CK
N=2
213
235
7,6
7,4
51
116
38
1,3
39
8,2
2,5
5,7
0
43 50
81
0,8
79
8,2
2,4
5,8
2
43 83
Outros dois ces foram detectados com co-infeco com Hepatozoon sp.
tambm com PCR positivos, apenas em protocolos genricos e soropositivas,
mostradas nas tabelas 37, subdivididos de acordo com a sorologia. Quatro ces coinfectados simultaneamente com D. immitis e Leishmania sp., descritos na tabela 38,
tambm subdivididos, de acordo com a sorologia. Um co com co-infeco de D.
immitis e Hepatozoon sp., descrito na tabela 39 e um co com co-infeco de D.
immitis, Leishmania sp. e Hepatozoon sp., descrito na tabela 40.
Os animais das tabelas 36, 37, 38, 39 e 40 foram discutidos juntos e
comparativamente entre eles e os da tabela 35, pelas condies semelhantes de
positividade na PCR, diferindo na sorologia e parasita(s) co-infectante(s).
156

positiva para E. canis e/ou A. phagocytophilum, com co-infeco.
PCR genrico e sororreativo E. canis co-infectado Hepatozoon
Parmetro plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
N = 1 381
75.000
4,06
9,1
26
64,9
22,5
34,6
PCR genrico e sororreativo E. canis e A. phagocytophilum co-infectado Hepatozoon
N = 1 629
165.000
4,94
12,4
35
70,6
25,0
35,4
LEUCOGRAMA
Parmetro
LG
BAS BAS EOS EOS Ba
Ba
Se
Se
Li
Li
MO MO
N = 1 381 16500
0
0
5
825
1
165 69 11385 4
660
21 3465
PCR genrico e SORORREATIVO E. canis e A. phagocytophilum co-infectado Hepatozoon
N = 1 629 33800
3
1014
15
5070 6 2028 34 11492 33 11154
9
3042
Parmetro
N=1
BIOQUMICA SRICA
PPT
GGT
FA
6,8 24
30
0,6
38
8,9
4,1
4,8
3
145
PCR genrico e sororreativo E. canis e A. phagocytophilum co-infectado Hepatozoon
N=1
9,0
12
25
1,1
38
8,5
2,5
43
CK
78
Legenda:
Todos esses animais apresentaram trombocitopenia, sendo que os que

tinham co-infeco com Leishmania sp. observou-se tendncia a desenvolver
trombocitopenia mais intensa, em torno de 50000/L, semelhante a co-infeco por
Babesia sp., mesmo quando nesta no havia sorologia positiva. Entre os ces
distribudos nessas cinco tabelas, apenas um teve plaquetometria prximo ao valor
mnimo normal, que foi de 199000/L.
157
Tabela 38: Mdia e desvio padro e valores hematolgicos e bioqumicos de

PCR genrico e sororreativo E. canis co-infectado D. immitis e Leishmania
Parmetro N = 2 plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
232
103.000
6,43
13,5
39 60,7 21,1
34,7
238
45.000
3,95
11,4
32 80,4 29,0
36,0
PCR genrico e sororreativo A. phagocytophilum co-infectado D. immitis e Leishmania
N = 1 203
19.000
6,65
17,3
48 72,9 26,1
35,8
PCR genrico e sororreativo A. phagocytophilum e E. canis co-infectado D. immitis e Leishmania
N = 1 554
38.000
4,58
10,6
30
66,3
23,1
34,9
mdia Gg
Desv Pad
51.250
36206
5,4
1,3
13,2
3
37
8
70,1
8
24,8
4
35,4
1
LEUCOGRAMA
Parmetro
LG
BAS BAS EOS EOS Ba Ba
Se
Se
Li
Li
MO MO
N=2
14900
0
0
7
1043 0
0
70
10430 18 2682
5
745
16600
0
0
26
4316 0
0
24
3984
38 6308 12 1992
N=1
14300 0
0
14
2002
1
143
44
6292 34
4862
7
1001
PCR genrico e sororreativo E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis e Leishmania
N=1
14200
0
0
6
852
3 426
48
6816
38 5396
5
710
mdia Gg
Desv Pad
15000
1110
Parmetro
BIOQUMICA SRICA
PPT
ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina GGT
N=2
0
0
0
0
13
9
2053
1590
1
1
142
201
47
19
6880
2667
32
9
4812
1540
7
3
1112
601
FA
CK
7,8
75
68
1,3
35
8,5
3,6
4,9
2
39
8,6
50
41
1,6
51
8,5
2,7
5,8
5
37
164
80
N=1
8,0 21
46
1,3
22
8,6
3,7
4,9
3
43
PCR genrico e sororreativo E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis e Leishmania
N=1
8,8
29
28
0,7
33
7,8
1,9
5,9
3
45 130
mdia Gg
Desv Pad
Legenda:
8,3
44
46
35
8,3
5,4
3,2
41
125
0,5
24
17
0,4
12
0,4
0,8
0,5
1,2
3,6
42
158
Embora esses animais no tenham a espcie de Anaplasmataceae definida, o

comportamento fisiopatognico parece ser semelhante aos de infeces por
Ehrlichia sp., em que a diminuio do nmero de plaquetas, principalmente
associado co-infeco, a principal caracterstica hematolgica. Alm disso, esses
animais foram sorologicamente positivos para E. canis e/ou A. phagocytophilum, o
que mostrou que tiveram contato com essas bactrias.
PCR genrico positivos e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis e
Hepatozoon sp.
Parmetro
N=1
Parmetro
N=1
plaquetas
199.000
Hemcias x103
5,16
Hemoglobina
12,0
VG
34
VCM
66,7
HCM
23,3
CHCM
35,0
LEUCOGRAMA
LG
Se
Li
Li
13400
2
268
15
2010
1
134 51 6834 19 2546
MO
13
MO
1742
BIOQUMICA SRICA
PCR genrico positivos e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis e Hepatozoon sp.
Parmetro
N=1
PPT
8,2
ALT
AST
Creatinina
Uria
PT
Albumina
Globulina
GGT
FA
13
12
0,5
19
7,1
1,3
5,8
3
79
Nos valores relacionados aos eritrcitos esses animais apresentaram

variao entre valores mnimos normais e anemia discreta, normoctica e
normocrmica arregenerativa, provavelmente decorrente de inflamao. Apenas um
animal, da tabela 38, apresentou macrocitose, mas sem indicao de regenerao
na hematoscopia, podendo estar relacionado carncia nutricional de elementos
para sntese de cidos nuclicos, como cido flico e vitamina B 12 (JAIN, 1993;
KANEKO, 1997).
No leucograma, dos 10 animais distribudos nas tabelas 36, 37, 38, 39 e 40,
apenas um foi leucopnico e outro teve leucocitose. Os demais tiveram a
CK
-
159
leucometria global normal. O animal leucopnico teve neutropenia, linfopenia e

monocitose relativa, combinados a anemia discreta e trombocitopenia muito
acentuada, podendo indicar possvel depresso medular leucocitria e tambm com
diminuio da produo de plaquetas e, em menor grau, a de eritrcitos, todos
compatveis com fisiopatogenia das infeces da ehrlichiose canina, principalmente
na fase cnica (JAIN, 1993; ALMOSNY, 1998; ALMOSNY e MASSARD, 2002;
CASTRO et al., 2004; LITTLE, 2010). O co que apresentou leucocitose, da tabela
37, apresentou perfil de infeco bacteriana crnico, trombocitopenia discreta sem
anemia, mas com valores eritrocitrios mnimos normais, talvez iniciando a
cronicidade observada na ehrlichiose canina.
PCR genrico positivos e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado 1, 2 e3
Parmetrto plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG
VCM
HCM
CHCM
N = 1 231
86.000
3,70
9,5
27
72,8
25,7
35,3
LEUCOGRAMA
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO
MO
N=1
15500
1
155
18
2790
0
0
55 8525 19 2945
8
1240
BIOQUMICA SRICA
Parmetro
PPT
PT
Albumina Globulina GGT FA
N=1
11,8
32
51
1,1
29
13,2
2,3
10,9
35
Legenda:
GGT, FA, CK em U/L; Hemoglobina, PPT, PT, Albumina e Globulina em g/dL. Creatinina, Uria em mg/dL. coinfectado 1, 2 e 3 = co-infectado D. immitis, Leishmania sp. Hepatozoon sp.
Esses dois animais apresentaram uria elevada podendo ser de origem prrenal ou renal, mas sem cronicidade por causa da associao com creatinina normal
(KANEKO, 1997; THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011) e tiveram perfil
protico
elevado,
em
consequncia
de
hiperglobulinemia,
mas
com
CK
86
160
hipoalbuminemia, ambos em decorrncia da resposta imune humoral (JAIN, 1993;

KANEKO, 1997).
Os outros animais (tabelas 36 a 40) que tiveram a leucometria global normal
combinaram alteraes da leucometria especfica compatveis com processo
infeccioso crnico, uria aumentada e perfil protico com hiperglobulinemia, sendo
que, alguns com hipoalbuminemia. Todas essas alteraes eram semelhantes aos
dos animais anteriores, sugerindo processo em cronificao (JAIN, 1993), sendo
que, no caso do aumento dos valores sricos de uria, indicaram origem pr-renal
ou renal, mas sem cronicidade.
5.5.2.2.2 Ces PCR positivos em protocolos especficos sororreativas
Semelhantemente aos grupos anteriores, esses foram divididos de acordo
com o(s) parasita(s) co-infectantes.
5.5.2.2.2.1 Ces PCR positivos para A. platys sororreativos para E. canis
Apenas um animal foi PCR positivo para A. platys, soropositivo e co-infectado
e, seus resultados hematolgicos e bioqumicos esto descritos na tabela 41.
Semelhantemente
trombocitopenia
moderada,
alteraes
anemia
dos
moderada
outros
e
grupos,
normoctica
prevalece
normocrmica
arregenerativa, leucometria global com perfil de cronicidade (eosinofilia e discreta

linfocitose) e bioqumica srica com elevao de uria e hiperproteinemia com
hiperglobulinemia e hipoalbuminemia, tambm resultantes de resposta inflamatria
em cronificao (JAIN, 1993; KANEKO, 1997; THRALL, 2003; STOCKHAM e
SCOTT, 2011).
Como estatisticamente o resultado no foi representativo, no se pode
considerar essas caractersticas como comuns nesse tipo de infeco. Porm como
se assemelha a outros quadros de positividade sorolgica e com co-infeco, mas
com PCR de Anaplasmataceae, sugeriu-se que em outros indivduos seja provvel a
trombocitopenia com anemia e quadro leucocitrio e bioqumico srico secundrio a
inflamao/infeco crnica.
161

Maric/RJ em 2007, PCR positivo para A. platys, com sorologia positiva para E.
canis, com co-infeco.
Parmetro
N=1
Parmetro
N=1
Parmetro
LEUCOGRAMA
PCR A. platys e sororreativos E. canis co-infectado D. immitis
LG
Se
Li
12000
0
0
12
1440
0
0
42 5040 39
PPT
N=1
VCM
HCM
86.000
3,16
7,7
21
67,2
24,3
CHCM
36,2
Li
4680
BIOQUMICA SRICA
10,0
49
43
0,9
53
9,8
7,8
MO
7
MO
840
GGT
FA
CK
48
50
Legenda:
5.5.2.2.2.2 Ces PCR positivos para E. canis sororreativos para E. canis e A.

phagocytophilum
Apenas um animal foi PCR positivo para E. canis, soropositivo e co-infectado
e, seus resultados hematolgicos e bioqumicos esto descritos na tabela 42.
Embora
no
tenha
quantidade
de
indivduos
para
ser
um
grupo
estatisticamente representativo, como os outros grupos sorologicamente positivos

para E. canis e co-infectado de Leishmania sp. esse animal
apresentou
trombocitopenia moderada a acentuada, confirmando mais uma vez que o estado de

co-infeco intensifica a trombocitopenia.
162

Maric/RJ em 2007, PCR positivo para E. canis, com sorologia positiva para E.
canis e A. phagocytophilum com co-infeco.
PCR E. canis e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado Leishmania
Parmetro plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
N=1
72.000
4,04
9,9
29 71,2 24,7
34,6
LEUCOGRAMA
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO MO
N=1
11900
0
0
3
357
0
0 67 7973 20 2380 10 1190
BIOQUMICA SRICA
Parmetro PPT ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina GGT FA
N=1
6,4
29
23
0,7
43
7,9
2,7
5,2
81
CK
112
Legenda:
Anemia discreta normoctica e normocrmica arregenerativa com leucometria

global normal e sem alteraes especficas, sugerindo fase subclnica da infeco
ehrlichial (ALMOSNY, 1998; ALMOSNY e MASSARD, 2002; CASTRO et al., 2004),
associadas a uria discretamente aumentada, indicando diminuio de filtrao
glomerular de origem pr-renal ou renal, mas sem cronicidade e perfil protico srico
com hiperproteinemia com hiperglobulinemia, provavelmente pela resposta imune
humoral, tanto para E. canis e A. phagocytophilum como para Leishmania sp.
5.5.3 Ces PCR negativos soropositivos

Esses foram divididos de acordo com o quadro de co-infeco e separados
pelo tipo de reao sorolgica positiva para E. canis e/ou A. phagocytophilum.
163
5.5.3.1 Ces sem parasitas co-infectantes

Com essas caractersticas foram encontrados 17 animais, separados de
acordo com a positividade sorolgica como descrito a seguir.
5.5.3.1.1 Ces sororreativas para E. canis
Doze ces foram PCR negativos com sorologia positiva apenas para E. canis
e sem parasitos co-infectantes, descritos na tabela 43.
PCR negativos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis,
sem co-infeco.
Parmetro
PCR negativo e SORORREATIVOS E. canis
plaquetas Hemcias Hemoglobina VG VCM
HCM
CHCM
117.333
57308
23.000
242.000
25,7
2
22,5
29,1
36,1
1
34,8
36,8
MO
N = 12
mdia
Desv Pad
MIN
MAX
6,06
0,7
5,26
7,37
15,5
2
12,6
17,4
43
4
36
49
69,1
8
45,2
79,1
LEUCOGRAMA
Parmetro
N = 12
Mdia
LG
BAS
15533
Desv Pad
5394
MIN
8400
MAX
27700
549
Parmetro
BAS
EOS
EOS
Ba
Ba
Se
Se
Li
Li
0,4
73
10
1513
74
54
7795
30
5185
893
163
924
113
16
1938
18
4587
516
576
26
5252
10
1330
202
17
3366
360
73
10803
68
13736
10
1939
PPT
ALT
BIOQUMICA SRICA
AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina
8,4
1,5
47
20
45
16
6,0
10,8
18
84
22
72
MO
GGT
FA
CK
5,6
3,6
55
36
163
171
N = 12
Mdia
Desv Pad
MIN
1,2
0,3
41
16
9
1,4
3,2
0,8
5,9
1,5
0,6
19
6,4
1,8
3,4
0
12
57
1,8
72
11,1
4,7
8,9
12
114 523
MAX
164
Embora a mdia desses animais tenha demonstrado trombocitopenia discreta

a moderada, o intervalo entre valor mnimo e mximo mostrou que havia indivduos
com trombocitopenia muito acentuada e indivduos com contagem normal de
plaquetas. Esse estado flutuante da contagem plaquetria, se considerarmos que
esses animais poderiam estar em diferentes fases da infeco ehrlichial, embora no
estivessem com a bactria detectada no sangue, pde ser observado e mostrado em
vrios estudos de infeco experimental ou natural com diferentes espcies e cepas
de Ehrlichia sp. (TROY e FORRESTER, 1990; CASTRO et al,. 2004; STICH et al.,
2008; XAVIER et al., 2009).
A mdia do eritrograma indicou normalidade, no entanto, o valor mnimo do
VGM apresentou microcitose, caracterstica que poderia estar associada intensa
deficincia de sntese de hemoglobina (JAIN, 1993; THRALL, 2003; STOCKHAM e
SCOTT, 2011), que seria mostrada por presena de hipocromia, porm, isso no foi
observado nos resultados de CHGM. Essa microcitose tambm poderia estar
associada esferocitose por fragmentao eritrocitria imunomediada (JAIN, 1993),
mas essas alteraes tambm no foram observadas na hematoscopia.
No leucograma mdio a LG foi normal, mas apresentando eosinofilia e
linfocitose, compatveis com cronicidade inflamatria. Nos valores mximos normais
tambm foi observado monocitose que refora caracterstica de cronicidade (JAIN,
1993; THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011).
Na bioqumica srica desse grupo destacou-se nos valores mdios,
novamente a uria elevada, semelhante aos demais casos discutidos e,
hiperproteinemia com hiperglobulinemia, tambm semelhantes aos demais j
discutidos, alm da hipoalbuminemia que pode ser compensatria, observada no
seu valor mnimo.
5.5.3.1.2 Ces sororreativas para A. phagocytophilum
Quatro animais foram observados com essas caractersticas e seus
resultados hematolgicos e bioqumicos descritos na tabela 44.
165
Tabela 44 Mdia e desvio padro, de valores hematolgicos e bioqumicos de

ces, do municpio de Maric/RJ em 2007, PCR negativos para
Anaplasmataceae, com sorologia positiva para A. phagocytophilum, sem coinfeco.
PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum
Parmetro N = 4 plaquetas Hemcias Hemoglobina VG VCM
Mdia
121.000
4,94
12,2
34 69,2
Desv Pad
59727
0,8
3
8
4,5
HCM
24,5
2
CHCM
35,4
0,9
LEUCOGRAMA
Parmetro
N=4
Mdia
Desv Pad
Parmetro
LG
BAS
BAS
EOS
EOS
Ba
Ba
Se
Se
Li
Li
MO
MO
15075
297
961
139
50
7633
31
4568
10
1474
4528
1,4
192
3,6
593
206
2691
1025
433
PPT
BIOQUMICA SRICA
GGT
FA
CK
N=4
Mdia
Desv Pad
6,8
0,3
1
34
7
2,8
4,3
4,5 104 167
0,6
15
0,8
0,7
1,4
4,4
40 113
Nesses
trombocitopenia
39
18
48
5
animais
os
moderada,
valores
anemia
mdios
discreta
indicaram que
normoctica
tambm
e
houve
normocrmica
arregenerativa, leucograma com LG normal e linfocitose muito discreta e monocitose

discreta, compatveis com fase subclnica a crnica de infeco ehrlichial. A
bioqumica
srica
com
uria
elevada,
semelhante
aos
anteriormente e os outros parmetros dentro da normalidade.
casos
discutidos
166
5.5.3.1.3 Ces sororreativos para E. canis e A. phagocytophilum

Apenas dois ces apresentaram essas caractersticas e seus resultados
hematolgicos e bioqumicos esto descritos na tabela 45.
Tabela 45 Valores hematolgicos e bioqumicos de ces, do municpio de
Maric/RJ em 2007, PCR negativos para Anaplasmataceae, com sorologia
positiva para E. canis e A. phagocytophilum, sem co-infeco.
PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum
Parmetro plaquetas Hemcias Hemoglobina VG VCM HCM
CHCM
N=2
306.000
89.000
4,00
5,23
9,2
12,3
27
34
66,4
65,5
23,0
23,5
34,6
35,9
LEUCOGRAMA
Parmetro
N=2
Parmetro
LG
BAS
BAS
EOS
EOS
13800
276
11
14400
864
11
Ba
Ba
Se
Se
Li
Li
MO
MO
1518
55
7590
22
3036
10
1380
1584
43
6192
34
4896
864
GGT
FA
BIOQUMICA SRICA
CK
N=2
7,0
8,4
21
139
18
0,6
16
6,9
1,8
5,1
5
73 155
27
0,9
42
9,7
2,2
7,5
12
69 90
Sricas Totais; GGT = Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase ALT, AST,
Embora um desses animais estivesse com plaquetometria normal, o outro

apresentou trombocitopenia moderada acentuada o que faria uma mdia de
trombocitopenia discreta. Porm, como no h representatividade estatstica no se
pode afirmar que esse tipo de alterao seja significante ou no. Mas, como se
assemelha a alterao constantemente observada nos animais positivos para
Anaplasmataceae, esse achado pode ser considerado frequente, embora no
patognomnico (COCKBURN e TROY, 1986).
167
No leucograma foi observado LG normal com perfil especfico com eosinofilia

discreta acompanhada de linfcitos e moncitos normais ou aumentados,
compatveis de fase subclnica a crnica (JAIN, 1993; THRALL, 2003).
A bioqumica sria com um dos ces com uria elevada, semelhante a grupos
j discutidos anteriormente e ALT e GGT aumentados, indicando colestase
(KANEKO, 1997). Ambos tiveram alteraes na proteinemia com hiperglobulinemia
e hipoalbuminemia, semelhante a outros grupos, tambm j discutidos, que
poderiam estar com alteraes compensatrias no proteinograma.
5.5.3.2 Ces PCR negativos soropositivos com parasitas co-infectantes
Nesse grupo foram observados 29 ces que foram subdivididos de acordo
com a reao sorolgica. A fim de simplificar a discusso desses animais, nos quais
foram observadassemelhanas em suas alteraes, todos foram agrupados no
grupo com sorologia para E. canis e/ou A. phagocytophilum, independente do(s)
parasita(s) co-infectante, embora estivessem descritos em tabelas separadas.
5.5.3.2.1 Ces sororreativas para E. canis
O total de ces desse grupo foi de 14, descritos nas tabelas 46, 47, 48, 49 e
50, onde foi comum a trombocitopenia abaixo de 100000/L, considerada de
moderada a acentuada. Porm, raros animais tiveram contagem pouco acima desse
valor, mas ainda trombocitopnicos moderados, reforando que essa uma das
caractersticas mais comuns dos ces positivos.
Embora esses ces no tenham formado grupos de co-infectados com
representatividade estatstica, aqueles com Leishmania sp. e/ou Babesia sp.
apresentaram tendncia s trombocitopenias mais intensas.
168
Tabela 46 Mdia, desvio padro, valor mnimo e mximo de valores

PCR negativos para Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis,
com co-infeco
PCR negativo e sororreativos E. canis co-infectado Leishmania
Parmetro plaquetas HemciasX103 Hemoglobina VG VCM HCM
CHCM
N=7
mdia
Desv Pad
MIN
MAX
Parmetro
5,53
0,8
4,6
6,6
13,5
2,3
11
16,8
38
6,7
31
48
68
3,8
62
74
24,3
1
22,3
26,1
35,9
0,5
35,2
36,4
LEUCOGRAMA
BAS BAS EOS EOS Ba
LG
Ba Se
Se
Li
Li
Parmetro N = 7
Mdia
Desv Pad
MIN
MAX
49.143
37800
14.000
119.000
12557
4343
3200
16000
1
1
0
2
80
104
0
278
9
3
4
14
1232
629
128
1989
1
0,5
0
1
69
77
0
160
41
13
23
64
4858
1884
2048
7200
43
14
22
65
5680
2747
704
9490
BIOQUMICA SRICA
MO
MO
6
3
2
12
638
402
256
1452
GGT
FA
CK
N=7
Mdia
Desv Pad
MIN
MAX
Legenda:
9,1
1,3
22
10
29
8
2
2
29
14
9,1
1,4
2,3
0,5
6,3
2
3
2
46
8,7
49
10
7,2
10,6
10
41
17
38
0,9
7
12
53
7,2
10,9
1,5
3,1
3,1
8,9
1
6
29
57
34
62
169
Tabela 47 Mdia e desvio padro de valores hematolgicos e bioqumicos de

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis, com co-infeco.
PCR negativo e sororreativos E. canis co-infectado D. immitis
3
Parmetro plaquetas Hemcias X10
Hemoglobina VG VCM HCM
CHCM
N=3
mdia
Desv Pad
Parmetro N = 3
Mdia
Desv Pad
Parmetro
56.333
30664
5,07
1
13,6
3,5
37,6
9
74,1
2,4
26,7
1
LEUCOGRAMA
BAS BAS EOS EOS Ba
LG
Ba
Se
Se
Li
12133
7342
1
1
99
91
11
3
1287
946
61
8
7060
3887
18
12
2712
2428
9
3
BIOQUMICA SRICA
36
0,5
Li
MO
MO
976
409
61
8,4
7060
3887
GGT
FA
CK
N=3
Mdia
Desv Pad
8,0
1,1
42
27
41
18
2,2
92
7,8
2,7
5,1
4
58 114
1,8
106 0,4
0,9
1,2
1
37 22
No eritrograma foi observado variao entre valores normais e anemia

acentuada sendo que, um animal da tabela 48 (co-infectado com Hepatozoon sp.),
apresentou hipocromia, indicativo de diminuio de sntese de hemoglobina (JAIN,
1993; THRALL, 2003). A maioria, no entanto, apresentou valores normais nesses
parmetros.
No leucograma foi observada maior variao de resultados entre os animais,
porm, a maioria apresentou LG normal. Apenas um apresentou leucocitose,
acompanhada de linfocitose e monocitose, perfil mais tpico da cronicidade na
ehrlichiose canina (JAIN, 1993; ALMOSNY, 1998; ALMOSNY e MASSARD, 2002;
CASTRO et al., 2004; GAUNT et al., 2010). Nos co-infectados com Leishmania sp.
foram observados valores mnimos
nos resultados. Este animais apresentaram
leucopenia, neutropenia ou linfopenia,. Os demais que tiveram LG normais tiveram

seus perfis especficos bem variveis, com caractersticas de processo inflamatrio
170
agudo, subclnico ou crnico, no podendo ser traado um perfil mais comum a

todos. Alguns apresentaram eosinofilia que tambm pode ser uma caracterstica de
inflamao crnica ou mesmo de agresso parasitria tecidual, como discutido em
grupos anteriores.
positiva para E. canis, com co-infeco.
PCR negativo e sororreativos E. canis co-infectado Hepatozoon sp.
Parmetro plaquetas Hemcias X103 Hemoglobina VG VCM HCM
CHCM
N=2
81.000
33.000
Parmetro N = 2
Parmetro
2,85
5,18
4,9
11,4
20
33
69,9
63,0
17,0
21,9
24,4
34,8
LEUCOGRAMA
LG
Se
Li
Li
MO
MO
23800
11400
9
16
2142
1824
0
0
0
0
3
15
714
1710
1
2
238
228
46
54
10948
6156
41
13
9758
1482
BIOQUMICA SRICA
PPT ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina GGT
FA
CK
N=2
6,6
8,0
19
23
24
57
0,6
24
13,3
1,4
11,9
4
15 113
1,1
47
8,7
2,6
6,1
7
49 141
No perfil bioqumico as alteraes mais comuns foram no proteinograma,

onde todos das tabelas 46, 47, 48, 49 e 50 mostraram animais com hiperproteinemia
com hiperglobulinemia, semelhante aos grupos anteriormente discutidos, sendo que
tambm alguns apresentaram hipoalbuminemia que pode ser compensatria
hiperglobulinemia, como comentado.
171
Tabela 49 Valores hematolgicos e bioqumicos de co, do municpio de

PCR negativo e sororreativos E. canis co-infectado D. immitis e Babesia sp.
Parmetro plaquetas Hemciasx103 Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
N=1
39.000
5,17
14,5
39,8 77,0 28,1
36,5
LEUCOGRAMA
Parmetro LG
Se
Li
Li
MO
N=1
7700
10
770
77
53
4081
29
2233
BIOQUMICA SRICA
Parmetro PPT ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina GGT
N=1
30
539
FA
CK
1,2
26
7,8
3
4,8
2
87 62
VG = Volume Globular %; VCM = Volume Globular Mdio fl; HCM =
Legenda:
8,2
MO
36
Hemcias= hematimetria/L;
Nos animais com co-infeco com Leishmania sp. e naqueles com D. immitis,
foram observados ces com valores de uria elevada acompanhada de elevao
dos de creatinina, indicando leso renal mais grave, quer seja aguda ou crnica, que
pode estar associada a infeco ehrlichial (KANEKO et al, 1997; TROY &
FORRETER, 1990; HOSKINS, 1991a; CODNER et al., 1992; VARELA et al, 1997;
ALMOSNY, 1998). Na maioria, no entanto, os nveis de uria esteve aumentada
sem elevao da creatinina, podendo ser de causas pr-renais ou renais mais
brandas.
172

PCR negativo e sororreativos E. canis co-infectado Leishmanis sp., Hepatozoon sp. e
Babesia sp.
Parmetro plaquetas Hemcias x103 Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
N=1
31.000
4,14
9,2
26
63,0 22,1
35,1
LEUCOGRAMA
PCR negativo e sororreativos E. canis co-infectado Leishmanis sp., Hepatozoon sp. e Babesia sp.
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO MO
N=1
6600
13
858
330
56
3696
15
990
11
726
BIOQUMICA SRICA
PCR negativo e sororreativos E. canis co-infectado Leishmanis sp., Hepatozoon sp. e Babesia sp.
Parmetro PPT ALT AST Creatinina Uria PT Albumina Globulina GGT FA CK
N=1
0,8
35
8
2,7
5,3
8
102 162
Legenda:
7,6
40
53
5.5.3.2.2 Ces soropositivos para A. phagocytophilum

Da mesma forma que foi discutido com os ces soropositivos para E. canis,
esses tambm foram agrupados durante a discusso. Apenas seis ces formaram
esse grupo, subdividido nas tabelas 51, 52, 53 e 54.
Embora tambm todos tivessem apresentado trombocitopenia de moderada a
acentuada, no houve representatividade estatstica para comparar entre os casos
de co-infeco, apesar da semelhana com outros grupos j descritos, sugerindo
que a co-infeco com Leishmania sp. e/ou Babesia sp. tenham tendncia a causar
trombocitopenia mais frequente e mais acentuada.
173

positiva para A. phagocytophilum, com co-infeco.
PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum co-infectado D. immitis
Parmetro plaquetas Hemcias Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
N=1
56.000
5,87
15,2
42
71,8 25,9
36,0
LEUCOGRAMA
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO
N=1
10800
15
1620
41
4428
40
4320
BIOQUMICA SRICA
N=1
8,2
MO
432
FA
CK
21
57
1,2
35
9,4
4,2
5,2
1
31 65
O eritrograma foi normal na maioria desses animais, porm um co da tabela

52, co-infectado com Babesia sp., foi intensamente anmico, com microcitose e
hipocromia, associados a intensa diminuio de sntese de hemoglobina (JAIN,
1993). Neste animal foram observados tambm leucopenia com neutropenia e
linfopenia, mas eosinofilia relativa que, associadas trombocitopenia, j comentada,
indica diminuio de atividade medular somada a possvel falta de elementos para
sntese de hemoglobina que, no caso da babesiose, pode ser decorrente da
hemlise intravascular com hemoglobinria que leva a perda de elementos como o
ferro. Esse animal tambm combina perfil bioqumico de uria elevada,
hipoproteinemia com hipoalbuminemia e hipoglobulinemia que podem estar
associadas a perda renal e diminuio de sntese (JAIN, 1993; KANEKO, 1997;
THRALL, 2003; STOCKHAM e SCOTT, 2011).
174

PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum co-infectado Babesia sp.
Parmetro Plaquetas Hemciasx103 Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
N=1
83.000
387
3,26
7,4
21,5 65,9
22,9
LEUCOGRAMA
Parmetro LG
Se
Li
Li MO
N=1
4900
49
25
1225
196
44
2156
17
833
BIOQUMICA SRICA
N=1
21
441
FA
CK
0,6
35
4,7
1,9
2,8
3
159 454
Nos
7,4
MO
37
demais
animais
com
eritrogramas
normais,
os
leucogramas
apresentaram LG normais, mas com eosinofilia, provavelmente associada a leso

parasitria tecidual.
Os
perfis
bioqumicos
apresentaram
uria
aumentada
em
todos,
semelhantemente a outros grupos j comentados. E, com exceo do co coinfectado com Hepatozoon sp., descrito na tabela 54 e do com co-infeco com
Babesia sp., os demais apresentaram hiperproteinemia com hiperglobulinemia.
175

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para A. phagocytophilum, com coinfeco.
PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum co-infectado Leishmanis sp.
N=3
mdia
Desv Pad
93.667
67471
6,08
0,4
15,7
1,8
44
3,8
72,3
2,4
25,9
1,6
35,7
0,9
LEUCOGRAMA
Parmetro N = 3
LG
Se
Li
Li
MO
Mdia
12167
2
318
13 1810 1
99 61 7135 14 1883
8
Desv Pad
4475
1
260
9
1489 1 171 11 1693 6 1239
3
BIOQUMICA SRICA
MO
922
355
FA
CK
N=3
Mdia
Desv Pad
8,1
0,6
77
27
44
1
56
8,1
3,5
4,6
5
76 60
11
0,1
24
0,6
0,9
1,2
2,6
55 3,5
176

PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum co-infectado Hepatozoon sp.
N=1
133.000
6,20
15,5
43
69,2 25,0
36,2
LEUCOGRAMA
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO
N=1
13700
12
1644
57
7809
25
3425
BIOQUMICA SRICA
N=1
25
822
CK
1
45
7,1
3,3
3,8
3
49 56
Legenda:
8,0
MO
25
5.5.3.2.3 Ces sororreativas para E. canis e A. phagocytophilum

Nas tabelas 55, 56, 57, 58, 59 e 60 foram apresentados os resultados dos
nove ces com reaes sorolgicas simultneas para E. canis e A. phagocytophilum,
separados de acordo com o(s) parasita(s) co-infectante(s), discutidos juntos, como
nos casos anteriores.
Nesses animais a trombocitopenia foi o resultado mais comum a todos os
ces e, apenas os co-infectados com D. immitis e simultaneamente com D. immitis e
Leishmania sp. apresentaram trombocitopenia com valores acima de 100000/L,
porm sem alguma representatividade estatstica, no descaracterizando esse
achado como o de maior importncia hematolgica em ces positivos para
Ehrlichia/Anaplasma. Sendo que, mais uma vez a associao com Babesia sp.
mostrou acentuar a trombocitopenia.
177

PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis
N=1
143.000
4,15
10,5
30
71,7 25,4
35,4
LEUCOGRAMA
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO MO
N=1
12600
126
15
1890
61
7686
16
2016
BIOQUMICA SRICA
N=1
7,0
882
CK
22
15
1,9
127 9,5
1,9
7,6
1
53 35
O eritrograma apresentou valores normais na maioria desses animais e

anemia discreta a moderada em dois deles, um co-infectado com D. immitis , na
tabela 55 e outro com co-infeco com Hepatozoon sp., na tabela 58. Ambas
normoctica e normocrmicas arregenerativas, provavelmente decorrentes de
inflamao.
O leucograma apresentou valores de LG normais na maioria desses ces,
menos nos co-infectados com Hepatozoon sp., na tabela 58. Na maioria, a
leucometria especfica tambm teve poucas alteraes. Dois ces com linfocitose,
nas tabelas 57(co-infectados com Leishmania sp.) e 58 (co-infectados com
Hepatozoon sp.). Essa alterao pode caracterizar resposta imune humoral intensa
(JAIN, 1993), por estar associada hiperglobulinemia, nos dois casos.
178

PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado Babesia sp.
N=1
32.000
5,50
14,1
39
76,6 25,3
35,9
LEUCOGRAMA
Parmetro LG
Se
Li
Li
MO MO
N=1
7200
72
73
5256
24
1728
144
BIOQUMICA SRICA
N=1
7,0
CK
19
19
0,8
31
8,4
3,1
5,3
3
33 37
No leucograma de outros dois ces desse grupo foi observado linfopenia, um

co-infectados com D. immitis e Leishmania sp., na tabela 59 e outro co-infectado
com esses dois parasitas e mais Babesia sp., na tabela 60. E, embora ambos
estivessem tambm com hiperglobulinemia, mostrando que, apesar da diminuio
linfocitria, esses animais permaneceram com resposta inflamatria protica que
pode estar associadas a alfa e beta globulinas (KANEKO, 1997).
Apenas um animal apresentou eosinofilia discreta, co-infectado com D.
immitis, na tabela 55 e, provavelmente, decorrente de contato ntimo do parasita com
tecidos vasculares.
179

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis e A. phagocytophilum,
com co-infeco.
PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum e E. canis co-infectado Leishmania
sp.
Parmetro plaquetas Hemciasx103 Hemoglobina VG
VCM HCM CHCM
N=3
mdia
Desv Pad
78.000
36428
5,16
0,4
12,5
1,5
35
4,3
67,9
3
24,2
1
35,6
0,4
LEUCOGRAMA
PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum e E. canis co-infectado Leishmania sp.
Parmetro N = 3
LG
Se
Li
Li
MO MO
Mdia
11533
0
0
6
726
1
81 44 4643 41 5228
8
855
Desv Pad
6296
0
0
2
522
2 140 11 1236 14 4453
4
409
BIOQUMICA SRICA
PCR negativo e sororreativos A. phagocytophilum e E. canis co-infectado Leishmania sp.
N=3
Mdia
Desv Pad
9,0
2,1
21
13
40
1
24
9,9
2,1
7,9
6,3
42 52
23
0,3
4
1,5
0,4
1,4
4,2
15 18
Nesses animais, o perfil bioqumico na maioria, apresentou elevao da uria,

caracterizando alteraes pr-renais ou renais, sendo que, em um deles, coinfectado com D. immitis, o valor desse parmetro ultrapassou mais do triplo do valor
mximo normal, sugerindo leso renal (KANEKO, 1997).
180

PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado Hepatozoon sp.
Parmetro plaquetas Hemciasx103 Hemoglobina VG VCM HCM
CHCM
N=2
54.000
90.000
3,64
6,72
8,1
17,1
23
47
63,5
69,5
22,4
25,4
35,2
36,5
LEUCOGRAMA
Parmetro
N=2
LG
BAS
BAS
EOS
EOS
Ba
Ba
Se
19000
17400
Se
Li
Li
MO
MO
190
190
1218
39
7410
53
10070
1140
68
11832
19
3306
1044
BIOQUMICA SRICA
CK
N=2
12,0
7,2
20
57
18
53
0,8
31
12,5
1,3
11,2
2
93 95
1,2
27
9,6
3,3
6,3
4
44 67
Ainda no perfil bioqumico, a caracterstica mais comum a todos esses ces

foi a hiperproteinemia com hiperglobulinemia, em alguns acompanhado de
hipoalbuminemia, provavelmente compensatria a hiperglobulinemia.
181

e Leishmania sp.
Parmetro plaquetas Hemcias103 Hemoglobina VG VCM HCM CHCM
N=1
188.000
5,58
14,3
39
69,7 25,7
36,8
LEUCOGRAMA
PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis e Leishmania sp.
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO MO
N=1
7400
12
888
74
74
5476
12
888
74
BIOQUMICA SRICA
PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis e Leishmania
sp.
N=1
1,6
48
8,3
1,9
6,4
3
69 126
Legenda:
8,6
32
44
182

PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis,
Babesia sp. e Leishmania sp.
N=1
23.000
5,49
14,3
38,6 70,3 26,1
37,0
LEUCOGRAMA
PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis, Babesia sp. e
Leishmania sp.
Parmetro
LG
Se
Li
Li
MO MO
N=1
11600
348
87
10092
696
464
BIOQUMICA SRICA
PCR negativo e sororreativos E. canis e A. phagocytophilum co-infectado D. immitis, Babesia sp.
e Leishmania sp.
N=1
10,2
50
33
0,7
20
7
2,5
4,5
4
58 43
5.5.4 Anlise estatstica das alteraes hematolgicas e Bioqumicas

Foram feitas anlises estatsticas para avaliar se as variveis hematolgicas e
bioqumicas estudadas eram significativamente diferentes de um grupo para outro.
Porm, foram submetidos estatstica, apenas os grupos com representatividade
suficiente para ter anlise. Assim, apesar de terem sido feitas 34 tabelas,
descrevendo os resultados bioqumicos e hematolgicos dos animais estudados, de
acordo com os resultados da PCR, sorologia e estado de co-infeco, apenas cinco
grupos apresentaram representatividade, com mais de 10 animais.
Os grupos foram assim classificados: grupo um, ces PCR positivos com
sorologia negativas sem co-infeco; grupo dois, ces PCR positivos com sorologia
positivas (tanto para E. canis como para A. phagocytophilum)
sem co-infeco;
grupo trs, ces PCR positivos com sorologia positivas (idem ao anterior) com coinfeco com Leishmania sp.; grupo quatro, ces PCR negativos com sorologia
183
positivas (idem) sem co-infeco; grupo cinco, ces PCR negativos com sorologia
positivas (idem) com co-infeco com Leishmania sp. Os valores de mdia, desvio
padro, valor mnimo e mximo para as variveis hematolgicas e bioqumicas
nesses grupos esto nas tabelas 61, 62, 63, 64 e 65. Alm desses, o grupo de
animais negativos (Tabela 68) foi usado para comparao nas anlises estatsticas.
hematolgicos e bioqumicos de ces PCR positivos/sorologia negativas sem
co-infeco do municpio de Maric/RJ em 2007.
Grupo um (PCR positivos/sorologia negativas sem co-infeco)
Variavel
Hemacias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
plaquetas
LG
BAS1
BAS2
EOS1
EOS2
Ba1
Ba2
Se1
Se2
Li1
Li2
MO1
MO2
N
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
Variavel
PPT
ALT
AST
CREATININA
UREIA
PT
ALBUMINA
GLOBULINA
N
12
11
11
11
11
12
11
11
Mdia
5.7683333
13.9666667
40.2833333
69.4416667
23.6250000
33.8250000
184333.33
14916.67
0.9166667
156.5000000
9.9166667
1420.50
0.5000000
65.3333333
58.4166667
8950.58
21.1666667
3005.25
9.0833333
1318.50
Desv Pad
1.0567603
4.3920038
8.9030979
4.5265798
4.4290621
5.0436504
162502.21
4710.88
1.2401124
218.1882007
6.4731380
965.4916317
0.7977240
131.1171117
11.9427295
4274.42
12.7052840
2091.26
5.4348762
807.7061234
Minimum
3.4600000
6.9000000
22.8000000
58.7000000
12.1000000
18.9000000
21000.00
7400.00
0
0
1.0000000
74.0000000
0
0
39.0000000
3774.00
3.0000000
672.0000000
3.0000000
447.0000000
Maximum unidade
7.09000 x103/L
19.70000 g/dL
50.60000 %
73.50000 fL
26.90000 pg
36.80000 %
493000. /L
22400. /L
3.00000 %
516.00000/L
22.00000 %
3784. /L
2.00000 %
448.00000/L
78.00000 %
16926. /L
45.00000 %
6795. /L
23.00000 %
3038. /L
VALORES BIOQUMICOS
Mdia
6.8666667
46.8181818
35.8181818
0.8272727
32.8181818
6.0666667
2.8272727
3.7909091
Desv Pad
0.9354953
19.4875251
12.0980840
0.2866737
10.2549323
2.1025237
0.5217105
1.0024515
Minimum
5.2000000
21.0000000
25.0000000
0.4000000
17.0000000
0
1.9000000
2.4000000
Maximum
8.40000 g/dL
81.00000 U/L
60.000000 U/L
1.30000 mg/dL
54.00000 mg/dL
7.90000 g/dL
3.60000 g/dL
5.30000 g/dL
Alcalina; CK = Creatinoquinase. ALT, AST, GGT, FA, CK em U/L; Hemoglobina, PPT, Creatinina, Uria, PT,
Albumina e Globulina em g/dL.
184

hematolgicos e bioqumicos de ces PCR positivos/sorologia positivas sem
co-infeco do municpio de Maric/RJ em 2007.
Grupo dois (PCR positivos/sorologia positivas sem co-infeco)
Variavel
Hemacias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
plaquetas
LG
BAS1
BAS2
EOS1
EOS2
Ba1
Ba2
Se1
Se2
Li1
Li2
MO1
MO2
N
11
11
11
11
11
11
11
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
12
Mdia
5.4845455
14.0090909
39.1181818
70.9727273
25.3090909
35.6454545
156090.91
16858.33
1.2500000
223.5833333
11.0000000
1766.92
0.4166667
72.9166667
57.5000000
9823.00
22.6666667
3654.92
8.0000000
1462.00
Variavel
PPT
ALT
AST
CREATININA
UREIA
PT
ALBUMINA
GLOBULINA
GGT
FA
CK
N
11
12
12
12
12
12
12
12
10
12
11
Mdia
7.6909091
33.3333333
34.0833333
1.0250000
36.8333333
7.2833333
2.5583333
4.7250000
2.6000000
73.0833333
96.0000000
Desv Pad
1.1367793
3.4820840
9.0280472
3.4698965
1.8195904
1.0122881
70157.61
6586.55
1.9128750
360.0304175
7.8624539
1557.40
0.6685579
113.6337485
10.8334499
5512.45
10.9820791
2094.87
4.4517617
1290.03
Minimum
2.8700000
6.6000000
19.4000000
64.8000000
22.4000000
33.9000000
72000.00
7000.00
0
0
0
0
0
0
41.0000000
4690.00
4.0000000
910.0000000
2.0000000
254.0000000
Maximum Unidade
6.86000 x103/L
17.80000 g/dL
49.30000 %
77.80000 fL
28.60000 pg
36.80000 %
325000. /L
32200. /L
6.00000 %
1212. /L
26.00000 %
5252. /L
2.00000 %
322.00000 /L
80.00000 %
25760. /L
47.00000 %
8366. /L
16.00000 %
4830. /L
VALORES BIOQUMICOS
Desv Pad
0.6774283
18.3616861
11.2286835
0.3306330
10.3995921
1.0399592
0.7415688
1.0746035
1.5776213
28.6719956
47.9437170
Minimum
6.4000000
12.0000000
20.0000000
0.5000000
21.0000000
5.8000000
0.9000000
3.0000000
1.0000000
35.0000000
46.0000000
Maximum
9.00000
74.00000
57.00000
1.60000
59.00000
10.00000
3.50000
7.10000
5.00000
128.00000
185.00000
Unidade
g/dL
U/L
U/L
mg/dL
mg/dL
g/dL
g/dL
g/dL
U/L
U/L
U/L
185

hematolgicos e bioqumicos de ces PCR positivos/sorologia positivas com
co-infeco com Leishmania sp. do municpio de Maric/RJ em 2007.
Grupo trs (PCR positivos/sorologia positivas com co-infeco com Leishmania sp.)
Variavel
Hemacias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
plaquetas
LG
BAS1
BAS2
EOS1
EOS2
Ba1
Ba2
Se1
Se2
Li1
Li2
MO1
MO2
N
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
11
Mdia
5.0081818
12.4363636
34.7363636
69.4272727
24.8090909
35.7363636
45636.36
12090.91
0.8181818
101.3636364
12.6363636
1319.45
0.8181818
132.2727273
54.6363636
6389.36
24.4545455
3338.45
6.6363636
810.0000000
Variavel
PPT
ALT
AST
CREATININA
UREIA
PT
ALBUMINA
GLOBULINA
GGT
FA
CK
N
10
11
11
11
11
11
11
11
9
11
10
Mdia
8.0200000
79.6363636
35.9090909
1.0545455
38.0000000
8.0363636
2.4909091
5.5454545
3.7777778
73.7272727
81.6000000
Desv Pad
0.8976393
2.4229209
6.2501636
3.0964789
1.2621050
0.8065640
22504.54
5811.27
1.0787198
142.3940116
8.9137279
935.6537141
1.1677484
225.1062375
13.7932790
2896.63
14.2854026
4002.75
2.8380531
505.7238377
Minimum
3.6900000
8.9000000
25.5000000
63.3000000
22.0000000
34.5000000
11000.00
3100.00
0
0
2.0000000
248.0000000
0
0
24.0000000
1581.00
11.0000000
540.0000000
3.0000000
93.0000000
Maximum Unidade
6.31000 x103/L
16.00000 g/dL
43.50000 g/dL
73.50000 fL
26.80000 pg
36.70000 %
77000. /L
24600. /L
3.00000 %
432.00000 /L
27.00000 %
3240. /L
3.00000 %
738.00000/L
72.00000 %
10140. /L
61.00000 %
15006. /L
12.00000 %
1722. /L
VALORES BIOQUMICOS
Desv Pad
1.6342174
106.5150438
14.1453494
0.2161649
17.9276323
1.1526255
0.5107926
1.2266733
2.7738862
39.4261104
39.6041524
Minimum
6.4000000
11.0000000
17.0000000
0.7000000
14.0000000
6.6000000
1.5000000
3.6000000
1.0000000
33.0000000
40.0000000
Maximum
12.00000 g/dL
345.00000 U/L
67.00000 U/L
1.50000 mg/dL
76.00000 mg/dL
10.50000 g/dL
3.30000 g/dL
8.00000 g/dL
9.00000 U/L
140.00000 U/L
147.00000 U/L
186

hematolgicos e bioqumicos de ces PCR negativos/sorologia positivas para
Anaplasmataceae, sem co-infeco do municpio de Maric/RJ em 2007.
Grupo quatro (PCR negativos/sorologia positivas sem co-infeco)
Varivel
Hemacias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
plaquetas
LG
BAS1
BAS2
EOS1
EOS2
Ba1
Ba2
Se1
Se2
Li1
Li2
MO1
MO2
N
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
18
Mdia
5.64
14.27
39.76
68.77
25.18
35.84
127055
15272
1.16
178
9.05
1394
0.55
80
52.55
7659
29.67
4912
7.00
1047
Varivel
PPT
ALT
AST
CREATININA
UREIA
PT
ALBUMINA
GLOBULINA
GGT
FA
CK
N
18
18
18
18
18
18
18
18
17
18
17
Mdia
7.92
48.72
43.11
1.13
38.39
8.55
2.98
5.58
6.00
68.05
152.05
Desv Pad
0.90
2.67
7.02
7.17
1.92
0.77
69273
4761
1.69
251
4.34
819
0.85
131
13.43
1961
15.02
3753
3.10
523
Minimum
3.88
8.40
24.60
45.20
21.60
34.10
23000
8400
0
0
1.00
126
0
0
26.00
5252
10.00
1330
1.00
202
Maximum Unidade
7.37
x106/L
17.40
g/dL
48.90
%
79.10
fL
29.10
pg
36.80
%
306000
/L
27700
/L
6.00
%
864
/L
17.00
%
3366
/L
3.00
%
436
/L
73.00
%
11554
/L
68.00
%
13736
/L
14.00
%
1939
/L
VALORES BIOQUMICOS
Desv Pad
1.39
29.57
15.15
0.42
15.52
1.53
0.80
1.59
3.64
39.55
135.13
Minimum
6.00
18.00
18.00
0.60
16.00
6.20
1.80
2.80
1.00
12.00
35.00
Maximum Unidade
10.80
g/dL
139.00
U/L
72.00
U/L
1.90 mg/dL
72.00 mg/dL
11.10
g/dL
4.70
g/dL
8.90
g/dL
12.00
U/L
140.00
U/L
523.00
U/L
Legenda: N= nmero de ces; VG=Volume Globular; VGM= Volume Globular Mdio; HGM= Hemoglobina
Globular Mdia; CHGM= Concentrao de Hemoglobina Globular Mdia; plaquetas = plaquetometria; LG=
Leucometria Global; Bas=Basfilo; Eos= Eosinfilo; Se= Segmantado; Li=Linfcito; Mo=moncito; 1= valores
relativos;
2=Valores
absolutos;
PPT=Protenas
Plasmticas
Totais;
ALT=Alaninaminotransferase;AST=Aspartatoaminotransferase; PT=Protenas Sricas Totais; GGT=
Gamaglutamil transferase; FA=Fosfatase Alcalina; CK=Creatinoquinase.
187

hematolgicos e bioqumicos de ces PCR negativos/sorologia positivas com
co-infeco com Leishmania sp.do municpio de Maric/RJ em 2007.
Grupo cinco (PCR negativos/sorologia positivas com co-infeco com Leishmania sp.)
Variavel
N
Hemacias
6.6100000x106/L
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
plaquetas
LG
BAS1
BAS2
EOS1
EOS2
Ba1
Ba2
Se1
Se2
Li1
Li2
MO1
MO2
Mdia
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13
13.7769231
38.5153846
68.9230769
24.6615385
35.7923077
66076.92
12230.77
0.9230769
116.3846154
9.3846154
1248.62
0.6923077
78.6923077
46.6153846
5334.08
35.6923077
4699.23
6.6923077
753.7692308
N
13
13
13
13
13
13
13
12
12
13
10
Mdia
8.8153846
34.7692308
34.7692308
1.4846154
33.9230769
8.3461538
2.5461538
6.5416667
4.3333333
52.3076923
53.0000000
Desv Pad
Minimum
Maximum Unidade
5.5730769
0.7161865
4.5600000
2.2446803
6.2237243
3.6731353
1.3961485
0.5407734
45688.19
4422.74
1.1875422
175.9505321
5.0750774
871.5080358
0.9473309
106.2688294
14.0862726
1889.59
16.9331264
3154.16
3.4006033
383.7853467
10.8000000
30.2000000
62.0000000
22.3000000
35.0000000
14000.00
3200.00
0
0
4.0000000
128.0000000
0
0
23.0000000
2048.00
9.0000000
630.0000000
2.0000000
256.0000000
17.7000000 g/dL
48.1000000
%
74.6000000
fL
27.5000000
pg
36.8000000
%
144000.00
/L
18800.00
/L
4.0000000
%
588.0000000
/L
23.0000000
%
3381.00
/L
3.0000000
%
296.0000000
/L
74.0000000
%
8140.00
/L
65.0000000
%
10340.00
/L
13.0000000
%
1452.00
/L
Minimum
6.6000000
9.0000000
17.0000000
0.6000000
12.0000000
0
1.5000000
3.2000000
1.0000000
26.0000000
34.0000000
Maximum Unidade
10.6000000 g/dL
105.0000000
U/L
66.0000000
U/L
7.0000000 mg/dL
81.0000000 mg/dL
11.2000000
g/dL
4.3000000
g/dL
9.3000000
g/dL
11.0000000
U/L
140.0000000
U/L
65.0000000
U/L
VALORES BIOQUMICOS
Variavel
PPT
ALT
AST
CREATININA
UREIA
PT
ALBUMINA
GLOBULINA
GGT
FA
CK
Desv Pad
1.3378130
28.0539773
13.6146603
1.6797054
19.2676825
2.8256608
0.7848730
1.8352401
2.8709623
27.7620383
10.2956301
Legenda: N = nmero de ces; VG = Volume Globular; VGM = Volume Globular Mdio; HGM = Hemoglobina
Globular Mdia; CHGM = Concentrao de Hemoglobina Globular Mdia; plaquetas = plaquetometria; LG =
Leucometria Global; Bas = Basfilo; Eos = Eosinfilo; Se = Segmantado; L i= Linfcito; Mo = moncito; 1 =
valores
relativos;
2
=
Valores
absolutos;
PPT
=
Protenas
Plasmticas
Totais;
ALT=Alaninaminotransferase;AST=Aspartatoaminotransferase; PT = Protenas Sricas Totais; GGT =
Gamaglutamil transferase; FA = Fosfatase Alcalina; CK = Creatinoquinase.
188
O resultado da anlise estatstica pelo teste de Kruskal-Walllis X2, revelou

diferena significativa entre os grupos para as seguintes variveis: plaquetometria
(p< 0,0001), segmentados em valores absolutos (p< 0,0008), protenas sricas totais
(p< 0,0008), protenas plasmticas totais (p< 0,0310), AST (p< 0,0216) e globulina
(p< 0, 0002).
No caso da plaquetometria, essa foi a que mais variou. E, analisando as
mdias de cada grupo, o teste estatstico mostrou que os grupos cinco e trs foram
mais semelhantes entre si, enquanto o mesmo ocorreu com os demais grupos: um,
dois, quatro e seis. Na tabela 66 foram destacados os valores das mdias da
plaquetometria de cada grupo. Embora todos estejam abaixo do mnimo normal para
espcie (200000/L), os grupos trs e cinco esto abaixo de 100000/ L,
considerados com risco clnico hemorrgico (JAIN, 1993; KANEKO et al., 1997).
Tabela 66: Resultados das mdias dos grupos estatsticos para anlise da
plaquetometria de ces de Maric/RJ em 2007.
Mdia G1
Mdia G2
Mdia G3
Mdia G4
Mdia G5
Mdia G6
Varivel
Plaquetometria/L 184333
156091
45636
127056
66077
177571
Os grupos trs e cinco eram co-infectados com Leishmania sp. enquanto os
grupos um, dois e quatro eram positivos ou em PCR ou sorologia ou ambos, para
Anaplasmataceae, mas sem co-infeco. A coinfeco parece ser um fator
importante na determinao de trombocitopenia e vrios estudos tm mostrado essa
ocorrncia (MOREIRA et al., 2003; SANTOS et al., 2009; LITTLE, 2010; GAUNT et
al., 2010). Alm disso, estudos como o de Pires et al., (2008) analisando aspirado de
medula ssea, encontraram 1 co entre 65 (1,5%) co-infectado com Ehrlichia sp. e
Leishmania sp., indicando que podem se associar no tecido hematopoitico
contribuindo para a diminuio do nmero de plaquetas, uma vez que a
trombocitopenia pode ser causada pela hipoplasia de medula ssea e tambm pelo
sequestro e aumento de consumo (LITTLE, 2010). O grupo seis, embora de animais
negativos para Anaplasmataceae, foi composto por um grupo de ces que poderiam
apresentar outras alteraes fisiopatognicas, no avaliadas nesse estudo,
mostrando
que
trombocitopenia
pode
estar
presente
em
qualquer
inflamao/infeco que afete o animal sistemicamente, no sendo patognomnico

de infeces por Anaplasma platys (COCKBURN e TROY, 1986) ou outra bactria
do mesmo grupo taxonmico.
189
Embora o nmero de segmentados tenha variado significativamente entre os

grupos, todos os valores mdios se mantiveram dentro do intervalo de referncia
para espcie e, esses valores podem oscilar entre a diminuio, normalidade e o
aumento, de acordo com a fase da ehrlichiose/anaplasmose (ALMOSNY, 1998;
BREITSCHWERDT et al., 1998; LITTLE, 2010).
Na avaliao bioqumica as globulinas e as protenas sricas totais
apresentaram maior variao em relao aos valores de referncia, tendendo a
valores elevados. No grupamento estatstico das globulinas os grupos quatro e cinco
foram mais prximos entre si, bem como o dois e trs, todos com valores mdios
acima do normal. Esses valores podem estar relacionados ao aumento do ttulo de
anticorpos
(HOSKINS,
1991),
hipergamaglobulinemia
devido
reao
de
hipersensibilidade ou resposta autoimune (SWANGO et al., 1989). Os grupos um e

seis foram mais semelhantes entre si e apresentaram valores mdios dentro dos
normais para espcie, sendo que no grupo seis so ces negativos para
Anaplasmataceae e outros parasitos e o grupo um, ces soronegativos para
Ehrlichia/Anaplasma, o que pode justificar a no elevao do ttulo de anticorpos
acima do normal.
As protenas sricas totais apresentaram no grupamento estatstico maior
semelhana entre os grupos quatro e cinco, seis e trs e, dois com o seis, todos
esses com valores acima da referncia. Uma vez que o grupo seis so ces
negativos, essa hiperproteinemia pode estar relacionada presena de alteraes
no avaliadas nesse estudo. O grupo um se assemelhou mais ao dois, sendo que o
grupo um apresentou valores mdios dentro da normalidade. Essas variaes
podem
estar
relacionadas
com
as
alteraes
das
globulinas,
descritas
anteriormente, uma vez que essas fazem parte da concentrao das protenas totais
sricas. No entanto, o grupo dos ces negativos (seis) no apresentou aumento
mdio de globulinas e apresentou aumento mdio das protenas sricas totais,
reforando a idia de que outras alteraes no relacionadas a esse estudo podem
estar presentes nesses ces.
Na avaliao das protenas plasmticas totais tambm foi observado um
comportamento semelhante ao das protenas sricas totais. No entanto, o
grupamento estatstico mostrou maior semelhana entre os grupos trs e cinco, dois
e quatro, seis e dois, todos esses com valores mdios acima do normal, e do grupo
um com o seis, sendo o um com valores mdios normais. A maior semelhana entre
190
os grupos trs e cinco, diferente do observado nas protenas sricas totais, pode
estar relacionada ao fato desses dois grupos serem de Anaplasmataceae coinfectados com Leishmania sp. e que, talvez, o fibrinognio tenha um papel mais
acentuado na fisiopatogenia da infeco com Leishmania sp., j que esta protena
o principal elemento que difere as protenas plasmticas das sricas totais. Alm
disso uma protena de importncia na resposta inflamatria tecidual (KANEKO et
al., 1997).
Embora as enzimas hepticas AST e GGT tenham apresentado diferenas
significativas entre os grupos analisados, seus valores mdios foram todos dentro
dos intervalos de normalidade para ces. Essas variaes podem estar associadas a
possveis quadros de leso heptica que podem ser observados nos animais com
ehrlichiose canina, uma vez que a bactria pode se albergar no fgado (HARRUS et
al., 1997a; ALMOSNY, 1998; ALMOSNY e MASSARD, 2002), podendo causar
hepatomegalia (UNVER et al., 2009).
5.5.5 Comentrios finais sobre Alteraes Hematolgicas e Bioqumicas
Analisando os resultados gerais, mesmos dos grupos sem representatividade

estatstica, descritos separadamente, observa-se que mesmo a trombocitopenia e a
hiperglobulinemia que foram os mais frequentes, no houve um resultado
suficientemente frequente entre os animais positivos, quer seja em diagnstico por
PCR ou sorolgico, que possa ser considerado como caracterstica exclusiva de
ces com Ehrlichia sp., Ehrlichia canis e/ou Anaplasma platys ou soropositivos para
Ehrlichia canis e/ou Anaplasmaphagocytophilum. Estudo transversal feito com
populao hospitalar, sugeriu que a elevao da creatinina indicasse cronicidade na
ehrlichiose canina e que as atividades sricas de ALT e FA elevadas, estariam
associadas fase aguda (SANTARM et al., 2008), no entanto esses autores
correlacionaram com o estado de pancitopenia ou no nos animais doentes, alm de
sinais clnicos, para sugerirem fase da doena e, no estudo feito em Maric, os
animais tiveram outros parmetros analisados, alm do diagnstico molecular e
morfolgico, a condio sorolgica e estados de co-infeces, que contriburam para
diferenas nessas concluses. No entanto, semelhantemente a esses autores, a
trombocitopenia e hiperglobulinemia foram os resultados mais frequentes nos
animais positivos.
191
Estudo longitudinal em ces de abrigo particular na Itlia, infectados naturalmente

com Ehrlichia canis ou Anaplasma platys co-infectados ou no com outros
patgenos transmitidos por vetores artrpodes, sugeriu intensa gravidade da
associao infecciosa de E. canis e Babesia canis, onde todos ces com esse
diagnstico vieram a bito (CAPRARIIS et al., 2011). Isso pode indicar que muitos
ces no sobrevivam a essa co-infeco e talvez possa justificar a baixa frequncia
encontrada na populao de ces de Maric, em que se selecionou tipo de
populao semelhante, uma vez que vrios estudos indicam como muito provvel
essas associao (KORDICK et al., 1999; SUKSAWAT et al., 2001a; INOKUMA et
al., 2003). Tambm no estudo de Caprariis et al., (2011) a trombocitopenia foi o
achado mais frequente e mais intensa em co-infeces. Entretanto, esses autores
encontraram tambm uma correlao significativa de hipoalbuminemia em ces com
A. platys. Isso no pode ser avaliado nos ces de Maric devido a baixa
representatividade estatstica encontrada.
5.6 ANIMAIS NEGATIVOS

O grupo dos negativos foi representado pelos ces PCR e sorologia negativas
e que no foram encontrados outros parasitos no Anaplasmataceae. Este grupo foi
o nmero seis da anlise estatstica e os resultados hematolgicos e bioqumicos
esto sumarizados na tabela 68.
Dos 155 animais avaliados, 22/155 (14,2%) foram negativos em todos os
testes usados para deteco de Anaplasmataceae, Ehrlichia e Anaplasma caninas:
avaliao morfolgica em esfregao sanguneo, sorologia e PCR, e tambm no
estavam infectados com outros parasitas, encontrados na populao, durante a
avaliao.
Alm dos 22 animais negativos para Anaplasmataceae e outros parasitos
encontrados durante o estudo, mais 16 ces tambm negativos, porm positivos
para esses outros parasitos que foram identificados e esto sumarizados na tabela
67.
192
Tabela 67: Ces negativos para Ehrlichia/Anaplasma sem e com outros

parasitas em ces do municpio de Maric/RJ, em 2007.
Condio
PCR/Soro
Parasitos no
Anaplasmataceae
N0 de
amostras
SEM
22 amostras
Parasito co-infectante
0
(n )
G6
D. immtis (11)
Leishmania sp. (3)
Hepatozoon sp. (2)
PCR (-) SORO (-)

COM
16
Legenda: G = Grupo estatstico
Apenas os 22 ces negativos para Anaplasmataceae e sem outros parasitos

encontrados durante o estudo foram analisados estatisticamente e usados para
comparao com os dos grupos um, dois, trs, quatro e cinco. Na tabela 68 esto
sumarizados os valores de mdia, desvio padro, valor mnimo e mximo para as
variveis hematolgicas e bioqumicas desses animais.
hematolgicos e bioqumicos de ces PCR negativos/sorologia negativas para
Anaplasmataceae do municpio de Maric/RJ em 2007.
Variavel
Hemacias
Hemoglobina
VG
VCM
HCM
CHCM
plaquetas
LG
BAS1
BAS2
EOS1
EOS2
Ba1
Ba2
Se1
Se2
Li1
Li2
MO1
MO2
N
21
21
21
21
21
21
21
22
22
22
22
22
22
22
22
22
22
22
22
22
Mdia
5.8400000
14.6000000
40.8761905
69.6428571
24.8238095
35.6095238
177571.43
17559.09
0.5000000
90.0909091
11.9545455
2042.18
0.8636364
150.9545455
59.1363636
10509.32
20.8181818
3624.32
6.7272727
1142.23
Variavel
PPT
ALT
AST
CREATININA
UREIA
PT
ALBUMINA
GLOBULINA
GGT
FA
CK
N
22
22
22
22
22
22
22
22
22
22
22
Mdia
7.6000000
50.0454545
52.8181818
1.1863636
34.5909091
7.3500000
3.0863636
4.2636364
6.8181818
96.3636364
212.7272727
Desv Pad
1.3065259
3.7567273
10.0653318
4.5633947
1.9255921
0.8467023
67568.17
5952.08
0.9636241
175.3944966
7.7917983
1471.94
1.1252705
199.9660631
11.2727884
4570.34
9.7669821
2134.35
4.0494775
747.0936023
Minimum
3.2100000
6.2000000
18.3000000
57.0000000
19.3000000
33.2000000
49000.00
11200.00
0
0
2.0000000
366.0000000
0
0
39.0000000
5520.00
6.0000000
840.0000000
1.0000000
262.0000000
Maximum Unidade
8.2700000 x103/L
22.200000 g/dL
61.800000 %
79.5000000 fL
28.2000000 pg
36.9000000 %
261000.00 /L
34400.00 /L
4.0000000 %
656.0000000 /L
30.0000000 %
5240.00 /L
4.00000 %
750.000 /L
78.0000 %
23736.00 /L
48.00000 %
10608.00 /L
19.0000 %
3108.00 /L
VALORES BIOQUMICOS
Desv Pad
1.4579830
30.7717825
27.7156245
0.3931502
15.9303815
1.6927717
0.8724871
1.3421892
5.5689305
73.3326053
113.7634060
Minimum
4.6000000
9.0000000
22.0000000
0.5000000
10.0000000
3.8000000
1.0000000
2.4000000
1.0000000
10.0000000
66.0000000
Maximum Unidade
10.00000 g/dL
141.00000 U/L
157.00000 U/L
2.2000 mg/dL
70.00000 mg/dL
10.00000 g/dL
4.40000 g/dL
7.20000 g/dl
20.00000 U/L
314.00000 U/L
472.00000 U/L
Legenda: VG=Volume Globular; VGM= Volume Globular Mdio; HGM= Hemoglobina Globular Mdia;
CHGM= Concentrao de Hemoglobina Globular Mdia; LG= Leucometria Global; Bas=Basfilo; Eos=
Eosinfilo; Se= Segmantado; Li=Linfcito; Mo=moncito; 1= valores relativos; 2=Valores absolutos;
PPT=Protenas
Plasmticas
Totais;
ALT=Alaninaminotransferase;AST=Aspartatoaminotransferase;
PT=Protenas Sricas Totais; GGT= Gamaglutamil transferase; FA=Fosfatase Alcalina; CK=Creatinoquinase.
193
Desses 22 negativos, 11 (50%) de Bambu, 8 (36,4%) foram do bairro do

Espraiado, 1 (4,5%) de So Jos do Imbassa e 2 (9,1%) do Centro.
Esses resultados negativos, quando comparados a populao que foi
coletada para o estudo em cada bairro, tm-se as porcentagens variando da mais
baixa em So Jos e a mais elevada em Bambu. Esses resultados esto
sumarizados na tabela 69.
Com exceo do bairro de So Jos, todos os demais apresentaram valores
semelhantes mdia geral no municpio. Isso pode sugerir que esse bairro tenha
maior possibilidade de transmisso de doena por carrapatos, como as observadas
nesse estudo.
Tabela 69: Resultados de ces negativos para Ehrlichia/Anaplasma em ces do
municpio de Maric/RJ, em 2007.
BAIRROS
N0 COLETADOS
N0 NEGATIVOS
%
BAMBU
67
11
16,4
ESPRAIADO
50
16
SO JOS
24
4,2
CENTRO
14
14,3
TOTAL
155
22
14,2
6 CONCLUSES
Analisando os resultados descritos e a discusso com outros trabalhos, pode-se
concluir:
- A frequncia de Anaplasmataceae na populao canina em quatro diferentes
bairros do municpio de Maric elevada (72%), onde a maior foi no bairro de
So Jos do Imbassa, seguida pelas respectivas frequncias nos bairros do
Centro, Espraiado e Bambu, ocorrendo em infeces isoladas e associadas.
- possvel identificar, atravs de evidncia morfolgica, sorolgica e molecular a
presena de co-infeces de Anaplasmataceae, E. canis e A. platys com outros
parasitas como D. immitis, Babesia sp., Hepatozoon sp. e Leishmania sp. e,
existe predomnio de animais sorologicamente positivos em relao aqueles com
evidncia de E. canis no sangue.
- O Bairro de Bambu mais exposto que os demais bairros estudados co-infeco
por Ehrlichia sp. e D. immitis e, por isso, maior variedade de casos de coinfeco.
-
Trombocitopenia a alterao hematolgica mais frequente em ces infectados

com E. canis e naqueles sorologicamente positivos, bem como nos ces
infectados com A. platys e nos co-infectados com E. canis e A. platys.
- Em ces com evidncia morfolgica, sorolgica e molecular de Anaplasmataceae

associados outros parasitas que no so dessa famlia, a trombocitopenia mais
acentuada.
- No possvel traar um perfil de alteraes bioqumicas tpico das infeces
observadas, por causa da grande variedade de quadros de associao
parasitria, no municpio de Maric. No entanto, possvel concluir que:
- o proteinograma o que mais se altera.
- a hiperglobulinemia a alterao mais comum em animais sorologicamente
positivos para Ehrlichia/Anaplasma, co-infectados ou no.
7 PERSPECTIVAS
Os resultados de frequncia das infeces e co-infeces reforam o conceito

do co como animal sentinela para a circulao destes agentes e de que existe uma
variedade de vetores para diferentes doenas transmitidas por artrpodes nos
bairros estudados. A frequncia de ces infectados, encontrada nas regies
estudadas, mostra que seus habitantes esto expostos a vetores contaminados,
representando risco de infeco. Decorrente dessas observaes, sugere-se como
perspectivas:
- Estimulo a implantao de programas de controles de vetores artrpodes no
municpio de Maric.
- Como essas bactrias tambm tm sido caracterizadas em felinos deve-se
sugerir ao grupo de pesquisa Hemoparasitas, que a avaliao realizada em ces,
tambm ocorra na populao felina, para aprofundamento do conhecimento do risco
real, da exposio da populao, a esses agentes.
- sugerir Secretaria Municipal de Sade o desenvolvimento de um estudo
semelhante na populao humana dessa regio, principalmente naqueles que
estejam em condies consideradas de maior risco de exposio a essas doenas
transmitidas por carrapatos.
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9 ANEXOS
ANEXO 1
VALORES DE REFERNCIA HEMATOLGICOS PARA CES SEGUNDO JAIN,
1993.
EXAMES (unidade)
6
3
Hemcias (x 10 /mm )
CANINO
5,5 8,5
37 55
Volume Globular (VG) ou Hematcrito (%)

12,0 18,0
Hemoglobina (g/dl)
60 77
32 36
6,0 17,0
VGM (fl)
CHGM (%)
3
Leucom glob. (x 10 /mm )

3
Leucometria especfica
Relativa (%)
Absoluta (/mm )
Basfilos
Raros
Raros
2 - 10
100 - 1250
0
0
0
0
0-3
0 - 300
60 - 77
3000 - 11500
12 - 30
1000 - 4800
3 - 10
150 - 1350
Eosinfilos
Mielcitos
Metamielcitos
Bastes
Neutrfilos segmentados
Linfcitos
Moncitos
0 1,5
Reticulcitos (%)
200 - 500
3
Plaquetometria (x 10 /mm )
Protenas plasmticas (g/dl)
Fibrinognio (g/dl)
6,0 8,0
0,2 0,4
VALORES DE REFENCIA BIOQUMICOS para ces SEGUNDO KANEKO et al, 1997

Exame
(unidade)
Valores
PPT
g/dL
ALT
U/L
AST
U/L
CREATININA
mg/dL
UREIA
mg/dL
PT
g/dL
5,4 7,1
ALBUMINA
g/dL
2,6 3,3
GLOBULINA
g/dL
2,7 4,4
GGT
U/L
FA
U/L
CK
U/L
1,15 28,4
10 100U/L (thrall);
(Duncan/Prasse)
52 368 U/L
PPT=Protenas
Plasmticas
Totais;
ALT=Alaninaminotransferase;AST=Aspartatoaminotransferase;
PT=Protenas Sricas Totais; GGT= Gamaglutamil transferase; FA=Fosfatase Alcalina; CK=Creatinoquinase.
220
ANEXO 2. Ficha do animal
FICHA DO ANIMAL
N ______
Proprietrio:
End:
CEP:
Nome do animal:
Tel:
Can Fel Outros
Sexo: M Castrado: Sim No

F
Raa:
Porte: Pequeno Mdio Grande
Vacinado: Veterinrio Campanha No vacinado
Vermifugado: No Sim Quando?
Pulgas: Sim No
Carrapatos: Sim No
Idade:
Tem alguma doena? No Sim Qual?

Toma remdio? No Sim Qual?
Acesso rua: Nunca s vezes Sempre
Material coletado: sangue total soro carrapato ponta de orelha
OBS:
221
ANEXO 3. Termo de consentimento
TERMO DE AUTORIZAO
Eu,__________________________________________________________________
___________________________ autorizo por meio deste documento a coleta de
sangue, do(s)
animal(ais)___________________________________________________
de minha propriedade, para fins de pesquisa na Universidade Federal Fluminense,
bem como informo estar ciente do anonimato das informaes referentes minha
identidade na divulgao dos resultados do presente estudo.
Maric,_____/______/_________.
_____________________________________________________
Assinatura do(a) proprietrio(a) do(s) animal(is)
222
ANEXO 4. Aprovao do Comit de tica em Pesquisa Animal

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UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE

MRCIA DE SOUZA XAVIER

Estudos de Hemoparasitos por evidncias morfolgicas, sorolgicas e moleculares,

MRCIA DE SOUZA XAVIER

Estudos de Hemoparasitos por evidncias morfolgicas, sorolgicas e moleculares,

Tese apresentada ao Programa De PsGraduao

Universidade Federal Fluminense, como

ORIENTADORA:Profa Dra NDIA REGINA PEREIRA ALMOSNY

MRCIA DE SOUZA XAVIER

Estudos de Hemoparasitos por evidncias morfolgicas, sorolgicas e moleculares,

Aprovada em 12 de julho de 2011.

2.6.2 Testes sorolgicos, p. 63

5.1 ANLISES MORFOLGICAS DOS ESFREGAOS SANGUNEOS, p. 89

microscpica direta com os resultados da sorologia, p. 115

5.5.2.1.1.1 Ces PCR positivos apenas em protocolos genricos sororreativas

Quadro 1. Resumo das mudanas taxonmicas nos gneros Ehrlichia e Anaplasma,

Tabela 1: Resultados das pesquisas de mrulas de hemoparasitas em esfregaos

Tabela 10: Distribuio pelos bairros avaliados, do nmero de amostras sanguneas

Tabela 18a: Resultados da pesquisa morfolgica, com as respectivas clulas com

Tabela 35a: Mdia e desvio padro de valores hematolgicos eritrocitrios de ces,

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis e/ou A.

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis e/ou A.

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis e/ou A.

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para A. phagocytophilum, sem

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para E. canis, com coinfeco, p. 171

Tabela 53 Mdia e desvio padro de valores hematolgicos e bioqumicos de ces,

Anaplasmataceae, com sorologia positiva para A. phagocytophilum, com

phagocytophilum, com co-infeco, p. 181

Figura 1 Figura 1 : Mapas de localizao do municpio de Maric. A Mapa do

LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS

Centro de Controle de Zoonoses

Combinao (ou compilao) de vrias espcies novas

Dias Aps Inoculao

Ehrlichiose Granuloctica Canina

Ehrlichiose Granuloctica Humana

Ehrlichiose Monoctica Canina

Ehrlichiose Monoctica Humana

Gramas por decilitro

Milimol por litro

Reao em cadeia da polimerase

cido ribonuclico ribossomal

Semanas Aps Infeco

Espcie nova, ainda sem classificao completa

sem raa definida

Unidades por litro

Universidade Federal Fluminense

Palavras-chave: Ehrlichia; Anaplasma; canino; Patologia Clnica

"Ehrlichiosis" is a generic term for infections caused by bacteria belonging to the

Keywords: Ehrlichia; Anaplasma; dogs; Clinical Pathology

Doenas transmitidas por carrapatos so muito frequentes em todo mundo.

relacionada presena dos carrapatos. O carrapato relacionado transmisso da E.

epidemiolgicos, clnicos e laboratoriais como bioqumicos, hematolgicos e

2.1 HISTRICO E AGENTES ETIOLGICOS

pleomrficas cocides Gram negativas e intracelulares obrigatrias, denominadas

BREITSCHWERDT et al., 1998); E. phagocytophila3 (JOHANSSON et al., 1995;

Reclassificada como Anaplasma platys (DUMLER et al., 2001).

epidemiolgicas e clnicas (DUMLER et al., 2001). Vrios outros organismos tambm

Taxonomia dos gneros Ehrlichia e Anaplsma antes e depois de 2001

Taxonomia depois de 2001

Genero III Anaplasma Especies A. marginale

Genero V Neorickettsia Especies N. helminthoeca

Genero IV Ehrlichia B Especies

Genera V Neorickettsia N. helminthoeca

Quadro 1: Resumo das mudanas taxonmicas nos gneros Ehrlichia e Anaplasma,